KR102444538B1 - 요산 수치를 감소시키기 위한 화합물 및 이의 사용 - Google Patents

요산 수치를 감소시키기 위한 화합물 및 이의 사용 Download PDF

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알렉상드르 라리비
알샤드 시디키
카렌 타이
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애퀴스트 엘엘씨
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Abstract

요산 배설을 증가시키고 요산 생성을 감소시키는 이작용성 화합물, 및 요산 배설을 증가시키거나 요산 생성을 감소시키는 일작용성 화합물. 혈액 또는 혈청에서의 요산 수치를 감소시키기 위한, 과량의 요산과 연관된 장애를 치료하기 위한, 및 혈액 또는 혈청, 또는 전신에서의 정상 요산 수치를 유지시키기 위한, 이 화합물을 사용하는 방법이 또한 제공된다. 이작용성 및 일작용성 화합물을 포함하는 약제학적 조성물이 또한 제공된다.

Description

요산 수치를 감소시키기 위한 화합물 및 이의 사용
본 발명은 활성제로서 이작용성 및 일작용성 화합물을 사용하여 대상체의 혈액 또는 혈청에서, 또는 대상체의 전신에서 요산을 감소시키기 위한 약제학적 조성물 및 방법에 관한 것이다.
통풍은 800만 명 초과의 미국 대상체에 영향을 미치고, 혈액에서의 요산(UA)의 만성 증가와 연관된다. 이 병태의 발생률은 과거 10년에 2배가 되었다. UA가 용해도 제한을 초과할 때, 이것은 관절 및 신장에 침전되어, 중증 통증, 파괴적 관절염 및 신부전을 야기하는 결정을 형성한다. 요산 자체는 다수의 다른 조직에 직접적으로 독성인 것으로 공지되어 있고, 잔틴 산화효소에 의한 요산의 생성은 또한 산소 자유 라디칼의 방출에 유도된 산화 스트레스로 인해 독성인 것으로 공지되어 있다. 과량의 요산과 연관된 장애, 예컨대 만성 통풍에 대한 치료는, UA 생성을 감소시키거나 이의 배설을 증가시키는 것에 초점을 둔, 일생 동안은 아니지만, 연장된 치료를 수반한다. 예를 들어, 통풍의 초기 치료에 대한 관리 표준은 중요한 생성 효소인 잔틴 산화효소(XO)를 저해하는 약물인 알로푸리놀이다. 2009년에 런칭되어, Uloric(등록상표)(febuxostat; Takeda)는 약간 더 높은 효율 및 개선된 안전성을 갖는 XO 저해제와 유사한 활성을 갖는다. 잔틴 산화효소 저해제는 통풍 환자의 90% 초과에서 초기 치료로서 사용되고, 그럼에도 불구하고 치료학적 표적은 환자의 1/3 미만에서 달성되고, 약물은 다수의 부작용을 갖고, (특히 알로푸리놀에 대한) 과민증은 흔하다. 대부분의 환자가 실제로 반응하지 않는다는 점을 고려할 때, 반응하는 환자의 적은 백분율을 결정하기 위해 수개월에 걸쳐 투여되는 비효과적인 치료의 연속된 사용은 환자, 및 전체 건강관리 시스템에 대한 실질적인 비용에 중요한 부담을 나타낸다. 더구나, 높은 비율의 실패는 많은 환자가 치료에 순응하지 않게 되고, 이로써 통풍의 만성 합병증, 특히 파괴적 관절염 및 신부전의 발생을 위한 증가된 위험에 있게 한다.
2000년 이후로, 수송제로 공지된 단백질의 생물학에서의 신속한 진보는 일련의 새로운 약물 표적을 제시하였다. 효소 URAT1은 신장에 의해 혈액으로부터 뇨로 초기에 여과된 대부분의 UA를 재흡수하는 고역량 신장 수송제이다. 소정의 요산염 수송제의 저해제는 이러한 재흡수를 예방하고 이로써 UA 배설을 증가시킬 수 있다. 벤즈브로마론(허가되었지만, 2003년에 Sanofi에 의해 미국에서 철수됨) 및 2016년에 미국 및 유럽에서 승인된 레시뉴라드(Zurampic(등록상표), AstraZeneca)를 포함하는 몇몇 약물이 현재 URAT1을 저해하는 것으로 공지되어 있다.
이들 약물은 모두 단일작용성이다. 즉, 이들은 혈액에서 UA의 수치를 감소시키는 2개의 평형 경로(즉, 감소된 생성 또는 증가된 배설) 중 오직 하나를 저해한다. 알로푸리놀은 잔틴 산화효소를 저해함으로써 UA 생성을 감소시키지만, 신장 배설에 효과를 갖지 않는 약물의 예이다. 예상된 바대로, 알로푸리놀은 URAT1 또는 다른 신장 요산염 수송제의 활성에 영향을 미치지 않는다. 벤즈브로마론 및 레시뉴라드는 주로 URAT1의 저해를 통해 UA 배설(즉, 이들은 요산뇨를 촉진함)을 증가시키지만, 이 물질은 UA 생성에 효과를 갖지 않는데, 왜냐하면 이들이 잔틴 산화효소에 실질적인 효과를 갖지 않기 때문이다. 잔틴 산화효소 저해가 고뇨산혈증을 위한 치료의 주요한 바람직한 1차 제1선 형태이므로, 요산뇨를 촉진하는 물질은 제2선으로 사용되고, 단일 물질로서 보다는 오직 잔틴 산화효소 저해제와 조합되어 보통 사용된다.
메르바론(5-(N-페닐카복사미도)-2-티오-바르비투르산)을 포함하는 바르비투레이트의 비진정 5-카복스아닐리드 유도체는 잠재적인 세포독성 항암 약물로서 평가된다. 후속하여, 메르바론에 의한 임상 치료는 혈액에서의 UA 수치의 현저한 감소와 연관된다는 것이 발견되었다. 이 발견에도 불구하고, 이러한 사용(주로 이의 유전독성)의 안전성이 인간 건강의 다른 양태에 심각한 위험을 부여하므로, 메르바론의 세포독성 활성은 만성 과량의 요산과 연관된 장애를 위한 치료로서 이의 사용을 완전히 못하게 하였다. 이러한 임상 유용성은 유전독성 활성이 저요산혈증 활성으로부터 화학적으로 분리되고 제거되는 경우 오직 가능할 것이다. 본 발명자들은 그후 메르바론의 다수의 비유전독성 저요산혈증 유도체를 기재하였다.
혈액 또는 전신에서 UA 수치를 감소시키고 통풍에 의해 이환된 환자에 대한 더 양호한 치료를 제공할 수 있는 새로운 약물에 대한 강력한 수요가 존재하다. UA의 감소는 보편적으로 통풍, 및 다른 과량의 요산과 연관된 장애를 갖는 환자에 대해 유리한 것으로 인정되고, 이러한 감소는 환자 이익과 직접적으로 연관된다. 더 구체적으로, "목표" 수치 미만의 혈청 요산의 감소는 통풍에서의 상업용 약물 허가를 위한 종점으로서 국제 약물 규제 기관(예를 들어, 미국 식품의약청[FDA], 유럽 의약청[EMA] 등)에 의해 허용된다. 이전에 기재된 바대로, 잔틴 산화효소 저해제의 제한된 임상 활성을 극복할 수 있는 약물은 이용 가능하거나, 그러나 오직 조합 사용을 위한 "부가(add-on)"로서 현재 조사 중이다. 레시뉴라드[Zurampic(등록상표)]의 승인은 가장 최근의 예이다. 본 발명은 상승된 UA 수치에 대한 현재의 치료 및 다른 과량의 요산과 연관된 장애, 예컨대 통풍의 치료에 대한 대안을 제공할 수 있는 새로운 화합물에 관한 것이다. 소정의 이들 화합물은 이작용성 활성(즉, 잔틴 산화효소를 저해함으로써 UA 생성의 감소 및 신장 요산염 수송제를 저해함으로써 UA 배설의 증가)의 특정한 이점을 가져서, 초기 치료로서 및 "부가" 치료보다는 단일 물질로서 이것이 사용하기에 적합하게 만든다. 또한, 소정의 화합물은 선행 기술 약물, 예컨대 메르바론과 비교하여 감소한 독성을 갖는다.
제1 양태에서, 하기 화학식 (I)로 표시된 구조를 갖는 화합물이 제공된다:
Figure 112019002004819-pct00001
식 중,
W, X 및 Y는 각각 독립적으로 O, S, NR2 또는 N(R2)2이고;
T는 -CONR2-, -C(NR2)NH-, -C(NOR2)NH-, -C(N-NR2)NH-, -C(SR2)N- 또는 -NHC(O)-이고;
A는 페닐, 헤테로아릴, C5-C10 분지 또는 비분지 사이클로알킬, C6-C10 바이사이클로알킬 또는 C5-C10 스피로사이클로알킬이고;
Z는 각각 독립적으로 존재하거나 부재하고, 존재하는 경우, 하나 이상의 할로겐 원자, -CN, -CF3, -OR2, -C(O)R2, SR2, -S(O)gR3(여기서, g는 1 또는 2임), -N(R2)2, -NO2, -CO2R2, -OCO2R3, OC(O)R2, -CON(R2)2, -NR2C(O)R2, -SO2N(R2)2, -NR2SO2R3, -NR2SO2N(R2)2 또는 -NR2C(O)N(R2)2, -C(O)NHOR2, 알킬, 아릴, 알켄일 및 알킨일로부터 독립적으로 선택되고;
R2는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 아릴이고;
R3은 각각 독립적으로 하나 이상의 할로겐 원자 또는 OR2에 의해 임의로 치환된 알킬 또는 아릴이고;
a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 탄소 또는 질소이거나, a, b, c, d 및 e 중 4개는 각각 독립적으로 탄소 또는 질소이고, a, b, c, d 및 e 중 1개는 O이고, 단 a, b, c, d 및 e 중 적어도 1개는 질소이고, Z는 질소 또는 산소에 직접적으로 연결되지 않는다.
제2 양태에서, 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물이 제공된다:
Figure 112019002004819-pct00002
식 중,
W, X 및 Y는 각각 독립적으로 O, S, NR2 또는 N(R2)2이고;
A는 페닐, 헤테로아릴, C5-C10 분지 또는 비분지 사이클로알킬, C6-C10 바이사이클로알킬 또는 C5-C10 스피로사이클로알킬이고;
Z는 각각 독립적으로 존재하거나 부재하고, 존재하는 경우, 하나 이상의 할로겐 원자, -CN, -CF3, -OR2, -C(O)R2, SR2, -S(O)gR3(여기서, g는 1 또는 2임), -N(R2)2, -NO2, -CO2R2, -OCO2R3, OC(O)R2, -CON(R2)2, -NR2C(O)R2, -SO2N(R2)2, -NR2SO2R3, -NR2SO2N(R2)2 또는 -NR2C(O)N(R2)2, -C(O)NHOR2, 알킬, 아릴, 알켄일, 알킨일 및 사이클로알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R1은 각각 Z에 의해 임의로 치환된 C1-C8 분지 또는 비분지 알킬이고;
R2는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 아릴이고;
R3은 각각 독립적으로 하나 이상의 할로겐 원자 또는 OR2에 의해 임의로 치환된 알킬 또는 아릴이고;
a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 탄소 또는 질소이거나, a, b, c, d 및 e 중 4개는 각각 독립적으로 탄소 또는 질소이고, a, b, c, d 및 e 중 1개는 O이고, 단 a, b, c, d 및 e 중 적어도 1개는 질소이고, Z는 질소 또는 산소에 직접적으로 연결되지 않는다.
추가의 양태는 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합을 혈액 또는 혈청 요산 수치를 감소시키거나 혈액 또는 혈청 요산 수치의 상승을 예방하기 위한 효과적인 양으로 이를 요하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 혈액 또는 혈청에서의 요산 수치를 감소시키거나 대상체의 혈액 또는 혈청에서의 요산 수치의 상승을 예방하는 방법에 관한 것이다. 이 실시형태의 변형에서, 상기 방법은 상기 기재된 바와 같은 화학식 (I), 화학식 (II)의 화합물, 또는 이들의 조합의 구체적인 실시형태에 따른 화합물을 혈액 또는 혈청 요산 수치를 감소시키거나 혈액 또는 혈청 요산 수치의 상승을 예방하기 위한 효과적인 양으로 이를 요하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
이들 방법의 소정의 실시형태에서, 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합은 요산 수치를 감소시키기 위해 과량의 요산과 연관된 장애, 예컨대 통풍, 고뇨산혈증, 신장 질환, 관절염, 신장 결석, 신부전, 요로결석증, 연독, 부갑상선 기능 항진증, 건선, 대사의 선천적 유전적 오차(레쉬-니한 증후군(이들로 제한되지는 않음)을 포함), 사르코이드증, 심혈관 질환(죽상동맥경화증 및 고혈압(이들로 제한되지는 않음)을 포함), 당뇨병 또는 인슐린 내성, 당뇨, 대사 증후군, 또는 혈액, 골수 또는 고형 장기의 이식을 갖는 대상체에게 투여한다.
추가의 양태는 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합을 혈액 또는 혈청 요산 수치를 감소시키거나 혈액 또는 혈청 요산 수치의 상승을 예방하기 위한 효과적인 양으로 이를 요하는 대상체에게 투여하여서 과량의 요산과 연관된 장애를 치료하는 단계를 포함하는, 혈액 또는 혈청에서 상승된 요산과 연관되거나 이에 의해 생긴 과량의 요산과 연관된 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다. 하나의 이러한 실시형태는 상기 기재된 바와 같은 화학식 (I), 화학식 (II)의 화합물, 또는 이들의 조합의 구체적인 실시형태에 따른 화합물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 혈액 또는 혈청에서 상승된 요산과 연관되거나 이에 의해 생긴 과량의 요산의 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 추가의 양태는 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 구체적인 실시형태에서, 약제학적 조성물은 상기 기재된 바와 같은 화학식 (I), 화학식 (II)의 화합물, 또는 이들의 조합의 구체적인 실시형태에 따른 화합물을 포함한다.
추가의 양태는 하기 더 자세히 기재된 바대로 상기 기재된 화합물을 합성하는 방법을 제공한다.
도 1은 화학식 (I)에 따른 화합물의 합성에 대한 일반 도식을 예시한다.
도 2는 화학식 (II)에 따른 화합물의 합성에 대한 일반 도식을 예시한다.
도 3은 화학식 (II)에 따른 화합물의 합성에 대한 대안적인 일반 도식을 예시한다.
도 4는 바르비투레이트 고리의 X에서의 치환기를 함유하는 화합물의 합성에 대한 일반 도식을 예시한다.
도 5는 바르비투레이트 고리의 X에서의 치환기를 함유하는 화합물의 합성에 대한 대안적인 일반 도식을 예시한다.
도 6은 바르비투레이트 고리의 X에서의 치환기를 함유하는 화합물의 합성에 대한 추가의 대안적인 일반 도식을 예시한다.
도 7은 당해 분야에 공지되지 않은 트라이아졸 헤테로사이클릭 고리를 형성하는 방법을 예시한다.
도 8은 화합물의 A 고리의 합성에 대한 대안적인 일반 도식을 예시한다.
도 9는 실시예 1에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 10은 실시예 2에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 11은 실시예 3에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 12는 실시예 4에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 13은 실시예 5에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 14는 실시예 6에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 15는 실시예 7에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 16은 실시예 8에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 17은 실시예 9에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 18은 실시예 10에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 19는 실시예 11에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 20은 실시예 12에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 21은 실시예 13에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 22는 실시예 14에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 23은 실시예 15에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 24는 실시예 16에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 25는 실시예 17에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 26은 실시예 18에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 27은 실시예 19에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 28은 실시예 20에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 29는 실시예 21에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 30은 실시예 22에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 31은 실시예 23에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 32는 실시예 24에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 33은 실시예 25에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 34는 실시예 26에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 35는 실시예 27에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 36은 실시예 28에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 37은 실시예 29에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 38은 실시예 30에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 39는 실시예 31에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 40은 실시예 32에 도시된 합성 도식을 예시한다.
도 41은 화학식 (II)에 따른 화합물의 합성에 대한 대안적인 일반 도식을 예시한다.
도 42는 화학식 (I)에 따른 화합물의 합성에 대한 대안적인 일반 도식을 예시한다.
본 명세서에 제공된 몇몇 예시적인 실시형태를 기재하기 전에, 본 발명이 하기 설명에 기재된 구성 또는 공정 단계의 상세내용으로 제한되지 않는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명은 다른 실시형태일 수 있고 다양한 방식으로 실행되거나 수행될 수 있다.
"일 실시형태", "소정의 실시형태", "하나 이상의 실시형태" 또는 "실시형태"에 대한 본 명세서에 걸친 언급은 실시형태와 연결되어 기재된 특정한 특징, 구조, 재료 또는 특성이 본 발명의 적어도 하나의 실시형태에 포함된다는 것을 의미한다. 따라서, 본 명세서에 걸쳐 다양한 위치에서의 "하나 이상의 실시형태에서", "소정의 실시형태에서", "일 실시형태에서" 또는 "실시형태에서"와 같은 구절의 출현은 본 발명의 동일한 실시형태를 반드시 의미하지는 않는다. 더욱이, 특정한 특징, 구조, 재료 또는 특성은 하나 이상의 실시형태에서 임의의 적합한 방식으로 조합될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 개시된 화합물에 관한 용어 "이작용성"은 화합물이 URAT1 및 잔틴 산화효소(이들로 제한되지는 않음)를 포함하는 신장 수송제 둘 다를 저해한다는 것을 의미한다. 어느 한 표적의 저해의 효력은 변할 수 있지만, 일반적으로 잔틴 산화효소 및 신장 수송제, 예컨대 URAT1 둘 다에 대한 약 100μM 미만의 IC50은 이작용성으로 생각된다. 잔틴 산화효소 및 URAT1 둘 다에 대한 약 50μM 미만의 IC50은 특히 활성인 이작용성 화합물로 생각되고, 10μM 미만의 IC50은 매우 강력한 이작용성 화합물로 생각된다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 개시된 화합물에 관한 용어 "일작용성"은 화합물이 둘 다가 아닌 신장 수송제, 예를 들어 URAT1(이것으로 제한되지는 않음), 또는 요산 생성에 관여한 효소, 예를 들어 잔틴 산화효소(이것으로 제한되지는 않음) 중 어느 하나인 요산 배설에 관여한 요산 대사 경로에서의 효소를 저해한다는 것을 의미한다. 단일 표적의 저해의 효력은 변할 수 있지만, 일반적으로 하나의 잔틴 산화효소 또는 URAT1에 대한 약 100μM 초과의 IC50, 및 다른 잔틴 산화효소 또는 URAT1에 대한 약 100μM 미만의 IC50은 일작용성으로 생각된다. 하나의 잔틴 산화효소 또는 URAT1에 대한 약 50μM 미만의 IC50, 및 다른 잔틴 산화효소 또는 URAT1에 대한 약 100μM 초과의 IC50은 특히 활성인 일작용성 화합물로 생각된다. 하나의 잔틴 산화효소 또는 URAT1에 대한 약 10μM 미만의 IC50, 및 다른 잔틴 산화효소 또는 URAT1에 대한 약 100μM 초과의 IC50은 매우 강력한 일작용성 화합물로 생각된다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "치료"는 활성 질환의 증상을 경감 및/또는 이의 재발의 예방의 전체 목표에 의해 바람직하게는 수치를 정상, 저정상 또는 준정상 범위로 감소시킴으로써 혈액 또는 혈청에서의 상승된 요산 수치를 감소시키는 것을 의미한다. 예를 들어, 상승된 혈청 요산의 치료에 대한 통상적인 "치료학적 목표"는 6.0㎎/㎗ 이상의 수치이다. "상승된" 요산 수치는 장기간 상승된 수치가 일반적으로 추가 치료를 요하는 병태를 발생시킬 수 있으므로 정상 초과 요산 수치를 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 혈액 또는 혈청에서의 요산 수치의 상승의 용어 "예방"은 활성 질환의 증상의 발생 또는 재발의 예방 및/또는 이의 재발의 예방의 전체 목표에 의해 요산 수치의 증가를 달리 경험하는 대상체에서 혈액 또는 혈청에서의 정상 또는 치료학적으로 허용 가능한 요산 수치를 유지시키는 것을 의미한다. 요산 수치의 상승의 예방, 또는 요산에서의 지속된 감소의 달성이 하기 기재된 장기간 유지 치료, 및 소정의 단기간 컨디션의 목표인 것으로 이해될 것이다.
본 명세서에 사용된 바르비투레이트 고리에서의 위치의 넘버링은 Warrell의 관례(미국 특허 제4,880,811호)에 따른다. 본 명세서에 개시된 화합물이 특정한 화학 구조에 의해 일반적으로 예시되지만, 화합물의 개시내용이 이의 호변이체를 포함하도록 의도되는 것으로 또한 이해되어야 한다. 바르비투레이트 고리에서의 호변이체의 대표적인 예는 하기 도시된 구조, 및 화학식 (I) 또는 화학식 (II)의 치환기에서의 임의의 추가 호변이체를 포함한다:
Figure 112019002004819-pct00003
Figure 112019002004819-pct00004
본 명세서에 기재된 화합물은 혈액에서의 요산 수치의 감소 및 혈액 또는 혈청에서의, 또는 전신에서의 과량의 요산과 연관된 장애의 치료의 치료학적 분야에서의 소정의 수요를 충족시킨다. 소정의 화합물은 URAT1 또는 잔틴 산화효소의 강력한 일작용성 저해제이다. 소정의 화합물은 URAT1 및 잔틴 산화효소 둘 다의 이작용성 저해제이다.
본 발명의 화합물의 개선된 생물학적 활성 프로필 및 이의 효력은 이 화합물이 혈액 또는 전신에서의 요산 수치를 감소시키기 위한, 및 통풍을 포함하는 혈액 또는 혈청 또는 전신에서의 과량의 요산 수치와 연관되거나 이에 의해 생긴 장애를 치료하기 위한 유용한 새로운 약물로 만든다. 혈액에서의 요산 수치를 감소시키기 위한, 과량의 요산과 연관된 장애 요산을 치료하거나 예방하기 위한, 및 구체적으로 통풍을 치료하기 위한 단일치료로서 효과적으로 사용될 수 있다는 이점이 특히 중요하다. 소정의 실시형태에서, 이작용성 화합물은 비알코올성 지방간 질환(NAFLD), 비알코올성 지방간염(NASH), 및 대사 증후군, 죽상동맥경화증 또는 심혈관 질환의 다른 형태, 고혈압, 만성 신장 질환, 당뇨, 당뇨병 또는 인슐린 내성, 및 대사 증후군을 치료하거나 예방하기 위해 효과적으로 사용될 수 있다.
제1 양태에서, 하기 화학식 (I)로 표시된 구조를 갖는 화합물이 제공된다:
Figure 112019002004819-pct00005
식 중,
W, X 및 Y는 각각 독립적으로 O, S, NR2 또는 N(R2)2이고;
T는 -CONR2-, -C(NR2)NH-, -C(NOR2)NH-, -C(N-NR2)NH-, -C(SR2)N- 또는 -NHC(O)-이고;
A는 A는 페닐, 헤테로아릴, C5-C10 분지 또는 비분지 사이클로알킬, C6-C10 바이사이클로알킬 또는 C5-C10 스피로사이클로알킬이고;
Z는 각각 독립적으로 존재하거나 부재하고, 존재하는 경우, 하나 이상의 할로겐 원자, -CN, -CF3, -OR2, -C(O)R2, SR2, -S(O)gR3(여기서, g는 1 또는 2임), -N(R2)2, -NO2, -CO2R2, -OCO2R3, OC(O)R2, -CON(R2)2, -NR2C(O)R2, -SO2N(R2)2, -NR2SO2R3, -NR2SO2N(R2)2 또는 -NR2C(O)N(R2)2, -C(O)NHOR2, 알킬, 아릴, 알켄일 및 알킨일로부터 독립적으로 선택되고;
R2는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 아릴이고;
R3은 각각 독립적으로 하나 이상의 할로겐 원자 또는 OR2에 의해 임의로 치환된 알킬 또는 아릴이고;
a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 탄소 또는 질소이거나, a, b, c, d 및 e 중 4개는 각각 독립적으로 탄소 또는 질소이고, a, b, c, d 및 e 중 1개는 O이고, 단 a, b, c, d 및 e 중 적어도 1개는 질소이고, Z는 질소 또는 산소에 직접적으로 연결되지 않는다.
