KR102469249B1 - Functional cosmetic and manufacturing method for the same - Google Patents
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Abstract
Description
본원은 화장품 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.The present application relates to cosmetics and methods for their preparation.
줄기세포란 미분화 세포로서, 장기간 동안 분열을 하고 자기 갱신(self-renewal)을 할 수 있으며, 어떤 조건이 주어지면 다양한 종류의 세포로 분화할 수 있는 세포를 말한다. 줄기세포는 기원되는 조직에 따라 배아줄기세포와 성체줄기세포로 분류되는데, 잠재 능력은 배아줄기세포보다 한정적인 단점이 있으나 윤리적 문제가 없고 부작용이 없는 성체줄기세포를 대상으로 많은 치료제가 연구되고 있다.Stem cells are undifferentiated cells, which can divide and self-renew for a long period of time, and refer to cells that can differentiate into various types of cells when certain conditions are given. Stem cells are classified into embryonic stem cells and adult stem cells depending on the tissue of origin. Although their potential has a limited disadvantage compared to embryonic stem cells, many treatments are being studied for adult stem cells that have no ethical problems and no side effects. .
줄기세포를 배양하게 되면 줄기세포는 배양액 내로 다양한 물질들을 분비한다. 이 배양액은 여러 연구에서 상당한 생화학적 활성을 가지고 있는 것으로 밝혀졌다. 최근에는, 이와 같이 줄기세포를 배양하여 유효물질을 극대화시킨 배양액을 이용하여 화장품 소재로 이용하려는 시도가 늘어나고 있다.When stem cells are cultured, the stem cells secrete various substances into the culture medium. This culture has been shown to have significant biochemical activity in several studies. Recently, attempts to use a culture medium in which effective substances are maximized by culturing stem cells in this way as a cosmetic material are increasing.
본원의 배경이 되는 기술인 한국 등록특허공보 제 10-13364748호는 퀀텀 지방 유래 성체줄기세포 배양액의 나노섬유 또는 나노캡슐을 포함하는 화장료 조성물 및 그 제조방법에 대한 것이다.Korean Patent Registration No. 10-13364748, which is the background of the present application, relates to a cosmetic composition comprising nanofibers or nanocapsules of adult stem cell culture medium derived from quantum fat and a method for manufacturing the same.
본원은 전술한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 화장품 및 이의 제조 방법을 제공한다.The present application is to solve the problems of the prior art described above, and provides cosmetics and a manufacturing method thereof.
다만, 본원의 실시예가 이루고자 하는 기술적 과제는 상기된 바와 같은 기술적 과제들로 한정되지 않으며, 또 다른 기술적 과제들이 존재할 수 있다.However, the technical problem to be achieved by the embodiments of the present application is not limited to the technical problems described above, and other technical problems may exist.
상기한 기술적 과제를 달성하기 위한 기술적 수단으로서, 본원의 제 1 측면은, 화장품의 제조 방법에 대한 것으로서, 다공성 PLLA 나노 입자를 포함하는 용액을 준비하는 단계, 상기 용액 및 줄기 세포로부터 유래된 배양 물질을 포함하는 배양액을 혼합하여 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 내부 및 외부를 상기 배양 물질로서 코팅하는 단계, 및 상기 용액 및 TiO2 가 용해된 히알루론산 용액을 혼합하여 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 외부를 히알루론산으로서 코팅하는 단계를 포함하는, 화장품의 제조 방법을 제공한다.As a technical means for achieving the above technical problem, the first aspect of the present application relates to a method for manufacturing cosmetics, preparing a solution containing porous PLLA nanoparticles, a culture material derived from the solution and stem cells. Coating the inside and outside of the porous PLLA nanoparticles with the culture material by mixing a culture medium containing a mixture, and mixing the solution and a hyaluronic acid solution in which TiO2 is dissolved to coat the outside of the porous PLLA nanoparticles with hyaluronic acid. It provides a method for manufacturing cosmetics, including the step of coating.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 직경은 50 nm 내지 200 nm 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the diameter of the porous PLLA nanoparticles may be 50 nm to 200 nm, but is not limited thereto.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 기공의 직경은 10 nm 내지 60 nm 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the diameter of the pores of the porous PLLA nanoparticles may be 10 nm to 60 nm, but is not limited thereto.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 배양액 및 상기 히알루론산 용액은 각각 독립적으로 비타민 C, 티페노이드, 뮤신, 알라토인, 글리콜릭산, 콜라겐, 엘라스틴, 상피 세포 성장 인자(Epidermal Growth Factor, EGF) 및 이들의 조합들로 이루어진 군에서 선택된 것을 추가 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the culture medium and the hyaluronic acid solution are each independently vitamin C, tifenoid, mucin, allatoin, glycolic acid, collagen, elastin, epidermal growth factor (EGF) and these It may further include one selected from the group consisting of combinations of, but is not limited thereto.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 용액 및 상기 배양액을 혼합하는 단계는 pH 가 7 내지 8 인 환경에서 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, mixing the solution and the culture medium may be performed in an environment having a pH of 7 to 8, but is not limited thereto.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 용액 및 상기 히알루론산 용액을 혼합하는 단계는, 10 kV 의 전압이 인가되는 환경에서 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the step of mixing the solution and the hyaluronic acid solution may be performed in an environment in which a voltage of 10 kV is applied, but is not limited thereto.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 다공성 PLLA 나노 입자가 히알루론산에 의해 코팅된 후, 50℃ 에서 열처리하는 단계 및 60℃ 에서 열처리하는 단계를 추가 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, after coating the porous PLLA nanoparticles with hyaluronic acid, heat treatment at 50°C and heat treatment at 60°C may be further included, but is not limited thereto.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 배양 물질은 엑소좀을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the culture material may include exosomes, but is not limited thereto.
또한, 본원의 제 2 측면은, 제 1 측면에 따라 제조된, 화장품에 대한 것이다.Also, the second aspect of the present application relates to a cosmetic, prepared according to the first aspect.
상술한 과제 해결 수단은 단지 예시적인 것으로서, 본원을 제한하려는 의도로 해석되지 않아야 한다. 상술한 예시적인 실시예 외에도, 도면 및 발명의 상세한 설명에 추가적인 실시예가 존재할 수 있다.The above-described problem solving means are merely exemplary and should not be construed as intended to limit the present disclosure. In addition to the exemplary embodiments described above, additional embodiments may exist in the drawings and detailed description of the invention.
본원에 따른 화장품은, 줄기 세포 유래 성분에 더하여 PLLA 와 같은 성분을 추가로 포함하여 단순히 줄기 세포 유래 성분 또는 PLLA 중 어느 하나만을 포함하는 화장품에 비해 피부 조직 재생 성능이 우수하다.The cosmetic according to the present application, in addition to the stem cell-derived component, further includes a component such as PLLA, and thus has excellent skin tissue regeneration performance compared to a cosmetic product simply containing either a stem cell-derived component or PLLA.
또한, 상기 화장품은 엑소좀, 히알루론산 및 셀룰로오스 나노 섬유를 포함하기 때문에, 피부 재생 성능이 우수할 뿐만 아니라, 피부에 도포된 화장품이 공기중으로 건조되는 것을 최소화할 수 있어 화장품의 효과 유지 기간이 길다.In addition, since the cosmetics include exosomes, hyaluronic acid, and cellulose nanofibers, skin regeneration performance is excellent, and drying of the cosmetics applied to the skin in the air can be minimized, so the effect of the cosmetics is maintained for a long time. .
또한, 본원에 따른 화장품은 TiO2 를 포함하기 때문에 자외선 차단 효과가 우수할 뿐만 아니라, 셀룰로오스 나노 섬유 및 히알루론산에 의해 피부 표면에 TiO2 가 고정될 수 있다. 즉, 상기 화장품이 도포된 피부에서 땀이 나더라도 TiO2 가 땀에 의해 흘러내리지 않을 수 있다.In addition, since the cosmetic according to the present application contains TiO 2 , it has excellent sunscreen effect, and TiO 2 can be fixed to the skin surface by cellulose nanofibers and hyaluronic acid. That is, even if the skin on which the cosmetic is applied sweats, TiO 2 may not flow down due to sweat.
다만, 본원에서 얻을 수 있는 효과는 상기된 바와 같은 효과들로 한정되지 않으며, 또 다른 효과들이 존재할 수 있다.However, the effects obtainable herein are not limited to the effects described above, and other effects may exist.
도 1 은 본원의 일 구현예에 따른 줄기 세포 성분을 포함하는 화장품의 제조 방법의 순서도이다.1 is a flow chart of a method for manufacturing a cosmetic comprising a stem cell component according to one embodiment of the present application.
아래에서는 첨부한 도면을 참조하여 본원이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본원의 실시예를 상세히 설명한다. 그러나 본원은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다. 그리고 도면에서 본원을 명확하게 설명하기 위해서 설명과 관계없는 부분은 생략하였으며, 명세서 전체를 통하여 유사한 부분에 대해서는 유사한 도면 부호를 붙였다.Hereinafter, embodiments of the present application will be described in detail so that those skilled in the art can easily practice with reference to the accompanying drawings. However, the present disclosure may be implemented in many different forms and is not limited to the embodiments described herein. And in order to clearly describe the present application in the drawings, parts irrelevant to the description are omitted, and similar reference numerals are attached to similar parts throughout the specification.
본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 다른 부분과 "연결"되어 있다고 할 때, 이는 "직접적으로 연결"되어 있는 경우뿐 아니라, 그 중간에 다른 소자를 사이에 두고 "전기적으로 연결"되어 있는 경우도 포함한다. Throughout this specification, when a part is said to be "connected" to another part, this includes not only the case of being "directly connected" but also the case of being "electrically connected" with another element in between. do.
본원 명세서 전체에서, 어떤 부재가 다른 부재 "상에", "상부에", "상단에", "하에", "하부에", "하단에" 위치하고 있다고 할 때, 이는 어떤 부재가 다른 부재에 접해 있는 경우뿐 아니라 두 부재 사이에 또 다른 부재가 존재하는 경우도 포함한다.Throughout the present specification, when a member is referred to as being “on,” “above,” “on top of,” “below,” “below,” or “below” another member, this means that a member is located in relation to another member. This includes not only the case of contact but also the case of another member between the two members.
본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.Throughout the present specification, when a part "includes" a certain component, it means that it may further include other components without excluding other components unless otherwise stated.
본 명세서에서 사용되는 정도의 용어 "약", "실질적으로" 등은 언급된 의미에 고유한 제조 및 물질 허용오차가 제시될 때 그 수치에서 또는 그 수치에 근접한 의미로 사용되고, 본원의 이해를 돕기 위해 정확하거나 절대적인 수치가 언급된 개시 내용을 비양심적인 침해자가 부당하게 이용하는 것을 방지하기 위해 사용된다. 또한, 본원 명세서 전체에서, "~ 하는 단계" 또는 "~의 단계"는 "~를 위한 단계"를 의미하지 않는다.As used herein, the terms "about," "substantially," and the like are used at or approximating that number when manufacturing and material tolerances inherent in the stated meaning are given, and are intended to assist in the understanding of this disclosure. Accurate or absolute figures are used to prevent undue exploitation by unscrupulous infringers of the stated disclosure. In addition, throughout the present specification, “steps of” or “steps of” do not mean “steps for”.
본원 명세서 전체에서, 마쿠시 형식의 표현에 포함된 "이들의 조합"의 용어는 마쿠시 형식의 표현에 기재된 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 혼합 또는 조합을 의미하는 것으로서, 상기 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 의미한다.Throughout the present specification, the term "combination thereof" included in the expression of the Markush form means one or more mixtures or combinations selected from the group consisting of the components described in the expression of the Markush form, and the components It means including one or more selected from the group consisting of.
