KR102517287B1 - 조혈 줄기 세포 이식을 받는 환자를 치료하기 위한 분변 미생물총 - Google Patents

조혈 줄기 세포 이식을 받는 환자를 치료하기 위한 분변 미생물총 Download PDF

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Abstract

본 발명은 수용자 환자에서 동종이계 조혈 줄기 세포 (HSC) 이식으로부터 발생하는 감염성 또는 비-감염성 합병증의 예방 및/또는 치료에 사용하거나, 또는 암을 치료하기 위한 분변 미생물총 샘플에 관한 것이며, 상기 분변 미생물총 샘플 및 상기 조혈 줄기 세포는 동일한 공여자 대상체로부터 유래되거나, 또는 상기 분변 미생물총 샘플은 HSC 이식 전에 투여된다.

Description

조혈 줄기 세포 이식을 받는 환자를 치료하기 위한 분변 미생물총
본 발명은 조혈 줄기 세포 (HSC) 이식을 받는 환자의 치료에 관한 것이다.
조혈 줄기 세포는 모든 혈액 세포주의 기원이 되는 세포이다. 분화에 의해, 이들 세포는 임의의 혈액 세포 (적혈구, 백혈구, 혈소판)를 생성할 수 있으며 또한 자기 재생할 수 있다.
조혈 줄기 세포 이식은 특정 혈액 장애 및 특정 암의 치료에서 주요한 치료 방법이다. 실제로, 이는 화학요법 및/또는 방사선 요법에 의한 치료의 강도가 방대한 용량으로 증가되도록 하여 환자의 생존을 개선시키면서 상기 장애를 치료하거나 또는 회복시킨다. 또한, 이는 암 질환의 제어에 기여할 수 있는 새로운 면역 체계가 환자에 도입되도록 한다 (동종 이식의 경우).
이러한 치료 후에 수행되는, 상당한 혈액학적 독성을 수반하는 이식은 골수 재건 및 정상적인 혈액 세포 생성으로의 복귀를 가능하게 한다.
조혈 줄기 세포 이식은 여러 유형의 병리학: 악성, 예컨대 급성 백혈병, 골수종, 림프종 또는 특정 고형 종양 (유방암, 고환암, 난소암, 신경모세포종 등) 및 또한 비-악성, 예컨대 선천성 또는 후천성 결핍증 (면역 결핍증, 무형성증, 대사성 결핍증 및 대사 이상 등)의 치료에 사용된다.
2가지 유형의 이식이 수행될 수 있다:
- 환자가 수주, 수개월 또는 수년 전에 말초 혈액으로부터 채취하거나 또는 골수로부터 채취하여 냉동 저장한 자신의 줄기 세포를 받는 자가 이식.
- 화합성이든 아니든 간에 관계 공여자, 또는 화합성이든 아니든 간에 비관계 공여자, 또는 제대혈 세포를 필요로 하는 동종 이식 (또는 "동종이계 이식").
이식은 여러 단계로 수행된다. 이식을 받기 며칠 전에, 환자는 전형적으로, 골수 절제식이거나 또는 골수 절제식이 아닌 "컨디셔닝"을 받게 된다. 이것은 종종 수용자의 골수를 파괴하고 이식을 허용하기 위한 다소 심한 화학요법이고 임의로는 전신 방사선 조사이다. 일반적으로, 그 목적은 공여자의 조혈 줄기 세포가 수용자의 골수에서 발생하여 파괴된 수용자의 골수를 대체하도록 하기 위해 수용자의 골수에 존재하는 모든 세포를 파괴하는 것이다.
이때, 조혈 세포의 이식은 정맥내 수혈에 의해 이루어진다. 이식 후에 무형성증 기간이 이어지고, 이 동안에 환자는 더 이상 면역 방어를 갖고 있지 않다.
동종 이식의 경우, 동종이계 이식에 선행되는 "컨디셔닝" 기간은 충분한 면역 억제를 생성하여 이식 거부를 방지할 수 있게 하고, 필요한 경우 악성 세포에 대한 항신생물 효과를 수득할 수 있게 한다. 그러나, 이러한 유익한 효과는 공여자와 수용자 간의 면역학적 반응과 연계된 이식편 대 숙주 (GVH) 질환의 높은 위험성에 의해 상쇄된다. 더욱이, "컨디셔닝"은 예방적 또는 치료적 항감염 치료가 필요한 박테리아성, 바이러스성 또는 진균성 감염 위험에 환자를 노출시킨다.
현재까지, 이러한 심각한 합병증에 대해 충분히 만족스러운 치료법은 없다.
이러한 합병증에 대한 예방적 또는 치료적 접근법이 여전히 필요하다.
이러한 치료 필요성에 반응하여, 본 발명자들은 HSC 이식을 분변 미생물총 이식과 조합하자고 제안한다. 본 발명자들은 보다 특히, 분변 미생물총 공여자가 HSC 공여자와 동일한 경우의 혜택을 확인하였다. 본 발명자들은 또한, 동종 상황의 경우 (분변 미생물총 공여자와 HSC 공여자가 동일한 경우)이든, 또는 분변 미생물총 공여자와 HSC 공여자가 상이한 상황의 경우이든지 간에, HSC 이식 전에 분변 미생물총 이식의 이익을 확인하였다.
따라서, 본 발명의 측면은 수용자 환자에서 동종이계 HSC 이식으로부터 발생하는 감염성 또는 비-감염성 합병증의 예방 및/또는 치료에 있어서의, 분변 미생물총 샘플의 용도에 관한 것이며, 상기 분변 미생물총 샘플 및 상기 HSC는 하나의 동일한 공여자 대상체로부터 유래된다.
분변 미생물총 이식은 HSC 동종 이식 전 또는 이식 후에 수행될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 수용자 환자에서 동종이계 HSC 이식으로부터 발생하는 감염성 또는 비-감염성 합병증의 예방 및/또는 치료에 있어서의, 분변 미생물총 샘플의 용도에 관한 것이며, 상기 분변 미생물총 샘플은 HSC 이식 전에 투여된다.
유리하게는, 분변 미생물총은 동종이계 HSC 이식 후 이식편 대 숙주 (GVH) 질환의 발생을 예방하거나 또는 발생 위험을 감소시킬 수 있게 한다.
