KR102547208B1

KR102547208B1 - A Composition For Enhancing Skin Immunity Comprising Column-purified Fraction Of Ginseng Extract

Info

Publication number: KR102547208B1
Application number: KR1020210075433A
Authority: KR
Inventors: 허준혁; 조혜선; 이승호
Original assignee: 주식회사 한국인삼공사
Priority date: 2021-06-10
Filing date: 2021-06-10
Publication date: 2023-06-26
Also published as: KR20220166541A

Abstract

본 발명은 인삼 추출물의 에탄올을 이용한 컬럼 정제 분획물을 포함하는 피부면역 강화용 조성물을 제공한다. 본 발명의 피부면역 강화용 조성물은 인삼 추출물의 에탄올을 이용한 컬럼 정제 분획물을 포함함으로써 전신 면역에 관여하는 알파-베타 T 세포의 생존률을 개선할 뿐만 아니라 피부 면역에 특히 관여하는 감마-델타 T 세포의 생존률도 개선하므로, 피부면역기능 조절 및 피부면역 강화를 위한 용도로서 활용될 수 있다.The present invention provides a composition for enhancing skin immunity comprising a column-purified fraction of ginseng extract using ethanol. The composition for enhancing skin immunity of the present invention includes column-purified fractions of ginseng extract using ethanol, thereby improving the survival rate of alpha-beta T cells involved in systemic immunity, as well as improving gamma-delta T cells involved in skin immunity. Since the survival rate is also improved, it can be used for regulating skin immune function and enhancing skin immunity.

Description

A composition for enhancing skin immunity containing a column-purified fraction of ginseng extract {A Composition For Enhancing Skin Immunity Comprising Column-purified Fraction Of Ginseng Extract}

본 발명은 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물을 포함하는 피부면역 강화용 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for enhancing skin immunity comprising a column-purified fraction of a ginseng extract.

면역은 신체가 자기(self)와 비-자기(non-self)를 구별하여 외부로부터 침입하는 미생물, 세균, 바이러스뿐만 아니라 체내 조직이나 불필요한 산물 등을 비-자기 항원으로 인식하여 특이적으로 반응하여 항체를 생산하고 이를 제거함으로서 생체의 항상성을 유지하는 현장이며 체내에 존재하는 자기 방어체계이다(비특허문헌 1). 이 방어체계에는 항원에 대한 특이성에 따라 선천 면역(Innate immunity, non-specific immunity)과 후천 면역(adaptive immunity, specific immunity)으로 구분된다.Immunity is when the body differentiates between self and non-self, recognizes not only microorganisms, bacteria, and viruses invading from the outside, but also body tissues and unnecessary products as non-self antigens, and responds specifically to them. It is a field that maintains the homeostasis of the body by producing and removing antibodies and is a self-defense system present in the body (Non-Patent Document 1). This defense system is divided into innate immunity (non-specific immunity) and adaptive immunity (specific immunity) according to the specificity for the antigen.

먼저, 선천 면역은 피부나 점막과 같은 물리적 방어막 이외에도 대식세포(Macrophage)와 자연 살해 세포(Natural killer, NK 세포) 등의 면역세포들이 관여한다. 두 번째로 후천 면역은 선천 면역계의 방어막을 통과한 항원들에 특이적으로 작용하는 면역체계로 이는 다시 체액성 면역(Humoral immunity)과 세포성 면역(Cellular immunity)으로 분류된다. 체액성 면역은 B-세포의 항체에 의한 혈액에서의 반응이고 세포성 면역은 T-세포가 활성화하거나 대식세포를 유인하여 다양한 종류의 사이토카인(Cytokine)과 긴밀한 상호 작용에 의하여 제어가 이루어진다. First, innate immunity involves immune cells such as macrophages and natural killer cells (NK cells) in addition to physical defenses such as skin or mucous membranes. Second, acquired immunity is an immune system that acts specifically on antigens that have passed through the defenses of the innate immune system, which is further classified into humoral immunity and cellular immunity. Humoral immunity is a response in blood by B-cell antibodies, and cellular immunity is controlled by T-cell activation or macrophage attraction and close interaction with various types of cytokines.

세포성 면역에 관여하는 T-세포는 다양한 아형(subset)으로 구성되어 있는데, 이 중에서 γδ-T 세포(이하, 감마-델타 T 세포라고 함)는 인간의 피부나 폐, 장과 같이 병원균과의 접촉이 빈번한 점막 등에 주로 존재하는 선천성 T 세포로서 스트레스 받은 세포를 초기에 제거하거나 박테리아 등의 감염시 중요한 세포로서 알려져 있다.T-cells involved in cellular immunity are composed of various subtypes (subset), among which γδ-T cells (hereinafter referred to as gamma-delta T cells) are resistant to pathogens such as human skin, lungs, and intestines. Congenital, mainly present in mucous membranes with frequent contact As T cells, they are known to eliminate stressed cells at an early stage or to be important cells during bacterial infection.

화상 또는 여드름과 같이 피부를 통해 병원균이 감염될 수 있는 피부 질환에서 이러한 감마-델타 T 세포가 관여하게 되는데, 이는 αβ-T 세포(이하, 알파-베타 T 세포라고 함)가 관여하는 전신 면역력과는 다른 생리학적 메커니즘을 보인다. 표피에 상재하는 감마-델타 T 세포는 림프절 또는 말초혈액과 같은 조직에 주로 존재하는 알파-베타 T 세포와 달리 다수의 덴드라이트(dendrite)를 가진 특징적인 형태를 이루며 주변의 케라티노사이트(keratinocyte), 멜라노사이트(melanocyte), 랑게르한스(Langerhans) 세포 등의 표피 구성세포들과 긴밀하게 연결되어 있다. 이러한 특성으로 인하여 감마-델타 T 세포는 수지상 표피 T 세포(dendritic epidermal T cells, DETC)라고도 불린다. 또한 감마-델타 T 세포는 주변의 세포와 직접적인 접촉에 의해 상호작용을 수행할 뿐 아니라, 직접 접촉하고 있지 않은 다른 피부 내 면역세포 또는 케라티노사이트, 멜라노사이트, 섬유아세포 등과도 모종의 수단에 의하여 상호작용을 수행하는 것으로 알려져 있다. These gamma-delta T cells are involved in skin diseases in which pathogens can be transmitted through the skin, such as burns or acne. show different physiological mechanisms. Gamma-delta T cells residing in the epidermis, unlike alpha-beta T cells, which are mainly present in tissues such as lymph nodes or peripheral blood, form a characteristic shape with multiple dendrites and form a number of dendrites. , melanocytes, Langerhans cells, and other epidermal constituent cells. Due to these characteristics, gamma-delta T cells are also called dendritic epidermal T cells (DETC). In addition, gamma-delta T cells not only interact with neighboring cells by direct contact, but also interact with other immune cells in the skin or keratinocytes, melanocytes, and fibroblasts that are not in direct contact by some means. known to interact.

