KR102530481B1 - External composition for antiaging comprising osthole - Google Patents
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Abstract
본 발명은 오스톨을 유효성분으로 포함하는 피부외용제 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 오스톨을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지용 또는 항산화용 피부외용제 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 오스톨을 유효성분으로 포함하는 피부외용제 조성물은 히알루론산 생성 및 합성 효소의 발현을 촉진시킴으로서 피부의 탄력 저하 예방 및 피부 보습을 촉진 시키며, 피부 섬유아세포의 콜라겐 합성을 촉진하며 콜라게나제 활성을 억제함으로써 피부 주름을 억제하고 피부의 재생을 촉진시키고, 자유 라디칼을 소거하여 항산화 효과가 뛰어나, 기능성 피부외용제 조성물에 효과적인 유효성분으로 사용될 수 있다.The present invention relates to a composition for external application for skin containing osthole as an active ingredient, and more particularly, to a composition for external application for skin containing osthole as an active ingredient for preventing skin aging or antioxidation. The composition for external application for skin containing osthole as an active ingredient according to the present invention promotes the production of hyaluronic acid and the expression of synthesizing enzymes, thereby preventing deterioration of skin elasticity and promoting skin moisturizing, promoting collagen synthesis of skin fibroblasts, and It inhibits skin wrinkles, promotes skin regeneration, and scavenges free radicals to have an excellent antioxidant effect, so it can be used as an effective active ingredient in a functional composition for external application for skin.
Description
본 발명은 오스톨을 유효성분으로 포함하는 피부외용제 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 오스톨을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지용 또는 항산화용 피부외용제 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for external application for skin containing osthole as an active ingredient, and more particularly, to a composition for external application for skin containing osthole as an active ingredient for preventing skin aging or antioxidation.
히알루론산(hyaluronic acid)은 글리코사미노글리칸(glycosaminoglycans)의 일종으로 글루쿠론산과 N-아세틸글루코사민 잔기가 반복적으로 연결되어 있는 사슬모양의 고분자 다당류 물질이다. 다량의 물과 결합하여 겔을 만드는 성질이 있어 높은 점성과 탄성을 가진다. 히알루론산은 세포외 기질의 주요 성분으로, 수분 보유, 세포 간 간격 유지, 세포성장인자 및 영양성분의 저장과 확산에 관여할 뿐만 아니라, 세포의 분열과 분화, 이동 등에도 관여하는 것으로 보고된 바 있다.Hyaluronic acid, a type of glycosaminoglycans, is a chain-like polymeric polysaccharide material in which glucuronic acid and N-acetylglucosamine residues are repeatedly linked. It has the property of forming a gel by combining with a large amount of water, so it has high viscosity and elasticity. Hyaluronic acid is a major component of the extracellular matrix and has been reported to be involved in water retention, maintenance of intercellular space, storage and diffusion of cell growth factors and nutrients, as well as cell division, differentiation, and migration. there is.
피부에서, 포유류의 체내에 존재하는 히알루론산의 50% 이상이 피부, 특히 표피의 세포 간 간격과 진피의 결체 조직에 분포한다고 보고되었고, 이러한 히알루론산은 주로 각질형성세포와 섬유아세포에 의해 합성되는 것으로 알려져있다. 인간 피부에서 히알루론산의 양은 노화와 함께 감소되는 것으로 보고되었고, 피부 내 히알루론산의 감소는 노화에 따른 피부 탄력 저하 또는 수분 함유량 감소의 직접적인 원인 중 하나라고 여겨지고 있다(Biochem Biophys Acta 279, 265-275; Carbohydr Res 159, 127-136; Int J Dermatol 33, 119-122). 또한 히알루론산은 각질층의 구조유지와 피부장벽 기능을 유지하는데에도 관여한다고 알려져 있다(J Cosmet Dermatol. 2007 Jun, 6(2), 75-82).In the skin, it has been reported that more than 50% of the hyaluronic acid present in the mammalian body is distributed in the skin, especially in the intercellular space of the epidermis and the connective tissue of the dermis, and such hyaluronic acid is mainly synthesized by keratinocytes and fibroblasts. is known to be It has been reported that the amount of hyaluronic acid in human skin decreases with aging, and the decrease in hyaluronic acid in the skin is considered to be one of the direct causes of the decrease in skin elasticity or decrease in moisture content due to aging (Biochem Biophys Acta 279, 265-275 (Carbohydr Res 159, 127-136; Int J Dermatol 33, 119-122). In addition, hyaluronic acid is known to be involved in maintaining the structure of the stratum corneum and maintaining the skin barrier function (J Cosmet Dermatol. 2007 Jun, 6(2), 75-82).
그러나, 상기와 같은 효과를 가진 히알루론산은 분자량이 커서 피부에 흡수가 잘 되지 않는다. 또한, 히알루론산을 피부로 주입하는 방법이 현재 시술되고 있으나, 피부 세포 내의 히알루론산 합성을 증가시키는 방법이 더 효과적이다. 따라서 인체 내의 히알루론산의 생성을 증가시킬 수 있는 방법에 대한 연구가 활발히 진행되고 있으나, 괄목할 만한 연구 결과는 아직 알려진 바가 없는 실정이다.However, hyaluronic acid having the same effect as above has a large molecular weight and is not easily absorbed into the skin. In addition, a method of injecting hyaluronic acid into the skin is currently being performed, A method of increasing hyaluronic acid synthesis in skin cells is more effective. Therefore, although research on methods capable of increasing the production of hyaluronic acid in the human body is being actively conducted, remarkable research results have not yet been known.
한편, 세포 외 기질(matrix)의 주요 구성 성분인 콜라겐은 피부의 섬유아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질로서 세포 외 간질에 존재한다. 또한, 생체 단백질 총 중량의 약 30％를 차지하는 중요한 단백질로서 견고한 3중 나선구조를 가지고 있다. 콜라겐은 피부, 건(tendon), 뼈 및 치아의 유기 물질의 대부분을 형성하는데, 특히 뼈와 피부(진피)에 그 비율이 높다. 대부분의 다른 체 구조물에서는 섬유상 봉입체로서 존재한다. On the other hand, collagen, a major component of the extracellular matrix, is present in the extracellular matrix as a major matrix protein produced by fibroblasts of the skin. In addition, it is an important protein that accounts for about 30% of the total weight of biological proteins and has a solid triple helix structure. Collagen forms most of the organic matter of skin, tendons, bones and teeth, and its proportion is particularly high in bones and skin (dermis). In most other sieve structures it is present as fibrous inclusions.
피부에 존재하는 콜라겐의 기능으로는 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포접착의 지탱, 세포분할과 분화(유기체의 성장 혹은 상처 치유시)의 유도 등이 알려져 있다(van der Rest et al., 1990). 이러한 콜라겐은 피부의 재생, 피부탄력, 피부 노화 방지, 상처 치유, 보습 등에 관련이 있으며 특히 연령 및 자외선 조사에 의한 광노화에 의해 감소하며, 이는 피부의 주름 형성과 밀접한 연관이 있다고 알려져 있다(Arthur K. Balin et al.,"Aging and the skin”, 1989). 또한 최근에 들어 피부 노화에 대한 광범위한 연구가 발전되면서 피부에서의 콜라겐의 중요한 기능들이 밝혀지고 있다.The functions of collagen present in the skin are known to include the mechanical firmness of the skin, the resistance and cohesiveness of connective tissue, the support of cell adhesion, and the induction of cell division and differentiation (in the growth of organisms or wound healing) (van der Rest et al., 1990). Collagen is related to skin regeneration, skin elasticity, skin aging prevention, wound healing, moisturizing, etc., and is particularly reduced by age and photoaging by ultraviolet irradiation, which is known to be closely related to skin wrinkle formation (Arthur K Balin et al., "Aging and the skin", 1989). Recently, as extensive research on skin aging has been developed, important functions of collagen in the skin have been revealed.
