KR102552779B1 - Method for determining an organic ginseng using the organic acid - Google Patents

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Abstract

본 명세서에는 바이오마커인 유기산을 이용하여 유기농 인삼과 농약 및 화학비료를 사용하여 재배한 관행인삼을 판별하는 방법에 관한 것으로, 구체적으로 유기산 중 이소시트르산의 함량을 측정하여 비교함으로써 유기농 인삼을 판별하는 방법을 제공하며, 이에 의해 기존 유기농 인삼을 판별하기 위해 다양한 종류의 잔류농약 및 화학비료 모두를 검사하여야 하는 판별법에 비해 간단하고 빠르게 유기농 인삼을 판별할 수 있는 효과를 제공한다.The present specification relates to a method for distinguishing organic ginseng from conventional ginseng cultivated using pesticides and chemical fertilizers using organic acid as a biomarker. It provides a method, thereby providing an effect of identifying organic ginseng simply and quickly compared to the discrimination method in which all of various types of pesticide residues and chemical fertilizers must be inspected to identify existing organic ginseng.

Description

유기산을 이용한 유기농 인삼의 판별 방법{Method for determining an organic ginseng using the organic acid}Method for determining an organic ginseng using the organic acid}

본 명세서는 유기산을 이용한 유기농 인삼의 판별 방법 및 상기 판별 방법의 내용을 포함하는 키트에 관한 것이다.The present specification relates to a method for identifying organic ginseng using an organic acid and a kit including contents of the method for determining the organic ginseng.

농업 과정에서 과다 투입된 화학비료와 농약은 농산물의 안전성 문제 등을 야기하고 있다. 이에 국제적으로 지속적인 농업생산성과 식품의 안전성을 보장하기 위해 농업-환경-무역의 연계 논의가 강화되고 관련 국제규범이 제정되었으며, OECD에서는 13개 부분의 농업환경지표를 개발하여 각국의 농업 정책을 평가하고 있다. 이러한 국제적 움직임에 부응하고 능동적으로 대처하기 위해 대한민국에서는 '친환경 농업육성법' 과 '동법 시행령'을 제정하여, 친환경 농업을 장려함은 물론 친환경 농산물에 대한 품질인증을 실시하여 고부가가치 농산물 생산을 유도하고 있다. 대한민국에서 제정된 '친환경 농업육성법'에 따른 친환경 농산물 품질기준에 따르면, 농산물은 저농약 농산물(유기 합성 농약 시용기준의 1/2 이하 사용 및 화학비료 권장시비량의 1/2 이하 사용); 무농약 농산물(유기 합성 농약 시용 금지 및 화학비료 권장시비량의 1/3 이하 시용); 전환기 유기 농산물(1년 이상 유기 합성 농약 사용 금지 및 화학비료 시용금지) 및 유기 농산물(3년 이상 유기 합성 농약 사용 금지 및 화학비료 시용금지)로 분류하고 있다.Excessive use of chemical fertilizers and pesticides in the agricultural process causes safety problems of agricultural products. Accordingly, to ensure sustainable agricultural productivity and food safety internationally, discussions on the connection between agriculture-environment-trade have been strengthened and related international standards have been enacted. are doing In order to respond to and actively respond to these international movements, the Republic of Korea enacted the 'Eco-friendly Agricultural Promotion Act' and the 'Enforcement Decree of the Act' to promote eco-friendly agriculture as well as conduct quality certification for eco-friendly agricultural products to induce the production of high value-added agricultural products. there is. According to the eco-friendly agricultural product quality standards under the 'Environmentally Friendly Agriculture Promotion Act' enacted in Korea, agricultural products are low-pesticide agricultural products (using less than 1/2 of the organic synthetic pesticide application standards and using less than 1/2 of the recommended chemical fertilizer application amount); Pesticide-free agricultural products (prohibit the application of synthetic organic pesticides and apply less than 1/3 of the recommended amount of chemical fertilizers); It is classified into transitional organic agricultural products (prohibited use of organic synthetic pesticides and chemical fertilizers for more than 1 year) and organic agricultural products (banned use of organic synthetic pesticides and chemical fertilizers for more than 3 years).

상기 농산물 중 전환기 유기 농산물 및 유기 농산물의 인증에 있어서, 가장 핵심적인 심사 사항은 유기 합성 농약 및 화학비료의 사용여부를 판별하는 것이다. 현재의 품질인증 심사 체계에서는 유기 합성 농약 사용여부를 심사하기 위해서 토양이나 작물체 중의 잔류 농약 성분을 검사하는데, 그 기준은 농산물의 경우 농약 잔류량이 식품 의약품 안전청장 고시 기준의 1/10 이하로 명시되어 있다.In the certification of transitional organic agricultural products and organic agricultural products among the agricultural products, the most important examination item is to determine whether organic synthetic pesticides and chemical fertilizers are used. In the current quality certification review system, residual pesticide components in soil or crops are inspected to examine whether organic synthetic pesticides are used. there is.

특히, 인삼의 경우 유기농 인삼과 농약 및 화학비료를 관행적으로 사용하여 재배한 관행 재배인삼을 판별하는 분석방법에 있어 기존 잔류 농약 검사 및 화학비료 검사 방법으로 두 그룹을 판별하고 있는 실정이며, 이는 200여가지가 넘는 잔류 농약 모두 및 화학비료 모두를 스크리닝 해야 하는 점에서 시간 혹은 비용적 측면에서 단점이 있었다.In particular, in the case of ginseng, in the analysis method for distinguishing between organic ginseng and conventionally cultivated ginseng grown using pesticides and chemical fertilizers conventionally, the existing pesticide residue test and chemical fertilizer test method are used to discriminate the two groups. There was a disadvantage in terms of time or cost in that all of the more than 200 residual pesticides and chemical fertilizers had to be screened.

또한, 화학비료 시용 여부 판별은 영농 자료 심사와 토양 화학성 분석 등의 간접적인 방법으로 심사되고 있는데, 영농 자료는 영농인이 작위적으로 수정할 수 있고, 토양 화학성은 투입된 비료의 양에 의해 직접적으로 영향을 받는 성질이지만, 투입된 비료의 종류(화학비료 또는 유기질 비료)와는 과학적인 인과관계가 없다는 문제점이 있었다. 따라서, 현재의 기술수준에 의하면 화학비료 또는 유기질 비료 시용 여부를 객관적으로 판별하는 것은 불가능한 실정이며, 그에 따라 이들을 신뢰성 있게 측정할 수 있는 방법이 요구되고 있었다.In addition, determination of whether to use chemical fertilizers is being reviewed by indirect methods such as agricultural data review and soil chemistry analysis. Farming data can be arbitrarily modified by farmers, and soil chemistry is directly affected by the amount of fertilizer input. Although it is a receiving property, there was a problem that there was no scientific causal relationship with the type of fertilizer (chemical fertilizer or organic fertilizer) introduced. Therefore, according to the current technology level, it is impossible to objectively determine whether chemical fertilizers or organic fertilizers have been applied, and accordingly, a method capable of measuring them reliably has been required.

따라서, 바이오마커를 이용하여 간편하고 저비용으로 유기농 인삼과 관행 인삼을 판별하는 방법이 필요한 실정이며, 본 발명의 발명자들은 이에 대한 연구를 수행하여 본 발명에 이르게 되었다.Therefore, there is a need for a method for discriminating organic ginseng and conventional ginseng simply and at low cost using biomarkers, and the inventors of the present invention have conducted research on this and have reached the present invention.