기존의 면역 연구는 대부분 알파-베타 T 세포로 이루어졌으나, 최근에는 감마-델타 T 세포를 이용한 연구가 활발히 이루어지고 있다. 예를 들면, 피부에 과도한 면역으로 인한 질병 등의 치료 목적을 위한 약물의 개발에서 전신 면역에 관여되는 알파-베타 T 세포에는 영향을 미치지 않으면서 상피 세포의 면역반응에 영향을 주는 감마-델타 T 세포의 비정상적인 활성을 특이적으로 억제하는 성분을 찾아 우리 몸의 면역체계에 대한 부작용을 최소화하면서 피부 또는 호흡기 관련 질병의 치료 또는 개선을 달성하려는 연구가 진행되고 있다(비특허문헌 2, 3).Most of the existing immune studies have been conducted with alpha-beta T cells, but recently, studies using gamma-delta T cells have been actively conducted. For example, in the development of drugs for the treatment of diseases caused by excessive skin immunity, gamma-delta T cells that affect the immune response of epithelial cells without affecting alpha-beta T cells involved in systemic immunity. Research is being conducted to find a component that specifically inhibits the abnormal activity of cells and to achieve treatment or improvement of skin or respiratory diseases while minimizing side effects on the body's immune system (Non-Patent Documents 2 and 3).

인삼(Panax ginseng)은 식물 분류학상으로 오갈피나무과(Araliaceae)의 인삼속(Panax)에 속하는 다년생 음지성 초본식물로서 오래 전부터 한방에서 중요한 약재로 사용되었다. 인삼은 일반적으로 가공 방법에 따라 백삼과 홍삼으로 구분되며, 백삼은 밭에서 채굴한 가공되지 아니한 인삼 즉, 수삼을 그대로 건조한 것을 지칭하며 홍삼은 수삼을 증숙하여 건조 가공한 것으로 제조 과정에서 사포닌 변형과 아미노산 변화 등 여러 화학적인 변화가 수반된다. 홍삼은 제조 과정에서 가해지는 열에 의해 인삼에 존재하지 않는 진세노사이드 Rg2, Rg3, Rh1, Rh2 등의 사포닌 성분이 생성되며, 홍삼 특유의 유효 성분은 암 예방 작용, 암세포 성장 억제 작용, 혈압 강하 작용, 뇌신경세포 보호 및 학습 능력 개선 작용, 항혈전 작용, 항산화 작용 등이 우수하다.Ginseng ( Panax ginseng ) is a perennial shady herbaceous plant belonging to the genus Panax of Araliaceae and has been used as an important medicinal material in oriental medicine for a long time. Ginseng is generally divided into white ginseng and red ginseng depending on the processing method. White ginseng refers to unprocessed ginseng mined from the field, that is, dried fresh ginseng as it is. It involves several chemical changes, such as amino acid changes. In red ginseng, saponin components such as ginsenosides Rg2, Rg3, Rh1, and Rh2, which do not exist in ginseng, are produced by the heat applied during the manufacturing process. , It is excellent in protecting brain nerve cells and improving learning ability, antithrombotic action, and antioxidant action.

본 발명자들은 피부면역 기능 조절에 특히 효능이 있는 성분에 대한 연구를 계속하던 중에 홍삼 물 추출물의 컬럼 정제 분획물이 감마-델타 T 세포의 생존률을 크게 개선시키는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.The inventors of the present invention completed the present invention by confirming that column-purified fractions of red ginseng water extract significantly improved the viability of gamma-delta T cells while continuing research on components particularly effective in regulating skin immune function.

Willoughby DA, Human arthritis applied to animal models, Towards a better therapy. Ann Rheum Dis 34: 471-478. 1975 Willoughby DA, Human arthritis applied to animal models, Towards a better therapy. Ann Rheum Dis 34: 471-478. 1975 γδ T cells amplify Blomia tropicalis-induced allergic airway disease. Allergy. 2019 Feb;74(2):395-398. γδ T cells amplify Blomia tropicalis-induced allergic airway disease. Allergy. 2019 Feb;74(2):395-398. Circadian Gene Clock Regulates Psoriasis-Like Skin Inflammation in Mice. J Invest Dermatol. 2015 Dec;135(12):3001-3008. Circadian Gene Clock Regulates Psoriasis-Like Skin Inflammation in Mice. J Invest Dermatol. 2015 Dec;135(12):3001-3008.

본 발명은 홍삼 유래 성분을 이용하여 피부면역 강화 효능이 우수한 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.An object of the present invention is to provide a composition with excellent skin immunity enhancing efficacy using red ginseng-derived components.

본 발명의 일 양태는 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물을 포함하는 피부면역 강화용 조성물을 제공한다.One aspect of the present invention provides a composition for enhancing skin immunity comprising a column-purified fraction of ginseng extract.

본 발명의 피부면역 강화용 조성물은 인삼 추출물의 에탄올을 이용한 컬럼 정제 분획물을 포함함으로써 전신 면역에 관여하는 알파-베타 T 세포의 생존률을 개선할 뿐만 아니라 피부 면역에 특히 관여하는 감마-델타 T 세포의 생존률도 개선하므로, 피부면역기능 조절 및 피부면역 강화를 위한 용도로서 활용될 수 있다.The composition for enhancing skin immunity of the present invention includes column-purified fractions of ginseng extract using ethanol, thereby improving the survival rate of alpha-beta T cells involved in systemic immunity, as well as improving gamma-delta T cells involved in skin immunity. Since the survival rate is also improved, it can be used for regulating skin immune function and enhancing skin immunity.

도 1은 제조예 2의 컬럼 정제 분획물에 대해 전신면역 및 피부면역 조절 효능을 확인한 결과이다.
도 2는 제조예 1의 홍삼 정제수 추출물에 대해 전신면역 및 피부면역 조절 효능을 확인한 결과이다.
도 3은 제조예 3의 부탄올 분획물에 대해 전신면역 및 피부면역 조절 효능을 확인한 결과이다.1 is a result of confirming systemic immunity and skin immunity regulating efficacy for the column-purified fraction of Preparation Example 2.
2 is a result of confirming the systemic immunity and skin immunity regulating efficacy of the red ginseng purified water extract of Preparation Example 1.
Figure 3 is the result of confirming the systemic immunity and skin immunity regulating efficacy for the butanol fraction of Preparation Example 3.

이하, 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 이때, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail to aid understanding of the present invention. At this time, the terms or words used in this specification and claims should not be construed as being limited to ordinary or dictionary meanings, and the inventor appropriately defines the concept of terms in order to explain his/her invention in the best way. It should be interpreted as meaning and concept consistent with the technical idea of the present invention based on the principle that it can be done.