기존에 콜라겐의 피부 주름 개선과 보습효과로부터 화장품에 콜라겐을 배합하는 제품들이 출시되어 있으나, 이러한 제품은 콜라겐을 피부 표면에 도포하는 것으로, 고분자인 콜라겐은 경피 흡수되기 어렵고, 따라서 뛰어난 효능을 기대할 수 없었다.Previously, products that combine collagen in cosmetics have been released from the skin wrinkle improvement and moisturizing effects of collagen, but these products apply collagen to the skin surface, and collagen, a polymer, is difficult to absorb percutaneously, so excellent efficacy can be expected. There was no
콜라겐의 합성을 촉진하여 주름 개선 효과를 나타내는 것으로 알려진 유효 성분들이 있다. 기존에 콜라겐합성 촉진물질로 레티노산(retinoic acid), 동물 태반 유래의 단백질(일본특허공보 특개평8-231370), 베툴린산(betulinic acid)(일본특허공보 특개평8-208424), 클로렐라 추출물(일본특허공보 특개평9-40523, 특개평10-36283, 섬유아세포 증식 촉진작용) 등이 알려져 있으나, 피부 적용 시 자극과 발적 등의 안전성의 문제로 사용량의 제한이 있고, 또는 효과가 미미하여 실질적으로 피부의 콜라겐 합성을 촉진하여 피부 기능 개선 효과를 기대할 수 없다. 따라서, 생체에 안전하고 기존의 콜라겐 발현 촉진 물질보다 효과가 높은 새로운 콜라겐 발현 촉진제의 개발이 절실히 요망되고 있다.There are active ingredients known to exhibit anti-wrinkle effects by promoting the synthesis of collagen. Previously, as collagen synthesis promoting substances, retinoic acid, protein derived from animal placenta (Japanese Patent Publication Hei 8-231370), betulinic acid (Japanese Patent Publication Hei 8-208424), chlorella extract ( Japanese Patent Laid-Open No. 9-40523, Japanese Unexamined Patent Publication No. 10-36283, fibroblast proliferation promoting activity) are known, but there are limitations in the amount used due to safety problems such as irritation and redness when applied to the skin, or the effect is insignificant, so It cannot be expected to improve skin function by promoting collagen synthesis in the skin. Therefore, there is an urgent need for the development of new collagen expression promoters that are safe for the living body and have higher effects than existing collagen expression promoters.
한편, 생체 외부로부터 유입되거나, 생체 내에서 발생하는 활성 산소는 생체의 노화를 촉진시키거나, 암을 발생시키는 등 많은 문제의 원인이 된다. 따라서 활성 산소에 의한 산화를 억제하는 항산화 물질에 대한 개발 및 연구가 많이 이루어지고 있다. 항산화 물질은 동, 식물계에 널리 분포되어 있으며 과일과 채소에 많은 페놀성 화합물, 플라보노이드, 토코페롤, 비타민 C, 또는 셀레늄 등이 알려져 있다. 다만, 천연에 존재하는 항산화 물질은 피부 적용 시 실질적으로 충분한 효과를 기대할 수 없는 실정이다. 따라서, 항산화력이 뛰어나고 가격이 저렴한 합성 항산화제가 많이 사용되고 있으나, 인체 부작용 등 안전성에 대한 우려로 그 사용이 제한된다. On the other hand, active oxygen introduced from the outside of the living body or generated inside the living body causes many problems such as accelerating aging of the living body or causing cancer. Therefore, a lot of development and research on antioxidants that inhibit oxidation by active oxygen have been conducted. Antioxidants are widely distributed in animals and plants, and many phenolic compounds, flavonoids, tocopherols, vitamin C, or selenium are known in fruits and vegetables. However, antioxidants present in nature cannot be expected to have a substantially sufficient effect when applied to the skin. Therefore, many synthetic antioxidants with excellent antioxidant power and low price are used, but their use is limited due to safety concerns such as side effects on the human body.
따라서, 생체에 안전하고 유효성분이 안정하며, 무엇보다도 기존의 기능성 물질보다 효과가 우수한 피부 탄력, 피부 보습, 피부 노화 방지, 피부 재생, 피부 주름개선, 또는 항산화 활성을 지닌 기능성 성분의 개발이 절실히 요망되고 있다.Therefore, it is urgently needed to develop functional ingredients that are safe to the body, stable active ingredients, and, above all, more effective than existing functional materials, such as skin elasticity, skin moisturizing, skin aging prevention, skin regeneration, skin wrinkle improvement, or antioxidant activity. It is becoming.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 오스톨을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지용 피부외용제 조성물을 제공하는 것이다.The problem to be solved by the present invention is to provide a composition for external application for skin for preventing skin aging comprising osthole as an active ingredient.
또한 본 발명이 해결하고자 하는 또 다른 과제는 오스톨을 유효성분으로 포함하는 항산화용 피부외용제 조성물을 제공하는 것이다.In addition, another problem to be solved by the present invention is to provide an anti-oxidant composition for external application for skin containing osthole as an active ingredient.
상기 기술적 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1로 표현되는 오스톨(Osthole)을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지용 피부외용제 조성물을 제공한다. 본 발명의 용어 "피부 노화 방지"는 피부 탄력 개선, 피부 보습, 피부 재생 촉진, 또는 피부 주름 개선 등을 의미한다. 또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표현되는 오스톨을 유효성분으로 포함하는 항산화용 피부외용제 조성물을 제공한다.In order to achieve the above technical problem, the present invention provides a composition for external application for skin for preventing skin aging comprising Osthole represented by Formula 1 below as an active ingredient. The term "anti-aging of the skin" of the present invention refers to improving skin elasticity, moisturizing the skin, promoting skin regeneration, or improving skin wrinkles. In addition, the present invention provides a composition for external application for skin for antioxidant comprising osthole represented by Formula 1 below as an active ingredient.
[화학식 1][Formula 1]
이하, 본 발명의 구성을 구체적으로 설명한다.Hereinafter, the configuration of the present invention will be described in detail.
피부 상태 개선 성분이 실제 피부에 적용 시 우수한 효과를 발휘하기 위해서는 저농도에서 고활성의 피부 상태 개선 활성을 나타내고, 피부를 투과하여 흡수되는 능력이 우수해야한다. 또한 이는 피부 상태 개선 효과를 나타내기에 충분한 시간 동안 머무를 수 있도록 휘발성이 낮고, 조성물이나 피부 상에서 활성 성분이 안정하게 유지되고, 화장품으로의 제형화가 용이하며, 또한 피부에 안전한 것이 바람직하다. In order for the skin condition improving component to exhibit excellent effects when applied to the actual skin, it must exhibit high activity for improving skin condition at a low concentration and have excellent ability to penetrate and absorb through the skin. In addition, it is desirable that the volatility is low so that it can remain for a sufficient time to show the skin condition improvement effect, the active ingredient is stably maintained in the composition or on the skin, it is easy to formulate into cosmetics, and it is also safe for the skin.