분변 미생물총은 또한, 동종이계 HSC 이식이 시작되기 전에, 심지어 환자의 골수 절제식 또는 비-골수 절제식 컨디셔닝이 시작되기 전에 수용자 환자를 감염시킨, 병원성 박테리아, 특히 항생제에 대해 다중 내성인 박테리아에 의한 콜로니화에 기인하는 패혈증을 포함할 수도 있는, 감염성 합병증의 위험을 감소시킬 수 있게 한다. 이러한 감염은 전형적으로, 동종이계 HSC 이식에 대한 금기 사항이다. 본 발명에 따르는 분변 미생물총 이식은 이러한 금기 사항을 해결해 주며, 환자는 컨디셔닝 및 동종이계 HSC 이식을 받을 수 있게 된다.
수용자 환자는 특히 암, 특히 악성 혈액병증뿐만 아니라 비-악성 장애를 앓고 있을 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 암, 특히 악성 혈액병증을 앓고 있고, 동종이계 HSC 이식을 받거나 또는 받았던 수용자 환자에서 암을 치료하는 데 있어서의 분변 미생물총 샘플의 용도에 관한 것이며, 상기 분변 미생물총 샘플 및 상기 HSC는 바람직하게는 하나의 동일한 공여자 대상체로부터 유래된다.
여기서 다시, 분변 미생물총 이식은 HSC 이식 전 또는 이식 후에 수행될 수 있다.
수용자 환자
예상되는 환자는 연령과 성별에 상관 없이, 조혈 줄기 세포 이식을 받았거나 또는 받을 것인 인간이다. 환자는 HSC 이식에 의해 치료될 수 있는 임의의 장애를 앓고 있다. 이들은 특히 암, 유전적 장애, 조혈계 및/또는 면역 체계에 영향을 미치는 장애이다. 특히: 고형 종양, 악성 혈액병증, 예를 들어, 만성 골수성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 골수 증식성 증후군, 골수 이형성 증후군, NHL (비-호지킨 악성 림프종), 호지킨병, 다발성 골수종, 특발성 수질 무형성증, 발작성 야간 혈색소뇨증, 헤모글로빈혈증, 선천성 면역 결핍증 [SCID, 코스트만(Kostmann), 비스코트-올드리치(Wiskott-Aldrich)] 및 판코니(Fanconi) 빈혈이 언급될 수 있다.
환자는 조혈 줄기 세포 이식 전에, 골수 절제식 또는 비-골수 절제식 치료일 수 있는 컨디셔닝 (또는 제제)을 받는다.
이러한 유형의 치료에 관한 고찰이 문헌 [Petersen et al., 2007 (Alloreactivity of therapeutic principle in the treatment of hematologic malignancies. Danish Medical Bulletin, May 2007, 54: 112-39)]에 제시된다. 골수 절제식 치료의 한 예는 다음과 같을 수 있다: 시클로포스파미드 (120 mg/kg)를 부술판 (16 mg/kg)과 조합하거나, 또는 12 Gy의 흡수된 방사선 선량으로 환자를 전신 방사선 조사하는 것과 조합한다.
비-골수 절제식 치료의 경우에, 환자는 12 Gy 미만의 방사선 선량으로 전신 방사선 조사를 받을 수 있거나 또는 시클로포스파미드 및/또는 플루다라빈에 근거한 화학요법을 받을 수 있다. 예를 들어, D-6 및 D-5에 시클로포스파미드 50 mg/kg을 1회 정맥내 주사하고, D-6 내지 D-2에 플루다라빈 25 mg/m2를 주사하는 것을 포함하는 비-골수 절제식 림프구 감소증 치료를 제공할 수 있다 (D0은 조혈 줄기 세포 이식날이다) (문헌 [Sandmaier et al., Semin Oncol. 2000 Apr: 27 (2 Suppl 5): 78-8] 참조).
문헌 [Dulery et al., Biol Blood Marrow Transplant. 2018 Jan 11. p ii: S1083-8791(18)]에 기재된 바와 같은, 티오테파를 이용한 순차적 컨디셔닝이 또한 가능하다.
사용된 조혈 줄기 세포는 임의의 공급원, 예를 들어, 공여자 대상체로부터의 말초 혈액 또는 골수로부터 유래될 수 있다.
분변 미생물총
본 발명은 특정 실시양태에 따라서 유리하게는, HSC 공여자 대상체와 동일한 공여자 대상체로부터 유래될 수 있는 분변 미생물총 이식을 구현한다.
"분변 미생물총"은 건강한 개체의 대변에 존재하는 미생물, 특히 박테리아 균총을 의미한다. 인간 장내 미생물총은 인간의 위장계 (위, 장 및 결장)에서 발견되는 주요 미생물 (박테리아, 효모 및 진균)이다. 미생물 다양성은 현재 성인 개체의 우세한 장내 미생물총을 구성하는 약 10가지의 박테리아 종으로 추정되고, 1014개의 박테리아가 존재하며, 각각의 개체에서 200,000 내지 800,000개의 유전자의 박테리아 메타게놈을 나타내는데, 즉 인간 게놈의 유전자의 수의 10배 내지 50배이다. 태내에서는 무균성이지만, 장은 독특한 개별 미생물총으로 진화하면서 생후 1일부터 콜로니화된다. 각각의 사람은 종의 관점에서 비교적 가까운 박테리아를 가지고 있지만, 그들의 미생물총의 정확한 조성 (종, 비율)은 대체로 (종의 3/4 초과) 숙주에 대해 특이적이다.
"분변 미생물총의 이식" 또는 "분변 미생물총 샘플의 이식"은 건강한 개체로부터의 분변 미생물, 특히 박테리아, 균총을 환자 내로 투여하는 것을 의미한다.
본 발명의 맥락에서, 조혈 줄기 세포 이식의 "수용자 환자"는 조혈 줄기 세포의 "공여자 대상체"와 상이하고, 분변 미생물총 샘플의 "공여자 대상체"와 상이하며, 특정의 특별한 실시양태에서는, 조혈 줄기 세포의 공여자 대상체가 또한 분변 미생물총 샘플의 공여자 대상체인 것으로 이해된다. 조혈 줄기 세포의 인간 공여자 대상체는 바람직하게는, 수용자 환자와의 조직 적합성이 우수한데, 즉 공여자는 수용자와 가능한 한 가까운 HLA 타이핑을 갖는다. 따라서, 적어도 5 내지 10개의 HLA 항원이 화합성인 것이 바람직하다.
바람직하게는, 분변 미생물총의 공여자 대상체는 건강한 대상체이다. "건강한 대상체"는 장내 미생물총의 불균형 또는 의학 전문의가 진단/인정한 병리상태를 앓고 있지 않는 대상체를 의미한다. 또한 바람직하게는, 분변 미생물총의 공여자 대상체는 동일한 환경에서 살고 있는 환자의 가까운 친척, 바람직하게는 가족 구성원이다.
