KR102490408B1 - Health food composition for strengthening immunity customized for individual and disease prevention and slug breeding method for the same - Google Patents

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Abstract

본 발명은 우리가 섭취하는 천연물에 대하여 개인별로 면역력 증진에 미치는 영향을 측정하여 개인별로 면역력 증진에 효과가 있는 천연물을 선별하고 이 선별된 천연물을 굼벵이 사료로 제조하여 이 사료를 이용하여 사육된 굼벵이를 이용하는 경우 굼벵이를 이용한 개인별 맞춤형 면역 증진용 건강식품 조성물에 관한 것으로서, a) 개인의 혈액과 천연물 소재를 이용하여 천연물 소재가 없을 때의 면역력과 천연물 소재를 첨가하였을 때의 면역력 변화를 비교하여 개인 맞춤형 면연력 증진 천연물을 탐색하는 천연물 탐색 단계: b) 상기 탐색한 천연물을 15분간 고압멸균하고 냉각 후, 유산균을 상기 고압 멸균물의 중량 대비 5중량부가 되도록 투입하여 37℃에서 7일간 발효처리하여 얻은 고상 발효물을 100℃에서 30분간 다시 스팀살균처리하여 후 발효를 억제시켜 굼벵이 사료를 제조하는 굼벵이 사료 제조 단계; 및 c) 상기 제조된 사료를 이용하여 굼벵이를 사육하는 단계를 포함하는 개인별 맞춤형 면역 증진 건강식품을 제조하기 위한 굼벵이 사육 방법 및 이 방법에 의해 사육된 굼벵이를 이용한 건강식품 조성물을 제공한다.The present invention measures the effect of the natural products we ingest on immunity enhancement for each individual, selects natural products effective for enhancing immunity for each individual, manufactures the selected natural products as slug feed, and uses this feed to grow slugs It relates to a health food composition for personalized immunity enhancement using slugs. Natural product search step of searching for a customized immunity enhancing natural product: b) After sterilizing the searched natural product under high pressure for 15 minutes and cooling it, lactic acid bacteria were added in an amount of 5 parts by weight based on the weight of the high-pressure sterilized product and fermented at 37 ° C for 7 days. A slug feed preparation step of preparing a slug feed by suppressing post-fermentation by steam sterilizing the solid fermented product at 100 ° C. for 30 minutes; and c) breeding slugs by using the prepared feed.

Description

개인별 맞춤형 면역력 강화 및 질병 예방을 위한 건강식품 조성물 및 이를 위한 굼벵이 사육 방법{Health food composition for strengthening immunity customized for individual and disease prevention and slug breeding method for the same}Health food composition for strengthening immunity and preventing disease customized for each individual and method for breeding slugs for the same {Health food composition for strengthening immunity customized for individual and disease prevention and slug breeding method for the same}

본 발명은 우리가 섭취하는 천연물에 대하여 개인별로 면역력 증진에 미치는 영향을 측정하여 개인별로 면역력 증진에 효과가 있는 천연물을 선별하고 이 선별된 천연물을 굼벵이 사료로 제조하였고 이 사료를 이용하여 사육된 굼벵이를 이용한 개인별 맞춤형 면역 증진용 건강식품 조성물에 관한 것이다.The present invention measures the effect of the natural products we ingest on immunity enhancement for each individual, selects natural products effective for enhancing immunity for each individual, manufactures the selected natural products as slug feed, and slugs raised using this feed It relates to a health food composition for personalized immunity enhancement using.

면역계는 자연저항, 비특이성 면역체계 및 특이성 면역체계로 구분할 수 있다. 자연저항(1차 방어선)이란 미생물을 위시한 모든 침입자들을 그들의 종류에 관계없이 막아내는 해부생리학적 요소들을 말하며, 비특이적 면역(2차 방어선)은 자연저항을 돌파하여 체내로 들어온 침입자들을 제거하는 식세포로 구성된 방어체계를, 그리고 특이성 면역계(3차 방어선)는 림프구들로 구성된 면역체계를 말하는데, 이중 특이성 면역계는 기억능 그리고 자기와 비자기를 구분할 수 있는 능력을 지닌 고도로 발달한 면역체계이다.The immune system can be divided into natural resistance, non-specific immune system and specific immune system. Natural resistance (first line of defense) refers to the anatomical and physiological factors that block all invaders, including microorganisms, regardless of their type, and non-specific immunity (second line of defense) is phagocytes that break through natural resistance and eliminate invaders entering the body. The bispecific immune system is a highly developed immune system with memory and the ability to distinguish between self and nonself.

백혈구는 2차 또는 3차 방어선을 구성하여 1차 방어선을 돌파하여 체내에 들어온 이물을 담당하게 되며, 세균, 바이러스 감염 또는 염증 반응 시, 대식세포 및 림프구 활성의 조절은 의약품의 치료 효과의 결정에 있어서 중추적인 역할을 한다.Leukocytes form the 2nd or 3rd line of defense and break through the 1st line of defense to take charge of foreign substances that enter the body. In the event of bacterial or viral infection or inflammatory response, the regulation of macrophage and lymphocyte activity plays a role in determining the therapeutic effect of medicines. plays a pivotal role in

또한, 대식세포(Macrophage)는 다양한 기능을 가진 세포로 산화적 스트레스 상황에서 여러 가지 사이토카인(cytokine)과 일산화산소(NO)를 생성하여 면역체계에서 중요한 역할을 한다.In addition, macrophages are cells with various functions and play an important role in the immune system by producing various cytokines and oxygen monoxide (NO) under oxidative stress.

상기 대식세포는 항원을 제시하거나(antigen-presenting), 종양을 없애거나(tumoricidal) 미생물 세포를 죽이는(microbicidal) 세포로서, 세포매개(cell-mediated) 또는 체액성 면역(humoral immunity)에 중심적인 역할을 하는 조절세포로, 활성화된 대식세포에서 생산되는 NO는 비특이적 숙주 방 어기작인 대식작용, 그리고 세균 및 암세포의 증식억제활성을 보인다. 특히, 대식세포에서 리포다당류(Lipopolysaccharide; LPS), 사이토카인, TNF-α와 같은 자극에 의해 발현되는 iNOS는 장시간 동안 다량의 NO를 생산하여, NFκB 활성을 촉진시키는 것으로 알려져 있다. 활성화된 대식세포에 의한 슈퍼옥사이드 음이온(superoxide anion, O2-), 과산화수소(hydrogen peroxide, H2O2)와 같은 활성산소종(reactive oxygen species; ROS) 및 일산화질소(nitric oxide, NO)의 생산은 비특이적 면역에서 중요한 세포독성 및 세포활성 억제 기작이다.The macrophages are antigen-presenting, tumoricidal, or microbicidal cells that play a central role in cell-mediated or humoral immunity. NO produced from activated macrophages exhibits phagocytosis, a non-specific host defense mechanism, and inhibits proliferation of bacteria and cancer cells. In particular, iNOS, which is expressed by stimuli such as lipopolysaccharide (LPS), cytokines, and TNF-α in macrophages, is known to promote NFκB activity by producing a large amount of NO for a long time. Reactive oxygen species (ROS) such as superoxide anion (O 2 -), hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) and nitric oxide (NO) by activated macrophages production is an important cytotoxic and cytostatic mechanism in non-specific immunity.

면역활성과 관련하여, 암 환자는 방사성 치료 또는 화학치료와 같은 항암 치료 시 조혈모세포들이 손상을 입게 되어 조혈 세포와 면역세포들이 감소하고, 이로 인해 종종 조혈과 면역작용의 형성에 장애가 발생한다. 최근에는 이러한 암 환자의 항암 치료에 의한 면역활성의 저하뿐만 아니라, 특정 질환이 없는 일반인도 환경적인 이유나 생활 습관에 의하여 면역력이 약화하는 것으로 보고되고 있다.Regarding immune activity, in cancer patients, hematopoietic stem cells are damaged during anticancer treatment such as radiation therapy or chemotherapy, resulting in a decrease in hematopoietic cells and immune cells, which often causes disorders in hematopoiesis and immune function formation. Recently, it has been reported that not only the decrease in immune activity of cancer patients due to anticancer treatment, but also the weakening of immunity due to environmental reasons or lifestyle in general people without specific diseases.

이러한 사정으로 인하여, 현재 전 세계적으로 면역력 증강을 통해 건강을 증진시키고자 많은 식물 추출물이 약는 건강기능성 식재나 의약품 또품으로도 사용되고 있다.Due to these circumstances, many plant extracts are currently used as health functional foods or medicines to improve health through immunity enhancement worldwide.

이러한 면역력을 증강시킬 수 있는 식물 추출물의 경우, 세균성 감염이나 바이러스 감염 또는 암세포에 의한 질환의 치료, 예방 또는 개선을 가능하게 하며, 이러한 효과는 항균 작용, 항바이러스 작용에 의한 것보다는 체내의 면역기능 개선에 의한 것이므로, 부작용 등의 문제로부터 자유로울 수 있는 장점이 있다. In the case of plant extracts capable of enhancing such immunity, it is possible to treat, prevent or improve diseases caused by bacterial or viral infections or cancer cells, and these effects are more effective in the body's immune function than by antibacterial or antiviral actions. Since it is by improvement, there is an advantage in being free from problems such as side effects.

