KR102381854B1 - T 세포 수용체 및 이를 사용하는 면역 요법 - Google Patents

T 세포 수용체 및 이를 사용하는 면역 요법 Download PDF

Info

Publication number
KR102381854B1
KR102381854B1 KR1020197006315A KR20197006315A KR102381854B1 KR 102381854 B1 KR102381854 B1 KR 102381854B1 KR 1020197006315 A KR1020197006315 A KR 1020197006315A KR 20197006315 A KR20197006315 A KR 20197006315A KR 102381854 B1 KR102381854 B1 KR 102381854B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ser
leu
val
tcr
ala
Prior art date
Application number
KR1020197006315A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20190039182A (ko
Inventor
레오니 알텐
도미니크 마우러
스테펜 월터
세바스티안 붕크
Original Assignee
이매틱스 바이오테크놀로지스 게엠베하
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE102016115246.3A external-priority patent/DE102016115246C5/de
Application filed by 이매틱스 바이오테크놀로지스 게엠베하 filed Critical 이매틱스 바이오테크놀로지스 게엠베하
Priority to KR1020227010365A priority Critical patent/KR20220044870A/ko
Publication of KR20190039182A publication Critical patent/KR20190039182A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102381854B1 publication Critical patent/KR102381854B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4632—T-cell receptors [TCR]; antibody T-cell receptor constructs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464484—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/464488—NY-ESO
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)

Abstract

본 발명은 COL6A3 항원에 대한 항원 인식 구조체에 관한 것이다. 본 발명은 특히 종양 발현된 항원 COL6A3에 대해 선택적이고 특이적인 신규 T 세포 수용체(TCR) 기반의 분자를 제공한다. 본 발명의 TCR 및 그로부터 유래하는 COL6A3 항원 결합 단편은 암 질환을 발현하는 COL6A3의 진단, 치료 및 예방에 유용하다. 본 발명의 항원 인식 구조체를 인코딩하는 핵산, 이 핵산으로 구성되는 벡터, 항원 인식 구조체를 발현하는 재조합 세포 및 본 발명의 화합물로 구성되는 약학적 조성물이 추가로 제공된다.