1. 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물1. Column purified fractions of ginseng extract

본 발명에서 인삼 추출물은 인삼으로부터 통상의 방식으로 수득된 것일 수 있다. 상기 인삼은 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 인삼은 다양하게 가공된 것을 포함하며, 예를 들면 수삼, 미삼, 흑삼, 산삼, 장뇌삼, 산양삼, 호정화 인삼, 효소 처리된 미삼, 발효 인삼, 홍삼 및 발효 홍삼으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 어느 하나일 수 있으며, 이에 한정되지 않는다. 수삼은 말리지 아니한 인삼을 말하고, 미삼은 머리와 몸통에서 분리된 다리부분과 세미를 말한다. 여기서 세미란 본삼을 제외한 잔뿌리를 말한다. 홍삼은 생인삼을 쪄서 익혀 건조한 것으로 건조 과정에서 갈변 반응이 일어나 담황갈색 내지 적갈색을 띄는 것이다. 흑삼은 홍삼을 더 여러 번 찌고 건조하여 흑색으로 변화한 인삼을 말한다. 산삼은 자생 인삼을 말하며, 장뇌삼은 심어서 기른 산삼을 말한다. 산양삼은 산간의 삼림 하에서 인위적으로 종자나 묘삼을 파종 이식하여 재배한 인삼이다. 본 발명에서 상기 인삼 추출물은 인삼을 찌는 증삼 과정에서 인삼의 표면에서 생성되는 증삼액을 포함하는 의미로 사용될 수 있다. In the present invention, the ginseng extract may be obtained from ginseng in a conventional manner. The ginseng can be used without limitation, such as cultivated or commercially available. The ginseng includes variously processed ones, for example, at least any one selected from the group consisting of fresh ginseng, misam, black ginseng, wild ginseng, camphor ginseng, wild ginseng, dehydrated ginseng, enzyme-treated fine ginseng, fermented ginseng, red ginseng, and fermented red ginseng. It may be one, but is not limited thereto. Fresh ginseng refers to ginseng that has not been dried, and fine ginseng refers to the legs and semi-separated from the head and body. Here, semi refers to fine roots excluding main ginseng. Red ginseng is raw ginseng that has been steamed, cooked, and dried, and a browning reaction occurs during the drying process, resulting in a light yellowish brown to reddish brown color. Black ginseng refers to ginseng that has changed to black by steaming and drying red ginseng several times. Wild ginseng refers to ginseng that grows naturally, and camphor ginseng refers to wild ginseng that has been planted and grown. Sanyangsam is ginseng cultivated by artificially planting and transplanting seeds or seedlings under forests in the mountains. In the present invention, the ginseng extract may be used as a meaning including a steamed ginseng liquid produced on the surface of ginseng in the process of steaming ginseng.

본 발명에서 추출물은 원료로부터 임의의 방법으로 추출된 물질을 의미하며, 이렇게 추출된 추출액, 이로부터 얻을 수 있는 농축액, 상기 농축액의 건조물 및 분말을 제한 없이 모두 포함하는 의미로 사용된다.In the present invention, the extract refers to a material extracted from a raw material by any method, and is used in the sense of including all of the extracted extract, the concentrate obtained therefrom, and the dried product and powder of the concentrate without limitation.

상기 추출물을 원료로부터 추출하여 수득할 때, 추출 방법으로는 용매 추출법, 초음파 추출법, 여과법 및 환류 추출법 등 종래 알려진 통상적인 추출 방법을 모두 사용할 수 있으며, 바람직하게는 용매 추출법이나 환류 추출법을 이용함으로써 제조할 수 있다. 상기 추출 과정은 수회 반복할 수 있으며, 이후에 농축, 분무건조, 동결건조 등의 단계를 추가적으로 거칠 수 있다. 구체적으로, 수득한 추출물을 감압 농축하여 농축액을 얻고, 상기 농축액을 열풍으로 건조하거나, 동결건조시킨 후 분쇄기를 이용하여 고농도의 추출 분말을 제조할 수 있다. 추출물은 추출물을 추가적으로 분획하여 얻은 분획물도 포함한다.When the extract is obtained by extraction from a raw material, all known conventional extraction methods such as solvent extraction, ultrasonic extraction, filtration and reflux extraction may be used as extraction methods, preferably prepared by using solvent extraction or reflux extraction. can do. The extraction process may be repeated several times, and then additional steps such as concentration, spray drying, and lyophilization may be performed. Specifically, the obtained extract may be concentrated under reduced pressure to obtain a concentrate, and the concentrate may be dried with hot air or freeze-dried, and then a high-concentration extract powder may be prepared using a grinder. The extract also includes fractions obtained by further fractionating the extract.

상기 추출물은 물, 유기용매, 초임계 유체 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 추출용매로 사용할 수 있다. 상기 유기용매는 알코올, 바람직하게는 C1-C4의 저급 알코올, 헥산(n-헥산), 에테르, 글리세롤, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 메틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸아세테이트, 벤젠 및 이들의 혼합용매로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있고, 바람직하게는 물이다.The extract may use at least one selected from the group consisting of water, organic solvents, supercritical fluids, and mixtures thereof as an extraction solvent. The organic solvent is an alcohol, preferably a C1-C4 lower alcohol, hexane (n-hexane), ether, glycerol, propylene glycol, butylene glycol, ethyl acetate, methyl acetate, dichloromethane, chloroform, ethyl acetate, benzene and It may be any one selected from the group consisting of these mixed solvents, preferably water.

인삼 추출물 제조시, 추출은 10℃ 내지 100℃, 또는 50℃ 내지 100℃에서 실시될 수 있고, 바람직하게는 60℃ 내지 90℃에서 실시될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 70℃ 내지 80℃에서 실시될 수 있으나, 이에 한정되지 아니한다. 추출은 2시간 내지 12시간 동안 실시될 수 있고, 바람직하게는 5시간 내지 10시간 동안 실시될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 6시간 내지 8시간 동안 실시될 수 있다. 추출은 1회 내지 7회 실시될 수 있고, 바람직하게는 1회 내지 4회 실시될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 1회 내지 2회 실시될 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. When preparing the ginseng extract, the extraction may be carried out at 10 ° C to 100 ° C, or 50 ° C to 100 ° C, preferably at 60 ° C to 90 ° C, more preferably at 70 ° C to 80 ° C. It can be, but is not limited to. Extraction may be performed for 2 to 12 hours, preferably for 5 to 10 hours, and more preferably for 6 to 8 hours. Extraction may be performed 1 to 7 times, preferably 1 to 4 times, and more preferably 1 to 2 times, but is not limited thereto.

본 발명에서 인삼 추출물의 분획물은 인삼 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획물, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등으로 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 활성 분획물을 포함한다. 이와 같은 분획에 의해 피부면역 강화 효능이 있는 성분을 강화시킬 수 있다. In the present invention, the fraction of the ginseng extract is a fraction obtained by passing the ginseng extract through an ultrafiltration membrane having a certain molecular weight cut-off value, separation by various chromatography (made for separation according to size, charge, hydrophobicity or affinity) It includes active fractions obtained through various purification methods additionally carried out by the like. By such a fraction, it is possible to enhance components having an effect of enhancing skin immunity.

상기 크로마토그래피는 예를 들어 컬럼 크로마토그래피, 고성능액체 크로마토그래피(HPLC), 이온교환 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피 및 크기배제 크로마토그래피로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.The chromatography may be, for example, at least one selected from the group consisting of column chromatography, high performance liquid chromatography (HPLC), ion exchange chromatography, affinity chromatography, and size exclusion chromatography.