따라서, 상대적으로 안전성에 대한 문제가 발생할 가능성을 최소로 할 수 있을 것으로 기대되는 천연물 중에서 면역증강 효과를 갖는 물질을 선택하여, 면역력 증강에 대한 효과는 높고 부작용은 미약한 면역력 증강 성분을 함유하는 조성물의 개발이 요구되고 있다.Therefore, a composition containing an immune-enhancing component with high immunity-enhancing effect and weak side effects by selecting a substance having an immune-enhancing effect among natural products expected to relatively minimize the possibility of safety problems. development is required.

한편, 식용곤충의 하나인 흰점박이꽃무지는 민간 및 동의보감 등의 전통 한방의서에서 "제조" 또는 "굼벵이"라는 속명으로 불리고 있는 딱정벌레목, 풍뎅이과, 꽃무지아과에 속하며, 몸길이 17~22㎜, 폭 12~1 ㎜의 초식성 곤충으로서, 몸은 진한 구리빛이고 광택이 있으며 황백색 무늬가 흩어져 있다. 우리나라를 비롯하여 중국, 일본 및 시베리아 동부 지역에 서식하며, 4월에서 10월에 걸쳐 1 내지 2년에 1회 발생한다고 알려져있다(고천[古川] 등, 원색곤충백과 도감, 집앙사[集英社], 동경[東京], 573-574(1977); 장지이[張芝利], 중국경제곤충지 28책, 초시목, 중국과학원 중국동물지 편찬위원회, 과학출판사(1984)). 흰점박이꽃무지의 유충은 크기에 따라 1~3령으로 분류하는데, 3령 유충은 평균 머리폭이 4.3~4.5 ㎜ 전후가 되며, 몸길이는 25~37㎜이다. 이 시기의 유충의 몸은 유백색이며 전체에 황색의 짧은 털들이 촘촘하게 나있다. 몸의 크기에 비해 머리 크기가 작고 다리가 발달되지 않아 이동 시 등을 이용하여 이동한다.On the other hand, white-spotted flower radish, one of the edible insects, belongs to the order Coleoptera, chaferidae, and flower radish, called "manufacturing" or "sluggish" in traditional oriental medicine books such as private and donguibogam, and has a body length of 17 to 22 mm. , a herbivorous insect with a width of 12-1 mm, the body is dark copper and glossy, with scattered yellowish-white patterns. It inhabits Korea, China, Japan, and eastern Siberia, and is known to occur once every 1 to 2 years from April to October (Gocheon [古川], etc., encyclopedia of primary colored insects, Jipyangsa [集英社], Tokyo [Tokyo], 573-574 (1977); Zhang Jiyi, Chinese Economic Insect Journal 28, Chosimok, Chinese Zoology Compilation Committee, Chinese Academy of Sciences, Science Publishing House (1984)). The larvae of the white-spotted flower are classified into 1st to 3rd instars according to the size, and the average head width of the 3rd instar larvae is around 4.3~4.5㎜ and the body length is 25~37㎜. The body of the larvae at this stage is milky white and densely covered with short yellow hairs. Compared to the size of the body, the size of the head is small and the legs are not developed, so it moves using its back when moving.

흰점박이꽃무지는 오래전부터 간질환 등의 치료를 위한 한방 약재로 이용되어 왔다. 또한, 최근에 유용한 생체 활성물질의 탐색 및 개발을 위한 곤충자원으로 크게 주목을 받고 있으며, 항생활성물질의 생산, 흰쥐(mouse)를 이용한 실험에서 알코올 과량섭취에 의해 손상된 간 지질 대사의 회복작용 등이 알려졌고 혈전용해성 효소에 대한 연구와 집쥐(rat)에서 사염화탄소의 투여에 의해 유도된 간 독성에 대한 간 보호 효과를 나타내는 등 유용성이 확인된 바 있다.White-spotted radish has long been used as an herbal medicine for the treatment of liver diseases and the like. In addition, it has recently been attracting great attention as an insect resource for the exploration and development of useful bioactive substances, production of antibiotic substances, restoration of liver lipid metabolism damaged by excessive alcohol intake in experiments using mice, etc. This has been known and its usefulness has been confirmed, such as studies on thrombolytic enzymes and showing hepatoprotective effects against hepatotoxicity induced by administration of carbon tetrachloride in rats.

또한, 특허출원 제10-2017-0031760호를 통해 잎새버섯을 재배하고 남는 폐배지를 이용하여 흰점박이꽃무지 사육용 사료를 제조하면 비용이 절감되는 동시에 잎새버섯에 고유한 항암 및 면역활성 성분이 전환된 흰점박이꽃무지를 얻을 수 있음이 공개되어 있다,In addition, through Patent Application No. 10-2017-0031760, production of feed for breeding white-spotted daisies using waste medium after cultivation of maitake mushrooms reduces costs and at the same time, anticancer and immune active ingredients unique to maitake mushrooms are produced. It is disclosed that a converted white-spotted flower can be obtained,

1. 대한민국 특허출원번호 10-2017-0031760호1. Korean Patent Application No. 10-2017-0031760

그러나 상술한 바와 같은 흰점박이꽃무지 유충(이하 "굼벵이"라 함)을 이용한 면역 증진용 건강식품은 보편적으로 면역력 증진하여 암, 바이러스 질환, 감염병 질환에 대응할 수 있다는 점에서는 의의가 있으나 사람마다 개인적인 기질이나 환경적인 차이에 의해 특정인에게 면역력을 증진시켜주는 효과가 있지만, 이와는 다르게 전혀 도움이 되지 않을 수도 있음은 경험상 많이 찾아볼 수 있다. However, the health food for enhancing immunity using the larvae of the white-spotted daisies (hereinafter referred to as "sluggish") as described above is meaningful in that it can respond to cancer, viral diseases, and infectious diseases by improving immunity universally, but each person has individual Although it has the effect of enhancing the immunity of a specific person due to differences in temperament or environment, it can be found in many experiences that it may not be helpful at all.

이러한 문제를 해결하기 위하여 오랜 시간 동안 연구한 끝에 우리가 섭취하는 천연물에 대하여 개인별로 면역력 증진에 미치는 영향을 측정하여 개인별로 면역력 증진에 효과가 있는 천연물을 선별하고 이 선별된 식품군을 굼벵이 사료로 제조하여 이 사료를 이용하여 사육된 굼벵이를 이용하는 경우 굼벵이를 이용한 개인별 맞춤형 면역 증진용 건강식품을 제조할 수 있다는 것을 완성하여 본 발명을 이르게 된 것이다.In order to solve this problem, after a long period of research, we measure the effect of the natural products we consume on individual immunity enhancement, select natural products that are effective in improving immunity for each individual, and manufacture these selected food groups as slug feed. Thus, when slugs raised using this feed are used, it is possible to manufacture personalized immune enhancing health food using slugs, leading to the present invention.

따라서 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 개인별 맞춤형 면역 증진 건강식품을 제조하기 위한 굼벵이 사육 방법 및 이 사육 방법에 의해 생산된 굼벵이를 이용한 면역증진용 건강식품 조성물을 제공하는 것이다.Therefore, the technical problem to be achieved by the present invention is to provide a method for breeding slugs for manufacturing personalized immunity-enhancing health food and a health food composition for enhancing immunity using slugs produced by the breeding method.

상기 기술적 과제를 달성하기 위하여 본 발명은In order to achieve the above technical problem, the present invention

a) 개인의 혈액과 천연물 소재를 이용하여 천연물 소재가 없을 때의 면역력과 천연물 소재를 첨가하였을 때의 면역력 변화를 비교하여 개인 맞춤형 면연력 증진 천연물을 탐색하는 천연물 탐색 단계:a) Natural product search step of searching for a personalized immunity-enhancing natural product by comparing the change in immunity when there is no natural product material and when the natural product material is added using the individual's blood and natural product material:

b) 상기 탐색한 천연물을 15분간 고압멸균하고 냉각 후, 유산균을 상기 고압 멸균물의 중량 대비 5중량부가 되도록 투입하여 37℃에서 7일간 발효처리하여 얻은 고상 발효물을 100℃에서 30분간 다시 스팀살균처리하여 후 발효를 억제시켜 굼벵이 사료를 제조하는 굼벵이 사료 제조 단계; 및b) After sterilizing the searched natural product under high pressure for 15 minutes and cooling it, lactic acid bacteria were added in an amount of 5 parts by weight relative to the weight of the high-pressure sterilized material, and the solid fermentation product obtained by fermentation at 37 ° C for 7 days was steam sterilized again at 100 ° C for 30 minutes. A slug feed preparation step of preparing a slug feed by processing and suppressing post-fermentation; and

c) 상기 제조된 사료를 이용하여 굼벵이를 사육하는 단계를 c) breeding slugs using the prepared feed

포함하는 것을 특징으로 하는 개인별 맞춤형 면역 증진 건강식품을 제조하기 위한 굼벵이 사육 방법을 제공한다.It provides a slug breeding method for manufacturing a personalized immune enhancing health food, characterized in that it comprises.