한국등록특허 제 10-1444579호Korean Registered Patent No. 10-1444579 한국등록특허 제 10-0454913호Korean Registered Patent No. 10-0454913 한국등록특허 제 10-1468581호Korean Registered Patent No. 10-1468581 한국등록특허 제 10-1202282호Korean Registered Patent No. 10-1202282 한국등록특허 제 10-1149236호Korean Registered Patent No. 10-1149236

상기와 같은 문제점에 착안하여, 본 발명의 발명자들은 바이오마커를 사용하여 유기농 인삼과 관행 인삼을 판별하는 방법을 연구하여 본 발명에 이르게 되었다.In view of the above problems, the inventors of the present invention studied a method of discriminating organic ginseng from conventional ginseng using biomarkers and came to the present invention.

본 발명의 일측면은, 간편하고 용이하게 유기농 인삼과 관행 인삼을 판별하는 방법을 제공하고자 한다.One aspect of the present invention is to provide a method for simply and easily discriminating between organic ginseng and conventional ginseng.

본 발명의 일측면은, 바이오마커인 유기산을 이용하여 유기농 인삼과 관행 인삼을 판별하는 방법을 제공하고자 한다.One aspect of the present invention is to provide a method for discriminating between organic ginseng and conventional ginseng using organic acid as a biomarker.

본 발명의 다른 측면은, 상기 유기농 인삼과 관행 인삼을 판별하는 방법의 내용이 포함된 지시서를 포함하는 키트를 제공하고자 한다.Another aspect of the present invention is to provide a kit including instructions containing the contents of a method for distinguishing the organic ginseng from conventional ginseng.

본 발명의 일측면은, One aspect of the present invention,

유기농 인삼 후보 시료에서 유기산의 함량(w/w)을 측정하는 단계; Measuring organic acid content (w/w) in organic ginseng candidate samples;

상기 유기농 인삼 후보 시료와 농약 및 화학비료를 사용하여 재배한 관행 인삼의 유기산 함량을 비교하는 단계; 및Comparing the organic acid content of the organic ginseng candidate sample and conventional ginseng grown using pesticides and chemical fertilizers; and

상기 유기농 인삼 후보 시료의 유기산 함량이 관행 인삼의 유기산 함량을 초과하는 경우, 상기 유기농 인삼 후보 시료를 유기농 인삼으로 판정하는 단계;를 포함하는 유기산을 이용한 유기농 인삼의 판별 방법을 제공한다.When the organic acid content of the organic ginseng candidate sample exceeds the organic acid content of conventional ginseng, determining the organic ginseng candidate sample as organic ginseng;

본 발명의 일측면에서, 상기 유기산은 이소시트르산(isocitric acid)일 수 있다.In one aspect of the present invention, the organic acid may be isocitrate (isocitric acid).

본 발명의 일측면에서, 상기 유기농 인삼 후보 시료는 인삼의 뿌리일 수 있다.In one aspect of the present invention, the organic ginseng candidate sample may be a root of ginseng.

본 발명의 일측면에서, 상기 관행 인삼은 유기농 인삼 후보 시료와 종이 동일하고, 재배지역이 동일하며, 연근이 동일한 관행 인삼일 수 있다.In one aspect of the present invention, the conventional ginseng may be conventional ginseng having the same species, the same cultivation area, and the same lotus root as the organic ginseng candidate sample.

본 발명의 일측면에서, 상기 판정하는 단계는 상기 유기농 인삼 후보 시료의 유기산 함량이 관행 인삼의 유기산 함량의 1.1 배 이상일 때, 상기 유기농 인삼 후보 시료를 유기농 인삼으로 판정하는, 방법일 수 있다.In one aspect of the present invention, the determining step may be a method of determining that the organic ginseng candidate sample is organic ginseng when the organic acid content of the organic ginseng candidate sample is 1.1 times or more than the organic acid content of conventional ginseng.

본 발명의 다른 측면은 상기 내용을 포함하는 지시서를 포함하는 유기농 인삼 판별용 키트를 제공한다.Another aspect of the present invention provides a kit for determining organic ginseng including an instruction sheet comprising the above information.

본 발명의 일 측면에 따른 유기농 인삼의 판별방법은 유기산을 이용하므로 기존 유기농 인삼의 판별법에 비해 단시간에 판별할 수 있다.Since the method for identifying organic ginseng according to one aspect of the present invention uses organic acid, it can be identified in a shorter time compared to conventional methods for identifying organic ginseng.

본 발명의 일 측면에 따른 유기농 인삼의 판별방법은 유기산을 이용하므로 기존 유기농 인삼의 판별법에 비해 간단하게 판별할 수 있다.Since organic acid is used in the identification method of organic ginseng according to one aspect of the present invention, it can be simply identified compared to the conventional organic ginseng identification method.

본 발명의 일 측면에 따른 유기농 인삼의 판별방법은 유기산을 이용하므로 기존에 농가관리, 재배 포장, 용수, 토양 및 재배방법 각각을 인증받아야 하는 유기농 인삼의 판별법에 비해 간단하게 판별할 수 있다.Since the method for identifying organic ginseng according to one aspect of the present invention uses organic acid, it can be simply identified compared to the method for identifying organic ginseng in which each of farm management, cultivation packaging, water, soil, and cultivation method must be certified.

본 명세서에는 인삼의 재배조건, 즉 농약 및 화학비료의 사용 유무 판별에 활용할 수 있는 대사체를 분석하여, 이러한 대사체를 이용한 유기농 인삼의 판별 방법을 개시하고 있으며, 구체적으로 인삼에 대한 재배 조건별 대사체의 발현 변화를 분석하여, 특이적인 대사체인 유기산, 특히 이소시트르산을 유기농 인삼의 바이오 마커로 선정하여, 유기농 인삼의 판별 방법을 개시한다.In this specification, metabolomes that can be used to determine the cultivation conditions of ginseng, that is, the presence or absence of pesticides and chemical fertilizers are analyzed, and a method for identifying organic ginseng using these metabolites is disclosed. By analyzing the expression changes of metabolites, organic acids, especially isocitrate, which are specific metabolites, are selected as biomarkers for organic ginseng, and a method for identifying organic ginseng is disclosed.

이하 본 발명에 대하여 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명의 일측면은, One aspect of the present invention,

유기농 인삼 후보 시료에서 유기산의 함량(w/w)을 측정하는 단계; Measuring organic acid content (w/w) in organic ginseng candidate samples;

상기 유기농 인삼 후보 시료와 농약 및 화학비료를 사용하여 재배한 관행 인삼의 유기산 함량을 비교하는 단계; 및Comparing the organic acid content of the organic ginseng candidate sample and conventional ginseng grown using pesticides and chemical fertilizers; and

상기 유기농 인삼 후보 시료의 유기산 함량이 관행 인삼의 유기산 함량을 초과하는 경우, 상기 유기농 인삼 후보 시료를 유기농 인삼으로 판정하는 단계;를 포함하는 유기산을 이용한 유기농 인삼의 판별 방법을 제공한다.When the organic acid content of the organic ginseng candidate sample exceeds the organic acid content of conventional ginseng, determining the organic ginseng candidate sample as organic ginseng;

본 명세서에서 "유기농 인삼"이란 인삼의 재배시 유기 합성 농약 및 화학비료를 사용하지 않고 재배한 인삼이다. 상기와 같은 유기농 인삼에는 현행 대한민국의 '친환경 농업육성법'에 따른 농산물 품질기준상의 전환기 유기 인삼 및 유기 인삼(3년 이상 유기 합성 농약 사용 금지 및 화학비료 시용금지)이 포함된다.In the present specification, "organic ginseng" refers to ginseng grown without using organic synthetic pesticides and chemical fertilizers during cultivation of ginseng. The organic ginseng as described above includes organic ginseng and organic ginseng in the transition period according to the quality standards of agricultural products according to the current 'Environmentally Friendly Agriculture Promotion Act' of the Republic of Korea (banning the use of organic synthetic pesticides and chemical fertilizers for more than 3 years).