구체적으로, 본 발명에서 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물은 인삼 추출물을 컬럼 정제 분획하여 얻어지는 것일 수 있다. 상기 컬럼 정제 분획은 상기 인삼 추출물을 컬럼에 흘려 흡착시키는 단계와 상기 컬럼에 용출 용매를 첨가하여 분획물을 수득하는 단계를 통해 얻어질 수 있다. 본 발명은 이와 같은 인삼 추출물의 에탄올을 이용한 컬럼 정제 분획물이 전신 면역에 관여하는 알파-베타 T 세포의 생존률을 개선할 뿐만 아니라 피부 면역에 특히 관여하는 감마-델타 T 세포의 생존률도 개선함으로써 피부 면역 기능을 조절하는 효과가 특히 우수한 것을 특징으로 한다. Specifically, in the present invention, the column-purified fraction of the ginseng extract may be obtained by column-purified fractionation of the ginseng extract. The column-purified fraction may be obtained through the steps of flowing and adsorbing the ginseng extract on a column and obtaining fractions by adding an elution solvent to the column. In the present invention, the column-purified fraction using ethanol of the ginseng extract not only improves the survival rate of alpha-beta T cells involved in systemic immunity, but also improves the survival rate of gamma-delta T cells particularly involved in skin immunity, thereby improving skin immunity. It is characterized in that the effect of regulating the function is particularly excellent.

상기 인삼 추출물을 컬럼 정제 분획시에 사용되는 컬럼의 고정상으로는 실리카 겔, 활성 알루미나, 합성 고분자, 규산마그네슘, 활성탄, 셀룰로오스, 이온 교환 수지 등의 충진제가 이용될 수 있고, 실리카겔 또는 방향족계 합성수지가 충진제로 이용되는 것이 바람직하며, 방향족계 합성수지 사용시 방향족 타입의 합성 흡착제 컬럼일 수 있으며, 다이아이온 에치피(Diaion HP-20) 합성 흡착제가 충진제로 이용되는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 아니한다. 상기 컬럼을 이용한 분리는 원하는 순도의 분획물이 정제될 때까지 1회 내지 수회에 걸쳐 수행할 수 있으며, 필요에 따라 농축시키고, 농축액을 동결건조시키거나 분무건조에 의해 분말화할 수 있다.A filler such as silica gel, activated alumina, synthetic polymer, magnesium silicate, activated carbon, cellulose, or ion exchange resin may be used as the stationary phase of the column used for column purification fractionation of the ginseng extract, and silica gel or aromatic synthetic resin may be used as the filler It is preferably used as, and when aromatic synthetic resin is used, it may be an aromatic type synthetic adsorbent column, and it is more preferable that Diaion HP-20 synthetic adsorbent is used as a filler, but is not limited thereto. Separation using the column may be performed once or several times until a fraction of desired purity is purified, concentrated as necessary, and the concentrate may be lyophilized or pulverized by spray drying.

상기 정제 분획물 제조시 용출 용매는 물, 유기 용매 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다. 상기 유기 용매는 알코올, 헥산(n-헥산), 에테르, 글리세롤, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 에틸아세테이트, 메틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 벤젠, 아세톤, 아세토니트릴 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있고, 바람직하게는 상기 유기 용매는 아세톤, 아세토니트릴, C₁ 내지 C₄의 알코올 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있으며, 더 바람직하게는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있으며, 더 바람직하게는 에탄올일 수 있다.When preparing the purified fraction, the elution solvent may be any one selected from the group consisting of water, organic solvents, and mixtures thereof. The organic solvent is selected from the group consisting of alcohol, hexane (n-hexane), ether, glycerol, propylene glycol, butylene glycol, ethyl acetate, methyl acetate, dichloromethane, chloroform, benzene, acetone, acetonitrile, and mixed solvents thereof Preferably, the organic solvent may include at least one selected from the group consisting of acetone, acetonitrile, C ₁ to C ₄ alcohol, and mixed solvents thereof, More preferably, it may include at least one selected from the group consisting of methanol, ethanol, propanol, and butanol, and more preferably ethanol.

상기 정제 분획물 제조시 용출 용매가 에탄올일 경우, 상기 용출 용매는 에탄올 또는 에탄올 수용액일 수 있고, 에탄올 수용액인 경우, 예를 들어 상기 에탄올은 50 %(v/v) 초과 내지 100 %(v/v) 이하의 에탄올 수용액, 또는 60%(v/v) 내지 99%(v/v)의 에탄올 수용액, 또는 70%(v/v) 내지 97%(v/v)의 에탄올 수용액일 수 있다. 용출 용매로 사용되는 에탄올 수용액의 농도가 상한값을 초과하는 경우에는 얻어지는 분획물의 활성이 충분하지 못할 수 있다.When the elution solvent is ethanol when preparing the purified fraction, the elution solvent may be ethanol or an aqueous ethanol solution. ) or less ethanol aqueous solution, or 60% (v/v) to 99% (v/v) ethanol aqueous solution, or 70% (v/v) to 97% (v/v) ethanol aqueous solution. When the concentration of the aqueous ethanol solution used as the elution solvent exceeds the upper limit, the activity of the resulting fraction may not be sufficient.

상기 정제 분획물 제조시 용출 용매 첨가시에는 용출 용매를 컬럼에 흘려주는 것, 예를 들면 가압하여 흘려주는 것을 포함한다. When the elution solvent is added during the preparation of the purified fraction, the elution solvent may be flowed through the column, for example, flowing under pressure.

구체적으로, 상기 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물은 상기 인삼 추출물을 물에 희석하여 수득된 희석액을 컬럼에 통과시키는 단계; 상기 인삼 추출물의 희석액이 통과된 컬럼에 물을 가하여 컬럼에 흡착되지 않은 잔여물을 제거하는 단계; 및 상기 물이 통과된 컬럼에 에탄올을 가하여 분획물을 수득하는 단계;를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다.Specifically, the column-purified fraction of the ginseng extract is obtained by diluting the ginseng extract in water and passing the diluted solution through a column; adding water to the column through which the dilution of the ginseng extract has passed to remove residues not adsorbed to the column; and adding ethanol to the column through which the water has passed to obtain fractions.

2. 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물을 포함하는 화장료 조성물2. COSMETIC COMPOSITION COMPRISING Column Purified Fractions of Ginseng Extract

상기와 같이 얻어지는 본 발명의 컬럼 정제 분획물은 피부면역 강화를 위한 조성물의 유효성분으로 이용될 수 있다. 상기 피부면역 강화용 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.The column-purified fraction of the present invention obtained as described above can be used as an active ingredient of a composition for enhancing skin immunity. The composition for enhancing skin immunity may be a cosmetic composition.

본 발명의 피부면역 강화용 화장료 조성물은 상기 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물을 유효성분으로 포함하고, 상기 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물을, 상기 화장료 조성물 총 100 중량%에 대하여 0.0001 내지 20 중량%, 또는 0.001 내지 15 중량%, 또는 0.01 내지 12 중량%, 또는 0.05 내지 10 중량%, 또는 0.1 내지 1 중량% 포함할 수 있다.The cosmetic composition for enhancing skin immunity of the present invention contains a column-refined fraction of the ginseng extract as an active ingredient, and contains the column-refined fraction of the ginseng extract in an amount of 0.0001 to 20% by weight, or 0.001% by weight, based on 100% by weight of the cosmetic composition. to 15% by weight, or 0.01 to 12% by weight, or 0.05 to 10% by weight, or 0.1 to 1% by weight.

