KR102596069B1 - Wound healing compositions including dermal tissue-derived extracellular matrix and method of making the same - Google Patents
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Abstract
본 발명은 진피 유래 세포외기질을 포함하는 창상 치료용 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 창상 치료용 조성물을 사용함으로써, 상기 조성물의 점성을 증가시켜 다양한 크기와 깊이의 창상에 적용 가능하고, 창상 표면에 도포 후에도 조성물이 잘 응집된 상태로 일정기간 동안 탈락되지 않으며, 회복을 촉진할 수 있다.The present invention relates to a composition for treating wounds containing dermis-derived extracellular matrix and a method for producing the same.
By using the composition for wound treatment according to the present invention, the viscosity of the composition is increased to enable application to wounds of various sizes and depths, and even after application to the wound surface, the composition remains well cohesive and does not fall off for a certain period of time, and promotes recovery. can promote.
Description
본 발명은 진피조직 유래 세포외기질을 포함하는 창상 치료용 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for treating wounds containing extracellular matrix derived from dermal tissue and a method for producing the same.
피부는 우리 몸의 가장 큰 장기로, 외부의 자극 및 감염 위험으로부터 일차적인 방어 역할을 담당한다. 창상은 외상이나 화상, 외과적 술기로 인한 정상 피부의 결손으로 그 본래의 연속성이 상실되어 외부의 자극 및 감염 위험에 노출된 상태를 의미하며, 여러 가지 복잡한 생리적 과정을 통해 치유된다. 창상 치유 단계는 지혈단계, 염증단계, 증식단계, 리모델링 단계로 나뉘며, 가벼운 창상은 자연 치유될 수 있으나, 만성 창상인 당뇨병성 족부궤양이나 욕창의 경우에는 자연 치유가 어려워 창상의 보호뿐만 아니라 재생을 도와 줄 수 있는 창상피복재의 제공이 필요하다.The skin is the largest organ in our body and serves as the primary defense against external stimulation and risk of infection. A wound refers to a state in which the original continuity is lost due to a defect in the normal skin caused by trauma, burns, or surgical procedures, exposing it to external stimulation and risk of infection, and is healed through various complex physiological processes. The wound healing stage is divided into hemostasis stage, inflammation stage, proliferation stage, and remodeling stage. Minor wounds can heal naturally, but in the case of chronic wounds such as diabetic foot ulcers or bedsores, natural healing is difficult, so it is necessary to protect the wound as well as regenerate it. It is necessary to provide wound dressing materials that can help.
창상 피복재는 창상을 보호하고 오염을 방지하며, 삼출물을 흡수하고, 출혈 및 체액의 손실 등을 막기 위해 사용하는 의료기기를 말하며, 그 사용목적에 따라 다양한 원재료 및 형태로 사용되고 있다. 시판되고 있는 창상 피복재 제품은 시트형(sheet type), 폼형(foam type), 겔형(gel type) 등 다양한 형태를 가지며, 생체유래물, 합성고분자, 항균성 재료 등의 다양한 원재료들로 제조되고 있다. 기존에 사용되는 창상 피복재는 창상부위에서 자가 치유를 유도하는 재생 환경만을 제공하기 때문에, 가벼운 창상에서는 효과를 보이나 자연 치유가 어려운 만상 창상에서는 효과가 떨어지는 단점이 있다. Wound dressing refers to a medical device used to protect wounds, prevent contamination, absorb exudate, and prevent bleeding and loss of body fluids, and is used in various raw materials and forms depending on the purpose of use. Commercially available wound dressing products come in various forms such as sheet type, foam type, and gel type, and are manufactured from various raw materials such as bio-derived products, synthetic polymers, and antibacterial materials. Existing wound dressings only provide a regenerative environment that induces self-healing in the wound area, so they are effective in light wounds but have the disadvantage of being less effective in deep wounds where natural healing is difficult.
이러한 단점을 해결하기 위해, 줄기세포, 동종 진피 및 이종 진피 등이 만성 창상 치료에 사용되고 있으나, 이종 진피의 경우 이식 거부반응 유발과 같은 문제점으로 인해 사용이 제한적이다.To solve these shortcomings, stem cells, allogeneic dermis, and xenogeneic dermis are being used to treat chronic wounds, but the use of xenogeneic dermis is limited due to problems such as inducing transplant rejection.
진피조직 유래 세포외기질은 기증자의 진피에서 세포 성분을 제거하여 면역학적으로 안전하게 만든 것으로, 미국의 알로덤(AlloDerm®, 라이프셀), 국내의 메가덤(MegaDerm®, 엘앤씨바이오), 슈어덤(SureDermTM, 한스바이오메드), 시지크라이오덤(CGCryoDermTM, 시지바이오) 등과 같은 제품으로 개발되어 널리 사용되고 있다. 진피조직 유래 세포외기질에 함유된 콜라겐, 엘라스틴 및 피브로넥틴은 세포의 부착 및 증식을 유도하여 창상의 치유를 도와줄 수 있다. 기존 진피조직 유래 세포외기질 제품은 시트형태로 다양한 크기와 깊이의 창상에 대해서는 적용이 용이하지 않아 이를 해결하기 위해 진피조직 유래 세포외기질을 미세화(micronized) 형태로 제작하여 족부 궤양에 적용한 결과, 다양한 크기와 깊이의 창상에서 효과를 나타낸다고 보고된 바가 있다. 그러나, 미세화 진피조직 유래 세포외기질을 단독 성분으로 하여 창상피복재로 사용하는 경우, 창상 표면에 도포하였을 때 쉽게 탈락되어 창상피복재로서의 기능이 떨어지는 단점이 있다. Dermal tissue-derived extracellular matrix is made immunologically safe by removing cellular components from the donor's dermis, and is manufactured by AlloDerm ® (LifeCell) in the U.S., MegaDerm ® (L&C Bio) in Korea, and SureDerm ( Products such as SureDerm TM (Hans Biomed) and CGCryoDerm (CGCryoDerm TM (CG Bio)) have been developed and are widely used. Collagen, elastin, and fibronectin contained in the extracellular matrix derived from dermal tissue can help wound healing by inducing cell adhesion and proliferation. Existing dermal tissue-derived extracellular matrix products are in the form of sheets and are not easy to apply to wounds of various sizes and depths. To solve this problem, dermal tissue-derived extracellular matrix was manufactured in a micronized form and applied to foot ulcers. It has been reported to be effective in wounds of various sizes and depths. However, when using the micronized dermal tissue-derived extracellular matrix as the sole ingredient as a wound dressing, it has the disadvantage of being easily removed when applied to the wound surface, thereby reducing its function as a wound dressing.
이에, 본 발명에서는 기존 진피조직 유래 세포외기질 기반 창상 피복재의 단점을 해결하고자, 다양한 크기와 깊이의 창상에 적용 가능할 뿐만 아니라 창상 표면에 도포 후에도 응집된 상태로 일정기간 동안 탈락되지 않는 창상 치료용 조성물 및 그 제조 방법을 제시하고자 한다.Accordingly, in the present invention, in order to solve the shortcomings of existing dermal tissue-derived extracellular matrix-based wound coating materials, a wound coating material for wound treatment is not only applicable to wounds of various sizes and depths, but also does not fall off for a certain period of time in a cohesive state even after application to the wound surface. The purpose is to present a composition and a method for manufacturing the same.
본 발명은 진피 유래 세포외기질을 포함하는 창상 치료용 조성물 및 그 제조방법을 제공하는 것으로, 더욱 상세하게는 탈지방화 및 탈세포화된 진피 유래 세포외기질을 제 1 생체유래 고분자와 가교시킨 후, 제 2 생체유래 고분자와 물리적으로 혼합하여 제조한 창상 치료용 조성물 및 그 제조 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.The present invention provides a wound treatment composition containing a dermal-derived extracellular matrix and a method for manufacturing the same. More specifically, the de-fatted and decellularized dermal-derived extracellular matrix is cross-linked with a first bio-derived polymer, The purpose is to provide a wound treatment composition prepared by physically mixing a second bio-derived polymer and a method for producing the same.
본 발명은 또한, 본 발명에 따른 창상 치료용 조성물을 사용함으로써, 상기 조성물의 점성을 증가시켜 다양한 크기와 깊이의 창상에 적용 가능하고, 창상 표면에 도포 후에도 조성물이 잘 응집된 상태로 일정기간 동안 탈락되지 않으며, 회복을 촉진할 수 있는 창상 치료용 조성물 및 그 제조 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.The present invention also allows application to wounds of various sizes and depths by increasing the viscosity of the composition by using the wound treatment composition according to the present invention, and even after application to the wound surface, the composition remains well cohesive for a certain period of time. The purpose is to provide a composition for treating wounds that does not fall off and can promote recovery, and a method for manufacturing the same.
본 발명은 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물; 및 The present invention relates to a dermal-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product; and
제 2 생체유래 고분자를 포함하는 창상 치료용 조성물을 제공한다. Provided is a wound treatment composition comprising a second bio-derived polymer.
또한, 본 발명은 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물; 및 제 2 생체유래 고분자를 혼합하는 단계를 포함하는 창상 치료용 조성물의 제조 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a dermal-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product; and mixing a second bio-derived polymer.