그러나, 알려진 성분 중 상기 특성을 모두 만족시키는 성분은 흔치 않다. 예를 들어, 몇몇 피부 상태 개선 성분들은 체외(in vitro) 실험 시 저농도에서도 피부 상태 개선 활성은 우수하나, 피부를 투과하여 흡수되는 능력이 떨어져 실제 피부에 적용하기엔 어렵다. 또 다른 기능성 성분들은 친수성이 낮아 화장품으로 제형화가 어렵거나, 열, 광, 또는 산소에 노출되었을 때, 활성 성분이 분해되거나 다른 화합물로 변형되어 피부에 적용하기 전에 이미 효과가 사라지는 경우도 있다.However, among known components, components satisfying all of the above characteristics are not common. For example, some skin condition improving ingredients have excellent skin condition improving activity even at low concentrations in in vitro experiments, but their ability to penetrate and absorb is low, making it difficult to apply them to actual skin. Other functional ingredients are difficult to formulate into cosmetics due to their low hydrophilicity, or when exposed to heat, light, or oxygen, the active ingredient is decomposed or transformed into other compounds, and the effect disappears before application to the skin.
본 발명자들은 상기 종래기술들의 문제점을 극복하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, 오스톨(osthole)을 포함하는 피부외용제 조성물이 각질형성세포의 히알루론산의 생성을 촉진하고, 히알루론산 합성효소 (hyaluronic acid synthase, HAS)의 발현을 증가시키며, 신체 내의 히알루론산 합성을 증가시키는 것을 발견하였다. 또한 이는 피부의 섬유아세포의 콜라게나제 활성을 억제함으로써 콜라겐 합성을 촉진하고, 피부의 재생을 촉진시키고 주름을 개선하며, 자유 라디칼을 소거하여 항산화 효과가 있는 등 전반적인 피부 상태의 개선에 현저하게 우수한 효과가 있는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다. As a result of intensive research efforts to overcome the problems of the prior art, the inventors of the present invention have found that the composition for external application for skin containing osthole promotes the production of hyaluronic acid in keratinocytes, hyaluronic acid synthase, HAS) and increased hyaluronic acid synthesis in the body. In addition, it promotes collagen synthesis by inhibiting the collagenase activity of fibroblasts in the skin, promotes skin regeneration, improves wrinkles, and has an antioxidant effect by scavenging free radicals. The present invention was completed by discovering that there is an effect.
본 발명에서 사용된 오스톨(Osthole)은 사상자(Cnidium monnieri)열매 추출물의 유효성분 중 하나이다. Osthole used in the present invention is a casualty ( Cnidium monnieri ) It is one of the active ingredients of fruit extract.
하기 실시예에서 확인할 수 있는 바와 같이, 오스톨은 저농도에서 월등히 우수한 히알루론산 생성 촉진 효과, 콜라겐 생성 촉진 효과, 또는 항산화 효과를 나타낸다. 따라서 오스톨은 피부 탄력 개선, 피부 보습, 피부 재생, 및 피부 주름 개선 효과 등의 피부 노화 방지 효과 또는 항산화 효과를 위한 피부외용제 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다.As can be seen in the following examples, osthole exhibits a significantly superior hyaluronic acid production promoting effect, collagen production promoting effect, or antioxidant effect at a low concentration. Therefore, austole can be used as an active ingredient of a composition for external application for skin for anti-aging effects such as improving skin elasticity, moisturizing skin, regenerating skin, and improving skin wrinkles, or anti-oxidation effects.
본 발명은 오스톨을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지용 피부외용제 조성물을 제공한다. 상기 피부 노화 방지용 피부외용제 조성물은 피부 탄력 개선용, 피부 보습용, 피부 재생 촉진용, 또는 피부 주름 개선용 등으로 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 피부외용제 조성물은 피부 재생 능력이 우수하여 피부 표면의 상처 치유 용도로 사용될 수도 있다.The present invention provides a composition for external application for skin for preventing skin aging comprising osthole as an active ingredient. The composition for external application for skin for preventing skin aging may be used for improving skin elasticity, moisturizing skin, promoting skin regeneration, or improving skin wrinkles, but is not limited thereto. In addition, the composition for external application for skin has excellent skin regeneration ability and can be used for wound healing on the skin surface.
본 발명의 용어 "피부 노화"는 피부에 탄력 감소, 윤기 감소, 주름 생성, 재생력 약화 또는 심한 건조 등의 증상이 나타나는 것으로, 시간의 흐름 또는 외부 환경 등에 의해 유발될 수 있으며, 히알루론산 또는 콜라겐이 감소되면 피부탄력이 저하되거나 피부 주름이 생성되므로 히알루론산 또는 콜라겐의 감소에 의해 유발될 수 있다.The term "skin aging" of the present invention refers to the appearance of symptoms such as reduced elasticity, reduced gloss, wrinkles, weakened regenerative power, or severe dryness in the skin, which may be caused by the passage of time or the external environment, and hyaluronic acid or collagen When reduced, skin elasticity is lowered or skin wrinkles are generated, so it can be caused by a decrease in hyaluronic acid or collagen.
본 발명의 용어 "피부 노화 방지"는 피부 노화를 예방 또는 개선하는 것을 의미한다. 상기 용어 "예방"은 본 발명의 조성물의 투여로 피부 노화 또는 피부 주름을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 또한, 상기 용어 "개선"은 본 발명의 조성물의 투여로 피부 탄력 또는 피부 주름이 호전 또는 이롭게 변경되어 피부 노화가 억제되는 모든 행위를 의미한다.As used herein, the term “anti-aging of the skin” means preventing or improving skin aging. The term "prevention" refers to any action that inhibits or delays skin aging or skin wrinkles by administering the composition of the present invention. In addition, the term "improvement" refers to any action in which skin aging is suppressed by improving or beneficially changing skin elasticity or skin wrinkles by administration of the composition of the present invention.
본 발명의 용어 "피부 탄력"은 진피층에 존재하는 엘라스틴(elastin)으로 구성된 탄력섬유에 의해 나타나는데, 이러한 탄력섬유는 고무와 같이 매우 낮은 탄성계수를 가지고 있어서, 작은 힘에 의해서도 쉽게 변형되고, 또 그 힘이 제거되었을 때는 쉽게 원형으로 되돌아 온다. 상기 엘라스틴과 콜라겐을 이어주는 히알루론산이 감소되면 피부 탄력이 저하된다.The term "skin elasticity" of the present invention is represented by elastic fibers composed of elastin present in the dermal layer, and these elastic fibers have a very low modulus of elasticity like rubber, so they are easily deformed even by a small force, and When the force is removed, it easily returns to its original form. When hyaluronic acid, which connects the elastin and collagen, is reduced, skin elasticity is reduced.
본 발명의 용어 "피부 보습"은 수분손실(수분 증발) 등을 적절히 조절하여 생체의 항상성을 유지하는 것을 의미하는 것으로, 피부 내 히알루론산 또는 콜라겐이 감소되면 수분이 손실되고, 히알루론산 또는 콜라겐이 증가되면 수분이 증가할 수 있다.The term "moisturizing the skin" of the present invention means maintaining the homeostasis of the living body by properly controlling water loss (moisture evaporation), etc., when hyaluronic acid or collagen in the skin decreases, water is lost, and hyaluronic acid or collagen Moisture may increase with increasing water content.
본 발명의 용어 "피부 재생 효과"는 피부 외부 및 내부 원인에 의한 손상에 대하여 피부 조직이 회복되는 것을 말한다. 상기 외부 원인에 의한 손상은 자외선, 외부 오염 물질, 창상, 외상 등을 들 수 있으며, 상기 내부 원인에 의한 손상은 스트레스 등을 들 수 있다.The term "skin regeneration effect" of the present invention refers to skin tissue recovery against damage caused by external and internal skin causes. The damage caused by the external cause may include ultraviolet rays, external contaminants, wounds, trauma, and the like, and the damage caused by the internal cause may include stress.