하나 이상의 실시형태에서, 화학식 (I)로 표시된 구조를 갖는 화합물은 T가 -CONR2-인 화합물이다.
하나 이상의 실시형태에서, 화학식 (I)로 표시된 구조를 갖는 화합물은 5원 헤테로사이클릭 고리가 치환된 또는 비치환된 트라이아졸, 또는 치환된 또는 비치환된 테트라졸인(즉, a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 탄소 또는 질소이고, 단 a, b, c, d 및 e 중 3개 또는 4개는 질소이고, Z는 질소에 직접적으로 연결되지 않음) 화합물이다.
하나 이상의 실시형태에서, 화학식 (I)로 표시된 구조를 갖는 화합물은 A가 2개의 이종원자를 갖는 헤테로아릴, 예를 들어 티아졸 또는 아이소티아졸인 화합물이다.
구체적인 비제한적인 실시형태에서, 화학식 (I)로 표시된 구조를 갖는 화합물은 X가 O 또는 S이고; Y 및 W가 O이고; A가 치환된 또는 비치환된 티아졸 또는 아이소티아졸이고; Z가 각각 독립적으로 존재하거나 부재하고; R2가 각각 H이고; 5원 헤테로사이클릭 고리가 치환된, 또는 비치환된 트라이아졸 또는 치환된 또는 비치환된 테트라졸인 (즉, a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 탄소 또는 질소이고, 단 a, b, c, d 및 e 중 3개 또는 4개는 질소이고, Z는 질소에 직접적으로 연결되지 않음) 화합물이다.
추가의 구체적인 비제한적인 실시형태에서, 화학식 (I)로 표시된 구조를 갖는 화합물은 W, X 및 Y가 각각 독립적으로 O 또는 S이고; T가 CONR2이고; A가 헤테로아릴이고; Z가 부재하고; R2가 H이고; 5원 헤테로사이클릭 고리가 트라이아졸인 화합물이다. 이들 실시형태 중 하나 이상에서, 헤테로아릴 A는 티아졸 또는 아이소티아졸이다.
화학식 (I)로 표시된 구조를 갖는 화합물의 구체적인 예는 하기를 포함한다:
Figure 112019002004819-pct00006
.
제2 양태에서, 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물이 제공된다:
Figure 112019002004819-pct00007
식 중,
W, X 및 Y는 각각 독립적으로 O, S, NR2 또는 N(R2)2이고;
A는 페닐, 헤테로아릴, C5-C10 분지 또는 비분지 사이클로알킬, C6-C10 바이사이클로알킬 또는 C5-C10 스피로사이클로알킬이고;
Z는 각각 독립적으로 존재하거나 부재하고, 존재하는 경우, 하나 이상의 할로겐 원자, -CN, -CF3, -OR2, -C(O)R2, SR2, -S(O)gR3(여기서, g는 1 또는 2임), -N(R2)2, -NO2, -CO2R2, -OCO2R3, OC(O)R2, -CON(R2)2, -NR2C(O)R2, -SO2N(R2)2, -NR2SO2R3, -NR2SO2N(R2)2 또는 -NR2C(O)N(R2)2, -C(O)NHOR2, 알킬, 아릴, 알켄일, 알킨일 및 사이클로알킬로부터 독립적으로 선택되고;
R1은 각각 Z에 의해 임의로 치환된 C1-C8 분지 또는 비분지 알킬이고;
R2는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 아릴이고;
R3은 각각 독립적으로 하나 이상의 할로겐 원자 또는 OR2에 의해 임의로 치환된 알킬 또는 아릴이고;
a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 탄소 또는 질소이거나, a, b, c, d 및 e 중 4개는 각각 독립적으로 탄소 또는 질소이고, a, b, c, d 및 e 중 1개는 O이고, 단 a, b, c, d 및 e 중 적어도 1개는 질소이고, Z는 질소 또는 산소에 직접적으로 연결되지 않는다.
하나 이상의 실시형태에서, 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물의 5원 헤테로사이클릭 고리는 치환된 또는 비치환된 트라이아졸, 또는 치환된 또는 비치환된 테트라졸이다(즉, a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 탄소 또는 질소이고, 단 a, b, c, d 및 e 중 3개 또는 4개는 질소이고, Z는 질소에 직접적으로 연결되지 않음).
하나 이상의 실시형태에서, 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물은 R1이 -CH3인 화합물이다.
하나 이상의 실시형태에서, 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물은 -XR1이 -SCH3 또는 -OCH3인 화합물이다.
구체적인 비제한적인 실시형태에서, 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물은 X가 O, S 또는 N(R2)2이고; Y 및 W가 각각 독립적으로 O 또는 S이고; A가 치환된 또는 비치환된 페닐, 바이사이클로알킬, 스피로사이클로알킬, 피리딘 또는 다이아진이고; Z가 알킬, 사이클로알킬, 할로겐, CF3 또는 N(R2)2이고; R1이 각각 Z에 의해 임의로 치환된 C1-C3 분지 또는 비분지 알킬이고; R2가 각각 H이고; 5원 헤테로사이클릭 고리가 치환된 또는 비치환된 트라이아졸, 또는 치환된 또는 비치환된 테트라졸인(즉, a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 탄소 또는 질소이고, 단 a, b, c, d 및 e 중 3개 또는 4개는 질소이고, Z는 질소에 직접적으로 연결되지 않음) 화합물이다.
화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물의 구체적인 예는 하기를 포함한다:
1. 5원 헤테로사이클릭 고리가 비치환된 트라이아졸 또는 비치환된 테트라졸인 화합물. 이러한 화합물의 대표적인 예는 하기를 포함한다:
--- A가 치환된 또는 비치환된 페닐이고; X가 S인 화합물; 및 이의 호변이체, 예컨대 화학식 (IIi)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00008
,
화학식 (IIj)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00009
,
화학식 (IIk)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00010
,
화학식 (IIl)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00011
,
화학식 (IIm)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00012
,
화학식 (IIn)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00013
,
화학식 (IIo)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00014
,
화학식 (IIp)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00015
,
화학식 (IIq)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00016
,
화학식 (IIr)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00017
,
화학식 (IIs)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00018
,
화학식 (IIt)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00019
,
화학식 (IIu)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00020
,
화학식 (IIv)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00021
,
화학식 (IIw)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00022
,
화학식 (IIx)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00023
,
화학식 (IIy)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00024
,
화학식 (IIz)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00025
,
화학식 (IIaa)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00026
,
화학식 (IIbb)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00027
,
화학식 (IIcc)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00028
,
화학식 (IIdd)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00029
, 및
화학식 (IIee)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00030
.
--- A가 비치환된 페닐이고; X가 NR2 또는 N(R2)2인 화합물; 및 이의 호변이체, 예컨대 화학식 (IIll)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00031
, 및
화학식 (IImm)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00032
.
2. 5원 헤테로사이클릭 고리가 치환된 트라이아졸인 화합물. 이러한 화합물의 대표적인 예는 하기를 포함한다:
--- A가 페닐이고; X가 O 또는 S이고; R1이 메틸(CH3)인 화합물; 및 이의 호변이체, 예컨대 화학식 (IIff)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00033
, 및
화학식 (IIgg)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00034
.
3. A가 스피로사이클로알킬인 화합물. 이러한 화합물의 대표적인 예는 화학식 (IIhh)로 표시된 구조를 포함한다:
Figure 112019002004819-pct00035
.
4. A가 피리딘 또는 다이아진인 화합물. 이러한 화합물의 대표적인 예는 화학식 (IIii)로 표시된 구조를 포함한다:
Figure 112019002004819-pct00036
,
화학식 (IIjj)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00037
, 및
화학식 (IIkk)로 표시된 구조:
Figure 112019002004819-pct00038
.
본 명세서에 개시된 바대로, 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합에 대한 언급은 총칭 구조 내에 해당하는 모든 화합물, 및 기재된 구체적인 실시형태 및 이의 호변이체를 포함하는 것으로 의도된다.
본 명세서에 개시된 화합물은 도 1 내지 도 8에 도시된 바와 같은 다양한 일반 절차에 의해 합성될 수 있다. 일반적으로, 다양한 합성 경로는 적절하게 치환된 바르비투레이트 고리에 의한 치환된 페닐, 헤테로사이클릭, 사이클로알킬 또는 스피로사이클릭 A 고리의 커플링에 중심을 둔다. 몇몇 상이한 커플링제는 이 공정에서 사용될 수 있다. 적절하게 치환된 나이트로 또는 아미노 고리 A가 당해 분야에 공지된 경우, 많은 화학식 (I)의 화합물은 도 1에 예시된 바대로 제조될 수 있다.
도 2에 도시된 바대로, 화학식 (II) 화합물의 합성을 위해 이미 도입된 적절한 R1 기를 갖는 4,6-다이클로로-2-티오피리미딘-5-카보닐 클로라이드는 파라-메톡시 벤질기를 포함하는 다양한 보호기에 의해 보호될 수 있다. 파라-메톡시 벤질이 바람직하지만, 다른 보호기가 또한 가능하다. 이후, 이것은 보통 트라이아진 또는 테트라졸인 고리 A 함유 원하는 헤테로사이클에 부착된 적절한 아미노 유도체와 반응할 수 있다. 그러나, 많은 경우에 이 모이어티는 합성될 필요가 있다. 이것은 적절하게 치환된 할로겐(예를 들어, 브롬) 함유 아미노 유도체와 아세틸렌 사이의 Sonogashira 교차커플링 반응을 이용함으로써 달성된다. 이 아세틸렌은 일 말단에서 트라이메틸실릴기에 의해 가장 잘 보호된다. 이후, 트라이메틸 실릴기는 염기에 의해 제거되고, 생성된 아세틸렌은 적절한 아자이드와 반응하여 중간체를 생성하고, 이것은 4,6-다이클로로-2-알킬티오피리미딘-5-카보닐 클로라이드에 커플링된다. 아자이드는 보호기에 의해 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 하나의 이러한 기는 아지도메틸 피발레이트이고, 이것은 염기에 의해 후속하여 제거될 수 있다. 이후, 생성된 커플링된 생성물은 적절한 시약에 의해 탈보호된다. 예를 들어, PMB기는 산에 의해 제거되고 피발레이트기는 염기에 의해 제거될 수 있어서, 원하는 최종 생성물을 생성한다. 그러나, 당업자는 다른 보호기를 사용할 수 있다는 것을 인식할 것이다.
도 3에 도시된 바대로, 화학식 (II) 화합물의 합성을 위해, 4,6-다이클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카보닐 클로라이드는 파라-메톡시 벤질기를 포함하는 다양한 보호기에 의해 보호될 수 있다. 파라-메톡시 벤질이 바람직하지만, 다른 보호기가 또한 가능하다. 이후, 이것은 보통 트라이아진 또는 테트라졸인 고리 A 함유 원하는 헤테로사이클에 부착된 적절한 아미노 유도체와 반응할 수 있다. 이 모이어티는 보호기에 의해 보호되거나 그렇지 않을 수 있다. 몇몇 경우에, 반응은 보호기 없이 일한다. 2개의 모이어티가 함께 커플링되면, 티오메틸기는 mCPBA를 포함하는 다양한 물질에 의해 산화될 수 있다. 이것은 메틸 설폰을 생성하고, 이것은 다양한 알킬화 설프하이드릴 물질에 의해 대체될 수 있다. 이후, 보호기는 제거된다. PMB기는 보통 산, 예컨대 트리플산에 의해 제거된다. 트라이아진 또는 유사한 질소 헤테로사이클에 보호기가 존재하는 경우, 이 기는 기의 성질에 따라 다른 물질에 의해 제거된다. 예를 들어, 메틸 피발레이트는 염기에 의해 제거되고, 트라이메톡시벤질은 산에 의해 제거되고, [2-(트라이메틸실릴)에톡시]메틸은 플루오라이드에 의해 제거된다. 당업자는 다른 보호기가 가능하다는 것을 인식할 것이다.
도 41은 4,6-다이클로로-2-티오피리미딘-5-카복실산이 산 클로라이드 대신에 사용된다는 것을 제외하고 도 2 및 도 3에 기재된 도식과 유사한 합성 도식을 예시한다. 이 경우에 적절한 커플링제는 아미노 헤테로사이클과 바르비투레이트 고리 사이에 결합을 형성하도록 사용된다. 이러한 물질은 T3P/Et3N, EDC, DCC 및 카보닐 다이이미다졸을 포함하지만, 당업자가 아는 것처럼 사용될 수 있는 많은 다른 것이 있다. 황에서 메틸기 이외에 다른 치환기가 바람직한 경우, 당업자는 도 13에 기재된 도식을 이용할 것이다.
도 42는 바르비투레이트 산이 다른 도면에 기재된 것처럼 적절한 커플링제에 의해 활성화된 화학식 (I)의 화합물의 합성을 예시한다. 이후, 이것은 할로겐, 보통 브롬을 함유하는 적절한 아미노 유도체와 반응할 수 있다. 후속하는 치환된 아세틸렌에 의한 Sonogashira 교차-커플링 반응은 이후 적절하게 보호된 아자이드와 반응할 수 있는 중간체를 생성한다. 많은 경우에, 상이한 보호기를 사용할 수 있지만, 아지도메틸 피발레이트가 대개 바람직하고, 여기서 피발레이트기는 대개 염기에 의해 쉽게 제거될 수 있다.
도 4 내지 도 6은 바르비투레이트 고리의 X에서 치환기를 함유하는 화합물을 생성시키는 합성의 방법을 도시한다. 도 4는 도 1에 도시된 순서를 일반적으로 따름으로써 이러한 화합물을 제조하는 가장 간단한 방식이다. 그러나, 이 방법은 X 기의 알킬화를 수반하는 후속하는 마지막 단계를 수반한다. 이것은 R2가 알킬기인 경우 오직 가능하고, 얻은 다양한 가능한 이성질체의 분리가 필요할 수 있다. 도 5에 기재된 합성은 R2 기가 바르비투레이트 고리에 부착된다는 것을 보장한다는 점에서 더 직접적이다. 이 과정은, 처음에 적절하게 치환된 우레아로 말로네이트의 축합, 이어서 알킬화(다시 알킬 할라이드에 의해 수행됨(즉, R2는 알킬임))에 의해, 합성에서 초기에 R2 기의 도입을 수반한다. 소정의 경우에, 보호기는 치환기의 성질에 따라 필요할 수 있다. 또 다른 경우에, X에서의 R2 기는 합성의 가장 이른 부분에서 도입될 수 있다. 이것은 치환된 우레아 또는 티오우레아에서 온전할 수 있다. 이것은 X에서 아릴 또는 헤테로사이클릭 아릴기를 함유하는 화합물을 허용할 것이다. 이것은 도 6에 도시되어 있고, 말로네이트에 의한 R2 치환된 우레아 또는 티오우레아의 축합을 수반한다. 이후, 후속하는 바르비투레이트 고리는 원하는 생성물을 생성하기 위해 적절한 아미노 A 고리 화합물에 커플링된다.
도 7은 이것이 당해 분야에 공지되지 않을 때 트라이아졸 헤테로사이클릭 고리를 형성하는 방법을 도시한다. 아미노 함유 A 고리에 대한 아자이드의 첨가는 아세틸렌에 대한 아자이드의 첨가를 모두 수반하는 다양한 방법을 통해 달성될 수 있다. 도면에 예시된 바와 같은 보호기가 필요할 수 있다. 때때로, 아세틸렌 함유 A 고리는 당해 분야에 공지되지 않을 수 있어서, 이것은 합성될 필요가 있다. 이것은 도 8에 예시된 바와 같은 다양한 방법을 통해 달성될 수 있다. 당해 분야에 공지된 1-다이아조-1-((다이메틸퍼옥시)(옥소)-λ4-포스파닐)프로판-2-온에 의한 고리 A 화합물의 상응하는 알데하이드의 처리, 또는 고리 A 화합물의 할라이드에서의 Sonogashira 반응은 상응하는 아세틸렌 A 고리 함유 화합물을 생성할 것이다. 아세틸렌에 대한 아자이드의 후속하는 첨가는 트라이아졸을 생성할 것이다. 이후, 이것은 원하는 표적화된 화합물을 생성하기 위해 상기 기재된 방법에 의해 커플링될 수 있다.
일 양태에서, 본 발명은 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합을 혈액 또는 혈청 요산 수치를 감소시키기에 효과적인 양으로 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 혈액 또는 혈청에서, 또는 전신에서 요산 수치를 감소시키는 방법을 제공한다. 요산 수치를 감소시키기 위한 모든 이러한 방법이 의약에서의 용도를 위한 임의의 화학식 (I) 또는 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합, 및 상승된 요산 수치의 치료에서의 용도를 위한 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합에 상응하는 것으로 이해되어야 한다. 통상적으로, 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합은 대상체의 혈액에서의 요산의 수치가 상승할 때, 즉 정상의 상부 범위 또는 정상 수치 초과일 때 투여될 것이다. 당업자는 정상 요산 수치가 달성된 후 정상 범위 내에 요산 수치를 유지시키기 위해 또는 이전의 과량의 기간으로 인해 발생할 수 있는 과량의 요산의 전체 신체 부담을 감소시키기 위해 계속된 투여가 또한 고려된다는 것을 추가로 인식할 것이다. 따라서, 혈액 또는 혈청, 또는 전신에서의 요산 수치의 상승을 예방하는 방법은 또한 본 발명의 양태이다. 요산의 상승을 예방하기 위한 모든 이러한 방법이 치료학적 용도를 위한 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합, 및 상승된 요산 수치의 예방을 위한 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합에 상응하는 것으로 이해되어야 한다.
혈청에서의 정상 요산 수치는 일반적으로 4.3㎎/㎗ 내지 8.0㎎/㎗의 범위이다. 소정의 실시형태에서, 임의의 화학식 (I) 내지 (VIII)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합은 적어도 약 6㎎/㎗의 혈청 요산 수치를 갖는 대상체에게 투여된다. 약 6.0㎎/㎗ 이하의 혈청 요산 수치가 도달할 때까지 투여가 계속될 수 있지만, 과량의 요산과 연관된 장애를 갖는 환자에서 이 목표 아래로 요산 수치를 유지시키는 것이 유리한 것으로 일반적으로 생각된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은 혈액 또는 혈청 또는 전신에서의 과량의 요산과 연관된 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 장애를 치료하는 방법은 혈청 요산 수치를 감소시키기에 효과적인 양으로 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합을 이를 요하는 대상체에게 투여하고, 이로써 대상체에서의 과량의 요산과 연관된 장애를 치료하는 방법을 포함한다. 이 장애는 정상의 상부 범위 또는 정상 초과인 혈액 또는 혈청 또는 전신에서의 상승된 요산 수치와 연관되거나 이에 의해 생기고, 통풍; 고뇨산혈증; 신장 질환; 관절염; 신장 결석; 신부전; 요로결석증; 연독; 부갑상선 기능 항진증; 건선; 대사의 선천적 유전적 오차, (예컨대 레쉬-니한 증후군) 및 사르코이드증을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 이작용성 화합물은 다른 과량의 요산과 연관된 장애, 예를 들어 NAFLD, NASH, 죽상동맥경화증 또는 심혈관 질환의 다른 형태, 고혈압, 만성 신장 질환, 당뇨, 당뇨병, 인슐린 내성, 및 대사 증후군, 및/또는 혈액, 골수 또는 고형 장기의 이식을 치료하거나 예방하도록 효과적으로 사용될 수 있다.
이 약물은 통풍 및 신장 질환(급성 요산 신장병증, 만성 요산염 신장병증, 요산 신장결석 및 만성 신장 질환 포함)을 치료하는 데 특히 유용하다. 또한, 화학요법에 의한 몇몇 암의 치료는 혈액으로 다량의 요산의 방출을 발생시키고, 이것은 신장을 손상시킬 수 있다. 특히 "종양 용해 증후군"으로 공지된 장애인 화학요법 유도된 고뇨산혈증은 또한 본 발명의 방법에 따라 치료, 예방 또는 경감될 수 있다. 과량의 요산을 갖는 대상체, 예컨대 통풍, 신장 질환, 또는 화학요법으로 인해 상승된 요산 수치를 발생시킬 위험을 겪는 대상체에 대한 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합의 투여는 혈액에서의 요산 수치를 감소시킴으로써, 또는 증가의 이 수치를 예방하거나 제어함으로써 이 장애를 치료, 예방 또는 경감시킨다. 구체적인 실시형태에서, 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합의 투여에 의해 치료되는 과량의 요산과 연관된 장애는 통풍이다. 혈청에서의 과량의 요산 또는 상승된 요산 수치와 연관된 장애(고뇨산혈증)를 치료하기 위한 모든 이러한 방법이 치료학적 용도를 위한 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합, 및 혈액 또는 혈청 또는 전신에서의 과량의 요산과 연관된 장애의 치료를 위한, 임의의 화학식 (I) 내지 (VIII)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합에 상응하는 것으로 이해되어야 한다.
대상체에게 투여되는 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합의 용량은 투여의 시간 과정에 걸쳐 혈액 또는 혈청에서의 요산 수치의 원하는 감소를 달성하기에 충분한 임의의 용량일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 약 20 내지 약 1,500㎎/㎡/일의 일일 용량을 투여한다. 다른 실시형태에서, 약 20 내지 약 500㎎/㎡/일, 약 20 내지 약 250㎎/㎡/일, 약 20 내지 약 150㎎/㎡/일 또는 약 20 내지 약 100㎎/㎡/일의 일일 용량을 투여한다. 다른 실시형태에서, 약 50 내지 약 1,500㎎/㎡/일의 일일 용량을 투여한다. 다른 실시형태에서, 약 50 내지 약 500㎎/㎡/일, 약 50 내지 약 150㎎/㎡/일, 약 50 내지 약 100㎎/㎡/일, 또는 약 20 내지 약 100㎎/㎡/일의 일일 용량을 투여한다.
임의의 상기 방법의 소정의 실시형태에서, 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합은 비경구로, 복강내로, 정맥내로, 비강내로, 직장내로 또는 경구로 대상체에게 투여된다. 특히 유용한 투여 경로는 주사, 점적주사 또는 경구 투여를 포함한다. 용량마다 투여되는 약물의 양은 혈액 또는 혈청, 또는 전신에서의 요산 수치의 감소를 달성하기에, 혈액 또는 혈청 또는 전신에서의 요산 수치의 상승을 예방하기에, 또는 치료의 과정에 걸쳐 과량의 요산과 연관된 장애를 치료하거나 예방하기에 충분한 양이다. 당업자는 환자의 신체 조성 또는 치료에 대한 저요산혈증 반응에 기초하여 용량의 개별화가 의학적으로 필요하거나 바람직할 수 있다는 것을 인식할 것이다.
약물(들)은 혈액 또는 혈청 또는 전신에서의 요산 수치에서의 원하는 감소를 달성하기 위해 또는 과량의 요산과 연관된 장애를 치료하기 위해 시간 기간에 걸쳐 간헐적으로 또는 연속하여 대상체에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 용량은 간헐적으로 매일 수회, 일마다, 주마다 1회, 2회 또는 3회, 또는 달 간격으로 투여될 수 있다. 구체적인 예에서, 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합은 약 5일 동안 24시간에 걸쳐 연속 정맥내 점적주사에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 대안적으로, 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합은 연속 약 5일 동안 약 1시간 내지 약 5시간에 걸쳐 정맥내 점적주사에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 구체적인 예에서, 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합은 연속 약 5일 동안 약 10분에 걸쳐 근육내 주사 또는 정맥내 점적주사에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 추가의 구체적인 실시형태에서, 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합은 약 5일 동안 매일의 볼루스 주사에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 투여의 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 1주 또는 약 2주, 또는 반복된 치료 사이클에서 더 긴 기간 동안을 포함하는, 임의의 상기 프로토콜에서의 투여의 시간 기간은 요산 수치에서의 원하는 감소를 달성하도록 변형될 수 있고, 이 치료는 매 2주 내지 매 10주의 간격으로 반복될 수 있다.
