KR102433277B1 - Choline alfoscerate composition manufacturing method using fatty oil - Google Patents
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Abstract
본 발명은 인지질의 가수분해를 통한 식품 또는 약품용 콜린알포세레이트 조성물의 제조에 관한 것으로, 효소에 의한 인지질의 가수분해에 있어서 식용 가능한 유지(油脂)를 첨가함으로써 소요 반응을 촉진하고, 고순도 콜린알포세레이트 조성물의 생산성을 확보할 수 있도록 한 것이다.
본 발명을 통하여, 식약용 콜린알포세레이트 조성물의 제조에 있어서 안전성 및 생산성을 획기적으로 향상시킬 수 있다.The present invention relates to the preparation of a choline alfoscerate composition for food or pharmaceutical use through hydrolysis of phospholipids. In the hydrolysis of phospholipids by enzymes, edible oils and fats are added to promote the required reaction, and high-purity choline This is to ensure the productivity of the alfoscerate composition.
Through the present invention, it is possible to dramatically improve safety and productivity in the preparation of a choline alfoscerate composition for food and drug use.
Description
본 발명은 인지질의 가수분해를 통한 식품 또는 약품용 콜린알포세레이트 조성물의 제조에 관한 것으로, 효소에 의한 인지질의 가수분해에 있어서 식용 가능한 유지(油脂)를 첨가함으로써 소요 반응을 촉진하고, 고순도 콜린알포세레이트 조성물의 생산성을 확보할 수 있도록 한 것이다.The present invention relates to the preparation of a choline alfoscerate composition for food or pharmaceutical use through hydrolysis of phospholipids. In the hydrolysis of phospholipids by enzymes, edible oils and fats are added to promote the required reaction, and high-purity choline This is to ensure the productivity of the alfoscerate composition.
콜린알포세레이트(choline alfoscerate)로 알려져 있는 알파글리세릴포스포릴콜린(L-α-glyceryl phosphoryl choline)은 인지질(燐脂質)인 포스파티딜콜린(phosphatidyl choline)에서 유래하며 두개의 아실기의 가수분해를 통하여 얻어진다.Alpha-glyceryl phosphoryl choline (L-α-glyceryl phosphoryl choline), also known as choline alfoscerate, is derived from phosphatidyl choline, a phospholipid, and through hydrolysis of two acyl groups is obtained
알파글리세릴포스포릴콜린은 콜린신경계 전구체로서, 다양한 뇌기능 개선 효과를 발현하는 것으로 알려져 있으며, 그 예로서 뇌졸중 환자에 있어서의 학습 및 기억력 개선 효과와, 알츠하이머 환자에 있어서의 증상 호전 효과를 들 수 있다.Alpha-glyceryl phosphorylcholine is a precursor of the cholinergic nervous system and is known to express various brain function improvement effects, examples of which include learning and memory improvement effects in stroke patients and symptom improvement effects in Alzheimer's patients. have.
알파글리세릴포스포릴콜린 즉, 콜린알포세레이트는 상기와 같은 약리효과 뿐 아니라, 다양한 건강 증진 및 미용 효과 등을 나타내는 것으로 확인되고 있으며, 이에 건강 보조 식품 및 화장품 등 다양한 분야에 그 용도가 확장되고 있다.Alpha-glyceryl phosphorylcholine, that is, choline alfoscerate, has been confirmed to exhibit various health-promoting and cosmetic effects as well as the pharmacological effects described above, and its use is expanded to various fields such as health supplements and cosmetics. have.
콜린알포세레이트가 함유된 조성물의 제조 방법으로는 화학적 합성법 또는 효소를 활용한 정제법을 들 수 있는데, 전자의 제법은 합성 과정에서 다량의 독성 부산물 및 오염물이 배출될 뿐 아니라 완성품의 안전성 역시 담보할 수 없는 바, 식용 또는 약용 목적의 콜린알포세레이트 조성물의 제조에는 주로 효소 적용 분해 정제법이 적용되고 있다.A method for producing a composition containing choline alfoscerate includes a chemical synthesis method or a purification method using an enzyme. Since it cannot be done, the enzyme application decomposition purification method is mainly applied to the preparation of the choline alfoscerate composition for edible or medicinal purposes.