분변 미생물총 샘플은 전형적으로, 블라우티아(Blautia), 루미노코쿠스(Ruminococcus), 유박테리움(Eubacterium), 홀데마니아(Holdemania) 및 클로스트리디움(Clostridium) 속으로부터의 박테리아, 특히 루미노코쿠스 오베움(Ruminococcus obeum), 클로스트리디움 하테와이이(Clostridium hathewayi), 유박테리움 데스몰란스(Eubacterium desmolans), 도레아 롱기카테나(Dorea longicatena), 루미노코쿠스 락타리스(Ruminococcus lactaris) [블라우티아 프로둑타(Blautia producta)], 유박테리움 콘토르툼(Eubacterium contortum), 루미노코쿠스 파에시스(Ruminococcus faecis), 홀데마니아 필리포르미스(Holdemania filiformis), 클로스트리디움 소르델리(Clostridium sordelli) 종으로부터의 박테리아를 포함한다.
분변 미생물총 샘플은 유리하게는 분변 미생물총, 특히 혐기성 박테리아를 구성하는 박테리아의 생존율을 보존하도록 유의하면서 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 수단에 의해 수득 및 저장될 수 있다.
이러한 단계는 바람직하게는, 공여자 대상체로부터 대변 샘플을 취함으로써 수행된다. 사실, 대변 샘플은 공여자 대상체로부터의 분변 미생물총을 함유한다. 따라서, 방법은 분변 미생물총을 포함하는 적어도 하나의 대변 샘플을 공여자 대상체로부터 취하는 단계를 포함한다.
바람직하게는, 대변 샘플은 적어도 10 g의 중량을 갖는다.
분변 미생물총 샘플은 해동된 상태로 사용하기 위해 동결되거나, 또는 신선한 대변으로부터 준비될 수 있다. 신선한 대변과 동결된 샘플의 혼합물이 또한 가능하다.
특별한 실시양태에 따라서, i) 공여자 대상체로부터의 대변 샘플을, 동결 방지제 및/또는 벌킹제를 포함하는 식염수 수용액과 혼합하는 단계, 임의로 이어서 ii) 여과하는 단계, 그 후 iii) 저장을 위해 동결하는 단계로부터 해동에 의해 수득될 수 있는 샘플이 본 발명에 사용되며, 여기서 혼합 및 동결 단계는 바람직하게는, 혐기성 조건 하에 수행된다.
분변 미생물총 샘플의 제조를 위한 상기 방법은, 예를 들어, 특허 출원 WO2016/170285에 기재되어 있다.
이는 특히, 하기 단계:
a) 공여자 대상체로부터 적어도 하나의 분변 미생물총 샘플을 취하는 단계,
b) a)에서 수득된 상기 샘플을, 바람직하게는 샘플을 취한 후 5분 미만의 시간 제한 내에, 바람직하게는 산소에 대하여 밀폐된 수집 장치에 넣어두는 단계,
c) b)에서 수득된 샘플을, 적어도 하나의 동결 방지제 및/또는 벌킹제를 포함하는 적어도 하나의 식염수 수용액과 혼합하는 단계,
d) 임의로, c)에서 수득된 혼합물을, 특히 0.7 mm 이하, 바람직하게는 0.5 mm 이하의 직경의 공극을 포함하는 필터에 의해 여과하는 단계; 및
e) c) 또는 d)에서 수득된 혼합물을, 전형적으로 -15℃ 내지 -100℃, 바람직하게는 -60℃ 내지 -90℃의 온도에서 동결시킴으로써 저장하는 단계
를 포함할 수 있으며, 단계 b) 내지 e)는 바람직하게는 혐기적으로 수행된다.
일단 샘플 [a)에서 수득됨]을, 바람직하게는 산소에 대하여 밀폐된 수집 장치에 넣어둔 후, 이를 임의로, 최대 75시간의 기간 동안 33℃ 내지 40℃의 온도에서 인큐베이션할 수 있다. 바람직하게는, 이러한 인큐베이션 단계는 24시간 내지 73시간의 기간 동안 35℃ 내지 38℃의 온도에서 수행된다. 이상적으로, 이러한 단계는 72시간 동안 대략 37℃의 온도에서 수행된다. 또 다른 한편으론, 샘플을 임의로, 최대 75시간의 기간 동안 2℃ 내지 10℃의 온도에서 인큐베이션할 수 있다. 바람직하게는, 이러한 인큐베이션 단계는 24시간 내지 72시간의 기간 동안 4℃ 내지 8℃의 온도에서 수행된다.
이어서, 단계 c)가 수행된다: 이러한 단계는 b)에서 수득된 샘플을, 적어도 하나의 동결 방지제 및/또는 벌킹제를 포함하는 적어도 하나의 식염수 수용액과 혼합하는 것을 포함한다.
전형적으로, 식염수 수용액은 물 및 생리학상 허용되는 염을 포함한다. 전형적으로, 염은 클로라이드, 글루코네이트, 아세테이트 또는 탄산 수소 이온과의 칼슘, 나트륨, 칼륨 또는 마그네슘 염이다.
식염수 수용액은 또한 임의로, 적어도 하나의 항산화제를 포함할 수 있다. 항산화제는 특히, 아스코르브산 및 그의 염 (아스코르베이트), 토코페롤 (특히 -토코페롤), 시스테인 및 그의 염 형태 (특히 히드로클로라이드) 및 그의 혼합물로부터 선택된다.
바람직하게는, 식염수 수용액은 하기를 포함한다:
- 염화나트륨, 염화칼슘, 염화마그네슘, 염화칼륨, 소듐 글루코네이트 및 소듐 아세테이트로부터 선택된 적어도 하나의 염, 및
- 바람직하게는 L-아스코르브산 나트륨, 토코페롤, L-시스테인 히드로클로라이드 1 수화물 및 그의 혼합물로부터 선택된, 임의로 적어도 하나의 항산화제.
전형적으로, 염은 5 내지 20 g/L, 바람직하게는 7 내지 10 g/L의 농도로 식염수 수용액에 존재한다.
전형적으로, 항산화제는 용액의 총 용적에 대하여 0.3 내지 1 중량%의 양, 바람직하게는 용액의 총 용적에 대하여 0.4 내지 0.6 중량%의 양으로 식염수 수용액에 존재한다. 바람직하게는, 항산화제가 L-아스코르브산 나트륨과 L-시스테인 히드로클로라이드 1 수화물의 혼합물인 경우, L-아스코르브산 나트륨은 용액의 총 용적에 대하여 0.4 내지 0.6 중량%의 양으로 존재하고, L-시스테인 히드로클로라이드 1 수화물은 용액의 총 용적에 대하여 0.01 내지 0.1 중량%의 양으로 존재한다.