연속 정맥내 점적주사 또는 볼루스 정맥내 또는 피하 주사 이외에, 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합은 대상체에게 경구로 투여될 수 있다. 이 실시형태에서, 상기 기재된 바대로 양의 경구 용량은 요산 수치에서의 원하는 감소를 달성하도록 1일, 2일, 3일, 4일 또는 5일 동안 1회, 2회, 3회 또는 4회의 투여로 투여될 수 있다. 추가의 실시형태에서, 상기 기재된 바와 같은 경구 용량은 요산 수치에서의 원하는 감소를 달성하도록 매일 1회 또는 1주 또는 2주 동안 1회, 2회, 3회 또는 4회의 투여로 투여될 수 있다.
혈액 또는 혈청 또는 전신에서 요산의 감소된 수치를 요하거나, 과량의 요산과 연관된 장애의 치료를 요하는 대상체가 요산에서의 원하는 감소를 달성하도록 초기에 매우 공격적으로 치료될 것으로 이해될 것이다. 초기 치료 및 정상 또는 준정상 수치로의 요산의 감소 이후에, 대상체는 혈액 또는 혈청에서의 요산의 정상 또는 준정상 수치를 유지하고, 초기 치료에 후속하는 요산 수치의 상승을 예방하도록 시간의 기간에 걸쳐, 또는 일생에 걸쳐 추가로 치료될 수 있다. 유지 또는 예방적 프로토콜은, 혈액 또는 혈청 또는 전신에서 정상 또는 준정상 요산 수치를 유지시키기 위해 필요하거나 원하는 바대로, 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합의 감소된 투약량 및/또는 덜 빈번한 투여를 포함할 수 있다. 예를 들어, 유지 프로토콜에서, 약물(들)은 치료 기간 사이에 요산 수치 상승으로서 매일, 매주, 매달 또는 간헐적으로 투여될 수 있다. 이러한 유지 프로토콜은 연장된 시간 기간 동안 정상 또는 준정상 요산 수치를 유지시키고, 과량의 요산과 연관된 장애를 발생시킬 대상체의 일생 위험을 감소시키기 위해 작용할 것이다. 정상 초과 또는 높은 정상으로부터 정상 또는 준정상으로 요산 수치의 초기 감소, 및 정상 또는 준정상 요산 수치의 유지는 과량의 요산과 연관된 장애의 치료에 포함된 특징 둘 다이다. 소정의 실시형태에서, 통상적인 환자가 다양한 기간의 매일의 치료를 요하고, 이러한 매일 치료가 생애 동안 또는 연장된 기간 동안 간헐적으로 제공될 수 있는 것으로 기대된다.
임의의 상기 방법의 소정의 실시형태에서, 대상체의 혈액 또는 혈청 요산 수치는 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합의 투여 전의 요산 수치와 비교하여 적어도 25% 감소한다. 소정의 추가의 실시형태에서, 대상체의 혈액 또는 혈청 요산 수치는 투여 전의 수치와 비교하여 50% 이상 감소한다. 구체적인 실시형태에서, 요산 수치는 500㎎/㎡/일 이하의 일일 용량에서도 약 75% 감소한다.
본 발명의 제2 양태에서, 혈액 또는 혈청 요산 수치를 감소시키기에 효과적인 양으로 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합을 이를 요하는 대상체에게 투여하여서 과량의 요산과 연관된 장애를 치료하는 단계를 포함하는 혈액 또는 혈청 또는 전신에서 과량의 요산과 연관된 장애를 치료하는 방법이 제공된다. 투약, 투여 경로, 초기 치료 및 유지 치료에 관한 과량의 요산과 연관된 장애 대사를 치료하기 위한 방법의 구체적인 실시형태는 혈액 또는 혈청에서 요산 수치를 감소시키기 위해 상기 기재된 바와 같다. 요산 수치의 초기 감소는 통상적으로 빠르고, 대개 1일 내지 3일 내에 발생한다. 정상 또는 준정상 수치로 요산 수치의 감소 시, 계속된 유지 또는 예방적 치료는 과량의 요산, 예컨대 감소한 염증, 감소한 통증, 기형 발생의 느려짐, 신장 결석의 감소, 신장 기능의 개선, 종양 용해 증후군의 예방, 개선된 인지, 심혈관 질환 및 고혈압의 개선(또는 이에 대한 실제 또는 위험의 감소), 인슐린 내성의 역전 또는 간 기능의 매개변수의 개선의 적어도 하나의 증상의 검출 가능한 개선을 또한 발생시킬 수 있다. 당업자는 연장된 치료를 요할 수 있는 과량의 요산의 재발로 인해 질환의 재발성 증상 또는 합병증의 예방이 환자 이익을 최대화하기 위해 매우 바람직할 것이라는 것을 인식할 것이다.
상기 방법에 상응하는 실시형태에서, 본 발명은 이를 요하는 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 전신에서 요산 수치를 감소시키거나, 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 전신에서의 요산 수치의 증가를 예방하거나, 과량의 요산과 연관된 장애를 치료하기 위한, 본 명세서에 개시된 화합물, 또는 이들의 조합의 용도에 관한 것이다. 투여 경로, 투약량 및 투여되는 화합물을 포함하는 개시된 치료 또는 예방의 각각의 방법은 화합물의 이러한 용도에 또한 적용 가능하다.
본 발명의 추가의 양태는 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 약제학적 조성물의 소정의 실시형태에서, 조성물은 용액 또는 정제로서 제제화된다. 약물(들)의 용액 또는 분산액은 물 또는 식염수 중에 제조될 수 있다. 약제학적 조성물의 소정의 실시형태에서, 약제학적으로 허용 가능한 담체는 용매, 분산제, 코팅(예를 들어, 레시틴), 계면활성제(예를 들어, 하이드록시프로필셀룰로스), 보존제(예를 들어, 파라벤, 페놀, 티메로살, 소르브산, 클로로부탄올), 에멀션, 알코올(예를 들어, 에탄올), 폴리올(예를 들어, 글라이세롤, 프로필렌 글라이콜) 및 등장화제(예를 들어, 당, 염화나트륨) 중 하나 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 성분이다.
상기 약제학적 조성물의 소정의 실시형태에서, 조성물은 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합의 제어 방출을 위해 제제화된다. 상기 방법의 소정의 실시형태에서, 화학식 (I), 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물, 또는 이들의 조합은 제어 방출을 위한 형태로 투여된다. 제어 방출 조성물은 활성 성분의 방출을 더 느리게 하거나 신체 내에 이의 작용 동안 연장되는 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함할 수 있다. 제어 방출 조성물의 예는 활성 성분의 흡수를 지연시키는 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제(예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트, 젤라틴, 천연 또는 합성 친수성 검)를 포함한다. 대안적으로, 약제학적 조성물의 제어 방출은 장치, 예컨대 펌프, 임플란트 또는 경피 패치를 사용할 수 있다.
상기 약제학적 조성물의 소정의 실시형태에서, 조성물은 개선된 경구 생체이용률 또는 신체에서 연장된 방출을 위해 제제화된다. 화합물의 용해 속도 또는 평형 용해도를 개선하기 위해, 예를 들어, 마이크로에멀션, 입자 크기 감소 및 복합체형성 기술을 이용할 수 있다. 경구 생체이용률 또는 연장된 방출을 개선하기 위한 다른 적합한 화학적 및 물리적 수단은 당업자에게 또한 공지될 것이다.
실시예
트라이포스겐 커플링을 위한 일반 절차: 2-(메틸티오)피리미딘-4,6-다이올(2당량)을 실온에서 5분 동안 DMSO(0.2M) 중에 용해된 나트륨 tert-뷰톡사이드(2.0당량)의 교반하는 용액에 첨가하였다. 별개의 플라스크에서, 아민을 1,4-다이옥산(0.8M) 중에 용해시키고, 이 용액에 트라이포스겐(0.33당량)을 일 부분으로 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2분 동안 격렬히 교반하고, 이후 iPr2NEt(2당량)를 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2분 동안 격렬히 교반하였다. DMSO 중의 나트륨 6-하이드록시-2-(메틸티오)피리미딘-4-올레이트의 새로 제조된 용액을 일 부분으로 현탁액에 첨가하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 반응물을 90℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 C18 칼럼에 직접 로딩하고, 역상 크로마토그래피를 통해 정제하였다.
실시예 1: 4-하이드록시-N-(4-(4-메틸-1H-1,2,3-트라이아졸-5-일)페닐)-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(101, 도 9와 관련하여 화학식 (IIff))의 제조.
단계 1. 1-나이트로-4-(프로프-1-인-1-일)벤젠: 1-브로모-4-나이트로벤젠(1.00g, 4.95m㏖), PdCl2(PPh3)2(174㎎, 0.248m㏖) 및 CuI(47㎎, 0.248m㏖)를 함유하는 환저 플라스크를 15분 동안 질소에 의해 퍼징하였다. 무수 아세토나이트릴(2.5㎖), 이어서 헵탄 중의 프로핀(13.2㎖, 99.0m㏖, 헵탄 중의 3%) 및 Et3N(1.4㎖, 9.90m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉하고, 20시간 동안 실온으로 교반되게 하였다. 이후, 반응 혼합물을 농축시키고, 다이에틸 에터를 첨가하고, 이후 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 이후 ISCO(SiO2, 20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 25% 에틸 아세테이트의 구배 용리제)를 통해 정제하여 황색의 고체(645㎎, >99% 순도, 81% 수율)를 생성하였다.
R f : 0.79(헥산 중의 25% 에틸 아세테이트).
LCMS: RT = 1.73분; 순도 = >99%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 5-메틸-4-(4-나이트로페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸(101-B): 나트륨 아자이드(111㎎, 1.71m㏖)를 실온에서 무수 DMF(7.1㎖) 중에 용해된 101-A(229㎎, 1.42m㏖)에 첨가하였다. 반응물을 압력 용기에서 밀봉하고, 18시간 동안 120℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 가온되게 하고, 다이클로로메탄, 이어서 물을 첨가하였다. 수성 층을 다이클로로메탄(3 Х 20㎖)에 의해 추출하고, 합한 유기 추출물을 염수에 의해 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 이후 감압 하에 농축시켜 추가의 정제 없이 갈색의 고체(180㎎, >99% 순도, 62% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 205.29; RT = 1.29분; 순도 = >99%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. 4-(5-메틸-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)아닐린(101-C): 염화주석(II)(938㎎, 4.51m㏖)을 실온에서 EtOH(3.8㎖) 및 농축 HCl(710㎕) 중의 101-B(230㎎, 1.13m㏖)에 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 1시간 동안 환류로 가열하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, 반응물을 실온으로 냉각시킨 후, 실온에서 MeOH(10㎖) 중의 K3PO4(약 1.0g)의 용액에 부었다. pH가 더 이상 산성이 아닐 때까지, 생성된 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 침전물을 여과시키고, 추가 메탄올에 의해 세척하였다. 여과액을 수집하고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(SiO2, 12CV에 걸쳐 다이클로로메탄 중의 0 내지 15% 메탄올의 구배 용리제)를 통해 정제하여 갈색의 오일(69㎎, 35% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 175.42; RT = 0.83분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. 4-하이드록시-N-(4-(4-메틸-1H-1,2,3-트라이아졸-5-일)페닐)-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(101): 101을 일반 절차 2에 따라 합성하였다. 2-(메틸티오)피리미딘-4,6-다이올(171㎎, 1.08m㏖)을 실온에서 5분 동안 DMSO(2.7㎖) 중에 용해된 나트륨 tert-뷰톡사이드(104㎎, 1.08m㏖)의 교반하는 용액에 첨가하였다. 별개의 플라스크에서, 아닐린 101-C를 1,4-다이옥산(680㎖) 중에 용해시키고, 이 용액에 일 부분으로 트라이포스겐(53㎎, 0.178m㏖)을 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2분 동안 격렬히 교반하고, 이후 iPr2NEt(190㎕)를 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2분 동안 격렬히 교반하였다. DMSO 중의 나트륨 6-하이드록시-2-(메틸티오)피리미딘-4-올레이트의 새로 제조된 용액을 일 부분으로 현탁액에 첨가하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 반응물을 90℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 C18 칼럼에 직접 로딩하고, 역상 크로마토그래피(20CV에 걸쳐 폼산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 100% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 갈색의 고체(29.2㎎, 97.7% 순도, 15% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.69 (br s, 4H), 2.44 (s, 3H), 2.37 (s, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 359.0; RT = 1.37분; 순도 = 97.7%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 2: N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-5-일)페닐)-4-하이드록시-2-(아이소프로필티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(102). (102, 도 10과 관련하여 화학식 (IIi))의 제조.
단계 1. 1-(3,4,5-트라이메톡시벤질)티오우레아(102-A):(3,4,5-트라이메톡시페닐)메탄아민(2.5㎖, 14.6m㏖)을 0℃에서 다이클로로메탄(36.5㎖) 중에 용해된 1,1'-티오카보닐 다이이미다졸(3.91g, 22.0m㏖)의 용액에 적하하였다. 이후, 반응 혼합물을 2시간에 걸쳐 실온으로 가온되게 하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, 메탄올 중의 암모니아의 용액(7.5㎖, 52.6m㏖, MeOH 중의 7.0M)을 첨가하고, 이후 추가 20시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 다이클로로메탄을 첨가하고, 침전물을 단리시키고, 추가 CH2Cl2에 의해 세척하고, 이후 고진공 하에 건조시켜 밝은 핑크색의 고체(2.83g, 76% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 257.07; RT = 1.06분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 6-하이드록시-2-(아이소프로필티오)-3-(3,4,5-트라이메톡시벤질)피리미딘-4(3H)-온(102-B): 메탄올(2.4㎖) 중의 102-A(781㎎, 3.05m㏖), 다이에틸 말로네이트(465㎕, 3.05m㏖) 및 NaOMe(1.4㎖, 6.10m㏖, MeOH 중의 4.4M)의 혼합물을 3시간 동안 환류로 가열하였다. 이후, 반응물을 약 50℃로 냉각시키고, 아이소프로필 요오다이드(3.5㎖, 30.5m㏖)를 이후 일 부분으로 첨가하였다. 반응물을 50℃에서 추가 30분 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(15CV에 걸쳐 폼산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 100% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 백색의 고체(433㎎, 97.7% 순도, 38% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 367.02; RT = 1.41분; 순도 = 97.7%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-5-일)페닐)-4-하이드록시-2-(아이소프로필티오)-6-옥소-1-(3,4,5-트라이메톡시벤질)-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(102-C): 102-C를 일반 절차 2에 따라 합성하였다. 102-B(97㎎, 0.265m㏖)를 실온에서 5분 동안 DMSO(870㎕) 중에 용해된 나트륨 tert-뷰톡사이드(25㎎, 0.265m㏖)의 교반하는 용액에 첨가하였다. 별개의 플라스크에서, 아닐린 XX를 1,4-다이옥산(220㎕) 중에 용해시키고, 이 용액에 트라이포스겐(17㎎, 0.0578m㏖)을 일 부분으로 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2분 동안 격렬히 교반하고, 이후 iPr2NEt(60㎕)를 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2분 동안 격렬히 교반하였다. DMSO 중의 나트륨 6-하이드록시-2-(아이소프로필티오)-3-(3,4,5-트라이메톡시벤질)피리미딘-4(3H)-올레이트의 새로 제조된 용액을 현탁액에 일 부분으로 첨가하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 반응물을 90℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 C18 칼럼에 직접 로딩하고, 역상 크로마토그래피(15CV에 걸쳐 폼산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 30 내지 100% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 갈색의 고체(31.2㎎, 80.2% 순도, 26% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 552.9; RT = 1.80분; 순도 = 80.2%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-5-일)페닐)-4-하이드록시-2-(아이소프로필티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(102): 다이클로로메탄(1.5㎖) 중의 102-C(31.2㎎, 0.0452m㏖, 80% 순도)의 용액을 트라이플루오로아세트산(270㎕)에 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 가압 용기에서 밀봉하고, 이후 20시간 동안 60℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 메탄올(3x)에 의해 수회 공증발시키고, 이후 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 폼산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 30 내지 100% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 미백색의 고체(6.0㎎, 98.6% 순도, 35% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6+AcOD) δ 8.23 (s, 1H), 7.87 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.68 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 3.92 (dt, J = 13.7, 6.9 Hz, 1H), 1.36 (d, J = 6.9 Hz, 6H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 373.1; RT = 1.49분; 순도 = 98.6%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 3: N-(5-(1H-1,2,3-트라이아졸-5-일)피리딘-2-일)-4,6-다이하이드록시-2-(메틸티오)피리미딘-5-카복사미드(103, 도 11과 관련하여 화학식 (IIjj))의 제조
단계 1. 5-((트라이메틸실릴)에티닐)피리딘-2-아민(103-A): 밀봉 관에 2-아미노-5-브로모피리딘(1.00g, 5.8m㏖), Pd(dba)2Cl2(202㎎, 0.29m㏖), PPh3(151㎎, 0.58m㏖), CuI(110㎎, 0.578m㏖), Et3N(10㎖) 및 TMS-아세틸렌(963㎎, 9.8m㏖)을 순차적으로 첨가하였다. 혼합물을 탈기시키고, 85℃에서 2시간 동안 가열하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, 용매를 진공에서 제거하고, 미정제물을 실리카(구배 헥산 중의 0 내지 100% 에틸 아세테이트의 용리제) 위에서 정제하였다. 103-A를 베이지색의 고체(812㎎, 74% 수율)로서 얻었다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 191.3; RT = 1.55분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 5-에티닐피리딘-2-아민(103-B): 103-A(500㎎, 2.6m㏖)를 THF(5㎖) 중에 용해시키고, 이 용액에 TBAF(5㎖, THF 중의 1M)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 10분 동안 교반하고, THF를 진공에서 제거하였다. 미정제물을 EtOAc 중에 용해시키고, 이 용액을 실리카의 패드를 통해 통과시키고, EtOAc에 의해 세척하였다. 여과액을 농축시켜 베이지색의 고체(256㎎, 82% 수율)로서 103-B를 생성하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 118.8; RT = 0.41분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. N-(5-에티닐피리딘-2-일)-4,6-다이하이드록시-2-(메틸티오)피리미딘-5-카복사미드(103-C): t-BuONa(136㎎, 1.4m㏖)를 DMSO(2㎖) 중에 용해시키고, 이 용액에 2-(메틸티오)피리미딘-4,6-다이올(224㎎, 1.4m㏖)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 5분 동안 교반하고, 제2 단계를 위해 제쳐 두었다. 동시에, 103-B(84㎎, 0.71m㏖)를 DCE(1㎖) 중에 용해시키고, 용액에 CDI(115㎎, 0.71m㏖)를 일 부분으로 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2분 동안 격렬히 교반하고, iPr2NEt(250㎕, 1.4m㏖)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 2분 동안 격렬히 교반하였다. DMSO 중의 나트륨 6-하이드록시-2-(메틸티오)피리미딘-4-올레이트의 새로 제조된 용액을 현탁액에 첨가하였다. 반응물을 90℃에서 30분 동안 교반하였다. DCE 용매를 진공에서 제거하고, 생성물을 ISCO(120g C18 칼럼, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 50% 아세토나이트릴의 구배 용리제)에 의해 단리시켰다. 생성물은 물 중의 35% MeCN에서 용리하였다. 생성물은 동결건조 후 베이지색의 고체(62㎎, 29% 수율)로서 단리되었다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 303.0; RT = 1.59분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. N-(5-(1H-1,2,3-트라이아졸-5-일)피리딘-2-일)-4,6-다이하이드록시-2-(메틸티오)피리미딘-5-카복사미드(103). 103-C(62㎎, 0.21m㏖)를 DMSO(2㎖) 중에 용해시키고, 이 용액에 NaN3(67㎎, 1.0m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 180℃에서 30분 동안 교반하였다. 생성물을 ISCO(60g C18 칼럼, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 50% 아세토나이트릴의 구배 용리제, 생성물은 물 중의 22% MeCN에서 용리됨)에 의해 정제하였다. 생성물은 동결건조 후 미백색의 고체(25㎎, 35% 수율)로서 단리되었다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6, D2O 중의 DCl) δ 12.11 (s, 1H), 8.88 (dd, J = 2.4, 0.8 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.33 (dd, J = 8.6, 2.4 Hz, 1H), 8.22 (dd, J = 8.7, 0.8 Hz, 1H), 2.56 (s, 3H).
LCMS: m/z [M-1]- = 346.0; RT = 1.29분; 순도 = 94.4%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 4: 4-하이드록시-2-메톡시-N-(4-(4-메틸-1H-1,2,3-트라이아졸-5-일)페닐)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(104, 도 12와 관련하여 화학식 (IIgg))의 제조. 104를 일반 절차 1에 따라 합성하였다. 무수 DMSO(130㎕) 중의 101-C(23㎎, 0.132m㏖)의 교반하는 용액에 불활성 분위기 하에 실온에서 1,1'카보닐다이이미다졸(33㎎, 0.198m㏖)을 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 20분 동안 교반하였다. 2-메톡시피리미딘-4,6-다이올(21㎎, 0.145m㏖)을 함유하는 별개의 플라스크에서 무수 1,4-다이옥산(440㎕)을 첨가하고, 이후 50℃로 가열하였다. Et3N(29㎕, 0.211m㏖)을 첨가하고, 50℃에서 15분 동안 교반하였다. DMSO 중의 아민으로부터 생성된 아이소사이아네이트를 교반하는 현탁액에 첨가하고, 이후 LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지(30분), 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 6M HCl(수성)에 의해 산성화시키고, 반응 혼합물을 C18 칼럼에 직접 로딩하고, ISCO(20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 50% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 미백색의 고체(1.6㎎, 97.0% 순도, 4% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.14 (s, 1H), 7.69 (s, 4H), 3.79 (s, 3H), 2.44 (s, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 342.7; RT = 1.24분; 순도 = 97.0%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 5: N-(3-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)바이사이클로[1.1.1]펜탄-1-일)-2,4-다이하이드록시-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(105, 도 13과 관련하여 화학식 (IIhh))의 제조.
단계 1. tert-뷰틸(3-(하이드록시메틸)바이사이클로[1.1.1]펜탄-1-일)카바메이트(105-A). 3-((Tert-뷰톡시카보닐)아미노)바이사이클로[1.1.1]펜탄-1-카복실산(600㎎, 2.6m㏖)을 THF(25㎖)에 첨가하였다. 용액을 N2 하에 0℃로 냉각시켰다. 용액에 N2 하에 LiAH4(401㎎, 10.6m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. Na2SO4 10수화물(500㎎)을 반응물에 천천히 첨가하고, 반응물을 EtOAc(30㎖)에 의해 희석하였다. 침전물을 여과시키고, 여과액을 진공에서 농축시켜 미정제 PA67(420㎎, 75% 수율)을 생성하고, 이것을 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 3.7 (s, 2H), 1.94 (s, 6H), 1.44 (s, 9H).
단계 2. tert-뷰틸(3-폼일바이사이클로[1.1.1]펜탄-1-일)카바메이트(105-B). SO3-피리딘(500㎎, 3.1m㏖)을 실온에서 CH2Cl2(6㎖) 중의 DMSO(1.2g, 15m㏖), 105-A(335㎎, 1.6m㏖) 및 iPr2Net(811㎎, 6.3m㏖)의 용액에 부분으로 첨가하였다(약간 발열). 반응물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 CH2Cl2(30㎖)에 의해 희석하였다. 이후, 반응물을 포화 NaHCO3 (10㎖), 염수(10㎖)에 의해 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 미정제 105-B를 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.66 (s, 1H), 2.29 (s, 6H), 1.44 (s, 9H).
단계 3. tert-뷰틸(3-에티닐바이사이클로[1.1.1]펜탄-1-일)카바메이트(105-C). 105-B(80㎎, 0.38m㏖)를 건조 MeOH/THF(2㎖, 1:1 v/v, 밤새 MgSO4 위에서 건조됨) 중에 용해시켰다. 용액에 K2CO3(105㎎, 0.76m㏖) 및 다이메틸 di아조-2-옥소프로필포스포네이트(95㎎, 0.49m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반하였다. ISCO 정제(실리카에 의해 건조 로딩, 구배
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2.29 (s, 6H), 2.10 (s, 1H), 1.25 (s, 9H). 헥산 중의 0 내지 50% 에틸 아세테이트의 구배 용리제)를 수행하여 원하는 생성물, 105-C(42㎎, 53% 수율)을 생성하였다.