본원 명세서 전체에서, "A 및/또는 B" 의 기재는, "A, B, 또는, A 및 B" 를 의미한다.Throughout this specification, reference to "A and/or B" means "A, B, or A and B".
이하, 본원의 화장품 및 이의 제조 방법에 대하여 구현예 및 실시예와 도면을 참조하여 구체적으로 설명하도록 한다. 그러나, 본원이 이러한 구현예 및 실시예와 도면에 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, the cosmetics of the present application and their manufacturing method will be described in detail with reference to embodiments and examples and drawings. However, the present application is not limited to these embodiments and examples and drawings.
상기한 기술적 과제를 달성하기 위한 기술적 수단으로서, 본원의 제 1 측면은, 다공성 PLLA 나노 입자를 포함하는 용액을 준비하는 단계, 상기 용액 및 줄기 세포로부터 유래된 배양 물질을 포함하는 배양액을 혼합하여 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 내부 및 외부를 상기 배양 물질로서 코팅하는 단계, 및 상기 용액 및 TiO2 가 용해된 히알루론산 용액을 혼합하여 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 외부를 히알루론산으로서 코팅하는 단계를 포함하는, 화장품의 제조 방법을 제공한다.As a technical means for achieving the above technical problem, the first aspect of the present application is to prepare a solution containing porous PLLA nanoparticles, mixing the solution and a culture medium containing a culture material derived from stem cells to Coating the inside and outside of porous PLLA nanoparticles with the culture material, and coating the outside of the porous PLLA nanoparticles with hyaluronic acid by mixing the solution and a hyaluronic acid solution in which TiO 2 is dissolved, A manufacturing method for cosmetics is provided.
본원에 따른 화장품은 줄기 세포 조직으로부터 유래된 성분이 포함된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이와 관련하여, 줄기 세포 조직 자체는 윤리적 문제나 인간 매개 전염균 등이 포함될 수 있어 화장품에 사용하는 것이 금지되었다. 배지 내에서 줄기 세포 조직을 배양한 후 상기 배지에서 줄기 세포 조직을 제거한 배양액은 줄기 세포 조직의 배양 과정에서 발생한 물질이 포함되어 있을 뿐, 줄기 세포 조직 자체를 포함하지 않기 때문에, 화장품에 사용될 수 있다.Cosmetics according to the present application may include ingredients derived from stem cell tissues, but are not limited thereto. In this regard, stem cell tissue itself has been banned from being used in cosmetics because it may contain ethical issues or human-borne infectious bacteria. After culturing the stem cell tissue in the medium, the culture medium in which the stem cell tissue is removed from the medium contains only substances generated in the process of culturing the stem cell tissue and does not contain the stem cell tissue itself, so it can be used in cosmetics. .
후술하겠지만, 본원에 따른 화장품은 선크림과 같은 자외선 차단제를 의미할 수 있다.As will be described later, cosmetics according to the present application may mean a sunscreen such as a sunscreen.
먼저, 다공성 PLLA 나노 입자를 포함하는 용액을 준비하였다 (S100).First, a solution containing porous PLLA nanoparticles was prepared (S100).
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 직경은 250 nm 내지 400 nm 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는, 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 직경은 300 nm 내지 350 nm 일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the diameter of the porous PLLA nanoparticles may be 250 nm to 400 nm, but is not limited thereto. Preferably, the diameter of the porous PLLA nanoparticles may be 300 nm to 350 nm.
상기 다공성 PLLA 나노 입자의 직경이 250 nm 미만일 경우 후술할 배양 물질이 내부에 배치되기 어렵고, 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 직경이 400 nm 를 초과할 경우 후술할 히알루론산에 의해 코팅된 다공성 PLLA 나노 입자의 크기가 너무 커져 상기 다공성 PLLA 나노 입자가 피부 내부까지 스며들지 못해 화장품의 효능이 저하될 수 있다.If the diameter of the porous PLLA nanoparticles is less than 250 nm, it is difficult to place the culture material therein, which will be described later, and if the diameter of the porous PLLA nanoparticles exceeds 400 nm, the porous PLLA nanoparticles coated with hyaluronic acid will be described later. Since the size is too large, the porous PLLA nanoparticles cannot permeate into the skin, and the efficacy of cosmetics may be reduced.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 기공의 직경은 10 nm 내지 60 nm 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는, 상기 PLLA 다공성 나노 입자의 기공의 직경은 20 nm 내지 50 nm 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the diameter of the pores of the porous PLLA nanoparticles may be 10 nm to 60 nm, but is not limited thereto. Preferably, the diameter of the pores of the PLLA porous nanoparticles may be 20 nm to 50 nm, but is not limited thereto.
구체적으로 상기 기공의 직경이 10 nm 미만일 경우 내부에 엑소좀 등이 침투할 수 없고, 상기 기공이 60 nm 를 초과할 경우, 배양 물질이 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 내부에 진입하더라도 쉽게 이탈될 수 있다.Specifically, when the diameter of the pore is less than 10 nm, exosomes cannot penetrate inside, and when the pore exceeds 60 nm, even if the culture material enters the inside of the porous PLLA nanoparticle, it can be easily escaped. .
이와 관련하여, 상기 기공은 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 표면에 존재하며, 후술하겠지만 상기 기공에 의해 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 내부는 배양 물질 및/또는 히알루론산 등에 의해 코팅될 수 있다.In this regard, the pores exist on the surface of the porous PLLA nanoparticles, and as will be described later, the inside of the porous PLLA nanoparticles may be coated with a culture material and/or hyaluronic acid due to the pores.
본원에 따른 PLLA 는 생분해성 고분자의 일종으로서, 종래의 필러 및 보톡스와 달리 인체 무해하면서도 콜라겐 및 진피 세포의 생성을 촉진할 수 있다.PLLA according to the present application is a kind of biodegradable polymer, and unlike conventional fillers and Botox, it can promote the production of collagen and dermal cells while being harmless to the human body.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 다공성 PLLA 나노 입자는, PLLA 를 아세톤에 용해시키는 단계, 이어서 상기 아세톤을 PBS(Phosphate-buffered saline) 용액에 적하하는 단계, 및 상기 PBS 용액을 가열하여 아세톤을 제거하는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the porous PLLA nanoparticles are prepared by dissolving PLLA in acetone, then dropping the acetone into a PBS (Phosphate-buffered saline) solution, and heating the PBS solution to remove acetone. It may include the step of doing, but is not limited thereto.
상기 PBS 용액은 pH 를 7 내지 8 로 일정하게 유지할 수 있는 용액으로서, 멸균처리된 것일 수 있다.The PBS solution is a solution capable of maintaining a constant pH at 7 to 8, and may be sterilized.
구체적으로, 상기 PLLA 가 용해된 아세톤을 PBS 용액에 적하한 후 PBS 용액을 가열하면, 끓는 점의 차이로 인해 상기 PBS 용액에 혼합된 아세톤이 기화되어 제거될 수 있다.Specifically, when the acetone in which the PLLA is dissolved is dropped into the PBS solution and the PBS solution is heated, the acetone mixed in the PBS solution may be vaporized and removed due to a difference in boiling point.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 PBS 용액에서 아세톤을 제거할 때, 상기 PBS 용액 내에 공기를 공급할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, when removing acetone from the PBS solution, air may be supplied into the PBS solution, but is not limited thereto.
상기 PBS 용액 내에 공기를 공급하면서 상기 PBS 용액을 가열할 경우, 용액 내의 기체의 용해도가 감소하여 공급된 공기가 상기 PBS 용액 밖으로 배출될 수 있다. 이 때, 상기 공기가 배출되면서 상기 PLLA 나노 입자에 복수의 기공을 형성함을 확인할 수 있다.When the PBS solution is heated while supplying air into the PBS solution, the solubility of the gas in the solution decreases and the supplied air may be discharged out of the PBS solution. At this time, it can be confirmed that a plurality of pores are formed in the PLLA nanoparticles while the air is discharged.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 공기의 공급 속도는 10 cc/sec 내지 50 cc/sec 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이 때, 상기 공기의 공급 속도는 PBS 용액의 부피가 150 ml(cc)일 때가 기준으로서, PBS 용액의 부피가 변화하면 초당 1/15(10 cc) 내지 1/3 (50 cc)가 공급되는 것을 의미한다.According to one embodiment of the present application, the air supply rate may be 10 cc/sec to 50 cc/sec, but is not limited thereto. At this time, the air supply rate is based on when the volume of the PBS solution is 150 ml (cc), and when the volume of the PBS solution changes, 1/15 (10 cc) to 1/3 (50 cc) is supplied per second means that
상기 공기의 공급 속도가 10 cc/sec 미만이면 다공성 PLLA 나노 입자의 형성 정도가 급감하고, 50 cc/sec 초과일 경우 공기가 과하게 공급되어 생성된 다공성 PLLA 나노 입자가 훼손되어 PLLA 나노 입자 구조체의 수가 오히려 감소하였다.If the air supply rate is less than 10 cc/sec, the degree of formation of porous PLLA nanoparticles is rapidly reduced, and if it exceeds 50 cc/sec, the porous PLLA nanoparticles generated due to excessive air supply are damaged, and the number of PLLA nanoparticle structures is reduced. rather decreased.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 공기는 상기 PBS 용액의 하부에 공급될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the air may be supplied to the bottom of the PBS solution, but is not limited thereto.
상기 PBS 용액에 공기를 공급할 때, 상기 PBS 용액의 표면에 공기를 불어줄 경우 공기가 PBS 용액 내에 용해되지 못하고 열에 의해 용액으로부터 이탈할 수 있다. 그러나, 상기 PBS 용액의 내로 호스를 연결한 후 공기를 공급하면 상기 공기가 PBS 용액에 용해된 후, 열에 의해 용해도가 낮아지면서 상기 기포 형태로 방출되고, 이 때 상기 방출 과정에서 PLLA 나노 입자와 충돌하여 다공성 PLLA 나노 입자가 형성될 수 있다.When air is supplied to the PBS solution, when air is blown on the surface of the PBS solution, the air cannot be dissolved in the PBS solution and may escape from the solution by heat. However, when air is supplied after connecting a hose into the PBS solution, the air is dissolved in the PBS solution, and then released in the form of bubbles as the solubility is lowered by heat, and at this time, collides with PLLA nanoparticles during the release process. Thus, porous PLLA nanoparticles may be formed.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 PBS 용액은 PVA(poly(vinyl alcohol))을 추가 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 PVA 는 상기 PLLA 가 PBS 용액 내에서 잘 분산되도록 하기 위한 것으로서, 상기 PLLA 나노 입자의 크기를 제어할 수 있다.According to one embodiment of the present application, the PBS solution may further include poly(vinyl alcohol) (PVA), but is not limited thereto. The PVA is used to ensure that the PLLA is well dispersed in the PBS solution, and the size of the PLLA nanoparticles can be controlled.
상기 다공성 PLLA 나노 입자는, 동적 광산란법(dynamic light scattering) 기법을 통해 측정될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The porous PLLA nanoparticles may be measured through a dynamic light scattering technique, but are not limited thereto.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 PBS 용액은 셀룰로오스 나노 섬유(cellulose nano fiber, CNF)를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the PBS solution may include cellulose nano fibers (CNF), but is not limited thereto.