바람직하게는, 식염수 수용액은 또한, 적어도 하나의 동결 방지제를 포함한다. 동결 방지제는, 특히 얼음 결정의 형성으로 인해, 동결에 의해 야기된 손상으로부터 샘플을 보호하기 위해 사용되는 물질이다.
바람직하게는, 동결 방지제는 폴리올, 디사카라이드 내지 펜타사카라이드 (즉, 디사카라이드, 트리사카라이드, 콰드리사카라이드 및 펜타사카라이드), DMSO 및 그의 혼합물로부터 선택된다. 바람직하게는, 동결 방지제는 폴리올, 트리사카라이드 및 디사카라이드, DMSO 및 그의 혼합물로부터 선택된다. 보다 우선적으로, 식염수 수용액에 존재하는 동결 방지제는 디사카라이드 또는 트리사카라이드이다.
사용 가능한 폴리올 중에서, 특히 글리세롤, 만니톨, 소르비톨 및 또한 프로필렌 글리콜 또는 에틸렌 글리콜이 있다. 사용 가능한 디사카라이드 내지 펜타사카라이드 중에서, 동일하거나 또는 상이한 단위를 갖는 이량체, 삼량체, 사량체 및 오량체가 언급될 수 있으며, 상기 단위는 글루코스, 프룩토스, 갈락토스, 푸코스 및 N-아세틸뉴라민산으로부터 선택된다. 사용 가능한 디사카라이드 중에서, 특히 트레할로스 또는 그의 유사체 중 하나, 또는 사카로스가 있다. 최종적으로, DMSO, 또는 디메틸술폭시드가 표준 동결 방지제이다.
이들 동결 방지제는 단독으로 사용되거나 또는 혼합하여 사용될 수 있다.
전형적으로, 식염수 수용액에 존재하는 동결 방지제의 총 양은 용액의 총 용적에 대하여 3 내지 30중량%, 바람직하게는 용액의 총 용적에 대하여 4 중량% 내지 20중량%이다.
바람직하게는, 동결 방지제는 글리세롤, 만니톨, 소르비톨, DMSO, 프로필렌 글리콜, 에틸렌 글리콜, 트레할로스 및 그의 유사체, 사카로스, 갈락토스-락토스 및 그의 혼합물로부터 선택된다. 보다 우선적으로, 동결 방지제는 갈락토스-락토스 또는 트레할로스이다.
바람직하게는, 식염수 수용액은 적어도 하나의 벌킹제를 포함한다.
벌킹제는 바람직하게는, 전분 또는 잔사(fecula)의 부분 가수분해물로부터 선택된다. 전분, 특히 밀 또는 옥수수의 부분 가수분해물뿐만 아니라 잔사, 예를 들어 감자의 부분 가수분해물은 다량의 말토덱스트린을 포함한다. 말토덱스트린은 전분 또는 잔사의 부분 가수분해의 결과이며, 상이한 당 (글루코스, 말토스, 말토트리오스, 올리고사카라이드 및 폴리사카라이드)에 의해 구성되며, 그의 비율은 가수분해 정도의 함수로서 다양하다.
바람직하게는, 식염수 수용액에 존재하는 벌킹제는 말토덱스트린의 혼합물이며, 여기서 말토덱스트린의 양은 용액의 총 용적에 대하여 4 내지 20중량%이다.
바람직하게는, 식염수 수용액은 하기 둘 다를 포함한다:
- 상기 기재된 바와 같은, 즉 폴리올, 디사카라이드 내지 펜타사카라이드 (즉, 디사카라이드, 트리사카라이드, 콰드리사카라이드 및 펜타사카라이드), DMSO 및 그의 혼합물로부터 선택된 적어도 하나의 동결 방지제, 및
- 상기 기재된 바와 같은, 즉 전분 또는 잔사의 부분 가수분해물로부터 선택된 적어도 하나의 벌킹제; 바람직하게는 벌킹제는 말토덱스트린에 의해 구성된다.
바람직하게는, 이러한 경우에, 동결 방지제의 양은 용액의 총 용적에 대하여 3 내지 30중량%, 바람직하게는 용액의 총 용적에 대하여 4 중량% 내지 20중량%이고; 벌킹제, 바람직하게는 말토덱스트린의 양은 용액의 총 용적에 대하여 4 내지 20중량%이다.
b)에서 수득된 샘플을, 적어도 하나의 동결 방지제를 포함하는 적어도 하나의 식염수 수용액과 혼합하는 단계 c)는 균질한 혼합물을 수득하기 위해, 특히 혼합함으로써 수행될 수 있다.
바람직하게는, b)에서 수득된 샘플은 0.5 중량 : 10 용적 내지 2 중량 : 2 용적의 각각의 중량/용적 비로 상기 식염수 수용액과 혼합한다. 0.5 중량 : 10 용적과 동일한 샘플 : 용액 중량/용적 비는, 샘플이 0.5 중량 (예를 들어, 0.5 g) 대 용액의 10 용적 (예를 들어, 10 ml)으로 혼합된다는 것을 의미한다. 바람직하게는, 샘플 : 용액 중량/용적 비는 샘플 1 중량 대 용액 4 용적 (1 중량 : 4 용적)과 동일하다.
일단 이러한 단계가 수행되면, 임의의 단계 d)가 수행될 수 있다. 단계 d)는 c)에서 수득된 혼합물을, 특히 0.7 mm 이하, 바람직하게는 0.5 mm 이하의 직경의 공극을 포함하는 필터에 의해 여과하는 것을 포함한다. 이러한 여과는 거친 입자가 유지되고 관심 박테리아 (분변 미생물총을 구성함)가 여액에 남아 있게 한다.
이어서, 단계 c) 또는 d) 후, 후자가 이루어질 때, 수득된 혼합물을 -15℃ 내지 -100℃의 온도에서 동결시킴으로써 저장한다: 이것이 단계 e)이다. 바람직하게는, 동결 온도 (및 그에 따른 저장 온도)는 -60℃ 내지 -90℃이고; 보다 우선적으로 이는 대략 -80℃ 또는 대략 -65℃이다.
동결시키기 위해, 단계 c) 또는 d) 이후 및 단계 e) 이전에, 일정한 용적을 갖는 표본을 확보하기 위해, 혼합물을 미리 분취할 수 있다. 예를 들어, 50 ml, 100 ml, 150 ml, 또는 200 ml와 같은 용적을 갖는 표본을 수득하기 위해 분취를 수행한다. 바람직하게는, 100 ml와 같은 용적을 갖는 표본을 수득하기 위해 분취를 수행한다.