본 발명의 용어 "피부 주름"은 피부가 쇠하여 생긴 잔줄을 의미하는데, 유전자에 의한 원인, 피부 진피에 존재하는 콜라겐의 감소, 외부 환경 등에 의해 유발될 수 있으며, 엘라스틴과 콜라겐을 이어주는 히알루론산이 감소되면 피부 주름이 생성된다.The term "skin wrinkles" of the present invention refers to fine lines caused by skin deterioration, which can be caused by genes, a decrease in collagen present in the skin dermis, an external environment, etc., and a decrease in hyaluronic acid that connects elastin and collagen. This causes skin wrinkles to form.
본 발명의 오스톨을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 피부외용제 조성물은 히알루론산의 생성을 촉진시키는 것을 특징으로 한다. 또한, 상기 조성물은 히알루론산 합성효소(hyaluronic acid synthase, HAS)의 발현을 증가시키는 것을 특징으로 한다.The composition for external application for skin for preventing skin aging comprising osthole as an active ingredient of the present invention is characterized in that it promotes the production of hyaluronic acid. In addition, the composition is characterized by increasing the expression of hyaluronic acid synthase (HAS).
본 발명은 오스톨이 인체 유래의 각질 형성 세포에서 히알루론산 단백질의 발현을 증가시킬 수 있다는 사실에 기초한다. 본 발명에서는 오스톨의 히알루론산 생성 촉진 효과를 알아보기 위한 실험을 실시하였으며, 본 발명의 실시예 2~4에서 나타난 바와 같이 오스톨을 처리했을 때 히알루론산의 농도를 증가시키며, 또한 히알루론산 합성효소의 유전자 발현에 의해 히알루론산의 단백질의 발현이 증가됨을 확인하였다.The present invention is It is based on the fact that it is possible to increase the expression of hyaluronic acid protein in human-derived keratinocytes. In the present invention, an experiment was conducted to determine the effect of osthol on promoting hyaluronic acid production. It was confirmed that the expression of the hyaluronic acid protein was increased by the gene expression of the enzyme.
본 발명의 용어 "히알루론산"은 글리코사미노글리칸(glycosaminoglycans)의 일종으로 글루쿠론산과 N-아세틸글루코사민 잔기가 반복적으로 연결되어 있는 사슬모양의 고분자 다당류 물질을 의미한다.The term "hyaluronic acid" of the present invention is a kind of glycosaminoglycans, and refers to a chain-like polymeric polysaccharide material in which glucuronic acid and N-acetylglucosamine residues are repeatedly linked.
또한, 본 발명의 오스톨을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 피부외용제 조성물은 콜라겐의 생성을 촉진시키는 것을 특징으로 한다. 또한, 상기 조성물은 피부 섬유아세포의 콜라겐 생성을 촉진하고 콜라게나제(collagenase)의 활성을 억제하여 체내 콜라겐의 합성량을 증진시키는 것을 특징으로 한다.In addition, the composition for external application for skin for preventing skin aging comprising osthole as an active ingredient of the present invention is characterized in that it promotes the production of collagen. In addition, the composition is characterized in that it promotes the collagen production of skin fibroblasts and inhibits the activity of collagenase to increase the amount of collagen synthesis in the body.
본 발명에서는 오스톨의 콜라겐 생성 촉진 효과를 알아보기 위한 실험을 실시하였으며, 본 발명의 실시예 5 및 6에서 나타난 바와 같이 오스톨을 처리했을 때 콜라겐의 발현양은 증가하고 콜라겐 분해효소의 생성은 억제됨을 확인하였다.In the present invention, an experiment was conducted to determine the collagen production promoting effect of osthole, and as shown in Examples 5 and 6 of the present invention, when osthole was treated, the amount of collagen expression increased and the production of collagen degrading enzyme was inhibited. confirmed.
또한, 본 발명은 오스톨을 유효성분으로 포함하는 항산화용 피부외용제 조성물을 제공한다. 상기 항산화용 피부외용제 조성물은 라디칼 생성을 억제함으로써 항산화 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다. 상기 항산화용 피부외용제 조성물은 생체 외부로부터 유입되거나 생체 내에서 발생하는 활성 산소를 효과적으로 제거할 수 있어, 피부 항노화 용도 또는 항암 용도로 사용될 수 있다.In addition, the present invention provides a composition for external application for skin for antioxidant containing osthole as an active ingredient. The composition for external application for skin for antioxidant is characterized in that it exhibits an antioxidant effect by inhibiting the generation of radicals. The composition for external application for skin for antioxidant can effectively remove active oxygen introduced from the outside of a living body or generated in a living body, and can be used for skin anti-aging or anti-cancer purposes.
본 발명에서는 오스톨의 라디칼 생성 억제 효과를 알아보기 위한 실험을 실시하였으며, 본 발명의 실시예 7에서 나타난 바와 같이 오스톨을 처리했을 때 아스코르빈산에 비해 높은 라디칼 소거 활성을 나타내어 항산화 효과가 매우 우수한 것을 확인하였다.In the present invention, an experiment was conducted to investigate the radical generation inhibitory effect of osthol. As shown in Example 7 of the present invention, when osthol was treated, it exhibited a higher radical scavenging activity than ascorbic acid, so the antioxidant effect was very high. It was confirmed that it was excellent.
본 발명의 용어 "항산화" 효과는 세포내 대사 또는 자외선의 영향으로 인한 산화적 스트레스에 따라 반응성이 높은 자유 라디칼(free radical) 또는 활성산소종(reactive oxygen species;ROS)에 의한 세포의 산화를 억제하는 것을 말하며, 자유 라디칼 또는 활성산소종을 제거하여 이로 인한 세포의 손상이 감소되는 것을 포함한다.The term "antioxidant" effect of the present invention refers to inhibition of cell oxidation by highly reactive free radicals or reactive oxygen species (ROS) according to intracellular metabolism or oxidative stress caused by the influence of ultraviolet rays. It refers to doing, and includes reducing damage to cells caused by removing free radicals or reactive oxygen species.
본 발명에 따른 피부 노화 방지용 또는 항산화용 피부외용제 조성물은 피부 상태의 개선을 위한 화장료 조성물 또는 피부 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물로 사용될 수 있다.The composition for external application for skin for preventing skin aging or antioxidation according to the present invention may be used as a cosmetic composition for improving skin conditions or a pharmaceutical composition for preventing or treating skin diseases.
본 발명에 있어서, 상기 피부외용제 조성물은 오스톨을 조성물 총 중량 대비 0.00001 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.0001 내지 7 중량%, 더욱 바람직하게는 0.001 내지 5 중량%, 가장 바람직하게는 0.01 내지 3 중량%로 포함할 수 있다. 상기 오스톨이 피부외용제 조성물 총 중량 대비 0.00001 중량% 미만의 농도에서는 그 효과를 얻기 어려우며, 10% 중량% 초과의 농도에서는 제형 안정성에 문제가 발생할 수 있다.In the present invention, the composition for external application for skin includes 0.00001 to 10% by weight, preferably 0.0001 to 7% by weight, more preferably 0.001 to 5% by weight, and most preferably 0.01 to 3% by weight of ostol, based on the total weight of the composition. % can be included. It is difficult to obtain the effect at a concentration of less than 0.00001% by weight relative to the total weight of the composition for external application for skin, and a problem with formulation stability may occur at a concentration of more than 10% by weight.