본 발명에 따른 진피 유래 세포외기질을 포함하는 창상 치료용 조성물은 다양한 크기와 깊이의 창상에 적용 가능할 뿐만 아니라 도포 후에도 조성물이 잘 응집된 상태로 일정기간 동안 탈락되지 않고, 회복을 촉진할 수 있다.The composition for treating wounds containing dermis-derived extracellular matrix according to the present invention is not only applicable to wounds of various sizes and depths, but even after application, the composition remains well cohesive and does not fall off for a certain period of time, promoting recovery. .
도 1은 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물 및 제 2 생체유래 고분자의 혼합 비율에 따라 점도시험을 진행한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 창상 치료용 조성물을 창상 표면에 도포하였을 때, 이탈되지 않는 것을 확인한 사진이다.
도 3은 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물 및 제 2 생체유래 고분자의 혼합 비율에 따른 창상 치유 효과를 분석한 결과를 나타낸다. 구체적으로, 쥐를 사용하여 창상모델로 만들고 창상 치료용 조성물을 도포한 후 4주 동안 관찰한 사진 및 창상의 크기를 측정한 그래프이다.
도 4는 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물 및 제 2 생체유래 고분자의 혼합 비율에 따른 창상 치유를 조직학적 단계에서 평가한 결과를 나타낸다. 구체적으로, 쥐를 사용하여 창상모델로 만들고 창상 치료용 조성물을 도포한 후, 2주, 4주에 쥐를 희생하여 hematoxylin and eosin(H&E) 염색을 한 사진 및 창상 부위의 길이를 측정한 그래프이다.
도 5는 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물 및 제 2 생체유래 고분자의 혼합 비율에 따른 콜라겐 밀도를 평가한 결과를 나타낸다. 구체적으로, 쥐를 사용하여 창상모델로 만들고 창상 치료용 조성물을 도포한 후, 2주, 4주에 쥐를 희생하여 Masson’s trichrome(MT) 염색을 한 사진 및 콜라겐 밀도를 측정한 그래프이다.Figure 1 is a graph showing the results of a viscosity test according to the mixing ratio of dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product and second bio-derived polymer.
Figure 2 is a photograph confirming that the wound treatment composition does not come off when applied to the wound surface.
Figure 3 shows the results of analyzing the wound healing effect according to the mixing ratio of dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product and second bio-derived polymer. Specifically, this is a graph measuring the size of the wound and photographs observed for 4 weeks after making a wound model using a rat and applying a wound treatment composition.
Figure 4 shows the results of evaluating wound healing at the histological stage according to the mixing ratio of dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product and second bio-derived polymer. Specifically, after making a wound model using a rat and applying a wound treatment composition, the rat was sacrificed at 2 and 4 weeks. This is a photo of hematoxylin and eosin (H&E) staining and a graph measuring the length of the wound area. .
Figure 5 shows the results of evaluating collagen density according to the mixing ratio of dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product and second bio-derived polymer. Specifically, after making a wound model using a rat and applying a wound treatment composition, the rat was sacrificed at 2 and 4 weeks. This is a photograph stained with Masson's trichrome (MT) and a graph measuring collagen density.
본 발명은 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물; 및 The present invention relates to a dermal-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product; and
제 2 생체유래 고분자를 포함하는 창상 치료용 조성물에 관한 것이다. It relates to a composition for wound treatment containing a second bio-derived polymer.
본 발명의 실시예에서는 본 발명에 따른 창상 치료용 조성물이 우수한 점탄성 특성을 가짐을 확인하였다. 또한, 창상 치료용 조성물에 대해 인 비보(in vivo) 실험을 진행하여 상기 창상 치료용 조성물이 창상 부위에 도포 직후 잘 응집된 상태로 존재하여 창상 부위에서 이탈하지 않고, 우수한 창상 치유 효과를 가지며, 또한, 우수한 콜라겐 생성 효과를 가지는 것을 확인하였다. In the examples of the present invention, it was confirmed that the composition for wound treatment according to the present invention had excellent viscoelastic properties. In addition, an in vivo experiment was conducted on the wound treatment composition, and it was found that the wound treatment composition exists in a well-agglomerated state immediately after application to the wound area, does not deviate from the wound area, and has an excellent wound healing effect, Additionally, it was confirmed to have an excellent collagen production effect.
이하, 본 발명에 따른 창상 치료용 조성물을 보다 상세하게 설명한다. Hereinafter, the composition for wound treatment according to the present invention will be described in more detail.
본 발명의 창상 치료용 조성물은 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물; 및 제 2 생체유래 고분자를 포함한다. The composition for wound treatment of the present invention includes a dermal-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product; and a second bio-derived polymer.
본 발명에서 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물은 진피 유래 세포외기질 및 제 1 생체유래 고분자가 화학적으로 가교된 복합체를 의미한다. In the present invention, the dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product refers to a complex in which the dermis-derived extracellular matrix and the first bio-derived polymer are chemically cross-linked.
본 발명에서 진피 유래 세포외기질(이하, 세포외기질이라 한다.)은 창상 치료용 소재로 알려져 있으며, 상기 세포외기질에 함유된 콜라겐, 엘라스틴 및 피브로넥틴 등에 의해 세포의 부착 및 증식을 유도하여 창상 치유 효과를 가질 수 있다. In the present invention, dermis-derived extracellular matrix (hereinafter referred to as extracellular matrix) is known as a wound treatment material, and collagen, elastin, and fibronectin contained in the extracellular matrix induce cell adhesion and proliferation, thereby reducing wound healing. It can have a healing effect.
일 구체예에서, 세포외기질(extracellular matrix, ECM)은 조직 내 또는 세포 외의 공간을 채우고 있는 생체고분자의 복잡한 집합체를 의미한다. 상기 세포외기질은 세포의 유형 또는 세포의 분화 정도에 따라 그 성분이 달라질 수 있으며, 콜라겐, 엘라스틴 등의 섬유성단백질과 프로테오글리칸, 글리코사미노글리칸 등의 복합단백질, 그리고 파이브로넥틴, 라미닌 등의 세포 부착성 당단백질로 구성될 수 있다.In one embodiment, the extracellular matrix (ECM) refers to a complex assembly of biopolymers that fills the space within a tissue or outside a cell. The extracellular matrix may vary in composition depending on the type of cell or the degree of cell differentiation, and includes fibrous proteins such as collagen and elastin, complex proteins such as proteoglycan and glycosaminoglycan, and fibronectin, laminin, etc. It may be composed of cell adhesion glycoproteins.
일 구체예에서, 진피는 동종 또는 이종 유래 진피 조직일 수 있다. 상기 동종은 인간을 의미하며, 이종은 인간 이외의 동물, 즉, 돼지, 소, 말 등의 포유류를 의미할 수 있다.In one embodiment, the dermis may be allogeneic or xenogeneic derived dermal tissue. The same species may refer to humans, and the heterogeneous species may refer to animals other than humans, that is, mammals such as pigs, cows, and horses.
일 구체예에서, 진피 유래 세포외기질은 탈지방화 및 탈세포화된 피부유래 진피 조직일 수 있다. 상기 진피 유래 세포외기질로 시판되는 무세포 진피 제품을 사용할 수 있으며, 또는, 직접 제조하여 사용할 수 있다. 이러한 진피 유래 세포외기질의 제조는 하기 창상 치료용 조성물의 제조 방법에서 구체적으로 설명하도록 한다. In one embodiment, the dermis-derived extracellular matrix may be de-fatted and decellularized skin-derived dermal tissue. A commercially available acellular dermal product can be used as the dermis-derived extracellular matrix, or it can be manufactured and used directly. The production of such dermis-derived extracellular matrix will be described in detail in the method for producing a wound treatment composition below.
본 발명에서 제 1 생체유래 고분자는 진피 유래 세포외기질과 화학적으로 가교결합되어, 본 발명에 따른 창상 치료용 조성물이 창상 부위에 도포되었을 때 분해 속도를 늦추고, 오랫동안 창상 부위에 남아 있어 상처 치유 효과를 높일 수 있다. In the present invention, the first bio-derived polymer is chemically cross-linked with the dermis-derived extracellular matrix, thereby slowing down the decomposition rate when the wound treatment composition according to the present invention is applied to the wound area, and remains in the wound area for a long time, thereby providing a wound healing effect. can be increased.
일 구체예에서, 제 1 생체유래 고분자의 종류는 특별히 제한되지 않으며, 콜라겐, 히알루론산, 키토산, 카복시메틸셀룰로스, 알지네이트, 젤라틴 및 하이드록시아파타이트로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상을 포함할 수 있다. In one embodiment, the type of the first bio-derived polymer is not particularly limited and may include one or more selected from the group consisting of collagen, hyaluronic acid, chitosan, carboxymethylcellulose, alginate, gelatin, and hydroxyapatite.
일 구체예에서, 제 1 생체유래 고분자는 히알루론산일 수 있다.In one embodiment, the first bio-derived polymer may be hyaluronic acid.
"히알루론산"은 동물 등의 피부, 관절액, 연골 등에 많이 존재하는 생체 합성 천연 물질로서 수산화기가 많기 때문에 친수성을 띤 뮤코다당류이다. 물과 결합하여 겔 상태가 되어 관절의 윤활작용이나 피부의 유연성 등에 관여하며 점성이 크므로 세균의 침입이나 독물의 피부 침투를 막는 데에도 중요한 역할을 한다. 이러한 히알루론산은 자외선, 방사선, 전자빔과 같은 물리적인 방법 또는 BDDE 등을 이용한 화학적 방법을 통한 가교화(cross-linking)에 따라 물리적 물성과 생리적 물성의 차이가 나타난다.“Hyaluronic acid” is a biosynthetic natural substance that exists in abundance in the skin, joint fluid, and cartilage of animals, etc., and is a hydrophilic mucopolysaccharide because it has many hydroxyl groups. When combined with water, it becomes a gel and participates in the lubrication of joints and the flexibility of the skin. Since it has high viscosity, it also plays an important role in preventing the invasion of bacteria or poisons into the skin. Such hyaluronic acid exhibits differences in physical and physiological properties depending on cross-linking through physical methods such as ultraviolet rays, radiation, and electron beams, or chemical methods such as BDDE.