상기 CNF 는 셀룰로오스 사슬이 다발을 이루며 결합한 나노 또는 마이크로 사이즈의 막대 형태의 입자 또는 섬유로서, 셀룰로오스 섬유를 1 wt% 내지 2 wt% 농도로 증류수와 혼합하여 현탁액을 만든 후 고압 균질기에 투입함으로써 제조될 수 있다. 이 때 현탁액 내에서 셀룰로오스 섬유의 농도가 1 wt% 미만일 경우 고압이 가해졌을 때 셀룰로오스 섬유끼리 접촉되는 정도가 적어 셀룰로오스 나노 섬유의 수율이 적고, 2 wt% 를 초과할 경우 셀룰로오스 섬유끼리 과하게 접촉되어 셀룰로오스 나노 섬유의 수율이 적다.The CNF is a nano- or micro-sized rod-shaped particle or fiber in which cellulose chains are bundled together, and is prepared by mixing the cellulose fibers with distilled water at a concentration of 1 wt% to 2 wt% to form a suspension and then introducing it into a high-pressure homogenizer. can At this time, when the concentration of the cellulose fibers in the suspension is less than 1 wt%, the degree of contact between the cellulose fibers is low when a high pressure is applied, resulting in a low yield of cellulose nanofibers, and when the concentration exceeds 2 wt%, the cellulose fibers are excessively contacted with each other, resulting in cellulose The yield of nanofibers is low.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 셀룰로오스 나노 섬유는, 셀룰로오스 섬유, 및 물을 혼합하여 현탁액을 형성하는 단계, 및 상기 현탁액을 고압 균질기 상에 통과시키는 단계를 포함하는 공정에 의해 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. According to one embodiment of the present application, the cellulose nanofibers may be prepared by a process comprising mixing cellulose fibers and water to form a suspension, and passing the suspension on a high pressure homogenizer. , but is not limited thereto.
이 때, 상기 셀룰로오스 섬유는, 파쇄된 상태일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.At this time, the cellulose fibers may be in a crushed state, but are not limited thereto.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 현탁액을 고압 균질기 상에 통과시킬 때, 상기 현탁액에 공기를 지속적으로 주입할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 공기는 상기 고압 균질기 내에서 상기 현탁액의 외부로 배출되지 못하나, 상기 셀룰로오스 섬유가 셀룰로오스 나노 섬유로 파쇄되는 것을 보조할 수 있고, 고압 균질기를 통과하면 자연스럽게 액체 외부로 배출될 수 있다.According to one embodiment of the present application, when passing the suspension on a high-pressure homogenizer, air may be continuously injected into the suspension, but is not limited thereto. The air is not discharged to the outside of the suspension in the high-pressure homogenizer, but can assist in crushing the cellulose fibers into cellulose nanofibers, and can be naturally discharged to the outside of the liquid when passing through the high-pressure homogenizer.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 현탁액에 주입되는 공기의 양은 1 cc/sec 내지 3 cc/sec 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 공기의 주입량이 1 cc/sec 미만일 경우 공기를 주입하지 않았을 때와 큰 차이가 없었고, 공기의 주입량이 3 cc/sec 초과일 경우 현탁액이 고압 균질기를 통과하는 과정에서 속도의 제어가 어려웠다.According to one embodiment of the present application, the amount of air injected into the suspension may be 1 cc/sec to 3 cc/sec, but is not limited thereto. When the air injection amount was less than 1 cc/sec, there was no significant difference from when no air was injected, and when the air injection amount exceeded 3 cc/sec, it was difficult to control the speed while the suspension passed through the high-pressure homogenizer.
상기 셀룰로오스 나노 섬유 및 상기 다공성 PLLA 나노 입자가 포함된 용액 내에서, 상기 다공성 PLLA 나노 입자는 상기 셀룰로오스 나노 입자에 의해 코팅될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In a solution containing the cellulose nanofibers and the porous PLLA nanoparticles, the porous PLLA nanoparticles may be coated with the cellulose nanoparticles, but is not limited thereto.
구체적으로, 후술할 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 내부 및 외부를 배양물질로서 코팅하는 단계를 수행하기 전, 상기 용액을 교반함으로써 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 표면 또는 내부에 상기 셀룰로오스 나노 섬유가 부착되도록 할 수 있으며, 이 때 온도를 올릴 경우 셀룰로오스 나노 섬유가 분해될 수 있다.Specifically, before performing the step of coating the inside and outside of the porous PLLA nanoparticles with a culture material, which will be described later, by stirring the solution, the cellulose nanofibers can be attached to the surface or inside of the porous PLLA nanoparticles. At this time, if the temperature is raised, the cellulose nanofibers may be decomposed.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 현탁액은 100 MPa 내지 200 MPa 의 압력을 받을 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는, 상기 현탁액은 150 MPa 의 압력을 받을 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the suspension may be subjected to a pressure of 100 MPa to 200 MPa, but is not limited thereto. Preferably, the suspension may be subjected to a pressure of 150 MPa, but is not limited thereto.
상기 현탁액을 고압 균질기 상에 통과시킬 때 100 MPa 내지 200 MPa 의 압력을 가하면, 상기 셀룰로오스 섬유의 표면에 존재할 수 있는 세균의 세포벽이 파괴되어 멸균되면서, 셀룰로오스 섬유들이 압력에 의해 분해되어 나노 섬유화 될 수 있다.When a pressure of 100 MPa to 200 MPa is applied when passing the suspension on a high-pressure homogenizer, the cell walls of bacteria that may be present on the surface of the cellulose fibers are destroyed and sterilized, and the cellulose fibers are decomposed by the pressure to become nanofibers can
이 때, 상기 고압 균질기의 압력이 100 MPa 미만이면 셀룰로오스 섬유의 분쇄 정도가 미약하여 셀룰로오스 나노 섬유와 셀룰로오스 섬유가 혼재될 수 있다.At this time, if the pressure of the high-pressure homogenizer is less than 100 MPa, the pulverization degree of the cellulose fibers is weak, so that the cellulose nanofibers and the cellulose fibers may be mixed.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 고압 균질기를 통과한 셀룰로오스 나노 섬유의 길이는 10 nm 내지 100 μm 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는, 상기 셀룰로오스 나노 섬유의 길이는 10 nm 내지 100 nm, 또는 30 μm 내지 100 μm 일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the length of the cellulose nanofibers passing through the high-pressure homogenizer may be 10 nm to 100 μm, but is not limited thereto. Preferably, the length of the cellulose nanofibers may be 10 nm to 100 nm, or 30 μm to 100 μm.
상기 셀룰로오스 나노 섬유의 직경은 수 내지 수십 나노미터로 매우 작기 때문에, 상기 셀룰로오스 나노 섬유의 길이 마저 나노미터 스케일일 경우 피부의 모공으로 흘러들어가 염증을 일으킬 수 있다. 이를 방지하기 위해서는, 셀룰로오스 나노 섬유의 길이를 10 nm 내지 100 nm 로 제어하면서 동시에 화장품에 Mg(OH)2 를 첨가하여 염증이 일어나더라도 대처가 가능하도록 하거나, 또는 셀룰로오스 나노 섬유의 길이를 30 μm 내지 100 μm 로 설정하여 모공에 상기 셀룰로오스 나노 섬유가 침투하지 못하도록 억제할 필요가 있다.Since the diameter of the cellulose nanofibers is very small, ranging from several to several tens of nanometers, when the length of the cellulose nanofibers is even on the nanometer scale, they may flow into skin pores and cause inflammation. In order to prevent this, while controlling the length of cellulose nanofibers to 10 nm to 100 nm, at the same time adding Mg (OH) 2 to cosmetics to cope with inflammation, or to reduce the length of cellulose nanofibers to 30 μm to It is necessary to set the cellulose nanofiber to 100 μm to prevent penetration of the cellulose nanofiber into the pores.
이와 관련하여, 상기 고압 균질기를 통과한 상기 셀룰로오스 나노 섬유의 길이는 수 내지 수십 마이크로미터일 수 있다. 그러나 상기 셀룰로오스 나노 섬유를 황산 환경 하에서 가수분해하면 상기 셀룰로오스 나노 섬유의 길이가 짧아질 수 있다. In this regard, the length of the cellulose nanofibers passing through the high-pressure homogenizer may be several to several tens of micrometers. However, when the cellulose nanofibers are hydrolyzed in a sulfuric acid environment, the length of the cellulose nanofibers may be shortened.
구체적으로, 상기 셀룰로오스 나노 섬유가 포함된 용액을 40 wt% 의 황산 용액과 혼합하고, 50℃ 에서 1 시간 가량 교반한 후 중화 공정 및 원심분리 공정을 거치면 10 nm 내지 100 nm 의 셀룰로오스 나노 섬유를 수득할 수 있다.Specifically, the solution containing the cellulose nanofibers was mixed with a 40 wt% sulfuric acid solution, stirred at 50 ° C. for about 1 hour, and then subjected to a neutralization process and a centrifugation process to obtain cellulose nanofibers of 10 nm to 100 nm can do.
이와 관련하여, 상기 셀룰로오스 나노 섬유는 후술할 화장품의 효과가 지속되는 시간과 연관될 수 있다. 구체적으로, 상기 셀룰로오스 나노 섬유 중 일부는 상기 다공성 PLLA 나노 입자끼리 연결할 수 있기 때문에, 상기 다공성 PLLA 나노 입자를 포함하는 화장품을 피부에 도포하면 셀룰로오스 나노 섬유에 의해 흘러내리지 않고 피부 표면에 오래 남을 수 있으며, 이는 피부 보습에 효과적이다.In this regard, the cellulose nanofibers may be related to the duration of the effect of cosmetics to be described later. Specifically, since some of the cellulose nanofibers can connect the porous PLLA nanoparticles to each other, when a cosmetic containing the porous PLLA nanoparticles is applied to the skin, it can remain on the skin surface for a long time without flowing down by the cellulose nanofibers, , which is effective in moisturizing the skin.
이어서, 상기 용액 및 줄기 세포로부터 유래된 배양 물질을 포함하는 배양액을 혼합하여 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 내부 및 외부를 상기 배양 물질로서 코팅한다. Subsequently, the solution and a culture medium containing a stem cell-derived culture medium are mixed to coat the inside and outside of the porous PLLA nanoparticles with the culture material.
이 때, 상기 배양 물질은 상기 다공성 PLLA 나노 입자 및/또는 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 표면 또는 내부 상에 부착된 셀룰로오스 나노 섬유 상에 코팅될 수 있다.In this case, the culture material may be coated on the porous PLLA nanoparticles and/or cellulose nanofibers attached to the surface or inside of the porous PLLA nanoparticles.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 배양 물질은 엑소좀을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the culture material may include exosomes, but is not limited thereto.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 배양액은 비타민 C, 티페노이드, 뮤신, 알라토인, 글리콜릭산, 콜라겐, 엘라스틴, 상피 세포 성장 인자(Epidermal Growth Factor, EGF) 및 이들의 조합들로 이루어진 군에서 선택된 것을 추가 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the culture medium is selected from the group consisting of vitamin C, tiffenoids, mucin, allatoin, glycolic acid, collagen, elastin, epidermal growth factor (EGF), and combinations thereof It may further include, but is not limited thereto.