본 발명의 오스톨은 피부 내에서 히알루론산의 단백질 발현을 증가시켜 생성을 촉진시키고, 콜라겐의 생성을 증가시키고, 항산화 효과가 있으며, 피부 미백 효능이 있으므로 각종 피부 외용제의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다. 본 발명이 피부 외용제 조성물로서 사용될 때에는 액상, 유상, 크림상, 연고, 스틱상, 팩, 파스타제, 또는 산제 등 외피에 적용할 수 있는 어떠한 제형으로도 이용 가능하다. Osthole of the present invention increases the protein expression of hyaluronic acid in the skin to promote its production, increases collagen production, has an antioxidant effect, and has a skin whitening effect, so it can be usefully used as an active ingredient in various skin external preparations. there is. When the present invention is used as a composition for external application for skin, it can be used in any formulation that can be applied to the skin, such as liquid, oil, cream, ointment, stick, pack, pasta, or powder.
보다 구체적으로, 상기 피부외용제 조성물의 제형은 용액, 외용 연고, 크림, 폼, 영양 화장수, 유연 화장수, 향수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업 베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린 크림, 선 오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면 활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취, 및 스프레이 등으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나로 제조되어 사용될 수 있다.More specifically, the dosage form of the composition for external application for skin is a solution, external ointment, cream, foam, nutrient lotion, softening lotion, perfume, pack, softening water, emulsion, makeup base, essence, soap, liquid cleanser, bath additive, sunscreen cream , Sun oil, suspension, emulsion, paste, gel, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing, oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, patch, and prepared by any one selected from the group consisting of sprays, etc. and can be used
본 발명에 따른 오스톨을 함유하는 피부외용제 조성물은 본 발명의 목적 달성을 저해하지 않는 범위 내에서, 사용 및 취급이 용이하도록 화장학적 또는 약학적으로 허용되는 담체, 희석제, 보조제, 착색제, 안정화제, 착향제, 계면활성제, 유분, 보습제, 알코올, 점증제, 산화방지제, pH 조절제, 또는 자외선 차단제 등을 추가로 함유할 수 있다.The composition for external application for skin containing osthole according to the present invention includes a cosmetic or pharmaceutically acceptable carrier, diluent, adjuvant, colorant, and stabilizer for easy use and handling within the range that does not impede the achievement of the object of the present invention. , flavoring agents, surfactants, oils, humectants, alcohols, thickeners, antioxidants, pH adjusters, or sunscreens.
본 발명에 따른 오스톨을 유효성분으로 포함하는 피부외용제 조성물은 히알루론산 생성 및 합성 효소의 발현을 촉진시킴으로서 피부의 탄력 저하 예방 및 피부 보습을 촉진 시키며, 피부 섬유아세포의 콜라겐 합성을 촉진하며 콜라게나제 활성을 억제함으로써 피부 주름을 억제하고 피부의 재생을 촉진시키고, 자유 라디칼을 소거하여 항산화 효과가 뛰어나, 기능성 피부외용제 조성물에 효과적인 유효성분으로 사용될 수 있다.The composition for external application for skin containing osthole as an active ingredient according to the present invention promotes the production of hyaluronic acid and the expression of synthesizing enzymes, thereby preventing deterioration of skin elasticity and promoting skin moisturizing, promoting collagen synthesis of skin fibroblasts, and It inhibits skin wrinkles, promotes skin regeneration, and scavenges free radicals to have an excellent antioxidant effect, so it can be used as an effective active ingredient in a functional composition for external application for skin.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.Hereinafter, examples and the like will be described in detail to aid understanding of the present invention. However, the embodiments according to the present invention can be modified in many different forms, and the scope of the present invention should not be construed as being limited to the following examples. Embodiments of the present invention are provided to more completely explain the present invention to those skilled in the art.
재료의 준비preparation of materials
하기 실시예에 사용된 오스톨은 중국 섬서주강생물유한공사 (陝西舟康生物有限公司)에서 구입하여 사용하였다.Austol used in the following examples was purchased from Shaanxi Zhujiang Biological Co., Ltd. (陝西舟康生物有限公司).
실시예Example 1: One: 오스톨의Ostol's 세포독성 평가 Cytotoxicity evaluation
오스톨의 세포독성 평가를 위해 인체 유래 각질 형성 세포(HaCaT)의 세포분열 변화를 Cell Counting Kit-8(Dojindo Lab, 미국)을 사용하여 측정하였다. To evaluate the cytotoxicity of Ostol, cell division changes of human keratinocytes (HaCaT) were measured using Cell Counting Kit-8 (Dojindo Lab, USA).
먼저, 균일한 수의 세포를 96 well plate에 깔아준 뒤 안정화시킨 후 오스톨을 0.5 또는 1 ppm이 되도록 처리하여 24시간 동안 추가 배양하였다. 이후 CCK-8을 처리하여 2시간 뒤 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 무처리군(대조군) 대비 오스톨을 처리한 세포의 상대적인 세포 생존율을 아래와 같이 분석하여, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.First, a uniform number of cells were spread on a 96-well plate, stabilized, and then treated with ostol to be 0.5 or 1 ppm, followed by additional culture for 24 hours. Then, after 2 hours of treatment with CCK-8, absorbance was measured at 450 nm. The relative cell viability of the cells treated with osthole compared to the non-treated group (control group) was analyzed as follows, and the results are shown in Table 1 below.
1000 ppmglucosamine hydrochloride
1000 ppm
0.5 ppmOstall
0.5 ppm
1 ppmOstall
1ppm
* 반복수 n = 3* Number of repetitions n = 3
* 상대적인 세포 생존율 = (추출물 처리군)/(무처리군) X 100* Relative cell viability = (extract treated group)/(untreated group) X 100
상기 표 1에서와 같이, 오스톨 처리에 의해 세포의 수가 크게 변화하지 않는 것을 알 수 있었다. 이는 오스톨이 세포독성을 일으키지 않음을 의미한다.As shown in Table 1, it was found that the number of cells did not change significantly by osthole treatment. This means that osthole does not cause cytotoxicity.
실시예Example 2: 인체 유래의 각질 형성 세포에서 효소결합면역흡착검사 (Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)를 이용한 2: Using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in human-derived keratinocytes 오스톨에to Ostol 의한 히알루론산 농도 증가 Increased hyaluronic acid concentration by
인체 유래 각질 형성 세포를 10 % 우혈청(fetal bovin serum)을 포함한 DMEM 배지에서 1x105 cells/ml로 배양해서 24-well plate에 500 ㎕씩 분주하여 18시간 배양한 후, 우혈청이 포함되어 있지 않은 DMEM 배지로 2회 세척하고, 오스톨을 농도별(0.5 및 1 ppm)로 첨가하였다. 음성 대조군으로 동량의 에탄올을 처리하였고, 양성 대조군으로 히알루론산 생성을 촉진한다고 알려진 글루코사민 하이드로클로라이드(Glucosamine hydrochloride, Sigma-aldrich)를 100 ppm 처리하였다. 24시간 배양 후, 세포 배양액을 회수하여 Hyaluronan ELISA 키트(R&D Systems)를 이용하여 히알루론산 농도를 측정하여 표 2에 나타내었다.Human-derived keratinocytes were cultured at 1x10 5 cells/ml in DMEM medium containing 10% fetal bovin serum, dispensed in 500 μl each in a 24-well plate, cultured for 18 hours, and then cultured without bovine serum. After washing twice with untreated DMEM medium, osthole was added at different concentrations (0.5 and 1 ppm). As a negative control, the same amount of ethanol was treated, and as a positive control, 100 ppm of glucosamine hydrochloride (Sigma-aldrich) known to promote hyaluronic acid production was treated. After culturing for 24 hours, the cell culture medium was collected, and the hyaluronic acid concentration was measured using a Hyaluronan ELISA kit (R&D Systems), and is shown in Table 2.