Description

T 세포 수용체 및 이를 사용하는 면역 요법
본 발명은 COL6A3 항원에 대한 항원 인식 구조체에 관한 것이다. 본 발명은 특히 종양 발현된 항원 COL6A3에 대해 선택적이고 특이적인 신규 T 세포 수용체(TCR) 기반의 분자를 제공한다. 본 발명의 TCR 및 그로부터 유래하는 COL6A3 항원 결합 단편은 암 질환을 발현하는 COL6A3의 진단, 치료 및 예방에 유용하다. 본 발명의 항원 인식 구조체를 인코딩하는 핵산, 이 핵산으로 구성되는 벡터, 항원 인식 구조체를 발현하는 재조합 세포 및 본 발명의 화합물로 구성되는 약학적 조성물이 추가로 제공된다.
콜라겐은 다양한 조직의 완결성 유지에서 역할을 하는 단백질의 상위계열(superfamily)이다. 콜라겐은 세포외 기질 단백질이며 이들의 공통 구성 요소로서 삼중 나선 도메인을 갖는다. 콜라겐 VI은 미세원섬유의 주요 구조적 구성 요소이다. 콜라겐 VI의 기본 구조 단위는 α l(VI), α 2(VI) 및 α 3(VI) 콜라겐 사슬의 이종삼합체이다. α l(VI) 및 α 2(VI) 사슬은 각각 COL6A1 및 COL6A2 유전자에 의해 인코딩된다. COL6A3 유전자에 의해 인코딩되는 단백질은 VI형 콜라겐의 α 3 아단위이다(α 3(VI) 콜라겐 사슬)(Bertini et al., 2002 Eur. J. Paediatr. Neurol 6:193-8). COL6A3의 유전자 발현은 이전에 유방암의 진행과 연관 있는 것으로 나타났으며 결장암에서 상승했고(Smith MJ, et al. "Analysis of differential gene expression in colorectal cancer and stroma using fluorescence-activated cell sorting purification" British journal of cancer. 2009;100:1452-1464; Tilman G et al "Human periostin gene expression in normal tissues, tumors and melanoma: evidences for periostin production by both stromal and melanoma cells" Mol Cancer. 2007;6:80) 또한 결장직장 암종의 예후 표지자로서 나타났다(Qiao J et al. "Stroma derived COL6A3 is a potential prognosis marker of colorectal carcinoma revealed by quantitative proteomics" Oncotarget. 2015 Oct 6; 6(30): 29929-29946). COL6A3 유전자는 인간 게놈에서 2q37의 위치를 찾아내며 44개의 엑손을 포함한다. COL6A3은 3177개의 아미노산을 가지며 12개의 폰 빌베브란트 인자 A형(vWA) 도메인, 1개의 섬유결합소 3형 도메인 및 1개의 BPTI/Kunitz 계열의 세린 단백질분해효소 억제제(KU) 도메인을 포함한다.
T 세포 기반의 면역요법 표적은 종양 관련 또는 종양 특정 단백질을 나타내며 펩티드 에피톱을 표적으로 하며, 이는 주조직적합성 복합체(MHC)의 분자에 의해 제시된다. 종양 관련 항원(TAA)은 해당 종양의 세포에서 보통 상향조절되는 같은 원천의 변형되지 않은 세포들에 비해서, 발현된 효소, 수용체, 전사 인자 등과 같은 모든 단백질 클래스에서 유도된 펩티드일 수 있다.
세포 면역 반응의 특정 요소는 종양 세포를 특정하게 인식하고 파괴하는 능력이 있다. 종양 침윤 세포 모집단 또는 말초 혈액으로부터 T 세포의 분리는 그러한 세포가 암에 대한 자연 면역 방어에서 중요한 역할을 수행함을 시사한다. 특히 CD8-양성 T 세포는 세포질에 위치한 단백질이나 결손 리보솜 산물(DRiP)로부터 유래된 보통 8 내지 10개의 아미노산 잔기로 이루어진 주조직적합성 복합체(MHC)를 포함하는 펩티드의 클래스 I 분자를 인지하며, 이 반응에서 중요한 역할을 한다. 인간의 MHC 분자는 또한 인간 백혈구 항원(HLA)으로 지정된다.
TCR은 면역글로블린 상위계열의 이종이합체 세포 표면 단백질이며, 신호 전달의 매개에 관여하는 CD3 복합체의 불변 단백질과 관련이 있다. TCR은 αβ 및 γδ 형태로 존재하며, 이들은 구조적으로 유사하지만 해부학적 위치는 상당히 다르며 아마 기능도 다를 것이다. 자연 이종이합체 αβTCR의 세포외 부분은 두 개의 폴리펩티드로 구성되며, 각각 막 근위의 불변 도메인과 막 원위의 가변 도메인을 갖는다. 불변 및 가변 도메인 각각은 사슬내 이황화 결합을 포함한다. 가변 도메인은 항체의 보완 결정 영역(CDR)과 동족인 고도로 다형태적인 루프를 포함한다. TCR 유전자 요법의 사용은 다수의 기존 장애물을 극복한다. 이것은 환자 자신의 T 세포가 바람직한 특이성과 짧은 기간 동안 충분한 숫자의 T 세포 생성을 갖추는 것을 허용하여 세포의 고갈을 피할 수 있다. TCR이 중앙 기억 T 세포나 줄기세포 특성이 있는 T 세포 안으로 형질도입되며, 이것은 전달에 있어 더 나은 지속성 및 기능을 보장할 수 있다. TCR 조작된 T 세포를 화학요법이나 방사능에 의해 림프구감소증에 걸린 암 환자에게 주입하면, 효율적인 생착은 가능하게 하면서 면역 억제는 저해한다.
암 요법을 위한 분자 표적화 약물의 개발에서 진전이 있었지만, 암 세포에 고도로 특이적인 분자를 특이적으로 표적화하는 새로운 항암 제제의 개발 요구가 여전히 업계에 존재한다. 본 설명은 신규 COL6A3 TCR, 각 해당되는 재조합 TCR 구조체, 핵산, 벡터 및 공개된 바와 같이 COL6A3 에피톱(들)에 특이적으로 결합하는 숙주 세포; 그리고 암의 치료에서 그러한 분자들을 사용하는 방법들을 제공하여 이러한 요구를 해결한다.
본 발명의 목적은 첫 번째 양태에서 서열 식별 번호 3, 9, 15, 21, 27 및 33으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 또는 바람직하게는 100% 서열 동일성을 갖는 적어도 하나의 보완 결정 영역(CDR) 3을 포함하는 항원 인식 구조체에 의해 해결된다.
다른 추가 또는 대체의 구현에서, 항원 인식 구조체는 CDR1 및/또는 CDR2 도메인 서열을 추가로 포함할 수 있다. 가변 도메인 내부에서 CDR1 및 CDR2가 폴리펩티드 사슬의 가변(V) 영역에서 발견되고 CDR3은 V의 일부, 다양성(D) 전체 및 결합(J) 영역을 포함한다. CDR3이 가장 가변적이며, 특이적으로 그리고 선택적으로 항원을 인지하는 역할을 하는 주 CDR이다. CDR1 및 CDR2 서열은 인간 가변 사슬 대립형질의 CDR 서열로부터 선택할 수 있다.
자연 α-β 이종이합체 TCR은 하나의 α 사슬 및 하나의 β 사슬을 갖는다. 각 사슬은 가변, 결합 및 불변 영역을 포함하며, β 사슬은 또한 대개 가변 및 결합 영역 사이에 짧은 다양성 영역을 포함하지만, 이 다양성 영역은 흔히 결합 영역의 일부로서 간주된다. 각 가변 영역은 구조틀 서열에 포매되어 있는 세 개의 CDR(보완 결정 영역)을 포함하며, 그 중 하나는 CDR3으로 불리는 과가변 영역이다. 여러 유형의 α 사슬 가변(Vα) 영역이 있고 여러 유형의 β 사슬 가변(Vβ) 영역이 있는데, 이들은 구조틀, CDR1 및 CDR2 서열에 의해 그리고 부분적으로 정의된 CDR3 서열에 의해 구별된다. IMGT 명명법에서 Vα 유형은 고유한 TRAV 번호로 지칭하고, Vβ 유형은 고유한 TRBV 숫자로 지칭한다.
그러므로 하나의 추가 또는 대체 구현에서 본 발명의 항원 인식 구조체는 다음의 표 1에 나와 있는 바와 같이 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열이 조합으로 구성되며, 이들은 CDR3 서열과 함께 해당되는 가변 사슬 대립형질을 표시한다. 그러므로 적어도 한 개, 바람직하게는 세 개 모두의 CDR 서열(CDR1, CDR2 및 CDR3)을 포함하는 본 발명의 항원 인식 구조체가 바람직하다. 바람직하게는, 본 발명의 항원 인식 구조체는 본 발명에서 공개된 하나의 개별 TCR 가변 영역의 각각의 CDR1 내지 CDR3을 포함한다.
본 문서에서 사용된 "특이성" 또는 "항원 특이성" 또는 주어진 항원에 대한 "특이적"이란 용어는 항원 인식 구조체가 상기 항원이 HLA에 의하고, 바람직하게는 HLA A2에 의한 경우, 상기 항원에, 바람직하게는 COL6A3 항원에, 보다 바람직하게는 고결합성으로 결합할 수 있음을 의미한다. 예를 들어, TCR을 발현하며 COL6A3 제시 TCR을 발현하며, COL6A3 제시 HLA와 접촉시킨 T 세포가 COL6A3 에피톱 및 본 문서에서 다음에 제공된 항원들과 같은 낮은 농도의(예: 약 10-11 mol/l, 10-10 mol/l, 10-9 mol/l, 10-8 mol/l, 10-7 mol/l, 10-6 mol/l, 10-5 mol/l) COL6A3 항원으로 펄스된 표적 세포와 함께 공동배양 시 적어도 약 200 pg/ml 이상(예: 250 pg/ml 이상, 300 pg/ml 이상, 400 pg/ml 이상, 500 pg/ml 이상, 600 pg/ml 이상, 700 pg/ml 이상, 1000 pg ml 이상, 2,000 pg/ml 이상, 2,500 pg/ml 이상, 5,000 pg/ml 이상)의 인터페론 γ(IFN-γ)를 분비한다면, 항원 인식 구조로서 TCR이 COL6A3 항원에 대해 "항원성 특이성"을 갖는다고 간주할 수 있다. 대체적으로 또는 추가적으로, TCR을 발현하는 T 세포가 낮은 농도의 COL6A3 항원으로 펄스된 표적 세포와 공동배양 시 변환되지 않은 배경 수준의 IFN-γ의 적어도 2배에 해당하는 IFN-γ를 분비한다면, TCR의 COL6A3에 대해 "항원성 특이성"을 갖는다고 간주할 수 있다. 위에서 기술한 이러한 "특이성"은 예를 들어 ELISA로 분석할 수 있다.
본 발명의 한 대체 또는 추가의 구현에서, 항원 인식 구조체가 COL6A3에 선택적으로 결합하여; 바람직하게 그 COL6A3이 서열 식별 번호 58 내지 67, 가장 바람직하게는 서열 식별 번호 58에 나와 있는 아미노산 서열을 갖는 단백질 에피톱 또는 펩티드이거나 또는 그 변이체이며, 상기 변이체는 세 개 이하, 바람직하게는 두 개, 그리고 가장 바람직하게는 한 개 이하의 아미노산 위치의 아미노산 소실, 추가, 삽입 또는 치환이다.
"선택성" 또는 "선택적 인식/결합"이란 용어는 바람직하게는 단 하나의 특이적 에피톱을 선택적으로 인식하거나 이에 결합하며 다른 에피톱에 대해 교차반응성을 전혀 보이지 않거나 실질적으로 보이지 않는, TCR이나 항체와 같은 항원 인식 구조체의 성질을 지칭하는 것으로 이해한다. 바람직하게는 "선택성" 또는 "선택적 항원/결합"은 항원 인식 구조체(예: TCR)가 바람직하게 단 하나의 특이적 에피톱을 선택적으로 인식하거나 또는 이에 결합하며, 바람직하게는 다른 에피톱에 대해 교차반응성을 전혀 보이지 않거나 실질적으로 보이지 않으며, 상기 항원 인식 구조체가 다른 에피톱 및 다른 단백질에 대해 교차반응성을 전혀 보이지 않거나 실질적으로 보이지 않도록 상기 에피톱이 하나의 단백질에 고유한 것을 의미한다.
본 발명에 따른 항원 인식 구조체는 바람직하게는 항체 또는 그 유도체나 단편, 또는 T 세포 수용체(TCR) 또는 그 유도체나 단편으로부터 선택된다. 본 발명의 항체나 TCR의 유도체나 단편은 바람직하게는 모 분자의 항원 결합/인식 능력, 특히 상기 설명된 특이성 및/또는 선택성을 보유해야 한다. 그러한 결합 기능성은 본 문서에서 정의된 CDR3 영역의 존재에 의해 유지될 수 있다.
본 발명의 한 구현에서, 본 발명의 TCR은 주조직적합성 복합체(MHC) 클래스 I 의존 방식으로 COL6A3 항원을 인식할 수 있다. 본 문서에서 사용된 "MHC 클래스 I 의존 방식"은 MHC 클래스 I 분자의 환경 내에서 TCR이 COL6A3 항원에 결합 시 면역 반응을 유발한다는 의미이다. MHC 클래스 I 분자는 당업계에서 알려진 일체의 MHC 클래스 I 분자일 수 있으며, 예를 들어 HLA-A 분자이다. 본 발명의 바람직한 한 구현에서, MHC 클래스 I 분자는 HLA-A2 분자이다.
본 발명은 단일 사슬 항원 인식 구조체와 이중 사슬 인식 구조체 모두를 제공한다.
본 발명은 특히 항원 인식 구조체 또는 그 단편이나 유도체로서 TCR을 제공한다. TCR은 바람직하게는 인간의 TCR이며, 이는 인간 TCR 유전자로부터 생성되므로 인간 TCR 서열을 포함하는 것으로 이해된다. 더욱이, 본 발명의 TCR은 인간 기원의 TCR이며 COL6A3 항원을 특이적으로 인식하는 것으로 특징지을 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현은 면역 반응을 유도하는 상기 설명의 항원 인식 구조체를 추가적으로 또는 대안적으로 제공하는데, 바람직하게는 그 면역 반응이 인터페론(IFN) γ 수준의 증가의 특징을 가진다.
본 발명의 TCR은 단일 사슬 α 또는 β, 또는 γ 및 δ, 또는 대체적으로 α 및 β 사슬 또는 γ 및 δ 사슬 둘 모두로 구성되는 이중 사슬 구조체로 제공될 수 있다.
본 발명의 항원 인식 구조체는 TCR α 또는 γ 사슬, 및/또는 TCR β 또는 δ 사슬을 포함할 수 있으며, 상기 TCR α 또는 γ 사슬은 서열 식별 번호 3, 15 및 27로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 CDR3을 포함하고/하거나 TCR β 또는 δ 사슬은 서열 식별 번호 9, 21 및 33으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 CDR3을 포함한다.
가장 바람직하게는, 공개 내용이 본 문서에서 공개된 TCR 사슬(표 1 참조)의 CDR1 내지 CDR3 영역의 하나, 둘 또는 모두를 포함하는 항원 인식 구조체를 지칭하는 일부 추가적인 구현에서, 그러한 항원 인식 구조체가 바람직할 수 있으며, 이는 셋 또는 둘, 그리고 바람직하게는 단 하나의 변형된 아미노산 잔기를 갖는 해당 CDR 서열을 포함한다. 변형된 아미노산 잔기는 아미노산 삽입, 결손 또는 치환으로부터 선택될 수 있다. 셋, 둘, 바람직하게는 하나의 변형된 아미노산 잔기가 해당 CDR 서열의 첫 번째 또는 마지막 아미노산 잔기인 것이 가장 바람직하다. 변형이 치환인 경우, 일부 구현에서는 그러한 치환이 바람직하게 보존적 아미노산 치환이다.
본 발명의 항원 인식 구조체가 이중 사슬 TCR 또는 그 항원 결합 단편과 같은 적어도 2개의 아미노산 사슬로 구성되는 경우, 항원 인식 구조체는 첫째 폴리펩티드 사슬에 서열 식별 번호 3에 따른 아미노산 서열 및 둘째 폴리펩티드 사슬에 서열 식별 번호 9에 따른 아미노산 서열, 또는 첫째 폴리펩티드 사슬에 서열 식별 번호 15에 따른 아미노산 서열 및 둘째 폴리펩티드 사슬에 서열 식별 번호 21에 따른 아미노산 서열, 또는 첫째 폴리펩티드 사슬에 서열 식별 번호 27에 따른 아미노산 서열 및 둘째 폴리펩티드 사슬에 서열 식별 번호 33에 따른 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 위에서 언급된 이중 사슬 TCR의 어떤 것이든지 또는 그 항원 결합 단편들이 본 발명의 바람직한 TCR이다. 일부 구현에서, 본 발명의 이중 사슬 TCR의 CDR3이 돌연변이될 수 있다. 위에서 제공된 서열 식별 번호 9 내지 28의 CDR3 서열에 대한 돌연변이는 바람직하게는 3개 이하, 바람직하게 2개 그리고 가장 바람직하게 1개 이하의 아미노산 잔기에 대한 치환, 소실, 추가 또는 삽입을 포함한다. 일부 구현에서, 첫째 폴리펩티드 사슬은 TCR α 또는 γ 사슬일 수 있으며 그리고 둘째 폴리펩티드 사슬은 TCR β 또는 δ 사슬일 수 있다. αβ 또는 γδ TCR의 조합이 바람직하다.
TCR 또는 이의 항원 결합 단편은 일부 구현에서 TCR α 및 TCR β 사슬 또는 γ 및 δ 사슬로 구성된다. 이러한 이중 사슬 TCR은 각 사슬 가변 영역 내에서 포함되며 각 가변 영역은 하나의 CDR1, 하나의 CDR2 및 하나의 CDR3 서열을 포함한다. TCR은 서열 식별 번호 4 및 서열 식별 번호 10(R4P1D10) 또는 서열 식별 번호 16 및 서열 식별 번호 22(R4P3F9); 또는 서열 식별 번호 28 및 서열 식별 번호 34(R4P3H3)의 가변사슬 아미노산 서열에 포함된 CDR1 내지 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 일부 구현은 TCR, 또는 TCR α 및 TCR β 사슬로 구성된 이의 단편에 대한 것으로, 상기 TCR은 각각 서열 식별 번호 4 및 10; 또는 각각 16 및 22; 또는 각각 28 및 34에 따라 α 및 β 사슬로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 또는 바람직하게 100% 서열 동일성을 갖는 가변 영역 서열들을 포함한다.
본 발명의 TCR은 일체의 포유동물(예: 인간, 쥐, 원숭이, 토끼, 당나귀, 생쥐)과 같은 일체의 적절한 종으로부터 유래된 불변 영역을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 한 구현에서, 발명의 TCR은 인간 불변 영역을 추가로 포함한다. 일부 바람직한 구현에서, 본 발명의 TCR의 불변 영역은 TCR 발현과 안정성을 증가시킬 수 있는, 예를 들어, 이질성 서열 바람직하게는 마우스 서열의 도입에 의해 약간 변경될 수 있다.
본 발명의 일부 구현은 TCR 또는 TCR α 및 TCR β 사슬로 구성된 이의 단편에 대한 것으로, 상기 TCR은 각각 서열 식별 번호 5 및 11; 또는 각각 17 및 23; 또는 각각 29 및 35에 따라 α 및 β 사슬로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 또는 바람직하게 100% 서열 동일성을 갖는 불변 영역을 포함한다.
본 발명의 TCR α 또는 γ 사슬은 또한 서열 식별 번호 1, 13 및 25로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 CDR1, 및/또는 서열 식별 번호 2, 14 및 26으로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 CDR2를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에 따라 TCR β 또는 δ 사슬은 또한 서열 식별 번호 7, 19 및 31로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 CDR1, 및/또는 서열 식별 번호 8, 20 및 32로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 CDR2를 추가로 포함할 수 있다.
추가적인 구현에서 항원 인식 구조체는 TCR의 결합 단편을 포함할 수 있으며, 상기 결합 단편이 서열 식별 번호 1, 2, 3, 또는 7, 8, 9 또는 13, 14, 15 또는 19, 20, 21 또는 25, 26, 27 또는 31, 32, 33의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 내지 CDR3 서열로부터 임의적으로 선택되는 CDR1 내지 CDR3을 포함한다.
본 발명의 추가적인 구현에서, 본 문서에서 앞서 기술한 항원 인식 구조체가 TCR 또는 그 단편이며 적어도 하나의 TCR α 및 하나의 TCR β 사슬 서열로 구성되고, 상기 TCR α 사슬 서열이 서열 식별 번호 1 내지 3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 내지 CDR3 서열을 포함하며, 상기 TCR β 사슬 서열이 서열 식별 번호 7 내지 9의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 내지 CDR3 서열을 포함하거나, 상기 TCR α 사슬 서열이 서열 식별 번호 13 내지 15의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 내지 CDR3 서열을 포함하며, 상기 TCR β 사슬 서열이 서열 식별 번호 19 내지 21의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 내지 CDR3 서열을 포함하거나, 상기 TCR α 사슬 서열이 서열 식별 번호 25 내지 27의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 내지 CDR3 서열을 포함하며, 상기 TCR β 사슬 서열이 서열 식별 번호 31 내지 33의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 내지 CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 추가적인 구현에서, 본 문서에서 앞서 기술한 항원 인식 구조체는 하나의 TCR α 및 하나의 TCR β 사슬 서열을 포함하는 TCR이나 그 단편이며, 상기 TCR α 사슬 서열이 서열 식별 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 가변 영역 서열을 포함하고, 상기 TCR β 사슬 서열이 서열 식별 번호 10의 아미노산 서열을 갖는 가변 영역 서열을 포함하거나, 또는 상기 TCR α 사슬 서열이 서열 식별 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 가변 영역 서열을 포함하고, 상기 TCR β 사슬이 서열 식별 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 가변 영역 서열을 포함하거나, 또는 상기 TCR α 사슬 서열이 서열 식별 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 가변 영역 서열을 포함하며, 상기 TCR β 사슬 서열이 서열 식별 번호 34의 아미노산 서열을 갖는 가변 영역 서열을 포함한다.
본 발명의 추가적인 구현에서, 본 문서에서 앞서 기술한 항원 인식 구조체는 서열 식별 번호 5, 11, 17, 23, 29 및 35로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 및 100% 서열 동일성을 갖는 TCR 불변 영역을 더욱 포함하는 TCR이나 그 단편이며, 바람직하게는 그 TCR이 적어도 하나의 TCR α 및 하나의 TCR β 사슬 서열로 구성되며, TCR α 사슬 서열이 서열 식별 번호 5, 17 및 29로부터 선택되는 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 불변 영역을 포함한다.
본 문서에서 이전에 기술된, 서열 식별 번호 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 첫째 TCR 사슬, 그리고 서열 식별 번호 12의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 둘째 TCR 사슬을 포함하는 항원 인식 구조체 또한 공개된다. 본 발명은 또한 서열 식별 번호 18의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 첫째 TCR 사슬, 그리고 서열 식별 번호 24의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 둘째 TCR 사슬을 포함하는 TCR을 제공한다. 추가적인 구현에서 본 발명은 TCR이며, 서열 식별 번호 30의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 첫째 TCR 사슬, 그리고 서열 식별 번호 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 둘째 TCR 사슬을 포함하는 항원 인식 구조체를 제공한다.
본 문서에서 사용된 용어 "쥐과" 또는 "인간"은 항원 인식 구조체 또는 TCR이나 본 문서에서 기술된 TCR의 모든 성분(예: 보완 결정 영역(CDR), 가변 영역, 불변 영역, α 사슬 및/또는 β 사슬)을 지칭하는 경우, 이것은 생쥐나 인간 비재배열된 TCR 자리 각각으로부터 유래한 TCR(또는 그 성분)을 의미한다.
본 발명의 한 구현에서, 키메라 TCR이 제공되며, 여기서 TCR 사슬은 복수의 종으로부터의 서열을 포함한다. 바람직하게, 본 발명의 TCR은 α 사슬의 인간 가변 영역 그리고 예를 들어, 쥐과 TCR α 사슬의 쥐과 불변 영역을 포함하는 α 사슬을 포함할 수 있다.
한 구현에서, 본 발명의 TCR은 상기 구현에 따른 인간 가변 영역 및 인간 불변 영역을 포함하는 인간 TCR이다.
본 발명의 TCR은 단일 사슬 TCR(scTCR)로서 제공될 수 있다. scTCR은 첫 번째 TCR 사슬(예: α 사슬)의 가변 영역의 폴리펩티드 그리고 전체(전장) 두 번째 TCR 사슬(예: β 사슬)의 폴리펩티드 또는 이의 반대를 포함할 수 있다. 더욱이, scTCR은 두 개 이상의 폴리펩티드를 함께 연결하는 하나 이상의 링커를 임의적으로 포함할 수 있다. 링커는 예를 들어 펩티드일 수 있으며, 이는 본 문서에서 기술된 바와 같이 두 개의 단일 사슬을 함께 연결한다. 또한 본 발명의 그러한 scTCR도 제공되며, 이것은 IL-2, IL-7 또는 IL-15와 같은 인간 사이토킨에 융합된다.
본 발명에 따른 항원 인식 구조체는 적어도 2개의 scTCR 분자를 포함하는 다합체 복합체의 형태로 또한 제공될 수 있으며, 상기 scTCR 분자는 적어도 1개의 비오틴 모이어티에 각각 융합되며 또한 상기 scTCR은 비오틴-스트렙타비딘 상호작용에 의해 상호연결되어 상기 다합체 복합체의 형성을 허용한다. 다합체 TCR의 생성을 위한 유사한 접근 방식 또한 가능하며 본 공개에 포함된다. 또한 2개가 넘는 본 발명의 scTCR을 포함하는 더 높은 차수의 다합체 복합체가 제공된다.
본 발명의 목적 상, TCR이란 적어도 하나의 TCR α 또는 γ 및/또는 TCR β 또는 델타 가변 도메인을 갖는 모이어티이다. 일반적으로, 이들은 TCR α 가변 도메인 및 TCR β 가변 도메인 모두를 포함한다. 이들은 αβ 이질이합체이거나 단일 사슬 형태일 수 있다. 입양 요법에서의 사용을 위해, αβ 이질이합체 TCR은 예를 들어 세포질 및 막횡단 도메인을 모두 갖는 전장 사슬로서 형질주입될 수 있다. 원한다면, 해당 불변 도메인의 잔기 사이에 도입된 이황화 결합이 존재할 수 있다.
바람직한 한 구현에서, 항원 인식 구조체는 인간 TCR이거나 이의 단편 또는 유도체이다. 인간 TCR 또는 이의 단편 또는 유도체는 TCR이며, 이것은 상응하는 인간 TCR 서열의 50% 이상을 구성한다. 바람직하게, TCR 서열의 적은 부분만 인공적 기원이거나 다른 종으로부터 유래한다. 하지만 키메라 TCR, 예를 들어 불변 도메인에서 쥐과 서열을 가진 인간 기원으로부터 유래한 것이 유리하다고 알려져 있다. 그러므로 특히 바람직한 것은 본 발명에 의거한 TCR이며, 이것은 그 불변 도메인의 세포외 부분에서 쥐과 서열을 포함한다.
그리하여 발명의 항원 인식 구조체는 인간 백혈구 항원(HLA) 의존 방식으로, 바람직하게는 HLA-A02 의존 방식으로 그 항원을 인식할 수 있는 것이 또한 바람직하다. 본 발명의 환경 상 "HLA 의존 방식"이라는 용어는, 항원 인식 구조체가 항원 펩티드가 상기 HLA에 의해 제시되는 경우 항원에만 결합한다는 의미이다.