상기 제 1 생체유래 고분자의 분자량은 10 내지 2,000 kDa일 수 있다. The molecular weight of the first bio-derived polymer may be 10 to 2,000 kDa.
본 발명에서 진피 유래 세포외기질 및 제 1 생체유래 고분자는 가교제에 의해 가교결합을 형성한다. 구체적으로, 진피 유래 세포외기질 및 제 1 생체유래 고분자는 가교제를 매개로 결합을 형성할 수 있다. In the present invention, the dermis-derived extracellular matrix and the first bio-derived polymer are cross-linked by a cross-linking agent. Specifically, the dermis-derived extracellular matrix and the first bio-derived polymer may form a bond mediated by a cross-linking agent.
일 구체예에서, 가교제로 다관능성 화합물을 사용할 수 있다. 상기 다관능성 화합물에서 하나의 관능기에 진피 유래 세포외기질의 아민기(-NH2), 히드록시기(-OH) 또는 치올기(-SH)가 결합을 형성할 수 있으며, 또한, 다른 관능기에 히알루론산의 히드록시기가 결합을 형성할 수 있다. In one embodiment, a multifunctional compound can be used as a crosslinking agent. In the above multifunctional compound, an amine group (-NH2), a hydroxy group (-OH), or a thiol group (-SH) from the dermis-derived extracellular matrix can form a bond to one functional group, and a hydroxy group of hyaluronic acid can form a bond to the other functional group. can form a bond.
일 구체예에서, 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물의 평균 입경은 적용되는 부위, 즉, 창상의 크기 및 깊이에 따라 달라질 수 있으며, 예를 들어 100 내지 800 μm 일 수 있다. 상기 입경 범위에서 다양한 형상 및 깊이의 창상 부위에 적용 가능하다.In one embodiment, the average particle diameter of the dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked material may vary depending on the applied area, that is, the size and depth of the wound, and may be, for example, 100 to 800 μm. It can be applied to wound areas of various shapes and depths within the above particle size range.
일 구체예에서, 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물의 함량은 조성물 전체 중량 대비 5 내지 40 중량부, 15 내지 40 중량부, 15 내지 30 중량부 또는 15 내지 25 중량부일 수 있다. 상기 범위에서 우수한 창상 치유 효과를 나타낸다. 40 중량부를 초과할 경우 유의미한 창상 치유 효과를 보이지 않고, 오히려 치유 효과가 일부 감소하므로, 상기 함량 범위를 5 내지 40 중량부로 조절하는 것이 좋다. In one embodiment, the content of the dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product may be 5 to 40 parts by weight, 15 to 40 parts by weight, 15 to 30 parts by weight, or 15 to 25 parts by weight, based on the total weight of the composition. It shows excellent wound healing effect in the above range. If the amount exceeds 40 parts by weight, no significant wound healing effect is shown, and rather the healing effect is partially reduced, so it is better to adjust the content range to 5 to 40 parts by weight.
본 발명에서 제 2 생체유래 고분자는 창상 치료용 조성물의 점탄성 특성을 향상시킬 수 있으며, 창상 부위에서의 부착력을 향상시켜 창상 치료용 조성물이 탈락되는 것을 방지할 수 있다. In the present invention, the second bio-derived polymer can improve the viscoelastic properties of the wound treatment composition and improve adhesion at the wound site to prevent the wound treatment composition from falling off.
이러한 제 2 생체유래 고분자는 미가교 상태이거나, 또는 화학적으로 가교된 한 가지 이상의 생체유래 고분자, 즉, 생체유래 고분자의 가교물을 의미할 수 있다. This second bio-derived polymer may be in an uncrosslinked state or may refer to one or more chemically cross-linked bio-derived polymers, that is, a cross-linked product of bio-derived polymers.
일 구체예에서, 제 2 생체유래 고분자의 분자량은 10 kDa 내지 2,000 kDa 일 수 있다. In one embodiment, the molecular weight of the second bio-derived polymer may be 10 kDa to 2,000 kDa.
일 구체예에서, 제 2 생체유래 고분자로 콜라겐, 히알루론산, 키토산, 카복시메틸셀룰로스, 알지네이트, 젤라틴 및 하이드록시아파타이트로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상을 사용할 수 있다. In one embodiment, the second bio-derived polymer may be one or more selected from the group consisting of collagen, hyaluronic acid, chitosan, carboxymethylcellulose, alginate, gelatin, and hydroxyapatite.
또한, 제 2 생체유래 고분자로 콜라겐, 히알루론산, 키토산, 카복시메틸셀룰로스, 알지네이트, 젤라틴 및 하이드록시아파타이트로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 생체유래 고분자의 가교물을 사용할 수 있다. Additionally, as the second bio-derived polymer, a cross-linked product of one or more bio-derived polymers selected from the group consisting of collagen, hyaluronic acid, chitosan, carboxymethyl cellulose, alginate, gelatin, and hydroxyapatite can be used.
일 구체예에서, 제 2 생체유래 고분자로 제 1 생체유래 고분자와 동일한 고분자를 사용할 수 있다. In one embodiment, the same polymer as the first bio-derived polymer may be used as the second bio-derived polymer.
일 구체예에서, 생체유래 고분자의 가교물에서 생체유래 고분자는 가교제에 의해 가교되며, 상기 가교제로 다관능성 화합물을 사용할 수 있다.In one embodiment, in a cross-linked product of a bio-derived polymer, the bio-derived polymer is cross-linked by a cross-linking agent, and a multifunctional compound may be used as the cross-linking agent.
일 구체예에서, 제 2 생체유래 고분자의 함량은 조성물 전체 중량 대비 60 내지 95 중량부, 60 내지 85 중량부, 70 내지 85 중량부 또는 75 내지 85 중량부일 수 있다. 상기 범위에서 창상 치료용 조성물의 물성을 향상시킬 수 있다. In one embodiment, the content of the second bio-derived polymer may be 60 to 95 parts by weight, 60 to 85 parts by weight, 70 to 85 parts by weight, or 75 to 85 parts by weight, based on the total weight of the composition. Within the above range, the physical properties of the composition for wound treatment can be improved.
본 발명에서, 창상 치료용 조성물의 복소점도는 1,000 내지 10,000 Pa·s일 수 있다. 상기 복소점도는 회전형 레오미터 분석기(진동 수: 0.1~10 Hz, 온도: 25℃, 변형율: 1%)에 의해 측정된 결과값을 의미한다.In the present invention, the complex viscosity of the composition for wound treatment may be 1,000 to 10,000 Pa·s. The complex viscosity refers to the result measured by a rotational rheometer analyzer (frequency: 0.1~10 Hz, temperature: 25°C, strain: 1%).
점탄성(viscoelasticity)은 물체에 힘을 가했을 때 액체로서의 성질과 고체로서의 성질이 동시에 나타나는 현상을 의미한다. 본 발명에서는 조성물이 가해지는 힘에 대하여 저항하는 힘과 소실되는 힘을 측정하여 점성계수, 탄성계수 및 복소점도를 측정할 수 있다. Viscoelasticity refers to the phenomenon in which liquid properties and solid properties appear simultaneously when force is applied to an object. In the present invention, the viscosity coefficient, elastic modulus, and complex viscosity can be measured by measuring the force that resists and dissipates the force applied to the composition.
점성계수(손실탄성계수, viscous modulus, G'')란 상실된 에너지의 척도로서 물질의 점성성분을 의미한다. 탄성계수(저장탄성계수, elastic modulus, G')란 탄성체가 탄성한계 내에서 가지는 응력과 변형의 비를 의미한다. 상기 탄성계수가 클수록 조성물이 단단하고 변형에 대하여 저항하는 능력이 높아진다. 복소점도는(complex viscosity)는 진동 측정법에서 계산되는 진동수 의존적 점도로서, 상기 수치는 G'', G' 및 측정하는 진동수 값이 반영된 수치이다. 이러한 복소점도는 구체적으로 3,000 내지 6,000 Pa·s일 수 있다.Viscosity modulus (viscous modulus, G'') is a measure of lost energy and refers to the viscous component of a material. Elastic modulus (storage modulus, elastic modulus, G') refers to the ratio of stress and strain that an elastic body has within its elastic limit. The higher the elastic modulus, the harder the composition and the higher its ability to resist deformation. Complex viscosity is a frequency-dependent viscosity calculated from a vibration measurement method, and the value reflects G'', G', and the measured frequency value. This complex viscosity may specifically be 3,000 to 6,000 Pa·s.
일 구체예에서, 본 발명의 창상 치료용 조성물은 창상 부위에 도포될 수 있다. In one embodiment, the wound treatment composition of the present invention can be applied to the wound area.