상기 배양액은, 줄기 세포를 배지에 배치하고 줄기세포를 배양한 후 상기 줄기 세포를 배지에서 제거한 것을 의미한다. 이 때, 상기 배양액은 상기 줄기 세포가 배양하는 과정에서 방출한 엑소좀 뿐만 아니라, 상피 세포 성장 인자와 같은 물질을 포함할 수 있고, 상기 배지에 함유된 탄소원, 질소원, 무기 염류, 비타민류 등을 포함할 수 있다.The culture medium means that the stem cells are removed from the medium after placing the stem cells in a medium and culturing the stem cells. At this time, the culture medium may include substances such as epidermal cell growth factors as well as exosomes released during the process of culturing the stem cells, and carbon sources, nitrogen sources, inorganic salts, vitamins, etc. contained in the medium can include
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 줄기 세포는 인간 지방 조직 유래 줄기 세포를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 인간 지방 조직 유래 줄기 세포는 지방 흡입술로 채취한 지방 조직에서 유래된 줄기 세포이다.According to one embodiment of the present application, the stem cells may include human adipose tissue-derived stem cells, but are not limited thereto. The human adipose tissue-derived stem cells are stem cells derived from adipose tissue collected by liposuction.
본원에 따른 엑소좀은 세포 내에서 생성되어 외부로 방출되는 소낭(extracellular vesicles)의 이종으로서, 30 nm 내지 150 nm 의 소포체이다. 상기 엑소좀은 세포 간의 정보 전달 역할을 수행하는 것으로서, 다양한 지방 세포 조직의 에너지 대사에 영향을 미칠 수 있는 것으로 알려져 있다.The exosome according to the present application is a heterogeneous type of vesicles (extracellular vesicles) produced in cells and released to the outside, and is an endoplasmic reticulum of 30 nm to 150 nm. It is known that the exosome plays a role of transmitting information between cells and can affect energy metabolism of various fat cell tissues.
이와 관련하여, 상기 배양액의 pH 는 3.5 내지 4.5 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 배양액의 pH 가 3.5 내지 4.5 일 경우 다른 pH 범위에서 배양할 때에 비해 엑소좀이 더 많이 생성됨을 확인할 수 있다.In this regard, the pH of the culture medium may be 3.5 to 4.5, but is not limited thereto. When the pH of the culture solution is 3.5 to 4.5, it can be confirmed that more exosomes are produced than when cultured in other pH ranges.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 내부 및 외부는 상기 배양 물질에 의해 코팅될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the inside and outside of the porous PLLA nanoparticles may be coated with the culture material, but is not limited thereto.
상기 다공성 PLLA 나노 입자는 표면에 기공이 형성되어 있기 때문에, 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 기공보다 작은 크기의 배양 물질은 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 내부에 유입되어 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 내부에 위치할 수 있다.Since pores are formed on the surface of the porous PLLA nanoparticles, the culture material having a smaller size than the pores of the porous PLLA nanoparticles may flow into the porous PLLA nanoparticles and be located inside the porous PLLA nanoparticles. have.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 용액 및 상기 배양액을 혼합하는 단계는 pH 가 7 내지 8 인 환경에서 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, mixing the solution and the culture medium may be performed in an environment having a pH of 7 to 8, but is not limited thereto.
구체적으로, 상기 용액은 다공성 PLLA 나노 입자를 포함하는 PBS 용액으로서, PBS 용액에 의해 상기 배양액이 혼합되어도 pH 가 일정하게 유지될 수 있다.Specifically, the solution is a PBS solution containing porous PLLA nanoparticles, and even when the culture medium is mixed with the PBS solution, the pH can be maintained constant.
상기 다공성 PLLA 나노 입자가 포함된 용액과 혼합되는 배양액은 줄기 세포가 제거된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The culture solution mixed with the solution containing the porous PLLA nanoparticles may be stem cells removed, but is not limited thereto.
상기 용액 및 배양액을 혼합하는 단계에서, pH 를 7 내지 8 로 조절할 경우, 코팅 공정이 종료된 후 다공성 PLLA 나노 입자의 내부 및/또는 외부에 배치되지 않고 잔존한 엑소좀의 양이 적음을 확인할 수 있고, pH 를 7 미만 또는 8 초과로 조절한 후 상기 용액 및 배양액을 혼합할 경우 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 내부 및/또는 외부에 코팅된 엑소좀의 양이 적거나 효능이 저하됨을 확인할 수 있다.In the step of mixing the solution and the culture medium, when the pH is adjusted to 7 to 8, it can be confirmed that the amount of exosomes remaining without being placed inside and/or outside the porous PLLA nanoparticles after the coating process is finished is small. And, when the solution and the culture solution are mixed after adjusting the pH to less than 7 or more than 8, it can be confirmed that the amount of exosomes coated on the inside and / or outside of the porous PLLA nanoparticles is small or the efficacy is reduced.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 용액 및 배양액은 혼합 후 60 rpm 내지 180 rpm 의 속도로 교반될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the solution and culture medium may be stirred at a speed of 60 rpm to 180 rpm after mixing, but is not limited thereto.
이어서, 상기 용액 및 TiO2 가 용해된 히알루론산 용액을 혼합하여 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 외부를 히알루론산으로서 코팅한다.Next, the solution and the hyaluronic acid solution in which TiO 2 is dissolved are mixed to coat the outside of the porous PLLA nanoparticles with hyaluronic acid.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 히알루론산 용액은 비타민 C, 티페노이드, 뮤신, 알라토인, 글리콜릭산, 콜라겐, 엘라스틴, 상피 세포 성장 인자(Epidermal Growth Factor, EGF) 및 이들의 조합들로 이루어진 군에서 선택된 것을 추가 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the hyaluronic acid solution is a group consisting of vitamin C, tiffenoids, mucin, allantoin, glycolic acid, collagen, elastin, epidermal growth factor (EGF) and combinations thereof It may further include those selected from, but is not limited thereto.
본원에 따른 히알루론산은 다당류의 점액성 물질로서, 보습력이 뛰어나 피부 수분을 장시간 유지시켜줄 수 있다. 또한, 본원에 따른 화장품에서 히알루론산은, 상기 배양 물질로서 코팅된 다공성 PLLA 나노 입자를 코팅함으로써, 화장품이 도포된 피부의 보습력을 향상시키고, 다공성 PLLA 나노 입자가 공기 중에 노출되어 분해 또는 피부로부터 이탈하는 것을 억제할 수 있다.Hyaluronic acid according to the present application is a polysaccharide mucous substance, and has excellent moisturizing power, and can maintain skin moisture for a long time. In addition, in the cosmetic according to the present application, hyaluronic acid improves the moisturizing power of the skin to which the cosmetic is applied by coating the porous PLLA nanoparticles coated with the culture material, and the porous PLLA nanoparticles are exposed to the air to decompose or escape from the skin. can refrain from doing so.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 용액 및 상기 히알루론산 용액을 혼합하는 단계는, 10 kV 의 전압이 인가되는 환경에서 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the step of mixing the solution and the hyaluronic acid solution may be performed in an environment in which a voltage of 10 kV is applied, but is not limited thereto.
상기 배양 물질로서 코팅된 PLLA 나노 입자를 포함하는 용액과, 상기 히알루론산을 포함하는 용액을 혼합하고, 10 kV 의 전압을 가하면, 상기 셀룰로오스 나노 섬유의 음이온성 성질과 반응하여 상기 히알루론산이 상기 PLLA 나노 입자를 코팅하는 정도를 향상시킬 수 있고, 혼합 과정에서 첨가된 미생물을 제거할 수 있다.When a solution containing the PLLA nanoparticles coated as the culture material and a solution containing the hyaluronic acid are mixed and a voltage of 10 kV is applied, the hyaluronic acid reacts with the anionic nature of the cellulose nanofibers to form the PLLA The degree of coating the nanoparticles can be improved, and microorganisms added during the mixing process can be removed.
또한, 상기 히알루론산 용액은 TiO2 를 포함하는 것으로서, 상기 TiO2 는 상기 다공성 PLLA 나노 입자층 상에 히알루론산이 코팅됨으로써 형성된 히알루론산층의 표면 또는 내부에 존재할 수 있다. 상기 TiO2 는 자외선 차단을 수행할 수 있는 물질로서, 상기 화장품을 피부에 도포하면 TiO2 에 의해 자외선을 차단할 수 있어 피부를 보호할 수 있다.In addition, the hyaluronic acid solution contains TiO 2 , and the TiO 2 may be present on or inside a hyaluronic acid layer formed by coating hyaluronic acid on the porous PLLA nanoparticle layer. The TiO 2 is a material that can block ultraviolet rays, and when the cosmetics are applied to the skin, UV rays can be blocked by TiO 2 to protect the skin.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 TiO2 는 상기 다공성 PLLA 나노 입자 외부에 형성된 히알루론산으로 이루어진 층 상에 배치된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the TiO 2 may be disposed on a layer made of hyaluronic acid formed on the outside of the porous PLLA nanoparticles, but is not limited thereto.
피부 상에 배치된 TiO2 는 상기 화장품의 셀룰로오스 나노 섬유 및 히알루론산에 의해 고정되기 때문에, 도포된 피부에서 땀이 나더라도 TiO2가 흘러내리지 않을 수 있다.Since the TiO 2 disposed on the skin is fixed by the cellulose nanofibers and hyaluronic acid of the cosmetic product, TiO 2 may not flow down even if the skin to which it is applied is sweaty.
이 때, 상기 화장품이 피부에 덜 도포되거나 도포 후 시간이 지나더라도, 상기 화장품은 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 내부 및 외부에 포함된 배양 물질을 포함하기 때문에, 자외선에 의해 피부가 손상되더라도 회복할 수 있다.At this time, even if the cosmetic is less applied to the skin or time passes after application, the cosmetic can recover even if the skin is damaged by ultraviolet rays because it includes the culture material included inside and outside the porous PLLA nanoparticles. have.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 TiO2 의 입자 크기는 100 nm 내지 150 nm 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 TiO2 입자 크기가 100 nm 미만일 경우, 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 기공 내부의 엑소좀과 충돌하여 엑소좀을 나노 입자로부터 이탈시키거나, 또는 가시광선과 반응하여 열을 발생시켜 화장품이 도포된 피부가 뜨거워지는 문제가 발생할 수 있다. 또한, 상기 TiO2 입자 크기가 150 nm 를 초과할 경우, 상기 용액과 히알루론산 용액을 혼합할 때 상기 다공성 PLLA 나노 입자와 상기 TiO2 입자가 충돌하여 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 엑소좀 일부가 다공성 PLLA 나노 입자로부터 이탈하는 문제가 발생하였다.According to one embodiment of the present application, the particle size of the TiO 2 may be 100 nm to 150 nm, but is not limited thereto. When the TiO 2 particle size is less than 100 nm, it collides with the exosomes inside the pores of the porous PLLA nanoparticles to release the exosomes from the nanoparticles, or reacts with visible light to generate heat so that the skin coated with cosmetics There may be issues with heating up. In addition, when the TiO 2 particle size exceeds 150 nm, when the solution and the hyaluronic acid solution are mixed, the porous PLLA nanoparticles and the TiO 2 particles collide, resulting in a portion of the exosomes of the porous PLLA nanoparticles forming porous PLLA nanoparticles. A problem of separation from the nanoparticles occurred.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 다공성 PLLA 나노 입자가 히알루론산에 의해 코팅된 후, 50℃ 에서 열처리하는 단계 및 60℃ 에서 열처리하는 단계를 추가 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, after coating the porous PLLA nanoparticles with hyaluronic acid, heat treatment at 50°C and heat treatment at 60°C may be further included, but is not limited thereto.