이러한 동결 및 저장 단계는 처리된 샘플을 적어도 2개월의 기간 동안 저장할 수 있게 한다. 이러한 방식으로 저장된 샘플은 해동 후에도 양질이다.
바람직하게는, 방법은 e)에서 수득된 동결된 샘플을 주위 온도까지 혐기성으로 해동시키는 단계 f)를 포함한다. 이러한 해동 단계 f)는 동결된 샘플을 35℃ 내지 40℃, 예를 들어 37℃의 온도에서 수 분의 기간 (전형적으로 2분 내지 10분) 동안 수욕에 넣어둠으로써 수행될 수 있다. 해동 단계 f)는 또한, 동결된 샘플을 2℃ 내지 10℃, 예를 들어 4℃ 내지 8℃의 온도에서 10 내지 20시간의 기간 동안 넣어둠으로써 수행될 수 있다.
이어서, 이로써 주위 온도에서 해동된 샘플을 수용자 환자에게 투여할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 대변은 배출 후 6시간 내에 미생물 보안국에서 처리된다. 체중계, 블렌더, 멸균 용기 및 멸균 의료 장비 (주사기, 필터 등)를 사용하여 공여자로부터의 대변을 칭량하고 이를 식염수 냉동 보존 용액 (글리세롤 + NaCl 0.9%, 10/90 V/V)과 혼합한다. 균질화는 50 내지 100 g의 대변에 대해 500 ml에서 수행된다. 수득된 현탁액을 멸균 드레싱 거즈가 있는 깔대기 및 멸균 용기를 사용함으로써 여과하여, -80℃ 하에 동결하기 전에 모든 고형 잔류물을 제거한다.
분변 이식 전날에, 동결된 용액을 밤새 해동하기 위해 냉장고 (4 내지 8℃)에 넣어둔다. 분변 이식 당일에는, 용액을 관장 백에 넣어둔다. 그 재료를 사용할 준비가 되었다.
또 다른 실시양태에서, 신선한 대변, 즉 동결되지 않은 대변을 사용하는 것이 가능하다.
바람직한 실시양태에서, 대변은 배출 후 6시간 내에 미생물 보안국에서 처리된다. 체중계, 블렌더, 멸균 용기 및 멸균 의료 장비 (주사기, 필터 등)를 사용하여 공여자로부터의 대변을 칭량하고 이를 멸균 식염수 용액 (NaCl 0.9%, 10/90 V/V)과 혼합한다. 균질화는 50 내지 100 g의 대변에 대해 500 ml에서 수행된다. 수득된 현탁액을 멸균 드레싱 거즈가 있는 깔대기 및 멸균 용기를 사용함으로써 여과하여 모든 고형 잔류물을 제거한다. 이어서, 용액을 관장 백에 넣어둔다. 그 재료를 사용할 준비가 되었다.
치료 적응증
수용자 환자에서 동종이계 조혈 줄기 세포 이식 (HSC)으로부터 비롯된 감염성 또는 비-감염성 합병증의 예방 및/또는 치료 방법이 본원에 기재되어 있으며, 이는 상기 수용자 환자에게 분변 미생물총 샘플을 투여하는 것을 포함하며, 상기 분변 미생물총 샘플 및 상기 조혈 줄기 세포는 바람직하게는, 하나의 동일한 공여자 대상체로부터 유래된다. "동종이계 HSC 이식으로부터 비롯된 감염성 또는 비-감염성 합병증"은 특히, 환자의 면역 방어를 감소시키는 컨디셔닝인 동종이계 HSC 이식을 위한 환자의 컨디셔닝에 기인한 합병증뿐만 아니라 동종이계 이식 자체에 기인한 합병증, 즉 특히 급성 및/또는 만성 형태의 이식편 대 숙주 (GVH) 질환을 의미한다.
또한, 조혈 줄기 세포 이식 (HSC)에 의한 치료를 필요로 하는 환자를 HSC에 의해 치료하는 방법이 또한 기재되며, 여기서 HSC 이식 전 및/또는 이식 후에, 적합한 양의 분변 미생물총 샘플이 상기 환자에게 투여되고, 상기 분변 미생물총 샘플은 바람직하게는, HSC와 동일한 하나의 공여자 개체로부터 유래된다.
용어 "치료"는 회복 또는 완화 치료를 발생시키고, 장애의 증상 또는 이로 인해 유발된 통증을 개선, 제거, 감소 및/또는 안정화시키는 치료적 처치를 포함한다.
용어 "예방"은 장애의 발병률 또는 발병 위험을 감소 및/또는 지연시키는 치료에 관해서 장애를 예방시켜 주는 처치에 동등하게 널리 상응하는 예방적 처치에 상응한다.
본 발명의 맥락에서, 분변 샘플의 이식은 HSC 이식 후 하나 이상의 감염성 또는 비-감염성 합병증이 발생할 수 있는 수용자 환자의 위험을 감소시키고/시키거나 HSC 이식 후 발생하는 합병증 중 하나 이상을 개선시키거나 또는 치유한다.
분변 미생물총 샘플이 HSC와 동일한 공여자로부터 유래된다는 사실은 HSC 이식 후에 분변 미생물총 이식 (FMT)이 발생하는 경우에, 환자에 의한 FMT의 더 나은 내성을 허용한다. 사실, 이전 HSC 이식 동안, 공여자의 면역 세포가 수용자 환자에게 전달된다. 따라서 FMT 동안의 면역 반응은 수용자 환자의 몸에 이러한 동일한 공여자로부터의 면역 세포가 존재한다는 사실에 의해 감소된다.
HSC 이식 전에 수행된 FMT는 내성 박테리아, 예를 들어 시트로박터 프레운디이(Citrobacter freundii) 또는 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)에 의한 임의의 감염을 감소시키거나 또는 제거하는 것을 가능하게 하므로, 후보 환자에게 HSC 이식 및 그에 대한 사전 컨디셔닝 전에 수행될 수 있다.
또한, 이는 HSC 이식을 위해 후보 환자의 장내 미생물총을 교정시켜 주므로, HSC 이식 후에 발생할 수 있는 합병증의 발병률을 감소시킬 수 있다.
본 발명은 또한, 감염과 관련한 항생제 치료 과정을 감소시켜 줄 수 있다.
감염성 합병증은 특히, 클로스트리디움(Clostridium) 또는 엔테로코쿠스(enterococcus)에 의한 감염, 특히 반코마이신-내성 엔테로코쿠스 (VRE) 또는 고전적 항생제에 대해 내성인 임의의 다른 병원체에 의한 감염이다.