한 구현에서 본 발명에 의거한 항원 인식 구조체는 바람직하게는 면역 반응을 유도하며, 바람직하게는 그 면역 반응이 인터페론(IFN) γ 수준의 증가의 특징을 가진다.
또한 본 문서에서 기술된 어떠한 TCR(또는 그 기능적 변이체)의 기능적 부분, 예를 들어 실시예 항목과 표 1에서 제공된 R4P1D10, R4P3F9, 및 R4P3H3으로부터 선택되는 어느 하나의 TCR의 기능적 부분을 포함하는 폴리펩티드가 본 발명에서 제공된다. 본 문서에서 사용된 용어 "폴리펩티드"에는 올리고펩티드가 포함되며 하나 이상의 펩티드 결합에 의해 연결된 단일 사슬의 아미노산을 지칭한다. 본 발명의 폴리펩티드에 있어, 기능적 부분은 그것이 한 부분인 TCR(또는 그 기능적 변이체)의 연속적 아미노산(단 그 기능적 부분은 바람직하게는 여기의 표 2에 공개된 바와 같이 COL6A3 항체에 특이적으로 결합해야 한다) 그리고 펩티드 A1 내지 A9(서열 식별 번호 59 내지 67)를 포함하는 일체의 부분일 수 있다. TCR(또는 그 기능적 변이체)을 언급할 때 사용되는 "기능적 부분"이라는 용어는 본 발명의 TCR(또는 그 기능적 변이체)의 어떠한 일부나 단편을 지칭하며, 그 일부나 단편은 그 자체가 일부인(모 TCR 또는 그 모 기능적 변이체) TCR(또는 그 기능적 변이체)의 생물학적 활성도를 보유한다. 기능적 부분은 예를 들어, 모 TCR(또는 그 기능적 변이체)와 유사한 정도로, 같은 정도로 또는 더 높은 정도로 TAA 항원에(HLA-A2 의존 방식으로) 특이적으로 결합하는 능력 또는 암의 검출, 치료 또는 예방하는 능력을 보유하는 TCR(또는 그 기능적 변이체)의 일부들을 망라한다. 모 TCR(또는 그 기능적 변이체)에 기준하여, 기능적 부분은 모 TCR 가변 서열(또는 그 기능적 변이체)의 예를 들어, 약 10%, 25%, 30%, 50%, 68%, 80%, 90%, 95% 이상을 포함할 수 있다.
기능적 부분은 그 부분의 아미노 또는 카르복시 말단 또는 두 말단 모두에서 추가의 아미노산을 포함할 수 있으며, 그 추가의 아미노산은 모 TCR이나 그 기능적 변이체의 아미노산 서열에서 발견되지 않는다. 바람직하게는 추가의 아미노산이 기능적 부분의 생물학적 기능, 예를 들어 TAA 항원에 특이적으로 결합; 및/또는 암의 검출, 암의 치료나 예방 등의 능력 보유를 방해하지 않는다. 더 바람직하게는 추가의 아미노산이 모 TCR이나 그 기능적 변이체의 생물학적 활성도와 비교하여 생물학적 활성도를 강화시킨다.
폴리펩티드는 TCR의 α 및 β 사슬 중 하나 또는 모두의 기능적 부분 또는 본 발명의 그 기능적 변이체를 포함할 수 있으며, 이는 TCR의 α 사슬 및/또는 β 사슬의 가변 영역(들)의 하나 이상의 CDR1, CDR2 및 (바람직하게는) CDR3을 포함하는 기능적 부분이나 본 발명의 그 기능적 변이체와 같은 것이다. 본 발명의 한 구현에서, 폴리펩티드는 서열 식별 번호 3, 9, 15, 21, 27 및 33의 아미노산 서열(본 발명에서 TCR의 가변 영역의 CDR3) 또는 이의 조합을 포함하는 기능적 부분을 포함할 수 있다. 본 발명의 한 구현에서, 본 발명의 폴리펩티드는 예를 들어, 위에 명시된 CDR 영역의 조합을 포함하는 본 발명의 가변 영역 또는 이의 기능적 변이체를 포함할 수 있다. 이에 관해서, 폴리펩티드는 서열 식별 번호 4, 10, 16, 22, 28 및 34 중 어느 하나의 아미노산 서열(본 발명에서 TCR의 α 또는 β 사슬의 가변 영역)을 포함할 수 있다.
일부 경우에서, 본 발명의 구조체는 서열 식별 번호 1 내지 36(CDR 서열, 불변 및 가변 영역 그리고 전장 서열) 또는 그 기능적 단편에 따른 서열을 포함하는 하나 또는 둘의 폴리펩티드 사슬을 포함할 수 있으며, 또한 예를 들어, 면역글로불린이나 그 부분을 인코딩하는 아미노산과 같은 다른 아미노산 서열을 추가로 포함하며, 본 발명의 단백질은 융합 단백질일 수 있다. 이러한 점에서, 본 발명은 또한 적어도 하나의 다른 폴리펩티드와 함께 본 문서에서 기술된 적어도 하나의 발명의 폴리펩티드를 포함하는 융합 단백질을 제공한다. 다른 폴리펩티드는 융합 단백질의 별개의 폴리펩티드로 존재할 수 있거나, 폴리펩티드로 존재할 수 있으며, 이는 본 문서에서 기술된 발명의 폴리펩티드의 하나와 함께 틀로(일렬로) 발현된다. 다른 폴리펩티드에는 일체의 펩티드나 단백질성 분자 또는 그 부분이 포함될 수 있으며, 면역글로불린, CD3, CD4, CD8, MHC 분자, CD1 분자(예: CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, 등)가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다.
융합 단백질은 하나 이상의 발명의 폴리펩티드 사본 및/또는 하나 이상의 기타 폴리펩티드 사본을 포함할 수 있다. 예를 들어, 융합 단백질은 발명의 폴리펩티드 및/또는 기타 폴리펩티드의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 이상의 사본을 포함할 수 있다. 융합 단백질을 만드는 적합한 방법들은 당업계에서 알려져 있으며, 예를 들면 재조합 방법이 포함된다. 본 발명의 일부 구현에서, 본 발명의 TCR(및 그 기능적 부분 및 기능적 변이체), 폴리펩티드 및 단백질은 α 사슬과 β 사슬을 연계시키고 γ 사슬과 δ 사슬을 연계시키는 링커를 포함하는 단일 단백질로서 발현될 수 있다. 이에 관해서, TCR( 및 그 기능적 변이체 및 기능적 부분), 폴리펩티드 그리고 본 발명의 TCR의 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 본 발명의 단백질은 또한 링커 폴리펩티드를 추가로 포함할 수 있다. 링커 펩티드는 숙주 세포 내 재조합 TCR(그 기능적 부분 및 기능적 변이체 포함), 폴리펩티드 및/또는 단백질의 발현을 유리하게 원활하게 할 수 있다. 링커 펩티드는 임의의 적절한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 단일 사슬 TCR 구조체를 위한 링커 서열은 당업계에 잘 알려져 있다. 그러한 단일 사슬 구조체는 1개 또는 2개의 불변 도메인 서열을 추가로 포함할 수 있다. 숙주 세포에 의한 링커 펩티드를 포함하는 구조체의 발현 시, 링커 펩티드는 분할되어 분리된 α 및 β 사슬 그리고 분리된 γ 및 δ 사슬을 초래할 수도 있다.
위에서 이미 언급된 바와 같이, 본 발명의 TCR의 결합 기능성은 항체의 구조틀 안에서 제공될 수 있다. 다양한 문법적 형태로 사용되는 "항체"란 용어는 본 문서에서 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역 글로불린 활성적 부분 즉, 항체 결합 부위나 파라토프를 함유하는 분자를 지칭한다. 그러한 분자는 면역글로불린 분자의 "항원 결합 단편"으로도 불린다. 본 발명은 항체 또는 그 항체 결합 부분을 추기로 제공하며, 이는 본 문서에서 기술된 항원에 특이적으로 결합한다. 항체는 당업계에서 알려진 어떠한 유형의 면역글로불린이라도 될 수 있다. 예를 들어, 항체는 모든 아이소형의 것일 수 있으며, 예를 들면 IgA, IgD, IgE, IgG, IgM 등이다. 항체는 단클론 또는 다클론일 수 있다. 항체는 자연적으로 발생하는 항체일 수 있으며, 예를 들어 생쥐, 토끼, 염소, 말, 닭, 햄스터, 인간 등 포유동물로부터 분리되며/분리되거나 정제된 항체이다. 대체적으로, 항체는 유전자 조작된 항체, 예를 들어 인간화된 항체나 키메라 항체일 수 있다. 항체는 단량체 또는 중합체 형태일 수 있다.
본 발명은 또한 본 문서에서 기술한 항체 중 어느 하나의 항원 결합 부분을 제공한다. 항원 결합 부분은 Fab, F(ab')2, dsFv, sFv, 디아바디 및 트리아바디와 같은 적어도 하나의 항원 결합 부위를 갖는 어느 한 부분일 수 있다. 합성 펩티드를 통해 결합체의 V 도메인에 연계된 항체 중사슬의 가변(V) 도메인을 포함하는 절단된 Fab 단편으로 구성된, 단일 사슬 가변 영역 단편(sFv) 항체 단편은 일상적인 재조합 DNA 기술의 기법을 사용하여 생성될 수 있다. 유사하게 이황화물 안정화 가변 영역 단편(dsFv)은 재조합 DNA 기술에 의해 만들 수 있지만, 본 발명의 항체 단편은 이러한 항체 단편의 예시적 유형으로 제한되지 않는다. 또한 항체나 그 항체 결합 부분은 예를 들어 방사능동위원소, 형광단(예: 플로오레세인 이소티오시아네이트(FITC), 홍조(PE)), 효소(예: 알칼리성 인산분해효소, 겨자무 과산화효소) 및 원소 입자(예: 금 입자)를 포함하도록 변형시킬 수 있다. 일부 경우에서, TCR CDR3 서열은 약간 변형될 수 있지만 서열 식별 번호 3, 9, 15, 21, 27 및 33에서 제공된 CDR3 서열에 비해 바람직하게는 3개 아미노산 잔기 이하로, 바람직하게는 2개만 그리고 가장 바람직하게는 단 하나의 아미노산 위치에서 변형될 수 있다. 바람직하게는, 항체가 표 1에 있는 본 발명의 TCR에 대해 표시된 바와 같이 CDR3, 바람직하게는 그 조합에서 CDR1 내지 CDR3 영역의 모두를 포함한다.
항체를 만드는 적절한 방법은 당업계에서 알려져 있다. 예를 들어, 표준 히브리도마 방법은 예를 들어 다음에 기술되어 있다: Kohler and Milstein, Eur. J. Immunol, 5, 51 1-519 (1976), Harlow and Lane (eds.), Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press (1988), 그리고 C.A. Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 제8판, Garland Publishing, New York, NY (201 1)). 대체적으로, EBV-히브리도마 방법(Haskard and Archer, J. Immunol. Methods, 74(2), 361-67 (1984) 및 Roder et al, Methods Enzymol, 121, 140-67 (1986))과 같은 다른 방법들 그리고 박테리오파지 벡터 발현 시스템(예: Huse et al., Science, 246, 1275-81 (1989))이 당업계에서 알려져 있다. 또한 비인간 동물에서 항체를 생산하는 방법은 예를 들어, 미국 특허 번호 5,545,806, 5,569,825 및 5,714,352, 그리고 미국 특허 출원 번호 2002/0197266에 기술되어 있다.
본 발명의 일부 구현은 또한 TCR 또는 기능적 단편 및 그 폴리펩티드에 관한 것으로 이는 가용성 TCR이다. 본 문서에서 사용된 용어 "가용성 T 세포 수용체"는 자연 TCR의 이질이합체 절단된 변이체를 지칭하며, 이것은 이황화 결합에 의해 연계되는 TCR α 사슬 및 β 사슬의 세포외 부분들을 포함하지만 자연 단백질의 막횡단 및 세포질(cytosolic) 도메인이 결여된다. 용어 "가용성 T 세포 수용체 α 사슬 서열 및 가용성 T 세포 수용체 β 사슬 서열"은 막횡단 및 세포질 도메인이 결여된 TCR α 사슬 및 β 사슬 서열을 지칭한다. 가용성 TCR α 사슬 및 β 사슬의 서열(아미노산 또는 핵산)은 자연 TCR 내 상응하는 서열과 동일할 수 있거나 상응하는 자연 TCR에 비해 변이체 가용성 TCR α 사슬 및 β 사슬을 포함할 수 있다. 본 문서에서 사용된 용어 "가용성 T 세포 수용체"는 변이체 또는 비변이체 가용성 TCR α 사슬 및 β 사슬 서열을 망라한다. 그 변이는 가용성 TCR α 사슬 및 β 사슬 서열의 가변 또는 불변 영역에 있을 수 있으며, 아미노산 결손, 삽입, 치환 돌연변이 그리고 핵산 서열의 변경(이것은 아미노산 서열을 변경시키지 않음)을 포함할 수 있지만 이에 제한되지는 않는다. 어떠한 경우에도 본 발명의 가용성 TCR은 모 분자의 결합 기능성을 보유한다.
위의 문제는 또한 본 발명의 항원 인식 구조체를 인코딩하는 핵산 또는 위에서 언급된 단백질이나 폴리펩티드 구조체 중 어느 하나에 의해서 추가로 해결된다. 핵산은 바람직하게는 (a) 본 발명에 따른 항원 인식 구조체를 인코딩하는 가닥을 가지거나; (b) (a)의 가닥에 상보적인 가닥을 가지거나; (c) 엄격한 조건하에서 (a) 또는 (b)에 기술된 분자와 혼성화하는 가닥을 갖는다. 엄격한 조건이 당업자에게 알려져 있으며 구체적으로 Sambrook 등의 "분자 클로닝"에 나와 있다. 이에 추가하여, 핵산은 추가의 서열을 임의적으로 가지며, 이는 단백질에 상응하는 핵산 서열의 발현을 위해 구체적으로 포유동물/인간 세포에서의 발현을 위해 필요하다. 사용된 핵산은 세포에서 펩티드에 상응하는 핵산 서열의 발현을 허용하는데 적합한 벡터에 포함될 수 있다. 하지만 핵산은 수지상 세포와 같은 고전적 항원 제시 세포로 제약될 수 있는 항원 제시 세포를 자체의 세포 표면 상의 상응하는 단백질을 생산하는 방식으로 형질전환하는 데에도 사용될 수 있다.
본 문서에서 사용된 "핵산"에는 "폴리뉴클레오티드", "올리고뉴클레오티드" 및 "핵산 분자"가 포함되며, 일반적으로 DNA나 RNA의 중합체를 의미하는데 이것은 자연적 출처로부터 한 가닥이나 두 가닥으로 합성되거나 얻을 수 있을 수 있으며(예: 분리 및/또는 정제함), 그 출처는 자연적, 비자연적 또는 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있고, 또한 자연적, 비자연적 또는 변형되지 않은 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오티드 사이에서 발견되는 포스포디에스테르 대신 포스포로아미데이트 결합이나 포스포로티오에이트 결합과 같은 변형된 인터뉴클레오티드 결합을 포함할 수 있다.
바람직하게는 본 발명의 핵산은 재조합이다. 본 문서에서 사용된 "재조합"이란 용어는 (i) 살아 있는 세포에서 복제가 가능한 핵산 분자에 자연 또는 합성 핵산 세그먼트를 결합시켜 살아있는 세포 외부에 구성되는 분자 또는 (ii) 위의 (i)에서 기술한 것들의 복제로부터 얻어지는 분자를 지칭한다. 본 문서의 목적상, 복제는 시험관 내 복제 또는 생체 내 복제일 수 있다. 핵산은 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질 또는 본 문서에서 기술한 기능적 부분이나 이의 기능적 변이체를 인코딩하는 일체의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
더욱이, 본 발명은 또한 위에서 기술한 본 발명에 따른 핵산을 포함하는 벡터를 제공한다. 바람직하게, 벡터는 발현 벡터 또는 재조합 발현 벡터이다. "재조합 발현 벡터"란 용어는 본 발명의 환경에서 적절한 숙주 세포 안에서 mRNA, 단백질 또는 폴리펩티드의 발현을 허용하는 핵산 구조체를 지칭한다. 본 발명의 재조합 발현 벡터는 일체의 적합한 재조합 벡터일 수 있으며, 일체의 적합한 숙주의 형질전환이나 형질주입에 사용될 수 있다. 적합한 벡터에는 플라즈미드와 바이러스와 같이 전파 및 팽창을 위해 또는 발현을 위해 또는 두 가지 모두를 위해 고안된 것들이 포함된다. 동물 발현 벡터의 예에는 pEUK-Cl, pMAM 및 pMAMneo가 포함된다. 바람직하게는, 재조합 발현 벡터는 예를 들어 레트로바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터이다. 재조합 발현 벡터는 전사 그리고 번역 개시 및 종료 코돈과 같은 숙주 세포의 유형(예: 박테리아, 균류, 식물 또는 동물)에 특이적인 조절 서열을 포함하며, 그 안으로 벡터가 개입되어 그 안에서 본 발명의 핵산의 발현이 수행될 수 있다. 더욱이, 본 발명의 벡터에는 형질전환되거나 형질감염된 숙주의 선택을 허용하는 하나 이상의 표지자 유전자가 포함될 수 있다. 재조합 발현 벡터는 본 발명의 구조체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열에 또는 본 발명의 구조체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열에 상보적이거나 이를 혼성화하는 뉴클레오티드 서열에 작동할 수 있도록 연결되는 자연적 또는 규범적 프로모터를 포함할 수 있다. 프로모터의 선택에는 예를 들어 강한, 약한, 유도가능한, 조직 특이적 및 발육 특이적 프로모터가 포함된다. 프로모터는 비바이러스성 프로모터 또는 바이러스성 프로모터일 수 있다. 본 발명의 재조합 발현 벡터는 일시적 발현, 안정한 발현 또는 둘 모두를 위해 설계할 수 있다. 또한 재조합 발현 벡터는 구성적 발현이나 유도가능 발현을 위해 만들 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명에 의거하는 항원 인식 구조체를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명의 숙주 세포는 본 문서에서 앞서 기술한 핵산이나 벡터를 포함한다. 숙주 세포는 진핵 세포, 예를 들어 식물, 동물, 균류 또는 조류일 수 있으며 또는 원핵 세포, 예를 들어 세균이나 원생동물일 수 있다. 숙주 세포는 배양된 세포 또는 일차 세포 즉, 예를 들어 인간같은 생물로부터 직접 분리된 것일 수 있다. 숙주 세포는 유착 세포 또는 부유 세포 즉, 부유 상태로 성장하는 세포일 수 있다. 재조합 TCR, 폴리펩티드 또는 단백질 생산의 목적을 위해, 숙주 세포는 바람직하게 포유동물 세포이다. 가장 바람직하게, 숙주 세포는 인간 세포이다. 숙주 세포는 일체의 세포 유형일 수 있으며, 어떤 유형의 조직으로부터도 유래할 수 있고 또한 어떠한 발육 단계의 것일 수도 있지만, 숙주 세포는 바람직하게는 말초 혈액 백혈구(PBL) 또는 말초 혈액 단핵세포(PBMC)이다. 더욱 바람직하게, 숙주 세포는 T 세포이다. T 세포는 배양된 T 세포, 예를 들어 일차 T 세포와 같은 모든 T 세포 또는 배양된 세포주, 예를 들어 Jurkat, SupT1 등으로부터 유래한 T 세포 또는 포유동물에서 얻어진 T 세포, 바람직하게는 인간 환자로부터의 T 세포나 T 세포 전구체일 수 있다. 포유동물로부터 얻는 경우, T 세포는 다수의 출처로부터 얻을 수 있으며 혈액, 골수, 림프절, 흉선 또는 기타 조직이나 유체가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. T 세포는 또는 보강하거나 정제할 수 있다. 바람직하게는 T 세포는 인간 T 세포이다. 보다 바람직하게는 T 세포는 인간으로부터 분리된 T 세포이다. T 세포는 모든 유형의 T 세포일 수 있고 모든 발육 단계일 수 있으며, CD4 양성 및/또는 CD8 양성, CD4 음성 조력 T 세포, 예를 들어 Th1 및 Th2 세포, CD8 양성 T 세포(예: 세포 독성 T 세포), 종양 침윤 세포(TIL), 기억 T 세포, 자연 T 세포 등이 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는 T 세포는 CD8 양성 T 세포 또는 CD4 양성 T 세포이다.
바람직하게 본 발명의 숙주 세포는 림프구이며 바람직하게는 CD4 양성 또는 CD8 양성 T 세포와 같은 T 림프구이다. 숙주 세포는 더 나아가 바람직하게 COL6A3 발현 종양 세포에 대해 특이적인 종양 반응성 T 세포이다.
본 발명의 한 추가적인 양태는 의학에서의 사용을 위하여 본 문서에서 공개된 항원 인식 구조체, 핵산, 벡터, 약학적 조성물 및/또는 숙주 세포에 관한 것이다. 한 바람직한 구현에서 의학에서의 사용에는 악성 또는 양성 종양 질병과 같은 종양 질병의 진단, 예방 및/또는 치료에서의 사용이 포함된다. 종양 질환은 예를 들어 암이나 상기 종양 질환의 종양 세포에서 COL6A3의 발현에 의해 특징지어지는 종양 질환이다.
위에서 언급된 항원 인식 구조체 및 그로부터 유래된 기타 물질의 의학적 적용에 있어, 치료 및 진단 대상 암은 일체의 암일 수 있으며, 급성 림프구성 암, 급성 골수성 백혈병, 포상 횡문근육종, 골암, 뇌암, 유방암, 항문의 암, 항문, 항문관 또는 직장항문의 암, 눈의 암, 간내 담관의 암, 관절의 암, 목, 방광 또는 흉막의 암, 코, 비강 또는 중이의 암, 구강의 암, 질의 암, 외음부의 암, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수암, 결장암, 식도암, 자궁경부암, 위장관계 카르시노이드 종양, 신경아교종, 호지킨 림프종, 하인두암, 신장암, 인두암, 간암, 폐암, 악성 중피종, 흑색종, 다발성 골수종, 비강인두암, 비호지킨 림프종, 구인두의 암, 난소암, 음경의 암, 췌장암, 복막, 망 및 장간막 암, 인두암, 전립선암, 직장암, 신장암, 피부암, 소장암, 연조직암, 위암, 고환암, 갑상선암, 자궁의 암, 요관암 및 방광암 중 어느 하나를 포함한다. 선호되는 암은 자궁 경부, 구인두, 항문, 항문관, 직장항문, 질, 외음부, 또는 음경의 암이다. 특히 바람직한 암은 위장 및 위의 암 등 COL6A3 양성 암이다.
본 발명의 구조체, 단백질, TCR 항체, 폴리펩티드 및 핵산은 특히 면역 요법 바람직하게는 입양 T 세포 요법에서의 사용을 위한 것이다. 본 발명의 화합물의 투여에는, 예를 들어 본 발명의 T 세포를 상기 환자에 주입하는 것이 관여할 수 있다. 바람직하게, 그러한 T 세포는 환자의 자가 T 세포이며 본 발명의 핵산이나 항원 인식 구조체와 함께 시험관 내 형질도입 된다.
WO 2016/011210에서는 NK 세포 및 T 세포를 포함하여 입양 요법을 위해 조작된 세포와 그 세포를 함유하는 조성물, 그리고 시험대상자에 대한 이의 투여 방법을 공개하고 있다. 이 세포는 키메라 항원 수용체(CAR) 및 공동자극 수용체와 같은 항원에 특이적으로 결합하는 유전자 조작 항원 수용체를 포함할 수 있다.
본 발명의 목적은 또한 세포주를 발현하는 COL6A3 특이적 항원 인식 구조체의 제조 방법에 의해 해결되며, 그 방법은
a. 적절한 숙주 세포의 제공,
b. 본 문서에 공개된 발명에 따른 항원 인식 구조체를 인코딩하는 코딩 서열을 포함하는 유전자 구조체의 제공,
c. 상기 적절한 숙주 세포 안으로 상기 유전자 구조체의 도입, 및
d. 상기 적절한 숙주 세포에 의한 상기 유전자 구조체의 발현
을 포함한다.
이 방법은 상기 적절한 숙주 세포 상에 상기 항원 인식 구조체의 세포 표면 제시의 단계를 추가로 포함할 수 있다.
다른 바람직한 구현에서, 유전자 구조체는 상기 코딩 서열에 작동 가능하게 연계되는 프로모터 서열을 포함하는 발현 구조체이다.
바람직하게는, 상기 항원 인식 구조체가 포유동물 기원의 구조체, 바람직하게는 인간 기원의 구조체이다. 본 발명의 방법에서 사용을 위한 바람직한 적절한 숙주 세포는 인간 세포와 같은 포유동물 세포, 특히 인간 T 림프구이다. 본 발명에서의 사용을 위한 T 세포는 본 문서에서 앞서 상세히 기술되어 있다.
또한, 상기 항원 인식 구조체가 변형된 TCR이며, 상기 변형이 표지자 또는 치료에 활성적인 물질과 같은 기능적 도메인의 추가인 구현들도 본 발명에 망라된다. 더욱이, 내인성 막횡단 영역 대신에 대체 막 고정 도메인과 같은 대체 도메인을 갖는 TCR이 망라된다.
바람직하게 유전자 구조체를 상기 적절한 숙주 세포에 도입하는 형질주입 시스템은 레트로바이러스성 벡터 시스템이다. 그러한 시스템은 당업자에게 잘 알려져 있다.
한 구현에서 세포로부터 항원 인식 구조체의 분리 및 정제 그리고 임의적으로 T 세포에서 번역된 항원 인식 구조체-단편의 재구성에 대한 추가의 방법 단계 또한 본 발명에 포함된다.
본 발명의 대체 양태에서는, 본 문서에서 앞서 기술된 바와 같이 종양 세포에 대해 특이적이며 높은 결합도를 갖는 T 세포 수용체(TCR)의 생산 방법에 의해 T 세포가 제공되거나 획득되거나 획득될 수 있다. 이러한 T 세포는 본 발명의 방법에서 사용된 숙주 세포, 예를 들어 인간이나 비인간 T 세포, 바람직하게는 인간 TCR에 의존한다.
본 발명의 TCR, 폴리펩티드, 단백질(그 기능적 변이체 포함), 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포(그 모집단 포함) 그리고 항체(그 항원 결합 부분 포함)는 분리 및/또는 정제할 수 있다. 본 문서에서 사용된 "분리"란 용어는 그 자연 환경으로부터 제거됨을 의미한다. 본 문서에서 사용된 "정제"란 용어는 순도가 증가됨을 의미하며, 여기서 "순도"는 상대적 용어로 절대 순도로 해석해서는 안 된다. 예를 들어, 순도는 적어도 약 50%일 수 있으며 60%, 70%, 80%, 90%, 95%보다 클 수 있거나 100%일 수 있다.
본 발명의 항원 인식 구조체, TCR, 폴리펩티드, 단백질(그 기능적 변이체 포함), 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포(그 모집단 포함) 그리고 항체(그 항원 결합 부분 포함)는 본 문서에서 이하 집합적으로 "본 발명의 TCR 물질"로 지칭하며, 약학적 조성물과 같은 조성물로 배합할 수 있다. 이러한 점에서, 본 발명은 본 문서에서 기술한 항원 인식 구조체, TCR, 폴리펩티드, 단백질, 기능적 부분, 기능적 변이체, 핵산, 발현 벡터, 숙주 세포(그 모집단 포함) 및 항체(그 항원 결합 부분 포함) 그리고 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 및/또는 안정화제의 어느 하나를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 TCR 물질의 어느 하나를 포함하는 본 발명의 약학적 조성물은 하나보다 많은 본 발명의 TCR 물질(예: 폴리펩티드 및 핵산) 또는 2개 이상의 다른 TCR(그 기능적 부분 및 기능적 변이체 포함)을 포함할 수 있다. 대체적으로, 약학적 조성물이 화학요법 제제(예: 아스파라기나제, 부술판, 카보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시맙, 빈블라스틴, 빈크리스틴 등)와 같은 다른 약학적으로 활성인 제제(들)이나 약물(들)과의 조합으로 발명의 TCR 물질을 포함할 수 있다. 바람직하게, 담체는 약학적으로 허용가능한 담체이다. 약학적 조성물에 대하여, 담체는 고려 중인 본 발명의 특정적인 TCR 물질에 관계적으로 사용되는 담체 중 어느 하나일 수 있다. 그러한 약학적으로 허용 가능한 담체는 당업자에게 잘 알려져 있으며 일반 대중에게 즉시 제공될 수 있다. 약학적으로 허용가능한 담체는 사용 조건하에서 유해한 부작용이나 독성이 없는 것이 바람직하다.
그리하여 본 문서에서 기술된 본 발명의 제품 중 어느 하나 및 본 발명의 TCR 물질, 구체적으로 일체의 단백질, 핵산 또는 숙주 세포를 포함하는 약학적 조성물 또한 제공된다. 바람직한 한 구현에서 약학적 조성물은 면역 요법 바람직하게는 양자 세포 요법을 위한 것이다.
바람직하게, 본 발명의 TCR 물질은 주사, 예를 들어 정맥 내로 투여된다. 본 발명의 TCR 물질이 본 발명의 TCR(또는 그 기능적 변이체)을 발현하는 숙주 세포인 경우, 주입을 위한 세포의 약학적으로 허용 가능한 담체는 예를 들어, 생리학적 식염수(물에 든 약 0.90% w/v의 NaCl, 물에 든 약 300 mOsm/L의 NaCl, 또는 물 1리터당 약 9.0 g의 NaCl), NORMOSOL R 전해질 용액(Abbott, Chicago, IL), PLASMA-LYTE A(Baxter, Deerfield, IL), 물에 든 약 5% 덱스트로스 또는 링거 젖산액과 같은 일체의 등장성 담체를 포함할 수 있다. 한 구현에서 약학적으로 허용가능한 담체는 인간 혈청 알부멘으로 보완된다.