(음성 대조군)untreated
(negative control)
100 ppmglucosamine hydrochloride
100 ppm
0.5 ppmOstall
0.5 ppm
1 ppmOstall
1ppm
상대농도(%)hyaluronic acid
Relative concentration (%)
* 반복수 n = 3* Number of repetitions n = 3
* 음성 대조군의 히알루론산 농도를 기준(100%)으로 오스톨을 처리한 실험군의 히알루론산 농도를 수치화함.* The hyaluronic acid concentration of the experimental group treated with Ostol was quantified based on the hyaluronic acid concentration of the negative control group (100%).
그 결과, 오스톨은 농도 의존적으로 인체 유래 각질형성세포에서 히알루론산 생성을 증가시켰다.As a result, Osthole increased the production of hyaluronic acid in human keratinocytes in a concentration-dependent manner.
실시예Example 3: 인체 유래의 각질 형성 세포에서 3: from human-derived keratinocytes 오스톨에to Ostol 의한 히알루론산 합성효소(HAS) 유전자의 발현 증가 Increased expression of hyaluronic acid synthase (HAS) gene by
인체 유래 각질 형성 세포를 10 % 우혈청(fetal bovin serum)을 포함한 DMEM 배지에서 1x106 cells/ml로 배양해서 6-well plate에 3000 ㎕씩 분주하여 18시간 배양한 후, 우혈청이 포함되어 있지 않은 DMEM 배지로 2회 세척하고, 오스톨 0.5 및 1 ppm을 24시간동안 처리하였다. 세포를 회수하여, RNeasy mini kit(Qiagen)로 전체 RNA를 추출한 뒤, 정량하여 1 ㎍의 RNA를 GeneAmp® RNA PCR kit(Applied Biosystems)를 이용하여 역전사(reverse transcription)하였다. 역전사 반응은 Mycycler® PCR 기기(Biorad)를 이용하여 수행하였다.Human-derived keratinocytes were cultured at 1x10 6 cells/ml in DMEM medium containing 10% fetal bovin serum, dispensed in 3000 μl each in a 6-well plate, cultured for 18 hours, and then cultured without bovine serum. Washed twice with DMEM medium, and treated with Ostol 0.5 and 1 ppm for 24 hours. Cells were recovered, total RNA was extracted with RNeasy mini kit (Qiagen), and quantified, and 1 μg of RNA was reverse transcribed using GeneAmp ® RNA PCR kit (Applied Biosystems). Reverse transcription reaction was performed using a Mycycler ® PCR machine (Biorad).
이후 역전사 반응용액 2 ㎕와 HAS-2, HAS-3, GAPDH(Glyceraldehyde- 3-phosphate dehydrogenase)의 Taqman® probe (Invitrogen, 미국, HS02511055_S1, HS03929097_g1)를 이용하여 quantitative real time PCR을 수행하였다. Real time PCR은 CFX96 TouchTM Real-Time PCR Detection System 기기(Biorad)를 이용하여 수행하였다. Real time PCR을 통해 얻은 실험 결과는 세포 내 대조유전자인 GAPDH를 기준으로 Livak K.J. 외(Methods, 2001, 25, 402-408)에 기재된 방법으로 계산하여 나타내었다.Then, quantitative real time PCR was performed using 2 μl of the reverse transcription reaction solution and Taqman ® probe (Invitrogen, USA, HS02511055_S1, HS03929097_g1) of HAS-2, HAS-3, and GAPDH (Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase). Real-time PCR was performed using a CFX96 Touch TM Real-Time PCR Detection System (Biorad). Experimental results obtained through real-time PCR were calculated and presented by the method described in Livak KJ et al. (Methods, 2001, 25, 402-408) based on the intracellular control gene GAPDH.
또한, 음성 대조군의 mRNA 발현량을 기준(100 %)으로 하여 오스톨 처리 실험군의 mRNA 발현량을 수치화하여 하기 표 3에 나타내었다.In addition, the mRNA expression level of the osthole-treated experimental group was quantified based on the mRNA expression level of the negative control group (100%), and is shown in Table 3 below.
(음성 대조군)untreated
(negative control)
100 ppmglucosamine hydrochloride
100 ppm
0.5 ppmOstall
0.5 ppm
1 ppmOstall
1ppm
발현량(%)HAS-2
Expression level (%)
발현량(%)HAS-3
Expression level (%)
* 반복수 n = 3* Number of repetitions n = 3
그 결과, 오스톨 처리에 의해 인체 유래 각질형성 세포에서 히알루론산 합성효소, 특히 HAS-2와 HAS-3의 발현이 증가되었다.As a result, the expression of hyaluronic acid synthase, especially HAS-2 and HAS-3, was increased in human-derived keratinocytes by osthole treatment.
실시예Example 4: 4: 인체 유래 섬유아세포에서 In human-derived fibroblasts 오스톨에to Ostol 의한 히알루론산 농도 증가 Increased hyaluronic acid concentration by
인체 유래 섬유아세포(Human Dermal Fibroblast)를 10 % 우혈청(fetal bovin serum)을 포함한 DMEM 배지에서 1x105 cells/ml로 배양해서 24-well plate에 500 ㎕씩 분주하여 18시간 배양한 후, 우혈청이 포함되어 있지 않은 DMEM 배지로 2회 세척하고. 오스톨을 농도별(0.5 및 1 ppm)로 첨가하였다. 음성 대조군으로 동량의 에탄올을 처리하였고, 양성 대조군으로 히알루론산 생성을 촉진한다고 알려진 글루코사민 하이드로클로라이드(Glucosamine hydrochloride, Sigma-aldrich)를 100 ppm 처리하였다. 24시간 배양 후, 세포 배양액을 회수하여 Hyaluronan ELISA 키트(R&D Systems)를 이용하여 히알루론산 농도를 측정하여 표 4에 나타내었다.Human dermal fibroblasts were cultured at 1x10 5 cells/ml in DMEM medium containing 10% fetal bovin serum, and 500 μl of each was dispensed into a 24-well plate, cultured for 18 hours, and bovine serum Wash twice with DMEM medium without Ostol was added at different concentrations (0.5 and 1 ppm). As a negative control, the same amount of ethanol was treated, and as a positive control, 100 ppm of glucosamine hydrochloride (Sigma-aldrich) known to promote hyaluronic acid production was treated. After culturing for 24 hours, the cell culture medium was collected, and the hyaluronic acid concentration was measured using a Hyaluronan ELISA kit (R&D Systems), and is shown in Table 4.
(음성 대조군)untreated
(negative control)
100 ppmglucosamine hydrochloride
100 ppm
0.5 ppmOstall
0.5 ppm
1 ppmOstall
1ppm
상대농도(%)hyaluronic acid
Relative concentration (%)
* 반복수 n = 3* Number of repetitions n = 3
표 4에 나타난 실험 결과를 볼 때, 오스톨은 인체 유래 섬유아세포에서 히알루론산 생성을 증가시켰다. Looking at the experimental results shown in Table 4, Ostol increased the production of hyaluronic acid in human-derived fibroblasts.