본 발명에서 "피부면역 강화"는 상기 조성물이 투여되는 개체에서 피부면역이 강화되는 것을 포함하여 이로써 파생되는 효과, 즉 피부염, 지루성 피부염, 습진, 여드름, 화상, 찰과상이나 창상과 같이 병원균에 의해 증상이 심화되는 피부 질환의 감염률 또는 발병률이 저하되는 등의 효과를 의미할 수 있다. In the present invention, "skin immunity enhancement" includes enhancement of skin immunity in the subject to which the composition is administered, and the effect derived therefrom, that is, symptoms caused by pathogens such as dermatitis, seborrheic dermatitis, eczema, acne, burns, abrasions or wounds This may mean an effect such as a decrease in the infection rate or incidence of the skin disease that is intensifying.

본 발명의 화장료 조성물은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 기제, 보조제 및 첨가제를 사용하여 액체 또는 고체 형태로 제조될 수 있다. 액체 또는 고체 형태의 화장품으로는, 예를 들면 이에 한정되지는 않으나 화장수, 크림제, 로션제, 입욕제 등의 형태를 포함할 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may be prepared in liquid or solid form using bases, adjuvants and additives commonly used in the field of cosmetics. Cosmetics in liquid or solid form may include, but are not limited to, cosmetic products, creams, lotions, and bath products.

화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 기제, 보조제 및 첨가제는 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면 물, 알코올, 프로필렌글리콜, 스테아르산, 글리세롤, 세틸알코올, 유동 파라핀 등이 있다. Bases, adjuvants and additives commonly used in the field of cosmetics are not particularly limited, and examples thereof include water, alcohol, propylene glycol, stearic acid, glycerol, cetyl alcohol, and liquid paraffin.

본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 조성물은 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.When the composition of the present invention is prepared as a cosmetic composition, the composition of the present invention may include not only the column-refined fraction of ginseng extract, but also components commonly used in cosmetic compositions, such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, conventional adjuvants such as vitamins, pigments and flavors, and carriers.

본 발명의 화장료 조성물은 본 기술분야에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이, 파우더, 헤어토닉, 헤어로션, 헤어크림, 헤어스프레이, 헤어무스, 헤어젤, 헤어컨디셔너, 헤어샴푸, 헤어 린스, 헤어팩, 헤어트리트먼트, 애완동물용 샴푸, 애완동물용 린스, 핸드크림, 손 세정제, 세제, 비누, 소독청결제, 물티슈, 마스크, 연고제, 패치 또는 필터 충진제의 제형으로 제조될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may be prepared in any formulation commonly prepared in the art, for example, solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing , It may be formulated as an oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation and spray, but is not limited thereto. More specifically, softening lotion, nourishing lotion, nourishing cream, massage cream, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, spray, powder, hair tonic, hair lotion, hair cream, hair spray, hair Mousse, hair gel, hair conditioner, hair shampoo, hair conditioner, hair pack, hair treatment, pet shampoo, pet conditioner, hand cream, hand sanitizer, detergent, soap, disinfectant, wet wipes, mask, ointment, patch or as a formulation of a filter filler.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as a carrier component. can

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component, and in particular, in the case of a spray, additional chlorofluorohydrocarbon, propane / May contain a propellant such as butane or dimethyl ether.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 벤질벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, solubilizing agent or emulsifying agent is used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 ,3-butylene glycol oil, glycerol aliphatic esters, polyethylene glycol or fatty acid esters of sorbitan.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a suspension, as a carrier component, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystals Star cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracanth and the like may be used.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is surfactant-containing cleansing, as carrier components, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, imidazolinium derivative, methyl taurate, sarcosinate, fatty acid amide ether sulfate, alkyl Amidobetaine, fatty alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives, or ethoxylated glycerol fatty acid esters may be used.

본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명의 화장료 조성물은 통상적인 사용 방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may be used alone or overlappingly applied, or may be used overlappingly with other cosmetic compositions other than the present invention. In addition, the cosmetic composition of the present invention can be used according to a conventional method of use, and the number of times of use can be varied according to the user's skin condition or taste.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클린징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.When the cosmetic composition of the present invention is a soap, surfactant-containing cleansing or surfactant-free cleansing formulation, it may be applied to the skin and then wiped off, removed, or washed with water. As specific examples, the soap is liquid soap, powder soap, solid soap, and oil soap, the surfactant-containing cleansing formulation is a cleansing foam, cleansing water, cleansing towel, and a cleansing pack, and the surfactant-free cleansing formulation is a cleansing cream. , cleansing lotion, cleansing water and cleansing gel, but are not limited thereto.

3. 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물을 포함하는 약학적 조성물3. Pharmaceutical Composition Containing Column Purified Fractions of Ginseng Extract

본 발명의 다른 양태는 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물을 포함하는 피부 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating skin diseases comprising a column-purified fraction of ginseng extract.

상기 본 발명의 피부 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 상기 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물을 유효성분으로 포함하고, 상기 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물을, 상기 약학적 조성물 총 100 중량%에 대하여 0.0001 내지 20 중량%, 또는 0.001 내지 15 중량%, 또는 0.01 내지 12 중량%, 또는 0.05 내지 10 중량%, 또는 0.1 내지 1 중량% 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition for preventing or treating skin diseases of the present invention contains the column-purified fraction of the ginseng extract as an active ingredient, and contains the column-purified fraction of the ginseng extract in an amount of 0.0001 to 0.0001 to 100% by weight, based on 100% by weight of the total pharmaceutical composition. 20 wt%, or 0.001 to 15 wt%, or 0.01 to 12 wt%, or 0.05 to 10 wt%, or 0.1 to 1 wt%.

본 발명에서 "예방"은 상기 조성물에 의해 병원균에 의해 감염됨으로써 유발되거나 진행되는 피부 질환을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 말하며, "치료"는 상기 조성물에 의해 병원균에 의해 감염됨으로써 유발되거나 진행되는 피부 질환이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 말한다. 상기 피부 질환은 피부면역이 약화되어 병원균에 의해 감염됨으로써 유발되거나 피부조직의 손상 부위로 병원균의 감염이 진행되는 것일 수 있고, 예를 들어 피부염, 지루성 피부염, 습진, 여드름, 화상, 찰과상이나 창상 이후에 병원균에 의한 감염 증상일 수 있다. 상기 병원균은 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 고름사슬알균(S. pyogenes), 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)과 같은 피부에 상재하는 박테리아 또는 칸디다 알비칸스(C. albicans), 칸디다 트로피칼리스(Candidan tropicalis), 칸디다 글라브라타(Candida glabrata), 말라쎄지아 글로보사(Malassezia globosa), 말라쎄지아 효모균과 같은 진균 등 일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. In the present invention, "prevention" refers to any activity that inhibits or delays skin diseases caused or progressed by infection by pathogens by the composition, and "treatment" refers to skin diseases caused or progressed by infection by pathogens by the composition. It refers to any action that improves or beneficially changes a disease. The skin disease may be caused by infection by a pathogen due to weakened skin immunity or infection by a pathogen to a damaged area of the skin tissue, for example, dermatitis, seborrheic dermatitis, eczema, acne, burns, after abrasions or wounds It can be a symptom of an infection caused by a pathogen. The pathogen is resident bacteria on the skin, such as Staphylococcus aureus, S. pyogenes, and Propionibacterium acnes, or Candida albicans, Candida tropicalis (Candidan tropicalis), Candida glabrata, Malassezia globosa, and fungi such as Malassezia yeast, but are not limited thereto.