본 발명에 따른 창상 치료용 조성물을 사용함으로써, 상기 조성물의 점성을 증가시켜 다양한 크기와 깊이의 창상에 적용 가능하고, 창상 표면에 도포 후에도 조성물이 잘 응집된 상태로 일정기간 동안 탈락되지 않으며, 회복을 촉진할 수 있다. By using the composition for wound treatment according to the present invention, the viscosity of the composition is increased to enable application to wounds of various sizes and depths, and even after application to the wound surface, the composition remains well cohesive and does not fall off for a certain period of time, and promotes recovery. can promote.
또한, 본 발명은 전술한 창상 치료용 조성물의 제조 방법에 관한 것이다. Additionally, the present invention relates to a method for producing the above-described wound treatment composition.
상기 창상 치료용 조성물의 제조 방법은 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물; 및 제 2 생체유래 고분자를 혼합하는 단계를 포함할 수 있다. The method for producing the composition for wound treatment includes dermal-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked material; And it may include mixing a second bio-derived polymer.
본 발명에서 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물은 a) 피부 조직에서 지질 성분을 제거하는 단계;In the present invention, the dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product is prepared by: a) removing lipid components from skin tissue;
b) 상기 지질 성분이 제거된 지방조직에서 세포를 제거하여 진피 유래 세포외기질을 제조하는 단계; b) preparing a dermis-derived extracellular matrix by removing cells from the fat tissue from which the lipid component has been removed;
c) 상기 세포가 제거된 지방조직을 동결건조하는 단계; c) freeze-drying the fat tissue from which the cells have been removed;
d) 상기 동결건조된 동결건조물을 분말화하는 단계;d) powdering the freeze-dried product;
e) 상기 분말화된 진피 유래 세포외기질과 제 1 생체유래 고분자를 가교결합시켜 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물을 제조하는 단계; e) cross-linking the powdered dermis-derived extracellular matrix and the first bio-derived polymer to prepare a dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product;
f) 상기 가교된 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물을 동결건조하는 단계; 및 f) freeze-drying the cross-linked dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product; and
g) 상기 동결건조된 동결건조물을 분말화하는 단계를 통해 제조될 수 있다. g) It can be manufactured through the step of powdering the freeze-dried product.
본 발명에서 진피 유래 세포외기질은 시중에서 시판 중인 제품을 사용할 수 있으며, 또는 실험실 등에서 제조하여 사용할 수 있다. In the present invention, the dermis-derived extracellular matrix can be a commercially available product or can be manufactured and used in a laboratory.
본 발명은 단계 a)를 수행하기 전에 세척 단계를 수행할 수 있다. 상기 세척 단계에서는 피부 조직을 멸균 증류수로 세척할 수 있다. 상기 단계를 통해 피부 조직 내의 불순물을 제거할 수 있다. The present invention may perform a washing step before performing step a). In the washing step, the skin tissue may be washed with sterile distilled water. Through the above steps, impurities in skin tissue can be removed.
또한, 본 발명은 피부 조직에서 표피 및 시반을 제거하는 단계를 추가로 수행할 수 있다. 상기 단계는 단계 a)를 수행하기 전에 수행할 수 있으며, 또는 후술할 단계 a) 중 물리적 처리를 수행한 후 화학적 처리를 수행하기 전에 수행할 수 있다. In addition, the present invention may additionally perform the step of removing the epidermis and varicose veins from skin tissue. The above step may be performed before performing step a), or may be performed after performing physical treatment during step a), which will be described later, but before performing chemical treatment.
일 구체예에서, 상기 단계는 염화나트륨 및/또는 과산화수소를 사용하여 수행할 수 있다. In one embodiment, the above step can be performed using sodium chloride and/or hydrogen peroxide.
본 발명에서 단계 a)는 탈지방화 단계로서 피부 조직에서 지질 성분을 제거하는 단계이다. In the present invention, step a) is a defatting step, which is a step of removing lipid components from skin tissue.
일 구체예에서, 탈지방화(delipidation)는 조직으로부터 지질 성분을 제거하는 것을 의미한다.In one embodiment, delipidation means removing lipid components from tissue.
일 구체예에서, 지질 성분의 제거는 물리적 처리 또는 화학적 처리에 의해 수행될 수 있으며, 상기 물리적 처리 및 화학적 처리를 함께 수행할 수 있다. 함께 수행 시, 물리적 처리를 수행한 후 화학적 처리를 수행할 수 있다. In one embodiment, removal of lipid components may be performed by physical treatment or chemical treatment, and the physical treatment and chemical treatment may be performed together. When performed together, chemical treatment can be performed after physical treatment.
일 구체예에서, 물리적 처리의 종류는 특별히 제한되지 않으며, 분쇄를 사용하여 수행할 수 있다. 상기 분쇄는 당업계에 공지된 분쇄 수단, 예를 들어, 믹서기, 호모게나이져, 냉동 분쇄기, 초음파 분쇄기, 핸드블랜더, 플런저 밀 등을 사용하여 수행할 수 있다. In one embodiment, the type of physical treatment is not particularly limited and can be performed using grinding. The grinding can be performed using grinding means known in the art, for example, a blender, homogenizer, freezer grinder, ultrasonic grinder, hand blender, plunger mill, etc.
일 구체예에서, 화학적 처리의 종류는 특별히 제한되지 않으며, 탈지방 용액을 사용하여 수행할 수 있다. 상기 탈지방 용액은 극성 용매, 비극성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 포함할 수 있다. 상기 극성 용매로는 물, 알코올 또는 이들의 혼합 용액을 사용할 수 있으며, 알코올로는 메탄올, 에탄올 또는 이소프로필 알코올을 사용할 수 있다. 또한, 비극성 용매로는 헥산, 헵탄, 옥탄, 또는 이들의 혼합 용액을 사용할 수 있다. 구체적으로, 본 발명에서는 탈지질 용액으로 이소프로필 알코올(IPA) 및 헥산(Hexane)의 혼합 용액을 사용할 수 있다. 이때, 이소프로필 알코올 및 헥산의 혼합 비율은 20:80 내지 80:20일 수 있다. In one embodiment, the type of chemical treatment is not particularly limited and can be performed using a defatting solution. The defatting solution may include a polar solvent, a non-polar solvent, or a mixed solvent thereof. The polar solvent may be water, alcohol, or a mixed solution thereof, and the alcohol may be methanol, ethanol, or isopropyl alcohol. Additionally, hexane, heptane, octane, or a mixed solution thereof can be used as the nonpolar solvent. Specifically, in the present invention, a mixed solution of isopropyl alcohol (IPA) and hexane can be used as the delipidating solution. At this time, the mixing ratio of isopropyl alcohol and hexane may be 20:80 to 80:20.
상기 탈지방 용액의 처리 시간은 1 내지 8 시간일 수 있다. The processing time for the defatting solution may be 1 to 8 hours.
본 발명에서 단계 b)는 탈세포화 단계로서, 상기 단계 a)에 의해 지질 성분이 제거된 피부 조직에서 세포를 제거하는 단계이다. In the present invention, step b) is a decellularization step, which is a step of removing cells from skin tissue from which lipid components have been removed in step a).
일 구체예에서, 탈세포화(decellularization)는 조직으로부터 세포외기질을 제외한 다른 세포 성분, 예를 들면 핵, 세포막, 핵산 등을 제거하는 것을 의미한다.In one embodiment, decellularization means removing other cellular components, such as nuclei, cell membranes, and nucleic acids, other than the extracellular matrix, from tissue.
상기 단계는 탈세포 용액을 사용하여 수행할 수 있으며, 탈세포 용액으로 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화암모늄, 칼슘카보네이트, 수산화마그네슘, 수산화칼슘, 암모니아, 소듐데옥시클로라이트(Sodium Deoxycholate, SDC) 및 소듐도데실설페이트(Sodium dodecyl sulfate, SDS), 알킬벤젠설포네이트(Alkylbenzene sulfonate, ALS), 알코올에테르설페이트(Alcohol ether sulfates, AES), 소듐라우릴설페이트(Sodium Lauryl Sulfate, SLS) 및 폴리에틸렌글리콜(Polyethylen glycol, PEG)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상을 사용할 수 있다. The above step can be performed using a decellularization solution, which includes sodium hydroxide, potassium hydroxide, ammonium hydroxide, calcium carbonate, magnesium hydroxide, calcium hydroxide, ammonia, sodium deoxycholate (SDC), and sodium. Sodium dodecyl sulfate (SDS), Alkylbenzene sulfonate (ALS), Alcohol ether sulfates (AES), Sodium Lauryl Sulfate (SLS) and Polyethylene glycol , PEG) can be used.
일 구체예에서, 탈세포 용액의 농도는 0.1 내지 10%일 수 있다. 상기 농도 범위에서 세포의 제거가 용이하다. In one embodiment, the concentration of the decellularization solution may be 0.1 to 10%. Removal of cells is easy in the above concentration range.
또한, 일 구체예에서, 탈세포화 단계는 30 분 내지 10 시간 동안 수행될 수 있다. 상기 시간 범위에서 세포의 제거가 용이하다. Additionally, in one embodiment, the decellularization step may be performed for 30 minutes to 10 hours. Removal of cells is easy in this time range.
본 발명에서는 탈세포화 단계까지 수행된 피부 조직을 진피 유래 세포외기질로 표현할 수 있다. In the present invention, skin tissue that has been carried out to the decellularization stage can be expressed as dermis-derived extracellular matrix.