상기 50℃ 에서 열처리하는 단계는 상기 히알루론산이 상기 다공성 PLLA 나노 입자로부터 이탈되지 않도록 하기 위한 것으로서, 상기 배양 물질 및 상기 셀룰로오스 나노 섬유는 최외곽의 히알루론산에 의해 열이 공급되지 않아 분자 구조가 훼손되지 않을 수 있다.The heat treatment at 50 ° C is to prevent the hyaluronic acid from being separated from the porous PLLA nanoparticles, and the culture material and the cellulose nanofibers are not supplied with heat by the outermost hyaluronic acid, so that the molecular structure is damaged It may not be.
또한, 상기 60℃ 에서 열처리하는 단계는, 다공성 PLLA 나노 입자층 상에 형성된 히알루론산의 표면 및 내부에 TiO2 가 배치될 수 있도록 조절하는 공정으로서, 이 때 60℃ 를 초과하는 온도에서 열처리하면 다공성 PLLA 나노 입자 내부의 엑소좀이 파괴되고, 60℃ 미만의 온도에서 열처리하면 TiO2 가 히알루론산으로 코팅된 PLLA 나노 입자로부터 이탈되어 자외선 차당 효과가 저하할 수 있다.In addition, the step of heat treatment at 60 ° C is a process of adjusting the TiO 2 to be disposed on the surface and inside of the hyaluronic acid formed on the porous PLLA nanoparticle layer. Exosomes inside the nanoparticles are destroyed, and when heat treatment is performed at a temperature of less than 60° C., TiO 2 is separated from the PLLA nanoparticles coated with hyaluronic acid, and the UV blocking effect may be reduced.
이 때, 상기 50℃ 에서 열처리하는 단계 및, 상기 60℃에서 열처리하는 단계 사이에는 상온으로 냉각하는 단계가 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In this case, a step of cooling to room temperature may be included between the heat treatment at 50° C. and the heat treatment at 60° C., but is not limited thereto.
상기 50℃ 로 열처리 후 냉각 없이 60℃ 로 열처리할 경우 히알루론산의 일부가 PLLA 나노 입자의 밖으로 이탈한 반면, 상온 냉각 단계를 포함하였을 경우 히알루론산의 이탈이 확인되지 않아 상기 화장품의 피부 보호 및 조직 재생능이 향상될 수 있다.In the case of heat treatment at 60 ° C without cooling after the heat treatment at 50 ° C, some of the hyaluronic acid escaped out of the PLLA nanoparticles, whereas when the room temperature cooling step was included, the escape of hyaluronic acid was not confirmed, thereby protecting the skin and tissue of the cosmetic Regeneration may be improved.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 화장품의 제조 방법은, 상기 히알루론산에 의해 코팅된 다공성 PLLA 나노 입자를 보습제, 용매, 계면 활성제, 점도 조절제, pH 조절제, 및 보존제와 혼합하는 단계를 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the manufacturing method of the cosmetic product may further include mixing the hyaluronic acid-coated porous PLLA nanoparticles with a moisturizer, a solvent, a surfactant, a viscosity modifier, a pH modifier, and a preservative. It may be, but is not limited thereto.
상기 히알루론산에 의해 코팅된 다공성 PLLA 나노 입자는, 화장품에 포함되는 피부 재생 성분의 일종으로서, 화장품에 상기 다공성 PLLA 나노 입자를 첨가시킴으로써 자외선 등에 의해 손상된 피부를 재생하고, 수분을 유지할 수 있어 피부 탄력을 유지할 수 있다. 그러나 상기 다공성 PLLA 나노 입자를 피부에 직접 도포하기는 어렵기 때문에, 상기 히알루론산에 의해 코팅된 다공성 나노 입자를 보습제, 용매, 계면 활성제, 점도 조절제, pH 조절제, 보존제 등 일반적인 화장품에 포함되는 다양한 성분들과 조합하여 화장품의 형테로 제조할 필요가 있다.The porous PLLA nanoparticles coated with hyaluronic acid are a type of skin regeneration component included in cosmetics, and by adding the porous PLLA nanoparticles to cosmetics, skin damaged by ultraviolet rays can be regenerated and moisture can be maintained, resulting in skin elasticity. can keep However, since it is difficult to directly apply the porous PLLA nanoparticles to the skin, the porous nanoparticles coated with hyaluronic acid are used as moisturizers, solvents, surfactants, viscosity modifiers, pH modifiers, and various ingredients included in general cosmetics such as preservatives. It is necessary to prepare it in the form of cosmetics in combination with
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 화장품은 자외선 차단제를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the cosmetic may include a sunscreen, but is not limited thereto.
본원에 따른 자외선 차단제는 자외선 차단을 위한 성분은 TiO2 뿐만 아니라, 엑소좀, 히알루론산, 셀룰로오스 나노 섬유, Mg(OH)2 등을 함께 포함하기 때문에, 자외선에 의해 자극된 피부의 개선에 도움이 될 수 있고, 도포한 피부에서 염증이 발생하는 것을 억제할 수 있으며, 보습성을 유지할 수 있다.Since the sunscreen according to the present application includes not only TiO 2 but also exosomes, hyaluronic acid, cellulose nanofibers, Mg(OH) 2 , etc. for sunscreen, it is helpful in improving skin stimulated by ultraviolet rays. It can be, can suppress the occurrence of inflammation in the applied skin, and can maintain moisturizing properties.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 화장품은, 식물 유래 추출물을 포함할 수 있고, 상기 식물 유래 추출물은 스페인감초 추출물, 라케모사승마뿌리 추출물, 하수오뿌리 추출물, 검은깨 추출물, 진흙버섯 추출물, 참당귀뿌리 추출물, 뽕나무껍질 추출물, 작약뿌리 추출물, 고삼뿌리 추출물, 황금 추출물, 검은콩 추출물, 귀리커넬 추출물, 녹차수, 하이드롤라이즈드콩단백질, 밀단백질을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the cosmetics may include plant-derived extracts, and the plant-derived extracts include Spanish licorice extract, Lakemosa horseback riding root extract, sewage root extract, black sesame extract, mud mushroom extract, and Angelica gigas. It may include root extract, mulberry bark extract, peony root extract, sorghum root extract, golden extract, black bean extract, oat kernel extract, green tea water, hydrolyzed soybean protein, and wheat protein, but is not limited thereto.
본원에 따른 녹차수는 피부 케어에 도움을 줄 수 있다.Green tea water according to the present application can help skin care.
또한, 스페인감초 추출물, 라케모사승마뿌리 추출물, 하수오뿌리 추출물, 검은깨 추출물, 진흙버섯 추출물, 참당귀뿌리 추출물, 뽕나무껍질 추출물, 작약뿌리 추출물, 고삼뿌리 추출물, 및 황금 추출물은 피부 케어에 도움을 줄 수 있는 물질이다.In addition, Spanish licorice extract, racemosa rhododendron root extract, rhododendron root extract, black sesame extract, mud mushroom extract, angelica root extract, mulberry bark extract, peony root extract, sorghum root extract, and golden extract help skin care. material that can be given.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 pH 조절제는 Mg(OH)2 를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the pH adjusting agent may include Mg(OH) 2 , but is not limited thereto.
상기 Mg(OH)2 는 화장품의 pH 를 조절할 수 있을 뿐만 아니라, 상기 화장품을 도포한 피부 표면 표피층 및/또는 내부 진피층에 염증이 발생할 경우 염증을 억제할 수 있다. 예를 들어, 상기 화장품의 다공성 PLLA 나노 입자나 셀룰로오스 나노 섬유가 피부 모공 내부로 침투한 후 피부의 세포벽을 손상시켜 염증을 일으키더라도, 상기 Mg(OH)2 에 의해 염증이 완화 또는 억제될 수 있다.The Mg(OH) 2 can not only adjust the pH of cosmetics, but also suppress inflammation when inflammation occurs in the skin surface epidermal layer and/or inner dermal layer to which the cosmetic is applied. For example, even if the porous PLLA nanoparticles or cellulose nanofibers of the cosmetics penetrate into the skin pores and damage the cell walls of the skin to cause inflammation, the inflammation can be alleviated or suppressed by the Mg(OH) 2 .
또한, 본원의 제 2 측면은, 제 1 측면에 따라 제조된, 화장품에 대한 것이다.Also, the second aspect of the present application relates to a cosmetic, prepared according to the first aspect.
본원의 제 2 측면에 따른 화장품에 대하여, 본원의 제 1 측면과 중복되는 부분들에 대해서는 상세한 설명을 생략하였으나, 그 설명이 생략되었더라도 본원의 제 1 측면에 기재된 내용은 본원의 제 2 측면에 동일하게 적용될 수 있다.With respect to the cosmetics according to the second aspect of the present application, detailed descriptions of portions overlapping with those of the first aspect of the present application have been omitted, but even if the description is omitted, the contents described in the first aspect of the present application are the same as those of the second aspect of the present application. can be applied
상술한 과제 해결 수단은 단지 예시적인 것으로서, 본원을 제한하려는 의도로 해석되지 않아야 한다. 상술한 예시적인 실시예 외에도, 도면 및 발명의 상세한 설명에 추가적인 실시예가 존재할 수 있다.The above-described problem solving means are merely exemplary and should not be construed as intended to limit the present disclosure. In addition to the exemplary embodiments described above, additional embodiments may exist in the drawings and detailed description of the invention.
이하 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 하나, 하기의 실시예는 단지 설명의 목적을 위한 것이며 본원의 범위를 한정하고자 하는 것은 아니다. The present invention will be described in more detail through the following examples, but the following examples are for illustrative purposes only and are not intended to limit the scope of the present application.
[실시예 1][Example 1]
먼저 다공성 PLLA 나노 입자를 생성하기 위해, PLLA 200 mg 를 아세톤 10 ml 에 용해시키고, 이어서 상기 아세톤을 0.4 wt% 의 농도로 PVA 가 용해되고 pH 가 7 내지 8 인 PBS 용액 150 ml 에 적하한 후, 상기 PBS 용액 내에 공기를 30 cc/sec 씩 주입하면서 60℃에서 가열하여 아세톤을 제거하여, 다공성 PLLA 나노 입자를 형성하였다. 이 때, 상기 PLLA 의 질량, 아세톤 및 PBS 용액의 부피, 공기의 주입량 등은 조절가능하다.First, to produce porous PLLA nanoparticles, 200 mg of PLLA was dissolved in 10 ml of acetone, and then the acetone was added dropwise to 150 ml of a PBS solution in which PVA was dissolved at a concentration of 0.4 wt% and the pH was 7 to 8, Porous PLLA nanoparticles were formed by heating at 60° C. while injecting air into the PBS solution at a rate of 30 cc/sec to remove acetone. At this time, the mass of the PLLA, the volume of the acetone and PBS solutions, and the injection amount of air can be adjusted.
또한, 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 생성 과정과는 동시에 또는 별도로, 셀룰로오스 분말 1.5 g 을 증류수 100 ml 에 혼합하여 현탁액을 제조한 후, 상기 현탁액을 150 MPa 의 압력을 가할 수 있는 고압 균질기를 통과시켜 직경이 나노 미터 단위이고, 길이가 30 μm 내지 100 nm 인 셀룰로오스 나노 섬유를 형성하였다. 이 때, 상기 고압 균질기에 현탁액을 공급할 때 현탁액에 공기를 1 cc/sec 의 양으로 공급하였다.In addition, simultaneously with or separately from the process of producing the porous PLLA nanoparticles, a suspension was prepared by mixing 1.5 g of cellulose powder with 100 ml of distilled water, and then the suspension was passed through a high-pressure homogenizer capable of applying a pressure of 150 MPa to obtain a diameter Cellulose nanofibers with a length of 30 µm to 100 nm in nanometers were formed. At this time, when supplying the suspension to the high-pressure homogenizer, air was supplied to the suspension in an amount of 1 cc/sec.