클로스트리디움 디피실레(Clostridium difficile) 감염, 특히 재발성 감염이 특히 표적이 된다. 감염성 합병증을 일으킬 수 있는 다른 기회 감염성 종 중에, 이. 페칼리스(E. fecalis), 피. 미라빌리스(P. mirabilis) 또는 이. 콜라이(E. coli)가 언급될 수 있다.
가장 널리 공지된 비-감염성 합병증은 이식편 대 숙주 질환 (GVH)이다. 급성 GVH는 일반적으로, HSC 이식 후 6개월 이내에 발생하며 공여자와 수용자 간의 유전적 불균형에 따라 증례의 10 내지 80%의 빈도를 가질 수 있다. 만성 GVH는 일반적으로, 이식 후 100일이 지나 발생할 때 또는 또한 이러한 GVH의 특정 임상 특징의 함수로서 그와 같이 지칭된다.
다른 합병증은 이식 후 장질환 및 다른 소화기 합병증을 포함한다.
또 다른 측면에 따르면, 암을 앓고 있으며 동종이계 조혈 줄기 세포 이식을 받거나 또는 받았던 수용자 환자에서 암을 치료하는 방법이 기재되며, 이러한 방법은 분변 미생물총 샘플을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하고, 상기 분변 미생물총 샘플 및 상기 조혈 줄기 세포는 바람직하게는, 하나의 동일한 공여자 대상체로부터 유래된다.
용어 "치료하다" 또는 "치료"는 암의 진행을 늦추거나, 완전히 완화시키거나, 또는 재발 위험을 감소시키는 것을 포함한다.
이는 특히, 상기 기재된 바와 같은 고형 종양 또는 악성 혈액병증과 관련될 수 있다.
실제로, 동일한 공여자로부터의 분변 미생물총 이식 및 HSC 이식이 잔여 암세포의 제거 및 그에 따른 암의 지속적인 완화와 관련하여 상승적 효과를 제공할 수 있다. 사실, HSC는 공여자의 환경과 이미 접촉한 적이 있었던 면역적격성 세포 (자연 살해 세포, 특히 림프구 B 및 T)를 함유하고 있다. 따라서 이들 HSC는 공여자의 (장내 균총의) 공생 박테리아의 항원에 의해 미리 활성화된 림프구 및 다른 특이적 면역 이펙터를 함유한다. 특별한 작용 메커니즘에 얽매이고자 한 것은 아니지만, 본 발명자들은 수용자 내로 이식된 이들 미리 활성화된 면역 이펙터가 상기 이식된 박테리아에 의해 재자극된다고 가정하고 있다.
한편으로는 인간 조혈 줄기 세포 (HSC)를 포함하고 다른 한편으로는 분변 미생물총 샘플을 포함하는 조합 제품 ("부분들의 키트")이 또한 본원에 기재되어 있으며, 상기 HSC와 분변 미생물총 샘플은 바람직하게는, 상기 기재된 바와 같은 HSC 이식에 의한 치료에서 동시에 또는 시간 경과에 따라 엇갈리게 조합 사용하기 위하여 하나의 동일한 공여자 개체로부터 유래된다.
한편으로는 인간 조혈 줄기 세포 (HSC)를 적합한 패키징 내에 포함하고 다른 한편으로는 분변 미생물총 샘플을 적합한 패키징 내에 포함하는 키트가 또한 제공될 수 있으며, 상기 HSC와 분변 미생물총 샘플은 바람직하게는, 하나의 동일한 공여자 개체로부터 유래된다. 한편으로는 HSC를 취하고 패키징하며 다른 한편으로는 분변 미생물총 샘플을 취하고 패키징하는 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있으며, 특히 전술되어 있다. "키트"는 본 발명에 따라 그것을 구성하는 두 요소가 조합 용도를 위해 연합되고, 하나의 동일한 환자에서 이들을 사용하기 위해 함께 또는 별도로 저장될 수 있다는 것을 의미한다.
프로토콜
분변 미생물총 샘플은 상기 HSC 이식 전 또는 후에 수용자 환자의 소화관에 투여 (용어 "이식"도 사용됨)될 수 있다.
환자에게 분변 미생물총 샘플을 단일 투여하거나, 또는 예를 들어, 4 내지 8일 또는 2 내지 8주 간격으로 반복 투여할 수 있다.
특별한 실시양태에서, 분변 미생물총 샘플은 상기 HSC 이식 후 1주 내지 2년, 바람직하게는 1주 내지 1년, 보다 바람직하게는 1주 내지 6개월, 보다 더 바람직하게는 1주 내지 3개월에, 임의로 반복적으로, 수용자 환자의 소화관에 이식된다.
또 다른 특별한 실시양태에서, 분변 미생물총 샘플은 상기 HSC 이식 전 1주 내지 12개월, 바람직하게는 1주 내지 8개월, 바람직하게는 1주 내지 6개월, 보다 바람직하게는 1주 내지 4개월, 바람직하게는 1주 내지 3개월, 또는 1주 내지 8주, 바람직하게는 1주 내지 6주에, 임의로 반복적으로, 수용자 환자의 소화관에 이식된다.
일반적으로, 투여되는 양은 체내 이식된 분변 미생물총의 박테리아 및 다른 미생물에 의한 소화관의 콜로니화를 허용하는 양이다.
투여되는 양은 전형적으로, 상기 기재된 바와 같이 분변 샘플로부터 제조된 식염수 용액의 100 ml 내지 1 L, 바람직하게는 대략 500 ml를 차지한다.
바람직하게는, 분변 미생물총 샘플은 샘플 g 당 1010 내지 1013개의 박테리아를 포함한다.
분변 미생물총 샘플의 이식은 직장 경로를 통한 투여, 경구 경로 (예를 들어 동결 건조된 형태 또는 캡슐의 형태)를 통한 투여, 또는 미생물총의 장관 내로의 이동을 허용하는 임의의 방법에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 관장 백은 이러한 목적을 위해 사용될 수 있다. 분변 미생물총 샘플의 이식은 결장 검사를 위해 정상적으로 사용되는 장치인 결장경을 사용함으로써 수행될 수도 있다.
하기 실시예는 본 발명의 범위를 제한하지 않고 본 발명을 예시한다.
실시예 1: 급성 골수성 백혈병을 앓고 있는 여성 환자에서 HSC 이식 후 동종 분변 미생물총의 이식
프로토콜:
환자는 첫 번째 HSC 동종 이식 후 재발한, 급성 골수성 백혈병을 앓고 있는 16세 소녀이다.