본 발명에서는 단계 b)를 수행한 후, 세척 단계를 추가로 수행할 수 있다. 세척을 통해 단계 a)인 탈지방화 단계 및 단계 b)인 탈세포화 단계에서의 불순물을 제거할 수 있으며, 높은 순도의 진피 유래 세포외기질을 수득할 수 있다. In the present invention, after performing step b), a washing step may be additionally performed. Through washing, impurities in step a), the de-fatting step, and step b), the decellularization step, can be removed, and high purity dermal-derived extracellular matrix can be obtained.
본 발명에서 단계 c)는 동결건조 단계로서 전술한 단계, 즉, 단계 b)의 수득물을 동결건조하는 단계이다. 상기 동결건조는 조직이 동결된 상태에서 이를 급속 냉각후 진공으로 수분을 흡수하는 방법으로, 상기 동결건조를 수행하여 진피 유래 세포외기질 물질 내 수분을 조절할 수 있으며, 분말화를 용이하게 수행할 수 있도록 할 수 있다. In the present invention, step c) is a freeze-drying step, that is, a step of freeze-drying the product obtained in step b). The freeze-drying is a method of rapidly cooling the tissue in a frozen state and absorbing moisture in a vacuum. By performing the freeze-drying, the moisture in the dermis-derived extracellular matrix material can be controlled and powderization can be easily performed. It can be done.
일 구체예에서, 동결건조는 -50 내지 -80℃ 에서 24 내지 96 시간 동안 수행할 수 있다. In one embodiment, freeze-drying may be performed at -50 to -80°C for 24 to 96 hours.
일 구체예에서, 동결건조된 진피 유래 세포외기질의 수분 함량은 10% 이하 또는 1 내지 8%일 수 있다. In one embodiment, the moisture content of the lyophilized dermis-derived extracellular matrix may be 10% or less or 1 to 8%.
본 발명에서 단계 d)는 분말화 단계로서 동결건조된 동결건조물, 즉, 세포외기질을 분말화하는 단계이다. In the present invention, step d) is a powdering step, which is a step of powdering the lyophilized product, that is, the extracellular matrix.
상기 분말화된 세포외기질의 입경은 100 내지 800 μm 일 수 있다. The particle size of the powdered extracellular matrix may be 100 to 800 μm.
본 발명에서 단계 e)는 가교 단계로서, 상기 분말화된 진피 유래 세포외기질과 제 1 생체유래 고분자를 가교결합시켜 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물을 제조하는 단계이다. In the present invention, step e) is a cross-linking step, which is a step of cross-linking the powdered dermis-derived extracellular matrix and the first bio-derived polymer to produce a cross-linked product of the dermis-derived extracellular matrix and the first bio-derived polymer.
일 구체예에서, 제 1 생체유래 고분자로 전술한 성분을 제한없이 사용할 수 있으며, 구체적으로, 히알루론산을 사용할 수 있다. In one embodiment, the ingredients described above can be used without limitation as the first bio-derived polymer, and specifically, hyaluronic acid can be used.
일 구체예에서, 히알루론산의 함량은 진피 유래 세포외기질 100 중량부 대비 1 내지 1,000 중량부, 5 내지 1,000 중량부일 수 있다. 상기 함량범위에서, 생체유래 고분자는 진피 유래 세포외기질과 일차로 가교 결합을 형성하고, 창상 부위에서의 진피 유래 세포외기질의 분해를 방지할 수 있다. 상기 히알루론산의 함량이 1,000 중량부를 초과하면, 고농도의 히알루론산이 진피 유래 세포외기질에 결합되고, 이에 의해 가교물의 주된 물성이 진피의 물성 보다는 히알루론산의 물성으로 역전될 수 있으므로, 전술한 범위를 사용하는 것으로 좋다. In one embodiment, the content of hyaluronic acid may be 1 to 1,000 parts by weight or 5 to 1,000 parts by weight based on 100 parts by weight of dermis-derived extracellular matrix. In the above content range, the bio-derived polymer can primarily form cross-links with the dermis-derived extracellular matrix and prevent decomposition of the dermis-derived extracellular matrix at the wound site. If the content of hyaluronic acid exceeds 1,000 parts by weight, a high concentration of hyaluronic acid is bound to the dermis-derived extracellular matrix, and as a result, the main physical properties of the cross-linked product may be reversed to the physical properties of hyaluronic acid rather than the physical properties of the dermis, so that the above-mentioned range It is better to use .
일 구체예에서, 가교는 가교제의 존재하에서 수행할 수 있다. 상기 가교제로 다관능성 화합물을 사용할 수 있으며, 구체적으로, 부탄디올디글리시딜에테르(1,4-butandiol diglycidyl ether, BDDE), 에틸렌글리콜디글리시딜에테르(ethylene glycol diglycidyl ether, EGDGE), 헥산디올디글리시딜에테르(1,6-hexanediol diglycidyl ether), 프로필렌글리콜디글리시딜에테르(propylene glycol diglycidyl ether), 폴리프로필렌글리콜디글리시딜에테르(polypropylene glycol diglycidyl ether), 폴리테트라메틸렌글리콜디글리시딜에테르(polytetramethylene glycol diglycidyl ether), 네오펜틸글리콜디글리시딜에테르(neopentyl glycol diglycidyl ether), 폴리글리세롤폴리글리시딜에테르(polyglycerol polyglycidyl ether), 디글리세롤폴리글리시딜에테르(diglycerol polyglycidyl ether), 글리세롤폴리글리시딜에테르(glycerol polyglycidyl ether), 트리메틸프로판폴리글리시딜에테르(tri-methylpropane polyglycidyl ether), 비스에폭시프로폭시에틸렌(1,2-(bis(2,3-epoxypropoxy)ethylene), 펜타에리쓰리톨폴리글리시딜에테르(pentaerythritol polyglycidyl ether), 및 소르비톨폴리글리시딜에테르(sorbitol polyglycidyl ether)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상을 사용할 수 있다. In one embodiment, crosslinking can be performed in the presence of a crosslinking agent. Multifunctional compounds can be used as the crosslinking agent, specifically, butanediol diglycidyl ether (1,4-butandiol diglycidyl ether, BDDE), ethylene glycol diglycidyl ether (EGDGE), and hexanediol. Diglycidyl ether (1,6-hexanediol diglycidyl ether), propylene glycol diglycidyl ether, polypropylene glycol diglycidyl ether, polytetramethylene glycol digly Polytetramethylene glycol diglycidyl ether, neopentyl glycol diglycidyl ether, polyglycerol polyglycidyl ether, diglycerol polyglycidyl ether , glycerol polyglycidyl ether, tri-methylpropane polyglycidyl ether, bisepoxypropoxyethylene (1,2-(bis(2,3-epoxypropoxy)ethylene), One or more selected from the group consisting of pentaerythritol polyglycidyl ether and sorbitol polyglycidyl ether may be used.
일 구체예에서, 가교제의 함량은 진피 유래 세포외기질 중량 대비 0.5 내지 10 중량부일 수 있다. In one embodiment, the content of the cross-linking agent may be 0.5 to 10 parts by weight based on the weight of the dermis-derived extracellular matrix.
일 구체예에서, 가교 시간은 1 내재 5 시간일 수 있다. In one embodiment, the crosslinking time may be 1 intrinsic 5 hours.
상기 단계 e)에 의해 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물이 제조된다. Through step e), the dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product is prepared.
본 발명에서는 단계 e)를 수행한 후에 세척 단계를 추가로 수행할 수 있다. 상기 세척은 원심분리를 이용하여 수행할 수 있다. In the present invention, a washing step may be additionally performed after step e). The washing can be performed using centrifugation.
본 발명에서 f)는 동결건조 단계로 상기 가교된 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물을 동결건조하는 단계이다. In the present invention, f) is the freeze-drying step, which is a step of freeze-drying the cross-linked dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked material.
상기 동결건조를 수행하여 가교물 내 수분을 조절할 수 있으며, 분말화를 용이하게 수행할 수 있도록 할 수 있다.By performing the freeze-drying, the moisture in the cross-linked product can be controlled and powderization can be easily performed.
일 구체예에서, 동결건조는 -50 내지 -80℃ 에서 24 내지 96 시간 동안 수행할 수 있다.In one embodiment, freeze-drying may be performed at -50 to -80°C for 24 to 96 hours.
일 구체예에서, 동결건조의 가교물의 수분 함량은 10% 또는 1 내지 8%일 수 있다. In one embodiment, the moisture content of the freeze-dried cross-linked product may be 10% or 1 to 8%.
본 발명에서 단계 g)는 분말화 단계로서, 상기 동결건조된 동결건조물을 분말화하는 단계이다. In the present invention, step g) is a powdering step, which is a step of powdering the freeze-dried product.
상기 분말화된 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물의 입경은 100 내지 800 μm 일 수 있다.The particle size of the powdered dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked material may be 100 to 800 μm.
본 발명에서 제 2 생체유래 고분자는 시중에서 시판 중인 제품을 사용할 수 있다. 또한, 제 2 생체유래 고분자로 생체유래 고분자의 가교물을 사용할 경우, 상기 가교물은 생체유래 고분자를 가교제를 이용하여 가교하는 가교 단계; 및 In the present invention, the second bio-derived polymer can be a commercially available product. In addition, when using a cross-linked product of a bio-derived polymer as the second bio-derived polymer, the cross-linked product includes a cross-linking step of cross-linking the bio-derived polymer using a cross-linking agent; and
상기 가교된 가교물을 건조하는 건조 단계를 통해 제조될 수 있다. It can be manufactured through a drying step of drying the cross-linked product.