또한, 지방흡입술을 통해 채취한 인간 지방 조직 유래 줄기 세포를 pH 가 4 인 배지에 배치하고 1주 내지 2주간 배양한 후 지방 유래 줄기 세포를 배지로부터 제거하여 배양 물질인 엑소좀이 포함된 배양액을 준비하였다. 이 때, 상기 배양액은 상피 세포 성장 인자를 추가로 포함할 수 있다.In addition, human adipose tissue-derived stem cells collected through liposuction are placed in a medium with a pH of 4 and cultured for 1 to 2 weeks, and then the adipose-derived stem cells are removed from the medium to obtain a culture medium containing exosomes, a culture material. prepared. At this time, the culture medium may further include an epidermal cell growth factor.
이어서, 상기 다공성 PLLA 나노 입자가 포함된 PBS 용액, 셀룰로오스 나노 섬유, 및 상기 배양액을 혼합하고, pH 을 7.5 로 조절한 후, 120 rpm 의 속도로 교반하여 엑소좀 코팅된 PLLA 나노 입자를 포함하는 용액을 준비하였다.Subsequently, the PBS solution containing the porous PLLA nanoparticles, the cellulose nanofibers, and the culture medium were mixed, the pH was adjusted to 7.5, and then stirred at a speed of 120 rpm to obtain a solution containing the exosome-coated PLLA nanoparticles. prepared.
이어서, 비타민 C 및 입자의 크기가 120 nm 인 TiO2 100 mg 을 포함하는 히알루론산 용액 1 L 및 상기 엑소좀 코팅된 PLLA 나노 입자를 포함하는 용액을 혼합하고, 10 kV 의 전압을 인가한 후, 50℃ 에서 1 차 열처리하고, 상온으로 냉각한 후, 60℃에서 2 차 열처리 함으로써, 기능성 PLLA 나노 입자를 포함하는 용액을 형성하였다.Subsequently, 1 L of a hyaluronic acid solution containing vitamin C and 100 mg of TiO 2 having a particle size of 120 nm and a solution containing the exosome-coated PLLA nanoparticles were mixed, and a voltage of 10 kV was applied, A solution containing functional PLLA nanoparticles was formed by first heat treatment at 50°C, cooling to room temperature, and then second heat treatment at 60°C.
이어서, 상기 기능성 PLLA 나노 입자를 포함하는 용액 상에, Mg(OH)2, 보습제, 용매, 계면활성제, pH 조절제, 점도 조절제, 보존제 등 일반적인 화장품에 포함되는 물질과, 스페인감초 추출물, 라케모사승마뿌리 추출물, 하수오뿌리 추출물, 검은깨 추출물, 진흙버섯 추출물, 참당귀뿌리 추출물, 뽕나무껍질 추출물, 작약뿌리 추출물, 고삼뿌리 추출물, 황금 추출물, 검은콩 추출물, 귀리커넬 추출물, 녹차수, 하이드롤라이즈드콩단백질, 밀단백질을 포함하는 식물 유래 추출물을 혼합하여, 자외선 차단제를 제조하였다. 이 때, 상기 샴푸 100 중량부에 대해 기능성 PLLA 나노 입자는 2 중량부이고, 상기 식물 유래 추출물은 0.1 중량부 내지 1 중량부일 수 있다.Then, on the solution containing the functional PLLA nanoparticles, Mg (OH) 2 , moisturizers, solvents, surfactants, pH adjusters, viscosity modifiers, substances included in general cosmetics such as preservatives, Spanish licorice extract, racemosa horse Root extract, sagebrush extract, black sesame extract, mud mushroom extract, angelica root extract, mulberry bark extract, peony root extract, sorghum root extract, golden extract, black bean extract, oat kernel extract, green tea water, hydrolyzed soybean A sunscreen was prepared by mixing plant-derived extracts including proteins and wheat proteins. In this case, the functional PLLA nanoparticles may be 2 parts by weight and the plant-derived extract may be 0.1 to 1 part by weight, based on 100 parts by weight of the shampoo.
[실시예 2] [Example 2]
실시예 1 과 동일하되, 세룰로오스 나노 섬유를 형성한 후 셀룰로오스 나노 섬유가 포함된 용액을 40 wt% 의 황산 용액과 혼합하고, 60℃ 에서 1 시간 가량 교반한 후 중화 공정 및 원심분리 공정을 거치면 10 nm 내지 100 nm 의 셀룰로오스 나노 섬유를 수득하였다.Same as Example 1, but after forming the cellulose nanofibers, the solution containing the cellulose nanofibers was mixed with a 40 wt% sulfuric acid solution, stirred at 60 ° C. for about 1 hour, and then neutralized and centrifuged. After passing through, cellulose nanofibers of 10 nm to 100 nm were obtained.
[비교예 1-1][Comparative Example 1-1]
실시예 1 과 동일하되, PVA 가 용해되지 않은 PBS 용액을 사용하였다.The same as in Example 1, but a PBS solution in which PVA was not dissolved was used.
[비교예 1-2][Comparative Example 1-2]
실시예 1 과 동일하되, PBS 용액 상에 공기를 주입하지 않았다.Same as Example 1, but no air was blown over the PBS solution.
[비교예 1-3][Comparative Example 1-3]
실시예 1 과 동일하되, PBS 용액의 표면에 공기를 30 cc/sec 의 속도로 주입하였다.Same as in Example 1, but air was injected into the surface of the PBS solution at a rate of 30 cc/sec.
[비교예 1-4][Comparative Example 1-4]
실시예 1 과 동일하되, PBS 용액 내에 공기를 5 cc/sec 의 속도로 주입하였다.Same as in Example 1, but air was injected into the PBS solution at a rate of 5 cc/sec.
[비교예 1-5][Comparative Example 1-5]
실시예 1 과 동일하되, PBS 용액 내에 공기를 60 cc/sec 의 속도로 주입하였다.Same as in Example 1, but air was injected into the PBS solution at a rate of 60 cc/sec.
[비교예 1-6][Comparative Example 1-6]
실시예 1 과 동일하되, 가열 온도를 80℃로 하였다.Same as Example 1, but the heating temperature was set to 80°C.
[비교예 1-6][Comparative Example 1-6]
실시예 1 과 동일하되, 아세톤을 제거하는 과정을 생략하였다.Same as Example 1, but the process of removing acetone was omitted.
[비교예 2-1][Comparative Example 2-1]
실시예 1 과 동일하되, 고압 균질기에서 가하는 압력을 90 MPa 로 조절하였다.Same as Example 1, but the pressure applied in the high-pressure homogenizer was adjusted to 90 MPa.
[비교예 2-2][Comparative Example 2-2]
실시예 1 과 동일하되, 고압 균질기에서 가하는 압력을 210 MPa 로 조절하였다.Same as Example 1, but the pressure applied in the high-pressure homogenizer was adjusted to 210 MPa.
[비교예 2-3][Comparative Example 2-3]
실시예 1 과 동일하되, 고압 균질기에 공급되는 현탁액에 주입되는 공기의 양을 0.9 cc/sec 로 조절하였다.Same as Example 1, but the amount of air injected into the suspension supplied to the high-pressure homogenizer was adjusted to 0.9 cc/sec.
[비교예 2-4][Comparative Example 2-4]
실시예 1 과 동일하되, 고압 균질기에 공급되는 현탁액에 주입되는 공기의 양을 3.1 cc/sec 로 조절하였다.Same as Example 1, but the amount of air injected into the suspension supplied to the high-pressure homogenizer was adjusted to 3.1 cc/sec.
[비교예 3-1][Comparative Example 3-1]
실시예 1 과 동일하되, 지방 유래 줄기 세포를 배양할 때, pH 를 1 로 조절하였다.Same as in Example 1, but pH was adjusted to 1 when culturing adipose-derived stem cells.
[비교예 3-2][Comparative Example 3-2]
실시예 1 과 동일하되, 지방 유래 줄기 세포를 배양할 때, pH 를 7 로 조절하였다.Same as Example 1, but pH was adjusted to 7 when culturing adipose-derived stem cells.
[비교예 3-3][Comparative Example 3-3]
실시예 1 과 동일하되, 지방 유래 줄기 세포를 배양할 때, pH 를 10 로 조절하였다.Same as in Example 1, but pH was adjusted to 10 when adipose-derived stem cells were cultured.
[비교예 4-1][Comparative Example 4-1]
실시예 1 과 동일하되, 기능성 PLLA 나노 입자를 형성할 때 10 kV 의 전압을 인가하는 공정을 생략하였다.Same as Example 1, but the step of applying a voltage of 10 kV was omitted when forming the functional PLLA nanoparticles.
[비교예 4-2][Comparative Example 4-2]
실시예 1 과 동일하되, 기능성 PLLA 나노 입자를 형성할 때 50℃ 에서 열처리하는 공정을 생략하였다.Same as Example 1, but the process of heat treatment at 50° C. was omitted when forming the functional PLLA nanoparticles.
[비교예 4-3][Comparative Example 4-3]
실시예 1 과 동일하되, 히알루론산 없이 엑소좀 코팅된 PLLA 나노 입자를 열처리하였다.Exosome-coated PLLA nanoparticles were heat-treated in the same manner as in Example 1, but without hyaluronic acid.
[비교예 4-4][Comparative Example 4-4]
실시예 1 과 동일하되, 셀룰로오스 나노 섬유를 형성하는 공정을 생략하여 PBS 용액과 배양액 만을 혼합하였다.Same as Example 1, but the process of forming cellulose nanofibers was omitted, and only the PBS solution and the culture medium were mixed.
[비교예 5-1][Comparative Example 5-1]
실시예 1 과 동일하되, 다공성 PLLA 나노 입자를 포함하는 용액과 배양액을 혼합할 때의 pH 를 6 으로 조절하였다.Same as in Example 1, but the pH was adjusted to 6 when mixing the solution containing the porous PLLA nanoparticles and the culture medium.
[비교예 5-2][Comparative Example 5-2]
실시예 1 과 동일하되, 다공성 PLLA 나노 입자를 포함하는 용액과 배양액을 혼합할 때의 pH 를 9 으로 조절하였다.Same as in Example 1, but the pH was adjusted to 9 when mixing the solution containing the porous PLLA nanoparticles and the culture medium.
[비교예 6-1][Comparative Example 6-1]
실시예 1 과 동일하되, TiO2 를 첨가하지 않았다.Same as Example 1, but without adding TiO 2 .
[비교예 6-2][Comparative Example 6-2]
실시예 1 과 동일하되, TiO2 의 입자 크기를 160 nm 로 조절하였다.Same as Example 1, but the particle size of TiO 2 was adjusted to 160 nm.
[비교예 6-3][Comparative Example 6-3]
실시예 1 과 동일하되, TiO2 의 입자 크기를 80 nm 로 조절하였다.Same as Example 1, but the particle size of TiO 2 was adjusted to 80 nm.
[비교예 6-4][Comparative Example 6-4]
실시예 1 과 동일하되, 2 차 열처리 온도를 80℃ 로 조절하였다.Same as Example 1, but the secondary heat treatment temperature was adjusted to 80°C.
[비교예 6-5][Comparative Example 6-5]
실시예 1 과 동일하되, 2 차 열처리 온도를 50℃ 로 조절하였다.Same as Example 1, but the secondary heat treatment temperature was adjusted to 50°C.
[실시예 6-6][Example 6-6]
실시예 1 과 동일하되, 1 차 열처리와 2 차 열처리를 연달아서 수행하였다.Same as Example 1, but the first heat treatment and the second heat treatment were performed consecutively.