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 사육 방법에 있어서, 상기 유산균이 락토바실러스 카제이(Lactobacillus Casei)인 것이 바람직하다.In the breeding method according to the present invention as described above, it is preferable that the lactic acid bacteria are Lactobacillus Casei .

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 사육 방법에 있어서, 상기 b)단계에서 고압멸균 후에 멸균된 천연물에 다진 생강과 감초 분말을 넣고 볶은 다음 냉각하여 유산균을 투입하는 것이 바람직하다.In the breeding method according to the present invention as described above, it is preferable to add minced ginger and licorice powder to the natural product sterilized after high-pressure sterilization in step b), stir-fry, and then cool to add lactic acid bacteria.

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 사육 방법에 있어서, 상기 b)단계에서 유산균 투입 시 동량 중량으로 일라이트 분말을 더 투입하는 것이 바람직하다.In the breeding method according to the present invention as described above, it is preferable to further add illite powder in the same amount of weight when adding lactic acid bacteria in step b).

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 사육 방법에 있어서, 상기 (c) 단계는 상기 (b) 단계에서 제조한 사료를 굼벵이용 톱밥 사료에 혼합하여 굼벵이에게 섭취시키는 방식인 것이 바람직하다.In the breeding method according to the present invention as described above, step (c) is preferably a method in which the feed prepared in step (b) is mixed with sawdust feed for slugs and fed to slugs.

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 사육 방법에 있어서, 상기 굼벵이용 톱밥 사료에 상기 b) 단계에서 제조한 사료를 중량대비 1/25 포함시키는 것이 바람직하다.In the breeding method according to the present invention as described above, it is preferable to include the feed prepared in step b) in the weight ratio of 1/25 to the sawdust feed for slugs.

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 사육 방법에 있어서, 상기 (c) 단계는 상기 (b) 단계에서 제조한 사료를 굼벵이 출하 7 ~ 14일 전에 굼벵이 톱밥 사료를 공급을 중지하면서 굼벵이에게 섭취시키는 방식인 것이 바람직하다.In the breeding method according to the present invention as described above, in the step (c), the feed prepared in step (b) is fed to the slugs while stopping the supply of slug sawdust feed 7 to 14 days before the slugs are shipped. it is desirable

다른 기술적 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은 전술한 항 중 어느 한 항에 의한 굼벵이를 포함하는 것을 특징으로 하는 개인별 맞춤형 면역 증진용 건강식품 조성물을 제공한다.In order to achieve another technical problem, the present invention provides a personalized health food composition for enhancing immunity, characterized in that it comprises the slugs according to any one of the above items.

본 발명에 따른 건강식품 조성물에 있어서, 상기 굼벵이는 건조 분말 또는 추출물 형태로 포함될 수 있다.In the health food composition according to the present invention, the slugs may be included in the form of dry powder or extract.

본 발명에 따르면 우리가 섭취하는 천연물에 대하여 개인별로 면역력 증진에 미치는 영향을 측정하여 개인별로 면역력 증진에 효과가 있는 천연물을 선별하고 이 선별된 천연물을 굼벵이 사료로 제조하여 이 사료를 이용하여 사육된 굼벵이를 이용하는 경우 굼벵이를 이용한 개인별 맞춤형 면역 증진용 건강식품을 제조할 수 있다.According to the present invention, the effect of the natural products we consume on the immunity enhancement of each individual is measured, and natural products effective in enhancing immunity are selected for each individual, and the selected natural products are prepared as slug feed, and the feed is used to raise In the case of using slugs, it is possible to manufacture a personalized health food for enhancing immunity using slugs.

도 1은 본 발명에 따른 조성물에 의한 림프구 증식 활성을 나타내는 그래프이다.
도 2는 본 발명에 따른 조성물의 싸이토카인 IL-2의 유도능력을 나타내는 그래프이다.
도 3은 발명에 따른 조성물의 싸이토카인 IL-4의 유도능력을 나타내는 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 조성물의 싸이토카인 INF-γ의 유도능력을 나타내는 그래프이다.
1 is a graph showing the lymphocyte proliferation activity by the composition according to the present invention.
Figure 2 is a graph showing the induction ability of the cytokine IL-2 of the composition according to the present invention.
Figure 3 is a graph showing the induction ability of the cytokine IL-4 of the composition according to the invention.
Figure 4 is a graph showing the induction ability of the cytokine INF-γ of the composition according to the present invention.

이하 본 발명을 용이하게 실시할 수 있도록 구체적이고 상세하게 설명하기로 한다.Hereinafter, it will be described in detail and in detail so that the present invention can be easily practiced.

본 발명은 the present invention

a) 개인의 혈액과 천연물 소재를 이용하여 천연물 소재가 없을 때의 면역력과 천연물 소재를 첨가하였을 때의 면역력 변화를 비교하여 개인 맞춤형 면연력 증진 천연물을 탐색하는 천연물 탐색 단계:a) Natural product search step of searching for a personalized immunity-enhancing natural product by comparing the change in immunity when there is no natural product material and when the natural product material is added using the individual's blood and natural product material:

b) 상기 탐색한 천연물을 15분간 고압멸균하고 냉각 후, 유산균을 상기 고압 멸균물의 중량 대비 5중량부가 되도록 투입하여 37℃에서 7일간 발효처리하여 얻은 고상 발효물을 100℃에서 30분간 다시 스팀살균처리하여 후 발효를 억제시켜 굼벵이 사료를 제조하는 굼벵이 사료 제조 단계; 및b) After sterilizing the searched natural product under high pressure for 15 minutes and cooling it, lactic acid bacteria were added in an amount of 5 parts by weight relative to the weight of the high-pressure sterilized material, and the solid fermentation product obtained by fermentation at 37 ° C for 7 days was steam sterilized again at 100 ° C for 30 minutes. A slug feed preparation step of preparing a slug feed by processing and suppressing post-fermentation; and

c) 상기 제조된 사료를 이용하여 굼벵이를 사육하는 단계를 c) breeding slugs using the prepared feed

포함하여 우리가 섭취하는 천연물에 대하여 개인별로 면역력 증진에 미치는 영향을 측정하여 개인별로 면역력 증진에 효과가 있는 천연물을 선별하고 이 선별된 천연물을 굼벵이 사료로 제조하여 이 사료를 이용하여 사육된 굼벵이를 이용하는 경우 굼벵이를 이용한 개인별 맞춤형 면역 증진용 건강식품을 제공하기 위한 것이다.Including natural products we ingest, we measure the effect on immunity enhancement for each individual, select natural products that are effective in enhancing immunity for each individual, manufacture the selected natural products as slug feed, and feed slugs raised using this feed. When used, it is intended to provide a health food for enhancing immunity customized for each individual using slugs.

먼저, 개인별 면역 증진을 위한 천연물을 탐색하는 단계에 대하여 설명하기로 한다.First, the steps of searching for natural products for individual immunity enhancement will be described.

본 천연물 탐색 단계는 본 발명이 속하는 기술 분야에 널리 알려진 것이라면 특별한 제한 없이 이용이 가능하며, 그 예는 대한민국 공개 특허 제10-2017-0110297호, 공개 특허 제10-2011-0010030호 및 공개 특허 제10-2011-0084118호에 기재되어 있으며, 이 내용은 본 발명에 당연히 포함이 된다. 이에 한정되는 것은 아니다.This natural product search step can be used without particular limitation as long as it is widely known in the art to which the present invention belongs, and examples thereof include Korean Patent Publication No. 10-2017-0110297, Patent Publication No. 10-2011-0010030 and Patent Publication No. It is described in No. 10-2011-0084118, and this content is naturally included in the present invention. It is not limited to this.

상기 예 주에서 대한민국 공개 특허 제10-2017-0110297호에 개시되어 있는 내용을 구체적으로 보면Looking specifically at the contents disclosed in Korean Patent Publication No. 10-2017-0110297 in the above example note

a) 혈액을 채취하는 단계;a) drawing blood;

b) 상기 혈액에 항원세포를 주입하여 배양하는 단계;b) injecting and culturing antigen cells into the blood;

c) 상기 배양이 끝난 혈액을 분석하여 항원세포의 사멸 및 IFN-γ를 포함한 싸이토카인의 농도를 측정하는 단계;c) analyzing the cultured blood to measure the death of antigen cells and the concentration of cytokines including IFN-γ;

d) 상기 a)단계의 혈액에 항원세포 및 천연물 소재를 첨가하여 배양하는 단계;d) culturing by adding antigen cells and natural materials to the blood of step a);

e) 상기 d) 단계에서 배양이 끝난 혈액을 분석하여 항원세포의 사멸 및 IFN-γ를 포함한 싸이토카인의 농도를 측정하는 단계; 및e) analyzing the blood cultured in step d) to measure the death of antigen cells and the concentration of cytokines including IFN-γ; and

f) 상기 c) 단계의 측정 결과와 상기 e) 단계의 측정 결과를 비교 분석하는 단계;를 포함하는 검사하는 방법이 개시되어 있다.f) comparing and analyzing the measurement result of step c) and the measurement result of step e).