본 발명에서 가교 단계는 생체유래 고분자를 가교제를 이용하여 가교할 수 있다. 상기 생체유래 고분자 및 가교제는 전술한 제1 생체유래 고분자 및 가교제를 제한없이 사용할 수 있다. In the present invention, the crosslinking step can crosslink bio-derived polymers using a crosslinking agent. The bio-derived polymer and cross-linking agent may be the first bio-derived polymer and cross-linking agent described above without limitation.
일 구체예에서, 가교제의 함량은 생체유래 고분자 대비 0.5 내지 10 중량부일 수 있다. In one embodiment, the content of the cross-linking agent may be 0.5 to 10 parts by weight based on the bio-derived polymer.
본 발명에서 건조 단계는 상기 가교에 의해 가교된 생체유래 고분자를 건조하는 단계로, 생체유래 고분자를 투석한 후, 열풍 건조하여 담체 형태로 제조할 수 있다. In the present invention, the drying step is a step of drying the bio-derived polymer cross-linked by the cross-linking, and the bio-derived polymer can be dialyzed and then dried with hot air to prepare it in the form of a carrier.
일 구체예에서, 제조된 담체에서 생체유래 고분자의 함량은 1 내지 10%일 수 있다. In one embodiment, the content of bio-derived polymer in the prepared carrier may be 1 to 10%.
본 발명에서 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물; 및 제 2 생체유래 고분자는 물리적 혼합에 의해 혼합될 수 있다.In the present invention, dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product; and the second bio-derived polymer may be mixed by physical mixing.
일 구체예에서, 혼합물 내에서 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물의 함량은 5 내지 40 중량부, 15 내지 40 중량부, 15 내지 30 중량부 또는 15 내지 25 중량부일 수 있다. In one embodiment, the content of the dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product in the mixture may be 5 to 40 parts by weight, 15 to 40 parts by weight, 15 to 30 parts by weight, or 15 to 25 parts by weight.
또한, 혼합물 내에서 제 2 생체유래 고분자의 함량은 60 내지 95 중량부, 60 내지 85 중량부, 70 내지 85 중량부 또는 75 내지 85 중량부일 수 있다.Additionally, the content of the second bio-derived polymer in the mixture may be 60 to 95 parts by weight, 60 to 85 parts by weight, 70 to 85 parts by weight, or 75 to 85 parts by weight.
일 구체예에서, 제2 생체유래 고분자로 미가교된 생체유래 고분자를 사용할 경우 상기 생체유래 고분자를 1 내지 10%로 포함하는 고분자 용액을 사용할 수 있다. 또한, 전술한 담체 형태로 사용할 경우, 상기 담체에서 생체유래 고분자의 함량은 1 내지 10% 일 수 있다. In one embodiment, when using an uncrosslinked bio-derived polymer as the second bio-derived polymer, a polymer solution containing 1 to 10% of the bio-derived polymer can be used. Additionally, when used in the form of the above-described carrier, the content of bio-derived polymer in the carrier may be 1 to 10%.
일 구체예에서, 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물과 제 2 생체유래 고분자를 물리적으로 혼합하여 혼합물을 제조할 수 있다. In one embodiment, a mixture can be prepared by physically mixing the dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product and the second bio-derived polymer.
본 발명은 상기 혼합물을 멸균하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. The present invention may further include the step of sterilizing the mixture.
상기 멸균 단계를 통해 창상 치료용 조성물 내의 면역성을 제거할 수 있으며, 세균 등을 효과적으로 파괴할 수 있다. Through the sterilization step, immunity in the wound treatment composition can be removed and bacteria, etc. can be effectively destroyed.
일 구체예에서, 상기 멸균 단계는 방사선을 조사하여 수행할 수 있으며, 방사선의 조사 범위는 10 내지30 kGy일 수 있다.In one embodiment, the sterilization step may be performed by irradiating radiation, and the irradiation range of radiation may be 10 to 30 kGy.
하기 실시예를 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명의 범주는 하기 실시예에 한정되는 것이 아니며 첨부된 특허청구범위에 기재된 사항에 의해 도출되는 기술적 사항을 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 변형, 수정 또는 응용이 가능하다는 것을 당업자는 이해할 수 있을 것이다. The present invention will be described in more detail through the following examples. However, the scope of the present invention is not limited to the following examples, and those skilled in the art will understand that various variations, modifications, or applications are possible without departing from the technical details derived from the matters described in the appended claims. will be.
실시예Example
실시예 1. 창상 치료용 조성물 제조 Example 1. Preparation of composition for wound treatment
(1) 미세입자화 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물 제조(1) Preparation of fine particle dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product
① 미세입자화 진피 유래 세포외기질 제조① Manufacturing of fine particle dermis-derived extracellular matrix
피부 조직(조직은행으로부터 비영리 목적의 환자 치료를 위해 기증받은 시신으로부터 채취)을 준비하였다. Skin tissue (collected from cadavers donated for non-commercial patient treatment from a tissue bank) was prepared.
피부 조직을 멸균 증류수로 세척하였다. 세척된 피부 조직을 가위 등을 이용하여 근막 및 지방을 물리적으로 제거하였다. 상기 피부 조직을 0.1M 내지 10M 염화나트륨과 1% 내지 10% 과산화수소로 24 시간 동안 처리하여 피부 조직에서 표피 및 시반을 제거하였다. 표피 및 시반이 제거된 피부 조직에서 40% 내지 60% 아이소프로필 알코올 및 40% 내지 60% 헥산을 이용하여 2시간 동안 탈지방화 과정을 수행하였다. 지방이 제거된 피부 조직에 0.1% 내지 10% SDS 용액을 처리하여 세포를 제거하였다(진피 유래 세포외기질 제조).The skin tissue was washed with sterile distilled water. Fascia and fat were physically removed from the washed skin tissue using scissors, etc. The skin tissue was treated with 0.1M to 10M sodium chloride and 1% to 10% hydrogen peroxide for 24 hours to remove the epidermis and tarsal from the skin tissue. A defatting process was performed on skin tissue from which the epidermis and varnish were removed using 40% to 60% isopropyl alcohol and 40% to 60% hexane for 2 hours. Skin tissue from which fat was removed was treated with 0.1% to 10% SDS solution to remove cells (preparation of dermis-derived extracellular matrix).
상기 제조된 진피 유래 세포외기질을 멸균증류수로 2 시간 동안 세척하였다. 진피 유래 세포외기질을 동결건조하여 수분 함유량을 10% 이하로 조절하였다. 동결건조가 완료된 진피 유래 세포외기질을 마이크로 분쇄기를 이용하여 미세입자화 하였다. The dermis-derived extracellular matrix prepared above was washed with sterilized distilled water for 2 hours. The dermis-derived extracellular matrix was freeze-dried and the moisture content was adjusted to less than 10%. The freeze-dried extracellular matrix derived from dermis was converted into fine particles using a micro grinder.
② 미세입자화 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물 제조② Production of fine particle dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product
미세입자화한 진피 유래 세포외기질과 히알루론산(hyaluronic acid, HA)을 가교제인 1,4-butanediol diglycidyl ether(BDDE)와 혼합하여 진피 유래 세포외기질-히알루론산 가교물을 제조하였다. A dermis-derived extracellular matrix-hyaluronic acid cross-linked product was prepared by mixing microparticles of dermis-derived extracellular matrix and hyaluronic acid (HA) with 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE), a cross-linking agent.
구체적으로, 0.1N 내지 1N의 수산화나트륨 수용액 100 ml당 1 ml 내지 10ml의 BDDE를 첨가하여 반응 용매를 준비했다. 준비된 반응 용매에 1g 내지 20g의 HA와 1g 내지 20g의 미세입자화한 진피 유래 세포외기질을 첨가한 후 균질하게 혼합하여 혼합 용액을 준비했다. Specifically, a reaction solvent was prepared by adding 1 ml to 10 ml of BDDE per 100 ml of 0.1N to 1N aqueous sodium hydroxide solution. A mixed solution was prepared by adding 1g to 20g of HA and 1g to 20g of finely divided dermis-derived extracellular matrix to the prepared reaction solvent and mixing homogeneously.
상기 혼합 용액을 30℃ 내지 50℃에서 3 시간 동안 반응을 진행하여 가교를 완료하였다. 가교 반응이 완료된 반응물은 8,000 rpm에서 10 분 간 원심분리를 통해 상등액을 제거하였으며, 세척 과정을 5 내지 10회 반복하였다. The mixed solution was reacted at 30°C to 50°C for 3 hours to complete crosslinking. After the crosslinking reaction was completed, the supernatant was removed by centrifugation at 8,000 rpm for 10 minutes, and the washing process was repeated 5 to 10 times.
미세입자화 진피 유래 세포외기질-히알루론산의 가교물을 동결건조하여 수분 함유량을 10% 이하로 조절하였다. 동결건조가 완료된 미세입자화 진피 유래 세포외기질-히알루론산의 가교물을 마이크로 분쇄기를 이용하여 미세입자화 하였다. 제조된 세포외기질-히알루론산 가교물의 입자 크기는 100 내지 800 μm였다. The microparticle-derived dermis-derived extracellular matrix-hyaluronic acid cross-linked product was freeze-dried to control the moisture content to 10% or less. The cross-linked product of the freeze-dried dermis-derived extracellular matrix-hyaluronic acid into microparticles was converted into microparticles using a micro grinder. The particle size of the prepared extracellular matrix-hyaluronic acid crosslinked product was 100 to 800 μm.