콜린알포세레이트 조성물의 제조에 있어서 원료로 활용될 수 있는 물질로서 자연계에서 일반적으로 존재하는 다양한 인지질이 적용될 수 있는데, 구체적인 예를 들면 대두 레시틴, 해바라기 레시틴, 쌀 레시틴 또는 이들 저순도 레시틴으로부터 정제된 탈지 레시틴, 분획 레시틴(fractionated lecithin) 또는 고순도 레시틴(purified lecithin)을 들 수 있다.As a material that can be used as a raw material in the preparation of the choline alfoscerate composition, various phospholipids generally present in nature can be applied, for example, soybean lecithin, sunflower lecithin, rice lecithin, or purified from these low-purity lecithins. skim lecithin, fractionated lecithin or purified lecithin.
효소를 활용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조는 상기와 같은 원료 물질로서의 레시틴 즉, 기질(基質)로서의 인지질에서 지방산을 제거하는 공정이라 할 수 있으며, 상대적으로 온화한 반응 조건을 설정할 수 있을 뿐 아니라 유해 부산물이 산출되지 않는 장점이 있으나, 기질인 인지질이 물에 대하여 불용성이므로 적절한 효소 반응을 위한 조치가 요구되는데, 관련 종래기술로서 특허 제1995642호 및 특허 제1995643호를 들 수 있다.The production of a choline alfoscerate composition using an enzyme can be said to be a process of removing fatty acids from lecithin as a raw material, that is, a phospholipid as a substrate, as described above, and can set relatively mild reaction conditions as well as harmful Although there is an advantage that by-products are not produced, since phospholipids, which are substrates, are insoluble in water, measures for an appropriate enzymatic reaction are required.
특허 제1995642호 및 특허 제1995643호를 비롯한 종래의 효소 적용 콜린알포세레이트 조성물 제조방법은 유기용매인 헥산(hexane)을 반응매질로 적용하고, 반응촉매로서 고정화 리파제를 활용한 것으로, 전술한 인지질의 불용성 문제를 일정 수준 해결할 수 있으나, 다음과 같은 다양한 문제를 야기하였다.The conventional method for preparing a choline alfoscerate composition applied with an enzyme, including Patent Nos. 1995642 and No.1995643, uses hexane, an organic solvent, as a reaction medium, and utilizes an immobilized lipase as a reaction catalyst, and the above-described phospholipids Although it can solve the insolubility problem to a certain level, it causes various problems such as
우선, 유기용매인 헥산이 적용된다는 점에서 완성품에 있어서의 생체 독성을 배제할 수 없다.First, since hexane, an organic solvent, is applied, biotoxicity in the finished product cannot be excluded.
또한, 반응 특성상 격렬한 교반이 필요하여 방폭 시설물 등 고도의 안전시설 구축이 요구되며, 반응 후 헥산 회수를 위한 용매 회수 설비 역시 필수적으로 요구된다.In addition, since vigorous stirring is required due to the nature of the reaction, it is necessary to construct a high-level safety facility such as an explosion-proof facility, and a solvent recovery facility for hexane recovery after the reaction is also essential.
특히, 효소의 안정성 부족 등으로 인하여 충분한 반응 효율을 확보할 수 없는 바, 생산성이 산업적 생산이 가능한 수준에 미달하는 심각한 문제점을 가진다.In particular, it is not possible to secure sufficient reaction efficiency due to lack of stability of the enzyme, etc., there is a serious problem in that the productivity falls short of the level at which industrial production is possible.
본 발명은 전술한 문제점을 감안하여, 잔류 독성이 전무하고 생산성이 우수할 뿐 아니라, 유해 부산물 및 오염물의 배출이 미미한 친환경적인 콜린알포세레이트 조성물 제조가 가능하도록 창안된 것으로, 인지질의 가수분해가 수행되는 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법에 있어서, 기질인 인지질과 효소, 물 및 유지가 혼합되어 인지질의 가수분해가 수행됨으로써 반응액이 형성되는 반응단계와, 반응단계에서 형성된 반응액을 정제 및 농축하여 콜린알포세레이트 조성물을 형성하는 취출단계로 이루어짐을 특징으로 하는 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법 및 그 조성물이다.In view of the above-mentioned problems, the present invention was devised to produce an eco-friendly choline alfoscerate composition with no residual toxicity and excellent productivity, as well as minimal emission of harmful by-products and pollutants. In the method for producing a choline alfoscerate composition to be carried out, a reaction step in which a reaction solution is formed by mixing phospholipids as a substrate, an enzyme, water and oil and hydrolysis of the phospholipids is performed, and the reaction solution formed in the reaction step is purified and A method for producing a choline alfoscerate composition using fats and oils, characterized in that it consists of an extraction step of concentrating to form a choline alfoscerate composition, and a composition thereof.