상기 방법에서, 혈액이 병자의 혈액일 경우에는 상기 b) 단계와 d) 단계에서 항원세포를 첨가하지 않으며, 상기 항원세포는 부유세포일 수 있다.In the above method, when the blood is the blood of a sick person, antigen cells are not added in steps b) and d), and the antigen cells may be floating cells.

또한, 상기 방법에서 자연살해세포(NK cell), 자연살해T세포(NKT cell) 및 선천성 림프구 세포(Innate lymphoid cell)의 활성도 증강을 검사하는 방법으로 면역증강을 검사할 수 있다.In addition, in the above method, immunity enhancement can be tested by examining the activity enhancement of natural killer cells (NK cells), natural killer T cells (NKT cells), and innate lymphoid cells.

더욱 상세하게 보면in more detail

1) 개인의 면역능력을 검사하는 단계1) The step of examining the individual's immune ability

1-1) 혈액 채취 단계1-1) Blood sampling step

[정상인 혹은 병자의 혈액을 채취한다. 여기에서, 병자는 암환자이거나 바이러스 등에 감염이 된 사람을 포함한다.[Take the blood of a healthy person or a sick person. Here, the sick include cancer patients or people infected with viruses or the like.

1-2) 혈액에 항원세포를 첨가하여 배양하는 단계1-2) Culturing by adding antigen cells to blood

정상인의 혈액에는 항원세포를 첨가하고 배양을 하며, 병자의 혈액은 해당 항원세포의 특성에 맞게끔 배양을 한다. 여기에서, 주입되는 항원세포나 병자의 항원세포는 부유세포일 것을 조건으로 한다. 그 이유는 NK cell이 부유세포이기 때문에 부착세포를 사용할 수 없기 때문이다.Antigen cells are added to the blood of healthy people and cultured, and the blood of sick people is cultured to suit the characteristics of the antigen cells. Here, it is conditional that the antigen cells to be injected or the antigen cells of the patient are floating cells. The reason is that adherent cells cannot be used because NK cells are floating cells.

예를 들어, 첨가되는 항원세포는 휴먼 암세포일 수 있고, 바람직하게는 K562 cells일 수 있다. K562 세포는 만성골수성백혈병(慢性骨髓性白血病) 환자 유래 세포주(株)인데 원래는 필라데르피아(Philaderphia)염색체(染色體) 양성(Ph+), bcr-Abl양성세포이다. 자극에 따라 적혈구, 과립구, 단구(單球) 등으로 분화하는 다능성 줄기세포 유사 성질을 보여서 줄기세포연구에 사용하는 외에도 NK 세포에 의한 세포상해성에 대한 감수성이 높아 NK 세포활성의 측정에도 이용될 수 있다.For example, the antigen cells to be added may be human cancer cells, preferably K562 cells. K562 cells are a cell line derived from a patient with chronic myeloid leukemia, and they are originally Philaderphia chromosome positive (Ph+), bcr-Abl positive cells. In addition to being used in stem cell research because it shows properties similar to pluripotent stem cells that differentiate into red blood cells, granulocytes, monocytes, etc. depending on stimulation, it is highly sensitive to cytotoxicity by NK cells, so it can be used for measuring NK cell activity. can

또한, 휴먼 암세포 배양을 위해서는 10% FBS와 1% penicilin 및 streptomycin이 포함된 DMEM 및 RPMI 배지를 사용한다. hemocytometer를 이용하여 세포수를 1×108cell/mL로 측정하고, T25 cell culture flasks에 24시간 동안 37℃, 5%, CO2 항온기에서 배양한다. 계대배양은 2~3일에 한번씩 시행한다. 그러나 배양조건이나 배양기간은 항원세포의 특성에 따라 변경될 수 있다.In addition, DMEM and RPMI media containing 10% FBS and 1% penicilin and streptomycin are used for human cancer cell culture. The cell number was measured at 1×10 8 cell/mL using a hemocytometer, and incubated in T25 cell culture flasks for 24 hours at 37° C., 5%, CO 2 incubator. Subculture is carried out once every 2-3 days. However, culture conditions or culture period may be changed depending on the characteristics of antigen cells.

1-3) 세포사멸능력 및 싸이토카인 측정단계1-3) Apoptotic ability and cytokine measurement step

배양이 끝난 혈액을 분석하여 항원세포의 사멸 및 IFN-γ를 포함한 싸이토카인을 측정한다. 항원세포의 사멸 분석은 MTT assay를 이용한 세포증식률의 측정으로 이루어질 수 있다.The cultured blood is analyzed to measure the death of antigen cells and cytokines including IFN-γ. Apoptosis analysis of antigenic cells may be performed by measuring cell proliferation rate using MTT assay.

MTT (3-〔4,5-dimethyl thiazol-2-yl〕-2,5-yl tetrazolium bromide) assay는 세포의 독성과 생존율을 측정하는 방법으로서 황색의 수용성 물질인 MTT가 미토콘드리아 내의 탈수소효소 작용에 의하여 비수용성인 보라색 formazan을 생성하는 원리를 이용한다. 이를 위해 각 세포주를 1×104cells/well의 농도로 96well에 각각 200μL씩 첨가하여 24시간 동안 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양하여 안정화시킨다. 준비된 추출물을 배지에 적정 농도로 처리하고 48시간 동안 배양한다. 배지에 MTT(3-〔4,5-dimethyl thiazol-2-yl〕-2,5-yl tetrazolium bromide) assay 시약을 처리하여 4시간동안 37℃, 5% CO2 incubator에서 반응시킨 후 MTT 반응 용액을 제거한다. MTT (3-[4,5-dimethyl thiazol-2-yl]-2,5-yl tetrazolium bromide) assay is a method for measuring cell toxicity and viability. It uses the principle of producing water-insoluble purple formazan. To this end, 200 μL of each cell line was added to 96 wells at a concentration of 1×10 4 cells/well for 24 hours at 37° C., and cultured in a 5% CO 2 incubator for stabilization. The prepared extract is treated in a medium at an appropriate concentration and cultured for 48 hours. The medium was treated with MTT (3-[4,5-dimethyl thiazol-2-yl] -2,5-yl tetrazolium bromide) assay reagent and reacted for 4 hours in a 37℃, 5% CO 2 incubator, followed by MTT reaction solution Remove

생성된 formazan을 녹이기 위해 200μL DMSO를 처리하여 ELISA 분광기기로 540nm에서 흡광도를 측정한다.200μL of DMSO was treated to dissolve the generated formazan, and absorbance was measured at 540nm with an ELISA spectrophotometer.

또한, IFN-γ를 포함한 싸이토카인의 농도변화는 ELISA 기법에 의하여 수행될 수 있다. 96 well plate에 purified anti-human cytokines( IFN-γ) monoclonal antibody를 2 μg/mL로 binding buffer(0.1 M sodium phosphate buffer, pH 9.0)에 희석해서 50 μL/well로 넣은 후, 4℃에서 하룻밤 방치한다. PBS/Tween으로 세척 후, blocking buffer(1% BSA/PBS)를 200 μL/well로 가한 후, 37℃에서 2시간 동안 방치한다. 세척 후, standard cytokine과 추출물을 처리하여 수거한 상층액을 100 μL씩 넣고, 4℃에서 하룻밤 방치한다. PBS/Tween으로 세척 후, biotinylated anti-cytokine detection antibody를 blocking buffer/Tween에 희석하여 100μL/well로 처리 후 37℃에서 1시간 동안 방치한다. 다시 PBS/Tween으로 세척 후, 1/1000로 희석한 streptavidin-HRP을 100μg/well로 blocking buffer/Tween에 희석하여 넣고 1시간 방치 후, 세척한다. TMB solution을 100μg/well로 넣고 15분 후, stop reagent로 1 M HCl을 50 μL/well로 넣어, 450 nm에서 ELISA 분광기기로 흡광도를 측정한다.In addition, concentration changes of cytokines including IFN-γ can be performed by ELISA technique. Dilute purified anti-human cytokines (IFN-γ) monoclonal antibody at 2 μg/mL in binding buffer (0.1 M sodium phosphate buffer, pH 9.0) on a 96-well plate, add 50 μL/well, and leave overnight at 4°C. do. After washing with PBS/Tween, blocking buffer (1% BSA/PBS) was added at 200 μL/well, and then left at 37° C. for 2 hours. After washing, add 100 μL of the supernatant collected by treating the standard cytokine and extract, and leave overnight at 4℃. After washing with PBS/Tween, the biotinylated anti-cytokine detection antibody is diluted in blocking buffer/Tween, treated with 100 μL/well, and left at 37° C. for 1 hour. After washing again with PBS/Tween, 1/1000 diluted streptavidin-HRP was added at 100 μg/well in blocking buffer/Tween, left for 1 hour, and then washed. Add 100 μg/well of TMB solution and after 15 minutes, add 50 μL/well of 1 M HCl as a stop reagent and measure the absorbance at 450 nm with an ELISA spectrophotometer.