실시예Example 5: 5: 오스톨에to Ostol 의한 콜라겐 Collagen by 발현양amount of expression 증가 increase
상기 오스톨을 인간유래의 섬유아세포의 배양액에 첨가하여 세포수준에서 콜라겐 발현양을 검정하였다. 발현된 콜라겐의 측정은 PICP EIA kit(Procollagen Type I C-Peptide Enzyme Immuno assay, TAKARA Korea)를 이용하여 정량하였다.The osthole was added to the culture medium of human-derived fibroblasts, and the amount of collagen expression was assayed at the cellular level. The expression of collagen was quantified using PICP EIA kit (Procollagen Type I C-Peptide Enzyme Immuno assay, TAKARA Korea).
오스톨을 1 ppm, 10 ppm 농도로 24시간 처리 후, 배양액을 취하여 PICP EIA Kit로 각 농도에서 콜라겐 발현 정도를 분광광도계를 이용하여 450 nm에서 측정하였다. 음성대조군은 무 처리군이며, 양성대조군은 비타민 C를 50 nM 처리한 군이다. 콜라겐 발현양은 음성대조군에 대한 상대적인 발현양으로 증가율을 계산하여 표 5에 나타냈다. After treatment with osthole for 24 hours at 1 ppm and 10 ppm concentration, the culture medium was taken and the degree of collagen expression at each concentration was measured at 450 nm using a spectrophotometer using the PICP EIA Kit. The negative control group is a non-treated group, and the positive control group is a group treated with 50 nM of vitamin C. The amount of collagen expression was shown in Table 5 by calculating the increase rate with the relative expression amount for the negative control group.
비타민C 50nMpositive control
Vitamin C 50nM
1 ppmOstall
1ppm
10 ppmOstall
10 ppm
*반복수 n = 3*Number of iterations n = 3
실시예Example 6: 6: 오스톨에to Ostol 의한 콜라겐 분해효소 by collagenase MMPMMPs -1 억제 효과-1 inhibitory effect
하기 표 6에서 오스톨에 의한 콜라겐 분해효소 (MMP-1) 생성 억제 효과를 확인하였다.In Table 6 below, the inhibitory effect of ostall on collagenase (MMP-1) production was confirmed.
실험 전 인간 유래 섬유아세포를 대상으로 실험물질의 농도 0.001 ~ 10 ppm 농도 범위에서 세포독성을 평가(섬유아세포를 배양하여 MTT 시험을 하는 방법)[참고문헌: Mossman T. (1983). Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth & Survival: application to proliferation & cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods 65, 55-63]하였으며, 세포독성이 없는 농도를 선정하여 MMP-1 생성억제 평가법을 수행하였다.Evaluation of cytotoxicity in the concentration range of 0.001 ~ 10 ppm of the test substance on human-derived fibroblasts before the experiment (method of culturing fibroblasts for MTT test) [Reference: Mossman T. (1983). Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth & Survival: application to proliferation & cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods 65, 55-63], and the MMP-1 production inhibition evaluation method was performed by selecting a concentration without cytotoxicity.
인간 정상 피부 세포인 섬유아세포를 24-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 2.5× 104 세포가 되도록 접종하고, 10% 혈청 DMEM 배지 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 10% 혈청 DMEM 배지를 제거하고 인산완충용액으로 1회 세척한 후 오스톨을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 오스톨이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 30분 동안 추가로 배양하였다. Fibroblasts, which are normal human skin cells, were inoculated into a 24-well microplate at 2.5×10 4 cells per well, cultured for 24 hours in 10% serum DMEM medium and 37°C, and then 10% serum DMEM medium was removed. After washing once with phosphate buffer, the cells were further cultured for 30 minutes in serum-free DMEM medium containing osthole and serum-free DMEM medium without osthole as a control.
시료 처리 30분 후 MMP-1 생성시키는 것으로 알려진 물질인 TNF-α(tumor necrosis factor-α) 50 ng/ml로 자극 후 24시간 배양하였다. 이때 TNF-α 무처리군과 처리군은 오스톨이 포함되지 않은 대조군 중 TNF-α를 처리하지 않은 무처리군과 TNF-α를 처리한 처리군으로 하였다.After 30 minutes of sample treatment, the cells were stimulated with 50 ng/ml of TNF-α (tumor necrosis factor-α), a substance known to produce MMP-1, and cultured for 24 hours. At this time, the TNF-α untreated group and the treated group were the non-treated group without TNF-α and the treated group treated with TNF-α among the control group that did not contain osthole.
각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 킷트(Amersham, 미국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, MMP-1 생성저해율(%)을 계산하였다.The supernatant of each well was collected, and the amount (ng/ml) of newly synthesized MMP-1 was measured using an MMP-1 assay kit (Amersham, USA), and the inhibition rate (%) of MMP-1 production was calculated.
실시예Example 7: 7: 오스톨에to Ostol 의한 항산화 효과 - 자유라디칼 소거율 Antioxidant effect by free radical scavenging rate
오스톨의 항산화 작용을 확인하기 위해 자유라디칼 소거 활성을 측정하였다. 자유라디칼 소거능은 1,1-디페닐-2-피크릴-하이드라질(DPPH) 방법으로 다음과 같이 측정하였다(Blois, M.S. Nature 181, 1190, 1958). DPPH는 비교적 안정한 자유 라디칼로서, 라디칼 상태로 존재시 517 ㎚에서 최대 흡광도를 보이며 소거되면 흡광성을 잃는다. DPPH는 시그마(Sigma)사의 것을 사용하였으며, 0.15 mM의 농도로 메틸 알코올에 녹여 사용하였다. 먼저, 오스톨과, 양성 대조군으로 아스코르빈산을 96 웰 플레이트(well plate)의 각 웰에 100 ㎕씩 넣었다. 여기에 DPPH 용액을 100 ㎕씩 첨가하여 상온에서 30 분간 방치한 다음, 마이크로플레이트 판독기(Micro plate reader, BioTek EL-340)를 이용하여 517 ㎚에서의 흡광도를 측정하였다. 이때, 대조군으로는 오스톨 대신 메틸알코올을 넣어 사용하였다. 상기 실험군과 대조군에 대하여 측정한 흡광도를 가지고 자유 라디칼 소거활성 효과를 구하여 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다.Free radical scavenging activity was measured to confirm the antioxidant activity of osthole. The free radical scavenging ability was measured by the 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) method as follows (Blois, M.S. Nature 181, 1190, 1958). DPPH is a relatively stable free radical, exhibiting maximum absorbance at 517 nm when present in a radical state and losing absorbance when eliminated. DPPH was used from Sigma, and was dissolved in methyl alcohol at a concentration of 0.15 mM. First, 100 μl of osthol and ascorbic acid as a positive control were added to each well of a 96-well plate. 100 μl of DPPH solution was added thereto, left at room temperature for 30 minutes, and then absorbance at 517 nm was measured using a micro plate reader (BioTek EL-340). At this time, as a control, methyl alcohol was used instead of Ostol. The free radical scavenging activity effect was obtained with the absorbance measured for the experimental group and the control group, and the results are shown in Table 7 below.
표 7의 결과에서 볼 수 있듯이, 오스톨은 기존에 알려진 항산화 물질인 아스코르빈산과 비교할 때 높은 활성을 보이므로, 항산화 효과가 있음을 알 수 있다.As can be seen from the results of Table 7, it can be seen that osthol has an antioxidant effect because it shows high activity compared to ascorbic acid, which is a previously known antioxidant.