이 환자는 화학요법 약물의 조합을 포함하여 강도가 감소된 컨디셔닝 후, 그녀의 어머니로부터 유래된 두 번째 HSC 이식을 받았다. 이 환자에게 이식 전 6일에 티오테파 5 mg/kg을, 이어서 이식 전 5일 내지 2일에 플루다라빈 40 mg/m2/일을, 그리고 이식 전 5일 내지 4일에 부술판을 3.2 mg/kg/일로 제공하였다. 최종적으로, 이식 후 3일 내지 5일에 환자에게 50 mg/kg/일의 시클로포스파미드를 제공하였다.
환자는 이식 직후에 급성 이식편 대 숙주 반응을 일으키지 않았고, 이식 후 83일에 시클로스포린-A 및 미코페놀레이트 모페틸에 기초한 그녀의 면역억제제 치료를 중단할 수 있었다.
그러나, 이식 후 첫 1개월 동안에는 여러 번의 박테리아성 합병증 (패혈증, 다중 내성 박테리아)이 관찰되어 광범위한 스펙트럼의 항생제 사용이 필요하였다. 이식 후 1개월에, 환자는 클로스트리디움 디피실레 감염의 첫 번째 에피소드를 나타냈는데, 이는 메트로니다졸로 성공적으로 치료되었다. 이식 후 2.5개월에, 반코마이신-내성 엔테로코쿠스 (VRE)의 존재가 직장 면봉채취법에 의해 검출되었다. 메트로니다졸 및 피닥소미신에 의한 치료에 내성을 보인 클로스트리디움 디피실레 감염의 재발로 인해, HSC 이식 후 3개월 만에 첫 번째 분변 미생물총 이식 (HSC 공여자이기도 한 환자의 어머니로부터 유래됨)을 수행하였다.
어머니로부터의 대변은 식염수 냉동 보존 용액 (글리세롤 + NaCl 0.9%, 10/90 V/V)과 미리 혼합시켜 두었다. 균질화는 50 내지 100 g의 대변에 대해 500 ml에서 수행되었다. 수득된 현탁액을 멸균 드레싱 거즈가 있는 깔대기 및 멸균 용기를 사용함으로써 여과하여, 모든 고형 잔류물을 제거하였다. 그 후, 용액을 관장 백에 넣어두어, 사용할 준비가 되었다.
결과:
위장관 증상은 현저하게 감소하였고, 검사 결과 클로스트리디움 디피실레 감염으로부터 회복되었고 반코마이신-내성 엔테로코쿠스가 근절되었다.
HSC 이식 후 6개월에, 환자는 광범위한 스펙트럼의 베타-락타마제를 생산하는 병원성 박테리움인 클렙시엘라 뉴모니아에(Klebsiella pneumoniae)로 인한 패혈증과 연관된 범혈구 감소증을 나타냈고, VRE 보균자 상태를 보였다. 또한 환자는 클로스트리디움 감염 또는 위장 이식편 대 숙주 반응을 명확하게 보여주지 않으면서 복통과 상당한 설사를 나타냈다.
동일한 공여자 (어머니)로부터의 두 번째 분변 미생물총 이식 (FMT)이 VRE 콜로니화를 치료하기 위해 환자에게 실시되었다. 이러한 FMT 후, 임상 징후는 개선되었고 VRE는 더 이상 검출 가능하지 않았다.
HSC 이식 후 12개월에 직장 면봉채취법을 실시한 결과, 다중 내성 박테리아 (특히 클로스트리디움 또는 VRE)가 검출되지 않았다.
HSC 이식 후 3년에, 환자는 급성 백혈병으로부터 완전히 완화되었다.
실시예 2: 급성 림프모구성 백혈병을 앓고 있는 여성 환자에서 HSC 이식 후 동종 분변 미생물총의 이식
환자는, 티오테파로의 순차적 컨디셔닝과 함께 그녀의 어머니 (동일단배체)로부터 HSC 이식을 받았을 때, 화학요법의 여러 과정을 거친 후에 재발한 급성 림프모구성 백혈병을 앓고 있는 19세 소녀였다 (이후에 둘러리(Dulery) 등의 문헌 (상기 참조)에 기재된 바와 같음).
이러한 이식 후, 그녀에게 급성 GVH가 발생하였고 (치료됨), 그 다음 만성 GVH가 발생하였다.
HSC 이식 후 4개월에, 그녀는 반코마이신-내성 엔테로코쿠스 (VRE)에 대해 양성인 것으로 검출되었다.
HSC 후 6개월 및 8개월에, 그녀는 그녀의 어머니로부터 분변 미생물총 이식을 또한 받았으며, 샘플은 실시예 1에 기재된 바와 같이 준비되었다.
직장 면봉채취법에 의해 다중 내성 박테리아가 연속적으로 검출되지 않았다.
GVH의 징후는 HSC 이식 후 2년에 환자의 백혈병이 재발했을 때 개선 프로세스에 있었다.
실시예 3: 급성 수지상 세포 백혈병을 앓고 있는 남성 환자에서 HSC 이식 전 동종 분변 미생물총의 이식
급성 수지상 세포 백혈병으로 진단된 47세의 환자는 화학요법 (유도 단계에서 메토트렉세이트, 이다루비신 및 아스파라기나제 조합, 이어서 2개의 통합 단계)을 받았다. 이 환자는 HSC 이식에 대한 금기 사항일 수 있는 시트로박터 프레운디이에 대해 양성 반응을 보였다.
그는 그의 HLA-동일한 여동생로부터 유래된 분변 미생물총 이식을 받았는데, 이는 시트로박터 프레운디이 콜로니화를 해결하여 환자가 HSC 이식을 받을 수 있게 하였다. HSC 이식 (또한 그의 여동생으로부터 유래됨)은 티오테파, 부술판 및 플루다라빈을 포함한 컨디셔닝 후 9일이 지난 다음 수행되었다.
여동생으로부터의 대변은 실시예 1에서 설명된 바와 같이 분변 미생물총 이식을 위해 준비되었다.
환자는 HSC 이식 직후 어떠한 급성 이식편 대 숙주 반응도 일으키지 않았으며 동종 이식 후 4 개월 만에 시클로스포린에 근거한 그의 면역억제제 치료를 중단할 수 있었다.
박테리아성 감염 합병증 (반코마이신-내성 스타필로코쿠스 감염 (VRSA) 포함)은 제한되고 제어되었다.
이식 후 1년, 환자는 완화되고 있다.
실시예 4: 급성 골수성 백혈병을 앓고 있는 남성 환자에서 HSC 이식 전 비-동종 분변 미생물총의 이식
급성 골수성 백혈병을 앓고 있는 이 64세의 환자는 처음에 2가지 라인의 화학요법으로 치료받았다.