또한, 상기 효소는 포스포리파제 A1, 포스포리파제 A2, 포스포리파제 B 및 리파제로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함함을 특징으로 하는 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법 및 그 조성물이다.In addition, the enzyme is phospholipase A1, phospholipase A2, phospholipase B and a method for producing a choline alfoscerate composition using fat, characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of lipase, and a method for producing the same composition.
또한, 상기 취출단계는 반응액과 에탄올을 혼합하여 혼합액을 형성하는 혼합단계와, 혼합액을 정치하여 층분리한 후 에탄올 층을 수거하여 추출액을 형성하는 추출단계와, 추출액과 유지를 혼합 및 교반하고 정치하여 층분리한 한 후 에탄올 층을 재차 수거하여 정제액을 형성하는 정제단계와, 정제액을 농축하여 콜린알포세레이트 조성물 형성하는 농축단계로 이루어짐을 특징으로 하는 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법 및 그 조성물이다.In addition, the extraction step includes a mixing step of mixing the reaction solution and ethanol to form a mixed solution, an extraction step of collecting the ethanol layer after separating the layers by standing still, an extraction step of forming an extract solution, and mixing and stirring the extract solution and the oil and fat Choline alfoscerate composition using fat, characterized in that it consists of a purification step of forming a purified solution by collecting the ethanol layer again after standing to separate the layers, and a concentration step of concentrating the purified solution to form a choline alfoscerate composition manufacturing method and composition thereof.
본 발명을 통하여, 식약용 콜린알포세레이트 조성물의 제조에 있어서 안전성 및 생산성을 획기적으로 향상시킬 수 있다.Through the present invention, it is possible to dramatically improve safety and productivity in the preparation of a choline alfoscerate composition for food and drug use.
특히, 공정 전반에 있어서 대규모 설비 또는 고도의 안전 시설을 요구하지 않는 바, 제조 시설 구축 비용 및 운용 비용을 절감할 수 있을 뿐 아니라, 유해 부산물 및 오염물의 제조 과정에서의 생성을 방지할 수 있다.In particular, since it does not require a large-scale facility or a high safety facility in the overall process, it is possible to reduce the cost of constructing and operating a manufacturing facility, as well as preventing the generation of harmful by-products and pollutants during the manufacturing process.
본 발명의 상세한 구성 및 수행 과정을 설명하면 다음과 같다.A detailed configuration and execution process of the present invention will be described as follows.
본 발명은 인지질의 가수분해 효소인 포스포리파제(phospholipase) 및 리파제(lipase)가 물과 유지(油脂)의 계면에서 반응하는 특성을 보유한다는 사실에서 착안한 것으로, 효소 반응의 기질인 인지질이 효소 반응에 적합하고 적절한 수준의 계면을 형성할 수 있도록 처리함으로써, 유기용매 없이도, 왕성하고 안정적인 효소 반응이 가능한 것이다.The present invention is based on the fact that phospholipase and lipase, which are enzymes that hydrolyze phospholipids, have the property of reacting at the interface between water and oil. By treating to form an interface suitable for the reaction and at an appropriate level, a robust and stable enzymatic reaction is possible without an organic solvent.
즉, 본 발명에서는 효소 반응액에 적절한 양의 식용유지를 투입하여 인지질의 효소 반응에 필요한 물 및 유지간 계면을 조성함으로써, 효소에 의한 인지질의 가수분해를 일층 촉진할 수 있도록 한 것이다.That is, in the present invention, an appropriate amount of edible oil and fat is added to the enzyme reaction solution to form an interface between water and oil required for the enzymatic reaction of phospholipids, so that hydrolysis of phospholipids by the enzyme can be further promoted.
이러한 본 발명은 기본적으로 인지질을 효소를 적용하여 가수분해하되, 반응 과정에 있어서 식용 가능한 유지를 첨가하는 것으로, 여기서 기질인 인지질로는 고순도 인지질로서의 포스파티딜콜린은 물론, 대두 레시틴, 난황 레시틴, 해바라기 레시틴, 옥수수 레시틴 및 쌀 레시틴 등이 적용될 수 있으며, 식용 유지 역시 대두유, 해바라기씨유, 옥수수유, 카놀라유, 면실유 및 포도씨유 등 일상적으로 섭취되는 다양한 식용유가 적용될 수 있다.The present invention basically hydrolyzes phospholipids by applying an enzyme, but adds edible oils and fats in the reaction process. Corn lecithin and rice lecithin may be applied, and edible oils and fats may also be applied to various edible oils such as soybean oil, sunflower oil, corn oil, canola oil, cottonseed oil and grapeseed oil.