본 명세서에서 "화학 비료"는 인공의 화학적 처리로 제조되는 비료이며, 인공의 화학적 조작을 거치지 않고 사람이나 가축의 배설물 등에서 얻어지는 천연비료 혹은 유기질 비료와 구별된다.In this specification, "chemical fertilizer" is a fertilizer produced by artificial chemical treatment, and is distinguished from natural fertilizer or organic fertilizer obtained from human or livestock excrement without artificial chemical manipulation.

본 명세서에서 "유기농 인삼 후보 시료"는 상기 유기농 인삼이 검증되지 않은 인삼으로 유기합성 농약 및 화학비료의 사용유무를 알 수 없는 인삼이다.In the present specification, "organic ginseng candidate sample" is ginseng for which the organic ginseng has not been verified, and the use of organic synthetic pesticides and chemical fertilizers is unknown.

본 명세서에서 "관행 인삼"은 유기합성 농약 및 화학비료를 사용한 기존의 관행 농법으로 재배한 인삼으로, 「식품위생법」 제7조제1항에 따라 식품의약품안전처장이 고시한 농산물(인삼)의 농약잔류 허용기준 및 화학비료 사용량을 충족하는 인삼이다.In this specification, "customary ginseng" refers to ginseng cultivated by existing conventional farming methods using organic synthetic pesticides and chemical fertilizers, and pesticides for agricultural products (ginseng) notified by the Minister of Food and Drug Safety in accordance with Article 7 (1) of the "Food Sanitation Act." It is ginseng that satisfies the residual tolerance standard and chemical fertilizer usage.

본 발명의 일측면에서, 상기 유기산은 이소시트르산(isocitric acid)일 수 있다.In one aspect of the present invention, the organic acid may be isocitrate (isocitric acid).

본 발명의 일측면에서, 상기 유기농 인삼 후보 시료는 인삼의 뿌리일 수 있다.In one aspect of the present invention, the organic ginseng candidate sample may be a root of ginseng.

본 발명의 일측면에서, 상기 유기농 인삼 후보 시료의 인삼은 Panax Ginseng C. A Meyer 일 수 있다.In one aspect of the present invention, the ginseng of the organic ginseng candidate sample may be Panax Ginseng C. A Meyer.

본 발명의 일측면에서, 상기 관행 인삼은 유기농 인삼 후보 시료와 종이 동일하고, 재배지역이 동일하고, 연근이 동일한 관행 인삼일 수 있다.In one aspect of the present invention, the conventional ginseng may be conventional ginseng having the same species, the same cultivation area, and the same lotus root as the organic ginseng candidate sample.

본 명세서에서 인삼의 "종이 동일"하다는 것은 해당 인삼의 속명 및 종명이 동일한 것일 수 있다.In the present specification, "the same species" of ginseng may mean the same generic name and species name of the corresponding ginseng.

본 명세서에서 인삼의 "재배 지역의 동일"은 대한민국 행정구역 상 동일한 시 또는 군을 의미한다.In this specification, "the same cultivation area" of ginseng means the same city or county in the administrative district of the Republic of Korea.

본 명세서에서 인삼의 "연근이 동일"하다는 것은 동일연수의 인삼을 의미하며, 4년근, 5년근 또는 6년근 인삼일 수 있다.In the present specification, "the lotus root of ginseng" means ginseng of the same age, and may be 4-year-old, 5-year-old or 6-year-old ginseng.

본 발명의 일측면에서, 유기농 인삼 후보 시료는 4년근, 5년근 또는 6년근 인삼일 수 있다.In one aspect of the present invention, the organic ginseng candidate sample may be 4-year-old, 5-year-old or 6-year-old ginseng.

본 발명의 일측면에서, 상기 판정하는 단계는 상기 유기농 인삼 후보 시료의 유기산 함량(w/w)이 관행 인삼의 유기산 함량의 1.1 배 이상일 때, 상기 유기농 인삼 후보 시료를 유기농 인삼으로 판정하는, 방법일 수 있다. 구체적으로, 상기 유기농 인삼 후보 시료의 유기산 함량(w/w)이 관행 인삼의 유기산 함량의 1.10 배 이상, 1.11배 이상, 1.12배 이상, 1.13배 이상, 1.14배 이상, 1.15배 이상, 1.16배 이상, 1.17배 이상, 1.18배 이상, 1.19배 이상, 1.20배 이상, 1.21배 이상, 1.22배 이상, 1.23배 이상, 1.24배 이상, 1.25배 이상, 1.26배 이상, 1.27배 이상, 1.28배 이상, 1.29배 이상 또는 1.30배 이상일 수 있다. 유기농 인삼 후보 시료의 함량의 배수비가 상기 범위 내일 때, 유기농 인삼 후보 시료를 유기농 인삼으로 판별할 수 있다.In one aspect of the present invention, the determining step is to determine the organic ginseng candidate sample as organic ginseng when the organic acid content (w / w) of the organic ginseng candidate sample is 1.1 times or more than the organic acid content of conventional ginseng. can be Specifically, the organic acid content (w/w) of the organic ginseng candidate sample is 1.10 times or more, 1.11 times or more, 1.12 times or more, 1.13 times or more, 1.14 times or more, 1.15 times or more, 1.16 times or more of the organic acid content of conventional ginseng. , 1.17 times or more, 1.18 times or more, 1.19 times or more, 1.20 times or more, 1.21 times or more, 1.22 times or more, 1.23 times or more, 1.24 times or more, 1.25 times or more, 1.26 times or more, 1.27 times or more, 1.28 times or more, 1.29 It can be more than twice or more than 1.30 times. When the multiple ratio of the content of the organic ginseng candidate sample is within the above range, the organic ginseng candidate sample can be determined as organic ginseng.

본 발명의 다른 측면은 상기 유기농 인삼 판별방법의 내용을 포함하는 지시서를 포함하는 유기농 인삼 판별용 키트를 제공한다.Another aspect of the present invention provides a kit for identifying organic ginseng, including instructions including the contents of the method for identifying organic ginseng.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are only for illustrating the present invention, and it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not to be construed as being limited by these examples.

[실시예 1] 유기농 인삼 및 관행 인삼의 유기산 분석 및 비교 [Example 1] Organic acid analysis and comparison of organic ginseng and conventional ginseng

유기합성 농약 및 화학비료를 사용하지 않고 재배한 유기농 인삼과 유기합성 농약 및 화학비료를 관행적으로 사용하여 재배한 관행 인삼 각각을 동일한 지역 및 동일한 연근(4, 5 또는 6년근)으로 채취하여 인삼에 함유된 유기산 함량을 분석 및 비교하였으며, 구체적으로 하기 방법에 따라 실시하였다.Organic ginseng grown without the use of organic synthetic pesticides and chemical fertilizers and conventional ginseng cultivated using conventional organic synthetic pesticides and chemical fertilizers are collected from the same region and from the same lotus root (4, 5, or 6 years old). The organic acid content contained in was analyzed and compared, and was specifically conducted according to the following method.

(1) 시료 전처리 과정(1) Sample pretreatment process

순창, 괴산, 상주, 포천, 화천 지역에서 농림축산식품부의 유기농 인증을 받은 유기농 인삼 및 농약과 화학비료를 사용하여 재배한 관행 인삼을 채취하여 세척을 실시하고 인삼 무게를 측정 하여 분쇄 한 후, 물을 넣고 초음파 추출(30 분)을 수행 하였다. 이어서 3000 rpm에서 5분간 원심분리하여 상층액을 취하여 0.45 ㎛ Syringe-Driven Filter를 이용하여 필터 후 사용하였다.Organic ginseng certified organic by the Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs and conventional ginseng cultivated using pesticides and chemical fertilizers in Sunchang, Goesan, Sangju, Pocheon, and Hwacheon regions were collected, washed, weighed, ground, and then washed with water. was added and ultrasonic extraction (30 minutes) was performed. After centrifugation at 3000 rpm for 5 minutes, the supernatant was taken and used after filtering using a 0.45 μm Syringe-Driven Filter.