본 발명의 약학적 조성물은 상기 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물 외에 본 발명이 목적으로 하는 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 상기 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물의 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 추가로 함유할 수 있다. 예를 들어 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 또는 담체를 포함할 수 있다.In addition to the column-purified fraction of the ginseng extract, the pharmaceutical composition of the present invention may be used within a range that does not impair the desired effect of the present invention, preferably other substances that can give a synergistic effect to the effect of the column-purified fraction of the ginseng extract. Ingredients and the like may be further contained. conventional adjuvants such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and flavors, or carriers.

상기 약학적 조성물은 상기 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 상기 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.The pharmaceutical composition may contain one or more active ingredients exhibiting the same or similar functions in addition to the column-purified fraction of the ginseng extract. The composition may be formulated and used in the form of oral formulations such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, external preparations, suppositories and sterile injection solutions according to conventional methods, respectively.

경구 투여를 위한 고형 제제에는 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연질 캅셀제, 환 등이 포함된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.Solid preparations for oral administration include powders, granules, tablets, capsules, soft capsules, pills and the like. Liquid preparations for oral administration include suspensions, internal solutions, emulsions, syrups, etc. In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweeteners, aromatics, and preservatives may be included. there is.

비경구 투여를 위한 제제로는 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 멸균된 수용액, 액제, 비수성용제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 좌제, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사제제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 약학적 조성물을 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.Formulations for parenteral administration include powders, granules, tablets, capsules, sterilized aqueous solutions, solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, syrups, suppositories, aerosols, etc., and sterile injection preparations according to conventional methods, respectively. It can be formulated and used in the form of a cream, gel, patch, spray, ointment, warning, lotion, liniment, pasta, or cataplasma. , but is not limited thereto. Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate may be used as non-aqueous solvents and suspending agents. As a base for the suppository, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin paper, glycerogeratin and the like may be used.

상기 조성물은 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제형화할 수 있다.The composition may further contain adjuvants such as preservatives, stabilizers, hydration agents or emulsification accelerators, salts and/or buffers for osmotic pressure control, and other therapeutically useful substances, which are conventional methods such as mixing, granulation or It can be formulated according to the coating method.

본 발명의 약학적 조성물은 피부면역 강화를 통해 피부염, 지루성 피부염, 습진, 여드름, 화상, 찰과상이나 창상 등의 피부 질환의 예방 또는 치료를 목적으로 하는 개체이면 특별히 한정되지 않고, 어떠한 것이든 적용가능하다. 예를 들면, 본 발명의 약학적 조성물은 인간뿐만 아니라 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 모르모트, 랫트, 마우스, 소, 양, 돼지, 염소 등과 같은 인간이 아닌 동물, 조류 및 어류 등 어느 것에 사용가능하다.The pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited as long as it is an object for the purpose of preventing or treating skin diseases such as dermatitis, seborrheic dermatitis, eczema, acne, burns, abrasions or wounds through skin immunity enhancement, and any can be applied do. For example, the pharmaceutical composition of the present invention can be used not only for humans but also for non-human animals such as monkeys, dogs, cats, rabbits, guinea pigs, rats, mice, cows, sheep, pigs, goats, birds and fish. do.

상기 약학적 조성물의 투여 경로는 구강, 정맥내, 근육내, 동맥내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장이 포함되고, 예컨대 도포에 의한 국부투여(topical application) 방식으로 적용될 수 있다. 상기 비경구는 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 병소내 주사 또는 주입기술을 포함한다. The route of administration of the pharmaceutical composition includes oral, intravenous, intramuscular, intraarterial, transdermal, subcutaneous, intraperitoneal, intranasal, intestinal, topical, sublingual or rectal, for example topical application by application method can be applied. The parenteral includes subcutaneous, intradermal, intravenous, intramuscular, intralesional injection or infusion techniques.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered in a pharmaceutically effective amount.

본 발명에서 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 질병의 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 본 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.In the present invention, "pharmaceutically effective amount" means an amount sufficient to treat a disease with a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is the type and severity of the subject, age, sex, type of disease, It may be determined according to the activity of the drug, the sensitivity to the drug, the time of administration, the route of administration and the rate of excretion, the duration of treatment, factors including drugs used concurrently, and other factors well known in the medical field. The composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. And it can be single or multiple administrations. Considering all of the above factors, it is important to administer the amount that can obtain the maximum effect with the minimum amount without side effects, and can be easily determined by a person skilled in the art.

상기 약학적 조성물의 투여량은 개체의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 투여시간, 투여 경로, 배출률, 약물 배합 및 특정 질환의 중증을 포함한 여러 요인에 따라 다양하게 변할 수 있다. The dose of the pharmaceutical composition may vary depending on various factors including age, body weight, general health, sex, administration time, route of administration, excretion rate, drug combination, and severity of a specific disease.

또한, 본 발명의 약학적 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다. 또한 상기 약학적 조성물은 성인 기준으로 0.001 내지 200㎎/㎏ 범위 내의 투여량으로 투여될 수 있고, 상기 약학적 조성물이 외용제인 경우에는 성인기준으로 1.0 내지 3.0㎖의 양으로 1일 1회 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속하는 것이 좋으나, 상기 투여량은 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.In addition, the pharmaceutical composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy, and biological response modifiers. In addition, the pharmaceutical composition may be administered in a dosage within the range of 0.001 to 200 mg / kg on an adult basis, and when the pharmaceutical composition is an external agent, in an amount of 1.0 to 3.0 ml on an adult basis once a day to 5 times a day. It is recommended to apply once and continue for 1 month or longer, but the dosage is not intended to limit the scope of the present invention.

상기 약학적 조성물을 단위 용량 형태로 제형화하는 경우, 유효성분으로서 본 발명의 인삼 추출물의 컬럼 정제 분획물은 g 당 약 0.1 내지 10㎎의 단위 용량으로 함유되는 것이 바람직하고, 성인 치료에 필요한 투여량은 투여의 빈도와 강도에 따라 하루에 약 1 내지 500㎎ 범위가 보통이나 이에 한정되는 것은 아니며, 일부 환자의 경우 더 높은 1일 투여량이 바람직할 수 있다.When the pharmaceutical composition is formulated in a unit dose form, the column-purified fraction of the ginseng extract of the present invention as an active ingredient is preferably contained in a unit dose of about 0.1 to 10 mg per g, and the dosage required for adult treatment Depending on the frequency and intensity of silver administration, a range of about 1 to 500 mg per day is usually, but not limited to, higher daily dosages may be desirable for some patients.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 제조예, 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are only for exemplifying the present invention, and the contents of the present invention are not limited by the following preparation examples, examples and experimental examples.