단계 4. tert-뷰틸(3-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)바이사이클로[1.1.1]펜탄-1-일)카바메이트(105-D). CuSO4(3㎖ 물 중의 263㎎, 1.6m㏖)를 나트륨 아스코르베이트(3㎖ 물 중의 390㎎, 2.0m㏖)에 첨가하였다. 용액을 실온에서 1분 동안 교반하고, DMSO(8㎖)를 혼합물에 첨가하였다. 현탁액을 4㎖ MeOH 중의 105-C(70㎎, 0.33m㏖) 및 PMB-N3(161㎎, 0.99m㏖) 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 침전물을 셀라이트에 의해 여과시키고, 메탄올에 의해 세척하였다. 여과액을 농축시켜 MeOH를 제거하고, 생성물을 EtOAc/H2O(40㎖/20㎖)에 의해 추출하였다. 유기 층을 염수에 의해 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 이후 진공에서 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 실리카 패드(헥산 중의 30% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 과량의 아자이드를 제거하였다. 생성물을 1/1 MeOH/DCM에 의해 플러싱하여 원하는 생성물(115㎎, 95% 수율)을 생성하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 371.1; RT = 1.61분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. 3-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)바이사이클로[1.1.1]펜탄-1-아민(105-E). 105-D(80㎎,
LCMS: m/z [M+1]+ = 271.0; RT = 1.08분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴. 0.22 mol)를 TFA(4㎖) 중에 용해시키고, 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하고, 미정제물을 EtOAc(30㎖) 중에 용해시켰다. 유기 층을 포화 수성 Na2CO3(10㎖) 및 염수(10㎖)에 의해 세척하였다. 이후, 유기 층을 MgSO4 위에서 건조시키고, 용매를 진공에서 제거하여 미정제 생성물(58㎎, 99% 수율)을 생성시켰다.
단계 6. 4-하이드록시-N-(3-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)바이사이클로[1.1.1]펜탄-1-일)-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(105-F). 105-E(57㎎, 0.21m㏖)를 다이옥산(0.3㎖) 중에 용해시켰다. 이 용액에 CDI(45㎎, 0.27m㏖)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 3분 동안 교반하고, iPr2NEt(82㎎, 0.63m㏖)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 이 용액에 DMSO(1㎖) 중의 NaOt-Bu(61㎎, 0.63m㏖)와 함께 새로 제조된 2-(메틸티오)피리미딘-4,6-다이올(100㎎, 0.63m㏖)을 첨가하였다. LCMS에 의해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 혼합물을 1시간 동안 90℃까지 가열하였다. 이후, 미정제 생성물을 ISCO(중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 100% 아세토나이트릴의 구배 용리제, 물 중의 35% MeCN에서 용리된 생성물)에 의해 정제하여 동결건조 후 생성물(42㎎, 44% 수율)을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 455.1; RT = 1.54분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 7. N-(3-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)바이사이클로[1.1.1]펜탄-1-일)-2,4-다이하이드록시-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(105). 106-F(20㎎, 0.044m㏖)를 TFA(4㎖) 중에 용해시키고, TfOH(0.2㎖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 85℃에서 4시간 동안 가열하였다. 반응물에 (TfOH에 의해 야기된 분해를 막도록) 0.3㎖ iPr2NEt를 첨가하고, 반응물을 진공에서 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(15CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 100% 아세토나이트릴의 구배 용리제)에 의해 정제하여 백색의 고체(27㎎, 87% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6 + TFA) δ 9.91 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.45 (s, 6H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 334.9; RT = 1.23분; 순도 = 97.0%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 6: N-(6-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)피리딘-3-일)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(106, 도 14와 관련하여 화학식 (IIii))의 제조.
단계 1. 6-브로모피리딘-3-아민(106-A). EtOH/THF/H2O/NH4Cl(포화)(5.0㎖, 4:4:1:1 v/v)의 혼합물 중의 2-브로모-5-나이트로피리딘(502㎎, 2.47m㏖)의 용액에 Fe 분말(1.40g, 25.1m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 밤새 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 EtOAc를 사용하여 셀라이트/MgSO4 혼합물(1:1)의 패드를 통해 여과시켰다. 미정제 생성물을 농축시키고, ISCO(SiO2, 헥산 중의 0 내지 50%% 에틸 아세테이트)를 통한 정제로 처리하여 갈색의 고체(411㎎, 96.1% 수율)로서 생성물을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.84 (dd, J = 3.1, 0.5 Hz, 1H), 7.21 (dd, J = 8.5, 0.6 Hz, 1H), 6.87 (dd, J = 8.5, 3.1 Hz, 1H), 3.73 (br s, 2H).
13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 142.1, 137.1, 129.6, 127.8, 124.7.
LCMS: m/z [M+2H]+ = 175.2, RT = 0.92분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 6-((트라이메틸실릴)에티닐)피리딘-3-아민(106-B). 건조 15㎖ 환저 플라스크에 PdCl2(PPh3)2(25㎎, 0.0360m㏖)를 첨가하고, CuI(4.9㎎, 0.0260m㏖) 및 6-브로모피리딘-3-아민 106-A(200㎎, 1.16m㏖)을 THF(4㎖)에 첨가하고, 용액을 N2에 의한 버블링에 의해 탈기시켰다. 용액 혼합물을 2-에탄올아민(140㎕, 2.32m㏖) 및 에티닐트라이메틸실란(200㎕, 1.42m㏖)에 의해 처리하고, 반응물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc를 사용하여 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 미정제 생성물을 농축시키고, ISCO(SiO2, 헥산 중의 0 내지 25% 에틸 아세테이트)를 통한 정제로 처리하여 갈색의 고체(179㎎, 81.4% 수율)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (dd, J = 2.9, 0.5 Hz, 1H), 7.28 - 7.22 (m, 1H), 6.87 (dd, J = 8.4, 2.8 Hz, 1H), 3.86 (s, 2H), 0.24 (s, 9H).
LCMS: m/z [M+H]+ = 191.3, RT = 1.52분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. 6-에티닐피리딘-3-아민(106-C). THF(14㎖) 중의 106-B(529㎎, 2.78m㏖)의 용액에 TBAF(3.0㎖ 3.00m㏖, THF 중의 1M)를 첨가하고, 생성된 검정 용액을 실온에서 교반하였다. 30분 후, 반응 혼합물을 물(20㎖)에 의해 세척하고, CH2Cl2(3x10㎖)에 의해 추출하였다. 유기 상을 염수(10㎖)에 의해 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 이후 농축시켰다. 미정제 고체를 ISCO(헥산 중의 10 내지 100% 에틸 아세테이트)를 통한 정제로 처리하여 갈색의 고체(310㎎, 94.5% 수율)로서 106-C를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (dd, J = 2.9, 0.7 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 8.4, 0.7 Hz, 1H), 6.90 (dd, J = 8.4, 2.9 Hz, 1H), 3.88 (brs, 2H), 3.02 (s, 1H).
LCMS: m/z [M+H]+ = 119.4, RT = 0.50분; 98% 순도.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. N-(6-에티닐피리딘-3-일)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(106-D). DMSO(2.4㎖) 중의 t-BuONa(163㎎, 1.69m㏖)의 용액에 4,6-다이하이드록시-2-메틸머캅토피리미딘(268㎎, 1.69m㏖)을 첨가하고, 용액을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 동시에, 106-C(100㎎, 0.846m㏖)를 DCE(1.2㎖) 중에 용해시키고, 용액에 CDI(251㎎, 0.846m㏖)를 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2분 동안 격렬히 교반하고, iPr2NEt(300㎕)를 첨가하였다. 용액을 2분 동안 격렬히 교반하였다. 이후, 제조된 DMSO 용액을 한 번에 현탁액에 첨가하고, 반응물을 90℃에서 30분 동안 교반하였다. 이후, DCE를 진공에서 제거하고, 미정제 생성물을 ISCO(C18 칼럼, 폼산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 50% 아세토나이트릴)에 의한 정제로 처리하였다. 생성물은 칼럼에서 침전되었다, 칼럼을 100% DMSO에 의해 플러싱하였다. 용매를 제거하여 적색의 고체(67.2㎎, 13.1% 수율)로서 106-D를 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+H]+ = 303.0, RT = 1.36분; 94% 순도.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴
단계 5. 4-하이드록시-N-(4-(5-하이드록시-1H-피라졸-3-일)페닐)-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(106). 106-D(67.2㎎, 0.220m㏖) 및 나트륨 아자이드(72.3㎎, 1.11m㏖)를 DMSO(2.2㎖) 중에 용해시켰다. 용액을 180℃에서 교반하고, LCMS를 통해 출발 재료의 소모를 모니터링하였다. 2시간 후, 미정제 생성물을 ISCO(C18 칼럼, 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 40% 아세토나이트릴)에 의한 정제로 처리하고, 동결건조시켜 백색의 고체(7.4㎎, 9.7% 수율)를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, D2O 중의 DCl) δ 9.18 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.63 (dd, J = 8.9, 2.3 Hz, 1H), 8.47 (app d, J = 8.9 Hz, 1H), 2.54-2.53 (m, J = 4.7 Hz, 3H).
1H NMR (400 MHz, CD3OD, D2O 중의 DCl) δ 9.44 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.69 (dd, J = 8.9, 2.1 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 2.64 (s, 3H).
LCMS: m/z [M+H]+ = 346.1, RT = 1.19분; 99% 순도.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 7: 4-하이드록시-N-(4-(5-하이드록시-1H-피라졸-3-일)페닐)-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(107, 도 15와 관련하여 화학식 (IIj))의 제조.
NaH(2.4㎎, 0.0615m㏖)를 0℃에서 THF(280㎕) 중의 XY(19.6㎎, 0.056m㏖)에 첨가하고, 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 이후, 5-(트라이플루오로메틸)-5H-다이벤조[b,d]티오펜-5-이윰 트라이플루오로메탄설포네이트(27㎎, 0.067m㏖)를 일 부분으로 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 72시간에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. 반응물을 메탄올(5㎖)에 의해 급랭시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 15CV에 걸쳐 폼산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 30 내지 100% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 백색의 고체(2.0㎎, 9% 수율)로서 생성물 107을 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 + AcOD) δ 8.09 (s, 5H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 399.1; RT = 2.01분; 순도 = 99.2%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 8: N-(4-(1H-1,2,4-트라이아졸-3-일)페닐)-2-(메틸티오)-4,6-다이옥소-1,4,5,6-테트라하이드로피리미딘-5-카복사미드(108, 도 16과 관련하여 화학식 (IIk))의 제조.
2-(메틸티오)피리미딘-4,6-다이올(300㎎, 1.90m㏖)을 실온에서 5분 동안 DMSO(4.8㎖) 중에 용해된 나트륨 tert-뷰톡사이드(182㎎, 1.90m㏖)의 교반하는 용액에 첨가하였다. 별개의 플라스크에서, 4-(4H-1,2,4-트라이아졸-3-일)아닐린(160㎎, 0.95m㏖, 95% 순도)을 1,4-다이옥산(1.2㎖) 중에 용해시키고, 이 용액에 트라이포스겐(93㎎, 0.314m㏖)을 일 부분으로 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2분 동안 격렬히 교반하고, 이후 iPr2NEt(330㎕, 1.90)를 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2분 동안 격렬히 교반하였다. DMSO 중의 나트륨 6-하이드록시-2-(메틸티오)피리미딘-4-올레이트의 새로 제조된 용액을 현탁액에 일 부분으로 첨가하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 반응물을 90℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 C18 칼럼에 직접 로딩하고, 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 5 내지 100% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 베이지색의 고체(23.5㎎, 7.0% 수율)로서 생성물 108을 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6 + AcOD) δ 8.07 (s, 1H), 7.99 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.69 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 2.50 (s, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 345.2; RT = 1.21분; 순도 = 95.2%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 9: N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-2-(에틸티오)-4-하이드록시-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(109, 도 17과 관련하여 화학식 (IIl))의 제조.
단계 1. 2-(에틸티오)-6-하이드록시피리미딘-4(3H)-온(109-A). 메탄올(1.5㎖) 중의 6-하이드록시-2-머캅토피리미딘-4(3H)-온(250㎎, 1.73m㏖) 및 NaOMe(400㎕, 1.76m㏖, MeOH 중의 4.4M)의 혼합물을 30분 동안 50℃로 가열하였다. 요오도에탄(140㎕, 1.74m㏖)을 반응 혼합물에 적하하고, 반응물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 여과시키고, 이후 메탄올에 의해 세척하였다. 여과액을 농축시켜 백색의 고체로서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 에틸 아세테이트에 의해 미분쇄하여 백색의 고체(270㎎, 90.5% 수율)로서 109-A를 얻었다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 173.4; RT = 0.78분; 순도 = 92.5%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-2-(에틸티오)-4-하이드록시-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(109). 화합물 109를 일반 절차 1에 따라 합성하였다. 반응 혼합물을 C18 칼럼에 직접 로딩하고, 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 5 내지 75% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 농축 후 불순한 생성물 109를 생성시켰다. 불순한 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 50% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 부분적으로 정제된 생성물 109를 생성시켰다. 원심분리를 이용하여 미분쇄를 통한 추가의 정제를 수행하였다. 고체를 물에 의해 세척하고, 상청액을 제거하고, 순서를 추가 3회 반복하고, 이후 2회 아세토나이트릴에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 동결건조시켜 미백색의 고체(11.2㎎, 2% 수율)로서 순수한 생성물 109를 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3 + TFA) δ 8.58 (s, 1H), 7.87 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.81 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 3.47 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.53 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 359.2; RT = 1.42분; 순도 = 95.2%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 10: N-(3-(1H-1,2,3-트라이아졸-5-일)페닐)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(110, 도 18과 관련하여 화학식 (IIm))의 제조.
단계 1. 3-((트라이메틸실릴)에티닐)아닐린(110-A). PdCl2(PPh3)2(124㎎, 0.176m㏖), CuI(22㎎, 0.118m㏖) 및 3-브로모아닐린(320㎕, 2.94m㏖)의 용액에 THF(10㎖)를 첨가하고, 용액을 N2에 의한 버블링에 의해 탈기시켰다. 용액 혼합물을 2-에탄올아민(360㎕, 5.88m㏖) 및 에티닐트라이메틸실란(620㎕, 4.41m㏖)에 의해 처리하고, 반응물을 65℃에서 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트를 사용하여 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 미정제 생성물을 농축시키고, 추가의 정제 없이 후속하는 반응으로 옮겼다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 190.3; RT = 1.82분; 순도 = 66%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 3-에티닐아닐린(110-B). THF(15㎖) 중의 110-A(556g, 2.94m㏖)의 용액에 TBAF(THF 중의 1M, 4.40㎖, 4.40m㏖)를 첨가하고, 생성된 검정 용액을 실온에서 교반하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 물(40㎖)에 의해 세척하고, CH2Cl2(3x10㎖)에 의해 추출하였다. 유기 상을 염수(10㎖)에 의해 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 이후 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(SiO2, 헥산 중의 10 내지 50% 에틸 아세테이트)를 통한 정제로 처리하여 어두운 갈색의 오일(320㎎, 93.2% 수율)로서 110-B를 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.10(ddd, J = 8.1, 7.6, 0.5 Hz, 1H), 6.92 - 6.88 (m, 1H), 6.83 - 6.79 (m, 1H), 6.67(ddd, J = 8.1, 2.4, 1.0 Hz, 1H), 3.68 (brs, 2H), 3.01 (s, 1H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 118.4; RT = 1.22분; 순도 = 97%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. 3-(1H-1,2,3-트라이아졸-5-일)아닐린(110-C). 무수 MeOH/DMF 용액(12.0㎖, 1:23 v/v) 중의 3-에티닐아닐린 110-B(300㎎, 2.56m㏖), CuI(24.4㎎, 0.128m㏖) 및 트라이메틸실릴 아자이드(510㎕, 3.84m㏖)의 용액을 100℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 물(20㎖)에 의해 세척하고, EtOAc(3x10㎖)에 의해 추출하였다. 유기 상을 포화 NH4Cl(10㎖), 염수(10㎖)에 의해 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 이후 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(헥산 중의 10 내지 100% 에틸 아세테이트)를 통한 정제로 처리하여 핑크색의 고체(205㎎, 50% 수율)로서 생성물을 얻었다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 161.4; RT = 0.79분; 순도 = 98%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. N-(3-(1H-1,2,3-트라이아졸-5-일)페닐)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(110). DMSO(3.1㎖) 중의 t-BuONa(120㎎, 1.25m㏖)의 용액에 4,6-다이하이드록시-2-메틸머캅토피리미딘(198㎎, 1.25m㏖)을 첨가하고, 용액을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 동시에, 110-C(100㎎, 0.624m㏖)를 1,4-다이옥산(0.800㎖) 중에 용해시키고, 용액에 트라이포스겐(61.0㎎, 0.206m㏖)을 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2분 동안 격렬히 교반하고, iPr2NEt(220㎕, 1.25m㏖)를 첨가하였다. 용액을 2분 동안 격렬히 교반하였다. 이후 제조된 DMSO 용액을 한 번에 현탁액에 첨가하고, 반응물을 90℃에서 30분 동안 교반하였다. 이후, 물(2㎖)을 반응 혼합물에 첨가하고, 미정제 용액을 MeOH를 사용하여 플라스크로 옮겼다. 미정제 혼합물을 농축시키고, 미정제 생성물을 ISCO(30g, C18 칼럼, 물/MeCN 중의 10mM AmF)에 의한 정제로 처리하였다. C18 칼럼을 DMSO에 의해 플러싱하고, 공기 건조에 의해 증발시켜 미정제 생성물을 얻었다. 생성물을 ISCO(30g, C18 칼럼, 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 50% 아세토나이트릴)에 의한 정제로 처리하여 생성물(22.8㎎, 5.3% 수율)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3 + TFA) δ 8.59 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.68 (s, 3H), 2.85 (s, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 345.1; RT = 1.33분; 순도 = >99%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 11: N-(4-(1H-1,2,4-트라이아졸-3-일)페닐)-6-하이드록시-2-(아이소프로필티오)-4-옥소-1,4-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(112, 도 19와 관련하여 화학식 (IIn))의 제조.
단계 1. 6-하이드록시-2-(아이소프로필티오)-3-(3,4,5-트라이메톡시벤질)피리미딘-4(3H)-온(112-A). 메탄올(4.4㎖) 중의 102-A(1.00g, 3.91m㏖), 다이에틸 말로네이트(600㎕, 3.91m㏖) 및 NaOMe(1.8㎖, 7.82m㏖, MeOH 중의 4.4M)의 혼합물을 3시간 동안 환류로 가열하였다. 이후, 반응물을 약 50℃로 냉각시키고, 이후 아이소프로필 요오다이드(4.4㎖, 39.1m㏖)를 일 부분으로 첨가하였다. 반응물을 50℃에서 추가 30분 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(15CV에 걸쳐 폼산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 100% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 백색의 고체(695㎎, 49% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 367.02; RT = 1.42분; 순도 = >99%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. N-(4-(1H-1,2,4-트라이아졸-3-일)페닐)-2-(아이소프로필티오)-4,6-다이옥소-1-(3,4,5-트라이메톡시벤질)-1,4,5,6-테트라하이드로피리미딘-5-카복사미드(112-B). 112-A(354㎎, 0.924m㏖)를 실온에서 5분 동안 DMSO(4.2㎖) 중에 용해된 나트륨 tert-뷰톡사이드(87㎎, 0.924m㏖)의 교반하는 용액에 첨가하였다. 별개의 플라스크에서, 4-(1H-1,2,4-트라이아졸-5-일)아닐린(141㎎ 0.840m㏖, 95% 순도)을 1,4-다이옥산(1.1㎖) 중에 용해시키고, 이 용액에 트라이포스겐(82㎎, 0.277m㏖)을 일 부분으로 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2분 동안 격렬히 교반하고, 이후 iPr2NEt(290㎕, 1.68)를 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2분 동안 격렬히 교반하였다. DMSO 증의 나트륨 6-하이드록시-2-(메틸티오)피리미딘-4-올레이트의 새로 제조된 용액을 현탁액에 일 부분으로 첨가하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 반응물을 90℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 C18 칼럼에 직접 로딩하고, 역상 크로마토그래피(C18, 구배 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 10 내지 75% 아세토나이트릴의 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 백색의 고체(34㎎, 6% 수율)로서 생성물 112-C를 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 553.4; RT = 1.73분; 순도 = 85.3%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. N-(4-(1H-1,2,4-트라이아졸-3-일)페닐)-6-하이드록시-2-(아이소프로필티오)-4-옥소-1,4-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(112). 다이클로로메탄(1.5㎖) 중의 112-B(31.2㎎, 0.0452m㏖)의 용액에 트라이플루오로아세트산(270㎕)을 첨가하고, 반응물을 고압 용기에서 밀봉하고, 60℃로 가열하였다. 20시간 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 메탄올(3x)에 의해 동시증발시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 60% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 백색의 고체로서 생성물 7을 생성시켰다. 원심분리에 의해 미분쇄를 통한 추가의 정제를 수행하였다. 고체를 물에 의해 세척하고, 상청액을 제거하고, 순서를 추가 3회 반복하고, 이후 2회 아세토나이트릴에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 동결건조시켜 미백색의 고체(13.0㎎, 64% 수율)로서 순수한 생성물 112를 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3+TFA) δ 9.49 (s, 1H), 8.15-8.08 (m, 2H), 7.88-7.80 (m, 2H), 4.28-4.16 (m, 1H), 1.59 (d, J = 6.5 Hz, 6H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 373.1; RT = 1.07분; 순도 = 98.9%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 중탄산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 12: N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-2-((사이클로프로필메틸)티오)-4,6-다이옥소-1,4,5,6-테트라하이드로피리미딘-5-카복사미드(113, 도 20과 관련하여 화학식 (IIo))의 제조.
단계 1. 2-((사이클로프로필메틸)티오)-1-(3,4,5-트라이메톡시벤질)피리미딘-4,6(1H,5H)-다이온(113-A). 메탄올(4.9㎖) 중의 102-A(697㎎, 2.71m㏖, 99.4% 순도), 다이에틸 말로네이트(940㎖, 6.13m㏖) 및 NaOMe(2.8㎖, 12.3m㏖, MeOH 중의 4.4M)의 혼합물에. 반응물을 2시간 동안 환류로 가열하고, 이후, 반응물을 50℃로 냉각시키고, (브로모메틸)사이클로프로판(290㎕, 2.98m㏖)을 50℃에서 추가 12시간 동안 첨가하고 교반하고, 불완전한 전환이 관찰되었다. 추가 NaOMe 용액(0.5㎖, 2.71m㏖, MeOH 중의 4.4M)을 반응 혼합물에 첨가한 후, (브로모메틸)사이클로프로판(300㎕, 3.09m㏖)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 30분 동안 교반하고, LCMS를 통해 완전한 전환이 관찰되었고, 이후 반응 혼합물을 농축시켰다. 에틸 아세테이트(약 10㎖)를 첨가하고, 침전물을 여과시키고, 아이소프로판올(약 10㎖)에 의해 세척하고, 이후 에틸 아세테이트에 의해 세척하였다. 생성물은 백색의 고체(715㎎, 67% 수율)로서 단리되었다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 379.4; m/z [M-1]- = 377.5; RT = 1.45분; 순도 = 96.5%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-2-((사이클로프로필메틸)티오)-4,6-다이옥소-1-(3,4,5-트라이메톡시벤질)-1,4,5,6-테트라하이드로피리미딘-5-카복사미드(113B). 화합물 113B를 일반 절차 1에 따라 합성하였다. 미정제 113A를 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 0 내지 70% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 황색의 고체(255㎎, 16% 수율)로서 부분적으로 정제된 생성물 113A를 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 565.5; RT = 1.82분; 순도 = 50.0%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-2-((사이클로프로필메틸)티오)-4,6-다이옥소-1,4,5,6-테트라하이드로피리미딘-5-카복사미드(113). 다이클로로메탄(6.6㎖) 중의 113-B(225㎎, 0.199m㏖)의 용액을 트라이플루오로아세트산(1.2㎖)에 첨가하고, 반응물을 고압 용기에서 밀봉하고, 60℃로 가열하였다. 20시간 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 메탄올(3x)에 의해 동시증발시켰다. 미정제 생성물 113을 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 40% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하고, 생성물을 함유하는 분획을 수집하고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 중탄산암모늄 완충제 10mM(약 20㎖)과 함께 물에 첨가하고, 이후 음파처리하였다. 침전물을 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 잔류물을 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 50% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 부분적으로 순수한 생성물을 생성시키고, 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 30% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 다시 정제하여 농축 후 백색의 고체로서 부분적으로 순수한 생성물을 생성시켰다. 백색의 고체를 탈이온수에 의해 미분쇄하고, 이후 여과액을 동결건조시켰다. 원심분리에 의해 미분쇄를 통한 추가의 정제를 수행하였다. 고체를 물에 의해 세척하고, 상청액을 제거하고, 순서를 추가 3회 반복하고, 이후 2회 아세토나이트릴에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 순서를 추가 3회 반복하고, 이후 2회 아세토나이트릴에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 고진공 하에 건조시켜 미백색의 고체(3.0㎎, 4% 수율)로서 순수한 생성물 113을 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3+TFA) δ 8.61 - 8.58 (m, 1H), 7.89 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 7.83 - 7.78 (m, 2H), 2.40 - 2.19 (m, 2H), 1.32 (br s, 4H), 0.49 (dd, J = 10.3, 4.6 Hz, 1H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 385.2; RT = 1.54분; 순도 = 96.4%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 중탄산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 13: N-(4-(1H-테트라졸-5-일)페닐)-2-(에틸티오)-4-하이드록시-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(114, 도 21과 관련하여 화학식 (IIp))의 제조.