화학요법의 유도 치료 동안, 이 환자에게 슈도모나스 아에루기노사로부터의 중증의 패혈증이 발생하였다.
분변 미생물총 이식은 실시예 1의 프로토콜에 따라 제조된, 그의 딸로부터의 대변으로부터 수행되었으며, 이는 다중 내성 병원체의 음화를 허용하였다.
HLA-동일한 공여자로부터의 말초 줄기 세포의 동종 이식은 주요 감염성 에피소드의 부재 하에 41일 후, 및 부술판 및 플루다라빈으로의 컨디셔닝 후에 수행되었다.
이식 후 급성 소화 GVH는 관찰되지 않았다.
환자는 완화 상태에 있다 (HSC 이식 후 2년).
실시예 5: 급성 골수성 백혈병을 앓고 있는 남성 환자에서 HSC 이식 전 비-동종 분변 미생물총의 이식
이 42세 환자는 첫 번째 화학요법 라인에 대해서는 내성을 보였지만 두 번째 화학요법 라인에는 반응하는 급성 골수성 백혈병을 앓고 있었다.
이 환자는 연관된 전신 감염성 합병증 없이 다중 내성 슈도모나스 아에루기노사 콜로니화를 나타냈지만, HSC 동종 이식과 그에 따른 면역억제 상태의 관점에서 그의 여동생으로부터 분변 미생물총 이식을 수행하기로 결정되었다. 이러한 FMT는 실시예 1의 프로토콜에 따라 수행되었다. 46일 후에, 및 티오테파로의 순차적 컨디셔닝 후에 (둘러리 등의 문헌 (상기 참조)에 기재된 바와 같음), 이 환자는 그의 동일단배체 형제로부터 HSC 이식을 받을 수 있었다.
이식 후 특별한 합병증이 관찰되지 않았다 (GVH도 없고 감염도 없었다).
그러나, 이 환자는 백혈병이 재발하여 HSC 이식 후 11개월 만에 사망하였다.
실시예 6: 급성 골수성 백혈병을 앓고 있는 여성 환자에서 HSC 이식 전 비-동종 분변 미생물총의 이식
이 45세의 환자는 급성 골수성 백혈병 고위험군으로 진단받았고 모리셔스(Mauritius)에서 2가지 라인의 화학요법으로 치료받았다.
그녀는 그녀의 자매로부터 HLA-동일한 HSC 동종 이식을 받기 위해 프랑스에 도착하였다.
이식 전 평가를 수행하고 여러 가지 심폐 동반 질환의 문제를 해결하기 위한 입원 기간 동안, 직장 면봉채취법시 내성 시트로박터 프레운디이가 검출되었다. 이와 동시에 상기 환자는 내성 클렙시엘라 뉴모니아에에 의해 콜로니화되었다는 것에 주목해야 한다.
분변 미생물총 이식 (그녀의 남편으로부터 유래되는, 실시예 1에 기재된 프로토콜에 따르는 신선한 대변과 동결된 대변의 혼합물)을 직장으로 수행하였는데, 이는 시트로박터 프레운디이 콜로니화를 해결하여 환자가 16일 후에 HSC 이식을 받을 수 있게 하였다.
환자는 이식 후 무형성증 기간 동안 주요 감염성 합병증을 나타내지 않았다는 것에 주목해야 한다. 또한 이식 D60까지 검출 가능한 클렙시엘라 뉴모니아에가 후속 직장 면봉채취법에서 더 이상 검출되지 않았다는 것에 주목해야 한다.
HSC 이식 후 환자에게 GVH가 발생하지 않았다 (3개월 추적 관찰).

Claims (15)

  1. 수용자 환자에서 동종이계 조혈 줄기 세포 (HSC) 이식으로부터 발생하는 이식편 대 숙주 (GVH) 질환의 예방에 사용하기 위한 분변 미생물총을 포함하는 약학적 조성물로서, 상기 분변 미생물총 조성물은 HSC 이식 전에 투여되고, 여기서 약학적 조성물은 상기 HSC 이식 1주 내지 12개월 전에 상기 HSC 이식 전의 수용자 환자의 소화관에서 한 번 또는 반복적으로 이식되는 것이며, 수용자 환자는 악성 혈액병증을 앓고 있는 것인 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 분변 미생물총 조성물 및 상기 조혈 줄기 세포가 하나의 동일한 공여자 대상체로부터 유래되는 것인, 분변 미생물총을 포함하는 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 HSC 이식 1주 내지 8개월 전에 상기 HSC 이식 전의 수용자 환자의 소화관에서의 상기 조성물의 이식에 의해, 한 번 또는 반복적으로 사용하기 위한, 분변 미생물총을 포함하는 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 HSC 이식 1주 내지 6개월 전에 상기 HSC 이식 전의 수용자 환자의 소화관에서의 상기 조성물의 이식에 의해, 한 번 또는 반복적으로 사용하기 위한, 분변 미생물총을 포함하는 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 HSC 이식 1주 내지 4개월 전에 상기 HSC 이식 전의 수용자 환자의 소화관에서의 상기 조성물의 이식에 의해, 한 번 또는 반복적으로 사용하기 위한, 분변 미생물총을 포함하는 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 HSC 이식 1주 내지 3개월 전에 상기 HSC 이식 전의 수용자 환자의 소화관에서의 상기 조성물의 이식에 의해, 한 번 또는 반복적으로 사용하기 위한, 분변 미생물총을 포함하는 약학적 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 HSC 이식 1주 내지 8주 전에 상기 HSC 이식 전의 수용자 환자의 소화관에서의 상기 조성물의 이식에 의해, 한 번 또는 반복적으로 사용하기 위한, 분변 미생물총을 포함하는 약학적 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 i) 공여자 대상체로부터의 대변 샘플을, 동결 방지제, 벌킹제, 또는 동결 방지제 및 벌킹제를 포함하는 식염수 수용액과 혼합하는 단계, 그 후 iii) 저장을 위해 동결하는 단계로부터 해동에 의해 수득될 수 있는 것인, 분변 미생물총을 포함하는 약학적 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 단계 iii) 전에 단계 i)이 ii) 여과로 이어지는 것인, 분변 미생물총을 포함하는 약학적 조성물.
  10. 제8항에 있어서, 혼합 및 동결 단계는 혐기성 조건 하에 수행되는 것인, 분변 미생물총을 포함하는 약학적 조성물.
  11. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 직장 경로를 통한 또는 경구 경로를 통한 투여에 의해 사용하기 위한, 분변 미생물총을 포함하는 약학적 조성물.
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