(2) 제 2 생체유래 고분자(HA 담체) 제조(2) Production of second bio-derived polymer (HA carrier)
히알루론산(HA)을 가교제인 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE)와 혼합하여 HA 담체를 제조하였다. An HA carrier was prepared by mixing hyaluronic acid (HA) with 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE), a cross-linking agent.
구체적으로, 0.1N 내지 1N 농도의 수산화나트륨 수용액 100 ml 당 1ml 내지 10ml의 BDDE를 첨가하여 반응 용매를 준비하였다. 준비된 반응 용매에 1g 내지 20g의 HA를 첨가한 후 균질하게 혼합하여 혼합용액을 준비하였다. 혼합용액은 50℃에서 3 시간 동안 반응을 진행하여 가교를 완료하였다. Specifically, a reaction solvent was prepared by adding 1 ml to 10 ml of BDDE per 100 ml of sodium hydroxide aqueous solution with a concentration of 0.1N to 1N. A mixed solution was prepared by adding 1g to 20g of HA to the prepared reaction solvent and mixing homogeneously. The mixed solution was reacted at 50°C for 3 hours to complete crosslinking.
가교반응이 완료된 반응물은 투석막에 넣고 5L의 인산완충용액(Phosphate-buffered saline)으로 상온에서 투석하였다. 2시간 후, 5L의 50% EtOH로 교체하고 상온에서 1시간 투석하였다. 이후 멸균증류수로 상온에서 72시간 동안 투석시켜 HA 담체를 수득하였다.After the crosslinking reaction was completed, the reactant was placed in a dialysis membrane and dialyzed against 5L of phosphate-buffered saline at room temperature. After 2 hours, it was replaced with 5L of 50% EtOH and dialyzed for 1 hour at room temperature. Afterwards, the HA carrier was obtained by dialyzing with sterilized distilled water at room temperature for 72 hours.
(3) 창상 치료용 조성물 제조 (3) Preparation of composition for wound treatment
(1)에서 제조한 미세입자화 진피 유래 세포외기질-HA 가교물과 (2)에서 제조한 HA 담체를 하기 표의 함량으로 혼합한 후, 혼합된 최종산물을 25kGy 감마선으로 멸균하였다.The microparticle dermis-derived extracellular matrix-HA cross-linked product prepared in (1) and the HA carrier prepared in (2) were mixed in the amounts shown in the table below, and the mixed final product was sterilized with 25 kGy gamma rays.
실험예 1. 창상 치료용 조성물의 물리적 특성 분석Experimental Example 1. Analysis of physical properties of composition for wound treatment
(1) 점성 분석(1) Viscosity analysis
실시예 1에서 제조된 창상 치료용 조성물(시료 1 내지 4)의 점성을 확인하였다. The viscosity of the wound treatment composition (samples 1 to 4) prepared in Example 1 was confirmed.
구체적으로, 시료 1 내지 4에 대하여 회전형 레오미터(분석 조건:진동수 = 0.1~10 Hz, 온도 = 25℃, 변형율 = 1%)를 사용하여 복소점도를 측정하였다.Specifically, the complex viscosity of Samples 1 to 4 was measured using a rotational rheometer (analysis conditions: frequency = 0.1 to 10 Hz, temperature = 25°C, strain = 1%).
상기 측정 결과를 도 1에 나타내었다. The measurement results are shown in Figure 1.
도 1에 나타난 바와 같이, HA 담체만으로 구성된 시료 1의 복소점도는 280 Pa·s로 나타났고, 두 성분을 함께 포함하는 시료 2의 복소점도는 1890 Pa·s, 시료 3의 복소점도는 4210 Pa·s 및 시료 4의 복소점도는 4340 Pa·s로 측정되었다. 상기 결과로부터 시료 1 및 2에 비해 시료 3 및 4의 복소점도가 유의미하게 높은 것을 확인할 수 있다.As shown in Figure 1, the complex viscosity of Sample 1, which consists of only the HA carrier, was 280 Pa·s, the complex viscosity of Sample 2, which contains both components, was 1890 Pa·s, and the complex viscosity of Sample 3 was 4210 Pa. ·s and the complex viscosity of Sample 4 were measured at 4340 Pa·s. From the above results, it can be seen that the complex viscosity of Samples 3 and 4 is significantly higher than that of Samples 1 and 2.
즉, 미세입자화 진피 유래 세포외기질-HA 가교물을 20% 이상 포함할 경우 우수한 복소점도 값을 가지는 것을 확인할 수 있다. In other words, it can be confirmed that it has an excellent complex viscosity value when it contains more than 20% of the microparticle-derived dermis-derived extracellular matrix-HA cross-linked product.
실험예 2. 창상 치료용 조성물의 in vivo 성능 검증Experimental Example 2. Verification of in vivo performance of wound treatment composition
실시예 1에서 제조된 창상 치료용 조성물(시료 1 내지 4)의 성능을 검증하기 위하여, 동물실험을 진행하였다. In order to verify the performance of the wound treatment composition (samples 1 to 4) prepared in Example 1, an animal test was conducted.
구체적으로, 넓은 크기와 깊이의 창상을 적용하기 위해 SD 랫의 등에 가로*세로*깊이가 2cm*2cm*0.5cm인 정사각형의 전층 창상을 유발하고, 창상 부위에 각 시료를 0.5 cc씩 도포하였다. 도포 후 2주와 4주에 실험동물을 희생하여 결과를 분석하였다.Specifically, in order to apply wounds of wide size and depth, a square full-thickness wound measuring 2cm x 2cm x 0.5cm was created on the back of an SD rat, and 0.5 cc of each sample was applied to the wound area. The experimental animals were sacrificed 2 and 4 weeks after application and the results were analyzed.
(1) 창상 치료용 조성물 도포 직 후 형태유지력 검증(1) Verification of shape retention immediately after application of wound treatment composition
창상 치료용 조성물을 도포한 직후의 사진을 촬영하였다.A photo was taken immediately after applying the wound treatment composition.
도 2는 시료 3을 창상표면에 도포한 직후의 창상 부위를 촬영한 사진이다. 상기 도 2에 나타난 바와 같이, 창상 치료용 조성물이 잘 응집되어 창상부위에서 이탈되지 않는 것을 확인할 수 있다. Figure 2 is a photograph taken of the wound area immediately after applying Sample 3 to the wound surface. As shown in Figure 2, it can be seen that the wound treatment composition is well cohesive and does not come off from the wound area.
(2) 창상 치유 효과 검증(2) Verification of wound healing effect
창상 치료용 조성물을 도포한 후 4주 동안 창상 부위에서의 변화를 촬영하였고, 디지털 캘리퍼스를 통해 창상 부위 면적을 측정하였다.Changes in the wound area were photographed for 4 weeks after applying the wound treatment composition, and the area of the wound area was measured using a digital caliper.
도 3은 4주 동안 창상 부위에서의 변화를 촬영한 사진(a) 및 창상 부위 면적을 측정한 결과(b)를 나타낸다. Figure 3 shows a photograph of changes in the wound area over 4 weeks (a) and the results of measuring the area of the wound area (b).
도 3에 나타난 바와 같이, 시료 3이 시료 1, 2 및 4에 비해 창상 치유 효과가 우수한 것을 확인할 수 있다. 특히, 시료 3이 시료 1, 2 및 4보다 5 일부터 창상의 크기가 유의미하게 감소하는 것을 확인할 수 있다. As shown in Figure 3, it can be seen that Sample 3 has a superior wound healing effect compared to Samples 1, 2, and 4. In particular, it can be seen that the size of the wound of sample 3 significantly decreased from day 5 compared to samples 1, 2, and 4.
(3) 창상 치유 분석(3) Wound healing analysis
창상 치료용 조성물을 도포한 후 2주와 4주에 실험동물을 희생하여 창상 부위를 적출하였다. 적출한 창상 부위를 10% 포르말린으로 고정하고 파라핀 블록을 만든 후 동결박절기를 사용하여 슬라이드를 제작하였다. 각 시료의 슬라이드를 H&E 염색하여 조직분석을 진행했고, 창상 부위의 길이를 측정하여 창상 치유 효과를 확인하였다. At 2 and 4 weeks after applying the wound treatment composition, the experimental animals were sacrificed and the wound area was extracted. The extracted wound area was fixed with 10% formalin, a paraffin block was made, and a slide was prepared using a cryodissection machine. The slides of each sample were stained with H&E for tissue analysis, and the length of the wound area was measured to confirm the wound healing effect.
도 4는 창상 치유 효과를 확인할 결과를 나타낸다. Figure 4 shows the results confirming the wound healing effect.
도 4에 나타난 바와 같이, H&E 염색 결과, 시료 3은 시료 1, 2 및 4보다 창상 부위의 길이가 시간이 지남에 따라 빠르게 감소하는 것을 확인할 수 있다. As shown in Figure 4, as a result of H&E staining, it can be seen that the length of the wound area of Sample 3 decreases faster over time than Samples 1, 2, and 4.
(4) 콜라겐 밀도 평가(4) Collagen density evaluation
(3)에서 적출한 창상 부위에서의 콜라겐 생성을 확인하였다. Collagen production was confirmed in the wound area extracted in (3).
구체적으로, 각 시료의 슬라이드를 MT 염색하여 조직분석을 진행했고, 콜라겐 밀도를 평가하였다. Specifically, tissue analysis was performed by MT staining the slides of each sample, and collagen density was evaluated.