본 발명의 목적상, 투여되는 본 발명의 TCR 물질의 수량이나 용량(예: 본 발명의 TCR 물질이 하나 이상의 세포일 때 세포의 수)은 합당한 시간의 틀에 걸쳐 시험대상자나 동물에서 영향을 미치는 데(예: 치료 또는 예방 반응) 충분할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 TCR 물질의 용량은 암 항원과의 결합하거나, 투여 시점부터 약 2시간 이상의 기간 동안(예: 12 내지 24시간 이상) 암의 검출, 치료 또는 예방에 충분해야 한다. 특정 구현에서 상기 시간 기간은 더 길 수 있다. 상기 용량은 발명의 특정 TCR 물질의 유효성 그리고 동물(예: 인간)의 상태 그리고 치료할 동물(예: 인간)의 체중에 의해 결정될 것이다.
본 발명의 약학적 조성물, TCR(그 기능적 변이체 포함), 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포 또는 세포의 모집단을 암이나 COL6A3 양성 전암 상태의 치료나 예방의 방법에 사용할 수 있다고 사료된다. 세포에 의해 발현되는 경우, 본 발명의 TCR(또는 관련된 발명의 폴리펩티드 또는 단백질 및 그 기능적 변이체)이 본 발명의 COL6A3 항원을 발현하는 표적 세포에 대해 면역 반응을 매개할 수 있도록, COL6A3 항원에 특이적으로 결합되는 것으로 사료된다. 이러한 점에서 본 발명은 포유동물에서 한 병태, 특히 암의 치료나 예방의 방법을 제공하며, 상기 방법은 약학적 조성물, 항원 인식 구조체, 특히 TCR(및 그 기능적 변이체), 폴리펩티드, 또는 본 문서에서 기술한 단백질, 일체의 핵산 또는 어느 한 TCR(및 그 기능적 변이체)을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 재조합 발현 벡터, 폴리펩티드, 본 문서에서 기술한 단백질, 또는 일체의 숙주 세포나 본 발명의 일체의 구조체(및 그 기능적 변이체)를 인코딩하는 재조합 벡터를 포함하는 세포의 모집단, 폴리펩티드 또는 본 문서에서 기술한 단백질 중 어느 하나를 포유동물의 질병을 치료하기에 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하여, 여기서 병태는 암, 바람직하게는 COL6A3 양성 암이다.
본 발명에서 유용한 약학적으로 허용가능한 담체나 희석제의 예는 SPGA와 같은 안정화제, 탄수화물(예: 솔비톨, 만니톨, 전분, 수크로스, 포도당, 덱스트란), 알부민이나 카세인과 같은 단백질, 소 혈청이나 탈지유와 같은 단백질 함유 제제 그리고 완충액(예: 인산염 완충액)을 포함한다.
본 문서에서 사용된 "치료" 및 "예방"이라는 용어 그리고 그로부터 유래하는 단어들은 반드시 100% 또는 완전한 치료나 예방을 내포하는 것은 아니다. 대신, 다양한 정도의 치료나 예방이 있으며 당업자는 이익이나 치료 효과의 가능성을 갖는 것으로 이를 인식한다. 이러한 점에서 본 발명의 방법들은 포유동물의 병태에 대하여 일체의 수량이나 일체의 수준의 치료나 예방을 제공할 수 있다. 더욱이, 본 발명의 방법에 제공되는 치료나 예방은 치료나 예방 대상인 병태(예: 암) 또는 병태의 증상의 치료나 예방을 포함할 수 있다. 예들 들어, 치료나 예방은 종양의 퇴행 촉진을 포함할 수 있다. 또한 본 문서에서의 목적상, "예방"은 병태의 발생, 또는 증상 또는 그 병태를 지연시키는 것을 망라할 수 있다.
본 발명은 또한 본 설명의 TCR, 핵산 또는 숙주 세포와 적어도 하나의 화학 요법제 및/또는 방사선 요법과 병용하는 투여를 포함하는 암 치료의 방법에 관한 것이다.
또한 다음을 포함하는, 암 치료를 필요로 하는 시험대상자에서 암 치료의 방법이 제공된다:
a) 상기 시험대상자로부터 세포의 분리,
b) 형질전환된 세포의 생산을 위해 본 발명의 항원 인식 구조체를 인코딩하는 적어도 하나의 벡터를 갖는 세포의 형질전환,
c) 복수의 형질전환된 세포의 생산을 위해 형질전환된 세포의 팽창, 및
d) 복수의 형질전환된 세포의 상기 시험대상자에 대한 투여.
또한 다음을 포함하는, 암 치료를 필요로 하는 시험대상자에서 암 치료의 방법이 제공된다:
a) 건강한 공여자로부터 세포의 분리,
b) 형질전환된 세포의 생산을 위해 본 발명의 항원 인식 구조체를 인코딩하는 적어도 하나의 벡터를 갖는 세포의 형질전환,
c) 복수의 형질전환된 세포의 생산을 위해 형질전환된 세포의 팽창, 및
d) 복수의 형질전환된 세포의 상기 시험대상자에 대한 투여.
또한 다음을 포함하는, 생물학적 샘플에서의 암 검출의 방법이 제공된다:
a) 생물학적 샘플을 본 설명의 항원 인식 구조체와 접촉, 및
b) 생물학적 검출에 대한 항원 인식 구조체의 결합의 검출.
일부 구현에서 암 검출 방법은 시험관 내, 생체 내 또는 제자리에서 실행된다.
또한 포유동물에서 병태의 존재를 검출하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 (i) 포유동물의 하나 이상의 세포를 포함하는 샘플과 본 발명의 TCR(및 그 기능적 변이체), 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포, 세포의 모집단, 항체 또는 그 항원 결합 부분 또는 본 문서에서 기술한 약학적 조성물 중 어느 하나와의 접촉으로써 복합체 형성 및 복합체 검출을 포함하며, 여기에서 복합체 검출은 포유동물에서 병태가 존재함을 나타내며, 상기 병태는 COL6A3 양성 암과 같은 암이다.
포유동물에서 병태 검출에 대한 본 발명의 방법에 있어, 세포의 샘플은 전세포, 그 용해물, 또는 전세포 용해물의 분획(예: 핵이나 세포질 분획), 전체 단백질 분획 또는 핵산 분획을 포함하는 세포일 수 있다.
본 발명의 검출 방법의 목적을 위해, 접촉은 포유동물에 대해 시험관 내 또는 생체 내에서 반영할 수 있다. 바람직하게는 상기 접촉이 시험관 내이다.
또한 복합체의 검출은 당업계에 알려진 임의의 숫자의 방식을 통해 발생할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항원 인식 구조체(및 그 기능적 변이체), 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 재조합 발현 벡터, 숙주 세포, 세포의 모집단, 또는 항체 또는 TCR 또는 본 문서에서 기술한 그 항원 결합 부분을 예를 들어 방사성동위원소 형광단(예: 플루오레세인 이소티오시안산염(FITC), 피코에리트린(PE)), 효소(예: 알칼리성 인산분해효소, 양고추냉이 과산화효소) 및 원소 입자(예: 금 입자)와 같은 검출 가능한 표지자로 표지화할 수 있다.
숙주 세포나 세포의 모집단이 투여되는 본 발명의 방법의 목적상, 상기 세포는 포유동물에 대해 동종 또는 자가 세포일 수 있다. 바람직하게는 상기 세포는 포유동물에 대해 자가 세포이다.
앞서 언급된 본 발명의 TCR 물질의 의학적 적용에 있어, 치료 및 진단 대상 암은 일체의 암일 수 있으며, 급성 림프구성 암, 급성 골수성 백혈병, 포상 횡문근육종, 골암, 뇌암, 유방암, 항문의 암, 항문, 항문관 또는 직장항문의 암, 눈의 암, 간내 담관의 암, 관절의 암, 목, 방광 또는 흉막의 암, 코, 비강 또는 중이의 암, 구강의 암, 질의 암, 외음부의 암, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수암, 결장암, 식도암, 자궁경부암, 위장관계 카르시노이드 종양, 신경아교종, 호지킨 림프종, 하인두암, 신장암, 인두암, 간암, 폐암, 악성 중피종, 흑색종, 다발성 골수종, 비강인두암, 비호지킨 림프종, 구인두의 암, 난소암, 음경의 암, 췌장암, 복막, 망 및 장간막 암, 인두암, 전립선암, 직장암, 신장암, 피부암, 소장암, 연조직암, 위암, 고환암, 갑상선암, 자궁의 암, 요관암 및 방광암 중 어느 하나를 포함한다. 선호되는 암은 자궁 경부, 구인두, 항문, 항문관, 직장항문, 질, 외음부, 또는 음경의 암이다. 특히 선호되는 암은 위장관 및 위의 암 등과 같은 COL6A3 양성 암이다.
일반적으로, 본 발명은 본 발명에 의해 공개된 항원 인식 구조체, 핵산, 벡터, 약학적 조성물 및/또는 숙주 세포의 투여를 포함하는, 종양이나 종양 질환을 앓는 시험대상자의 치료를 위한 방법을 제공한다. 바람직하게는 상기 시험대상자가 그러한 치료를 필요로 하는 시험대상자이다. 바람직한 구현의 시험대상자는 포유동물 시험대상자, 바람직하게는 COL6A3 양성인 종양이나 종양 질환을 앓는 인간 환자이다.
이제 동반되는 도면 및 서열을 참조하여 비제한적인 하기 실시예에서 본 발명을 추가로 기술한다. 본 발명의 목적상 본 문서에 인용되는 모든 참조 문헌은 그 전문이 참조 문헌으로 포함된다.
도 1: COL6A3-002 펩티드(서열 식별 번호 58), (서열 식별 번호 59 내지 67)의 위치 1 내지 9에서의 다양한 COL6A3-002 알라닌 또는 글리신 치환 변이체, 또는 NYESO1-001 대조 펩티드(서열 식별 번호 68)가 적재된 K562-A2 표적 세포(Hirano N. et al; Blood. 2006 Feb 15;107(4):1528-36 참조)와 공동배양한 후, TCR R4P1D10(표 1)의 α 및 β 사슬 RNA로 각각 전기천공된 한 공여자의 인간 일차 CD8+ T 세포에 대한 IFNγ 방출(왼쪽 축) 그리고 HLA-A*02/COL6A3-002 사합체 염색(오른쪽 축).
도 2: COL6A3-002 펩티드(서열 식별 번호 58), 상동성이지만 관련 없는 펩티드 AGRN-001, CLASP-001, COL6A1-001, COL6A2-001, COL6A3-006, COL6A3-008, COL6A3-014, VWA2-001, VWF-001(서열 식별 번호 49 내지 57) 또는 NYESO1-001 대조 펩티드(서열 식별 번호 68)가 적재된 K562-A2 표적 세포와 공동배양한 후, TCR R4P1D10(표 1)의 α 및 β 사슬 RNA로 각각 전기천공된 한 공여자의 인간 일차 CD8+T 세포에 대한 IFNγ 방출(왼쪽 축) 그리고 HLA-A*02/COL6A3-002 사합체 염색(오른쪽 축). 전기천공된 CD8+ T 세포만(E만) 대조 역할을 한다.
도 3: TCR R4P1D10의 α 및 β 사슬 RNA 또는 NYESO1-001 특이적 대조 TCR 1G4(표 1)로 전기천공된 J.RT3-T3.5 세포의 HLA-A*02/COL6A3-002 사합체 및 HLA-A*02/NYESO1-001 사합체 염색. 모의 전기천공된 J.RT3-T3.5 세포가 대조 역할을 한다.
도 4: TCR R4P1D10의 α 및 β 사슬 RNA 또는 NYESO1-001 특이적 대조 TCR 1G4(표 1)로 전기천공된 SUP-T1 세포의 HLA-A*02/COL6A3-002 사합체 및 HLA-A*02/NYESO1-001 사합체 염색. 모의 전기천공된 SUP-T1 세포가 대조 역할을 한다.
도 5: TCR R4P1D10의 α 및 β 사슬 RNA 또는 NYESO1-001 특이적 대조 TCR 1G4(표 1)로 전기천공된 한 공여자의 인간 일차 CD8+ T 세포의 HLA-A*02/COL6A3-002 사합체 및 HLA-A*02/NYESO1-001 사합체 염색. 모의 전기천공된 CD8+ T 세포가 대조 역할을 한다.
도 6: COL6A3-002 펩티드(서열 식별 번호 58), (서열 식별 번호 59 내지 67)의 위치 1 내지 9에서 다양한 COL6A3-002 알라닌 또는 글리신 치환 변이체 또는 NYESO1-001 대조 펩티드(서열 식별 번호 68)를 적재한 K562-A2 표적 세포와 공동배양한 후, TCR R4P3F9(표 1)의 α 및 β 사슬 RNA로 각각 전기천공된 한 공여자의 인간 일차 CD8+ T 세포의 IFNγ 방출.
도 7: COL6A3-002 펩티드(서열 식별 번호 58), 상동성이지만 관련 없는 펩티드 AGRN-001, CLASP-001, COL6A1-001, COL6A2-001, COL6A3-006, COL6A3-008, COL6A3-014, VWA2-001, VWF-001(서열 식별 번호 49 내지 57) 또는 NYESO1-001 대조 펩티드(서열 식별 번호 68)를 적재한 K562-A2 표적 세포와 공동배양한 후, TCR R4P3F9(표 1)의 α 및 β 사슬 RNA로 각각 전기천공된 한 공여자의 인간 일차 CD8+ T 세포의 IFNγ 방출. 모의 전기천공된 CD8+ T 세포(E만)가 대조 역할을 한다.
도 8: TCR R4P3F9의 α 및 β 사슬 RNA 또는 NYESO1-001-특이적 대조 TCR 1G4(표 1)로 전기천공된 J.RT3-T3.5 세포의 HLA-A*02/COL6A3-002 사합체 및 HLA-A*02/NYESO1-001 사합체 염색. 모의 전기천공된 J.RT3-T3.5 세포가 대조 역할을 한다.
도 9: TCR R4P3F9의 α 및 β 사슬 RNA 또는 NYESO1-001 특이적 대조 TCR 1G4(표 1)로 전기천공된 SUP-T1 세포의 HLA-A*02/COL6A3-002 사합체 및 HLA-A*02/NYESO1-001 사합체 염색. 모의 전기천공된 SUP-T1 세포가 대조 역할을 한다.
도 10: COL6A3-002 펩티드(서열 식별 번호 58), (서열 식별 번호 59 내지 67)의 위치 1 내지 9에서 다양한 COL6A3-002 알라닌 또는 글리신 치환 변이체 또는 NYESO1-001 대조 펩티드(서열 식별 번호 68)를 적재한 K562-A2 표적 세포와 공동배양한 후, TCR R4P3H3(표 1)의 α 및 β 사슬 RNA로 각각 전기천공된 한 공여자의 인간 일차 CD8+ T 세포의 IFNγ 방출.
도 11: COL6A3-002 펩티드(서열 식별 번호 58), 상동성이지만 관련 없는 펩티드 AGRN-001, CLASP-001, COL6A1-001, COL6A2-001, COL6A3-006, COL6A3-008, COL6A3-014, VWA2-001, VWF-001(서열 식별 번호 49 내지 57) 또는 NYESO1-001 대조 펩티드(서열 식별 번호 68)를 적재한 K562-A2 표적 세포와 공동배양한 후, TCR R4P3H3(표 1)의 α 및 β 사슬 RNA로 각각 전기천공된 한 공여자의 인간 일차 CD8+ T 세포의 IFNγ 방출. 모의 전기천공된 CD8+ T 세포(E만)가 대조 역할을 한다.
도 12: TCR R4P3H3의 α 및 β 사슬 RNA 또는 NYESO1-001 특이적 대조 TCR 1G4(표 1)로 전기천공된 SUP-T1 세포의 HLA-A*02/COL6A3-002 사합체 및 HLA-A*02/NYESO1-001 사합체 염색. 모의 전기천공된 SUP-T1 세포가 대조 역할을 한다.
[표 1]
본 발명의 TCR 서열
Figure 112019021667512-pct00001
Figure 112019021667512-pct00002
Figure 112019021667512-pct00003
Figure 112019021667512-pct00004
Figure 112019021667512-pct00005
[표 2]
본 발명의 펩티드 서열
Figure 112019021667512-pct00006
실시예
한 양태에서, 자가 내성을 피하고 자가조직 환경 즉, 환자로부터 유래한 T 세포에 비해 결합성이 더 높은 T 세포를 산출하기 위해 동종 반응성 설정이 사용된다. 그러한 설정의 예로는 동종-HLA 반응성, 펩티드 특이적 T 세포의 시험관 내 생성(Sadovnikova et al. 1998; Savage et al. 2004; Wilde et al. 2012), 그리고 인간-MHC 또는 인간 TCR에 대한 유전자 삽입 마우스의 면역접종(Stanislawski et al. 2001; Li et al. 2010)이 포함되며, 이 각각의 전문이 참조 문헌으로 포함된다.
고결합성의 T 세포를 동종 반응성 환경으로부터 분리하기 위해, 사전 동의를 받은 후 HLA-A*02-음성의 건강한 공여자로부터 얻은 PBMC를 사용한다. COL6A3-002를 포함하는 재조합 비오틴화 HLA-A*02 클래스 I 단량체 및 A2 형광 사합체는 MBLI(매사추세츠주 Woburn)로부터 얻는다. PBMC는 인산 완충 식염수(PBS)로 희석된 항-CD20SA와 함께 실온에서 1시간 동안 배양한 후 세척하고, 비오틴화 HLA-A*02/COL6A3-002 단량체와 함께 실온에서 30분 동안 배양한 다음 세척하고 나서 10% 인간 AB 혈청과 함께 RPMI가 든 24-웰 플레이트에 3x106 세포/웰 비율로 배치했다. 인터루킨 7(IL-7; R&D Systems, 미네소타주 Minneapolis)을 제1일에 10 ng/mL로 첨가했으며, IL-2(Chiron, 영국 Harefield)는 제4일에 10 U/mL로 첨가했다. 5주의 기간에 걸쳐 세포를 새로운 PBMC로 매주 다시 자극하고 1:1의 비율로 반응자 세포와 혼합한 다음 24 웰 플레이트에 3x106/웰의 비율로 배치했다.
결합성이 높은 T 세포를 얻기 위해, 약 106개 PBMC를 HLA-A*02/COL6A3-002 사합체-피코에리트린(PE)(MBLI로부터 취득)과 함께 37°C에서 30분 동안 배양한 다음, 항-CD8-플루오레세인 이소티오네이트(FITC)/알로피코시아닌(APC)과 4°C에서 20분 동안 배양한 후 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 수행했다. 분류된 사합체-양성 세포를 24웰 플레이트에 팽창했으며, 이때 웰 당 2x105 분리된 세포, 피더로서 2x106 조사 A2-음성 PBMC, 2x104 CD3/CD28 비드/mL(Dynal, 노르웨이 오슬로) 및 IL-2(1000 U/mL)의 조건이 사용되었다. 그 다음 이렇게 얻은 고결합성 T 세포를 사용하여 단일 세포 5' RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)와 같은 당업계에 알려진 기법으로 TCR을 식별하고 분리했다. 그런 후, 비반복성 TCR DNA를 아미노산/DNA 서열 결정 및 발현 벡터로의 클로닝을 위해 분석했다.
각 종양 특이적 TCR-α 및 TCR-β 사슬을 인코딩하는 세 가지 COL6A3-002 특이적 TCR(R4P1D10, R4P3F9 및 R4P3H3, 표 2 참조)을 건강한 공여자의 T 세포로부터 분리하여 증폭시켰다. 건강한 공여자로부터 얻은 세포를 이전에 기술한 방법에 따라 시험관 내에서 자극했다(Walter et al., 2003 J Immunol., Nov 15;171(10):4974-8). 이전에 기술된 바와 같이 COL6A3 펩티드 제시를 수행했다(Hirano N. et al; Blood. 2006 Feb 15;107(4):1528-36). 표적 특이적 세포를 HLA-A*02 다합체를 사용하여 단일 세포 분류를 실시하고 나서, 차후 TCR 분리를 위해 사용했다. TCR 서열은 예를 들어 분자 클로닝 실험실 매뉴얼 제4판, Green and Sambrook에 기술된 표준 방법에 의해 5' RACE를 통해 분리했다. TCR인 R4P1D10, R4P3F9 및 R4P3H3의 α 및 β 가변 영역의 서열을 결정하고 클로닝하여 추가의 기능적 특성화를 수행했다. R4P1D10 및 R4P3H3은 HLA-A*02 양성 공여자로부터 유래하고 R4P3F9은 HLA-A*02는 음성 공유자(자가 반응성 환경)로부터 유래한다.
[표 3]
COL6A3-002 및 NYESO1-001 TCR의 SPR 친화도
Figure 112019021667512-pct00007
실시예 1: T 세포 수용체 R4P1D10
TCR R4P1D10 α 및 β 사슬을 이전에 기술된 바와 같이, 예를 들어 U.S. 8,519,100에 기술된 바와 같이 클로닝했으며, 그 내용은 그 전문이 상기 방법의 참조 문헌으로 본 문서에 포함된다. TCR R4P1D10이 HLA-A2로 제시된 COL6A3-002를 향해 제약된다(위의 표 3 참조).
[표 4]
R4P1D10 α 사슬의 특징
Figure 112019021667512-pct00008
[표 5]
R4P1D10 β 사슬의 특징
Figure 112019021667512-pct00009
R4P1D10은 HLA-A*02+ 표적 세포와 공동 배양 시 이 TCR 방출 IFNγ를 재발현하는 인간 일차 CD8+ T 세포로서 COL6A3-002를 인식하며, COL6A3-002 펩티드나 COL6A3-002의 알라닌 및 글리신 치환 변이체(도 1) 또는 COL6A3-002(도 2)에 대해 높은 정도의 서열 유사성을 보이는 다른 펩티드들로 각각 적재된 HLA-A*02 사합체들을 결합시킨다. NYESO1-001 펩티드가 음성 대조로 사용된다.
R4P1D10의 재발현은 HLA-A*02/COL6A3-002 사합체의 선택적 결합으로 이어지지만 J.RT3-T3.5 JurkaT 세포(도 3), SUP-T1 세포(도 4) 및 인간 일차 CD8+ T 세포(도 5)에서 HLA-A*02/NYESO1-001 사합체는 그렇지 않다. 각 세포 유형마다 NYESO1-001 특이적 TCR 1G4의 재발현 및 모의 발현이 대조로 사용된다.
이전에 기술된 방법(Willcox BE et al., 1999 Protein Sci., Nov;8(11):2418-23)에 따라 가용성 TCR로 표현되는 R4P1D10에 대한 SPR(표면 플라스몬 공명) 결합 분석 및 HLA-A*02/COL6A3-002 복합체는 KD =16μM(표 3)의 친화도를 나타낸다. 1G4 TCR 및 HLA-A*02/NYESO1-001에 대한 SPR 결합 데이터가 대조로 사용된다.
실시예 2: T 세포 수용체 R4P3F9
TCR R4P3F9 α 및 β 사슬을 이전에 기술된 바와 같이 예를 들어 U.S. 8,519,100에 기술된 바와 같이 클로닝했으며, 그 내용은 그 전문이 상기 방법의 참조 문헌으로 본 문서에 포함된다. TCR R4P3F9이 HLA-A2로 제시된 COL6A3-002를 향해 제약된다(위의 표 3 참조).
[표 6]
R4P3F9 α 사슬의 특징
Figure 112019021667512-pct00010
[표 7]
R4P3F9 β 사슬의 특징
Figure 112019021667512-pct00011
R4P3F9는 HLA-A*02+ 표적 세포와 공동 배양 시 이 TCR 방출 IFNγ를 재발현하는 인간 일차 CD8+ T 세포로서 COL6A3-002를 인식하며, 상기 표적 세포는 COL6A3-002 펩티드나 COL6A3-002의 알라닌 및 글리신 치환 변이체(도 6) 또는 COL6A3-002(도 7)에 대해 높은 정도의 서열 유사성을 보이는 다른 펩티드들로 각각 적재된다. NYESO1-001 펩티드가 음성 대조로 사용된다.
R4P3F9의 재발현은 HLA-A*02/COL6A3-002 사합체의 선택적 결합으로 이어지지만 J.RT3-T3.5 JurkaT 세포(도 8) 및 SUP-T1 세포(도 9)에서 HLA-A*02/NYESO1-001 사합체는 그렇지 않다. 각 세포 유형마다 NYESO1-001 특이적 TCR 1G4의 재발현 및 모의 발현이 대조로 사용된다.
이전에 기술된 방법(Willcox BE et al., 1999 Protein Sci., Nov;8(11):2418-23)에 따라 가용성 TCR로 표현되는 R4P3F9에 대한 SPR 결합 분석 및 HLA-A*02/COL6A3-002 복합체는 KD =62μM(표 3)의 친화도를 밝힌다. 1G4 TCR 및 HLA-A*02/NYESO1-001에 대한 SPR 결합 데이터가 대조로 사용된다.
실시예 3: T 세포 수용체 R4P3H3
TCR R4P3H3 α 및 β 사슬을 이전에 기술된 바와 같이 예를 들어 U.S. 8,519,100에 기술된 바와 같이 클로닝했으며, 그 내용은 그 전문이 상기 방법의 참조 문헌으로 본 문서에 포함된다. TCR R4P3H3이 HLA-A2로 제시된 COL6A3-002를 향해 제약된다(위의 표 3 참조).
[표 8]
R4P3H3 α 사슬의 특징
Figure 112019021667512-pct00012
[표 9]
R4P3H3 β 사슬의 특징
Figure 112019021667512-pct00013
R4P3H3은 HLA-A*02+ 표적 세포와 공동 배양 시 이 TCR 방출 IFNγ를 재발현하는 인간 일차 CD8+ T 세포로서 COL6A3-002를 인식하며, 이 표적 세포는 COL6A3-002 펩티드나 COL6A3-002의 알라닌 및 글리신 치환 변이체(도 10) 또는 COL6A3-002(도 11)에 대해 높은 정도의 서열 유사성을 보이는 다른 펩티드들로 각각 적재된다. NYESO1-001 펩티드가 음성 대조로 사용된다.
R4P3H3의 재발현은 HLA-A*02/COL6A3-002 사합체의 선택적 결합으로 이어지지만 SUP-T1 세포(도 12)에서 HLA-A*02/NYESO1-001 사합체는 그렇지 않다. NYESO1-001 특이적 TCR 1G4의 재발현 및 모의 발현이 대조로 사용된다.
이전에 기술된 방법(Willcox BE et al., 1999 Protein Sci., Nov;8(11):2418-23)에 따라 가용성 TCR로 표현되는 R4P3H3에 대한 SPR 결합 분석 및 HLA-A*02/COL6A3-002 복합체는 KD =102μM(표 3)의 친화도를 밝힌다. 1G4 TCR 및 HLA-A*02/NYESO1-001에 대한 SPR 결합 데이터가 대조로 사용된다.