단계 1. 2-(4-메톡시벤질)-5-(4-나이트로페닐)-2H-테트라졸(114-A). DMF(3.5㎖) 중의 5-(4-나이트로페닐)-1H-테트라졸(1.00g, 5.23m㏖) 및 K2CO3(1.33g, 5.76m㏖)의 용액에 p-메톡시벤질 클로라이드(901㎎, 5.76m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 55℃에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 포화 수성 NH4Cl(50㎖)에 의해 희석하고, EtOAc(3x25㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 추출물을 함께 풀링하고, 염수(50㎖)에 의해 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 이후 농축시켰다. 미정제 생성물은 에틸 아세테이트의 첨가에 의해 침전되었고, 이후 이것을 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 새로 형성된 침전물이 90% 초과의 순도일 때까지 이 방법을 반복하였다. 추가의 정제를 수행하지 않았다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.31 (s, 4H), 7.43 - 7.38 (m, 2H), 6.94 - 6.88 (m, 2H), 5.76 (s, 2H), 3.80 (s, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 312.2; RT = 1.79분; 순도 = >99%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 중탄산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 4-(2-(4-메톡시벤질)-2H-테트라졸-5-일)아닐린(114-B). EtOH/THF/H2O/NH4Cl(포화)(7㎖, 4:4:1:1 v/v)의 혼합물 중의 114-A(1.09g, 3.52m㏖)의 용액에 Fe 분말(1.98g, 35.5m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 밤새 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 EtOAc를 사용하여 셀라이트/MgSO4 혼합물(1:1)의 패드를 통해 여과시켰다. 여과 후 얻은 미정제 생성물을 진공에서 농축시켰다. 생성물을 더는 정제하지 않아서 미백색의 고체(1.04g, 정량적 수율)를 얻었다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 282.3; RT = 1.51분; 순도 = 97.1%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 중탄산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. N-(4-(2-(4-메톡시벤질)-2H-테트라졸-5-일)페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질)옥시)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카복사미드(114-C). THF(2.5㎖) 중의 2-(메틸티오)피리미딘-5-카보닐 클로라이드(183㎎, 0.711m㏖)의 냉각된 용액(0℃)에 Et3N(109㎕, 0.782m㏖), 이어서 THF(2.5㎖) 중에 용해된 상응하는 아닐린 중간체 114-B(200㎎, 0.711m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 1.5시간 동안 교반하였다. 출발 재료가 완전히 소모되면, 용액을 0℃로 냉각시키고, PMBOH(333㎕, 2.84m㏖), 이어서 NaH(114㎎, 2.84m㏖, 오일 중에 분산된 60%)에 의해 처리하였다. 용액을 0℃에서 10분 동안 교반하고, 이후 실온으로 가온시켰다. 1.5시간 후, 용액을 0℃로 냉각시키고, 물에 의해 처리하였다. 용액을 농축시키고, 이후 물에 의해 세척하고, 여과시켰다. 이후, 침전물을 MTBE에 의해 세척하여 백색의 고체(362㎎, 72% 수율)로서 원하는 생성물을 얻었다. 생성물을 추가의 정제 없어 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 706.5; RT = 2.11분; 순도 = 94.1%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 중탄산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. N-(4-(2-(4-메톡시벤질)-2H-테트라졸-5-일)페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질)옥시)-2-(메틸설포닐)피리미딘-5-카복사미드(114-D). CH2Cl2(10.2㎖) 중의 메틸티오에터 기재(362㎎, 0.512m㏖)의 용액에 0℃에서 mCPBA(241㎎, 1.08m㏖)를 첨가하고, 공기에 개방하였다. 10분 후, 반응물을 실온으로 가온시키고, 3.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO3(포화)(50㎖)에 의해 처리하고, 30분 동안 교반하였다. 유기 분획을 NaHCO3(포화)(3x10㎖), 염수(10㎖)에 의해 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 이후 농축시켰다. LC-MS에 기초하여, mCBA의 트레이스는 미정제 생성물 중에 있고, 그래서 샘플을 CH2Cl2(20㎖) 중에 용해시키고, 이전의 후처리로 한번 더 처리하여 황색의 고체(320㎎, 85% 수율)를 얻고, 이것을 어떠한 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 738.4; RT = 1.91분; 순도 = 88.6%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 중탄산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. 2-(에틸티오)-N-(4-(2-(4-메톡시벤질)-2H-테트라졸-5-일)페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질)옥시)피리미딘-5-카복사미드(114-E). 0℃에서의 THF(8.7㎖) 중의 114-D(320㎎, 0.434m㏖)의 용액에 에탄티올(160㎕, 2.17m㏖)을 첨가한 후, KOtBu(2.60㎖, 2.60m㏖, THF 중의 1M)를 적하하였다. 생성된 용액을 0℃에서 10분 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 2시간 동안 교반하였다. 용액을 H2O(20㎖)에 의해 처리하고, EtOAc(3x10㎖)에 의해 추출하였다. 유기 분획을 염수(20㎖)에 의해 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켜 미백색의 고체(257㎎, 82% 수율)로서 생성물을 얻고, 이것을 어떠한 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 720.1; RT = 2.14분; 순도 = 81.1%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 중탄산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 6. N-(4-(2H-테트라졸-5-일)페닐)-2-(에틸티오)-4-하이드록시-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(114). 실온에서의 CH2Cl2(11.9㎖) 중의 114-E(257㎎, 0.356m㏖)의 용액에 TFA(2.1㎖)를 첨가하였다. 반응 용기를 밀봉하고, 60℃에서 가열하였다. 48시간 후, MeOH를 사용하여 혼합물을 농축시켜 임의의 잔류 TFA를 동시증발시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(60g, C18 칼럼, 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 50% 아세토나이트릴)를 통한 정제로 처리하여 백색의 고체(87㎎, 68% 수율)로서 생성물을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3 + TFA) δ 8.08 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.83 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 3.43 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 1.52 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 360.3; RT = 1.35분; 순도 = >99%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 중탄산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 14: N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4-하이드록시-2-(아이소뷰틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(115, 도 22와 관련하여 화학식 (IIq))의 제조.
단계 1. N-(4-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질)옥시)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카복사미드(115-A). 무수 THF(6.3㎖) 중의 4,6-다이클로로-2-(메틸티오)-5-피리미딘카보닐 클로라이드(227㎎, 0.881m㏖) 및 트라이에틸아민(98㎎, 0.97m㏖)의 교반하는 용액에 0℃에서의 아민 XX(247㎎, 280m㏖)을 첨가하였다. 반응물을 1시간에 걸쳐 실온으로 가온시키고, 이후 다시 0℃로 냉각시켰다. 파라-메톡실벤질아민(220㎕, 1.76m㏖)을 첨가한 후, 수소화나트륨(109㎎, 2.73m㏖, 광유 중에 분산된 60%)을 분액 첨가하였다. 반응물이 0℃에서 5분 동안 교반되게 하고, 이후 밤새 실온으로 가온시켰다. 추가 수소화나트륨(50㎎)을 첨가하고, 이후 추가 1시간 동안 교반하고, LCMS를 통해 완전한 전환이 관찰될 때까지, 반응물을 메탄올(약 10㎖)에 의해 급랭시켰다. tert-뷰틸 메틸 에터(약 20㎖)를 첨가하고, 이후 음파처리하였다. 침전물을 여과시키고, MeOH 및 TBME에 의해 세척하고, 침전물을 수집하였다. 생성물은 미백색의 고체(550㎎, 80% 수율)로서 단리되었다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 705.5; RT = 2.02분; 순도 = 90.6%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. N-(4-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질)옥시)-2-(메틸설포닐)피리미딘-5-카복사미드(115-B). 115-A(550㎎, 0.707m㏖)를 다이클로로메탄(3.5㎖) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. 메타-클로로퍼옥시벤조산(332㎎, 1.48m㏖, 물 중의 77%)을 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 밤새 실온으로 가온시켰다. 반응물을 포화 NaHCO3 수성 용액에 의해 급랭시키고, 30분 동안 격렬히 교반하였다. 유기 상을 추출하고, 포화 NaHCO3 수성 용액(3x), 이어서 염수(1x)에 의해 세척하였다. 생성된 유기 추출물을 MgSO4 위에서 건조시키고, 이후 농축시켜 오렌지색의 고체(440㎎, 70% 수율)로서 미정제 생성물을 생성시켰다. 추가의 정제가 필요하지 않았다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 737.5; RT = 1.84분; 순도 = 83.4%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4-하이드록시-2-(아이소뷰틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(115). 0℃에서의 무수 THF(2.4㎖) 중의 115-B(105㎎, 0.119m㏖) 및 2-메틸프로판-1-티올(64㎕, 0.594m㏖)의 교반하는 용액에 불활성 분위기 하에 KOtBu(714㎖, 0.714m㏖, THF 중의 1.0M)를 첨가하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, 생성된 반응 혼합물을 30분에 걸쳐 실온으로 가온시키고, 반응물을 탈이온수(약 5㎖)에 의해 급랭시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc(3x)에 의해 추출하고, 합한 유기 추출물을 MgSO4 위에서 건조시키고, 이후 농축시켰다. 미정제 생성물 115-C를 추가의 정제 없이 사용하였다. 미정제 생성물 115-C는 미백색의 고체로서 단리되었다.
미정제 115-C를 다이클로로메탄(2.4㎖) 중에 현탁시키고, TFA(700㎕), 이어서 TfOH(100㎕)를 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 고압 용기에서 밀봉하고, 80℃로 가열하였다. 20시간 후, 반응 혼합물을 메탄올에 첨가하고, 이후 감압 하에 메탄올(3x)에 의해 동시증발시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 5 내지 25% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 불순한 생성물 115를 생성시켰다. 원심분리를 이용하여 미분쇄를 통한 추가의 정제를 수행하였다. 고체를 물에 의해 세척하고, 상청액을 제거하고, 순서를 추가 3회 반복하고, 이후 2회 아세토나이트릴에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 동결건조시켜 미백색의 고체(25.4㎎, 55% 수율)로서 순수한 생성물 115를 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3+TFA) δ 8.61 (s, 1H), 7.90 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.81 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 3.37 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 2.14 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 1.17 (d, J = 6.6 Hz, 6H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 387.0; RT = 1.60분; 순도 = 98.6%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 중탄산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 15: N-(3-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(116, 도 23과 관련하여 화학식 (IIr))의 제조.
단계 1. 3-플루오로-4-((트라이메틸실릴)에티닐)아닐린(116-A). 4-브로모-2-플루오로아닐린(380㎎, 2.0m㏖), PdCl2(PPh3)2(84㎎, 0.12m㏖) 및 CuI(15㎎, 0.08m㏖)를 함유하는 환저 플라스크를 15분 동안 질소에 의해 퍼징하였다. 무수 THF(6.7㎖), 이어서 트라이메틸실릴아세틸렌(560㎕, 4.0m㏖) 및 에탄올아민(240㎕, 4.0m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉하고, 20시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: RT = 1.86분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 4-에티닐-3-플루오로아닐린(116-B). 메탄올(2.0㎖) 중에 용해된 미정제 116-A(2.0m㏖)의 용액에 실온에서 탄산칼륨(553㎎, 4.00m㏖)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안, 또는 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 미정제 생성물 116-B를 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 136.1; RT = 1.34분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. 3-플루오로-4-(1-(3,4,5-트라이메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)아닐린(116-C). 미정제 116-B(2.0m㏖)의 용액에 불활성 분위기 하에 무수 MeOH/DMF(10.0㎖, 1:9, v/v)의 혼합물 중에 용해시켰다. 실온에서, CuI(38㎎, 0.20m㏖)를 첨가한 후, 5-(아지도메틸)-1,2,3-트라이메톡시벤젠(487㎎, 2.14m㏖)을 첨가하고, 반응 혼합물을 고압 용기에서 밀봉하고, 2시간 동안 100℃로 가열하고, 이후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 이후 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(SiO2, 20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 40% 에틸 아세테이트의 구배 용리제)를 통해 정제하여 갈색의 오일(374㎎, 3 단계에 걸쳐 37% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 359.3; RT = 1.39분; 순도 = 70%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. N-(3-플루오로-4-(1-(3,4,5-트라이메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질)옥시)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카복사미드(116-D). 0℃에서의 무수 THF(5.2㎖) 중의 116-C(374㎎, 0.731m㏖, 70% 순도)의 교반하는 용액에 Et3N(110㎕, 0.804m㏖)을 첨가한 후, 4,6-다이클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카보닐 클로라이드(188㎎, 0.731m㏖)를 첨가하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 생성된 반응 혼합물을 60분에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. 이후, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 이후 p-메톡실벤질 알코올(180㎕, 1.46m㏖)을 첨가한 후, NaH(91㎎, 2.27m㏖, 오일 중에 분산된 60%)를 조심스럽게 첨가하였다. 반응을 0℃에서 5분 동안 유지시키고, 이후 20시간에 걸쳐 가온시키고, LCMS에 의해 반응의 진행을 모니터링하였다. 메탄올(약 1㎖)을 첨가하여 반응물을 급랭시키고, 이후 TBME(20㎖)를 첨가하고, 생성된 현탁액을 10분 동안 음파처리하였다. 이후, 현탁액을 여과시키고, 고체를 TBME에 의해 세척하고, 갈색의 고체(308㎎, 54% 수율)를 수집하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 784.3; RT = 2.03분; 순도 = 92.9%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. N-(3-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(116). CH2Cl2(7.3㎖) 중에 용해된 116-D(308㎎, 0.365m㏖)를 TFA(2.1㎖)에 첨가하고, 압력 용기에서 밀봉하고, 20시간 동안 60℃로 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 이후 TfOH(50㎕)를 첨가하고, 밀봉하고, 20시간 동안 60℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 MeOH(3x)에 의해 동시증발시켰다. TBME 및 탈이온수(약 10㎖, 1:1 v/v)를 첨가하고, 현탁액을 음파처리하였다. 고체를 여과시키고, 물에 의해 세척하고, TBME에 의해 세척하였다. 녹색의 고체를 TMB 보호된 중간체(302㎎, 정량적 수율, 69.6% 순도)로서 수집하였다.
TMB 보호된 중간체(288㎎, 0.256m㏖)를 CH2Cl2(1.3㎖), TfOH(640㎕)에 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 마이크로 용기에서 밀봉하고, 20시간 동안 80℃로 가열하였다. 이후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 이후 메탄올(3x)에 의해 동시증발시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 30% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 불순한 생성물 116을 생성시켰다. 원심분리를 이용하여 미분쇄를 통한 추가의 정제를 수행하였다. 고체를 물에 의해 세척하고, 상청액을 제거하고, 순서를 추가 3회 반복하고, 이후 2회 아세토나이트릴에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 동결건조시켜 미백색의 고체(12.9㎎, 14% 수율)로서 순수한 생성물 116을 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3+TFA) δ 8.66 (s, 1H), 7.92 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.84 (dd, J = 12.3, 2.0 Hz, 1H), 7.52 (dd, J = 8.6, 1.9 Hz, 1H), 2.86 (s, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 363.1; m/z [M-1]- = 361.3; RT = 1.38분; 순도 = 98.6%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 16: N-(2-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(117, 도 24와 관련하여 화학식 (IIs))의 제조.
단계 1. 2-플루오로-4-((트라이메틸실릴)에티닐)아닐린(117-A). 4-브로모-2-플루오로아닐린(380㎎, 2.0m㏖), PdCl2(PPh3)2(84㎎, 0.12m㏖) 및 CuI(15㎎, 0.08m㏖)를 함유하는 환저 플라스크를 15분 동안 질소에 의해 퍼징하였다. 무수 THF(6.7㎖), 이어서 트라이메틸실릴아세틸렌(560㎕, 4.0m㏖) 및 에탄올아민(240㎕, 4.0m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉하고, 20시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: RT = 1.91분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 4-에티닐-2-플루오로아닐린(117-B). 메탄올(2.0㎖) 중에 용해된 미정제 116-A(2.0m㏖)의 용액에 실온에서 탄산칼륨(553㎎, 4.00m㏖)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안, 또는 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 미정제 생성물 117-B를 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: RT = 1.37분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. 2-플루오로-4-(1-(3,4,5-트라이메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)아닐린(117-C). 미정제 117-B(2.0m㏖)의 용액에 불활성 분위기 하에 무수 MeOH/DMF(10.0㎖, 1:9, v/v)의 혼합물 중에 용해시켰다. 실온에서, CuI(38㎎, 0.20m㏖)를 첨가한 후, 5-(아지도메틸)-1,2,3-트라이메톡시벤젠(487㎎, 2.14m㏖)을 첨가하고, 반응 혼합물을 고압 용기에서 밀봉하고, 2시간 동안 100℃로 가열하고, 이후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 이후 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(SiO2, 20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 35% 에틸 아세테이트의 구배 용리제)를 통해 정제하여 갈색의 오일(566㎎, 3 단계에 걸쳐 70% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 359.2; RT = 1.36분; 순도 = 89.9%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. N-(2-플루오로-4-(1-(3,4,5-트라이메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질)옥시)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카복사미드(117-D). 0℃에서의 무수 THF(5.1㎖) 중의 117-C(285㎎, 0.715m㏖, 89.8% 순도)의 교반하는 용액에 불활성 분위기 하에 Et3N(110㎕, 0.804m㏖)을 첨가한 후, 4,6-다이클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카보닐 클로라이드(184㎎, 0.731m㏖)를 첨가하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 생성된 반응 혼합물을 60분에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. 이후, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 이후 p-메톡실벤질 알코올(180㎕, 1.43m㏖)을 첨가한 후, NaH(89㎎, 2.22m㏖, 오일 중에 분산된 60%)를 조심스럽게 첨가하였다. 반응물을 5분 동안 0℃에서 유지시키고, 이후 20시간에 걸쳐 실온으로 가온시키고, 반응의 진행을 LCMS에 의해 모니터링하였다. 메탄올(약 1㎖)을 첨가하여 반응물을 급랭시키고, 이후 TBME(20㎖)를 첨가하고, 생성된 현탁액을 10분 동안 음파처리하였다. 이후, 현탁액을 여과시키고, 고체를 TBME에 의해 세척하고, 갈색의 고체(461㎎, 74% 수율)를 수집하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 783.6; RT = 2.05분; 순도 = 90.0%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. N-(2-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(117). CH2Cl2(5.3㎖) 중에 용해된 117-D(461㎎, 0.530m㏖, 90.0% 순도)를 TFA(3.8㎖)에 첨가하고, 압력 용기에서 밀봉하고, 20시간 동안 60℃로 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 이후 TfOH(50㎕)를 첨가하고, 밀봉하고, 20시간 동안 60℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 MeOH(3x)에 의해 동시증발시켰다. TBME 및 탈이온수(약 10㎖, 1:1 v/v)를 첨가하고, 현탁액을 음파처리하였다. 고체를 여과시키고, 물에 의해 세척하고, TBME에 의해 세척하였다. 녹색의 고체를 TMB 보호된 중간체(100㎎, 27% 수율, 77.4% 순도)로서 수집하였다.
TMB 보호된 중간체(100㎎, 0.0989m㏖, 77.4% 순도)를 CH2Cl2(1.3㎖), TfOH(640㎕)에 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 마이크로 용기에서 밀봉하고, 20시간 동안 80℃로 가열하였다. 이후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 이후 메탄올(3x)에 의해 동시증발시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 30% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 불순한 생성물 117을 생성시켰다. 원심분리를 이용하여 미분쇄를 통한 추가의 정제를 수행하였다. 고체를 물에 의해 세척하고, 상청액을 제거하고, 순서를 추가 3회 반복하고, 이후 2회 아세토나이트릴에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 동결건조시켜 미백색의 고체(13.0㎎, 35% 수율)로서 순수한 생성물 117을 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3+TFA) δ 8.61 (s, 1H), 8.41 - 8.32 (m, 1H), 7.70 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 2.90 (s, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 362.8; RT = 0.92분; 순도 = 97.2%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 중탄산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 17: N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-2-(에틸아미노)-4-하이드록시-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(118, 도 25와 관련하여 화학식 (IIll))의 제조.
단계 1. 2-(에틸아미노)-N-(4-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질)옥시)피리미딘-5-카복사미드(118-A). 실온에서 무수 THF(3.3㎖) 중에 용해된 115-C(138㎎, 0.167m㏖, 89% 순도)를 불활성 분위기 하에 N-에틸아민(330㎕, 0.668m㏖, THF 중의 2.0M)을 첨가하였다. 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 반응물을 30분 동안 실온에서 교반하게 하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 702.6; RT = 1.96분; 순도 = 88.1%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-2-(에틸아미노)-4-하이드록시-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(118). TfOH(50㎕)를 TFA(980㎕) 및 CH2Cl2(3.3㎖) 중의 118-A(0.167m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 72시간 동안 가열하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, 반응물을 이후 실온으로 냉각시키고, 이후 메탄올(3x)에 의해 동시증발시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 30CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 25% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 백색의 고체(22.8㎎, 40% 수율)로서 생성물 118을 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3+TFA) δ 8.57 (s, 1H), 7.88 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.77 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.66 - 3.58 (m, 2H), 1.41 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 342.2; RT = 1.24분; 순도 = >99%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 18: N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-2-(에틸(메틸)아미노)-4-하이드록시-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(119, 도 26과 관련하여 화학식 (IImm))의 제조.
불활성 분위기 하에 실온에서의 무수 THF(3.8㎖) 중에 용해된 115-C(146㎎, 0.188m㏖)를 N-에틸메틸아민(64㎕, 0.750m㏖)에 첨가하였다. 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 반응물을 실온에서 30분 동안 교반되게 하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다. 미정제 생성물을 CH2Cl2(3.8㎖) 중에 용해시키고, TFA(1.1㎖)를 실온에서 첨가한 후, TfOH(70㎕)를 첨가하였다. 생성된 반응물을 압력 용기에서 밀봉하고, 72시간 동안 80℃로 가열하였다. 반응물을 냉각시키고, 이후 메탄올(3x)에 의해 동시증발시키고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 30CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 25% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 불순한 생성물 119를 생성시켰다. 원심분리를 이용하여 미분쇄를 통한 추가의 정제를 수행하였다. 고체를 물에 의해 세척하고, 상청액을 제거하고, 순서를 추가 3회 반복하고, 이후 2회 아세토나이트릴에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 동결건조시켜 백색의 고체(28.5㎎, 42% 수율)로서 순수한 생성물 119를 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3+TFA) δ 8.64 (s, 1H), 7.92 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.80 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.83 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 3.49 (s, 3H), 1.46 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 356.2; RT = 1.33분; 순도 = 99.5%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 19: N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-5-일)페닐)-2-((사이클로프로필메틸)티오)-4-하이드록시-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(121, 도 27과 관련하여 화학식 (IIt))의 제조.