<제조예 1> 홍삼 정제수 추출물의 제조<Preparation Example 1> Preparation of red ginseng purified water extract

6년근 홍삼 1㎏에 정제수 5.5배를 가하여 50℃에서 10시간 동안 1회 추출한 다음 50 brix 이상이 되도록 감압농축하여 홍삼 농축액(이하 '홍삼 정제수 추출물'이라고 함)을 제조하였다.5.5 times of purified water was added to 1 kg of 6-year-old red ginseng, extracted once at 50 ° C. for 10 hours, and then concentrated under reduced pressure to a concentration of 50 brix or more to prepare a red ginseng concentrate (hereinafter referred to as 'red ginseng purified water extract').

<제조예 2> 컬럼 정제 분획물의 제조<Preparation Example 2> Preparation of column purification fractions

상기 제조예 1의 홍삼 농축액을 정제수와 1:2로 혼합한 후 완전히 용해시킨 후 희석액을 HP-20 이온교환 수지(미츠비시 케미칼 인더스트리) 100g을 충진시킨 컬럼에 통과시켰다. 이후 0.5L의 정제수를 흘려 컬럼에 흡착되지 않은 잔여물을 제거한 후, 에탄올 수용액 70%(v/v)을 흘려 컬럼에 흡착된 성분을 회수하고, 이를 감압농축하여 컬럼 정제 분획물을 수득하였다. The red ginseng concentrate of Preparation Example 1 was mixed with purified water at a ratio of 1:2, completely dissolved, and then the diluted solution was passed through a column filled with 100 g of HP-20 ion exchange resin (Mitsubishi Chemical Industries). Thereafter, 0.5 L of purified water was poured to remove residues not adsorbed on the column, and then 70% (v/v) aqueous ethanol solution was poured to recover components adsorbed on the column, and concentrated under reduced pressure to obtain column purified fractions.

<제조예 3> 부탄올 분획물의 제조<Preparation Example 3> Preparation of butanol fraction

상기 제조예 1의 홍삼 농축액을 정제수와 1:2로 혼합한 후 완전히 용해시킨 후 희석액을 수포화 부탄올과 1:1의 비율로 혼합한 후 분획 깔대기에 넣은 후 상온에서 1시간 동안 분리시켰다. 분리된 층의 상층부만을 회수한 후 감압농축하여 고형의 부탄올 분획물을 수득하였다.The red ginseng concentrate of Preparation Example 1 was mixed with purified water in a ratio of 1:2, completely dissolved, and then the diluted solution was mixed with saturated butanol in a ratio of 1:1, placed in a separatory funnel, and separated at room temperature for 1 hour. After recovering only the upper layer of the separated layer, it was concentrated under reduced pressure to obtain a solid butanol fraction.

<실험예 1> 알파-베타 T 세포에 미치는 피부면역조절 효능<Experimental Example 1> Skin immunomodulatory effect on alpha-beta T cells

전신 림프절을 수확하여 RPMI 1640 배지에 희석시킨 후, 96-웰 배양 플레이트에 1×10⁵ 세포/웰 용량으로 분주하였다. 이 세포에 콘카나발린 A를 4 ㎍/㎖ 농도로 처리해 T 면역세포를 활성화시킨 후 제조예 1 내지 3의 홍삼 유래 시료를 첨가하여 37℃, 가습, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 배양 시작 2일 후, 배양 상층액을 수확하여 마우스 IL-2 ELISA 레디-셋-고 키트(이바이오사이언스)를 이용하여 제조사의 설명서에 따라 ELISA(효소-연결된 면역흡착 분석)를 수행하여 수집된 배양 상층액 내 IL-2 사이토카인 농도를 측정하고 하기 계산식에 따라 상대적인 IL-2 생산율을 산출하였다.Whole body lymph nodes were harvested, diluted in RPMI 1640 medium, and dispensed into 96-well culture plates at a capacity of 1×10 ⁵ cells/well. The cells were treated with concanavalin A at a concentration of 4 μg/ml to activate T immune cells, and then the red ginseng-derived samples of Preparation Examples 1 to 3 were added and cultured in a 37° C., humidified, 5% CO ₂ incubator. Two days after the start of culture, the culture supernatant was harvested and collected by ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) using the Mouse IL-2 ELISA Ready-Set-Go Kit (eBioscience) according to the manufacturer's instructions. The IL-2 cytokine concentration in the culture supernatant was measured, and the relative IL-2 production rate was calculated according to the following formula.

% IL-2 생산율 = 100×(시험군의 IL-2 농도)/(대조군의 IL-2 농도)% IL-2 production rate = 100 × (IL-2 concentration of test group) / (IL-2 concentration of control group)

또한, MTT(3(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드) 환원법을 수행하여 T 세포에 대한 독성을 확인하였다. 구체적으로 IL-2 사이토카인 농도를 측정하기 위해 상층액을 제거한 후 남아있는 T 세포에 MTT(2.5 ㎎/㎖)를 배지에 10배 희석시킨 희석액을 1㎖ 첨가한 후 37℃에서 4시간 동안 배양하였다. 배양이 완료된 후 배지를 제거하고, DMSO 0.5㎖를 첨가하여 상온에서 10분 동안 완전히 녹인 후 570 nm 및 670 nm에서 흡광도를 측정하여 하기 계산식에 따라 림프절 T 세포의 상대적 생존률을 측정하였다.In addition, toxicity to T cells was confirmed by performing MTT (3(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) reduction method. Specifically, to measure the IL-2 cytokine concentration, after removing the supernatant, 1 ml of a 10-fold dilution of MTT (2.5 mg/ml) in the medium was added to the remaining T cells, followed by incubation at 37°C for 4 hours. did After the culture was completed, the medium was removed, 0.5 ml of DMSO was added, completely dissolved at room temperature for 10 minutes, and absorbance was measured at 570 nm and 670 nm to measure the relative viability of lymph node T cells according to the following formula.