도 5는 콜라겐 밀도를 측정한 결과를 나타낸다. Figure 5 shows the results of measuring collagen density.
상기 도 5에 나타난 바와 같이, MT 염색 결과, 시료 3은 시료 1, 2 및 4보다 콜라겐 생성이 더 우수한 것을 확인할 수 있다. As shown in FIG. 5, as a result of MT staining, it can be confirmed that Sample 3 produced better collagen than Samples 1, 2, and 4.
Claims (16)
제 2 생체유래 고분자를 포함하며,
상기 진피 유래 세포외기질은 탈지방화 및 탈세포화된 피부유래 진피 조직이고,
상기 제 1 생체유래 고분자는 히알루론산이며,
상기 제 2 생체유래 고분자는 히알루론산의 가교물이고,
상기 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물의 함량은 조성물 전체 중량 대비 5 내지 40 중량%이고,
상기 제 2 생체유래 고분자의 함량은 조성물 전체 중량 대비 60 내지 95 중량%이며,
복소점도는 1,000 내지 10,000 Pa·s인 창상 치료용 조성물.
Dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product; and
Containing a second bio-derived polymer,
The dermis-derived extracellular matrix is de-fatted and decellularized skin-derived dermal tissue,
The first bio-derived polymer is hyaluronic acid,
The second bio-derived polymer is a cross-linked product of hyaluronic acid,
The content of the dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked material is 5 to 40% by weight based on the total weight of the composition,
The content of the second bio-derived polymer is 60 to 95% by weight based on the total weight of the composition,
A composition for wound treatment having a complex viscosity of 1,000 to 10,000 Pa·s.
진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물의 평균 입경은 100 내지 800 μm인, 창상 치료용 조성물.
According to claim 1,
A composition for treating wounds, wherein the dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked material has an average particle size of 100 to 800 μm.
상기 진피 유래 세포외기질은 탈지방화 및 탈세포화된 피부유래 진피 조직이며,
상기 제 1 생체유래 고분자는 히알루론산이고,
상기 제 2 생체유래 고분자는 히알루론산의 가교물이며,
상기 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물의 함량은 조성물 전체 중량 대비 5 내지 40 중량%이고,
상기 제 2 생체유래 고분자의 함량은 조성물 전체 중량 대비 60 내지 95 중량%이며,
복소점도는 1,000 내지 10,000 Pa·s인 창상 치료용 조성물의 제조 방법.
Dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product; And mixing a second bio-derived polymer,
The dermis-derived extracellular matrix is de-fatted and decellularized skin-derived dermal tissue,
The first bio-derived polymer is hyaluronic acid,
The second bio-derived polymer is a cross-linked product of hyaluronic acid,
The content of the dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked material is 5 to 40% by weight based on the total weight of the composition,
The content of the second bio-derived polymer is 60 to 95% by weight based on the total weight of the composition,
A method for producing a composition for wound treatment having a complex viscosity of 1,000 to 10,000 Pa·s.
진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물은 a) 분리된 피부 조직에서 지질 성분을 제거하는 단계;
b) 상기 지질 성분이 제거된 피부 조직에서 세포를 제거하여 진피 유래 세포외기질을 제조하는 단계;
c) 상기 세포가 제거된 피부 조직을 동결건조하는 단계;
d) 상기 동결건조된 동결건조물을 분말화하는 단계;
e) 상기 분말화된 진피 유래 세포외기질과 제 1 생체유래 고분자를 가교결합시켜 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물을 제조하는 단계;
f) 상기 가교된 진피 유래 세포외기질-제 1 생체유래 고분자 가교물을 동결건조하는 단계; 및
g) 상기 동결건조된 동결건조물을 분말화하는 단계를 통해 제조되는 것인, 창상 치료용 조성물의 제조 방법.
According to clause 9,
The dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product includes the steps of a) removing lipid components from separated skin tissue;
b) preparing a dermis-derived extracellular matrix by removing cells from the skin tissue from which the lipid component has been removed;
c) freeze-drying the skin tissue from which the cells have been removed;
d) powdering the freeze-dried product;
e) cross-linking the powdered dermis-derived extracellular matrix and the first bio-derived polymer to prepare a dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product;
f) freeze-drying the cross-linked dermis-derived extracellular matrix-first bio-derived polymer cross-linked product; and
g) A method for producing a composition for wound treatment, which is manufactured through the step of powdering the freeze-dried product.
단계 a)는 탈지질 용액을 사용하여 수행하며
상기 탈지질 용액은 극성 용매, 비극성 용매, 또는 이들의 혼합 용매를 포함하는 것인 창상 치료용 조성물의 제조 방법.
According to claim 10,
Step a) is performed using a delipidating solution and
The method of producing a composition for wound treatment, wherein the delipidating solution includes a polar solvent, a non-polar solvent, or a mixed solvent thereof.
단계 b)는 탈세포 용액을 사용하여 수행되며,
상기 탈세포 용액은 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화암모늄, 칼슘카보네이트, 수산화마그네슘, 수산화칼슘, 암모니아, 소듐데옥시클로라이트(Sodium Deoxycholate, SDC) 및 소듐도데실설페이트(Sodium dodecyl sulfate, SDS), 알킬벤젠설포네이트(Alkylbenzene sulfonate, ALS), 알코올에테르설페이트(Alcohol ether sulfates, AES), 소듐라우릴설페이트(Sodium Lauryl Sulfate, SLS) 및 폴리에틸렌글리콜(Polyethylen glycol, PEG)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상을 포함하는 것인, 창상 치료용 조성물의 제조 방법.
According to claim 10,
Step b) is performed using a decellularization solution,
The decellularization solution includes sodium hydroxide, potassium hydroxide, ammonium hydroxide, calcium carbonate, magnesium hydroxide, calcium hydroxide, ammonia, sodium deoxycholate (SDC), sodium dodecyl sulfate (SDS), and alkylbenzene. Containing at least one selected from the group consisting of alkylbenzene sulfonate (ALS), alcohol ether sulfates (AES), sodium lauryl sulfate (SLS), and polyethylene glycol (PEG). A method for producing a composition for treating wounds.
단계 e)는 가교제의 존재 하에서 수행되며,
상기 가교제는 부탄디올디글리시딜에테르(1,4-butandiol diglycidyl ether, BDDE), 에틸렌글리콜디글리시딜에테르(ethylene glycol diglycidyl ether, EGDGE), 헥산디올디글리시딜에테르(1,6-hexanediol diglycidyl ether), 프로필렌글리콜디글리시딜에테르(propylene glycol diglycidyl ether), 폴리프로필렌글리콜디글리시딜에테르(polypropylene glycol diglycidyl ether), 폴리테트라메틸렌글리콜디글리시딜에테르(polytetramethylene glycol diglycidyl ether), 네오펜틸글리콜디글리시딜에테르(neopentyl glycol diglycidyl ether), 폴리글리세롤폴리글리시딜에테르(polyglycerol polyglycidyl ether), 디글리세롤폴리글리시딜에테르(diglycerol polyglycidyl ether), 글리세롤폴리글리시딜에테르(glycerol polyglycidyl ether), 트리메틸프로판폴리글리시딜에테르(tri-methylpropane polyglycidyl ether), 비스에폭시프로폭시에틸렌(1,2-(bis(2,3-epoxypropoxy)ethylene), 펜타에리쓰리톨폴리글리시딜에테르(pentaerythritol polyglycidyl ether), 및 소르비톨폴리글리시딜에테르(sorbitol polyglycidyl ether)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상인, 창상 치료용 조성물의 제조 방법.
According to claim 10,
Step e) is carried out in the presence of a cross-linking agent,
The crosslinking agent is butanediol diglycidyl ether (1,4-butandiol diglycidyl ether, BDDE), ethylene glycol diglycidyl ether (EGDGE), and hexanediol diglycidyl ether (1,6-hexanediol). diglycidyl ether), propylene glycol diglycidyl ether, polypropylene glycol diglycidyl ether, polytetramethylene glycol diglycidyl ether, Neo Neopentyl glycol diglycidyl ether, polyglycerol polyglycidyl ether, diglycerol polyglycidyl ether, glycerol polyglycidyl ether ), tri-methylpropane polyglycidyl ether, bisepoxypropoxyethylene (1,2-(bis(2,3-epoxypropoxy)ethylene), pentaerythritol polyglycidyl ether (pentaerythritol) A method of producing a composition for treating wounds, which is at least one selected from the group consisting of polyglycidyl ether), and sorbitol polyglycidyl ether.
가교제의 함량은 진피 유래 세포외기질 중량 대비 0.5 내지 10 중량%인, 창상 치료용 조성물의 제조 방법.
According to claim 13,
A method for producing a composition for wound treatment, wherein the content of the cross-linking agent is 0.5 to 10% by weight relative to the weight of the dermis-derived extracellular matrix.
제 2 생체유래 고분자는 생체유래 고분자를 가교제를 이용하여 가교하는 단계; 및
상기 가교된 가교물을 건조하는 단계를 통해 제조되는 것인, 창상 치료용 조성물의 제조 방법.
According to clause 9,
The second bio-derived polymer includes cross-linking the bio-derived polymer using a cross-linking agent; and
A method for producing a composition for wound treatment, which is manufactured through the step of drying the cross-linked product.
혼합된 혼합물을 멸균하는 단계를 추가로 포함하는 것인, 창상 치료용 조성물의 제조 방법. According to clause 9,
A method for producing a composition for wound treatment, further comprising the step of sterilizing the mixed mixture.
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