단계 1. 4,6-비스((4-메톡시벤질)옥시)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카복실산(XZ). 4,6-다이클로로-2-(메틸티오)피리미딘-5-카복실산(1.099g, 4.46m㏖)을 함유하는 플라스크를 불활성 분위기 하에 무수 THF(32㎖) 중에 용해시켰다. 용액을 0℃로 냉각시키고, 이후 p-메톡실벤질 알코올(1.10㎖, 8.92m㏖)을 첨가한 후, NaH(535㎎, 13.4m㏖, 오일 중에 분산된 60%)를 조심스럽게 첨가하였다. 반응을 0℃에서 5분 동안 유지시키고, 이후 20시간에 걸쳐 실온으로 가온시키고, 반응의 진행을 LCMS에 의해 모니터링하였다. 메탄올(약 1㎖)을 첨가하여 반응물을 급랭시키고, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 CH3CN에 첨가하고, 음파처리하였다. 이후, 현탁액을 여과시키고, 고체를 CH3CN에 의해 세척하고, 미백색의 고체(1.234g, 58% 수율)를 수집하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 442.9; RT = 1.86분; 순도 = 90.0%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 2,6-다이플루오로-4-((트라이메틸실릴)에티닐)아닐린(121-A). 4-브로모-2,6-다이플루오로아닐린(1.00g, 4.80m㏖), PdCl2(PPh3)2(202㎎, 0.288m㏖) 및 CuI(37㎎, 0.1.92m㏖)를 함유하는 환저 플라스크를 질소에 의해 15분 동안 퍼징하였다. 무수 THF(16.0㎖), 이어서 트라이메틸실릴아세틸렌(1.40㎖, 9.62m㏖) 및 에탄올아민(580㎕, 9.62m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉하고, 20시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 226.0; RT = 2.01분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. 4-에티닐-2,6-다이플루오로아닐린(121-B). 메탄올(4.8㎖) 중에 용해된 미정제 121-A(4.80m㏖)의 용액에 실온에서 탄산칼륨(1.33㎎, 9.60m㏖)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안, 또는 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 미정제 생성물 121-B를 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: RT = 1.49분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. 2,6-다이플루오로-4-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)아닐린(121-C). 미정제 121-B(4.80m㏖)의 용액에 불활성 분위기 하에 무수 MeOH/DMF(2.4㎖, 1:9, v/v)의 혼합물 중에 용해시켰다. 실온에서, CuI(91㎎, 0.480m㏖)를 첨가한 후, 이어서 p-메톡시벤질 아자이드(838㎎, 5.14m㏖)를 첨가하고, 반응 혼합물을 고압 용기에서 밀봉하고, 48시간 동안 100℃로 가열하고, 이후 반응물을 실온으로 냉각시키고, 이후 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(SiO2, 20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 50% 에틸 아세테이트의 구배 용리제)를 통해 정제하여 갈색의 고체(1.057g, 3 단계에 걸쳐 61% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 317.1; RT = 1.55분; 순도 = 87.3%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. N-(2,6-다이플루오로-4-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질)옥시)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카복사미드(121-D). T3P(920㎕, 1.55m㏖, EtOAc 중의 50%)를 EtOAc(1.3㎖) 중의 121-C(93㎎, 0.258m㏖), 트라이에틸 아민(490㎕, 3.48m㏖) 및 XZ(178㎎, 0.387m㏖)의 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 밤새 가열하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, 혼합물을 농축시켰다. MeOH/H2O(약 10㎖, 1:1 v/v)를 잔류물에 첨가하고, 음파처리하여 갈색의 고체로서 표제 화합물(108㎎, 23% 수율)을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 741.4; RT = 2.07분; 순도 = 60.7%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 6. N-(2,6-다이플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(121). TfOH(35㎕)를 TFA(550㎕) 및 CH2Cl2(1.9㎖) 중의 121-C(114㎎, 0.0935m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 20시간 동안 가열하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, MeOH(10㎖)를 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 농축시켜 CH2Cl2 및 TFA를 제거하였다. MeOH(10㎖)를 2회 더 첨가하여 CH2Cl2 및 TFA에 의해 동시증발시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 30CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 25% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 불순한 생성물 121를 생성시켰다. 원심분리를 이용하여 미분쇄를 통한 추가의 정제를 수행하였다. 고체를 물에 의해 세척하고, 상청액을 제거하고, 순서를 반복하고, 이후 아세토나이트릴에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 동결건조시켜 백색의 고체(6.4㎎, 18% 수율)로서 순수한 생성물 121을 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3+TFA) δ 8.54 (s, 1H), 7.52 (s, 2H), 2.79 (s, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 381.1; RT = 1.36분; 순도 = 98.6%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 20: N-(3,5-다이플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(122, 도 28과 관련하여 화학식 (IIu))의 제조.
단계 1. 3,5-다이플루오로-4-((트라이메틸실릴)에티닐)아닐린. PdCl2(PPh3)2(168㎎, 0.24m㏖), CuI(30㎎, 0.16m㏖) 및 3,5-다이플루오로-4-요오도아닐린(1.02g, 4.0m㏖)의 혼합물에 THF(14.0㎖), 이어서 에탄올아민(489㎎, 8.0m㏖) 및 TMS-아세틸렌(786㎎, 8.0m㏖)을 첨가하였다. 반응물을 65℃에서 20시간 동안 가열하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시키고, 에틸 아세테이트(3x10㎖)에 의해 세척하였다. 여과액을 농축시켜 원하는 생성물을 생성시키고, 이것을 추가의 정제 없이 미정제로서 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 226.1; RT = 1.81분; 순도 = >87%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 4-에티닐-3,5-다이플루오로아닐린. MeOH(4.0㎖) 중의 3,5-다이플루오로-4-((트라이메틸실릴)에티닐)아닐린(1.1g, 4.0m㏖)의 용액에 K2CO3(1.11g, 8.0m㏖)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시키고, MeOH(3x5㎖)에 의해 세척하였다. 여과액을 농축시켜 원하는 생성물을 생성시키고, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다(생성물은 분해를 피하도록 바로 사용되어야 함).
LCMS: m/z [M+1]+ = 154.3; RT = 1.43분; 순도 = >90%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. 3,5-다이플루오로-4-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)아닐린. MeOH/DMF(1.0㎖, 1:9, v/v) 중의 4-에티닐-3,5-다이플루오로아닐린(306㎎, 2.0m㏖) 및 CuI(38㎎, 0.20m㏖)의 현탁액에 PMB-N3(359㎎, 2.2m㏖)을 첨가하였다. 반응 관을 밀봉하고, 100℃에서 2시간 동안 가열하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 ISCO(25g SiO2, 헥산 중의 0 내지 80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 황색의 고체(265㎎, 42% 수율)로서 표제 화합물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 317.0; RT = 1.46분; 순도 = >99%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. N-(3,5-다이플루오로-4-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질)옥시)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카복사미드. T3P(636.36㎎, 2m㏖)를 EtOAc(2.5㎖) 중의 3,5-다이플루오로-4-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)아닐린(158㎎, 0.50m㏖), 트라이에틸아민(455㎎, 4.5m㏖) 및 4,6-비스((4-메톡시벤질)옥시)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카복실산(331㎎, 0.75m㏖)의 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 100℃에서 밤새 가열하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, 혼합물을 농축시켰다. MeOH(10㎖)를 잔류물에 첨가하고, 음파처리하여 밝은 황색의 고체(406㎎, 정량적 수율)로서 표제 화합물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 741.2; RT = 2.06분; 순도 = >90%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. N-(3,5-다이플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(122). TfOH(100㎕)를 TFA(1.6㎖) 및 CH2Cl2(5.0㎖) 중의 N-(3,5-다이플루오로-4-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질)옥시)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카복사미드(200㎎, 0.27m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 2일 동안 가열하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, MeOH(10㎖)를 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 농축시켜 CH2Cl2 및 TFA를 제거하였다. MeOH(10㎖)를 2회 더 첨가하여 TFA에 의해 동시증발시켰다. MeOH(5㎖)를 첨가하고, 혼합물을 여과시키고, 수집된 침전물을 아세토나이트릴(2x5㎖), 물(1x5㎖) 및 아세톤(1x5㎖)에 의해 세척하여 밝은 황색의 고체(74.1㎎, 72% 수율)로서 표제 화합물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 380.9; RT = 1.39분; 순도 = >96.3%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3+TFA) δ 8.68 (s, 1H), 7.59 (d, J = 11.0 Hz, 2H), 2.77 (s, 3H).
실시예 21: N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 벤질)-4,6-다이하이드록시-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미드(1102, 도 29와 관련하여 화학식 (IIv))의 제조.
단계 1. 2-플루오로-4-((트라이메틸실릴)에티닐) 아닐린(1102-A). 4-브로모-2-플루오로아닐린(1.00g, 5.26m㏖), PdCl2(PPh3)2(222㎎, 0.316m㏖) 및 CuI(40㎎, 0.21m㏖)를 함유하는 환저 플라스크를 15분 동안 질소에 의해 퍼징하였다. 무수 THF(17.5㎖), 이어서 트라이메틸실릴 아세틸렌(1.5㎖, 10.5m㏖) 및 에탄올아민(634㎕, 10.5m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉하고, 20시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 미정제 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: RT = 1.91분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 4-에티닐-2-플루오로아닐린(1102-B). 메탄올(5.3㎖) 중에 용해된 미정제 1102-A(5.26m㏖)의 용액에 실온에서 탄산칼륨(1.45g, 10.5m㏖)을 첨가하였다. 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 30% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 황색의 오일(543㎎, 2 단계에 걸쳐 72% 수율, 93.9% 순도)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: RT = 1.37분; 순도 = 93.9%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. (4-(4-아미노-3-플루오로페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1102-C). 1102-B(543㎎, 3.78m㏖)의 용액에 무수 1,4-다이옥산(7.6㎖) 중에 용해시켰다. CuI(72㎎, 0.378m㏖)를 첨가한 후, iPr2NEt(660㎕, 3.78m㏖) 및 아지도메틸 피발레이트(7.6㎖, 3.78m㏖, 2-메톡시프로판 중의 0.5M)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 8시간 동안 60℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(15CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 60% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 황색의 고체(823㎎, 72% 수율, 97.3% 순도)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 293.2; RT = 1.51분; 순도 = 97.3%
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. N-(2-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시)-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미드(1102-D). 불활성 분위기 하에 무수 THF(9.8㎖) 중에 용해된 1102-C(412㎎, 1.37m㏖)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. Et3N(210㎕, 1.51m㏖)을 첨가한 후, 4,6-다이클로로-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카보닐 클로라이드 X(352㎎, 1.37m㏖)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 18시간에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, p-메톡시벤질 알코올(510㎕, 4.11m㏖), 이어서 NaH(219㎎, 5.48m㏖, 오일 중에 분산된 60%)를 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 5분 동안 교반하고, 이후 20시간에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. 메탄올(약 10㎖), 이어서 TBME(약 10㎖)를 첨가하고, 생성된 현탁액을 음파처리하고, 침전물을 여과시키고, 수집하여 갈색의 고체(722㎎, 63% 수율, 72.0% 순도)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 603.2; RT = 1.97분; 순도 = 72.0%
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. N-(2-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시)-2-(메틸 설포닐) 피리미딘-5-카복사미드(1102-E). CH2Cl2(2.2㎖) 및 CHCl3(2.0㎖) 중에 용해된 1102-D(364㎎, 0.435m㏖, 72.0% 순도)의 용액에 0℃에서의 mCPBA(158㎎, 0.914m㏖, H2O 중의 77%)를 첨가하였다. 반응물을 격렬히 교반하면서 20시간에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. LCMS를 통해 완전한 전환이 관찰된 후, 반응 혼합물을 6g Si-TMA 아세테이트 칼럼에 로딩하였다. 산 불순물을 칼럼에 보유시키고, 생성물을 메탄올에 의해 용리시켰다. 미정제 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 635.4; RT = 1.71분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 6. N-(2-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-2-(아이소프로필티오)-4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시) 피리미딘-5-카복사미드(1102-F). 무수 THF(8.7㎖) 중의 미정제 1102-D(0.435m㏖) 및 iPrSH(200㎕, 2.18m㏖)의 용액에 0℃에서의 KOtBu(2.6㎖, 0.261m㏖, THF 중의 1.0M)를 첨가하였다. 이후, 반응 혼합물을 30분에 걸쳐 실온으로 가온시키고, H2O(10㎖)를 첨가하고, 이후 EtOAc(3 x 약 10㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 추출물을 MgSO4 위에서 건조시키고, 이후 감압 하에 농축시켜 갈색의 고체로서 미정제 생성물을 생성시키고, 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 631.2; RT = 2.11분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 7. N-(2-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4-하이드록시-2-(아이소프로필티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1102). 다이클로로메탄(8.7㎖) 중의 미정제 1102-F(0.435m㏖)를 실온에서의 트라이플루오로아세트산(2.6㎖)에 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 이후 MeOH(3 x 약 20㎖)에 의해 동시증발시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 30% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 미백색의 고체(12.3㎎, 3 단계에 걸쳐 3% 수율, 97.2% 순도)로서 1102를 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6+아세톤+TFA) δ 8.70 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 17.0, 10.3 Hz, 2H), 4.11 - 4.00 (m, 1H), 1.41 (d, J = 6.9 Hz, 6H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 391.2; RT = 1.55분; 순도 = 97.2%.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 22: N-(3-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4-하이드록시-2-(아이소프로필티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1104, 도 30과 관련하여 화학식 (IIw))의 제조.
단계 1. 3-플루오로-4-((트라이메틸실릴)에티닐) 아닐린(1104-A). 4-브로모-3-플루오로아닐린(2.00g, 10.5m㏖), PdCl2(PPh3)2(442㎎, 0.63m㏖) 및 CuI(80㎎, 0.42m㏖)를 함유하는 환저 플라스크를 15분 동안 질소에 의해 퍼징하였다. 무수 THF(35㎖), 이어서 트라이메틸실릴 아세틸렌(2.9㎖, 21.0m㏖) 및 에탄올아민(1.3㎖, 21.0m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉하고, 20시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 미정제 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: RT = 1.86분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 4-에티닐-3-플루오로아닐린(1104-B). 메탄올(21㎖) 중에 용해된 미정제 1104-A(10.5m㏖)의 용액에 실온에서의 탄산칼륨(2.90g, 21.0m㏖)을 첨가하였다. 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 30% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 갈색의 오일(1.70g, 90% 수율, 75.2% 순도)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: RT = 1.43분(75.2% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. (4-(4-아미노-3-플루오로페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1104-C). 1104-B(1.033g, 5.75m㏖, 75.2% 순도)의 용액에 무수 1,4-다이옥산(11.5㎖) 중에 용해시켰다. CuI(110㎎, 0.575m㏖)를 첨가한 후, iPr2NEt(1.0㎖, 5.75m㏖) 및 아지도메틸 피발레이트(995㎎, 6.33m㏖)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 20시간 동안 60℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(15CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 60% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 오렌지색-황색의 고체(605㎎, 35% 수율, 95.9% 순도)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ =293.0; RT = 1.54분(95.9% 순도)
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. N-(3-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시)-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미드(1104-D). 불활성 분위기 하에 무수 THF(14.2㎖) 중에 용해된 1104-C(512㎎, 1.99m㏖)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. Et3N(305㎕, 2.19m㏖)을 첨가한 후, 4,6-다이클로로-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카보닐 클로라이드 X(512㎎, 1.99m㏖)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 20시간에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, p-메톡시벤질 알코올(740㎕, 5.97m㏖), 이어서 NaH(318㎎, 7.96m㏖, 오일 중에 분산된 60%)를 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 5분 동안 교반하고, 이후 20시간에 걸쳐 실온으로 가온시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 폼산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 20 내지 100% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 미백색의 고체(351㎎, 25% 수율, 89.8% 순도)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 603.1; RT = 1.88분(89.8% 순도)
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. N-(3-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시)-2-(메틸 설포닐) 피리미딘-5-카복사미드(1104-E). CH2Cl2(1.9㎖) 및 CHCl3(1.9㎖) 중에 용해된 1104-D(250㎎, 0.373m㏖, 89.8% 순도)의 용액에 0℃에서의 mCPBA(176㎎, 0.783m㏖, H2O 중의 77%)를 첨가하였다. 반응물을 격렬한 교반에 의해 20시간에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. LCMS를 통해 완전한 전환이 관찰된 후, 반응 혼합물을 6g Si-TMA 아세테이트 칼럼에 로딩하였다. 산 불순물을 칼럼에 보유하고, 생성물을 메탄올에 의해 용리시켰다. 미정제 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 635.1; RT = 1.67분(75.5% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 6. N-(3-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-2-(아이소프로필티오)-4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시) 피리미딘-5-카복사미드(1104-F). 무수 THF(7.5㎖) 중의 미정제 1104-D(0.373m㏖) 및 iPrSH(170㎕, 1.87m㏖)의 용액에 0℃에서의 KOtBu(2.2㎖, 2.24m㏖, THF 중의 1.0M)를 첨가하였다. 이후, 반응 혼합물을 30분에 걸쳐 실온으로 가온시키고, H2O(10㎖)를 첨가하고, 이후 EtOAc(3 x 약 10㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 추출물을 MgSO4 위에서 건조시키고, 이후 감압 하에 농축시키고, 미정제 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 631.2; RT = 2.02분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 7. N-(3-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4-하이드록시-2-(아이소프로필티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1104). 다이클로로메탄(7.5㎖) 중의 미정제 1104-F(0.373m㏖)를 실온에서의 트라이플루오로아세트산(2.2㎖)에 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 이후 MeOH(3 x 약 20㎖)에 의해 동시증발시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 25% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 백색의 고체(25.8㎎, 3 단계에 걸쳐 18% 수율, 99.1% 순도)로서 생성물 1104를 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, CHCl3+TFA) δ 8.66 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.85 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 4.22 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 1.55 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 391.0; RT = 1.60분(99.1% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 23: N-(2,6-다이플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4-하이드록시-2-(아이소프로필티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1105, 도 31과 관련하여 화학식 (IIx))의 제조
단계 1. 4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시)-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복실산(XZ). 4,6-다이클로로-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복실산(1.099g, 4.46m㏖)을 함유하는 플라스크를 불활성 분위기 하에 무수 THF(32㎖) 중에 용해시켰다. 용액을 0℃로 냉각시키고, 이후 p-메톡실벤질 알코올(1.10㎖, 8.92m㏖)을 첨가한 후, NaH(535㎎, 13.4m㏖, 오일 중에 분산된 60%)를 조심스럽게 첨가하였다. 반응을 0℃에서 5분 동안 유지시키고, 이후 20시간에 걸쳐 실온으로 가온시키고, 반응의 진행을 LCMS에 의해 모니터링하였다. 메탄올(약 1㎖)을 첨가하여 반응물을 급랭시키고, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 CH3CN에 첨가하고, 음파처리하였다. 이후, 현탁액을 여과시키고, 고체를 CH3CN에 의해 세척하고, 미백색의 고체(1.234g, 58% 수율)를 수집하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 442.9; RT = 1.86분;(90.0% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 2,6-다이플루오로-4-((트라이메틸실릴)에티닐) 아닐린(1105-A). 4-브로모-2,6-다이플루오로아닐린(3.94g, 18.9m㏖), PdCl2(PPh3)2(798㎎, 1.14m㏖) 및 CuI(144㎎, 0.0758m㏖)를 함유하는 환저 플라스크를 질소에 의해 15분 동안 퍼징하였다. 무수 THF(38㎖), 이어서 트라이메틸실릴 아세틸렌(5.3㎖, 37.9m㏖) 및 에탄올아민(2.3㎖, 37.9m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉하고, 20시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: RT = 1.98분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. 4-에티닐-2,6-다이플루오로아닐린(1105-B). 메탄올(9.5㎖) 중에 용해된 미정제 1105-A(9.47m㏖)의 용액에 실온에서의 탄산칼륨(2.61g, 18.9m㏖)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안, 또는 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 10% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 황색의 고체(508㎎, 2 단계에 걸쳐 35% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: RT = 1.46분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. (4-(4-아미노-3,5-다이플루오로페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1105-C). 1104-B(508㎎, 3.32m㏖)의 용액에 무수 1,4-다이옥산(6.6㎖) 중에 용해시켰다. CuI(63㎎, 0.332m㏖)를 첨가한 후, iPr2NEt(580㎕, 3.32m㏖) 및 아지도메틸 피발레이트(6.6㎖, 3.32m㏖, 2-메톡시프로판 중의 0.5M)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 20시간 동안 60℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 농축시켰다. 미정제 반응 혼합물을 H2O/MeOH(1:1 v/v)의 혼합물에 의해 음파처리하고, 침전물을 여과시키고, H2O, MeOH, 이어서 TBME에 의해 세척하여 고체(817㎎, 78% 수율, 97.7% 순도)로서 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 311.0; RT = 1.68분(97.7% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. (4-(4-(4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시)-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미도)-3,5-다이플루오로페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1105-D). 무수 다이클로로메탄(2.4㎖) 중의 플루오로-N,N,N',N'-비스(테트라메틸렌) 폼아미디늄 헥사플루오로포스페이트, BTFFH(270㎎, 0.853m㏖) 및 XY(330㎎, 0.711m㏖)를 iPr2Net(370㎕, 2.13m㏖)에 첨가하고, 생성된 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 1105-C(150㎎, 0.474m㏖, 97.7% 순도)를 첨가하고, 이후 압력 용기에서 밀봉하고, 24시간 동안 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 EtOAc(3x)에 의해 추출하고, 유기 추출물을 합하고, 염수에 의해 세척하고, 이후 MgSO4 위에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 60% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 미백색의 고체(176㎎, 51% 수율, >99% 순도)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 735.3; RT = 2.08분(99% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 6. (4-(4-(4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시)-2-(메틸 설포닐) 피리미딘-5-카복사미도)-3,5-다이플루오로페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1105-E). CH2Cl2(1.2㎖) 중에 용해된 1105-D(176㎎, 0.239m㏖)의 용액에 0℃에서의 mCPBA(113㎎, 0.503m㏖, H2O 중의 77%)를 첨가하였다. 반응물을 격렬히 교반하면서 20시간에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. LCMS를 통해 완전한 전환이 관찰된 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3에 의해 급랭시키고, 이후 30분 동안 격렬히 교반하고, 유기 층을 분리하고, 모든 mCBA 및 mCPBA 불순물을 유기 상으로부터 제거할 때까지, 포화 NaHCO3(수성)(3x)에 의해 세척하였다. 생성된 유기 추출물을 MgSO4 위에서 건조시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 767.4; RT = 1.89분(67.5% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 7. N-(2,6-다이플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-2-(아이소프로필티오)-4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시) 피리미딘-5-카복사미드(1105-F). 무수 THF(2.1㎖) 중의 미정제 1105-E(120㎎, 0.106m㏖, 67.5% 순도) 및 iPrSH(50㎕, 0.530m㏖)의 용액에 0℃에서의 KOtBu(740㎕, 0.742m㏖, THF 중의 1.0M)를 첨가하였다. 이후, 반응 혼합물을 30분에 걸쳐 실온으로 가온시키고, H2O(10㎖)를 첨가하고, 이후 EtOAc(3 x 약 10㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 추출물을 MgSO4 위에서 건조시키고, 이후 감압 하에 농축시키고, 미정제 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 769.3; RT = 1.99분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 8. N-(2,6-다이플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4-하이드록시-2-(아이소프로필티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1105). TFA(630㎕)를 CH2Cl2(2.1㎖) 중의 1105-F(0.1.06m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, MeOH(10㎖)를 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 농축시켜 CH2Cl2 및 TFA를 제거하였다. MeOH(10㎖)를 2회 더 첨가하여 CH2Cl2 및 TFA에 의해 동시증발시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 30CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 35% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 불순한 생성물 1105를 생성시켰다. 원심분리를 이용하여 미분쇄를 통한 추가의 정제를 수행하였다. 고체를 물에 의해 세척하고, 상청액을 제거하고, 순서를 반복하고, 이후 아세토나이트릴에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 동결건조시켜 백색의 고체(1.1㎎, 3 단계에 걸쳐 2% 수율, >99% 순도)로서 순수한 생성물 1105를 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3+TFA) δ 8.63 (s, 1H), 7.53 (s, 2H), 4.28 - 4.15 (m, 1H), 1.55 (d, J = 6.7 Hz, 6H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 409.2; RT = 1.51분(99.1% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 24: N-(2,6-다이클로로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4,6-다이하이드록시-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미드(1106, 도 32와 관련하여 화학식 (IIy))의 제조.