또한, 적용 효소로는 인지질을 가수분해하는 포스포리파제 A1, 포스포리파제 A2, 포스포리파제 B 또는 리파제가 단독 또는 혼합되어 적용될 수 있다.In addition, as the applied enzyme, phospholipase A1, phospholipase A2, phospholipase B or lipase that hydrolyzes phospholipids may be applied alone or in combination.
이렇듯, 본 발명은 인지질의 가수분해가 수행되는 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법으로서, 기질인 인지질과 효소, 물 및 유지가 혼합되어 인지질의 가수분해가 수행됨으로써 반응액이 형성되는 반응단계로 개시된다.As such, the present invention is a method for producing a choline alfoscerate composition in which hydrolysis of phospholipids is performed, and a reaction step in which a reaction solution is formed by mixing phospholipids as substrates, enzymes, water and oils and fats to perform hydrolysis of phospholipids. do.
반응단계는 인지질, 효소, 물 및 유지가 혼합되어 효소에 의한 인지질의 가수분해가 수행되는 단계로서, 전체 요소가 일시에 혼합된 후 반응될 수도 있고, 일단 인지질, 효소 및 물이 우선 혼합된 후, 유지가 첨가되어 반응되는 방식이 적용될 수도 있다.The reaction step is a step in which phospholipids, enzymes, water and oil are mixed to perform enzymatic hydrolysis of phospholipids, and may be reacted after all elements are mixed at once, once phospholipids, enzymes and water are first mixed , a method in which fats and oils are added and reacted may be applied.
또한, 온도 조절 및 교반이 가능한 용기에 상기 요소가 투입되어 반응이 진행될 수 있다.In addition, the urea may be added to a container capable of temperature control and agitation to proceed with the reaction.
반응단계가 완료되어 가수분해된 소화액인 반응액이 형성되면, 반응액을 정제 및 농축하여 콜린알포세레이트 조성물을 형성하는 취출단계가 수행됨으로써 본 발명의 조성물이 완성된다.When the reaction step is completed and a reaction solution, which is a hydrolyzed digestion solution, is formed, an extraction step of purifying and concentrating the reaction solution to form a choline alfoscerate composition is performed, thereby completing the composition of the present invention.
취출단계는 반응액으로부터 콜린알포세레이트 조성물 즉, 고순도 콜린알포세레이트 함유물을 취출하는 과정으로서, 콜린알포세레이트를 추출하는 용매로서 에탄올이 적용될 수 있으며, 층분리 등의 처리가 수행될 수 있다.The extraction step is a process of extracting a choline alfoscerate composition, that is, a high-purity choline alfoscerate-containing material from the reaction solution. Ethanol may be applied as a solvent for extracting choline alfoscerate, and a treatment such as layer separation may be performed. have.
즉, 취출단계는 반응액과 에탄올을 혼합하여 혼합액을 형성하는 혼합단계와, 혼합액을 정치하여 층분리한 후 에탄올 층을 수거하여 추출액을 형성하는 추출단계와, 추출액과 유지를 혼합 및 교반하고 정치하여 층분리한 한 후 에탄올 층을 재차 수거하여 정제액을 형성하는 정제단계와, 정제액을 농축하여 콜린알포세레이트 조성물 형성하는 농축단계를 거쳐 수행될 수 있으며, 이로써 정제된 고순도의 콜린알포세레이트 조성물을 획득할 수 있다.That is, the extraction step includes a mixing step of mixing the reaction solution and ethanol to form a mixed solution, an extraction step of collecting the ethanol layer after separating the layers by standing still, an extraction step of forming an extract solution, and mixing and stirring the extract and the oil and fat, and allowing the mixture to stand still After layer separation, the ethanol layer is collected again to form a purified solution, and the purified solution is concentrated to form a choline alfoscerate composition. A late composition can be obtained.
이하, 본 발명 제조 방법의 상세한 구성 및 수행 과정을 다양한 비교예 및 실시예를 통하여 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, the detailed configuration and execution process of the manufacturing method of the present invention will be described through various comparative examples and examples.
비교예 1. 고순도 인지질의 효소 반응 효율 확인Comparative Example 1. Confirmation of enzymatic reaction efficiency of high-purity phospholipids
순도 90%의 포스파티딜콜린 10g과, 물 50㎖와, 500㎕의 포스포리파제 A1을 온도 조절이 가능한 효소 반응기에 투입하여 교반하면서 45℃에서 12시간 반응하여 반응액을 형성하였다.10 g of phosphatidylcholine having a purity of 90%, 50 ml of water, and 500 μl of phospholipase A1 were put into an enzyme reactor capable of temperature control, and reacted at 45° C. for 12 hours while stirring to form a reaction solution.
반응액 0.5㎖를 취하여 클로로포름과 메탄올이 부피비 2 대 1로 혼합된 혼합용액으로 인지질을 추출한 후 건조하여 수득된 수득물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석하였다.After taking 0.5 ml of the reaction solution, phospholipids were extracted with a mixed solution in which chloroform and methanol were mixed in a volume ratio of 2 to 1, and the obtained product was dried and analyzed by high performance liquid chromatography.
분석 결과 수득물내 인지질 조성은 포스파티딜콜린 65%, 리소포스파티딜콜린(lyso-phosphatidyl choline) 20%, 지방산 및 기타로 확인되었다.As a result of the analysis, it was confirmed that the composition of phospholipids in the obtained product was 65% phosphatidylcholine, 20% lyso-phosphatidyl choline, fatty acid and others.
즉, 12시간의 반응 시간에도 불구하고 인지질 반응 효율은 30% 수준에 불과하였다.That is, despite the reaction time of 12 hours, the phospholipid reaction efficiency was only 30%.
비교예 2. 탈지 대두레시틴의 효소 반응 효율 확인Comparative Example 2. Confirmation of enzymatic reaction efficiency of defatted soybean lecithin
포스파티딜콜린 함량 22%의 탈지 대두레시틴 10g과, 물 50㎖와, 500㎕의 포스포리파제 A1을 온도 조절이 가능한 효소 반응기에 투입하여 교반하면서 45℃에서 12시간 반응하여 반응액을 형성하였다.10 g of defatted soybean lecithin having a phosphatidylcholine content of 22%, 50 ml of water, and 500 μl of phospholipase A1 were put into an enzyme reactor capable of temperature control, and reacted at 45° C. for 12 hours while stirring to form a reaction solution.
반응액 0.5㎖를 취하여 클로로포름과 메탄올이 부피비 2 대 1로 혼합된 혼합용액으로 인지질을 추출한 후 건조하여 수득된 수득물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석하였다.After taking 0.5 ml of the reaction solution, phospholipids were extracted with a mixed solution in which chloroform and methanol were mixed in a volume ratio of 2 to 1, and the obtained product was dried and analyzed by high performance liquid chromatography.
분석 결과 수득물내 인지질 조성은 포스파티딜콜린 9%, 리소포스파티딜콜린 3%, 지방산 및 기타로 확인되었다.As a result of the analysis, it was confirmed that the composition of phospholipids in the obtained product was 9% phosphatidylcholine, 3% lysophosphatidylcholine, fatty acid and others.
즉, 12시간의 반응 시간에도 불구하고 여전히 인지질 중 상당 부분이 반응되지 않고 잔존하였음을 확인할 수 있다.That is, it can be confirmed that, despite the reaction time of 12 hours, a significant portion of the phospholipids remained unreacted.
고순도 인지질의 유지 적용 효소 반응 효율 확인Confirmation of enzyme reaction efficiency for maintenance of high-purity phospholipids
순도 90%의 포스파티딜콜린 10g과, 물 50㎖와, 대두유 30g과, 500㎕의 포스포리파제 A1을 온도 조절이 가능한 효소 반응기에 투입하여 교반하면서 45℃에서 12시간 반응하여 반응액을 형성하였다.10 g of 90% pure phosphatidylcholine, 50 ml of water, 30 g of soybean oil, and 500 μl of phospholipase A1 were put into an enzyme reactor capable of temperature control, and reacted at 45° C. for 12 hours while stirring to form a reaction solution.
반응액 0.5㎖를 취하여 클로로포름과 메탄올이 부피비 2 대 1로 혼합된 혼합용액으로 인지질을 추출한 후 건조하여 수득된 수득물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석하였다.After taking 0.5 ml of the reaction solution, phospholipids were extracted with a mixed solution in which chloroform and methanol were mixed in a volume ratio of 2 to 1, and the obtained product was dried and analyzed by high performance liquid chromatography.
분석 결과 수득물내 인지질 조성은 포스파티딜콜린 0.2%, 리소포스파티딜콜린 0.5%, 지방산 및 기타로 확인되었다.As a result of the analysis, it was confirmed that the composition of phospholipids in the obtained product was 0.2% phosphatidylcholine, 0.5% lysophosphatidylcholine, fatty acid and others.
즉, 대두유를 첨가함으로써 대부분의 인지질이 가수분해되었음을 확인할 수 있었다.That is, it was confirmed that most of the phospholipids were hydrolyzed by adding soybean oil.
탈지 대두레시틴의 유지 적용 효소 반응 효율 확인Confirmation of Enzyme Reaction Efficiency of Fatty Soybean Lecithin
포스파티딜콜린 함량 22%의 탈지 대두레시틴 10g과, 물 50㎖와, 대두유 30g과, 500㎕의 포스포리파제 A1을 온도 조절이 가능한 효소 반응기에 투입하여 교반하면서 45℃에서 12시간 반응하여 반응액을 형성하였다.10 g of defatted soybean lecithin having a phosphatidylcholine content of 22%, 50 ml of water, 30 g of soybean oil, and 500 μl of phospholipase A1 were put into an enzyme reactor capable of temperature control, and reacted at 45° C. for 12 hours while stirring to form a reaction solution did.
반응액 0.5㎖를 취하여 클로로포름과 메탄올이 부피비 2 대 1로 혼합된 혼합용액으로 인지질을 추출한 후 건조하여 수득된 수득물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석하였다.After taking 0.5 ml of the reaction solution, phospholipids were extracted with a mixed solution in which chloroform and methanol were mixed in a volume ratio of 2 to 1, and the obtained product was dried and analyzed by high performance liquid chromatography.
분석 결과 수득물내 인지질 조성은 포스파티딜콜린 0.1%, 리소포스파티딜콜린 0.1%, 지방산 및 기타로 확인되었다.As a result of the analysis, it was confirmed that the composition of phospholipids in the obtained product was 0.1% phosphatidylcholine, 0.1% lysophosphatidylcholine, fatty acid and others.
즉, 대두레시틴에 있어서도 대두유를 첨가함으로써 대부분의 인지질이 가수분해되었음을 확인할 수 있었다.That is, it was confirmed that most of the phospholipids were hydrolyzed by the addition of soybean oil even in soybean lecithin.
고순도 난황 인지질의 유지 적용 효소 반응 효율 확인Confirmation of enzyme reaction efficiency for maintenance of high-purity egg yolk phospholipids
주식회사 두산 제조 정제 난황 인지질(DS PL95E) 25g을 100㎖의 에탄올에 용해하여 난황액을 형성하였다.25 g of purified egg yolk phospholipid (DS PL95E) manufactured by Doosan Corporation was dissolved in 100 ml of ethanol to form an egg yolk solution.
500g의 활성 알루미나와 1,200㎖의 에탄올을 혼합하여 유리컬럼에 장착한 후, 상기 난황액을 통과시키고 4,000㎖의 에탄올을 추가 용출하여 용출액을 형성하였다.After 500 g of activated alumina and 1,200 ml of ethanol were mixed and mounted on a glass column, the egg yolk solution was passed through, and 4,000 ml of ethanol was further eluted to form an eluate.
용출액을 감압 농축하여 고순도 난황 인지질 12g이 수득되었다.The eluate was concentrated under reduced pressure to obtain 12 g of high-purity egg yolk phospholipids.
고순도 난황 인지질 12g과, 물 50㎖와, 해바라기씨유 30g과, 500㎕의 포스포리파제 A1을 온도 조절이 가능한 효소 반응기에 투입하여 교반하면서 45℃에서 12시간 반응하여 반응액을 형성하였다.12 g of high-purity egg yolk phospholipids, 50 ml of water, 30 g of sunflower seed oil, and 500 μl of phospholipase A1 were put into an enzyme reactor capable of temperature control, and reacted at 45° C. for 12 hours while stirring to form a reaction solution.
반응액 0.5㎖를 취하여 클로로포름과 메탄올이 부피비 2 대 1로 혼합된 혼합용액으로 인지질을 추출한 후 건조하여 수득된 수득물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석하였다.After taking 0.5 ml of the reaction solution, phospholipids were extracted with a mixed solution in which chloroform and methanol were mixed in a volume ratio of 2 to 1, and the obtained product was dried and analyzed by high performance liquid chromatography.
분석 결과 수득물내 인지질 조성은 포스파티딜콜린 0.1%, 리소포스파티딜콜린 0.3%, 지방산 및 기타로 확인되었다.As a result of the analysis, it was confirmed that the phospholipid composition in the obtained product was 0.1% phosphatidylcholine, 0.3% lysophosphatidylcholine, fatty acid and others.
즉, 식용유지를 첨가함으로써 난황 인지질에 있어서도 대부분의 인지질이 가수분해되었음을 확인할 수 있었다.That is, it was confirmed that most of the phospholipids were hydrolyzed even in egg yolk phospholipids by adding edible oils and fats.
고순도 인지질로 부터의 콜린알포세레이트 조성물 제조Preparation of choline alfoscerate composition from high-purity phospholipids
실시예 1의 반응액에 에탄올 100㎖를 첨가하여 20분간 250RPM으로 교반하여여 혼합액을 형성하였다.100 ml of ethanol was added to the reaction solution of Example 1 and stirred at 250 RPM for 20 minutes to form a mixed solution.
혼합액을 정치하여 층분리한 후 에탄올 층을 수거하여 추출액을 형성하였다.After allowing the mixture to stand still to separate the layers, the ethanol layer was collected to form an extract.
추출액에 대두유 30㎖를 투입하여 교반한 후 정치하고 에탄올 층을 재차 수거함으로써 정제액을 형성하였다.30 ml of soybean oil was added to the extract, stirred, and then left to stand, and the ethanol layer was collected again to form a purified solution.
정제액을 건조하여 콜린알포세레이트 조성물 1.2g을 수득하였으며, 수득된 콜린알포세레이트 조성물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석한 결과 콜린알포세레이트 함량이 95%인 것으로 확인되었다.The purified solution was dried to obtain 1.2 g of a choline alfoscerate composition, and as a result of analyzing the obtained choline alfoscerate composition by high performance liquid chromatography, it was confirmed that the choline alfoscerate content was 95%.
탈지 대두레시틴으로 부터의 콜린알포세레이트 조성물 제조Preparation of choline alfoscerate composition from defatted soybean lecithin
실시예 2의 반응액에 에탄올 100㎖를 첨가하여 20분간 250RPM으로 교반하여여 혼합액을 형성하였다.100 ml of ethanol was added to the reaction solution of Example 2 and stirred at 250 RPM for 20 minutes to form a mixed solution.
혼합액을 정치하여 층분리한 후 에탄올 층을 수거하여 추출액을 형성하였다.After allowing the mixture to stand still to separate the layers, the ethanol layer was collected to form an extract.
추출액에 대두유 50㎖를 투입하여 교반한 후 정치하고 에탄올 층을 재차 수거하되, 에탄올 층 수거액에 재차 대두유 50㎖를 투입하여 교반한 후 정치하고 에탄올 층을 재차 수거함으로써 정제액을 형성하였다.50 ml of soybean oil was added to the extract, stirred, left still, and the ethanol layer was collected again, but 50 ml of soybean oil was added to the collected ethanol layer again, stirred, left still, and the ethanol layer was collected again to form a purified solution.
정제액에 0.5g의 활성탄을 투입하고, 교반하여 불순물을 흡착시킨 후 여과 및 건조하여 콜린알포세레이트 조성물 0.9g을 수득하였으며, 수득된 콜린알포세레이트 조성물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석한 결과 콜린알포세레이트 함량이 95%인 것으로 확인되었다.0.5 g of activated carbon was added to the purified solution, stirred to adsorb impurities, filtered and dried to obtain 0.9 g of a choline alfoscerate composition. As a result of analyzing the obtained choline alfoscerate composition by high performance liquid chromatography, choline It was confirmed that the alfoscerate content was 95%.
고순도 난황 인지질로 부터의 콜린알포세레이트 조성물 제조Preparation of choline alfoscerate composition from high-purity egg yolk phospholipids
실시예 3의 반응액에 에탄올 100㎖를 첨가하여 30분간 200RPM으로 교반하여여 혼합액을 형성하였다.100 ml of ethanol was added to the reaction solution of Example 3 and stirred at 200 RPM for 30 minutes to form a mixed solution.
혼합액을 정치하여 층분리한 후 에탄올 층을 수거하여 추출액을 형성하였다.After allowing the mixture to stand still to separate the layers, the ethanol layer was collected to form an extract.
추출액에 해바라기씨유 30㎖를 투입하여 교반한 후 정치하고 에탄올 층을 재차 수거함으로써 정제액을 형성하였다.30 ml of sunflower seed oil was added to the extract, stirred, and left to stand, and the ethanol layer was collected again to form a purified solution.
정제액에 0.5g의 활성탄을 투입하고, 교반하여 불순물을 흡착시킨 후 여과 및 건조하여 콜린알포세레이트 조성물 1.8g을 수득하였으며, 수득된 콜린알포세레이트 조성물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석한 결과 콜린알포세레이트 함량이 94%인 것으로 확인되었다.0.5 g of activated carbon was added to the purified liquid, stirred to adsorb impurities, filtered and dried to obtain 1.8 g of a choline alfoscerate composition. As a result of analyzing the obtained choline alfoscerate composition by high performance liquid chromatography, choline It was confirmed that the alfoscerate content was 94%.
전술한 비교예 및 실시예를 통하여도 확인할 수 있는 바와 같이, 대두유 또는 해바라기씨유 등의 식용유지를 첨가함으로써 인지질의 효소 가수분해 및 이를 통한 콜린알포세레이트 제조상 효율성을 극대화할 수 있다.As can be seen from the aforementioned comparative examples and examples, by adding edible oils such as soybean oil or sunflower seed oil, enzymatic hydrolysis of phospholipids and the efficiency of choline alfoscerate production through this can be maximized.
특히, 공정상 일체의 유기용매를 배제할 수 있어, 완성품의 안전성을 확보할 수 있으며, 유해 부산물 및 오염물의 배출을 최소화할 수 있음은 물론, 유기용매의 적용 및 회수에 필요한 복잡한 설비를 간소화할 수 있어, 제조비용을 절감할 수 있다.In particular, it is possible to exclude all organic solvents in the process, so it is possible to secure the safety of the finished product, to minimize the emission of harmful by-products and pollutants, as well as to simplify the complex facilities necessary for the application and recovery of organic solvents. Therefore, it is possible to reduce the manufacturing cost.
Claims (4)
기질인 인지질과 효소, 물 및 유지가 혼합되어 인지질의 가수분해가 수행됨으로써 반응액이 형성되되, 상기 기질인 인지질은 포스파티딜콜린, 탈지 대두레시틴 또는 난황 인지질이고, 상기 유지는 일상적으로 섭취되는 식용유인 반응단계와;
반응단계에서 형성된 반응액을 정제 및 농축하여 콜린알포세레이트 조성물을 형성하는 취출단계로 이루어짐을 특징으로 하는 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법.
In the method for preparing a choline alfoscerate composition in which hydrolysis of phospholipids is performed,
A reaction solution is formed by mixing phospholipids as substrates, enzymes, water and oils and fats to perform hydrolysis of phospholipids, wherein the substrate phospholipids are phosphatidylcholine, defatted soybean lecithin or egg yolk phospholipids, and the oils and fats are edible oil that is consumed routinely. step;
A method for producing a choline alfoscerate composition using oil, characterized in that it consists of an extraction step of purifying and concentrating the reaction solution formed in the reaction step to form a choline alfoscerate composition.
상기 효소는 포스포리파제 A1, 포스포리파제 A2, 포스포리파제 B 및 리파제로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함함을 특징으로 하는 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법.
The method according to claim 1,
The method for producing a choline alfoscerate composition using fat, characterized in that the enzyme comprises at least one selected from the group consisting of phospholipase A1, phospholipase A2, phospholipase B and lipase.
취출단계는 반응액과 에탄올을 혼합하여 혼합액을 형성하는 혼합단계와;
혼합액을 정치하여 층분리한 후 에탄올 층을 수거하여 추출액을 형성하는 추출단계와;
추출액과 유지를 혼합 및 교반하고 정치하여 층분리한 한 후 에탄올 층을 재차 수거하여 정제액을 형성하는 정제단계와;
정제액을 농축하여 콜린알포세레이트 조성물 형성하는 농축단계로 이루어짐을 특징으로 하는 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법.
The method according to claim 1,
The extracting step includes a mixing step of mixing the reaction solution and ethanol to form a mixed solution;
An extraction step of forming an extract by allowing the mixture to stand still to separate the layers, and then collecting the ethanol layer;
A purification step of mixing and stirring the extract and the oil and fat to separate the layers, and then collecting the ethanol layer again to form a purified solution;
A method for producing a choline alfoscerate composition using oil, characterized in that it comprises a concentration step of concentrating the purified liquid to form a choline alfoscerate composition.
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Biotechnology & Biotechnological Equipment, Vol. 32, pp. 968-973 (2018.)* |
| Biotechnology Progress, Vol. 36, pp. e1910 (1-9) (2019.10.10.) |
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