[실험예 1][Experimental Example 1]
실시예 1 과, 비교예 1-1 내지 1-5 를 비교하여 다공성 PLLA 나노 입자를 비교하였다.Porous PLLA nanoparticles were compared by comparing Example 1 and Comparative Examples 1-1 to 1-5.
[표 1][Table 1]
표 1 에서, 평균 입자 크기 및 평균 기공 크기는 동적 광 산란법 및 SEM 촬영을 통해 계산하였고, 수율은 PBS 용액으로부터 다공성 PLLA 나노 입자를 원심분리하여 얻었을 때 수득된 질량과 PLLA 200 mg 사이의 비율을 의미한다.In Table 1, the average particle size and average pore size were calculated through dynamic light scattering and SEM imaging, and the yield was the ratio between the mass obtained by centrifuging porous PLLA nanoparticles from a PBS solution and 200 mg of PLLA. means
표 1 에서, 비교예 1-2 및 1-3 과 같이 공기를 주입하지 않거나 PBS 용액의 표면에만 공기를 주입한 경우, 다공성 PLLA 나노 입자 뿐만 아니라 기공이 없는 PLLA 나노 입자가 형성되었고, 이 중 기공이 없는 PLLA 나노 입자의 수가 더 많은 것으로 확인되었기 때문에, 평균 기공 크기를 측정하지 않았다.In Table 1, when air was not injected or air was injected only on the surface of the PBS solution as in Comparative Examples 1-2 and 1-3, porous PLLA nanoparticles as well as poreless PLLA nanoparticles were formed, among which pores Since the number of PLLA nanoparticles without these was found to be higher, we did not measure the average pore size.
표 1 을 참조하면, PVA 를 사용하지 않은 비교예 1-1 의 경우, 다공성 PLLA 나노 입자 끼리 응집되어 크기가 더 커졌고, 그 결과 화장품으로서 피부에 흡수되는 비율이 저하됨을 확인할 수 있었다. Referring to Table 1, in the case of Comparative Example 1-1 without using PVA, the size of the porous PLLA nanoparticles increased due to aggregation, and as a result, it was confirmed that the rate of absorption into the skin as a cosmetic decreased.
비교예 1-4 는 공기 주입량이 적어 평균 입자 크기 및 평균 기공 크기가 실시예 1 에 비해 더 크게 측정되었기 문에, 실시예 1 의 다공성 PLLA 나노 입자 대비 피부 흡수율이 낮을 수 있다. 또한, 실시예 1 및 비교예 1-4 에 따라 다공성 PLLA 나노 입자와 배양액을 혼합한 후 엑소좀으로 코팅된 PLLA 나노 입자를 원심분리 공정으로 추출하였을 때, 남은 용액 내의 엑소좀의 양은 비교예 1-4 의 용액이 더 많았다. 이는 기공이 클수록 다공성 PLLA 나노 입자 내부에 엑소좀이 주입되는 만큼, 외부로 방출되는 엑소좀의 양이 많고, 기공이 커지면 용액과 배양액을 장시간 교반해야 기공이 작을 때와 유사한 효과를 갖는 PLLA 나노 입자를 제조할 수 있어 효율이 저하됨을 확인할 수 었다.In Comparative Examples 1-4, the average particle size and average pore size were measured larger than those of Example 1 due to a small amount of air injection, so the skin absorption rate may be lower than that of the porous PLLA nanoparticles of Example 1. In addition, after mixing the porous PLLA nanoparticles and the culture solution according to Example 1 and Comparative Examples 1-4, when the exosome-coated PLLA nanoparticles were extracted by centrifugation, the amount of exosomes in the remaining solution was the same as in Comparative Example 1. There were more solutions of -4. This is because the larger the pores, the more exosomes are injected into the porous PLLA nanoparticles, so the amount of exosomes released to the outside increases. It was confirmed that the efficiency was reduced because it could be produced.
한편, 비교예 1-5 의 경우 평균 입자 크기 및 평균 기공 크기가 실시예 1 에 비해 작게 측정되었으나, 공기 공급 양이 많아 다공성 PLLA 나노 입자가 분해되어 PBS 용액 내에 PLLA 가 용해된 상태로 존재하였다.On the other hand, in the case of Comparative Examples 1-5, the average particle size and average pore size were measured smaller than those of Example 1, but the amount of air supplied was large, so the porous PLLA nanoparticles were decomposed, and the PLLA was dissolved in the PBS solution.
한편, 비교예 1-6 의 경우 평균 기공 크기가 실시예 1 에 비해 작으며, 이는 용액 내의 공기의 용해도가 급감하여 생긴 현상으로 확인되었다. 그러나, 비교예 1-6 의 다공성 PLLA 나노 입자는 내부에 엑소좀 등의 배양 물질이 진입할 수 없어 실시예 1 에 비해 효능이 떨어짐을 확인할 수 있었다.On the other hand, in the case of Comparative Examples 1-6, the average pore size was smaller than that of Example 1, which was confirmed as a phenomenon caused by a sharp decrease in the solubility of air in the solution. However, it was confirmed that the porous PLLA nanoparticles of Comparative Examples 1-6 were less effective than those of Example 1 because culture materials such as exosomes could not enter therein.
한편, 비교예 1-7 의 경우 아세톤을 제거하는 공정을 생략하였고, 아세톤의 끓는점이 56℃임을 감안하면 후술할 열처리 공정에서도 제거되지 않았기 때문에, 상기 비교예 1-7 의 다공성 PLLA 나노 입자를 사용한 화장품을 바른 피부에서 피부가 손상되는 문제가 확인되었다.On the other hand, in the case of Comparative Example 1-7, the process of removing acetone was omitted, and considering that the boiling point of acetone is 56 ° C., it was not removed even in the heat treatment process described later. The problem of skin damage was confirmed on skin with cosmetics applied.
[실험예 2][Experimental Example 2]
실시예 1 과, 비교예 2-1 내지 2-4 에 따른 공정으로 제조된, 셀룰로오스 나노 섬유의 크기를 비교하였다.The sizes of cellulose nanofibers prepared by the processes according to Example 1 and Comparative Examples 2-1 to 2-4 were compared.
실시예 1 의 셀룰로오스 나노 섬유는 평균 직경이 30 nm 이고, 평균 길이가 35 μm 로 측정되었으나, 비교예 2-1 의 나노 섬유는 평균 직경이 1 μm, 평균 길이가 120 μm 정도로 측정되어 분쇄 정도가 미비하고, 비교예 2-2 의 나노 섬유는 평균 직경이 29 nm, 평균 길이가 34 μm 로 실시예 1 에 비해 소요하는 에너지는 많으면서 평균 직경 및 길이가 오차범위내로 측정되었다. 또한, 비교예 2-3 의 경우 공기를 주입하지 않았을 때와 같이 평균 직경이 수 마이크로미터, 평균 길이가 137 μm 로 측정되었다. 또한, 비교예 2-4 의 경우, 실시예 1 과 유사한 평균 직경 및 평균 길이를 갖는 나노 섬유가 제조되었으나, 상기 나노 섬유가 포함된 현탁액이 고압 균질기를 통과하는 과정에서 유로를 벗어나거나, 배출시 갑작스러운 감압에 의해 현탁액이 튀면서 기기가 부분적으로 파손되는 문제가 지속적으로 확인되었다.The cellulose nanofibers of Example 1 had an average diameter of 30 nm and an average length of 35 μm, but the nanofibers of Comparative Example 2-1 had an average diameter of 1 μm and an average length of 120 μm. Insufficient, the nanofibers of Comparative Example 2-2 had an average diameter of 29 nm and an average length of 34 μm, and the average diameter and length were measured within the error range while consuming more energy than in Example 1. In addition, in the case of Comparative Example 2-3, the average diameter was measured as several micrometers and the average length was 137 μm, as in the case of not injecting air. In addition, in the case of Comparative Examples 2-4, nanofibers having an average diameter and average length similar to those of Example 1 were prepared, but the suspension containing the nanofibers escaped from the flow path in the process of passing through the high-pressure homogenizer, or when discharged The problem of partial breakage of the device due to the splashing of the suspension due to sudden depressurization was continuously confirmed.
[실험예 3][Experimental Example 3]
실시예 1 과, 비교예 3-1 내지 3-3 의 엑소좀 함량을 분석하였다.The exosome contents of Example 1 and Comparative Examples 3-1 to 3-3 were analyzed.
실시예 1 의 엑소좀 함량을 1 로 측정하였을 때, 비교예 3-1 의 함량은 0.7 이었고, 비교예 3-2 의 함량은 0.6이었으며, 비교예 3-3 은 0.6 정도로, 비교예 3-1 내지 3-3 의 배양액 내의 엑소좀의 함량이 실시예 1 의 배양액의 엑소좀 함량보다 낮기 때문에, 화장품의 피부 재생능 등의 효능이 낮았다.When the exosome content of Example 1 was measured as 1, the content of Comparative Example 3-1 was 0.7, the content of Comparative Example 3-2 was 0.6, and the content of Comparative Example 3-3 was about 0.6, Comparative Example 3-1 Since the content of exosomes in the cultures of 3-3 to 3-3 was lower than the content of exosomes in the cultures of Example 1, the efficacy of cosmetics, such as skin regeneration, was low.
[실험예 4][Experimental Example 4]
실시예 1, 비교예 4-1 내지 4-3 를 비교하였다.Example 1 and Comparative Examples 4-1 to 4-3 were compared.
비교예 4-1 의 경우 전압 인가 공정을 생략하여 기능성 PLLA 나노 입자를 형성하는 과정에서 실시예 1 에 비해 2 배에 이상의 시간이 소요되었고, 원심분리시 상기 엑소좀 코팅된 PLLA 나노 입자 상에 코팅되지 못한 셀룰로오스 나노 섬유가 검출되었다.In the case of Comparative Example 4-1, the process of forming functional PLLA nanoparticles by omitting the voltage application process took twice as much time as in Example 1, and during centrifugation, coating on the exosome-coated PLLA nanoparticles Undetected cellulose nanofibers were detected.
또한, 실시예 1 의 기능성 PLLA 나노 입자와 달리, 비교예 4-2 의 기능성 PLLA 나노 입자는 엑소좀 및 상피 세포 성장 인자에 의해 코팅된 다공성 PLLA 나노 입자 상에 단순히 히알루론 산이 배치되었기 때문에, 시간이 흐르면서 히알루론산과 기능성 PLLA 나노 입자가 분리되어 효능이 저하됨을 확인할 수 있다.In addition, unlike the functional PLLA nanoparticles of Example 1, the functional PLLA nanoparticles of Comparative Example 4-2 simply placed hyaluronic acid on the porous PLLA nanoparticles coated with exosomes and epidermal growth factors, It can be seen that hyaluronic acid and functional PLLA nanoparticles are separated while flowing, and the efficacy is reduced.
또한, 비교예 4-3 의 경우, 실시예 1 과 달리 히알루론산이 없어 열처리시 열이 엑소좀, 셀룰로오스 나노 섬유, 및 상피 세포 성장 인자에 직접적으로 작용하여 실시예 1 의 화장품에 비해 피부 보습 등의 성능이 낮았다.In addition, in the case of Comparative Example 4-3, unlike Example 1, there is no hyaluronic acid, so heat directly acts on exosomes, cellulose nanofibers, and epidermal cell growth factors during heat treatment, so that skin moisturizing, etc. performance was low.