SEQUENCE LISTING <110> Immatics Biotechnologies GmbH <120> T CELL RECEPTORS AND IMMUNE THERAPY USING THE SAME <130> I32978WO <140> PCT/EP2017/066630 <141> 2017-07-04 <150> DE 102016115246.3 <151> 2016-08-17 <150> US 62/376,059 <151> 2016-08-17 <150> US 62/376,632 <151> 2016-08-18 <160> 74 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Asp Arg Gly Ser Gln Ser 1 5 <210> 2 <211> 2 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ile Tyr 1 <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Cys Ala Val Asn Phe His Asp Lys Ile Ile Phe 1 5 10 <210> 4 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser 1 5 10 15 Trp Val Trp Ser Gln Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu 20 25 30 Ser Val Pro Glu Gly Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp 35 40 45 Arg Gly Ser Gln Ser Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser 50 55 60 Pro Glu Leu Ile Met Phe Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly 65 70 75 80 Arg Phe Thr Ala Gln Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu 85 90 95 Ile Arg Asp Ser Gln Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val 100 105 110 Asn <210> 5 <211> 141 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys 1 5 10 15 Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr 20 25 30 Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr 35 40 45 Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala 50 55 60 Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser 65 70 75 80 Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp 85 90 95 Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe 100 105 110 Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala 115 120 125 Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 130 135 140 <210> 6 <211> 271 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser 1 5 10 15 Trp Val Trp Ser Gln Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu 20 25 30 Ser Val Pro Glu Gly Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp 35 40 45 Arg Gly Ser Gln Ser Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser 50 55 60 Pro Glu Leu Ile Met Phe Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly 65 70 75 80 Arg Phe Thr Ala Gln Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu 85 90 95 Ile Arg Asp Ser Gln Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val 100 105 110 Asn Phe His Asp Lys Ile Ile Phe Gly Lys Gly Thr Arg Leu His Ile 115 120 125 Leu Pro Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp 130 135 140 Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser 145 150 155 160 Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp 165 170 175 Lys Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala 180 185 190 Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn 195 200 205 Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser 210 215 220 Cys Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu 225 230 235 240 Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys 245 250 255 Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 260 265 270 <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Ser Gly Asp Leu Ser 1 5 <210> 8 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu 1 5 <210> 9 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Cys Ala Ser Ser Val Ala Ser Ala Tyr Gly Tyr Thr Phe 1 5 10 <210> 10 <211> 114 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Met Gly Phe Arg Leu Leu Cys Cys Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala 1 5 10 15 Gly Pro Val Asp Ser Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys His Leu Ile Thr 20 25 30 Ala Thr Gly Gln Arg Val Thr Leu Arg Cys Ser Pro Arg Ser Gly Asp 35 40 45 Leu Ser Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Ser Leu Asp Gln Gly Leu Gln Phe 50 55 60 Leu Ile His Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu Arg Ala Lys Gly Asn Ile Leu 65 70 75 80 Glu Arg Phe Ser Ala Gln Gln Phe Pro Asp Leu His Ser Glu Leu Asn 85 90 95 Leu Ser Ser Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser 100 105 110 Ser Val <210> 11 <211> 177 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro 1 5 10 15 Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu 20 25 30 Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn 35 40 45 Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys 50 55 60 Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu 65 70 75 80 Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys 85 90 95 Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp 100 105 110 Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg 115 120 125 Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser 130 135 140 Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala 145 150 155 160 Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp 165 170 175 Phe <210> 12 <211> 308 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Met Gly Phe Arg Leu Leu Cys Cys Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala 1 5 10 15 Gly Pro Val Asp Ser Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys His Leu Ile Thr 20 25 30 Ala Thr Gly Gln Arg Val Thr Leu Arg Cys Ser Pro Arg Ser Gly Asp 35 40 45 Leu Ser Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Ser Leu Asp Gln Gly Leu Gln Phe 50 55 60 Leu Ile His Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu Arg Ala Lys Gly Asn Ile Leu 65 70 75 80 Glu Arg Phe Ser Ala Gln Gln Phe Pro Asp Leu His Ser Glu Leu Asn 85 90 95 Leu Ser Ser Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser 100 105 110 Ser Val Ala Ser Ala Tyr Gly Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Arg Leu 115 120 125 Thr Val Val Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val 130 135 140 Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu 145 150 155 160 Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp 165 170 175 Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln 180 185 190 Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser 195 200 205 Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His 210 215 220 Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp 225 230 235 240 Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala 245 250 255 Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln Gly 260 265 270 Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr 275 280 285 Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys 290 295 300 Arg Lys Asp Phe 305 <210> 13 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Asp Arg Gly Ser Gln Ser 1 5 <210> 14 <211> 2 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Ile Tyr 1 <210> 15 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Cys Ala Ala Tyr Ser Gly Ala Gly Ser Tyr Gln Leu Thr Phe 1 5 10 <210> 16 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser 1 5 10 15 Trp Val Trp Ser Gln Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu 20 25 30 Ser Val Pro Glu Gly Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp 35 40 45 Arg Gly Ser Gln Ser Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser 50 55 60 Pro Glu Leu Ile Met Phe Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly 65 70 75 80 Arg Phe Thr Ala Gln Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu 85 90 95 Ile Arg Asp Ser Gln Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala 100 105 110 <210> 17 <211> 141 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys 1 5 10 15 Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr 20 25 30 Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr 35 40 45 Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala 50 55 60 Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser 65 70 75 80 Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp 85 90 95 Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe 100 105 110 Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala 115 120 125 Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 130 135 140 <210> 18 <211> 274 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser 1 5 10 15 Trp Val Trp Ser Gln Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu 20 25 30 Ser Val Pro Glu Gly Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp 35 40 45 Arg Gly Ser Gln Ser Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser 50 55 60 Pro Glu Leu Ile Met Phe Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly 65 70 75 80 Arg Phe Thr Ala Gln Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu 85 90 95 Ile Arg Asp Ser Gln Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Ala 100 105 110 Tyr Ser Gly Ala Gly Ser Tyr Gln Leu Thr Phe Gly Lys Gly Thr Lys 115 120 125 Leu Ser Val Ile Pro Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln 130 135 140 Leu Arg Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp 145 150 155 160 Phe Asp Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr 165 170 175 Ile Thr Asp Lys Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser 180 185 190 Asn Ser Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn 195 200 205 Ala Phe Asn Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro 210 215 220 Glu Ser Ser Cys Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp 225 230 235 240 Thr Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu 245 250 255 Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp 260 265 270 Ser Ser <210> 19 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Ser Gly Asp Leu Ser 1 5 <210> 20 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu 1 5 <210> 21 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Cys Ala Ser Ser Val Glu Ser Ser Tyr Gly Tyr Thr Phe 1 5 10 <210> 22 <211> 114 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Met Gly Phe Arg Leu Leu Cys Cys Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala 1 5 10 15 Gly Pro Val Asp Ser Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys His Leu Ile Thr 20 25 30 Ala Thr Gly Gln Arg Val Thr Leu Arg Cys Ser Pro Arg Ser Gly Asp 35 40 45 Leu Ser Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Ser Leu Asp Gln Gly Leu Gln Phe 50 55 60 Leu Ile His Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu Arg Ala Lys Gly Asn Ile Leu 65 70 75 80 Glu Arg Phe Ser Ala Gln Gln Phe Pro Asp Leu His Ser Glu Leu Asn 85 90 95 Leu Ser Ser Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser 100 105 110 Ser Val <210> 23 <211> 177 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro 1 5 10 15 Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu 20 25 30 Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn 35 40 45 Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys 50 55 60 Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu 65 70 75 80 Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys 85 90 95 Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp 100 105 110 Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg 115 120 125 Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser 130 135 140 Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala 145 150 155 160 Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp 165 170 175 Phe <210> 24 <211> 308 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Met Gly Phe Arg Leu Leu Cys Cys Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala 1 5 10 15 Gly Pro Val Asp Ser Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys His Leu Ile Thr 20 25 30 Ala Thr Gly Gln Arg Val Thr Leu Arg Cys Ser Pro Arg Ser Gly Asp 35 40 45 Leu Ser Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Ser Leu Asp Gln Gly Leu Gln Phe 50 55 60 Leu Ile Gln Tyr Tyr Asn Gly Glu Glu Arg Ala Lys Gly Asn Ile Leu 65 70 75 80 Glu Arg Phe Ser Ala Gln Gln Phe Pro Asp Leu His Ser Glu Leu Asn 85 90 95 Leu Ser Ser Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser 100 105 110 Ser Val Glu Ser Ser Tyr Gly Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Arg Leu 115 120 125 Thr Val Val Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val 130 135 140 Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu 145 150 155 160 Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp 165 170 175 Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln 180 185 190 Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser 195 200 205 Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His 210 215 220 Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp 225 230 235 240 Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala 245 250 255 Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln Gly 260 265 270 Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr 275 280 285 Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys 290 295 300 Arg Lys Asp Phe 305 <210> 25 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Asp Arg Gly Ser Gln Ser 1 5 <210> 26 <211> 2 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Ile Tyr 1 <210> 27 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Cys Ala Val Lys Ala Gly Asn Gln Phe Tyr Phe 1 5 10 <210> 28 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser 1 5 10 15 Trp Val Trp Ser Gln Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu 20 25 30 Ser Val Pro Glu Gly Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp 35 40 45 Arg Gly Ser Gln Ser Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser 50 55 60 Pro Glu Leu Ile Met Phe Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly 65 70 75 80 Arg Phe Thr Ala Gln Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu 85 90 95 Ile Arg Asp Ser Gln Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val 100 105 110 <210> 29 <211> 141 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys 1 5 10 15 Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr 20 25 30 Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr 35 40 45 Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala 50 55 60 Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser 65 70 75 80 Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp 85 90 95 Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe 100 105 110 Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala 115 120 125 Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 130 135 140 <210> 30 <211> 271 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser 1 5 10 15 Trp Val Trp Ser Gln Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu 20 25 30 Ser Val Pro Glu Gly Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp 35 40 45 Arg Gly Ser Gln Ser Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser 50 55 60 Pro Glu Leu Ile Met Phe Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly 65 70 75 80 Arg Phe Thr Ala Gln Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu 85 90 95 Ile Arg Asp Ser