설계조건에 따라, 항원세포의 사멸 및 IFN-γ를 포함한 싸이토카인을 측정하는 기법은 다른 방법이 사용될 수도 있다.Depending on the design conditions, other methods may be used for the detection of antigen cell death and cytokines including IFN-γ.

1-4) 면역능력 검사 단계1-4) Immunity test step

항원세포의 사멸을 분석하고, 정상인의 혈액에서 분석되는 싸이토카인의 농도와 항원세포가 주입된 후의 싸이토카인 농도의 차이를 분석한다.The death of antigen cells is analyzed, and the difference between the concentration of cytokines analyzed in the blood of a normal person and the concentration of cytokines after injection of antigen cells is analyzed.

이 후에, 의학적 데이터베이스에서 제시하고 있는 수치를 활용하거나 또는, 별도의 기준 조건을 마련하여 항원세포의 사멸과 싸이토카인 농도변화에 따른 면역능력을 점수화할 수 있다.After that, the immune ability according to the death of antigen cells and the change in cytokine concentration can be scored by using the numerical value presented in the medical database or by preparing a separate standard condition.

2) 천연물 소재의 면역증강을 검사하는 단계2) Step of examining immunity enhancement of natural materials

2-1) 혈액 채취 단계 2-1) Blood sampling step

상기의 1-1) 단계와 동일하게 수행한다.Perform the same as step 1-1) above.

혈액에 항원세포 및 천연물 소재를 주입하여 배양하는 단계The step of injecting and culturing antigen cells and natural materials into blood

상기의 1-2) 단계와 동일하게 수행하되, 천연물 소재를 추가로 혈액에 첨가한다.It is performed in the same manner as in step 1-2) above, but a natural material is additionally added to the blood.

여기에서, 천연물 소재의 성분은 생약 제제이거나 또는 식품 제제이거나 또는 식품의 주요성분일 수 있다. 천연물 소재는 생약 제제의 경우에는 열수, 에탄올, 발효 또는 분획 등을 활용하여 추출한 추출물 또는 농축물일 수 있으며, 식품 제제나 또는 식품의 주요성분일 경우에는 식품을 분쇄, 분말 및 용해한 시료일 수 있다.Here, the component of the natural material may be a herbal preparation, a food preparation, or a main ingredient of food. Natural materials may be extracts or concentrates extracted using hot water, ethanol, fermentation or fractionation in the case of herbal preparations, and may be samples obtained by pulverizing, powdering, or dissolving food in the case of food preparations or major ingredients of food.

2-3) 세포사멸능력 및 싸이토카인 측정단계2-3) Apoptotic ability and cytokine measurement step

상기의 1-3) 단계와 동일하게 수행한다. 2-4) 면역증강을 검사하는 단계Perform the same as steps 1-3) above. 2-4) Test for immunity enhancement

상기의 1-4) 단계와 동일하게 수행하되, 1-4) 단계의 결과와 비교 분석함으로써 천연물 소재의 면역 증강 능력을 검사한다. 즉, 1-4) 단계에서 분석된 결과보다 항원세포의 사멸과 IFN-γ를 포함한 싸이토카인의 분비가 증가하였다면, 검사대상인 천연물 소재의 면역 증강 능력이 확인되었다고 볼 수 있다.It is performed in the same manner as in steps 1-4) above, but the immune enhancing ability of natural materials is examined by comparing and analyzing the results of steps 1-4). That is, if the death of antigen cells and the secretion of cytokines including IFN-γ were increased compared to the results analyzed in steps 1-4), it can be seen that the immune enhancing ability of the natural material to be tested was confirmed.

이후에는, 동일한 천연물 소재의 농도에 따라 2-1) 내지 2-4) 단계를 반복 수행하여 최적의 농도를 분석할 수 있다. 또한, 복수 개의 천연물 소재에 대해서 동일한 조건으로 2-1) 내지 2-4) 단계를 수행함으로써 최적의 천연물 소재를 분석할 수 있게 된다.After that, the optimal concentration may be analyzed by repeating steps 2-1) to 2-4) according to the concentration of the same natural material. In addition, by performing steps 2-1) to 2-4) under the same conditions for a plurality of natural material materials, it is possible to analyze the optimal natural material material.

이어서 선별된 천연물을 이용하여 굼벵이 사료를 제조하는 방법에 대하여 설명하기로 한다.Next, a method for preparing slug feed using the selected natural product will be described.

본 발명에서는 선별한 천연물을 고압멸균시킨 후 냉각한 후 5중량부의 유산균을 첨가하여 품온 36℃에서 7일간 발효처리를 수행한다.In the present invention, the selected natural product is sterilized under high pressure, cooled, and then 5 parts by weight of lactic acid bacteria is added and fermentation is performed at a temperature of 36° C. for 7 days.

이때 수분을 공급할 필요가 없으며 미생물 발효에 필요한 수분은 상기 고압멸균과정에서, 상기 재료가 스스로 흡수한 수분으로 충분하므로 별도 공급이 필요하지 않다. At this time, there is no need to supply moisture, and since the moisture required for microbial fermentation is sufficient for the moisture absorbed by the material itself during the high-pressure sterilization process, a separate supply is not required.

본 발명의 발효사료를 얻기에 가장 바람직한 유산균으로는 락토바실러스 카제이(Lactobacillus Casei)이었다.The most preferred lactic acid bacteria for obtaining the fermented feed of the present invention was Lactobacillus Casei .

본 발명의 발효균주에 의하여 발효된 본 발명 고상 발효사료 원료는 100℃에서 30분간 스팀가열처리하여 멸균시킨다.The solid fermented feed material of the present invention fermented by the fermentation strain of the present invention is sterilized by steam heat treatment at 100 ° C. for 30 minutes.

본 발명에 따라 제조된 굼벵이 사료는 굼벵이의 사육에 전혀 문제가 없으며, 사료에 포함되어 있는 면역 증진 물질이 굼벵이 더욱 용이하게 축적이 되는 것으로 확인이 되었다.It was confirmed that the slug feed prepared according to the present invention has no problem in breeding slugs, and the immunity enhancing substances contained in the feed are more easily accumulated by the slugs.

또한, 상술한 효과를 더욱 증진시키기 위하여 본 발명에서는 선별한 천연물을 고압멸균시킨 다음 달구어진 팬에 다진 생강과 감초 분말은 넣고 볶은 다음에 냉각하여 유산균을 접종하는 것이다.In addition, in order to further enhance the above-mentioned effect, in the present invention, the selected natural product is sterilized under high pressure, then minced ginger and licorice powder are put in a heated pan, roasted, and then cooled to inoculate lactic acid bacteria.

상기 다진 생강과 감초 분말을 동일 중량비율이며, 이들의 전체 함유량은 천연물 중량 대비 10중량부인 것이 바람직하다.The minced ginger and licorice powder are the same weight ratio, and their total content is preferably 10 parts by weight relative to the weight of the natural product.

또한, 유산균을 부가할 때 이 유산균의 중량과 동일 중량의 일라이트 분말과 함께 부가하는 것이 유산균 발효의 효율성 및 굼벵이 사육의 효율성 증대에 매우 유리하다.In addition, when adding lactic acid bacteria, it is very advantageous to increase the efficiency of lactic acid bacteria fermentation and slug breeding by adding the same weight of illite powder as the weight of the lactic acid bacteria.

본 발명에서 사용되는 일라이트는 937년 미국의 일리노이(Illinois)주에서 처음 발견되었으며, 세계적으로 충북 영동군에 최대 매장량을 갖고 있는 희귀 광물질로서 일라이트의 구성성분은 이산화규소(SiO2), 알루미나(Ai2O3), 산화철(Fe2O3), 산화칼슘(CaO), 산화나트륨(Na2O), 산화마그네슘(MgO), TiO2, MnO 및 K2O 등으로, 모공 속의 노폐물 및 과잉 피지 제거, 혈액순환 촉진 작용, 콜라겐 결합 작용, 해독 작용 및 수분조절 등의 효능이 있다.Illite used in the present invention was first discovered in Illinois, USA in 937, and is a rare mineral that has the largest reserve in Yeongdong-gun, North Chungcheong Province worldwide, and the components of illite are silicon dioxide (SiO 2 ), alumina ( Ai 2 O 3 ), iron oxide (Fe 2 O 3 ), calcium oxide (CaO), sodium oxide (Na 2 O), magnesium oxide (MgO), TiO 2 , MnO and K 2 O, etc. It has effects such as sebum removal, blood circulation promotion, collagen binding, detoxification, and moisture control.

이어 상기 제조한 사료를 이용하여 굼벵이를 사육하는 방법에 대해서 설명하기로 한다. Next, a method for breeding slugs using the prepared feed will be described.

본 발명에서의 굼벵이 사육 방법은 2가지로 나누어질 수 있는데 첫 번째 방법이 굼벵이 사육 기간 내내 굼벵이 사육에 사용되는 공지의 톱밥 사료에 상기 본 발명에 따른 사료를 혼합하여 공급하는 것이다.The slug breeding method in the present invention can be divided into two types. The first method is to mix and supply the feed according to the present invention with the known sawdust feed used for slug breeding throughout the slug breeding period.

이때 사료의 공급량은 공지의 톱밥 사료와 중량대비 1/25 정도를 넣는 것이 본 발명자의 다양한 시험에 최적의 것으로 나타났다.At this time, it was found that the supply amount of the feed was optimal for various tests of the present inventors to put about 1/25 of the known sawdust feed and weight.

또 다른 방법으로 굼벵이를 건강식품 제조하기 전, 즉 출하 7 ~ 14일 전에 굼벵이 톱밥 사료를 공급을 중지하면서 굼벵이에게 섭취시키는 방식이다. 이 경우 굼벵이를 톱밥이 없는 사육 통을 옮기고 굼벵이에게 본 발명에 따라 제조된 사료만을 먹이는 것이다, 이때 바람직하게는 10일 정도 먹이는 것으로 이와 같은 방법에 의한 경우에 본 발명에 따른 사료에 포함되어 있는 면역 활성 물질이 더욱 용이하게 축적이 되어 매우 바람직하다.Another method is to feed the slugs while stopping supply of sawdust feed to the slugs before manufacturing healthy food, that is, 7 to 14 days before shipment. In this case, the slugs are moved to a breeding container without sawdust and only the feed prepared according to the present invention is fed to the slugs. At this time, it is preferably fed for about 10 days. Active substances accumulate more readily, which is highly desirable.

이하 실시예 및 실험예를 통하여 상세하게 설명하기로 한다.It will be described in detail through examples and experimental examples below.

<< 실시예Example 1> 1>

50대 남성의 혈액을 채취하여 대한민국 공개 특허 제10-2017-0110297호에 개시되어 있는 방법으로 새송이 버섯, 올리브, 다시마, 미나리, 포도, 사과, 브로콜리, 시금치에 대하여 테스트한 결과, 새송이 버섯, 올리브, 미나리, 브로콜리에서는 면역력 증진이 확인되었으며, 다른 식품에서 면연력을 떨어뜨리지는 않았으나 증진 효과까지는 확인이 되지 않았다.The blood of a man in his 50s was collected and tested on king oyster mushrooms, olives, kelp, water parsley, grapes, apples, broccoli, and spinach by the method disclosed in Korean Patent Publication No. 10-2017-0110297, king oyster mushrooms, olives , Water parsley, and broccoli were confirmed to enhance immunity, and other foods did not lower immunity, but the enhancing effect was not confirmed.

상기 천연물을 면역력 증진군과 비교군으로 나누어 면역력 증진군에는 새송이 버섯, 올리브, 미나리, 브로콜리를 비교군에는 다시마, 포도, 사과, 시금치로 하여 이를 굼벵이 사료로 제조하였다.The natural products were divided into an immunity enhancing group and a control group, and king oyster mushrooms, olives, water parsley, and broccoli were used in the immune enhancing group, and kelp, grapes, apples, and spinach were used in the comparative group, and these were prepared as slug feed.

사료는 고압멸균시킨 후 냉각한 후 5중량부의 락토바실러스 카제이(Lactobacillus Casei)을 첨가하여 품온 36℃에서 7일간 발효처리를 수행한 후 100℃에서 30분간 스팀가열처리하여 멸균시켜 제조하였다.The feed was sterilized by high-pressure sterilization, cooling, adding 5 parts by weight of Lactobacillus Casei , fermenting at a temperature of 36 ° C for 7 days, and then steam heating at 100 ° C for 30 minutes to sterilize.

.< 실시예 2> . < Example 2>

상기 실시예 1에서 면역력을 증진시킨 새송이 버섯, 올리브, 미나리, 브로콜리를 고압멸균 후 잘 달구어진 팬에 기름 없이 다진 생강과 감초 분말을 동일 중량으로 하여 고압멸균한 천연물 100중량부 대비 10중량부 부가하여 볶은 다음 냉각하여 사용한 점을 제외하고는 실시예 1과 동일하다.After high-pressure sterilization of king oyster mushrooms, olives, water parsley, and broccoli, which improved immunity in Example 1, ginger and licorice powder minced without oil in a well-heated pan were added in equal weight to 100 parts by weight of natural products sterilized under high pressure. 10 parts by weight added It is the same as in Example 1 except that it was roasted and then cooled and used.

.< 실시예 3> . < Example 3>

상기 실시예 2와 동일하며, 다만 유산균과 동일 중량비율로 일라이트 분말을 더 부가한 점에 차이가 있다.It is the same as in Example 2, but there is a difference in that more illite powder is added in the same weight ratio as the lactic acid bacteria.

<사육 방법><Breeding method>

이어 5개의 사육 통을 준비하여 첫 번째는 실시예 1의 면역력 증진군 사료를 섭취한 시험군 1, 두 번째는 실시예 2의 면역력 증진군 사료를 섭취한 시험군 2, 세 번째는 실시예 3의 면역력 증진군 사료를 섭취한 시험군 3, 네 번째는 비교군 사료를 섭취한 비교군 1, 다섯 번째는 일반 톱밥 사료를 섭취한 대조군 1로 하였으며, 각각의 사육 통에는 굼벵이 개월 수가 동일하였으며, 그 무게 또한 동일한 것으로 선별하여 출하 10일 전에 각각의 사육통에 나누어 사육하였다.Subsequently, 5 breeding tubes were prepared, the first test group 1 eating the immunity enhancing group feed of Example 1, the second test group 2 eating the immunity enhancing group feed of Example 2, and the third being Example 3 The test group 3 consumed the immunity boosting group feed, the fourth control group 1 consumed the control group feed, and the fifth was the control group 1 who consumed the normal sawdust feed. The weight was also selected to be the same, and it was divided and bred in each breeding tube 10 days before shipment.

건강식품의 제조하기 전에 굼벵이의 무게는 사육 방법에 따라 의미가 있는 차이가 없었으며, 굼벵이를 이틀 동안 절식시킨 후에 동결건조하여 준비하였다.Before manufacturing health food, there was no significant difference in the weight of slugs depending on the breeding method, and the slugs were prepared by fasting for two days and then freeze-drying.

<< 시험예test example 1: 투여하기 전과 후의 혈액 중 1: in the blood before and after administration 임파구lymphocyte 수 변화> number change>

혈액을 기증한 시험자에게 상기 동결건조한 굼벵이를 투여하였으며, 투약하기 전과 투약 후의 혈액 중 임파구 변화(단위: %)를 측정하여 아래의 표 1에 나타냈다. 투여량은 1일 1회 2000mg이었다.The freeze-dried slugs were administered to testers who donated blood, and changes in lymphocytes (unit: %) in the blood before and after administration were measured and shown in Table 1 below. The dose was 2000 mg once daily.

투여 전before administration 5일 투여 후 5 days after dosing 10일 투여 후10 days after administration 정상 범위normal range 시험군 1test group 1 2828 3636 4040
35∼41%

35-41%
시험군 2test group 2 2828 3838 4040 시험군 3test group 3 2828 4040 4040 비교군 1comparator group 1 2828 3131 3434 대조군 1Control 1 2828 3131 3434

상기 표 1을 보면, 본 발명의 시험군에서 투여 전에 면역력이 조금 떨어져 있었느냐 5일 투여 후부터 정상범위에 있었으며, 10일 투여 후에는 정상 범위에서도 상위에 위치하였으나 비교군과 대조군에서는 정상 범위에 약간 못 미치나 투여 전 보다는 상승하였음을 확인할 수 있었다. Looking at Table 1, in the test group of the present invention, was the immunity slightly lowered before administration? It was confirmed that it was increased compared to before Myitkyina administration.

특히 시험군 2 및 시험군 3에서는 투여 5일 만에 정상범위에서도 상위에 위치하는 결과를 보여 그 효과가 매우 현저함을 확인할 수 있었다.In particular, in test group 2 and test group 3, the results were found to be higher in the normal range after 5 days of administration, and it was confirmed that the effect was very remarkable.

<< 시험예test example 2: 2: 실시예Example 1 추출물을 이용한 in- 1 in- using extract virtovirto 시험> test>

상기 실시예 1의 굼벵이에 ethyl alcohol 1,000mL를 가하여 25℃ 수욕 상에서 24시간 2회 반복 추출한 후 감압여과장치로 여과하여 제조된 추출물을 이용하여 다음과 같은 시험을 실시하였다.The following tests were conducted using the extract prepared by adding 1,000 mL of ethyl alcohol to the slugs of Example 1, extracting twice for 24 hours in a 25 ° C water bath, and filtering with a vacuum filter.

<림프구 증식 <Lymphocyte proliferation 활성에 대한 실험Experiments on activity >>

5주령의 Balb/c 마우스로부터 비장을 적출하고, 비장세포(splenocytes)의 수가 2×105/100㎕의 밀도로 조정하여 각 웰(well)에 넣고 본 발명에 따른 조성물을 각각 200㎍/㎖, 100㎍/㎖, 50㎍/㎖ 및 10㎍/㎖를 첨가하였다.The spleen was removed from a 5-week-old Balb/c mouse, and the number of splenocytes was adjusted to a density of 2×10 5 /100 μl, put into each well, and the composition according to the present invention was added to each well at 200 μg/ml. , 100 μg/ml, 50 μg/ml and 10 μg/ml were added.

양성 대조군으로 T-세포 및 B-세포의 유사분열 물질인 콘카바날린-A(Concavanallin-A;이하 Con-A라 약칭함)와 지질 다당류(Lipopolysaccharide;이하 LPS라 약칭함)의 최종농도가 각각 0.5㎍/㎖ 및 5㎍/㎖가 되도록 조정하여 각 웰(well)에 처리하고, 실험군과 대조군을 37℃, 5% CO2 조건 하에서 3일간 배양하고 시료에 의한 림프구의 증식활성(proliferation assay)을 조사하였다.As a positive control, the final concentrations of Concavanallin-A (hereinafter abbreviated as Con-A) and Lipopolysaccharide (hereinafter abbreviated as LPS), which are mitotic substances of T-cells and B-cells, were respectively It was adjusted to 0.5 μg/ml and 5 μg/ml and treated in each well, and the experimental group and the control group were cultured for 3 days at 37° C. and 5% CO 2 conditions, and the proliferation assay of lymphocytes by the sample was investigated.

림프구(Lymphocyte)의 증식활성(proliferation activity)은 MTT[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide]법으로 수행하였으며, 상기 MTT법은 5㎎/㎖의 농도로 조정된 MTT시약을 각 웰(well)에 50㎕첨가하고 6시간 배양하여 MTT시약과 살아있는 세포가 생산하는 미토콘드리아 탈수소효소(mitochondria dehydrogense)와 반응하여 생성된 비수용성의 진청색 포마잔(formazan)의 양을 570㎚에서 흡광도를 측정함으로써 림프구의 증식활성을 측정하였다.The proliferation activity of lymphocytes was performed by the MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] method, and the MTT method was performed at a concentration of 5 mg/ml. After adding 50 μl of MTT reagent adjusted to each well and incubating for 6 hours, the reaction between MTT reagent and mitochondrial dehydrogenase produced by living cells resulted in the formation of water-insoluble dark blue formazan. The proliferative activity of lymphocytes was measured by measuring the absorbance at 570 nm.

본 실험예의 결과는 도 1에 나타낸 바와 같이 본 발명에 따른 조성물이 시료 무처리 대조군에 비하여 높은 비장세포의 증식활성을 나타내었다.As shown in FIG. 1, the results of this experimental example showed that the composition according to the present invention exhibited higher proliferation activity of splenocytes than the sample-untreated control group.

본 결과로서 본 발명이 B-세포 또는 T-세포 중 어떤 종류의 면역세포를 활성화시키는지 확인하지 못하였으나 비특이적으로 비장세포를 직접 자극하는 활성작용이 있음을 확인하였다.As a result, it was not confirmed which type of immune cell, B-cell or T-cell, was activated by the present invention, but it was confirmed that there was an active action of directly stimulating spleen cells in a non-specific way.

<< cytokinecytokines 유도에 대한 실험experiments on induction >>

5주령의 Balb/c 마우스로부터 비장을 적출하고, 비장세포(splenocytes)의 수를 2×106/500㎕의 밀도로 조정하여 각 웰(well)에 넣고 본 발명의 조성물을 각각 200㎍/㎖, 100㎍/㎖, 50㎍/㎖ 및 10㎍/㎖를 첨가하여 24시간 동안 동시배양 하였다.The spleen was removed from a 5-week-old Balb/c mouse, and the number of splenocytes was adjusted to a density of 2×10 6 /500 μl, put into each well, and 200 μg/ml of the composition of the present invention, respectively. , 100 μg/ml, 50 μg/ml and 10 μg/ml were added and co-cultured for 24 hours.

또한, 양성 대조군으로 Con A의 최종농도를 0.5㎍/㎖가 되도록 조정하여 웰(well)에 처리하고 24시간 동안 배양하였고, 배양완료 후에 상등액만을 회수하고 상등액에 유도 분비된 IL-2, IL-4, IL-10, INF-γ 등 여러 가지 cytokine을 각 싸이토카인 키트(cytokine kit)을 이용하여 측정하였다.In addition, as a positive control, the final concentration of Con A was adjusted to 0.5 μg/ml, treated in wells, and cultured for 24 hours. After completion of the culture, only the supernatant was recovered and induced secretion of IL-2 and IL- Various cytokines such as 4, IL-10, and INF-γ were measured using each cytokine kit.

본 시험의 결과는 도 2 내지 도 4에 나타낸 바와 같이 마우스의 췌장 세포를 직접 활성화시켜 IL-2, IL-4, IL-10, INF-γ 등의 면역 관련 싸이토카인을 유도하는 면역자극효과가 있음을 확인하였다.As shown in FIGS. 2 to 4, the results of this test directly activate the pancreatic cells of the mouse to induce immune-related cytokines such as IL-2, IL-4, IL-10, and INF-γ. confirmed.

본 발명은 싸이토카인의 종류, 조성물액의 농도에 따라 싸이토카인을 유도하는 정도가 달랐으나, 농도에 의존하여 싸이토카인 유도체(cytokine inducer)로의 활성이 있음을 확인하였다.In the present invention, the degree of cytokine induction was different depending on the type of cytokine and the concentration of the composition, but it was confirmed that the activity as a cytokine inducer was dependent on the concentration.

<< 실시예Example 4> 4>

육류를 좋아하는 60대 남성의 혈액을 채취하여 대한민국 공개 특허 제10-2017-0110297호에 개시되어 있는 방법으로 소고기, 돼지고기, 닭고기, 오리고기, 양고기, 쥐눈이콩, 고등어, 계란에 대하여 테스트한 결과, 닭고기, 쥐눈이콩, 고등어에서는 면역력 증진이 확인되었으며, 다른 식품에서 면연력을 떨어뜨리지는 않으나 증진 효과까지는 확인이 되지 않았다.The blood of a man in his 60s who likes meat was taken and tested for beef, pork, chicken, duck, lamb, green beans, mackerel, and eggs by the method disclosed in Korean Patent Publication No. 10-2017-0110297. As a result, immunity enhancement was confirmed in chicken, green bean, and mackerel, and immunity was not lowered in other foods, but the enhancing effect was not confirmed.

상기 천연물을 면역력 증진군과 비교군으로 나누어 면역력 증진군에는 닭고기, 쥐눈이콩, 고등어를 비교군에는 소고기, 돼지고기, 오리고기, 양고기로 하여 이를 굼벵이 사료로 제조하였다.The natural product was divided into an immunity enhancing group and a control group, and chicken, mouse eye pea, and mackerel were used in the immune enhancing group, and beef, pork, duck, and lamb were used in the comparative group, and these were prepared as slug feed.

사료는 고압멸균시킨 후 냉각한 후 5중량부의 락토바실러스 카제이(Lactobacillus Casei)을 첨가하여 품온 36℃에서 7일간 발효처리를 수행한 후 100℃에서 30분간 스팀가열처리하여 멸균시켜 제조하였다.The feed was sterilized by high-pressure sterilization, cooling, adding 5 parts by weight of Lactobacillus Casei , fermenting at a temperature of 36 ° C for 7 days, and then steam heating at 100 ° C for 30 minutes to sterilize.

.< 실시예 5> . < Example 5>

상기 실시예 4에서 면역력을 증진시킨 닭고기, 쥐눈이콩, 고등어를 고압멸균 후 잘 달구어진 팬에 기름 없이 다진 생강과 감초 분말을 동일 중량으로 하여 고압멸균한 천연물 100중량부 대비 10중량부 부가하여 볶은 다음 냉각하여 사용한 점을 제외하고는 실시예 4와 동일하다.After high-pressure sterilization of chicken, mouse's eye, and mackerel, which improved immunity in Example 4, equal weight of minced ginger and licorice powder without oil in a well-heated pan. 10 parts by weight compared to 100 parts by weight of high-pressure sterilized natural product. Roasted It is the same as Example 4 except that it was used after cooling.

.< 실시예 6> . < Example 6>

상기 실시예 5와 동일하며, 다만 유산균과 동일 중량비율로 일라이트 분말을 더 부가한 점에 차이가 있다.It is the same as Example 5, but there is a difference in that more illite powder is added in the same weight ratio as the lactic acid bacteria.

<사육 방법><Breeding method>

이어 5개의 사육 통을 준비하여 첫 번째는 실시예 4의 면역력 증진군 사료를 섭취한 시험군 4, 두 번째는 실시예 5의 면역력 증진군 사료를 섭취한 시험군 5, 세 번째는 실시예 6의 면역력 증진군 사료를 섭취한 시험군 6, 네 번째는 비교군 사료를 섭취한 비교군 2, 다섯 번째는 일반 톱밥 사료를 섭취한 대조군 2로 하였으며, 각각의 사육 통에는 굼벵이 개월 수가 동일하였으며, 그 무게 또한 동일한 것으로 선별하여 출하 10일 전에 각각의 사육통에 나누어 사육하였다.Subsequently, five breeding tubes were prepared, the first test group 4 eating the immunity enhancing group feed of Example 4, the second test group 5 eating the immunity enhancing group feed of Example 5, and the third being Example 6 The test group 6 consumed an immunity boosting group feed, the fourth control group 2 consumed a control group feed, and the fifth was a control group 2 that consumed a regular sawdust feed. The weight was also selected to be the same, and it was divided and bred in each breeding tube 10 days before shipment.

건강식품의 제조하기 전에 굼벵이의 무게는 사육 방법에 따라 의미가 있는 차이가 없었으며, 굼벵이를 이틀 동안 절식시킨 후에 동결건조하여 준비하였다.Before manufacturing health food, there was no significant difference in the weight of slugs depending on the breeding method, and the slugs were prepared by fasting for two days and then freeze-drying.

<< 시험예test example 3: 투여하기 전과 후의 혈액 중 3: in the blood before and after administration 임파구lymphocyte 수 변화> number change>

혈액을 기증한 시험자에게 상기 동결건조한 굼벵이를 투여하였으며, 투약하기 전과 투약 후의 혈액 중 임파구 변화(단위: %)를 측정하여 아래의 표 2에 나타냈다. 투여량은 1일 1회 2000mg이었다.The lyophilized slugs were administered to testers who donated blood, and changes in lymphocytes (unit: %) in the blood before and after administration were measured and shown in Table 2 below. The dose was 2000 mg once daily.

투여 전before administration 5일 투여 후 5 days after dosing 10일 투여 후10 days after administration 정상 범위normal range 시험군 4test group 4 2626 3636 4040
35∼41%

35-41%
시험군 5test group 5 2626 3838 4040 시험군 6test group 6 2626 4040 4141 비교군 2comparison group 2 2626 3030 3434 대조군 2Control 2 2626 2929 3232

상기 표 2를 보면, 본 발명의 시험군에서 투여 전에 면역력이 조금 떨어져 있었으나 5일 투여 후부터 정상범위에 있었으며, 10일 투여 후에는 정상 범위에서도 상위에 위치하였으나 비교군과 대조군에서는 정상 범위에 약간 못 미치나 투여 전 보다는 상승하였음을 확인할 수 있었다. Referring to Table 2, in the test group of the present invention, although the immunity was slightly lower before administration, it was within the normal range after administration on the 5th day, and after administration on the 10th day, it was located at the top of the normal range, but in the control group and the control group, it was slightly below the normal range. It was confirmed that it was increased compared to before Myitkyina administration.

특히 시험군 5 및 시험군 6에서는 투여 5일 만에 정상범위에서도 상위에 위치하는 결과를 보여 그 효과가 매우 현저함을 확인할 수 있었다.In particular, in test group 5 and test group 6, the results were found to be at the top even in the normal range after 5 days of administration, confirming that the effect was very remarkable.

이상에서 살펴본 바와 같은 본 발명에 따르면 우리가 섭취하는 천연물에 대하여 개인별로 면역력 증진에 미치는 영향을 측정하여 개인별로 면역력 증진에 효과가 있는 천연물을 선별하고 이 선별된 천연물을 굼벵이 사료로 제조하여 이 사료를 이용하여 사육된 굼벵이를 이용하는 경우 굼벵이를 이용한 개인별 맞춤형 면역 증진용 건강식품을 제조할 수 있다.As described above, according to the present invention, the effect of the natural products we ingest on the immunity enhancement of each individual is measured, and natural products effective for enhancing immunity are selected for each individual, and the selected natural products are prepared as slug feed to obtain this feed In the case of using slugs bred using slugs, it is possible to manufacture a personalized immune enhancing health food using slugs.

Claims (9)

a) 개인의 혈액과 천연물 소재를 이용하여 천연물 소재가 없을 때의 면역력과 천연물 소재를 첨가하였을 때의 면역력 변화를 비교하여 개인 맞춤형 면연력 증진 천연물을 탐색하는 천연물 탐색 단계:
b) 상기 탐색한 천연물을 15분간 고압멸균하고 냉각 후, 유산균을 상기 고압 멸균물의 중량 대비 5중량부가 되도록 투입하여 37℃에서 7일간 발효처리하여 얻은 고상 발효물을 100℃에서 30분간 다시 스팀살균처리하여 후 발효를 억제시켜 굼벵이 사료를 제조하는 굼벵이 사료 제조 단계; 및
c) 상기 제조된 사료를 이용하여 굼벵이를 사육하는 단계를
포함하고,
상기 b)단계에서 고압멸균 후에 멸균된 천연물에 다진 생강과 감초 분말을 넣고 볶은 다음 냉각하여 유산균을 투입하며,
상기 b)단계에서 유산균 투입 시 동량 중량으로 일라이트 분말을 더 투입하는 것을 특징으로 하는 개인별 맞춤형 면역 증진 건강식품을 제조하기 위한 굼벵이 사육 방법.
a) Natural product search step of searching for a personalized immunity-enhancing natural product by comparing the change in immunity when there is no natural product material and when the natural product material is added using the individual's blood and natural product material:
b) After sterilizing the searched natural product under high pressure for 15 minutes and cooling it, lactic acid bacteria were added in an amount of 5 parts by weight relative to the weight of the high-pressure sterilized material, and the solid fermentation product obtained by fermentation at 37 ° C for 7 days was steam sterilized again at 100 ° C for 30 minutes. A slug feed preparation step of preparing a slug feed by processing and suppressing post-fermentation; and
c) breeding slugs using the prepared feed
include,
After high-pressure sterilization in step b), minced ginger and licorice powder are added to the sterilized natural product, roasted, cooled, and lactic acid bacteria are added,
A slug breeding method for producing a personalized immune-enhancing health food, characterized in that when adding the lactic acid bacteria in step b), the illite powder is further added in the same weight.
제 1항에 있어서,
상기 유산균이 락토바실러스 카제이(Lactobacillus Casei)인 것을 특징으로 하는 개인별 맞춤형 면역 증진 건강식품을 제조하기 위한 굼벵이 사육 방법.
According to claim 1,
Slug breeding method for producing a personalized immune enhancing health food, characterized in that the lactic acid bacteria is Lactobacillus Casei .
제 1항 또는 제 2항에 있어서,
상기 (c) 단계는 상기 (b) 단계에서 제조한 사료를 굼벵이용 톱밥 사료에 혼합하여 굼벵이에게 섭취시키는 방식인 것을 특징으로 하는 개인별 맞춤형 면역 증진 건강식품을 제조하기 위한 굼벵이 사육 방법.
According to claim 1 or 2,
Wherein step (c) is a method of mixing the feed prepared in step (b) with sawdust feed for slugs and ingesting it to slugs.
제 3항에 있어서,
상기 굼벵이용 톱밥 사료에 상기 b) 단계에서 제조한 사료를 중량대비 1/25 포함시키는 것을 특징으로 하는 개인별 맞춤형 면역 증진 건강식품을 제조하기 위한 굼벵이 사육 방법.
According to claim 3,
A slug breeding method for producing a personalized immune-enhancing health food, characterized in that the sawdust feed for slugs contains 1/25 of the weight ratio of the feed prepared in step b).
제 1항 또는 제 2항에 있어서,
상기 (c) 단계는 상기 (b) 단계에서 제조한 사료를 굼벵이 출하 7 ~ 14일 전에 굼벵이 톱밥 사료를 공급을 중지하면서 굼벵이에게 섭취시키는 방식인 것을 특징으로 하는 개인별 맞춤형 면역 증진 건강식품을 제조하기 위한 굼벵이 사육 방법.
According to claim 1 or 2,
The step (c) is a method of ingesting the feed prepared in step (b) to the slugs while stopping the supply of sawdust feed to the slugs 7 to 14 days before the slugs are shipped. How to breed slugs for
제 1항 또는 제 2항에 의해 사육방법으로 사육된 굼벵이를 포함하는 것을 특징으로 하는 개인별 맞춤형 면역 증진용 건강식품 조성물.
A health food composition for personalized immunity enhancement, characterized in that it comprises slugs raised by the breeding method according to claim 1 or 2.
제 6항에 있어서, 상기 굼벵이는 건조 분말 또는 추출물 형태로 포함되는 것으로 특징으로 하는 개인별 맞춤형 면역 증진용 건강식품 조성물.


[Claim 7] The health food composition for personalized immunity enhancement according to claim 6, wherein the slugs are included in the form of dry powder or extract.


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