실시예Example 8: 8: 오스톨에to Ostol 의한 피부 수분량 증가 increase in skin moisture
오스톨을 함유하는 피부외용제에 대한 피부 수분량 증가 효과를 사람 피부에 적용시키기 위해, 하기 제조예 1의 영양크림의 조성에 따라 제조하였고, 22℃ 및 상대습도 50%의 항온 항습실에서 건강한 성인 20명의 하박 안쪽에 일정량(2 mg/㎠)을 도포하고 도포 전, 도포 1시간 후 및 도포 2시간 후의 피부의 수분함량을 측정하였다. 대조군의 경우 오스톨 대신 동량의 에탄올을 함유한 영양크림을 같은 방법으로 제조하여 도포하였으며, 아무런 처리를 하지 않은 정상 피부를 무처리군으로 사용하였다. 수분 보유능 측정은 Corneometer(Courage + Khazaka, GmbH, Germany)를 사용하여 피부 표면의 전기 전도도를 측정하였다. 그 결과는 다음 표 8에 나타내었다.In order to apply the effect of increasing skin moisture content of an external skin preparation containing Ostol to human skin, it was prepared according to the composition of the nutritional cream of Preparation Example 1 below, and 20 healthy adults were tested in a constant temperature and humidity room at 22 ° C and a relative humidity of 50%. A certain amount (2 mg/cm 2 ) was applied to the inside of the lower arm, and the moisture content of the skin was measured before application, 1 hour after application, and 2 hours after application. In the case of the control group, a nutritious cream containing the same amount of ethanol was prepared and applied in the same way instead of osthol, and normal skin without any treatment was used as the untreated group. Water retention was measured by measuring the electrical conductivity of the skin surface using a Corneometer (Courage + Khazaka, GmbH, Germany). The results are shown in Table 8 below.
영양크림Preparation Example 1
nourishing cream
영양크림control group
nourishing cream
* n = 20* n = 20
그 결과, 오스톨을 함유하는 영양크림은 사람 피부의 수분량을 증가시키며, 도포 2 시간 후에도 우수한 수분 보유능을 나타내었다.As a result, the nourishing cream containing osthol increased the amount of moisture in human skin and showed excellent moisture retention ability even after 2 hours of application.
이를 통해, 오스톨은 피부 수분량 증가 효과 및 수분 보유능이 매우 우수한 것을 확인한바, 피부 탄력 개선, 노화 예방, 피부 주름 예방 또는 치료, 및 피부 보습에 유용하게 사용될 수 있다.Through this, it was confirmed that Osthole has a very good skin moisture increase effect and moisture retention ability, so it can be usefully used for improving skin elasticity, preventing aging, preventing or treating skin wrinkles, and moisturizing the skin.
실시예Example 9: 9: 오스톨에to Ostol 의한 피부 탄력 증진 Improvement of skin elasticity by
오스톨을 함유하는 피부외용제에 대한 피부 탄력 증진 효과를 사람 피부에 적용시기 위해, 하기 제조예 1의 영양크림의 조성에 따라 제조하였고, 22℃ 및 상대습도 50%의 항온 항습실에서 건강한 성인 20명의 목가에 4주간 도포한 후 도포 전, 후의 탄력을 측정하여 피부탄력 개선효과를 비교 평가하였다.In order to apply the skin elasticity enhancing effect of an external skin preparation containing Ostol to human skin, it was prepared according to the composition of the nutritional cream of Preparation Example 1 below, and 20 healthy adults were tested in a constant temperature and humidity room at 22 ° C and 50% relative humidity. After applying to the neck for 4 weeks, the skin elasticity improvement effect was compared and evaluated by measuring the elasticity before and after application.
피검자의 목가 왼쪽 부위에는 오스톨을 함유한 영양크림을, 오른쪽 부위에는 오스톨 대신 동량의 에탄올을 함유한 영양크림을 1일 2회씩 아침ㆍ저녁으로 세안 후 4주간 사용하도록 하였다. 그 후, 피부탄력측정기(Cutometer, Germany)를 이용하여 각 부위에서의 탄력의 개선 정도를 측정하였다. 개선 정도는 Ur/Uf를 parameter로 사용하였고, 그 결과를 표 9에 나타내었다.A nourishing cream containing Ostol was applied to the left part of the subject's neck, and a nourishing cream containing the same amount of ethanol instead of Ostol was applied to the right part of the neck twice a day, morning and evening, for 4 weeks after cleansing. After that, the degree of improvement in elasticity in each area was measured using a skin elasticity measuring device (Cutometer, Germany). For the degree of improvement, Ur/Uf was used as a parameter, and the results are shown in Table 9.
영양크림Preparation Example 1
nourishing cream
영양크림control group
nourishing cream
* n = 20* n = 20
그 결과, 오스톨을 함유하는 영양크림은 사람 피부의 탄력을 개선시켰으며, 피부 내에 어떤 부작용도 나타내지 않았다.As a result, the nutrient cream containing osthol improved the elasticity of human skin and did not show any side effects in the skin.
이를 통해, 오스톨은 피부 탄력 개선 효과가 매우 우수한 것을 확인한바, 피부 탄력 개선, 노화 예방, 및 피부 주름 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.Through this, it was confirmed that Osthole has a very excellent skin elasticity improvement effect, and thus it can be usefully used for improving skin elasticity, preventing aging, and preventing or treating skin wrinkles.
이상과 같은 효과시험 결과를 근거로 하여, 본 발명에 따른 조성물의 제조예를 구체적으로 설명한다. 단, 하기 제조예는 본 발명 조성물의 예시일 뿐, 본 발명 조성물의 범위가 하기 제형만으로 한정되지 않는다는 것은 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다. 이하 오스톨을 함유하는 피부외용제의 처방예를 제조예에 의해 나타내었다.Based on the above results of the effect test, a preparation example of the composition according to the present invention will be described in detail. However, the following Preparation Examples are only examples of the composition of the present invention, and it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the composition of the present invention is not limited to only the following formulations. Hereinafter, formulation examples of external skin preparations containing Ostol are shown in Production Examples.
제조예manufacturing example 1: 영양크림의 제조 1: Manufacture of nutritional cream
하기 표 10에 나타낸 조성으로 오스톨을 유효성분으로 포함하는 영양크림을 화장품 분야에서 사용되는 통상적인 방법으로 제조하였다.In the composition shown in Table 10 below, a nutritious cream containing osthole as an active ingredient was prepared by a conventional method used in the cosmetic field.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.From the above description, those skilled in the art to which the present invention pertains will be able to understand that the present invention may be embodied in other specific forms without changing the technical spirit or essential characteristics thereof. In this regard, the embodiments described above should be understood as illustrative in all respects and not limiting. The scope of the present invention should be construed as including all changes or modifications derived from the meaning and scope of the claims to be described later and equivalent concepts rather than the detailed description above are included in the scope of the present invention.
Claims (7)
According to any one of claims 1, 2, and 5, the formulation of the composition is a solution, external ointment, cream, foam, nutrient lotion, softening lotion, perfume, pack, softening water, emulsion, makeup base, essence , soap, liquid cleanser, bath powder, sunscreen cream, sun oil, suspension, emulsion, paste, gel, lotion, powder, surfactant-containing cleanser, oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, patch, and A cosmetic composition, characterized in that any one selected from the group consisting of spray.
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|---|---|---|---|
| KR1020150128261A KR102530481B1 (en) | 2015-09-10 | 2015-09-10 | External composition for antiaging comprising osthole |
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