Gln Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val 100 105 110 Lys Ala Gly Asn Gln Phe Tyr Phe Gly Thr Gly Thr Ser Leu Thr Val 115 120 125 Ile Pro Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp 130 135 140 Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser 145 150 155 160 Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp 165 170 175 Lys Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala 180 185 190 Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn 195 200 205 Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser 210 215 220 Cys Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu 225 230 235 240 Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys 245 250 255 Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 260 265 270 <210> 31 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Ser Gly His Val Ser 1 5 <210> 32 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Phe Gln Asn Glu Ala Gln 1 5 <210> 33 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Cys Ala Ser Ser Leu Leu Thr Ser Gly Gly Asp Asn Glu Gln Phe Phe 1 5 10 15 <210> 34 <211> 115 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Met Gly Thr Arg Leu Leu Cys Trp Val Val Leu Gly Phe Leu Gly Thr 1 5 10 15 Asp His Thr Gly Ala Gly Val Ser Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Val Ala 20 25 30 Lys Arg Gly Gln Asp Val Ala Leu Arg Cys Asp Pro Ile Ser Gly His 35 40 45 Val Ser Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Ala Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe 50 55 60 Leu Thr Tyr Phe Gln Asn Glu Ala Gln Leu Asp Lys Ser Gly Leu Pro 65 70 75 80 Ser Asp Arg Phe Phe Ala Glu Arg Pro Glu Gly Ser Val Ser Thr Leu 85 90 95 Lys Ile Gln Arg Thr Gln Gln Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala 100 105 110 Ser Ser Leu 115 <210> 35 <211> 179 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro 1 5 10 15 Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu 20 25 30 Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn 35 40 45 Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys 50 55 60 Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu 65 70 75 80 Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys 85 90 95 Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp 100 105 110 Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg 115 120 125 Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser 130 135 140 Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala 145 150 155 160 Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp 165 170 175 Ser Arg Gly <210> 36 <211> 314 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Met Gly Thr Arg Leu Leu Cys Trp Val Val Leu Gly Phe Leu Gly Thr 1 5 10 15 Asp His Thr Gly Ala Gly Val Ser Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Val Ala 20 25 30 Lys Arg Gly Gln Asp Val Ala Leu Arg Cys Asp Pro Ile Ser Gly His 35 40 45 Val Ser Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Ala Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe 50 55 60 Leu Thr Tyr Phe Gln Asn Glu Ala Gln Leu Asp Lys Ser Gly Leu Pro 65 70 75 80 Ser Asp Arg Phe Phe Ala Glu Arg Pro Glu Gly Ser Val Ser Thr Leu 85 90 95 Lys Ile Gln Arg Thr Gln Gln Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala 100 105 110 Ser Ser Leu Leu Thr Ser Gly Gly Asp Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro 115 120 125 Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro 130 135 140 Glu Val Ala Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln 145 150 155 160 Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val 165 170 175 Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser 180 185 190 Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg 195 200 205 Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn 210 215 220 Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu 225 230 235 240 Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val 245 250 255 Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser 260 265 270 Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu 275 280 285 Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met 290 295 300 Ala Met Val Lys Arg Lys Asp Ser Arg Gly 305 310 <210> 37 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Asp Ser Ala Ile Tyr Asn 1 5 <210> 38 <211> 3 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Ile Gln Ser 1 <210> 39 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Cys Ala Val Arg Pro Thr Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Pro Thr Phe 1 5 10 15 <210> 40 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 Met Glu Thr Leu Leu Gly Leu Leu Ile Leu Trp Leu Gln Leu Gln Trp 1 5 10 15 Val Ser Ser Lys Gln Glu Val Thr Gln Ile Pro Ala Ala Leu Ser Val 20 25 30 Pro Glu Gly Glu Asn Leu Val Leu Asn Cys Ser Phe Thr Asp Ser Ala 35 40 45 Ile Tyr Asn Leu Gln Trp Phe Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Leu Thr 50 55 60 Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Ser Gln Arg Glu Gln Thr Ser Gly Arg 65 70 75 80 Leu Asn Ala Ser Leu Asp Lys Ser Ser Gly Arg Ser Thr Leu Tyr Ile 85 90 95 Ala Ala Ser Gln Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Arg 100 105 110 <210> 41 <211> 141 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Tyr Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys 1 5 10 15 Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr 20 25 30 Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr 35 40 45 Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala 50 55 60 Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser 65 70 75 80 Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp 85 90 95 Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe 100 105 110 Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala 115 120 125 Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 130 135 140 <210> 42 <211> 274 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Met Glu Thr Leu Leu Gly Leu Leu Ile Leu Trp Leu Gln Leu Gln Trp 1 5 10 15 Val Ser Ser Lys Gln Glu Val Thr Gln Ile Pro Ala Ala Leu Ser Val 20 25 30 Pro Glu Gly Glu Asn Leu Val Leu Asn Cys Ser Phe Thr Asp Ser Ala 35 40 45 Ile Tyr Asn Leu Gln Trp Phe Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Leu Thr 50 55 60 Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Ser Gln Arg Glu Gln Thr Ser Gly Arg 65 70 75 80 Leu Asn Ala Ser Leu Asp Lys Ser Ser Gly Arg Ser Thr Leu Tyr Ile 85 90 95 Ala Ala Ser Gln Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Arg 100 105 110 Pro Thr Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Pro Thr Phe Gly Arg Gly Thr Ser 115 120 125 Leu Ile Val His Pro Tyr Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln 130 135 140 Leu Arg Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp 145 150 155 160 Phe Asp Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr 165 170 175 Ile Thr Asp Lys Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser 180 185 190 Asn Ser Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn 195 200 205 Ala Phe Asn Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro 210 215 220 Glu Ser Ser Cys Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp 225 230 235 240 Thr Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu 245 250 255 Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp 260 265 270 Ser Ser <210> 43 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43 Met Asn His Glu Tyr 1 5 <210> 44 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Ser Val Gly Ala Gly Ile 1 5 <210> 45 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Cys Ala Ser Ser Tyr Val Gly Asn Thr Gly Glu Leu Phe Phe 1 5 10 <210> 46 <211> 114 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Met Ser Ile Gly Leu Leu Cys Cys Ala Ala Leu Ser Leu Leu Trp Ala 1 5 10 15 Gly Pro Val Asn Ala Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys Phe Gln Val Leu 20 25 30 Lys Thr Gly Gln Ser Met Thr Leu Gln Cys Ala Gln Asp Met Asn His 35 40 45 Glu Tyr Met Ser Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Met Gly Leu Arg Leu 50 55 60 Ile His Tyr Ser Val Gly Ala Gly Ile Thr Asp Gln Gly Glu Val Pro 65 70 75 80 Asn Gly Tyr Asn Val Ser Arg Ser Thr Thr Glu Asp Phe Pro Leu Arg 85 90 95 Leu Leu Ser Ala Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Tyr Phe Cys Ala Ser 100 105 110 Ser Tyr <210> 47 <211> 179 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47 Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro 1 5 10 15 Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu 20 25 30 Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn 35 40 45 Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys 50 55 60 Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu 65 70 75 80 Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys 85 90 95 Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp 100 105 110 Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg 115 120 125 Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser 130 135 140 Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala 145 150 155 160 Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp 165 170 175 Ser Arg Gly <210> 48 <211> 311 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Met Ser Ile Gly Leu Leu Cys Cys Ala Ala Leu Ser Leu Leu Trp Ala 1 5 10 15 Gly Pro Val Asn Ala Gly Val Thr Gln Thr Pro Lys Phe Gln Val Leu 20 25 30 Lys Thr Gly Gln Ser Met Thr Leu Gln Cys Ala Gln Asp Met Asn His 35 40 45 Glu Tyr Met Ser Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Met Gly Leu Arg Leu 50 55 60 Ile His Tyr Ser Val Gly Ala Gly Ile Thr Asp Gln Gly Glu Val Pro 65 70 75 80 Asn Gly Tyr Asn Val Ser Arg Ser Thr Thr Glu Asp Phe Pro Leu Arg 85 90 95 Leu Leu Ser Ala Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Tyr Phe Cys Ala Ser 100 105 110 Ser Tyr Val Gly Asn Thr Gly Glu Leu Phe Phe Gly Glu Gly Ser Arg 115 120 125 Leu Thr Val Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala 130 135 140 Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr 145 150 155 160 Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser 165 170 175 Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro 180 185 190 Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu 195 200 205 Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn 210 215 220 His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu 225 230 235 240 Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu 245 250 255 Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln 260 265 270 Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala 275 280 285 Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val 290 295 300 Lys Arg Lys Asp Ser Arg Gly 305 310 <210> 49 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Ala Leu Leu Asp Gly Arg Val Gln Leu 1 5 <210> 50 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Arg Leu Leu Asp Gly Ala Phe Lys Leu 1 5 <210> 51 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Ile Leu Leu Asp Gly Ser Ala Ser Val 1 5 <210> 52 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Phe Leu Leu Asp Gly Ser Glu Arg Leu 1 5 <210> 53 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 Phe Leu Phe Asp Gly Ser Ala Asn Leu Val 1 5 10 <210> 54 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54 Phe Leu Phe Asp Gly Ser Ala Asn Leu 1 5 <210> 55 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Phe Leu Leu Asp Gly Ser Glu Gly Val 1 5 <210> 56 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Phe Leu Leu Asp Gly Ser Asn Ser Val 1 5 <210> 57 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Phe Leu Leu Asp Gly Ser Ser Arg Leu 1 5 <210> 58 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58 Phe Leu Leu Asp Gly Ser Ala Asn Val 1 5 <210> 59 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 Ala Leu Leu Asp Gly Ser Ala Asn Val 1 5 <210> 60 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60 Phe Ala Leu Asp Gly Ser Ala Asn Val 1 5 <210> 61 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61 Phe Leu Ala Asp Gly Ser Ala Asn Val 1 5 <210> 62 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Phe Leu Leu Ala Gly Ser Ala Asn Val 1 5 <210> 63 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 Phe Leu Leu Asp Ala Ser Ala Asn Val 1 5 <210> 64 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Phe Leu Leu Asp Gly Ala Ala Asn Val 1 5 <210> 65 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Phe Leu Leu Asp Gly Ser Gly Asn Val 1 5 <210> 66 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66 Phe Leu Leu Asp Gly Ser Ala Ala Val 1 5 <210> 67 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67 Phe Leu Leu Asp Gly Ser Ala Asn Ala 1 5 <210> 68 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Val 1 5 <210> 69 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69 Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser 1 5 10 15 Trp Val Trp Ser Gln 20 <210> 70 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70 Met Gly Phe Arg Leu Leu Cys Cys Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala 1 5 10 15 Gly Pro Val <210> 71 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71 Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser 1 5 10 15 Trp Val Trp Ser Gln 20 <210> 72 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72 Met Gly Phe Arg Leu Leu Cys Cys Val Ala Phe Cys Leu Leu Gly Ala 1 5 10 15 Gly Pro Val <210> 73 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73 Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser 1 5 10 15 Trp Val Trp Ser Gln 20 <210> 74 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 74 Met Gly Thr Arg Leu Leu Cys Trp Val Val Leu Gly Phe Leu Gly Thr 1 5 10 15 Asp His Thr