% 림프절 T 세포 생존률 = 100×(시험군의 A570-A670)/(대조군의 A570-A670)% lymph node T cell viability = 100×(A570-A670 in the test group)/(A570-A670 in the control group)

<실험예 2> 감마-델타 T 세포에 미치는 피부면역조절 효능<Experimental Example 2> Skin immunomodulatory effect on gamma-delta T cells

피부생검 표본을 2.4 U/ml 디스파제 II가 포함된 RPMI 배지에 넣어 4℃에서 하룻밤 동안 반응시킨 후 피부 표피 조직만을 진피로부터 분리해 낸 다음 0.3% 트립신-GNK 용액을 37℃에서 10분 동안 처리한 후 교반하였다. 수집된 표피 세포 현탁액을 히스토파크(Histopaque) 1083 용액을 이용하여 실온에서 400×g으로 30분 동안 구배 원심분리하여 T 세포를 농축하였다. 수집된 상피 세포를 10 U/ml 마우스 IL-2가 포함된 완전 배지에 재현탁하고 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 하룻밤 동안 배양하였다. 다음 날 24-웰 세포 배양 플레이트에 고정시킨 10 mg/ml 항-마우스 CD3 mAb 및 100 U/ml IL-2와 함께 제조예 1 내지 3의 홍삼 유래 시료를 첨가하여 37℃, 가습, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 배양 5일 후, 배양 상층액을 수집하고 마우스 IL-13 ELISA 레디-셋-고 키트(이바이오사이언스)를 이용하여 제조사의 설명서에 따라, ELISA를 수행하여 수집된 배양 상층액 내 IL-13 사이토카인 농도를 측정하고 하기 계산식에 따라 상대적인 IL-13 생산율을 산출하였다.The skin biopsy specimen was put in RPMI medium containing 2.4 U/ml dispase II and reacted overnight at 4°C. Only the skin epidermal tissue was separated from the dermis and then treated with 0.3% trypsin-GNK solution at 37°C for 10 minutes. and then stirred. The collected epidermal cell suspension was enriched for T cells by gradient centrifugation at room temperature at 400 x g for 30 minutes using Histopaque 1083 solution. The collected epithelial cells were resuspended in complete medium containing 10 U/ml mouse IL-2 and cultured overnight in a 37°C, 5% CO ₂ incubator. The next day, the red ginseng-derived samples of Preparation Examples 1 to 3 were added together with 10 mg/ml anti-mouse CD3 mAb and 100 U/ml IL-2 immobilized in a 24-well cell culture plate at 37° C., humidified, 5% CO ₂ cultured in an incubator. After 5 days of culture, the culture supernatant was collected and ELISA was performed using the mouse IL-13 ELISA Ready-Set-Go kit (eBioscience) according to the manufacturer's instructions, and IL-13 cytotoxicity in the collected culture supernatant was performed. Caine concentration was measured and relative IL-13 production rate was calculated according to the following formula.

% IL-13 생산율 = 100×(시험군의 IL-13 농도)/(대조군의 IL-13 농도)% IL-13 production rate = 100 × (IL-13 concentration of the test group) / (IL-13 concentration of the control group)

또한, 상기 배양 상층액을 수집하여 활성화된 T 세포의 생존률을 프로피디움 아이오딘화물(PI) 배제 방법을 수행하여 확인하였다. 세포를 1 ㎍/ml PI가 포함된 차가운 PBS에서 현탁시키고 BD FACSCalibur 유세포 분석기(BD 바이오사이언스)를 이용한 유세포 분석을 수행하여 전체 세포군에서 약하게 적색 형광 신호를 나타내는 생존 세포의 수를 측정하였다. 상기 결과를 셀 퀘스트 소프트웨어(BD 바이오사이언스)로 분석하고 하기 계산식에 따라 상피 T 세포의 상대적인 생존률을 산출하였다. In addition, the viability of T cells activated by collecting the culture supernatant was confirmed by performing a propidium iodide (PI) exclusion method. Cells were suspended in cold PBS containing 1 μg/ml PI and flow cytometric analysis using a BD FACSCalibur flow cytometer (BD Biosciences) was performed to determine the number of viable cells showing a weak red fluorescence signal in the total cell population. The results were analyzed with Cell Quest software (BD Biosciences) and the relative viability of epithelial T cells was calculated according to the following formula.

% 상피 T 세포 생존률 = 100×(시험군 내 생존 세포 수)/(대조군 내 생존 세포 수)% epithelial T cell viability = 100×(number of viable cells in test group)/(number of viable cells in control group)

상기 제조예 2, 제조예 1, 제조예 3의 홍삼 유래 시료에 대해 상피 T 세포의 생존율(a), 림프절 T 세포의 생존율(b), IL-13 생산율(c) 및 IL-2 생산율(d)를 측정한 결과를 각각 도 1, 도 2, 도 3에 나타낸다. Epithelial T cell viability (a), lymph node T cell viability (b), IL-13 production rate (c) and IL-2 production rate (d) for the red ginseng-derived samples of Preparation Example 2, Preparation Example 1, and Preparation Example 3 The results of measuring ) are shown in FIGS. 1, 2, and 3, respectively.

상기 결과로부터, 제조예 1의 홍삼 정제수 추출물은 IL-2, IL-13을 유의적으로 증가시키지 않고, 제조예 3의 부탄올 분획물은 50 ㎍/ml 이상의 농도에서 IL-2의 생성을 증가시켰으나, IL-13은 유의적으로 증가시키지 않음을 확인하였다. From the above results, the red ginseng purified water extract of Preparation Example 1 did not significantly increase IL-2 and IL-13, and the butanol fraction of Preparation Example 3 increased the production of IL-2 at a concentration of 50 μg/ml or more, It was confirmed that IL-13 did not increase significantly.

반면, 제조예 2의 컬럼 정제 분획물은 10~25 ㎍/ml에서, IL-2 및 IL-13의 생성을 모두 크게 증가시킨 것을 확인하였다. 이로부터, 제조예 1의 홍삼 정제수 추출물이나 제조예 3의 부탄올 분획물에 비해, 본 발명의 컬럼 정제 분획물에 피부면역 기능을 강화시킬 수 있는 성분이 강화되어 있음을 알 수 있고, 이러한 컬럼 정제 분획물을 피부의 면역반응을 증진시킴으로써 피부의 병원균 감염을 예방하거나 억제하는 데 활용할 수 있음을 확인할 수 있다. On the other hand, it was confirmed that the column-purified fraction of Preparation Example 2 greatly increased the production of both IL-2 and IL-13 at 10 to 25 μg/ml. From this, it can be seen that, compared to the red ginseng purified water extract of Preparation Example 1 or the butanol fraction of Preparation Example 3, the column-purified fraction of the present invention has enhanced components capable of enhancing skin immunity function, and these column-purified fractions It can be confirmed that it can be used to prevent or suppress skin pathogen infection by enhancing the skin's immune response.

Claims

A composition for enhancing skin immunity comprising a column-purified fraction of ginseng extract,
The column-purified fraction of the ginseng extract improves the production of IL-13, a composition for enhancing skin immunity.

The method of claim 1,
The ginseng extract is to use any one selected from the group consisting of water, C1-C4 lower alcohol and a mixed solvent thereof as an extraction solvent, a composition for enhancing skin immunity.

The method of claim 1,
The column purification fraction is a composition for enhancing skin immunity, using an ethanol aqueous solution of 60% (v / v) to 99% (v / v) as an elution solvent.

The method of claim 1,
The column purification fraction is:
Diluting the ginseng extract in water and passing the diluted solution through a column;
adding water to the column through which the dilution of the ginseng extract has passed to remove residues not adsorbed to the column; and
A composition for enhancing skin immunity prepared by a method comprising: adding ethanol to a column through which the water has passed to obtain fractions.

The method of claim 1,
The stationary phase of the column is an aromatic synthetic resin composition for enhancing skin immunity.

The method of claim 1,
The composition is a cosmetic composition for enhancing skin immunity.