단계 1. 2,6-다이클로로-4-((트라이메틸실릴)에티닐) 아닐린(1106-A). 4-브로모-2,6-다이클로로아닐린(1.2g, 5.0m㏖), Pd(PPh3)4(115㎎, 0.1m㏖) 및 CuI(38㎎, 0.2m㏖)를 함유하는 환저 플라스크를 15분 동안 질소에 의해 퍼징하였다. 무수 CH3CN(10.0㎖), 이어서 트라이메틸실릴 아세틸렌(0.8㎖, 5.5m㏖) 및 트라이에틸아민(2.1㎖, 15.0m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 12시간 동안 65℃로 가열하였다. 완료 후 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
LCMS: RT = 2.18분(98% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 2,6-다이클로로-4-에티닐아닐린(1106-B). 메탄올(20.0㎖) 중에 용해된 미정제 1106-A(1.28g, 5.0m㏖)의 용액에 실온에서의 탄산칼륨(1.38g, 10.0m㏖)을 첨가하였다. 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 30% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 황색의 고체(721㎎, 2 단계에 걸쳐 78% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: RT = 1.72분(99.5% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. (4-(4-아미노-3,5-다이클로로페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1106-C). 무수 1,4-다이옥산(5.0㎖) 중에 용해된 1106-B(372㎎, 2.0m㏖)의 용액에. CuI(38㎎, 0.2m㏖)를 첨가한 후, DIPEA(0.7㎖, 4.0m㏖) 및 아지도메틸 피발레이트(377㎎, 2.4m㏖)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 12시간 동안 60℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(SiO2, 20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 50% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 미백색의 고체(610㎎, 89% 수율)로서 1106-C를 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 343.0; RT = 1.76분(98.8% 순도)
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. (4-(4-(4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시)-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미도)-3,5-다이클로로페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1106-D). 무수 1,2 다이클로로에탄(4.0㎖) 중의 플루오로-N,N,N',N'-비스(테트라메틸렌) 폼아미디늄 헥사플루오로포스페이트, BTFFH(427㎎, 1.35m㏖) 및 XY(403㎎, 1.5m㏖)를 DIPEA(0.42㎖, 2.4m㏖)에 첨가하고, 생성된 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 1106-C(200㎎, 0.6m㏖, 87.7% 순도)를 첨가하고, 이후 관을 밀봉하고, 16시간 동안 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 40% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 백색의 고체(55㎎, 12% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 768.1; RT = 2.13분(99.5% 순도)
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. N-(2,6-다이클로로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐) -4,6-다이하이드록시-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미드(1106). NaOH의 2.0M 수성 용액(1.0㎖)을 실온에서의 THF(1.0㎖) 중의 1106-D(50㎎, 0.07m㏖)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 이후 농축시키고, MeOH에 의해 증발시켜 중간체 미정제 생성물을 얻고, 이것을 THF(2.0㎖) 중에 용해시킨 후, 실온에서의 TFA(2.0㎖)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, MeOH(10㎖)를 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 30CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 35% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제한 후, 동결건조시켜 백색의 고체(8.0㎎, 30% 수율)로서 1106의 암모늄염을 생성시켰다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3+ TFA): δ 10.86 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.85 (s, 2H), 6.81-6.39 (m, 2H), 2.92 (s, 1H), 2.74 (s, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 414.9; RT = 1.37분(97.3% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 25: N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-2-((2-(다이메틸 아미노) 에틸) 티오)-4-하이드록시-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1107, 도 33과 관련하여 화학식 (IIz))의 제조.
단계 1. N-(4-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시)-2-(메틸 설포닐) 피리미딘-5-카복사미드(1107-A). CH2Cl2(10.0㎖) 중에 용해된 N-(4-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4,6-비스((4-메톡시 벤질) 옥시)-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미드(71㎎, 0.1m㏖)의 용액에 0℃에서의 mCPBA(67㎎, 0.22m㏖, H2O 중의 77%)를 첨가하였다. 반응물을 격렬히 교반하면서 2시간에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. LCMS를 통해 완전한 전환이 관찰된 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3에 의해 급랭시키고, 이후 30분 동안 격렬히 교반하고, 유기 층을 분리하고, 모든 mCPBA 및 mCPBA 불순물을 유기 상으로부터 제거할 때까지, 포화 NaHCO3(수성)(3x)에 의해 세척하였다. 생성된 유기 추출물을 MgSO4 위에서 건조시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물 1107-A(68㎎, 92% 수율)를 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 737.2; RT = 1.80분(92.7% 순도)
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 2-((2-(다이메틸아미노) 에틸) 티오)-N-(4-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시) 피리미딘-5-카복사미드(1107-B). 무수 THF(3.0㎖) 중의 미정제 1107-A(68㎎, 0.092m㏖, 92.7% 순도) 및 다이메틸아미노 에탄 티올(65㎎, 0.46m㏖)의 용액에 0℃에서의 KOtBu(0.65㎖, 0.65m㏖, THF 중의 1.0M)를 첨가하였다. 이후, 반응 혼합물을 30분에 걸쳐 실온으로 가온시키고, H2O(10㎖)를 첨가하고, 이후 EtOAc(3 x 약 10㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 추출물을 MgSO4 위에서 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, 미정제 생성물 1107-B를 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 762.3; RT = 1.72분(68% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-2-((2-(다이메틸아미노) 에틸) 티오)-4-하이드록시-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1107). 마이크로파 바이알에 TFA(2.0㎖)를 CH2Cl2(2.0㎖) 중의 1107-B(0.092m㏖)의 용액에 첨가한 후, TfOH(0.1㎖)를 첨가하였다. 반응물을 밀봉하고, 80℃에서 48시간 동안 가열하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, 이것을 실온으로 냉각시키고, MeOH(10㎖)를 반응 혼합물에 첨가하고, 농축시켜 과량의 TFA를 제거하였다. MeOH(10㎖)를 2회 더 첨가하여 CH2Cl2 및 TFA에 의해 동시증발시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 30CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 35% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 불순한 생성물 1107을 생성시켰다. 원심분리를 이용하여 미분쇄를 통한 추가의 정제를 수행하였다. 고체를 물에 의해 세척하고, 상청액을 제거하고, 순서를 반복하고, 이후 아세토나이트릴에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 동결건조시켜 백색의 고체(5.5㎎, 2 단계에 걸쳐 15% 수율)로서 순수한 생성물 1107을 생성시켰다.
1H NMR (400 MHz, D2O 중의 DMSO + DCl) δ 8.63 (s, 1H), 7.79 (d, J = 8.2Hz, 2H), 7.55 (d, J = 8.3Hz,2H) 3.32 (dd, J = 8.0Hz, 4H), 2.70 (s, 6H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 402.1; RT = 1.04분(98.2% 순도)
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 26: N-(5-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 티아졸-2-일)-2,4,6-트라이하이드록시피리미딘-5-카복사미드(1108, 도 34와 관련하여 화학식 (Io))의 제조.
단계 1. N-(5-브로모티아졸-2-일)-2,4,6-트라이하이드록시피리미딘-5-카복사미드(1108-A). 불활성 분위기 하에 건조 DMSO(3.6㎖) 중의 2-아미노-5-브로모티아졸 모노하이드로브로마이드(938㎎, 3.61m㏖)의 용액에 실온에서 트라이에틸아민(1.0㎖, 7.22m㏖) 및 CDI(1.17g, 7.22m㏖)를 일 부분으로 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 20시간 동안 교반하여 상응하는 아이소사이아네이트를 생성시켰다.
별개의 플라스크에서, 55℃에서의 무수 1,4-다이옥산(12.0㎖) 중의 바비투르산(462㎎, 3.61 mmole)의 현탁액에 트라이에틸아민(810㎕, 7.22m㏖)을 첨가하고, 반응 혼합물 55℃에서 30분 동안 교반하고, 이후 이전의 단계로부터 생성된 아이소사이아네이트를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 80℃에서 4시간 30분 동안 가열하였다. 반응 혼합물 실온으로 냉각시키고, 이후 6M HCl에 의해 산성화시키고, 형성된 침전물을 여과시키고, H2O 및 MeOH에 의해 세척하여 갈색의 고체(899㎎, 75% 수율, >99% 순도)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 333.1/335.1; RT = 0.99분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 2,4,6-트라이하이드록시-N-(5-((트라이메틸실릴) 에티닐) 티아졸-2-일) 피리미딘-5-카복사미드(1108-B). 1108-A(899㎎, 2.71m㏖), PdCl2(PPh3)2(114㎎, 0.163m㏖) 및 CuI(21㎎, 0.108m㏖)를 함유하는 환저 플라스크를 15분 동안 질소에 의해 퍼징하였다. 무수 DMF(5.4㎖), 이어서 트라이메틸실릴아세틸렌(760㎕, 5.42m㏖) 및 트라이에틸아민(760㎕, 5.42m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉하고, 20시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 폼산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 100% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 갈색의 고체로서 불순한 1108-B를 생성시켰다. 미분쇄를 통한 추가의 정제를 수행하고, 고체를 에틸 아세테이트 및 메탄올에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 동결건조시켜 갈색의 고체(182㎎, 20% 수율, 87.9% 순도)로서 순수한 생성물 1108-B를 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 351.2; RT = 1.33분(87.9% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. N-(5-에티닐티아졸-2-일)-2,4,6-트라이하이드록시피리미딘-5-카복사미드(1108-C). 메탄올(2.3㎖) 중에 용해된 미정제 1108-B(182㎎, 0.457m㏖)의 용액에 실온에서의 탄산칼륨(12.6㎎, 0.914m㏖)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안, 또는 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 미정제 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 278.8; RT = 0.96분(97.7% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. (4-(2-(2,4,6-트라이하이드록시피리미딘-5-카복사미도) 티아졸-5-일)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1108-D). 미정제 1108-C(125㎎, 0.450m㏖)의 용액에 무수 DMSO(900㎕) 중에 용해시켰다. CuI(9㎎, 0.045m㏖)를 첨가한 후, iPr2NEt(80㎕, 457m㏖) 및 아지도메틸 피발레이트(78㎎, 0.503m㏖)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 20시간 동안 60℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 농축시켰다. 미정제 반응 혼합물을 에틸 아세테이트에 의해 미분쇄하고, 침전물을 여과시키고, H2O, MeOH, 이어서 TBME에 의해 세척하여 고체(148㎎, 2 단계에 걸쳐 67% 수율, 88.9% 순도)로서 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 436.0; RT = 1.18분(88.9% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. N-(5-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 티아졸-2-일)-2,4,6-트라이하이드록시피리미딘-5-카복사미드(1108). NaOH의 2.5M 수성 용액(610㎕)을 실온에서의 MeOH(6.1㎖) 중의 1108-D(148㎎, 0.302m㏖, 88.9% 순도)에 첨가하였다. 반응물을 10분 동안 교반하고, 이후 6M HCl에 의해 산성화시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 20CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 30% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 갈색의 고체(6.5㎎, 6% 수율, 96.0% 순도)로서 생성물 1108을 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO+TFA) δ 8.85 (s, 1H), 8.60 (s, 1H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 321.8; RT = 0.82분(96.0% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 27: N-(2,3-다이플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4,6-다이하이드록시-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미드(1109, 도 35와 관련하여 화학식 (IIaa))의 제조.
단계 1. 2,3-다이플루오로-4-((트라이메틸실릴)에티닐) 아닐린(1109-A). 4-브로모-2,3-다이플루오로아닐린(1.04g, 5.0m㏖), PdCl2(PPh3)2(210㎎, 0.3m㏖) 및 CuI(38㎎, 0.2m㏖)를 함유하는 환저 플라스크를 질소에 의해 15분 동안 퍼징하였다. 무수 THF(10.0㎖), 이어서 트라이메틸실릴 아세틸렌(1.4㎖, 10.0m㏖) 및 에탄올아민(0.6㎖, 10.0m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 12시간 동안 65℃로 가열하였다. 완료 후 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
LCMS: RT = 1.90분(90% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 4-에티닐-2,3-다이플루오로아닐린(1109-B). 메탄올(20.0㎖) 중에 용해된 미정제 1109-A(1.1g, 4.9m㏖)의 용액에 실온에서의 탄산칼륨(1.35g, 9.8m㏖)을 첨가하였다. 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 30% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 황색의 고체(207㎎, 77% 순도)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: RT = 1.43분(77.0% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. (4-(4-아미노-2,3-다이플루오로페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1109-C). 무수 1,4-다이옥산(3.0㎖) 중에 용해된 미정제 1109-B(200㎎, 1.3m㏖)의 용액에. CuI(25㎎, 0.13m㏖)를 첨가한 후, DIPEA(0.5㎖, 2.6m㏖) 및 아지도메틸 피발레이트(250㎎, 1.56m㏖)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 12시간 동안 60℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(SiO2, 20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 50% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 미백색의 고체(208㎎, 3개의 단계에 걸쳐 14% 수율)로서 1109-C를 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 311.1; RT = 1.61분(98.2% 순도)
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. (4-(4-(4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시)-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미도)-2,3-다이플루오로페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1109-D). 무수 1,2 다이클로로에탄(5.0㎖) 중의 플루오로-N,N,N',N'-비스(테트라메틸렌) 폼아미디늄 헥사플루오로포스페이트, BTFFH(435㎎, 1.4m㏖) 및 XY(383㎎, 0.825m㏖)를 DIPEA(0.5㎖, 2.75m㏖)에 첨가하고, 생성된 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 1109-C(170㎎, 0.55m㏖, 98.2% 순도)를 첨가하고, 반응물을 16시간 동안 80℃로 가열하였다. 완료 후 이것을 실온으로 냉각시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 40% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 백색의 고체(290㎎, 74.2% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 735.4; RT = 2.18분(98.5% 순도)
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. N-(2,3-다이플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4,6-다이하이드록시-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미드(1109). NaOH의 2.0M 수성 용액(3.0㎖)을 실온에서의 THF:MeOH(6.0㎖) 중의 1109-D(290㎎, 0.4m㏖)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 이후 농축시키고, MeOH에 의해 동시증발시켜 중간체 미정제 생성물을 얻고, 이것을 THF(2.0㎖) 중에 재용해시킨 후, 실온에서의 TFA(2.0㎖)를 첨가하고, 2시간 동안 교반되게 하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, MeOH(10㎖)를 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 30CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 35% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제한 후, 동결건조시켜 백색의 고체(21.0㎎, 14% 수율)로서 1109를 생성시켰다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3+ TFA): δ 8.63 (s, 1H), 8.28 (t, J = 7.3Hz, 1H), 7.69 (t, J = 8.4Hz, 1H), 2.80 (s, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 381.0; RT = 0.89분(99.07% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 중탄산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 28: 2-((2-(다이메틸아미노) 에틸) 티오)-N-(2-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐) 4-하이드록시-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1110, 도 36과 관련하여 화학식 (IIbb))의 제조.
단계 1. N-(2-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시)-2-(메틸설포닐) 피리미딘-5-카복사미드(1110-A). N-CHCl3(7.0㎖) 중에 용해된 (2-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시)-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미드(182㎎, 0.217mmol, 67% 순도)의 용액에 0℃의 mCPBA(158㎎, 0.912m㏖, H2O 중의 77%)를 첨가하였다. 반응물을 격렬히 교반하면서 20시간에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. LCMS를 통해 완전한 전환이 관찰된 후, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3에 의해 급랭시키고, 이후 30분 동안 격렬히 교반하고, 유기 층을 분리하고, 모든 mCPBA 및 mCPBA 불순물이 유기 상으로부터 제거될 때까지, 포화 NaHCO3(수성)(3x)에 의해 세척하였다. 생성된 유기 추출물을 MgSO4 위에서 건조시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물 1110-A를 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 635.2; RT = 1.64분(62% 순도)
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 2-((2-(다이메틸아미노) 에틸) 티오)-N-(2-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시) 피리미딘-5-카복사미드(1110-B). 무수 THF(5.0㎖) 중의 미정제 1110-A(258㎎, 0.4m㏖, 60% 순도) 및 다이메틸아미노 에탄 티올(283㎎, 2.0m㏖)의 용액에 0℃에서의 KOtBu(2.8㎖, 2.8m㏖, THF 중의 1.0M)를 첨가하였다. 이후, 반응 혼합물을 40분에 걸쳐 실온으로 가온시키고, H2O(10㎖)를 첨가하고, 이후 EtOAc(3 x 약 10㎖)에 의해 추출하였다. 합한 유기 추출물을 MgSO4 위에서 건조시키고, 감압 하에 농축시키고, 미정제 생성물 1110-B를 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 660.2; RT = 1.46분(68% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. 2-((2-(다이메틸아미노) 에틸) 티오)-N-(2-플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4-하이드록시-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1110). TFA(2.0㎖)를 CH2Cl2(2.0㎖) 중의 1110-B(0.4m㏖)의 용액에 첨가하고, 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, MeOH(10㎖)를 반응 혼합물에 첨가하고, 농축시켜 과량의 TFA를 제거하였다. MeOH(10㎖)를 2회 더 첨가하여 CH2Cl2 및 TFA에 의해 동시증발시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 30CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 35% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 불순한 생성물 1110을 생성시켰다. 원심분리를 이용하여 미분쇄를 통해 추가의 정제를 수행하였다. 고체를 물에 의해 세척하고, 상청액을 제거하고, 순서를 반복하고, 이후 아세토나이트릴에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 동결건조시켜 백색의 고체(12.0㎎, 3 단계에 걸쳐 12% 수율)로서 순수한 생성물 1110을 생성시켰다.
1H NMR (400 MHz, DMSO + TFA): δ 9.56 (s, 1H), 8.37 (s, 1H) 8.31 (t, J = 8.5Hz, 1H), 7.80 (d, J = 11.6Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.5Hz, 1H) 3.47 (m, 4H), 2.84 (s, 6H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 420.0; RT = 1.09분(95.6% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 29: N-(2,5-다이플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1111, 도 37과 관련하여 화학식 (IIcc))의 제조.
단계 1. 2,5-다이플루오로-4-((트라이메틸실릴)에티닐) 아닐린(1111-A). 2,5-다이플루오로-4-요오도아닐린(1.20g, 4.61m㏖), PdCl2(PPh3)2(194㎎, 0.277m㏖) 및 CuI(35㎎, 0.184m㏖)를 함유하는 환저 플라스크를 15분 동안 질소에 의해 퍼징하였다. 무수 THF(9.2㎖), 이어서 트라이메틸실릴 아세틸렌(1.3㎖, 9.22m㏖) 및 에탄올아민(556㎕, 9.22m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉하고, 2시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 226.2; RT = 1.87분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 4-에티닐-2,5-다이플루오로아닐린(1111-B). 미정제 1111-A(2.31m㏖)를 THF(4.6㎖) 중에 용해시키고, 이 용액에 TBAF(4.6㎖, THF 중의 1M)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 10분 동안 교반하고, THF를 진공에서 제거하였다. 미정제물을 EtOAc 중에 용해시키고, 이 용액을 실리카의 패드를 통해 통과시키고, EtOAc에 의해 세척하였다. 여과액을 농축시키고, 미정제 생성물을 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: RT = 1.43분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. 2,5-다이플루오로-4-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 아닐린(1111-C). 미정제 1111-B(2.31m㏖)의 용액에 무수 1,4-다이옥산(4.6㎖) 중에 용해된 용해시켰다. CuI(44㎎, 0.231m㏖)를 첨가한 후, iPr2NEt(400㎕, 2.31m㏖) 및 p-메톡실벤질 피발레이트(377㎎, 2.31m㏖)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 20시간 동안 60℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 농축시켰다. 미정제 반응 혼합물을 ISCO(SiO2, 20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 50% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 오렌지색의 폼(352㎎, 3 단계에 걸쳐 43% 수율, 89.3% 순도)으로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 317.3; RT = 1.50분(89.3% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. N-(2,5-다이플루오로-4-(1-(4-메톡시벤질)-1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시)-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미드(1111-D). T3P(3.4㎖, 5.70m㏖, EtOAc 중의 50%)를 EtOAc(4.8㎖) 중의 1111-C(336㎎, 0.950m㏖), 트라이에틸아민(1.2㎖, 8.55m㏖) 및 XZ(594㎎, 1.24m㏖)의 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 밤새 가열하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, 혼합물을 농축시켰다. TBME를 잔류물에 첨가하고, 음파처리하고, 고체를 여과시키고, H2O 및 TBME에 의해 세척하여 밝은 갈색의 고체(575㎎, 40% 수율, 82.1% 순도)로서 표제 화합물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 741.1; RT = 2.13분(82.1% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. N-(2,5-다이플루오로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1111). TfOH(90㎕)를 TFA(1.5㎖) 및 1,2-다이클로로에탄(5.0㎖) 중의 1111-D(210㎎, 0.252m㏖)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 밀봉 압력 용기에서 80℃에서 20시간 동안 가열하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, MeOH(10㎖)를 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 농축시켜 CH2Cl2 및 TFA를 제거하였다. MeOH(10㎖)를 2회 더 첨가하여 CH2Cl2 및 TFA에 의해 동시증발시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피(C18, 30CV에 걸쳐 중탄산암모늄 완충제 10mM과 함께 물 중의 0 내지 30% 아세토나이트릴의 구배 용리제)를 통해 정제하여 동결건조 후 백색의 고체(25.4㎎, 26% 수율, 96.7% 순도)로서 생성물 1111을 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3+TFA) δ 8.63 (s, 1H), 8.50 - 8.41 (m, 1H), 7.72 (s, 1H), 2.77 (s, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 381.0; RT = 1.46분(96.7% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 30: N-(4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일)-2-(트라이플루오로메틸) 페닐) -4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1112, 도 38과 관련하여 화학식 (IIdd))의 제조.
단계 1. 2-(트라이플루오로메틸)-4-((트라이메틸실릴)에티닐)아닐린(1112-A). 4-요오도-2-(트라이플루오로메틸) 아닐린(280㎎, 2.02m㏖), PdCl2(PPh3)2(84㎎, 0.12m㏖) 및 CuI(30㎎, 0.16m㏖)를 함유하는 환저 플라스크를 15분 동안 질소에 의해 퍼징하였다. 무수 THF(4.0㎖), 이어서 트라이메틸실릴 아세틸렌(570㎕, 4.04m㏖) 및 트라이에틸아민(560㎕, 4.04m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉하고, 20시간 동안 65℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 추가의 정제 없이 사용하였다.
LCMS: RT = 2.08분.
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 4-에티닐-2-(트라이플루오로메틸) 아닐린(1112-B). 메탄올(4.0㎖) 중에 용해된 미정제 1112-A(2.02m㏖)의 용액에 실온에서의 탄산칼륨(558㎎, 4.04m㏖)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 교반한다 실온에서 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 30% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 황색의 고체(280㎎, 2 단계에 걸쳐 74% 수율, 98.6% 순도)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: RT = 1.64분(98.6% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. (4-(4-아미노-3-(트라이플루오로메틸) 페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1112-C). 1111-B(280㎎, 1.51m㏖)의 용액에 무수 1,4-다이옥산(3.0㎖) 중에 용해시켰다. CuI(29㎎, 0.151m㏖)를 첨가한 후, iPr2NEt(260㎕, 1.51m㏖) 및 아지도메틸 피발레이트(261㎎, 1.66m㏖)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 20시간 동안 60℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(SiO2, 20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 50% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 미백색의 고체(370㎎, 70% 수율, 97.0% 순도)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 343.2; RT = 1.70분(97.0% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. (4-(4-(4,6-비스((4-메톡시 벤질) 옥시)-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미도)-3-(트라이플루오로메틸) 페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1112-D). 무수 다이클로로메탄(1.5㎖) 중의 플루오로-N,N,N',N'-비스(테트라메틸렌) 폼아미디늄 헥사플루오로포스페이트, BTFFH(85㎎, 0.270m㏖) 및 XY(111㎎, 0.230m㏖)를 iPr2Net(120㎕, 0.88m㏖)에 첨가하고, 생성된 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 1112-C(50㎎, 0.150m㏖, 97.0% 순도)를 첨가하고, 이후 압력 용기에서 밀봉하고, 24시간 동안 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 40% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 미백색의 고체(62㎎, 46% 수율, 84.8% 순도)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 767.3; RT = 2.19분(84.8% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. (4-(4-(4,6-비스((4-메톡시 벤질) 옥시)-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미도)-3-(트라이플루오로메틸) 페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1112). NaOH의 2.5M 수성 용액(690㎕)을 실온에서의 THF(1.4㎖) 중의 1112-D(62㎎, 0.0686m㏖, 84.8% 순도)에 첨가하였다. 반응물을 20시간 동안 교반하고, 이후 에틸 아세테이트에 의해 동시증발시켰다. 미정제 생성물을 에틸 아세테이트에 의해 음파처리하고, 이후 여과시키고, 침전물을 EtOAc에 의해 세척하고, 이후 수집하였다.
중간체를 CH2Cl2(1.4㎖)에 첨가한 후, 실온에서의 TFA(400㎕)를 첨가하다. 반응물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, MeOH(10㎖)를 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 농축시켜 CH2Cl2 및 TFA를 제거하였다. MeOH(10㎖)를 2회 더 첨가하여 CH2Cl2 및 TFA에 의해 동시증발시켰다. 원심분리를 이용하여 미분쇄를 통해 미정제 생성물을 정제하였다. 고체를 물에 의해 세척하고, 상청액을 제거하고, 순서를 반복하고, 이후 아세토나이트릴에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 동결건조시켜 미백색의 고체(18.4㎎, 2 단계에 걸쳐 63% 수율, 95.4% 순도)로서 순수한 생성물 1112를 생성시켰다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3+TFA) δ 8.65 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 8.36 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 2.83 (s, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 413.2; RT = 1.41분(95.4% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 31: N-(6-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 피리다진-3-일)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1113, 도 39와 관련하여 화학식 (IIkk))의 제조.
단계 1. 6-((트라이메틸실릴)에티닐) 피리다진-3-아민(1113-A). 6-요오도피리다진-3-아민(1.1g, 5.0m㏖), 트라이메틸실릴 아세틸렌(3.58㎖, 25.0m㏖) 및 CuI(380㎎, 2.0m㏖)를 함유하는 환저 플라스크를 EtOAc(30.0㎖) 중에 용해시키고, 15분 동안 질소에 의해 퍼징하였다. 이후, 반응 혼합물 -20℃에서 냉각시키고, PdCl2(dppf)(732㎎, 1m㏖), DIPEA(1.75㎖, 10.0m㏖)를 첨가하였다. 10분 후, 반응 혼합물은 실온이 되고, 12시간 동안 교반하였다. 완료 후 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 용리제로서 DCM 중의 0 내지 5% MeOH를 사용하여 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피를 통해 정제하여 미백색의 고체(680㎎, 70% 수율)로서 1113-A를 얻었다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 192.0; RT = 1.41분(95.1% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 6-에티닐피리다진-3-아민(1113-B). THF(15.0㎖) 중에 용해된 1113-A(680㎎, 3.6m㏖)의 용액에 실온에서의 TBAF(7.2㎖, 7.2m㏖, THF 중의 1M)를 첨가하였다. 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(20CV에 걸쳐 DCM 중의 0 내지 30% MeOH)를 통해 정제하여 갈색의 고체(380㎎, 89.8% 수율)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 120.4; RT = 0.31분(99.2% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. (4-(6-아미노피리다진-3-일)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1113-C). 무수 1,4-다이옥산(5.0㎖) 중에 용해된 1113-B(198㎎, 1.7m㏖)의 용액에. CuI(33㎎, 0.17m㏖)를 첨가한 후, DIPEA(0.6㎖, 3.4m㏖) 및 아지도메틸 피발레이트(321㎎, 2.0m㏖)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 12시간 동안 60℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(SiO2, 20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 50% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 갈색의 고체(328㎎, 71% 수율)로서 1113-C를 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 277.3; RT = 1.18분(95.2% 순도)
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴
단계 4. (4-(6-(4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시)-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미도) 피리다진-3-일)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1113-D). 무수 DMF(5.0㎖) 중에 용해된 HBTU(380㎎, 1.0m㏖) 및 XY(443㎎, 1.0m㏖)의 교반하는 용액에 DIPEA(0.49㎖, 2.8m㏖)를 첨가하고, 생성된 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 1113-C(138㎎, 0.5m㏖)를 첨가하고, 이후 반응 혼합물을 16시간 동안 60℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 40% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 백색의 고체(60㎎, 78% 순도)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 701.3; RT = 2.07분(78.0% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. N-(6-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 피리다진-3-일)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1113). NaOH의 2.0M 수성 용액(2.0㎖)을 실온에서의 THF:MeOH(3.0㎖, 1:1) 중의 1113-D(60㎎, 0.06m㏖, 78.0% 순도)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 이후 농축시키고, MeOH에 의해 증발시켜 중간체 미정제 생성물을 얻고, 이것을 CH2Cl2(3.0㎖) 중에 용해시킨 후, 실온에서의 TFA(2.0㎖)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, MeOH(10㎖)를 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 농축시켜 CH2Cl2 및 TFA를 제거하였다. MeOH(10㎖)를 2회 더 첨가하여 CH2Cl2 및 TFA에 의해 동시증발시켰다. 원심분리를 이용하여 미분쇄를 통해 미정제 생성물을 정제하였다. 고체를 물에 의해 세척하고, 상청액을 제거하고, 순서를 반복하고, 이후 아세토나이트릴에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 동결건조시켜 미백색의 고체(4.8㎎, 2 단계에 걸쳐 22% 수율)로서 순수한 생성물 1113을 생성시켰다.
1H NMR (400 MHz, D2O 중의 1M K2CO3): δ 8.28 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.91 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 2.18 (s, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 347.0; RT = 1.20분(97.8% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 32: N-(2-클로로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1114, 도 40과 관련하여 화학식 (IIee))의 제조.
단계 1. 2-클로로-4-((트라이메틸실릴)에티닐) 아닐린(1114-A). 2-클로로-4-요오도아닐린(1.27g, 5.0m㏖), Pd(PPh3)4(115㎎, 0.1m㏖) 및 CuI(38㎎, 0.2m㏖)를 함유하는 환저 플라스크를 15분 동안 질소에 의해 퍼징하였다. 무수 CH3CN(10.0㎖), 이어서 트라이메틸실릴 아세틸렌(0.8㎖, 5.5m㏖) 및 트라이에틸아민(2.1㎖, 15.0m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 12시간 동안 65℃로 가열하였다. 완료 후 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
LCMS: RT = 2.02분(97.7% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 2. 2-클로로-4-에티닐아닐린(1114-B). 메탄올(20.0㎖) 중에 용해된 미정제 1114-A(1.32g, 5.9m㏖)의 용액에 실온에서의 탄산칼륨(1.63g, 11.8m㏖)을 첨가하였다. 출발 재료의 완전한 소모가 관찰될 때까지, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 30% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 황색의 고체(580㎎, 2 단계에 걸쳐 77% 수율)로서 생성물을 생성시시켰다.
LCMS: RT = 1.55분(97.9% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 3. (4-(4-아미노-3-클로로페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1114-C). 무수 1,4-다이옥산(5.0㎖) 중에 용해된 1114-B(303㎎, 2.0m㏖)의 용액에. CuI(38㎎, 0.2m㏖)를 첨가한 후, DIPEA(0.7㎖, 4.0m㏖) 및 아지도메틸 피발레이트(377㎎, 2.4m㏖)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 12시간 동안 60℃로 가열하였다. 이후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(SiO2, 20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 50% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 미백색의 고체(521㎎, 84% 수율)로서 1114-C를 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 309.2; RT = 1.62분(87.7% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 4. (4-(4-(4,6-비스((4-메톡시벤질) 옥시)-2-(메틸티오) 피리미딘-5-카복사미도)-3-클로로페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일) 메틸 피발레이트(1114-D). 무수 1,2 다이클로로에탄(4.0㎖) 중의 플루오로-N,N,N',N'-비스(테트라메틸렌) 폼아미디늄 헥사플루오로포스페이트, BTFFH(316㎎, 1.0m㏖) 및 XY(443㎎, 1.0m㏖)를 DIPEA(0.49㎖, 2.8m㏖)에 첨가하고, 생성된 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 1114-C(206㎎, 0.7m㏖, 87.7% 순도)를 첨가하고, 이후 관을 밀봉하고, 16시간 동안 80℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이후 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 ISCO(20CV에 걸쳐 헥산 중의 0 내지 40% 에틸 아세테이트)를 통해 정제하여 미백색의 고체(100㎎, 21% 수율, 85% 순도)로서 생성물을 생성시켰다.
LCMS: m/z [M+1]+ = 734.3; RT = 2.19분(85.0% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄 pH: 3.8; 용리제 B: 아세토나이트릴.
단계 5. N-(2-클로로-4-(1H-1,2,3-트라이아졸-4-일) 페닐)-4-하이드록시-2-(메틸티오)-6-옥소-1,6-다이하이드로피리미딘-5-카복사미드(1114). NaOH의 2.0M 수성 용액(2.0㎖)을 실온에서의 THF:MeOH(3.0㎖, 1:1) 중의 1114-D(100㎎, 0.12m㏖, 85.0% 순도)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 이후 농축시키고, MeOH에 의해 증발시켜 중간체 미정제 생성물을 얻고, 이것을 CH2Cl2(3.0㎖) 중에 용해시킨 후, 실온에서의 TFA(2.0㎖)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. LCMS를 통해 출발 재료의 완전한 소모가 관찰된 후, MeOH(10㎖)를 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 농축시켜 CH2Cl2 및 TFA를 제거하였다. MeOH(10㎖)를 2회 더 첨가하여 CH2Cl2 및 TFA에 의해 동시증발시켰다. 원심분리를 이용하여 미분쇄를 통해 미정제 생성물을 정제하였다. 고체를 물에 의해 세척하고, 상청액을 제거하고, 순서를 반복하고, 이후 아세토나이트릴에 의해 세척하였다. 생성된 고체를 수집하고, 동결건조시켜 미백색의 고체(7.0㎎, 2 단계에 걸쳐 16% 수율, 95.2% 순도)로서 순수한 생성물 1114를 생성시켰다.
1H NMR (400 MHz, D2O 중의 1M K2CO3): δ 7.97 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.47 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 2.18 (s, 3H).
LCMS: m/z [M+1]+ = 379.2; RT = 1.20분(95.2% 순도).
HPLC 조건: 칼럼: XBridge C18, 3.5㎛, 4.6 x 30㎜; 구배: 0.2분 동안 5% B, 1.8분에 5% 내지 100% B; 1분 동안 100% B; 3㎖/분. 용리제 A: Milli-Q H2O + 10mM 폼산암모늄; 용리제 B: 아세토나이트릴.
실시예 33: 생물활성 검정.
화학식 (I) 및 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물의 생물학적 활성을 잔틴 산화효소 활성 및 URAT1 활성의 2개의 검정에서 평가하였다.
적은 변동으로 잔틴 산화효소 활성에 대해 표준 형광 기반 검정을 이용하여 잔틴 산화효소 저해를 결정하였다(McHale A, Grimes H, Coughlan MP: Int J Biochem. 10:317-9, 1979). 이의 최적 저해 농도의 결정 후 모든 실험에 대해 대조군으로서 알로퓨리놀 및 DPI를 사용하여 절차를 내부적으로 표준화하였다. 시험 화합물에 대한 실험을 3배 희석 초과의 범위인 각각 화합물의 10 농도를 사용하여 다중웰 플레이트에서 3회 수행하였다.
안정하게 형질주입된 URAT-1/CHO 세포를 갖는 96웰 플레이트를 사용하여 세포 흡수 검정에서 URAT1(SLC22A12) 활성을 평가하였다. 3H-오로테이트는 시험 수송 물질로서 사용되고, 이것은 양성 대조군으로서 벤즈브로마론, 및 음성 대조군으로서 DMSO 및 비형질주입된 CHO 세포(Solvo Biotechno(매사추세츠주 보스턴))를 사용하여 액체 섬광 카운터에서 측정되었다. 일반적으로 7 농도 초과로 결정된(범위, 0.01 내지 150μM), 반로그 선도(시간에 따른 오레테이트의 상대 수송 백분율)를 생성하여서 50% 저해가 관찰된 농도(즉, IC50)를 결정하였다.
화학식 (I) 및 화학식 (II)에 따른 예시적인 화합물 에 대한 이 검정의 결과는 표 1에 기재되어 있다:
Figure 112019002004819-pct00039
화학식 (IIi), (IIjj), (IIii), (IIk), (IIl), (IIp), (IIq), (IIr), (IIs) 및 (IIt)는 알로푸리놀과 비교하여 잔틴 산화효소의 특히 강력한 저해제이다. 몇몇 화합물은 또한 URAT1(예를 들어, 화학식 (IIi), (IIk), (IIl), (IIq), (IIr), (IIs))을 효과적으로 저해하지만, 이들 모두가 시험되지 않았다. 이것은 가장 유망한 이작용성 저해제이다. 특히 효과적인 이작용성 저해제의 2개의 대표적인 예는 화학식 (IIr) 및 (IIs)이다.
많은 화합물이 강력한 저해제이지만, 각각의 효소/채널의 저해의 정도는 상이하다. 이러한 변동은 하나 또는 다른 효소 표적의 더 크거나 더 적은 저해를 나타내는 약제학적으로 허용 가능한 생성물의 똑똑한 선택을 허용한다. 예를 들어, XO의 더 큰 저해는 1차 대사 결함이 요산의 과생성인 환자에 대해 바람직하다고 생각될 것이다. 반대로, URAT1의 더 큰 저해는 1차 대사 결함이 요산의 저배설인 환자에 대해 바람직하다고 생각될 것이다. 그러나, 고뇨산혈증 또는 과량의 요산과 연관된 장애를 갖는 거의 모든 환자가 혈청 요산의 감소로부터 이익일 것이고, 이작용성 화합물이 이러한 환자에서 유리한 효과를 발휘하는 것으로 예상될 수 있다는 것에 주목해야 한다. 본 개시내용에 의해 안내된 의사는 당해 기술의 수준에 기초하여 특정한 사용에 적절한 바대로 특정한 화합물을 선택할 것이다.
비교의 예로 알로푸리놀은 약 2.0 내지 약 5.0μM의 범위의 XO에 대한 IC50 및 300μM 초과의 URAT1에 대한 IC50을 갖는다. 레시뉴라드는 300μM 초과의 XO에 대한 IC50 및 18 내지 53μM의 범위의 URAT1에 대한 IC50을 갖는다. 따라서, 둘 다가 요산의 생성 또는 배설에 영향을 미치는 오직 하나의 효소의 선택적 저해제이므로, 이들 화합물 중 어느 것도 이작용성이라 생각되지 않는다. 반대로, 본 명세서에 기재된 소정의 화합물은 오직 이작용성이 아니고, 몇몇은 XO 및 URAT1 중 어느 하나 또는 둘 다의 실질적으로 더 강력한 저해제이다.
많은 임상 상황에서 XO 및 URAT1 둘 다에 대해 매우 강력한 약물에 의해 고뇨산혈증을 치료하는 것이 바람직하지만, 고뇨산혈증 또는 과량의 요산과 연관된 장애의 치료를 위한 본 발명의 특정한 화합물의 선택이 치료되는 환자의 표현형(즉, 요산의 과생성 및 환자의 특정한 질환에 대한 요산의 저배설의 상대 기여)에 기초할 수 있다고 또한 생각된다. 요산의 과생성이 우세한 경우, URAT1보다 XO에 대해 실질적으로 더 강력한 본 발명에 따른 화합물의 사용은 적절할 수 있다. 요산의 저배설이 우세한 경우, XO보다 URAT1에 대해 실질적으로 더 강력한 본 발명에 따른 화합물의 사용은 적절할 수 있다. 이 2개의 경로의 유전학이 완전히 이해되지 않지만, 특정한 환자의 고뇨산혈증에 각각 기여하는 정도를 결정하기 위한 화학 시험은 공개되고, 당업자에 의해 적절하게 결정될 수 있는 것처럼 이 각각의 활성을 균형 이루는 적절한 약물의 선택을 위한 환자의 질환 표현형을 분명하게 하도록 유용할 수 있다.
본 명세서에서 발명이 특정한 실시형태와 관련하여 기재되어 있지만, 이 실시형태가 본 발명의 원칙 및 적용을 단지 예시한다고 이해되어야 한다. 본 발명의 정신 및 범위로부터 벗어나지 않으면서 본 발명의 방법 및 장치에 다양한 변형 및 변경이 이루어질 수 있다는 것이 당업자에게 명확할 것이다. 따라서, 본 발명이 첨부된 청구항의 범위 및 이의 등가물 내인 변형 또는 변경을 포함하는 것으로 의도된다.

Claims (18)

  1. 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물:
    a) 하기 화학식 (II)로 표시된 구조를 갖는 화합물:
    Figure 112022025084175-pct00040

    (식 중,
    W는 O; Y는 O; X는 O, S, 또는 NR2이고;
    A는 페닐, 바이사이클로알킬, 스피로사이클로알킬, 피리딘 및 다이아진으로 구성되는 군으로부터 선택되고;
    Z는 각각 독립적으로 존재하거나 부재하고, 존재하는 경우, 하나 이상의 할로겐 원자, 알킬, 사이클로알킬, CF3 또는 N(R2)2로부터 독립적으로 선택되고;
    R1은 각각 Z에 의해 임의로 치환된 C1-C3 분지 또는 비분지 알킬이고;
    R2는 각각 H이고;
    a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 탄소 또는 질소이고, 단 a, b, c, d 및 e 중 3개 또는 4개는 질소이고, Z는 질소에 직접적으로 연결되지 않음):
    b) 임의의 상기 화합물의 호변이체.
  2. 제1항에 있어서, a, b, c, d 및 e 중 3개는 질소인, 화합물.
  3. 제1항에 있어서, R1은 -CH3인, 화합물.
  4. 제3항에 있어서, -XR1은 -SCH3 또는 -OCH3인, 화합물.
  5. 제1항에 있어서, 하기 화학식으로 표시되는 구조를 갖는 화합물:
    Figure 112022025084175-pct00084
    ,
    Figure 112022025084175-pct00085
    ,
    Figure 112022025084175-pct00086
    ,
    Figure 112022025084175-pct00087
    ,
    Figure 112022025084175-pct00088
    ,
    Figure 112022025084175-pct00089
    ,
    Figure 112022025084175-pct00090
    ,
    Figure 112022025084175-pct00091
    ,
    Figure 112022025084175-pct00092
    ,
    Figure 112022025084175-pct00093
    ,
    Figure 112022025084175-pct00094
    ,
    Figure 112022025084175-pct00095

    Figure 112022025084175-pct00096
    ,
    Figure 112022025084175-pct00097
    ,
    Figure 112022025084175-pct00098
    ,
    Figure 112022025084175-pct00099
    ,
    Figure 112022025084175-pct00100
    ,
    Figure 112022025084175-pct00101
    ,
    Figure 112022025084175-pct00102
    ,
    Figure 112022025084175-pct00103
    ,
    Figure 112022025084175-pct00104
    ,
    Figure 112022025084175-pct00105
    ,
    Figure 112022025084175-pct00106
    ,
    Figure 112022025084175-pct00107
    ,
    Figure 112022025084175-pct00108
    ,
    Figure 112022025084175-pct00109
    ,
    Figure 112022025084175-pct00110
    ,
    Figure 112022025084175-pct00111
    ,
    Figure 112022025084175-pct00112
    ,
    Figure 112022025084175-pct00113
    ,
    Figure 112022025084175-pct00114

    및 이의 호변이체로 이루어진 군으로부터 선택된, 화합물.
  6. 제4항에 있어서,
    Figure 112022025084175-pct00115

    로 표시된 구조를 갖는, 화합물.
  7. 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화합물:
    a) 하기 화학식 (I)로 표시된 구조를 갖는 화합물:
    Figure 112022025084175-pct00041

    (식 중,
    W는 O 또는 S, Y는 O, X는 O 또는 S이고;
    A는 헤테로아릴이고;
    T는 -CONR2-이고;
    Z는 각각 독립적으로 존재하거나 부재하고, 존재하는 경우, 하나 이상의 할로겐 원자, -CN, -CF3, -OR2, -C(O)R2, SR2, -S(O)gR3(식 중, g는 1 또는 2임), -N(R2)2, -NO2, -CO2R2, -OCO2R3, OC(O)R2, -CON(R2)2, -NR2C(O)R2, -SO2N(R2)2, -NR2SO2R3, -NR2SO2N(R2)2 또는 -NR2C(O)N(R2)2, -C(O)NHOR2, 알킬, 아릴, 알켄일 및 알킨일로부터 독립적으로 선택되고;
    R2는 각각 독립적으로 H, 알킬 또는 아릴이고;
    R3은 각각 독립적으로 하나 이상의 할로겐 원자 또는 OR2에 의해 임의로 치환된 알킬 또는 아릴이고;
    a, b, c, d 및 e는 각각 독립적으로 탄소 또는 질소이고, 단 a, b, c, d 및 e 중 3개 또는 4개는 질소이고, Z는 질소에 직접적으로 연결되지 않음):
    b) 임의의 상기 화합물의 호변이체.
  8. 제7항에 있어서, A는 티아졸 또는 아이소티아졸인, 화합물.
  9. 제8항에 있어서, a, b, c, d 및 e 중 3개는 질소인, 화합물.
  10. 제9항에 있어서,
    Figure 112022025084175-pct00116
    화학식 (Io)
    로 표시된 구조를 갖는, 화합물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 하나 이상의 화합물 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 대상체의 혈액, 혈청 또는 전신에서의 요산 수치를 감소시키거나, 대상체의 혈액, 혈청 또는 전신에서의 요산 수치의 상승을 예방하거나, 과량의 요산과 연관된 장애를 치료하거나 예방하기 위한 약제학적 조성물.
  12. 제11항에 있어서,
    Figure 112022025084175-pct00117

    로 표시된 구조를 갖는 화합물 또는 이의 호변이체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  13. 삭제
  14. 제11항에 있어서, 상기 과량의 요산과 연관된 장애는 통풍, 고뇨산혈증, 종양 용해 증후군, 신장 질환, 관절염, 신장 결석, 신부전, 요로결석증, 연독, 부갑상선 기능 항진증, 건선, 대사의 선천적 유전적 오차, 예컨대 레쉬-니한(Lesch-Nyhan) 증후군, 사르코이드증, 비알코올성 지방간 질환(nonalcoholic fatty liver disease: NAFLD), 비알코올성 지방간염(nonalcoholic steatohepatitis: NASH), 심혈관 질환, 죽상동맥경화증, 고혈압, 당뇨, 당뇨병, 인슐린 내성, 대사 증후군, 및 혈액, 골수 또는 고형 장기의 이식으로부터 선택된, 약제학적 조성물.
  15. 삭제
  16. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 사용하여 약제를 제조하는 방법.
  17. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 사용하여, 통풍, 고뇨산혈증, 종양 용해 증후군, 신장 질환, 관절염, 신장 결석, 신부전, 요로결석증, 연독, 부갑상선 기능 항진증, 건선, 대사의 선천적 유전적 오차, 예컨대 레쉬-니한 증후군, 사르코이드증, 비알코올성 지방간 질환(NAFLD), 비알코올성 지방간염(NASH), 심혈관 질환, 죽상동맥경화증, 고혈압, 당뇨, 당뇨병, 인슐린 내성, 대사 증후군, 및 혈액, 골수 또는 고형 장기의 이식으로 이루어진 군으로부터 선택된 과량의 요산과 연관된 장애의 치료 또는 예방을 위한 약제를 제조하는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 상기 약제는
    Figure 112022025084175-pct00118

    로 표시된 구조를 갖는 화합물을 포함하는, 방법.
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