Claims (20)

  1. 서열 식별 번호 58의 아미노산 서열을 갖는 COL6A3 항원성 펩티드에 특이적으로 또는 선택적으로 결합하는 항원 인식 구조체로서,
    상기 항원 인식 구조체가 T 세포 수용체(TCR), 또는 그 유도체 또는 단편이고,
    상기 항원 인식 구조체가
    (i) 각각 서열 식별 번호 13, 14 및 15의 아미노산 서열을 갖는 보완 결정 영역(CDR)1, CDR2 및 CDR3 및 각각 서열 식별 번호 19, 20 및 21의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2 및 CDR3;
    (ii) 각각 서열 식별 번호 1, 2 및 3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 각각 서열 식별 번호 7, 8 및 9의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2 및 CDR3; 또는
    (iii) 각각 서열 식별 번호 25, 26 및 27의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2 및 CDR3 및 각각 서열 식별 번호 31, 32 및 33의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2 및 CDR3;
    을 포함하는, 항원 인식 구조체.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 항원 인식 구조체가 단일 사슬 TCR (scTCR)인, 항원 인식 구조체.
  3. 제1항에 있어서,
    TCR 알파 가변 사슬 영역 및 TCR 베타 가변 사슬 영역을 포함하는 항원 인식 구조체로서,
    (i) 상기 TCR 알파 가변 사슬 영역은 서열 식별 번호 16의 아미노산 서열을 가지고, TCR 알파 가변 사슬 영역은 서열 식별 번호 13, 14 및 15의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하고,
    상기 TCR 베타 가변 사슬 영역은 서열 식별 번호 22의 아미노산 서열을 가지고, TCR 베타 가변 사슬 영역은 서열 식별 번호 19, 20 및 21의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하고,
    (ii) 상기 TCR 알파 가변 사슬 영역은 서열 식별 번호 4의 아미노산 서열을 가지고, TCR 알파 가변 사슬 영역은 서열 식별 번호 1, 2 및 3의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하고,
    상기 TCR 베타 가변 사슬 영역은 서열 식별 번호 10의 아미노산 서열을 가지고, TCR 베타 가변 사슬 영역은 서열 식별 번호 7, 8 및 9의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하고, 또는
    (iii) 상기 TCR 알파 가변 사슬 영역은 서열 식별 번호 28의 아미노산 서열을 가지고, TCR 알파 가변 사슬 영역은 서열 식별 번호 25, 26 및 27의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하고,
    상기 TCR 베타 가변 사슬 영역은 서열 식별 번호 34의 아미노산 서열을 가지고, TCR 베타 가변 사슬 영역은 서열 식별 번호 31, 32 및 33의 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는,
    항원 인식 구조체.
  4. 제1항에 있어서,
    TCR α 또는 γ사슬, 및 TCR β 또는 δ사슬을 포함하는, 항원 인식 구조체.
  5. 제1항에 있어서,
    항원 인식 구조체가 TCR α 사슬 및 TCR β 사슬로 구성된 TCR 또는 그 단편이고, 상기 TCR이 서열 식별 번호 17 및 23의 아미노산 서열에 따른 α 사슬 및 β사슬; 서열 식별 번호 5 및 11의 아미노산 서열에 따른 α 사슬 및 β사슬; 및 서열 식별 번호 29 및 35에 따른 α 사슬 및 β사슬로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 불변 영역을 추가로 포함하는 항원 인식 구조체.
  6. 제1항에 따른 항원 인식 구조체를 인코딩하는 핵산.
  7. 제6항에 따른 핵산을 포함하는 벡터.
  8. 제1항에 따른 항원 인식 구조체, 상기 항원 인식 구조체를 인코딩하는 핵산, 또는 상기 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  9. (i) 제1항에 따른 항원 인식 구조체;
    (ii) 상기 항원 인식 구조체를 인코딩하는 핵산;
    (iii) 상기 핵산을 포함하는 벡터; 또는
    (iv) 상기 항원 인식 구조체, 핵산 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포;
    및 약학적으로 허용되는 담체, 안정화제 및 부형제에서 선택된 하나 이상을 포함하는, 암 진단, 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물.
  10. 암 진단, 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 제1항에 따른 항원 인식 구조체.
  11. 제6항에 있어서,
    암의 진단, 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 핵산.
  12. 제7항에 있어서,
    암의 진단, 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 벡터.
  13. 제8항에 있어서,
    암의 진단, 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 숙주 세포.
  14. 세포주를 발현하는 COL6A3 특이적 항원 인식 구조체의 제조 방법에 있어서,
    a. 적절한 숙주 세포를 제공하는 단계,
    b. 제1항에 따른 항원 인식 구조체를 인코딩하는 코딩 서열을 포함하는 유전자 구조체를 제공하는 단계,
    c. 상기 적절한 숙주 세포 안으로 상기 유전자 구조체를 도입하는 단계, 및
    d. 상기 적절한 숙주 세포에 의해 상기 유전자 구조체를 발현하는 단계
    를 포함하는 방법.
  15. 제14항에 있어서,
    적절한 숙주 세포로부터 항원 인식 구조체를 분리 및 정제하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  16. 제15항에 있어서,
    T-세포에서 항원 인식 구조체를 재구성하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 삭제
KR1020197006315A 2016-08-17 2017-07-04 T 세포 수용체 및 이를 사용하는 면역 요법 KR102381854B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020227010365A KR20220044870A (ko) 2016-08-17 2017-07-04 T 세포 수용체 및 이를 사용하는 면역 요법