또한, 비교예 4-4 의 경우, 실시예 1 과 달리 셀룰로오스 나노 섬유가 없어 실시예 1 의 화장품에 비해 피부 보습 등의 성능이 낮고, 점도가 낮으며, 피부에 머무르는 기간이 짧아 효과 지속 시간이 짧음을 확인할 수 있었다.In addition, in the case of Comparative Examples 4-4, unlike Example 1, there is no cellulose nanofiber, so compared to the cosmetic of Example 1, performance such as skin moisturizing is low, viscosity is low, and the duration of the effect is short. I could see that it was short.
[실험예 5][Experimental Example 5]
실시예 1, 비교예 5-1 및 비교예 5-2 의 실험에서, 다공성 PLLA 나노 입자가 포함된 PBS 용액과 배양액을 혼합하고, 원심분리를 통해 다공성 PLLA 나노 입자를 상기 용액으로부터 분리한 후, 남은 용액에 엑소좀이 포함되었는지 여부를 관찰하였다.In the experiments of Example 1, Comparative Example 5-1 and Comparative Example 5-2, the PBS solution containing the porous PLLA nanoparticles and the culture medium were mixed, and the porous PLLA nanoparticles were separated from the solution through centrifugation, It was observed whether exosomes were included in the remaining solution.
관찰결과, 실시예 1 의 남은 용액에서는 엑소좀이 10 μg/ml 의 농도로 검출된 반면, 비교예 5-1 및 비교예 5-2 의 남은 용액에서는 각각 157 μg/ml, 163 μg/ml 가 검출되었으며, PBS 용액과 혼합하기 전 배양액에서 엑소좀이 451 μg/ml 검출되었음을 감안하면, 비교예 5-1 및 비교예 5-2 와 같이 다공성 PLLA 나노 입자를 포함하는 용액과 엑소좀을 포함하는 배양액을 혼합할 때 pH 가 중성에 가까울수록 엑소좀이 다공성 PLLA 나노 입자 내부 및 외부에 부착될 수 있다.As a result of observation, exosomes were detected at a concentration of 10 μg/ml in the remaining solution of Example 1, whereas 157 μg/ml and 163 μg/ml were detected in the remaining solutions of Comparative Example 5-1 and Comparative Example 5-2, respectively. was detected, and considering that 451 μg/ml of exosomes was detected in the culture medium before mixing with the PBS solution, as in Comparative Example 5-1 and Comparative Example 5-2, a solution containing porous PLLA nanoparticles and exosomes When mixing the culture medium, the closer the pH is to neutral, the more the exosomes can be attached to the inside and outside of the porous PLLA nanoparticles.
[실험예 6][Experimental Example 6]
실시예 1, 및 비교예 6-1 내지 6-6 의 자외선 차단제를 비교하였다.The sunscreens of Example 1 and Comparative Examples 6-1 to 6-6 were compared.
비교 결과, 실시예 1 과 달리, 비교예 6-1 은 자외선 차단 성능이 존재하지 않았고, 비교예 6-2 는 나노 입자와 TiO2 가 충돌하면서 히알루론산으로 이루어진 부분이 파손되고 엑소좀이 유출되어 자외선 차단제가 도포된 피부의 탄력이 저하될 수 있다.As a result of comparison, unlike Example 1, Comparative Example 6-1 did not have UV blocking performance, and in Comparative Example 6-2, as the nanoparticles and TiO 2 collided, the part made of hyaluronic acid was damaged and exosomes leaked out. The elasticity of the skin to which sunscreen is applied may decrease.
또한, 비교예 6-3 의 경우, 실시예 1 에 비해 TiO2 입자의 크기가 작기 때문에, 빛에 의해 표면 플라즈몬 공명 현상이 발생하여 도포된 피부의 온도가 증가함을 확인할 수 있다.In addition, in the case of Comparative Example 6-3, since the size of the TiO 2 particles is smaller than that of Example 1, it can be confirmed that the surface plasmon resonance phenomenon occurs due to light and the temperature of the applied skin increases.
또한, 비교예 6-4 및 비교예 6-5 의 경우, 고온에서 열처리하여 다공성 PLLA 나노 입자 내부의 엑소좀이 열에 의해 분해되거나, 저온에서 열처리하여 TiO--2 가 히알루론산으로 코팅된 PLLA 나노 입자 상에 고정되지 않아 이탈하는 문제가 발생하였다.In addition, in the case of Comparative Example 6-4 and Comparative Example 6-5, the exosomes inside the porous PLLA nanoparticles are decomposed by heat by heat treatment at high temperature, or the PLLA nanoparticles coated with TiO-- 2 hyaluronic acid by heat treatment at low temperature There was a problem that it was not fixed on the particle and came off.
또한, 비교예 6-6 의 경우 1 차 열처리 과정과 2 차 열처리 과정 사이에 상온 냉각 과정이 수행되지 않았기 때문에, 상기 1 차 열처리 과정으로 가열된 히알루론산이 상기 다공성 PLLA 나노 입자 상에 코팅된 후 고정되지 않은 상태에서 2 차 열처리되었기 때문에, 2 차 열처리 과정에서 가해진 열이 다공성 PLLA 나노 입자의 내부를 가열하여 엑소좀이 분해되고, 이로 인해 피부 재생 성능 등이 저하됨을 확인할 수 있다.In addition, in the case of Comparative Examples 6-6, since the room temperature cooling process was not performed between the first heat treatment process and the second heat treatment process, after the hyaluronic acid heated by the first heat treatment process was coated on the porous PLLA nanoparticles, Since the secondary heat treatment was performed in an unfixed state, the heat applied during the secondary heat treatment process heated the inside of the porous PLLA nanoparticles to decompose the exosomes, thereby degrading the skin regeneration performance.
전술한 본원의 설명은 예시를 위한 것이며, 본원이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본원의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.The above description of the present application is for illustrative purposes, and those skilled in the art will understand that it can be easily modified into other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present application. Therefore, the embodiments described above should be understood as illustrative in all respects and not limiting. For example, each component described as a single type may be implemented in a distributed manner, and similarly, components described as distributed may be implemented in a combined form.
본원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.The scope of the present application is indicated by the following claims rather than the detailed description above, and all changes or modifications derived from the meaning and scope of the claims and equivalent concepts thereof should be construed as being included in the scope of the present application.
Claims (8)
다공성 PLLA 나노 입자를 포함하는 용액을 준비하는 단계;
셀룰로오스 나노 섬유를 형성하는 단계;
상기 용액 및 줄기 세포로부터 유래된 배양 물질을 포함하는 배양액을 혼합하여 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 내부 및 외부를 상기 배양 물질로서 코팅하는 단계; 및
상기 용액 및 TiO2 가 용해된 히알루론산 용액을 혼합하여 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 외부를 히알루론산으로서 코팅하는 단계;
를 포함하고,
상기 TiO2 는 상기 다공성 PLLA 나노 입자 외부에 형성된 히알루론산으로 이루어진 층 상에 배치된 것인,
화장품의 제조 방법에 있어서,
상기 다공성 PLLA 나노 입자를 포함하는 용액을 준비하는 단계는, PLLA 를 아세톤에 용해시키는 단계, 상기 PLLA 가 용해된 아세톤을, PVA 가 용해되고 pH 가 7 내지 8 인 PBS 용액에 적하하는 단계, 상기 PBS 용액 내에 공기를 30 cc/sec 주입하며 60℃ 에서 가열하는 단계를 포함하고,
상기 셀룰로오스 나노 섬유를 형성하는 단계는, 셀룰로오스 분말 및 증류수를 혼합하여 현탁액을 제조하는 단계, 상기 현탁액에 공기를 1 cc/sec 주입하며 150 MPa 의 압력이 가해지는 고압 균질기에 통과시키는 단계를 포함하고,
상기 배양액은, 인간 지방 조직 유래 줄기 세포를 pH 가 4 인 배지에 배치하고 1 주 내지 2 주간 배양한 후 상기 인간 지방 조직 유래 줄기 세포를 배지로부터 제거하여 형성된 것으로서, 엑소좀 및 상피 세포 성장 인자를 포함하고,
상기 다공성 PLLA 나노 입자의 내부 및 외부를 상기 배양 물질로서 코팅하는 단계는, 상기 다공성 PLLA 나노 입자가 포함된 PBS 용액, 상기 셀룰로오스 나노 섬유, 및 상기 배양액을 혼합하는 단계, 혼합된 물질의 pH 를 7.5 로 조절하는 단계, 및 상기 혼합된 물질을 120 rpm 의 속도로 교반하는 단계를 포함하고,
상기 다공성 PLLA 나노 입자의 외부를 히알루론산으로서 코팅하는 단계는, TiO2 를 포함하는 히알루론산 용액 및 상기 배양 물질로서 코팅된 PLLA 나노 입자를 포함하는 용액을 혼합하는 단계, 상기 용액에 10 kV 의 전압을 인가하는 단계, 및 상기 용액을 50℃ 에서 열처리하는 단계를 포함하는 것인,
화장품의 제조 방법.
As for the manufacturing method of cosmetics,
Preparing a solution containing porous PLLA nanoparticles;
Forming cellulose nanofibers;
coating the inside and outside of the porous PLLA nanoparticles with the culture medium by mixing the solution and a culture medium containing a stem cell-derived culture material; and
coating the outside of the porous PLLA nanoparticles with hyaluronic acid by mixing the solution and the hyaluronic acid solution in which TiO 2 is dissolved;
including,
The TiO 2 is disposed on a layer made of hyaluronic acid formed on the outside of the porous PLLA nanoparticles,
In the manufacturing method of cosmetics,
The step of preparing a solution containing the porous PLLA nanoparticles includes dissolving PLLA in acetone, dropping the acetone in which PLLA is dissolved into a PBS solution in which PVA is dissolved and having a pH of 7 to 8, and the PBS. Injecting air into the solution at 30 cc/sec and heating at 60 ° C,
The forming of the cellulose nanofibers includes mixing cellulose powder and distilled water to prepare a suspension, injecting air into the suspension at 1 cc/sec and passing it through a high-pressure homogenizer at a pressure of 150 MPa, ,
The culture medium is formed by placing human adipose tissue-derived stem cells in a medium having a pH of 4, culturing for 1 to 2 weeks, and then removing the human adipose tissue-derived stem cells from the medium. include,
In the step of coating the inside and outside of the porous PLLA nanoparticles with the culture material, mixing the PBS solution containing the porous PLLA nanoparticles, the cellulose nanofibers, and the culture medium, the pH of the mixed material is 7.5 Adjusting to , and stirring the mixed material at a speed of 120 rpm,
The step of coating the outside of the porous PLLA nanoparticles with hyaluronic acid is mixing the hyaluronic acid solution containing TiO 2 and the solution containing the PLLA nanoparticles coated as the culture material, and applying a voltage of 10 kV to the solution. Applying a, and heat-treating the solution at 50 ° C.,
Manufacturing method of cosmetics.
상기 다공성 PLLA 나노 입자의 직경은 50 nm 내지 200 nm 이고, 상기 다공성 PLLA 나노 입자의 기공의 직경은 10 nm 내지 60 nm 인, 화장품의 제조 방법.
According to claim 1,
The porous PLLA nanoparticles have a diameter of 50 nm to 200 nm, and the porous PLLA nanoparticles have a pore diameter of 10 nm to 60 nm.
상기 다공성 PLLA 나노 입자가 히알루론산에 의해 코팅된 후, 60℃ 에서 열처리하는 단계를 추가 포함하는 것인, 화장품의 제조 방법.
According to claim 1,
After the porous PLLA nanoparticles are coated with hyaluronic acid, further comprising the step of heat treatment at 60 ° C., a method for producing cosmetics.
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