(2)Methoxime 유도체화 반응(2) Methoxime derivatization reaction

인삼 물 추출액에 증류수 1 mL를 넣어 희석한 다음 methoxyamine·HCl (10 μg/μL) 100μl와 5 M NaOH를 사용하여 pH 12이상의 염기조건에서 60℃에서 30분간 반응하여 추출물 내에서 케토산의 케토그룹을 methoxime(MO) 유도체로 전환 하였다.Add 1 mL of distilled water to the ginseng water extract, dilute it, and react with 100 μl of methoxyamine HCl (10 μg/μL) and 5 M NaOH under basic conditions of pH 12 or higher at 60 ° C for 30 minutes to determine the keto group of keto acids in the extract. were converted to methoxime (MO) derivatives.

(3)추출 및 농축 과정(3) Extraction and concentration process

MO 유도체화 반응액에 NaCl을 넣어 포화 시키고 10% 황산을 넣어 pH를 2 이하가 되도록 조절 하였다. 이어서 디에틸에테르 3 mL과 에틸아세테이트 2 mL을 이용하여 케토산을 포함한 유기산들을 추출하고 triethylamine 5 μL를 넣어 질소 기류 하에 완전히 휘발 건조시켰다. 그리고 수분을 완전히 제거하기 위해 메틸렌클로라이드 100 μL를 넣고 질소 기류 하에서 한 번 더 휘발 건조 하였다.NaCl was added to the MO derivatization reaction solution to saturate it, and 10% sulfuric acid was added to adjust the pH to 2 or less. Subsequently, organic acids including keto acid were extracted using 3 mL of diethyl ether and 2 mL of ethyl acetate, and 5 μL of triethylamine was added thereto, followed by complete volatilization and drying under a nitrogen stream. In order to completely remove moisture, 100 μL of methylene chloride was added and volatilized and dried once more under a nitrogen stream.

(4) TBDMS 유도체화반응(4) TBDMS derivatization reaction

휘발 건조한 잔사에 N methyl-N-(tert-butyldimethylsilyl) trifluoroacetamide 20 μL와 toluene 20 μL를 넣은 후, 60℃에서 30분간 반응시켜 남아있는 활성수소를 TBDMS 유도체로 전환 하였다.After adding 20 μL of N methyl- N -( tert -butyldimethylsilyl) trifluoroacetamide and 20 μL of toluene to the volatilized residue, the reaction was performed at 60 °C for 30 minutes to convert the remaining active hydrogen into a TBDMS derivative.

(5)MO-TBDMS 유도체로써 유기산 분석을 위한 기체크로마토그래프-질량분석기(5) Gas chromatograph-mass spectrometer for organic acid analysis as a MO-TBDMS derivative

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인삼에서 발견된 ＴＣＡ회로 내 유기산들에 대한 구조와　정량　분석을 위하여 에질런트 (Agilent)사의 Agilenet 7890N 기체크로마토그래프-5975C 질량분석기를 사용하였다. 이온화 방법은 전자충격법이며 이온원의 온도는 230℃이었다. 컬럼은 Ultra 2 (길이 25m, 내경 0.25 mm, 필름 두께 0.11μm)를 사용하였고, 이동상 기체로는 헬륨이었으며, 유속은 0.5 mL/min이었다. 시료의 주입 방식은 분할 형식 (분할율 10:1)을 이용하였다. 컬럼의 온도는 초기에 100℃에서 2분간 머무른 후, 5℃/min 속도로 250℃까지 승온 시키고, 최종적으로 300℃까지 20℃/min으로 승온 시킨 후 5분 동안 머물게 하였다. 시료 주입구의 온도는 260℃이었으며, 연결장치의 온도는 300℃이었다.Agilent's Agilenet 7890N gas chromatograph-5975C mass spectrometer was used to analyze the structure and 　quantitatively' of the organic acids in the TCA circuit found in ginseng. The ionization method was an electron impact method, and the temperature of the ion source was 230°C. Ultra 2 (length 25 m, inner diameter 0.25 mm, film thickness 0.11 μm) was used as the column, helium was used as the mobile phase gas, and the flow rate was 0.5 mL/min. The injection method of the sample used a split format (division ratio 10:1). The temperature of the column was initially maintained at 100 °C for 2 minutes, then raised to 250 °C at a rate of 5 °C/min, and finally raised to 300 °C at a rate of 20 °C/min and maintained for 5 minutes. The temperature of the sample inlet was 260 °C, and the temperature of the connecting device was 300 °C.

(6) 유기산 분석 및 비교 결과(6) organic acid analysis and comparison results

상기와 같이 실험한 결과는 하기 표 1 내지 표 4와 같았다. 표 1은 인삼에서의 유기산에 대한 정량분석결과, 표 2는 인삼에서의 유기산에 대한 조성분석결과, 표 3은 인삼에서의 유기산에 대한 normalized 결과, 표 4는 각 지역별로 유기산의 조성변화에 대한 표이다.The results of the experiment as described above were shown in Tables 1 to 4 below. Table 1 is the quantitative analysis result of organic acid in ginseng, Table 2 is the composition analysis result of organic acid in ginseng, Table 3 is the normalized result of organic acid in ginseng, and Table 4 is the composition change of organic acid in each region. It is a table.

No. No. Analyte Analyte Amount（μｇ） Amount（μg） 포천　４년근 Pocheon = 4-year-old 괴산　４년근 Goesan 　 4-year-old 순창　５년근 Sunchang 　5 years old 상주　５년근 Resident = 5 years old 화천　６년근 Hwacheon 　6 years old 유기농 organic 관행 practice 유기농 organic 관행 practice 유기농 organic 관행 practice 유기농 organic 관행 practice 유기농 organic 관행 practice 1 One Succinic acid Succinic acid 2.2 ± 0.1 2.2 ± 0.1 1.0 ± 0.0 1.0 ± 0.0 2.6 ± 0.1 2.6 ± 0.1 1.5 ± 0.2 1.5 ± 0.2 0.5 ± 0.0 0.5 ± 0.0 1.4 ± 0.1 1.4 ± 0.1 0.4 ± 0.0 0.4 ± 0.0 1.3 ± 0.2 1.3 ± 0.2 2.7 ± 0.0 2.7 ± 0.0 0.8 ± 0.0 0.8 ± 0.0 2 2 Fumaric acid Fumaric acid 1.0 ± 0.1 1.0 ± 0.1 0.8 ± 0.2 0.8 ± 0.2 0.9 ± 0.1 0.9 ± 0.1 0.9 ± 0.1 0.9 ± 0.1 0.2 ± 0.0 0.2 ± 0.0 0.3 ± 0.0 0.3 ± 0.0 0.3 ± 0.0 0.3 ± 0.0 0.4 ± 0.0 0.4 ± 0.0 0.6 ± 0.0 0.6 ± 0.0 0.4 ± 0.1 0.4 ± 0.1 3 3 Oxaloacetic acid Oxaloacetic acid 1.6 ± 0.1 1.6 ± 0.1 1.8 ± 0.1 1.8 ± 0.1 1.3 ± 0.1 1.3 ± 0.1 1.6 ± 0.1 1.6 ± 0.1 1.5 ± 0.2 1.5 ± 0.2 1.6 ± 0.3 1.6 ± 0.3 1.6 ± 0.2 1.6 ± 0.2 1.6 ± 0.3 1.6 ± 0.3 2.1 ± 0.4 2.1 ± 0.4 2.9 ± 0.8 2.9 ± 0.8 4 4 α-Ketoglutaric acid α-Ketoglutaric acid 0.3 ± 0.0 0.3 ± 0.0 0.5 ± 0.1 0.5 ± 0.1 0.4 ± 0.0 0.4 ± 0.0 0.3 ± 0.0 0.3 ± 0.0 0.5 ± 0.0 0.5 ± 0.0 0.6 ± 0.1 0.6 ± 0.1 0.3 ± 0.0 0.3 ± 0.0 0.4 ± 0.0 0.4 ± 0.0 0.9 ± 0.1 0.9 ± 0.1 1.0 ± 0.0 1.0 ± 0.0 5 5 Malic acid Malic acid 3.9 ± 0.4 3.9 ± 0.4 6.5 ± 0.6 6.5 ± 0.6 3.8 ± 0.7 3.8 ± 0.7 2.1 ± 0.1 2.1 ± 0.1 3.4 ± 0.6 3.4 ± 0.6 3.4 ± 0.3 3.4 ± 0.3 5.3 ± 0.9 5.3 ± 0.9 4.2 ± 0.4 4.2 ± 0.4 3.5 ± 0.4 3.5 ± 0.4 6.9 ± 1.2 6.9 ± 1.2 6 6 cis-Aconitic acid cis -Aconitic acid 1.9 ± 0.3 1.9 ± 0.3 1.2 ± 0.1 1.2 ± 0.1 1.1 ± 0.1 1.1 ± 0.1 0.8 ± 0.0 0.8 ± 0.0 0.9 ± 0.0 0.9 ± 0.0 0.8 ± 0.0 0.8 ± 0.0 1.1 ± 0.1 1.1 ± 0.1 0.9 ± 0.1 0.9 ± 0.1 1.0 ± 0.0 1.0 ± 0.0 1.1 ± 0.1 1.1 ± 0.1 7 7 Citric acid Citric acid 20.1 ± 1.5 20.1 ± 1.5 12.3 ± 1.6 12.3±1.6 7.7 ± 1.4 7.7±1.4 2.1 ± 0.6 2.1 ± 0.6 16.8 ± 0.9 16.8 ± 0.9 10.3 ± 0.7 10.3 ± 0.7 13.3 ± 1.7 13.3 ± 1.7 15.0 ± 1.6 15.0±1.6 15.6 ± 1.0 15.6±1.0 37.1 ± 3.6 37.1 ± 3.6 8 8 Isocitric acid Isocitric acid 7.4 ± 0.4 7.4 ± 0.4 4.2 ± 0.5 4.2 ± 0.5 1.9 ± 0.4 1.9 ± 0.4 0.6 ± 0.1 0.6 ± 0.1 4.8 ± 0.7 4.8 ± 0.7 2.7 ± 0.5 2.7 ± 0.5 4.5 ± 0.7 4.5 ± 0.7 3.0 ± 0.3 3.0 ± 0.3 4.5 ± 0.5 4.5 ± 0.5 6.0 ± 0.8 6.0 ± 0.8 Total Total 38.3 ± 1.2 38.3 ± 1.2 28.2 ± 1.3 28.2 ± 1.3 20.5 ± 2.4 20.5 ± 2.4 9.9 ± 0.7 9.9 ± 0.7 28.4 ± 1.1 28.4 ± 1.1 21.1 ± 0.5 21.1 ± 0.5 26.7 ± 3.3 26.7 ± 3.3 26.9 ± 1.0 26.9±1.0 30.8 ± 1.8 30.8±1.8 56.2 ± 5.9 56.2 ± 5.9

No. No. Analyte Analyte Composition（％） Composition (%) 포천　４년근 Pocheon = 4-year-old 괴산　４년근 Goesan 　 4-year-old 순창　５년근 Sunchang 　5 years old 상주　５년근 Resident = 5 years old 화천　６년근 Hwacheon 　6 years old 유기농organic 관행 practice 유기농organic 관행 practice 유기농organic 관행 practice 유기농organic 관행 practice 유기농organic 관행 practice 1 One Succinic acid Succinic acid 5.7 ± 0.2 5.7 ± 0.2 3.6 ± 0.2 3.6 ± 0.2 13.2 ± 1.6 13.2±1.6 15.2 ± 1.9 15.2 ± 1.9 1.7 ± 0.1 1.7 ± 0.1 6.7 ± 0.4 6.7 ± 0.4 1.5 ± 0.1 1.5 ± 0.1 5.0 ± 0.7 5.0 ± 0.7 8.6 ± 0.6 8.6 ± 0.6 1.5 ± 0.1 1.5 ± 0.1 2 2 Fumaric acid Fumaric acid 2.6 ± 0.3 2.6 ± 0.3 2.8 ± 0.6 2.8 ± 0.6 4.7 ± 0.5 4.7 ± 0.5 9.3 ± 0.8 9.3 ± 0.8 0.6 ± 0.1 0.6 ± 0.1 1.4 ± 0.2 1.4 ± 0.2 1.0 ± 0.1 1.0 ± 0.1 1.5 ± 0.2 1.5 ± 0.2 2.1 ± 0.2 2.1 ± 0.2 0.8 ± 0.3 0.8 ± 0.3 3 3 Oxaloacetic acid Oxaloacetic acid 4.1 ± 0.3 4.1 ± 0.3 6.4 ± 0.6 6.4 ± 0.6 6.5 ± 0.3 6.5 ± 0.3 15.9 ± 0.8 15.9 ± 0.8 5.4 ± 0.9 5.4 ± 0.9 7.7 ± 1.2 7.7 ± 1.2 6.1 ± 1.3 6.1 ± 1.3 5.8 ± 1.1 5.8 ± 1.1 6.8 ± 1.0 6.8±1.0 5.2 ± 0.9 5.2 ± 0.9 4 4 α-Ketoglutaric acid α-Ketoglutaric acid 0.8 ± 0.0 0.8 ± 0.0 1.7 ± 0.2 1.7 ± 0.2 1.9 ± 0.3 1.9 ± 0.3 3.4 ± 0.3 3.4 ± 0.3 1.7 ± 0.1 1.7 ± 0.1 3.0 ± 0.4 3.0 ± 0.4 1.0 ± 0.2 1.0 ± 0.2 1.5 ± 0.1 1.5 ± 0.1 3.0 ± 0.2 3.0 ± 0.2 1.7 ± 0.1 1.7 ± 0.1 5 5 Malic acid Malic acid 10.3 ± 1.3 10.3±1.3 23.1 ± 2.9 23.1 ± 2.9 17.6 ± 1.8 17.6±1.8 21.3 ± 0.8 21.3 ± 0.8 11.8 ± 2.3 11.8 ± 2.3 16.0 ± 1.7 16.0±1.7 19.9 ± 1.0 19.9±1.0 15.8 ± 2.3 15.8 ± 2.3 11.3 ± 0.8 11.3 ± 0.8 12.2 ± 1.0 12.2±1.0 6 6 cis-Aconitic acid cis -Aconitic acid 5.0 ± 0.8 5.0 ± 0.8 4.1 ± 0.4 4.1 ± 0.4 5.3 ± 0.4 5.3 ± 0.4 7.8 ± 0.8 7.8 ± 0.8 3.1 ± 0.1 3.1 ± 0.1 3.9 ± 0.1 3.9 ± 0.1 4.1 ± 0.2 4.1 ± 0.2 3.4 ± 0.3 3.4 ± 0.3 3.1 ± 0.1 3.1 ± 0.1 1.9 ± 0.1 1.9 ± 0.1 7 7 Citric acid Citric acid 52.4 ± 2.3 52.4 ± 2.3 43.5 ± 4.0 43.5±4.0 40.3 ± 3.1 40.3 ± 3.1 21.1 ± 3.9 21.1 ± 3.9 58.9 ± 2.5 58.9 ± 2.5 48.7 ± 2.0 48.7±2.0 49.8 ± 1.5 49.8±1.5 55.7 ± 3.8 55.7 ± 3.8 50.6 ± 2.0 50.6±2.0 66.0 ± 1.6 66.0 ± 1.6 8 8 Isocitric acid Isocitric acid 19.2 ± 1.1 19.2 ± 1.1 14.8 ± 1.3 14.8±1.3 8.9 ± 1.6 8.9±1.6 6.0 ± 0.9 6.0 ± 0.9 16.8 ± 1.7 16.8±1.7 12.7 ± 2.3 12.7±2.3 16.7 ± 0.9 16.7 ± 0.9 11.2 ± 0.8 11.2 ± 0.8 14.5 ± 0.7 14.5 ± 0.7 10.7 ± 1.0 10.7±1.0

No. No. Analyte Analyte Normalized valuea Normalized value a 관행 practice 포천
4년근 Pocheon
4 years old 괴산
4년근 Goesan
4 years old 순창
5년근 Sunchang
5 years old 상주
5년근 resident
5 years old 화천
6년근 Hwacheon
6 years old 유기농organic 1 One Succinic acid Succinic acid 1.0 1.0 1.6 1.6 0.9 0.9 0.3 0.3 0.3 0.3 5.7 5.7 2 2 Fumaric acid Fumaric acid 1.0 1.0 0.9 0.9 0.5 0.5 0.4 0.4 0.6 0.6 2.8 2.8 3 3 Oxaloacetic acid Oxaloacetic acid 1.0 1.0 0.6 0.6 0.4 0.4 0.7 0.7 1.0 1.0 1.3 1.3 4 4 α-Ketoglutaric acid α-Ketoglutaric acid 1.0 1.0 0.5 0.5 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 1.7 1.7 5 5 Malic acid Malic acid 1.0 1.0 0.4 0.4 0.8 0.8 0.7 0.7 1.3 1.3 0.9 0.9 6 6 cis-Aconitic acid cis -Aconitic acid 1.0 1.0 1.2 1.2 0.7 0.7 0.8 0.8 1.2 1.2 1.6 1.6 7 7 Citric acid Citric acid 1.0 1.0 1.2 1.2 1.9 1.9 1.2 1.2 0.9 0.9 0.8 0.8 8 8 Isocitric acid Isocitric acid 1.0 1.0 1.3 1.3 1.5 1.5 1.3 1.3 1.5 1.5 1.4 1.4

No. No. Analyte Analyte 포천
４년근 Pocheon
4 years old 괴산
４년근 Goesan
4 years old 순창
５년근 Sunchang
5 years old 상주
５년근 resident
5 years old 화천
６년근 Hwacheon
6 years old 1 One Succinic acid Succinic acid 증가 (60%) increase (60%) 감소 (70%) Decrease (70%) 감소 (70%) Decrease (70%) 증가 (470%) increase (470%) 2 2 Fumaric acid Fumaric acid 감소 (50%) Decrease (50%) 감소 (60%) decrease (60%) 감소 (40%) decrease (40%) 증가 (180%) increase (180%) 3 3 Oxaloacetic acid Oxaloacetic acid 감소 (40%) decrease (40%) 감소 (60%) decrease (60%) 감소 (30%) decrease (30%) 증가 (30%) increase (30%) 4 4 α-Ketoglutaric acid α-Ketoglutaric acid 감소 (50%) Decrease (50%) 감소 (40%) decrease (40%) 감소 (40%) decrease (40%) 감소 (40%) decrease (40%) 증가 (70%) increase (70%) 5 5 Malic acid Malic acid 감소 (60%) decrease (60%) 감소 (30%) decrease (30%) 증가 (30%) increase (30%) 6 6 cis-Aconitic acid cis -Aconitic acid 감소 (30%) decrease (30%) 증가 (60%) increase (60%) 7 7 Citric acid Citric acid 증가 (90%) increase (90%) 8 8 Isocitric acid Isocitric acid 증가 (30%) increase (30%) 증가 (50%) increase (50%) 증가 (30%) increase (30%) 증가 (50%) increase (50%) 증가 (40%) increase (40%)

유기산 중 isocitric acid는 포천 4년근 유기농 인삼 및 관행 인삼, 괴산 4년근 유기농 인삼 및 관행 인삼, 순창 5년근 유기농 인삼 및 관행 인삼, 상주 5년근 유기농 인삼 및 관행 인삼, 화천 6년근 유기농 인삼 및 관행 인삼 모두에서 관행 인삼에 비해 유기농 인삼에서의 함량이 높았다. 특히 표 3을 참조하면, isocitric acid의 함량은 관행 인삼에 비해 유기농 인삼이 1.3배 내지 1.5배로 높게 분석되었다.Among the organic acids, isocitric acid is Pocheon 4-year-old organic ginseng and conventional ginseng, Goesan 4-year-old organic ginseng and conventional ginseng, Sunchang 5-year-old organic ginseng and conventional ginseng, Sangju 5-year-old organic ginseng and conventional ginseng, and Hwacheon 6-year-old organic ginseng and conventional ginseng. , the content of organic ginseng was higher than that of conventional ginseng. In particular, referring to Table 3, the content of isoctric acid was analyzed to be 1.3 to 1.5 times higher in organic ginseng than in conventional ginseng.

[비교예 1] 유기농 인삼 및 관행 인삼의 지방산 분석 및 비교 [Comparative Example 1] Fatty Acid Analysis and Comparison of Organic Ginseng and Conventional Ginseng

유기합성 농약 및 화학비료를 사용하지 않고 재배한 유기농 인삼과 유기합성 농약 및 화학비료를 관행적으로 사용하여 재배한 관행 인삼 각각을 동일한 지역 및 동일한 연근(4, 5 또는 6년근)으로 채취하여 인삼에 함유된 지방산 함량을 분석 및 비교하였으며, 구체적으로 하기 방법에 따라 실시하였다.Organic ginseng cultivated without the use of organic synthetic pesticides and chemical fertilizers and conventional ginseng cultivated using organic synthetic pesticides and chemical fertilizers conventionally are collected from the same region and the same lotus root (4, 5, or 6 years old). The fatty acid content contained in was analyzed and compared, and was specifically conducted according to the following method.

(1) 시료 전처리 과정(1) Sample pretreatment process

순창, 괴산, 상주, 포천, 화천 지역에서 유기농 인삼 및 관행 인삼을 채취하여 세척을 실시하고 인삼 무게를 측정하여 분쇄한 후, 물을 넣고 초음파 추출(30 분)을 수행하였다. 이어서 3000 rpm에서 5분간 원심분리하여 상층액을 취하여 0.45 ㎛ Syringe-Driven Filter를 이용하여 필터 후 사용하였다.Organic ginseng and conventional ginseng were collected from Sunchang, Goesan, Sangju, Pocheon, and Hwacheon regions, washed, weighed and pulverized, and then ultrasonically extracted (30 minutes) with water added. Subsequently, the supernatant was taken by centrifugation at 3000 rpm for 5 minutes and used after filtering using a 0.45 μm Syringe-Driven Filter.

(2) 추출 및 농축 과정(2) extraction and concentration process

인삼 물 추출액에 NaCl을 넣어 포화시키고, 10% 황산을 넣어 pH를 2 이하가 되도록 조절하였다. 이어서 디에틸에테르 3 mL과 에틸아세테이트 2 mL을 이용하여 지방산들을 추출하고 질소 기류 하에 완전히 휘발 건조시켰다. 그리고 수분을 완전히 제거하기 위해 메틸렌 클로라이드 100μL를 넣고 질소 기류하에서 한 번 더 휘발 건조하였다.NaCl was added to the ginseng water extract to saturate it, and 10% sulfuric acid was added to adjust the pH to 2 or less. Subsequently, fatty acids were extracted using 3 mL of diethyl ether and 2 mL of ethyl acetate, and completely evaporated to dryness under a nitrogen stream. In order to completely remove moisture, 100 μL of methylene chloride was added and volatilized and dried once more under a nitrogen stream.

(3) 분석 과정(3) Analysis process

상기 휘발 건조한 잔사를 TBDMS 유도체화 반응시키고 기체크로마토그래프-질량분석기를 활용하여 TBDMS 유도체로써 지방산을 분석하였다.The volatilized residue was subjected to a TBDMS derivatization reaction, and fatty acids were analyzed as a TBDMS derivative using a gas chromatograph-mass spectrometer.

(4) 지방산 분석 및 비교 결과 (4) Fatty acid analysis and comparison results

상기와 같이 실험한 결과는 하기 표 5와 같았다. 표 5는 인삼에서의 유기산에 대한 normalized 결과이다. 하기 표 5와 같이 유기농 인삼과 관행 인삼 사이에는 지방산 함량에 따른 유의미한 차이를 찾을 수 없었다.The results of the experiment as described above are shown in Table 5 below. Table 5 shows the normalized results for organic acids in ginseng. As shown in Table 5 below, no significant difference was found between organic ginseng and conventional ginseng according to the fatty acid content.

No. No. Analyte Analyte Normalized value Normalized value 관행 practice 포천
4년근 Pocheon
4 years old 괴산
4년근 Goesan
4 years old 순창
5년근 Sunchang
5 years old 상주
5년근 resident
5 years old 화천
6년근 Hwacheon
6 years old 유기농organic 1 One C8 C8 1.0 1.0 1.2 1.2 0.8 0.8 1.2 1.2 1.1 1.1 0.8 0.8 2 2 C10 C10 1.0 1.0 1.4 1.4 0.8 0.8 1.5 1.5 0.9 0.9 0.6 0.6 3 3 C12 C12 1.0 1.0 1.3 1.3 0.8 0.8 1.4 1.4 0.9 0.9 0.8 0.8 4 4 C14:1 C14:1 1.0 1.0 1.8 1.8 1.3 1.3 1.2 1.2 1.1 1.1 0.8 0.8 5 5 C14 C14 1.0 1.0 1.3 1.3 0.9 0.9 1.5 1.5 0.9 0.9 0.8 0.8 6 6 C16:1 C16:1 1.0 1.0 1.2 1.2 1.2 1.2 0.8 0.8 1.1 1.1 1.6 1.6 7 7 C16 C16 1.0 1.0 0.8 0.8 1.0 1.0 0.7 0.7 1.0 1.0 1.0 1.0 8 8 C18:1 C18:1 1.0 1.0 0.9 0.9 1.2 1.2 1.0 1.0 0.9 0.9 0.9 0.9 9 9 C18 C18 1.0 1.0 1.1 1.1 0.9 0.9 1.1 1.1 1.1 1.1 1.1 1.1 10 10 C20:1 C20:1 1.0 1.0 1.2 1.2 1.0 1.0 1.4 1.4 0.9 0.9 0.9 0.9 11 11 C20 C20 1.0 1.0 1.3 1.3 1.0 1.0 1.5 1.5 0.9 0.9 0.9 0.9 12 12 C22:1 C22:1 1.0 1.0 1.4 1.4 1.0 1.0 1.6 1.6 0.9 0.9 1.0 1.0 13 13 C22 C22 1.0 1.0 1.3 1.3 1.0 1.0 1.5 1.5 0.9 0.9 1.0 1.0 14 14 C24:1 C24:1 1.0 1.0 0.7 0.7 0.9 0.9 1.6 1.6 0.9 0.9 0.8 0.8 15 15 C24 C24 1.0 1.0 0.9 0.9 1.0 1.0 1.6 1.6 1.1 1.1 0.6 0.6 16 16 C26 C26 1.0 1.0 1.4 1.4 0.9 0.9 1.9 1.9 0.9 0.9 0.9 0.9

[[ 비교예comparative example 2] 유기농 인삼 및 관행 인삼의 아미노산 분석 및 비교 2] Analysis and comparison of amino acids in organic ginseng and conventional ginseng

유기합성 농약 및 화학비료를 사용하지 않고 재배한 유기농 인삼과 유기합성 농약 및 화학비료를 관행적으로 사용하여 재배한 관행 인삼 각각을 동일한 지역 및 동일한 연근(4, 5 또는 6년근)으로 채취하여 인삼에 함유된 아미노산 함량을 분석 및 비교하였으며, 구체적으로 하기 방법에 따라 실시하였다.Organic ginseng cultivated without the use of organic synthetic pesticides and chemical fertilizers and conventional ginseng cultivated using organic synthetic pesticides and chemical fertilizers conventionally are collected from the same region and the same lotus root (4, 5, or 6 years old). The amino acid content contained in was analyzed and compared, and was specifically conducted according to the following method.

(1) 시료 전처리 과정(1) Sample pretreatment process

순창, 괴산, 상주, 포천, 화천 지역에서 유기농 인삼 및 관행 인삼을 채취하여 세척을 실시하고 인삼 무게를 측정 하여 분쇄 한 후, 물을 넣고 초음파 추출(30 분)을 수행 하였다. 이어서 3000 rpm에서 5분간 원심분리하여 상층액을 취하여 0.45 ㎛ Syringe-Driven Filter를 이용하여 필터 후 사용하였다.Organic ginseng and conventional ginseng were collected from Sunchang, Goesan, Sangju, Pocheon, and Hwacheon regions, washed, weighed, ground, and ultrasonically extracted (30 minutes) with water added. Subsequently, the supernatant was taken by centrifugation at 3000 rpm for 5 minutes and used after filtering using a 0.45 μm Syringe-Driven Filter.

(2) Ethoxycarbonyl유도체화 반응(2) Ethoxycarbonyl derivatization reaction

메틸렌클로라이드 1 mL에 ethyl chloroformate 20 μL를 넣은 뒤, 인삼 물 추출액을 포함한 증류수 1 mL를 넣고 5 M NaOH를 사용하여 pH 12이상의 염기조건에서 vortex mixer를 사용하여 10분간 반응을 통하여 아미노산의 아민그룹을 ethoxycarbonyl(EOC) 유도체로 전환하였다.After adding 20 μL of ethyl chloroformate to 1 mL of methylene chloride, add 1 mL of distilled water including ginseng water extract, use 5 M NaOH, and react for 10 minutes using a vortex mixer under basic conditions of pH 12 or higher to remove the amine group of amino acids. It was converted to an ethoxycarbonyl (EOC) derivative.

(3) 추출 및 농축 과정(3) Extraction and concentration process

EOC 유도체화 반응액에 NaCl을 넣어 포화 시키고, 10% 황산을 넣어 pH를 2 이하가 되도록 조절 하였다. 이어서 디에틸에테르 3 mL과 에틸아세테이트 2 mL을 이용하여 아미노산들을 추출하고 질소 기류 하에 완전히 휘발 건조시켰다. 그리고 수분을 완전히 제거하기 위해 메틸렌 클로라이드 100μL를 넣고 질소 기류 하에서 한 번 더 휘발 건조 하였다.NaCl was added to the EOC derivatization reaction solution to saturate it, and 10% sulfuric acid was added to adjust the pH to 2 or less. Subsequently, amino acids were extracted using 3 mL of diethyl ether and 2 mL of ethyl acetate, and completely evaporated to dryness under a nitrogen stream. In order to completely remove moisture, 100 μL of methylene chloride was added and volatilized and dried once more under a nitrogen stream.

(3) 분석 과정 (3) Analysis process

상기 휘발 건조한 잔사를 TBDMS 유도체화반응시키고 기체크로마토그래프-질량분석기를 활용하여 EOC-TBDMS 유도체로써 아미노산을 분석하였다.The volatilized residue was subjected to a TBDMS derivatization reaction, and amino acids were analyzed as an EOC-TBDMS derivative using a gas chromatograph-mass spectrometer.

(4) 아미노산 분석 및 비교 결과 (4) Amino acid analysis and comparison results

상기와 같이 실험한 결과는 하기 표 6과 같았다. 표 6은 인삼에서의 아미노산에 대한 normalized 결과이다. 하기 표 6에서와 같이 유기농 인삼과 관행인삼 사이에는 아미노산 함량에 따른 유의미한 차이를 찾을 수 없었다.The results of the experiment as described above are shown in Table 6 below. Table 6 shows the normalized results for amino acids in ginseng. As shown in Table 6 below, no significant difference was found between organic ginseng and conventional ginseng according to amino acid content.

No. No. Analyte Analyte Normalized value Normalized value 관행 practice 포천
4년근 Pocheon
4 years old 괴산
4년근 Goesan
4 years old 순창
5년근 Sunchang
5 years old 상주
5년근 resident
5 years old 화천
6년근 Hwacheon
6 years old 유기농organic 1 One Alanine Alanine 1.0 1.0 0.81 0.81 1.03 1.03 0.46 0.46 1.31 1.31 0.90 0.90 2 2 Glycine Glycine 1.0 1.0 1.02 1.02 1.01 1.01 0.52 0.52 1.66 1.66 1.06 1.06 3 3 Valine Valine 1.0 1.0 0.96 0.96 1.02 1.02 0.70 0.70 1.64 1.64 0.96 0.96 4 4 Leucine Leucine 1.0 1.0 1.07 1.07 0.89 0.89 0.56 0.56 1.83 1.83 0.80 0.80 5 5 Isoleucine Isoleucine 1.0 1.0 1.05 1.05 1.19 1.19 0.74 0.74 1.77 1.77 0.92 0.92 6 6 Threonine Threonine 1.0 1.0 0.88 0.88 0.89 0.89 0.59 0.59 1.07 1.07 0.81 0.81 7 7 Proline Proline 1.0 1.0 0.90 0.90 0.87 0.87 0.40 0.40 1.70 1.70 0.89 0.89 8 8 γ-Aminobutric acid γ-Aminobutic acid 1.0 1.0 1.31 1.31 1.34 1.34 0.46 0.46 0.99 0.99 0.83 0.83 9 9 Pyroglutamic acid Pyroglutamic acid 1.0 1.0 0.80 0.80 1.00 1.00 1.69 1.69 0.75 0.75 0.70 0.70 10 10 Serine Serine 1.0 1.0 1.01 1.01 0.71 0.71 1.38 1.38 1.22 1.22 0.53 0.53 11 11 Phenylalanine Phenylalanine 1.0 1.0 1.00 1.00 0.96 0.96 0.78 0.78 1.43 1.43 0.80 0.80 12 12 Aspartic acid Aspartic acid 1.0 1.0 1.16 1.16 0.72 0.72 0.90 0.90 1.38 1.38 0.88 0.88 13 13 Glutamic acid Glutamic acid 1.0 1.0 1.09 1.09 1.11 1.11 0.71 0.71 0.89 0.89 0.91 0.91 14 14 Asparagine Asparagine 1.0 1.0 0.91 0.91 0.72 0.72 5.01 5.01 0.78 0.78 2.09 2.09 15 15 Ornithine Ornithine 1.0 1.0 1.18 1.18 1.86 1.86 0.61 0.61 1.10 1.10 0.52 0.52 16 16 Glutamine Glutamine 1.0 1.0 0.86 0.86 1.02 1.02 1.69 1.69 0.80 0.80 1.28 1.28 17 17 Lysine Lysine 1.0 1.0 1.12 1.12 0.41 0.41 1.91 1.91 0.85 0.85 0.64 0.64 18 18 Tyrosine Tyrosine 1.0 1.0 0.93 0.93 1.01 1.01 0.96 0.96 1.22 1.22 1.39 1.39 19 19 Tryptophane Tryptophane 1.0 1.0 0.94 0.94 0.90 0.90 0.87 0.87 0.91 0.91 1.06 1.06

상기와 같은 실시예 1 및 비교예 1 내지 2의 결과로부터, 유기농 인삼의 유기산 함량이 관행 인삼보다 높으며, 이는 인삼의 다른 바이오마커인 아미노산 및 지방산에 비해 유의미한 차이를 보이는 것을 확인할 수 있었다. 따라서, 유기산, 특히 isocitric acid 함량이 관행 인삼을 초과하는 경우 이러한 인삼을 유기농 인삼으로 판별할 수 있다.From the results of Example 1 and Comparative Examples 1 and 2 as described above, it was confirmed that the organic acid content of organic ginseng was higher than that of conventional ginseng, which showed a significant difference compared to amino acids and fatty acids, which are other biomarkers of ginseng. Therefore, when the content of organic acid, especially isoctric acid, exceeds conventional ginseng, such ginseng can be identified as organic ginseng.

Claims (8)

유기농 인삼 후보 시료에서 이소시트르산의 함량(w/w)을 측정하는 단계;
상기 유기농 인삼 후보 시료와 농약 및 화학비료를 사용하여 재배한 관행 인삼의 이소시트르산 함량을 비교하는 단계; 및
상기 유기농 인삼 후보 시료의 이소시트르산 함량이 관행 인삼의 이소시트르산 함량을 초과하는 경우, 상기 유기농 인삼 후보 시료를 유기농 인삼으로 판정하는 단계;를 포함하는 유기산을 이용한 유기농 인삼의 판별 방법으로서,
상기 관행 인삼은 유기농 인삼 후보 시료와 동일 종이며, 재배지역이 동일하고, 연근이 동일한 관행 인삼인, 방법.
Measuring the content (w / w) of isocitrate in organic ginseng candidate samples;
Comparing the isocitrate content of the organic ginseng candidate sample and conventional ginseng grown using pesticides and chemical fertilizers; and
When the isocitrate content of the organic ginseng candidate sample exceeds the isocitrate content of conventional ginseng, determining the organic ginseng candidate sample as organic ginseng;
The conventional ginseng is the same species as the organic ginseng candidate sample, the cultivation area is the same, and the lotus root is the same conventional ginseng.
 삭제delete 제 1항에 있어서,
상기 유기농 인삼 후보 시료는 인삼의 뿌리인, 방법.
According to claim 1,
Wherein the organic ginseng candidate sample is the root of ginseng.
 삭제delete 제 1항에 있어서,
상기 판정하는 단계는 상기 유기농 인삼 후보 시료의 이소시트르산 함량이 관행 인삼의 이소시트르산 함량의 1.1 배 이상일 때, 상기 유기농 인삼 후보 시료를 유기농 인삼으로 판정하는, 방법.
According to claim 1,
In the determining step, when the isocitrate content of the organic ginseng candidate sample is 1.1 times or more than the isocitrate content of conventional ginseng, the organic ginseng candidate sample is determined as organic ginseng.
 제 5항에 있어서,
상기 판정하는 단계는 상기 유기농 인삼 후보 시료의 이소시트르산 함량이 관행 인삼의 이소시트르산 함량의 1.2 배 이상일 때, 상기 유기농 인삼 후보 시료를 유기농 인삼으로 판정하는, 방법.
According to claim 5,
In the step of determining, when the isocitrate content of the organic ginseng candidate sample is 1.2 times or more than the isocitrate content of conventional ginseng, the organic ginseng candidate sample is determined as organic ginseng.
 제 6항에 있어서,
상기 판정하는 단계는 상기 유기농 인삼 후보 시료의 이소시트르산 함량이 관행 인삼의 이소시트르산 함량의 1.3 배 이상일 때, 상기 유기농 인삼 후보 시료를 유기농 인삼으로 판정하는, 방법.
According to claim 6,
In the determining step, when the isocitrate content of the organic ginseng candidate sample is 1.3 times or more than the isocitrate content of conventional ginseng, the organic ginseng candidate sample is determined as organic ginseng.
 제 1항, 제3항 및 제5항 내지 제 7항 중 어느 한 항의 유기농 인삼의 판별 방법의 내용을 포함하는 지시서를 포함하는 유기농 인삼 판별용 키트.Claims 1, 3, and 5 to 7, wherein any one of organic ginseng discrimination method of the organic ginseng identification kit including instructions including the contents.
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