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662376059P 2016-08-17 2016-08-17
US62/376,059 2016-08-17
DE102016115246.3 2016-08-17
DE102016115246.3A DE102016115246C5 (de) 2016-08-17 2016-08-17 Neue t-zellrezeptoren und deren verwendung in immuntherapie
US201662376632P 2016-08-18 2016-08-18
US62/376,632 2016-08-18
PCT/EP2017/066630 WO2018033291A1 (en) 2016-08-17 2017-07-04 T cell receptors and immune therapy using the same

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227010365A Division KR20220044870A (ko) 2016-08-17 2017-07-04 T 세포 수용체 및 이를 사용하는 면역 요법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20190039182A KR20190039182A (ko) 2019-04-10
KR102381854B1 true KR102381854B1 (ko) 2022-04-04

Family

ID=66635579

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227010365A KR20220044870A (ko) 2016-08-17 2017-07-04 T 세포 수용체 및 이를 사용하는 면역 요법
KR1020197006315A KR102381854B1 (ko) 2016-08-17 2017-07-04 T 세포 수용체 및 이를 사용하는 면역 요법

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227010365A KR20220044870A (ko) 2016-08-17 2017-07-04 T 세포 수용체 및 이를 사용하는 면역 요법

Country Status (16)

Country Link
EP (1) EP3978520A1 (ko)
KR (2) KR20220044870A (ko)
CO (1) CO2019002229A2 (ko)
CY (1) CY1124826T1 (ko)
ES (1) ES2897921T3 (ko)
HR (1) HRP20211677T1 (ko)
HU (1) HUE057094T2 (ko)
IL (1) IL264855B2 (ko)
MD (1) MD3500593T2 (ko)
MY (1) MY195101A (ko)
NZ (1) NZ750479A (ko)
PL (1) PL3500593T3 (ko)
PT (1) PT3500593T (ko)
SI (1) SI3500593T1 (ko)
TW (1) TWI790162B (ko)
UA (1) UA127162C2 (ko)

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0546073B1 (en) 1990-08-29 1997-09-10 GenPharm International, Inc. production and use of transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
US20020197266A1 (en) 2000-02-08 2002-12-26 Waldemar Debinski Immunotherapy using interleukin 13 receptor subunit alpha 2
GB0911566D0 (en) 2009-07-03 2009-08-12 Immunocore Ltd T cell receptors
US9228007B1 (en) * 2010-03-11 2016-01-05 The Regents Of The University Of California Recombinant human progenitor cells, engineered human thymocytes, and engineered human T cells
GB201004551D0 (en) * 2010-03-19 2010-05-05 Immatics Biotechnologies Gmbh NOvel immunotherapy against several tumors including gastrointestinal and gastric cancer
TWI777194B (zh) * 2013-08-05 2022-09-11 德商伊瑪提克斯生物科技有限公司 新穎肽類，細胞及其用於治療多種腫瘤的用途，其製造方法及包含其等之醫藥組成物（一）
JP7113618B2 (ja) 2014-07-15 2022-08-05 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 養子細胞療法用の操作された細胞

Also Published As

Publication number Publication date
HUE057094T2 (hu) 2022-04-28
KR20190039182A (ko) 2019-04-10
IL264855A (ko) 2019-03-31
MD3500593T2 (ro) 2021-12-31
CY1124826T1 (el) 2022-11-25
EP3978520A1 (en) 2022-04-06
PT3500593T (pt) 2021-11-04
MY195101A (en) 2023-01-10
SI3500593T1 (sl) 2021-12-31
TWI790162B (zh) 2023-01-11
HRP20211677T1 (hr) 2022-02-18
IL264855B2 (en) 2023-09-01
KR20220044870A (ko) 2022-04-11
CO2019002229A2 (es) 2019-05-31
TW202233690A (zh) 2022-09-01
NZ750479A (en) 2021-12-24
PL3500593T3 (pl) 2022-01-03
IL264855B1 (en) 2023-05-01
ES2897921T3 (es) 2022-03-03
UA127162C2 (uk) 2023-05-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10526407B2 (en) T cell receptors and immune therapy using the same
TWI736719B (zh) 新型t 細胞受體及其免疫治療應用
TWI735765B (zh) T細胞受體及其針對prame陽性癌症的免疫治療
US20200249233A1 (en) Novel t cell receptors and immune therapy using the same
KR102375218B1 (ko) T 세포 수용체 및 이를 사용하는 면역 요법
US11111294B2 (en) T cell receptors and immune therapy using the same
US11939376B2 (en) T cell receptors and immune therapy using the same
KR20190132655A (ko) T 세포 수용체, 및 이를 사용하는 흑색종의 우선적 발현 항원(prame) 양성 암에 대한 면역 요법
KR102381854B1 (ko) T 세포 수용체 및 이를 사용하는 면역 요법

Legal Events

Date Code Title Description
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant