KR102421900B1 - 가거양지꽃 메탄올 추출물 등을 이용한 항염증용 조성물 - Google Patents

가거양지꽃 메탄올 추출물 등을 이용한 항염증용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은, LPS(lipopolysaccharide)로 자극된 마우스 대식세포주(RAW 264.7 cells)에서 농도 의존적으로 NO 생성을 억제하고 iNOS와 COX-2의 발현을 억제하며 또 NF-κB의 핵내로의 이동을 억제하는 활성을 가지는, 연지골무꽃 추출물과 가거양지꽃 추출물을 이용한 항염증 조성물을 개시한다.

Description

연지골무꽃 추출물 등을 이용한 항염증용 조성물{Composition for Anti-inflammation Using an Extract of Scutellaria indica var. coccinea}
본 발명은 연지골무꽃(Scutellaria indica var. coccinea) 추출물 등을 이용한 항염증용 조성물에 관한 것이다.
염증은 물리적인 외상, 유해한 화학물질, 박테리아, 곰팡이, 바이러스에 의한 감염이나 생체 내 대사산물 중의 자극성 물질에 의하여 야기되는 병리적 상태에 대응하여 나타나는 국소적인 생체의 방어 반응이다. 염증은 손상된 조직과 이동하는 세포(migrating cells)로부터 생산되는 다양한 염증 매개 인자에 의하여 촉발된다. 염증 반응 시에는 염증 부위에 혈장이 축적되어 세균이 분비한 독성을 희석시키며, 혈류가 증가하고, 홍반, 통증, 부종, 발열 등의 증상이 수반되게 된다. 정상적인 경우에 생체는 염증 반응을 통하여 발병 요인을 중화시키거나 제거하고 상한 조직을 재생시켜서 정상적인 구조와 기능을 회복시키지만, 그렇지 못한 경우에는 만성 염증과 같은 질병 상태로 진행되기도 한다.
최근 분자생물학의 발달로 분자적 수준에서 염증 반응에 대한 많은 연구가 이루어져 있다.
염증반응이 일어나면 대식세포와 단핵구 등 면역세포들은 nitric oxide(NO), prostagladin E2(PGE2), tumor necrosis factor-α(TNF-α), interleukin-1β(IL-1β), IL-6, IL-8, IL-12 등의 염증 매개물질을 분비한다(Guha M and Mackman N. Cell Signal. 13: 85-94 (2001)). 염증반응의 대표적인 예로, pathogen associated molecular patterns (PAMPs)에 의한 대식세포의 toll like receptor(TLR) 신호전달체계 활성화를 들 수 있다. 그람 음성 세균의 외막(outer membrane)에 존재하는 엔도톡신(endotoxin)의 일종인 lipopolysaccharide (LPS)는, 외부 미생물에 존재하는 염증성 매개물질인 PAMPs에 속한다. 세균이 인체 내로 침투하는 경우, 대식세포 표면에서 TLR4는 MD-2 또는 CD14 등의 도움을 받아 LPS를 인식하며(Miyake K. Trends Microbiol. 12: 186-192 (2004)), 하위 신호전달체계의 활성화를 유도하며 궁극적으로 전사인자인 nuclear factor-κB(NF-κB)를 활성화한다(Youn HS. Korean. J. Food Sci. Technol. 39:481-487 (2007); Youn HS. Korean. J. Food Sci. Technol. 41: 477-482 (2009)). 핵으로 이동한 NF-κB는 염증성 cytokine(TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-12 등), inducible nitiric oxide synthase(iNOS), cyclooxygenase-2(COX-2)의 유전자 발현을 유도하며, iNOS에 의하여 발생된 산화질소(nitric oxide; NO)는 염증발생을 심화시킨다(Noh KH et al., J. Korean Soc. Food Sci. Nutr. 40: 625-634 (2011); Weisz A et al., Biochem. J. 316: 209-215 (1996)). 대식세포에서 iNOS에 의해 과다 생성된 산화질소는 수퍼옥사이드(superoxide)와 반응하여 퍼옥시니트라이트(peroxynitrite)를 형성하고 이는 강력한 산화제로 작용하여 세포에 손상을 입힘으로써 염증과 암을 포함한 다양한 병리적 과정에 관여하는 것으로 알려져 있으며, 염증 반응시 신속하게 발현이 유도되는 COX-2는 PGE2 등을 생성함으로써 염증 반응을 일으키는 데 중요한 역할을 수행한다고 알려져 있다(Gupta SC et al., Exp Biol Med., 236:658-671, (2011); Riehemann et al., FEBS Lett., 442:89-94(1999)).
현재 항염증제로서 널리 사용되고 있는 비스테로이드성 소염제(non-steroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDS)는 위장관 장애, 간장애, 신장애 등의 심각한 부작용을 야기한다고 알려져 있다(Rainsford KD., Subcell biochem., 42:3-27, 2007; Guruprasad P. Aithal.,Rheumatology., 7:139-150, 2011; Praveen P. N. Rao et al.,Pharmaceuticals., 3:1530-1549, 2010). 따라서 항염 활성을 가지면서 부작용이 적은 천연의 물질로부터 효과가 지속적인 새로운 약물을 찾고자 하는 연구가 활발하게 이루어지고 있다.
한편 유전체는 염색체의 DNA에 4개 염기의 서열로 저장된 생명체의 모든 유전 정보를 일컫는 것으로, 1세대 서열 분석 방법인 Sanger 방법(Chain Termination Method)이 사용되어 2001년 완성된 인간 유전체 분석은 총 27억 달러의 비용과 13년의 시간이 소요되었으나, 2000년대 중반 도입된 2세대 서열분석 방법인 NGS(Next Generation Sequencing) 기술로 인해 현재 특정 개체의 유전체 분석은 그 비용이 1천 달러 수준(Illumina Sequencing 기술 기준), 시간은 1주 미만으로 단축되었다.
본 발명은 본 출원인이 보유한 인공지능 기반 유전체 정보 분석 시스템을 활용하여 식물 유전체 정보를 바탕으로 생리활성과 관련된 식물의 2차 대사 산물을 예측하고 실제 해당 생리활성을 실험을 통해 확인하는 과정을 거쳐 이루어졌다.
본 발명은 이러한 과정을 거쳐 연지골무꽃 추출물 등이 항염증 활성을 가짐을 개시한다.
본 발명의 목적은 연지골무꽃 추출물 등을 이용한 항염증용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.
본 발명은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 연지골무꽃 추출물과 가거양지꽃(Potentilla gageodoensis) 추출물이 LPS(lipopolysaccharide)로 자극된 마우스 대식세포주(RAW 264.7 cells)에서 농도 의존적으로 NO 생성을 억제하고 iNOS와 COX-2의 발현을 억제하며 또 NF-κB의 핵내로의 이동을 억제함을 확인함으로써 완성된 것이다. 더불어 상기 2가지 추출물은 DPPH 법에 따라 평가하였을 때 높은 항산화 활성을 보였다.
전술한 바를 고려할 때, 본 발명은 일 측면에 있어서, 연지골무꽃 추출물 또는 가거양지꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물로 파악할 수 있고, 다른 측면에 있어서는 연지골무꽃 추출물 또는 가거양지꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 조성물로 파악할 수 있다.
본 명세서에서, "연지골무꽃 추출물"이란 추출 대상인 그 연지골무꽃 잎, 가지, 지상부, 근경, 뿌리, 지하부 또는 이들의 혼합물을 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜(메탄올, 에탄올, 부탄올 등), 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출 용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방법을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 조추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 물, 탄소수 1 내지 4의 알콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물, 더 바람직하게는 추출용매로서 물과 탄소수 1 내지 4의 알콜의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.
또 본 명세서에서, "가거양거꽃 추출물"은 상기 연지골무꽃 추출물과 마찬가지로 지상부 등을 추출 대상으로 하고 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 등을 추출용매로 하여 얻어진 추출물이나 그것의 농축물 등을 의미한다.
또 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
또 본 명세서에서, "항염증"은 아래에서 정의되는 염증성 질환의 개선(증상의 경감), 치료, 그러한 질환의 발병 억제 또는 지연을 포함하는 의미이다.
또 본 명세서에서, 상기 "염증성 질환"이란 외부의 물리·화학적 자극 또는 박테리아, 곰팡이, 바이러스, 각종 알레르기 유발 물질 등 외부 감염원의 감염 또는 자가면역에 대한 국부적 또는 전신적 생체 방어 반응으로 특정되는 염증 반응이 일으키는 병리적 증상으로서 정의될 있다. 이러한 염증 반응은 각종 염증 매개 인자와 면역세포와 관련된 효소(예컨대 iNOS, COX-2 등) 활성화, 염증 매개 물질의 분비(예컨대, NO, TNF-α, IL-6 등의 분비), 체액 침윤, 세포 이동, 조직 파괴 등의 일련의 복합적인 생리적 반응을 수반하며, 홍반, 통증, 부종, 발열, 신체의 특정 기능의 저하 또는 상실 등의 증상에 의해 외적으로 나타난다. 상기 염증성 질환은 급성, 만성, 궤양성, 알레르기성 또는 괴사성을 띨 수 있으므로, 어떠한 질환이 상기와 같은 염증성 질환의 정의에 포함되는 한 그것이 급성이든지, 만성이든지, 궤양성이든지, 알레르기성이든지 또는 괴사성이든지를 불문한다. 구체적으로 상기 염증성 질환에는 천식, 알레르기성 및 비-알레르기성 비염, 만성 및 급성 비염, 만성 및 급성 위염 또는 장염, 궤양성 위염, 급성 및 만성 신장염, 급성 및 만성 간염, 만성 폐쇄성 폐질환, 폐섬유종, 과민성 대장 증후군, 염증성 통증, 편두통, 두통, 허리 통증, 섬유 근육통, 근막 질환, 바이러스 감염(예컨대, C형 감염), 박테리아 감염, 곰팡이 감염, 화상, 외과적 또는 치과적 수술에 의한 상처, 프로스타글라딘 E 과다 증후군, 아테롬성 동맥 경화증, 통풍, 관절염, 류머티스성 관절염, 강직성 척추염, 호지킨병, 췌장염, 결막염, 홍채염, 공막염, 포도막염, 피부염(아토피성 피부염 포함), 습진, 다발성 경화증, 치주염, 치은염 등이 포함될 것이다.
본 발명의 항염증용 조성물과 항산화용 조성물(이하 "본 발명의 조성물")은 그 유효성분을 구체적 용도, 제형 등에 따라 치료를 의도하는 염증성 질환의 개선 활성이나 항산화 활성을 나타낼 수 있는 한 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게 의료 전문가 등의 제언에 의한 투여 기간 동안 본 발명의 조성물이 투여될 때, 염증성 질환의 개선, 치료, 또는 그러한 병리적 증상의 발병 억제/지연, 항산화 효과 등 의도한 의료적·약리학적 효과를 나타낼 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물은 유효성분 이외에, 항염증 효과나 항산화 효과의 상승·보강을 위하여 또는 항알러지 활성, 피부 보호 활성(자외선에 의한 피부 손상 억제, 피부 보습 등) 등 유사활성의 부가를 통한 복용이나 섭취의 편리성을 증진시키기 위하여, 당업계에서 이미 안전성이 검증되고 해당 활성을 갖는 것으로 공지된 임의의 화합물이나 천연 추출물을 추가로 포함할 수 있다.
이러한 화합물 또는 추출물에는 각국 약전(한국에서는 「대한민국약전」임), 각국 건강기능식품공전(한국에서는 식약처 고시인 「건강기능식품 기준 및 규격」임) 등의 공정서에 실려 있는 화합물 또는 추출물, 의약품의 제조·판매를 규율하는 각국의 법률(한국에서는 「약사법」임)에 따라 품목 허가를 받은 화합물 또는 추출물, 건강기능식품의 제조·판매를 규율하는 각국 법률(한국에서는 「건강기능식품에관한법률」임)에 따라 개별적으로 기능성을 인정받은 화합물 또는 추출물이 포함된다. 예컨대 한국 건강기능식품공전상 '관절염 개선' 기능성을 가진 MSM(dimethylsulfonylmethane), '관절염 개선' 기능성과 '피부 보습' 기능성을 가진 N-아세틸글루코사민, 글루코사민 등과, '항산화' 기능성을 가진 녹차 추출물, 코엔자임Q10 등을 들 수 있고, 또 한국 「건강기능식품에관한법률」에 따라 '관절염 개선'으로 개별적으로 기능성을 인정받은 가시오갈피 등의 복합 추출물, 강황 추출물, 까마귀쪽나무 열매 주정 추출물, 닭가슴 연골 분말, 로즈힙 분말, 보스웰리아 추출물, 비즈왁스 알코올, 전칠삼 추출물 등의 복합물, 지방산 복합물, 차조기 등의 복합 추출물, 초록입홍합 추출 오일, 호프 추출물, 황금 추출물 등의 복합물 등을 들 수 있으며, 또 한국 「건강기능식품에관한법률」에 따라 '항산화'로 개별적으로 기능성을 인정받은 대나무잎 추출물, 메론 추출물, 복분자 추출물(분말), 비즈 왁스 알코올, 유비퀴놀, 토마토 추출물 등을 들 수 있다. 또한 한국 「건강기능식품에관한법률」에 따라 '과민 면역반응 완화'로 개별적으로 기능성을 인정받은 Enterococcus faecalis 가열 처리 건조 분말, 구아바 잎 추출물 등의 복합물, 다래 추출물, 소엽 추출물, 피카오프레토 분말 등의 복합물, PLAG(1-palmitoyl-2-linoleoyl-3-acetyl-rac-glycerol) 등과, '과민피부상태 개선'으로 개별적으로 기능성을 인정받은 L. sakei Probio 65, 감마리놀렌산 함유 유지, 과채 유래 유산균인 L.plantarum CJLP133 등이 이러한 화합물 또는 추출물에 해당할 것이다.
이러한 화합물 또는 천연 추출물은 본 발명의 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.
본 발명의 항염증용 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로서 파악할 수 있다. 본 발명의 항염증용 조성물이 식품 조성물로 파악될 경우 그 용도는 '염증 반응 완화' 또는 '염증 반응 억제'로 이해될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구르트 등의 가공 유류, 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다.
또 본 발명의 식품 조성물은 법률상·기능상의 구분에 있어서 제조·유통 시점의 시행 법규에 부합하는 한 임의의 제품 구분을 띨 수 있다. 예컨대 한국 「건강기능식품에관한법률」에 따른 건강기능식품이거나, 한국 「식품위생법」의 식품공전(식약처 고시 「식품의 기준 및 규격」)상 각 식품유형에 따른 과자류, 두류, 다류, 음료류, 특수용도식품 등일 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 식품첨가물이 포함될 수 있다. 식품첨가물은 일반적으로 식품을 제조, 가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가되어 혼합되거나 침윤되는 물질로서 이해될 수 있는데, 식품과 함께 매일 그리고 장기간 섭취되므로 그 안전성이 보장되어야 한다. 식품의 제조·유통을 규율하는 각국 법률(한국에서는 「식품위생법」임)에 따른 식품첨가물공전에는 안전성이 보장된 식품첨가물이 성분 면에서 또는 기능 면에서 한정적으로 규정되어 있다. 한국 식품첨가물공전(식약처 고시 「식품첨가물 기준 및 규격」)에서는 식품첨가물이 성분 면에서 화학적 합성품, 천연 첨가물 및 혼합 제제류로 구분되어 규정되어 있는데, 이러한 식품첨가물은 기능 면에 있어서는 감미제, 풍미제, 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등으로 구분된다.
감미제는 식품에 적당한 단맛을 부여하기 위하여 사용되는 것으로, 천연의 것이거나 합성된 것 모두 본 발명의 조성물에 사용할 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.
풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.
보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등이 사용될 수 있고, 또 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있으며, 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등이 사용될 수 있다. 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.
점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 전술한 바의 식품첨가물 이외에, 기능성과 영양성을 보충, 보강할 목적으로 당업계에 공지되고 식품첨가물로서 안정성이 보장된 생리활성 물질이나 미네랄류를 포함할 수 있다.
그러한 생리활성 물질로서는 녹차 등에 포함된 카테킨류, 비타민 B1, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 B12 등의 비타민류, 토코페롤, 디벤조일티아민 등을 들 수 있으며, 미네랄류로서는 구연산 칼슘 등의 칼슘 제제, 스테아린산마그네슘 등의 마그네슘 제제, 구연산철 등의 철 제제, 염화 크롬, 요오드칼륨, 셀레늄, 게르마늄, 바나듐, 아연 등을 들 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 전술한 바의 식품첨가물이 제품 유형에 따라 그 첨가 목적을 달성할 수 있는 적량으로 포함될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에 포함될 수 있는 기타의 식품첨가물과 관련하여서는 각국 식품공전이나 식품첨가물 공전을 참조할 수 있다.
본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 투여 경로는 국소 경로, 경구 경로, 정맥 내 경로, 근육 내 경로, 및 점막 조직을 통한 직접 흡수를 포함하는 임의의 적절한 경로일 수 있으며, 두 가지 이상의 경로를 조합하여 사용할 수도 있다. 두 가지 이상 경로의 조합의 예는 투여 경로에 따른 두 가지 이상의 제형의 약물이 조합된 경우로서 예컨대 1차로 어느 한 약물은 정맥 내 경로로 투여하고 2차로 다른 약물은 국소 경로로 투여하는 경우이다.
약학적으로 허용되는 담체는 투여 경로나 제형에 따라 당업계에 주지되어 있으며, 구체적으로는 "대한민국약전"을 포함한 각국의 약전을 참조할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유, 에탄올, 그리세롤 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라적절한 결합제, 윤활제, 붕해제, 착색제, 희석제 등을 포함시킬 수 있다. 적절한 결합제로서는 전분, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분페리스트, 젤라틴, 메틸셀룰로스, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 글루코스, 옥수수 감미제, 소듐 알지네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 등을 들 수 있고, 윤활제로서는 올레산나트륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산마그네슘, 벤조산나트륨, 초산나트륨, 염화나트륨, 실리카, 탈쿰, 스테아르산, 그것의 마그네슘염과 칼슘염, 폴리데틸렌글리콜 등을 들 수 있으며, 붕해제로서는 전분, 메틸 셀룰로스, 아가(agar), 벤토나이트, 잔탄 검, 전분, 알긴산 또는 그것의 소듐 염 등을 들 수 있다. 또 희석제로서는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 소비톨, 셀룰로스, 글라이신 등을 들 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 주사제로 제제화할 경우 적합한 담체로서는 수성 등장 용액 또는 현탁액을 사용할 수 있으며, 구체적으로는 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화할 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화할 수 있으며, 좌제로 제제화할 경우 그 담체로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등을 사용할 수 있다.
약제학적 조성물의 구체적인 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.
본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001mg/kg ~ 10g/kg 범위, 바람직하게는 0.001mg/kg ~ 1g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.
본 발명의 조성물은 또 다른 구체적인 양태에 있어서, 화장료 조성물로 파악할 수 있다. 본 발명의 항염증용 조성물이 화장품 조성물로 파악될 경우 그 용도는 염증성 피부 트러블 억제, 염증성 피부 자극 완화 등의 용도로 이해될 수 있다.
본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 파악될 경우에도 그 화장료 조성물은 그 용도상, 법률상 임의의 제품 구분을 띨 수 있으며, 구체적으로 피부 트러블 개선, 아토피 피부염 개선 등의 용도를 가진 기능성 화장품, 비기능성 일반 화장품 등일 수 있다. 제품 형태에 있어서도 임의의 제품 형태를 띨 수 있는데, 구체적으로 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 등의 제품 형태를 띨 수 있다. 구체적인 제품 형태에 있어서는 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형 등일 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 비타민, 색소 및 항료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되는데, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 항염증 활성을 나타내는 유효성분을 포함하는 것을 제외하고는 당업계에 통상적으로 행하여지는 화장료 조성물의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 연지골무꽃 추출물 등을 이용한 항염증용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명의 조성물은 염증성 질환, 염증성 피부 자극의 완화 용도 등으로 식품, 화장품, 약품 등으로 제품화될 수 있다.
도 1은 NO(Nitric oxide) 생성 억제 정도 평가 결과이다.
도 2는 웨스턴 블럿을 통한 iNOS 및 COX-2 발현 정도 평가 결과이다.
도 3은 NF-κB p65의 면역형광염색 분석 결과이다.
도 4는 DPPH 법에 따른 항산화 활성 평가 결과이다.
이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예> 연지골무꽃 추출물 등의 제조와 이들의 항염증 활성 실험 등
<실시예 1> 연지골무꽃 추출물 등의 제조
연지골무꽃(추출 부위: 지상부)의 건조 분말에 10배 중량의 100% 메탄올을 가하여 실온에서 3일간 교반 추출하였다. 추출액을 여과한 후에 여과액을 감암농축하고 동결건조하여 분말상의 연지골무꽃 추출물을 제조하였다.
가거양지꽃 추출물도 상기 동일한 추출 방법으로 제조하였다.
<실시예 2> 항염증 활성 실험
<실시예 2-1> NO(Nitric oxide) 생성 정도 평가
마우스 대식세포인 RAW264.7 cell에서 상기 추출물 시료의 항염 활성을 평가하기 위해 6 well plate에 5×105cells/well의 세포 수로 분주하고 37℃, 5% CO2의 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 여기에 시료를 농도별로 처리하여 2시간 동안 배양한 뒤, LPS(Lipopolysacharide) 1ug/ml를 처리하여 37℃, 5% CO2의 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 원심하여 배지의 상등액을 회수하고 그 상등액 100ul에 동량의 Griess 시약을 혼합하여 실온에서 5분간 방치한 후 microplate reader를 이용해 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.
결과를 시료 무처리군(LPS만의 처리군) 대비 백분율로 하여 도 1에 나타내었다.도 1을 참조하여 보면 상기 2가지 추출물 시료 모두 농도 의존적으로 NO 생성을 억제함을 알 수 있다.
<실시예 2-2> 웨스턴 블럿을 통한 iNOS 및 COX-2 발현 정도 평가
RAW 264.7 세포를 DMEM 배지로 6 well plate에 분주하고 37℃, 5% CO2의 조건의 배양기에서 24시간 배양하였다. 증식된 세포에 시료를 농도별로 첨가하고 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 2시간 배양한 후, LPS 1ug/ml를 처리하여 24시간 배양하였다. 세포는 PBS로 2회 세척하고 RIPA buffer로 lysis 후 원심분리(12,000 xg, 15분, 4℃)하여 상층액을 회수하고 Bradford protein assay로 정량하였다. 단백질을 95℃에서 5분간 끓인 다음 10% SDS-PAGE에서 분리 후 PVDF 멤브레인으로 transfer 하였다. 멤브레인을 5% BSA (in TBS-T)에서 1시간 동안 blocking 후 3% BSA로 희석한 iNOS 1차 항체, COX-2 1차 항체, GAPDH 1차 항체와 함께 24시간 냉장 보관하였다. 멤브레인을 TBS-T로 3번 세척 후 2차 항체와 1시간 동안 실온에 방치하였다. 이후 ECL Western blotting substrate와 반응시킨 후 ChemiDoc(Bio-Rad)하에서 결과를 확인하였다.
결과를 도 2에 나타내었다. 도 2는 상기 2가지 추출물 시료 모두 농도 의존적으로 iNOS 및 COX-2 발현을 억제함을 보여준다.
<실시예 2-3> NF-κB p65의 면역형광염색 분석
RAW 264.7 세포를 DMEM 배지로 커버 슬립에 24시간 부착하였다. 세포에 시료(연지골무꽃 추출물)를 처리 또는 미처리하고 1시간 동안 배양 후 LPS 1ug/ml를 처리하여 30분간 배양하였다. 상층액은 모두 제거하고 세포 고정을 위해 4% 파라포름알데하이드를 15분간 처리하여 실온에 방치 후 3% BSA(Bovine Serum Albumin)와 0.1% TritonX-100을 처리하고 1시간 동안 반응시켰다. 상층액을 모두 제거하고 p65의 1차 항체를 처리하여 4℃에서 24시간 배양하였다. 이후 형광물질(Alexa Fluor 488)로 표지된 2차 항체를 처리하여 암실에서 1시간 반응시켰다. 핵의 경우 4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)를 사용하였다. 슬라이드는 마운팅 후 형광현미경하에서 관찰을 시도하였다.
결과를 도 3에 나타내었다. 도 3은 녹색 형광에 의해 NF-κB p65를 시각화하고 세포핵을 DAPI로 염색하여 형광으로 결과로, 시료(연지골무꽃 추출물) 처리에 의하여 LPS로 자극된 NF-κB p65의 핵내로의 이동이 감소하는 것을 보여준다.
<실험예 3> 항산화 활성 실험 - DPPH 법
항산화 활성은 DPPH 법으로 측정하였다. 300uM의 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH) 용액은 에탄올을 이용하여 제조하였다. 40ul의 추출물(200ug/ml)과 760 ul의 DPPH 용액 섞어 주고 20분간 실온에서 방치하였다. 분광광도계를 이용하여 515 nm에서 흡광도를 측정하고 아래의 식에 따라 항산화 활성을 백분율로 확인하였다. 비타민 C(Vit.C)는 양성 대조군으로 사용하였다.
DPPH 라디칼 소거 활성(%) = [1-(ASample - ABlank)/AControl] × 100(%)
ASample = Absorbance values of DPPH radicals after treatment with sample
ABlank = Absorbance values of DPPH radicals with ethanol
AControl = Absorbance values of DPPH radicals
결과를 도 4에 나타내었다. 도 4의 결과는 상기 2가지 추출물 시료 모두 높은 항산화 활성을 가짐을 보여준다.

Claims (7)

  1. 가거양지꽃 지상부의 메탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.



  7. 삭제
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KR20140125137A (ko) * 2013-04-18 2014-10-28 대한민국(농촌진흥청장) 양지꽃속 식물 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항염증 활성을 갖는 조성물
KR101837444B1 (ko) * 2016-10-25 2018-03-13 한국 한의학 연구원 양지꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물

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