KR102375328B1 - Tert 면역원성 조성물 및 이를 이용한 치료 방법 - Google Patents
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Abstract
본 명세서에서는 최적화된 공통 TERT 항원을 포함하는 조성물 및 암의 치료 방법, 그리고 특히 종양을 치료하고 종양에 대한 방어를 제공하는 면역원성 조성물이 개시되어 있다.
Description
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 미국 가출원 제62/402,695호(출원일: 2016년 9월 30일) 및 미국 가출원 제62/468,124호(출원일: 2017년 3월 7일)에 대한 우선권을 주장하며, 이들은 이들의 전문이 참고로 본 명세서에 원용된다
기술 분야
본 명세서에는 암의 치료를 위한 조성물 및 방법, 특히, 종양 성장을 치료하고 종양에 대한 방어를 제공하는 면역원성 조성물(immunogenic composition)이 개시되어 있다.
암은 전세계적으로 사망의 주요 원인 중 하나이며, 이는 미국에서 2번째로 흔한 사망 원인으로, 사망의 거의 1/4를 차지한다. 암은 정상 세포가 종양 세포로 변형되었던 단일 세포로부터 야기된다. 그러한 변형은 종종 다단식 과정이며, 전암성 병변으로부터 악성 종양으로 진행하게 된다. 다수 인자가 이러한 진행에 기여하게 되는데, 이는 노화, 유전적 기여, 및 물리적 발암물질(예컨대, 자외선 및 이온화 방사선)과 같은 외부 물질에 대한 노출, 화학적 발암물질(예컨대, 석면, 담배 연기 성분 등) 및 생물학적 발암물질(예컨대, 특정 바이러스, 박테리아 및 기생충)을 포함한다.
암의 예방, 진단, 및 치료는 많은 상이한 형태를 취할 수 있다. 예방은 소인적 인자에 대한 스크리닝(예컨대, 특정 유전적 변이체), 행동 변화(예컨대, 식단 및 신체적 활동의 양) 및 바이러스에 대한 백신접종(예컨대, 인간 유두종 바이러스 B형 간염 바이러스)을 포함할 수 있다. 치료는 화학요법, 방사선 요법, 및 종양 또는 암성 조직의 수술적 제거를 포함할 수 있다. 많은 예방 및 치료 방법의 이용가능성에도 불구하고, 그러한 방법들은 종종 암을 빠른 시일 내에 효과적으로 예방 및/또는 치료하는 것에 있어 제한된 성공만을 충족시킨다.
따라서, 질환 및 이의 진행에 대한 방어의 임상 관리를 촉진하기 위한 암의 예방 및/또는 치료를 위한 조성물 및 방법의 식별 및 발전에 대한 필요성이 존재한다. 더욱이, 암을 앓고 있는 대상체에 질환 진행을 지연시키고/시키거나 사망률을 감소시키기 위하여 더욱 효과적인 치료가 필요하다.
일 실시형태에 있어서, 본 발명은 공통(consensus) TERT 항원을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 일 실시형태에 있어서, 공통 TERT 항원은, a) 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 및 서열번호 56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, b) 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 및 서열번호 56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해서 95% 이상 동일한 아미노산 서열, 및 c) 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 및 서열번호 56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하되, 여기서 단편은 전장 아미노산 서열의 적어도 95%를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 면역원성 조성물은 a) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 58, 서열번호 60, 서열번호 62, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 서열번호 70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열; b) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 58, 서열번호 60, 서열번호 62, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 서열번호 70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산에 대해서 95% 이상 동일한 아미노산 서열, 및 c) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 58, 서열번호 60, 서열번호 62, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 서열번호 70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열의 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 암호화하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 더 포함하되, 여기서, 단편은 전장 아미노산 서열의 적어도 95%를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 면역원성 조성물은 MAGE A1, gp100, 바이러스 항원, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 더 포함한다. 일 실시형태에 있어서, 바이러스 항원은 B형 간염 바이러스(HBV), C형 간염 바이러스(HCV) 또는 인유두종 바이러스(HPV)로부터 유래된 항원이다. 일 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 코어 항원 또는 HBV 표면 항원, 또는 이들의 조합이다. 일 실시형태에 있어서, HCV 항원은 HCV NS34A 항원, HCV NS5A 항원, HCV NS5B 항원, HCV NS4B 항원, 또는 이들의 조합이다. 일 실시형태에 있어서, HPV 항원은 HPV 유형 6 E6 항원, HPV 유형 6 E7 항원, HPV 유형 11 E6 항원, HPV 유형 11 E7 항원, HPV 유형 16 E6 항원, HPV 유형 16 E7 항원, HPV 유형 18 E6 항원, HPV 유형 18 E7 항원, 또는 이들의 조합이다.
일 실시형태에 있어서, 면역원성 조성물은 면역관문 저해제(immune checkpoint inhibitor)를 더 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 핵산 분자는 a) 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 및 서열번호 55로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열, b) 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 및 서열번호 55로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열에 대해서 95% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열, 및 c) 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 및 서열번호 55로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 여기서 단편은 전장 아미노산 서열의 적어도 95%를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 면역원성 조성물은 a) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67 및 서열번호 69로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; b) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67 및 서열번호 69로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열에 대해서 95% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열, 및 c) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67 및 서열번호 69로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 여기서 단편은 전장 뉴클레오타이드 서열의 적어도 95%를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 핵산 분자는 플라스미드이다.
일 실시형태에 있어서, 면역원성 조성물은 하나 이상의 플라스미드를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 면역원성 조성물은 애주번트를 더 포함한다. 일 실시형태에 있어서, 애주번트는 IL-12, IL-15, IL-28 또는 RANTES이다.
일 실시형태에 있어서, 본 발명은 암의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 암을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이며, 해당 방법은 공통 TERT 항원을 암호화는 핵산 분자를 포함하는 면역원성 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에 있어서, 투여 방법은 전기천공(Electroporation) 단계를 포함한다. 일 실시형태에 있어서, 방법은 대상체에게 면역관문 저해제를 투여하는 단계를 더 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 면역원성 조성물과 면역관문 저해제는 대상체에게 단일 제형으로 투여된다. 일 실시형태에 있어서, 면역원성 조성물과 면역관문 저해제는 대상체에게 개별적으로 투여된다.
일 실시형태에 있어서, 암은 흑색종, 두경부암, 전립선암, 간암, 자궁경부암, 재발성 호흡기 유두종증(RRP), 항문암, 혈액암, 난소암 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시형태에 있어서, 본 발명은 a) 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 및 서열번호 55로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열, b) 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 및 서열번호 55로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열에 대해서 95% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열, 및 c) 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 및 서열번호 55로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자에 관한 것으로, 여기서 단편은 전장 뉴클레오타이드 서열의 적어도 95%를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 핵산 분자는 a) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67 및 서열번호 69로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열; b) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67 및 서열번호 69로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열에 대해서 95% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열, 및 c) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67 및 서열번호 69로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 더 포함하되, 여기서 단편은 전장 뉴클레오타이드 서열의 적어도 95%를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 핵산 분자는 플라스미드이다.
일 실시형태에 있어서, 본 발명은 a) 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 및 서열번호 56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, b) 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 및 서열번호 56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해서 95% 이상 동일한 아미노산 서열, 및 c) 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 및 서열번호 56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 분자에 관한 것으로, 여기서 단편은 전장 아미노산 서열의 적어도 95%를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 아미노산 분자는 a) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 58, 서열번호 60, 서열번호 62, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 서열번호 70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열; b) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 58, 서열번호 60, 서열번호 62, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 서열번호 70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산에 대해서 95% 이상 동일한 아미노산 서열, 및 c) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 58, 서열번호 60, 서열번호 62, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 서열번호 70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열의 단편(여기서 단편은 전장 아미노산 서열의 적어도 95%를 포함함)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 더 포함한다.
도 1A 내지 도 1E를 포함하는 도 1은, pTyr의 작제를 나타낸다.
도 2A 내지 도 2B를 포함하는 도 2는, 각각 Tyr DNA 백신 접종에 의한 세포 매개 면역 반응의 면역화 전략 및 유도를 나타낸다.
도 3은 대조군 및 면역화된 마우스의 유동 형광-활성화된 세포 분류(flow fluorescence-activated cell sorting: FACS)를 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 4A 내지 도 4B를 포함하는 도 4는, 면역화된 마우스에서 타이로시나제-특이적 항체의 유도를 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 5A 내지 도 5B를 포함하는 도 5는, 각각 대조군 및 면역화된 마우스에서 종양 시험감염 후, 카플란-마이어 생존 곡선 및 종양 용적 곡선을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 6A 내지 도 6B를 포함하는 도 6은, 면역화된 마우스 및 비-면역화된 마우스에서의 MDSC 세포 집단을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 7은 pVax1 및 pTyr로 면역화된 마우스에서 MDSC에 대한 염색을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 8A 내지 도 8B를 포함하는 도 8은, MDSC에 의한 MCP-1 분비를 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 9는 표시된 유기체 중에서 Tyr 뉴클레오타이드 서열의 계통발생적 관계를 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 10A 내지 도 10C를 포함하는 도 10은, (A) pPRAME(본 명세서에서 또한 pGX1411로도 알려짐)의 플라스미드 맵을 예시하는 개략도; (B) DAPI를 갖는 핵에 대한 그리고 공통 PRAME 항원에 대한 RD 및 293T의 염색; 및 (C) 비-형질감염된 세포("대조군"), pVAX으로 형질감염된 세포("pVAX") 및 pPRAME로 형질감염된 세포("PRAME-pVAX")로부터의 용해물에서의 공통 PRAME 항원에 대한 웨스턴 블롯팅을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 11A 내지 도 11B를 포함하는 도 11은, 마우스군 대 인터페론-감마(IFN-γ)에 대한 스폿 형성 유닛(spot forming unit: SFU)/106개 비장세포를 도시한 그래프를 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 12A 내지 도 12C를 포함하는 도 12는, (A) pNY-ESO-1(본 명세서에서 또한 pGX1409로도 알려짐)의 플라스미드 맵을 예시하는 개략도; (B) DAPI를 갖는 핵에 대한 그리고 공통 NY-ESO-1 항원에 대한 세포의 염색; 및 (C) 비-형질감염된 세포("대조군"), pVAX로 형질감염된 세포("pVAX") 및 pNY-ESO-1로 형질감염된 세포("pNY-ESO-1")로부터의 RD 및 293T 용해물에서의 공통 NY-ESO-1 항원에 대한 웨스턴 블롯팅을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 13은 마우스 군 대 인터페론-감마(IFN-γ)에 대한 스폿 형성 유닛(SFU)/106개 비장세포를 도시한 그래프를 나타낸다.
도 14는 마우스 군 대 인터페론-감마(IFN-γ)에 대한 스폿 형성 유닛(SFU)/106개 비장세포를 도시한 그래프를 나타낸다.
도 15는 연관된 암 항원(들)을 갖는 다양한 암을 예시하는 개략도를 나타낸다.
도 16은 TERT 작제물의 개략적 설계를 나타낸다. 합성 공통 hTERT는 그의 기능을 파괴하기 위하여 5개 돌연변이를 가진 인간 TERT에 대해서 설계되었다. 천연 RhTERT는 2개의 돌연변이를 가진 레서스(Rhesus) TERT를 암호화한다. 두 작제물이 최적화되었다. 표는 인간, 레서스 및 마우스에서 동정된 천연 TERT와 최적화된 TERT 간의 단백질 상동성을 나타낸다.
도 17A 내지 도 17B를 포함하는 도 17은, 레서스 천연 펩타이드에 대한 마우스 TERT-특이적 IFN-γ 반응의 특성규명을 나타낸다. (도 17A) 면역화 스케줄. 마우스(n = 8/군)는 IM/전기천공을 통해서 천연 RhTERT 및 합성 공통 hTERT로 0, 2 및 4주에 면역화되었다. (도 17B) 레서스 펩타이드를 이용하는 IFN-γ ELISpot 검정에 의해 결정된, 백신접종된 마우스로부터 단리된 백만개의 비장세포당 TERT-특이적 IFN-γ 스폿 형성 유닛(SFU)의 빈도.
도 18A 내지 도 18C를 포함하는 도 18은, 레서스 TERT-특이적 IFN-γ 반응의 특성규명을 나타낸다. (도 18A) 면역화 스케줄. 레서스 마카크(Rhesus macaque)(n = 5/군)는 IM/전기천공을 통해서 rhIL-12뿐만 아니라 천연 RhTERT 또는 합성 공통 hTERT에 의해서 0, 4, 8 및 12주에 면역화되었다. (도 18B 및 도 18C) 천연 레서스 펩타이드 및 합성 공통 hTERT 펩타이드를 이용하는 IFN-γ ELISpot 검정에 의해 결정된, 백신접종된 마우스로부터 단리된 백만개의 비장세포당 TERT-특이적 IFN-γ 스폿 형성 유닛(SFU)의 빈도.
도 19는 합성 공통 hTERT(pGX1434)가 마우스에서 강인한 T 세포 반응을 유도하고 TC-1 종양 성장을 늦추는 것을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. (좌측) 마우스는 0, 20, 40, 또는 60㎍의 pGX1434로 2주 간격으로 3회 면역화되었다. 마우스에서의 T 세포 반응은 5주에 평가되었고, 이것은 pGX1434가 강인한 T 세포 반응을 유도한 것을 입증한다. (우측) 마우스는 25 x 104개 TC-1 세포를 이식받았다. 이어서 마우스는 25㎍의 pGX1434로 1주 간격으로 4회 면역화되었다. 종양 용적은 32일에 걸쳐서 측정되었고, 이것은 pGX1434로 처리된 마우스가 미경험 마우스에 비해서 감소된 종양 용적을 가진 것을 입증하였다.
도 20은 마우스에서의 SynCon hTERT(pGX1434)의 면역원성을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 21A 내지 도 21B를 포함하는 도 21은, SynCon hTERT(pGX1434) 및 mut-hTERT(pGX1406)가 TC-1 종양 성장의 유사한 대조군을 제공하는 것을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 22A 내지 도 22B를 포함하는 도 22는, 비-인간 영장류(NHP)에서의 hTERT 면역원성을 입증하는 실험에 대한 실험 설계를 나타낸다. 도 22A는 예시적인 면역화 스케줄을 나타낸다. 도 22B는 상이한 군에 투여된 작제물을 입증하는 표를 나타낸다. pGX1434: hTERT; pGX1406: Mut-hTERT; pGX1447: Mut-rhTERT; pGX1404: WT-1; pGX1108: PSMA; pGX6006:rhIL-12.
도 23A 내지 도 23B를 포함하는 도 23은, SynCon hTERT가 NHP에서 자체-내성을 파괴하는 것을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 23A는 천연 레서스 TERT에 대한 반응이 제1군 동물에서의 검출된 PD3 및 PD4였던 것을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 23B는 천연 레서스 TERT에 대한 반응이 제2군 동물에서의 검출된 PD3 및 PD4였던 것을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 24A 내지 도 24C를 포함하는 도 24는, SynCon 설계가 자체-내성 파괴를 가능하게 하는 것을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 24A는 천연 서열에 대한 상이한 작제물의 퍼센트 동일성을 입증하는 표를 나타낸다. 도 24B는 TERT 특이적 IFNγ 반응을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 24C는 레서스 TERT 특이적 IFNγ 반응을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 25A 내지 도 25B를 포함하는 도 25는, SynCon hTERT의 NHP 면역원성을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 25A는 SynCon hTERT, PSMA, WT-1 및 IL-12의 조합을 이용하여 생성된 TERT 반응을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 25B는 mut-hTERT, PSMA, WT-1 및 IL-12의 조합을 이용하여 생성된 TERT 반응을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 26A 내지 도 26C를 포함하는 도 26은, SynCon hTERT의 NHP 면역원성을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 26A는 TERT, PSMA, WT-1 및 IL-12의 조합을 이용하여 생성된 TERT 반응을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 26B는 TERT, PSMA, WT-1 및 IL-12의 조합을 이용하여 생성된 PSMA 반응을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 26C는 TERT, PSMA, WT-1 및 IL-12의 조합을 이용하여 생성된 WT-1 반응을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 27A 내지 도 27B를 포함하는 도 27은, 다가 SynCon 백신의 폭을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 27A는 이용된 면역화 스케줄을 나타낸다. 도 27B는 면역화 후에 동정된 항원 특이적 T 세포의 백분율을 나타낸다.
도 28A 내지 도 28B를 포함하는 도 28은, 다가 SynCon 백신이 종양 부담을 저감시키고 생존율을 증가시키는 것을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 28A는 이용된 면역화 스케줄을 나타낸다. 도 28B는 WT1, PSMA 및 SynCon mTERT의 조합으로 면역화된 동물의 평균 종양 용적 및 생존율 %를 나타낸다.
도 2A 내지 도 2B를 포함하는 도 2는, 각각 Tyr DNA 백신 접종에 의한 세포 매개 면역 반응의 면역화 전략 및 유도를 나타낸다.
도 3은 대조군 및 면역화된 마우스의 유동 형광-활성화된 세포 분류(flow fluorescence-activated cell sorting: FACS)를 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 4A 내지 도 4B를 포함하는 도 4는, 면역화된 마우스에서 타이로시나제-특이적 항체의 유도를 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 5A 내지 도 5B를 포함하는 도 5는, 각각 대조군 및 면역화된 마우스에서 종양 시험감염 후, 카플란-마이어 생존 곡선 및 종양 용적 곡선을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 6A 내지 도 6B를 포함하는 도 6은, 면역화된 마우스 및 비-면역화된 마우스에서의 MDSC 세포 집단을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 7은 pVax1 및 pTyr로 면역화된 마우스에서 MDSC에 대한 염색을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 8A 내지 도 8B를 포함하는 도 8은, MDSC에 의한 MCP-1 분비를 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 9는 표시된 유기체 중에서 Tyr 뉴클레오타이드 서열의 계통발생적 관계를 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 10A 내지 도 10C를 포함하는 도 10은, (A) pPRAME(본 명세서에서 또한 pGX1411로도 알려짐)의 플라스미드 맵을 예시하는 개략도; (B) DAPI를 갖는 핵에 대한 그리고 공통 PRAME 항원에 대한 RD 및 293T의 염색; 및 (C) 비-형질감염된 세포("대조군"), pVAX으로 형질감염된 세포("pVAX") 및 pPRAME로 형질감염된 세포("PRAME-pVAX")로부터의 용해물에서의 공통 PRAME 항원에 대한 웨스턴 블롯팅을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 11A 내지 도 11B를 포함하는 도 11은, 마우스군 대 인터페론-감마(IFN-γ)에 대한 스폿 형성 유닛(spot forming unit: SFU)/106개 비장세포를 도시한 그래프를 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 12A 내지 도 12C를 포함하는 도 12는, (A) pNY-ESO-1(본 명세서에서 또한 pGX1409로도 알려짐)의 플라스미드 맵을 예시하는 개략도; (B) DAPI를 갖는 핵에 대한 그리고 공통 NY-ESO-1 항원에 대한 세포의 염색; 및 (C) 비-형질감염된 세포("대조군"), pVAX로 형질감염된 세포("pVAX") 및 pNY-ESO-1로 형질감염된 세포("pNY-ESO-1")로부터의 RD 및 293T 용해물에서의 공통 NY-ESO-1 항원에 대한 웨스턴 블롯팅을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 13은 마우스 군 대 인터페론-감마(IFN-γ)에 대한 스폿 형성 유닛(SFU)/106개 비장세포를 도시한 그래프를 나타낸다.
도 14는 마우스 군 대 인터페론-감마(IFN-γ)에 대한 스폿 형성 유닛(SFU)/106개 비장세포를 도시한 그래프를 나타낸다.
도 15는 연관된 암 항원(들)을 갖는 다양한 암을 예시하는 개략도를 나타낸다.
도 16은 TERT 작제물의 개략적 설계를 나타낸다. 합성 공통 hTERT는 그의 기능을 파괴하기 위하여 5개 돌연변이를 가진 인간 TERT에 대해서 설계되었다. 천연 RhTERT는 2개의 돌연변이를 가진 레서스(Rhesus) TERT를 암호화한다. 두 작제물이 최적화되었다. 표는 인간, 레서스 및 마우스에서 동정된 천연 TERT와 최적화된 TERT 간의 단백질 상동성을 나타낸다.
도 17A 내지 도 17B를 포함하는 도 17은, 레서스 천연 펩타이드에 대한 마우스 TERT-특이적 IFN-γ 반응의 특성규명을 나타낸다. (도 17A) 면역화 스케줄. 마우스(n = 8/군)는 IM/전기천공을 통해서 천연 RhTERT 및 합성 공통 hTERT로 0, 2 및 4주에 면역화되었다. (도 17B) 레서스 펩타이드를 이용하는 IFN-γ ELISpot 검정에 의해 결정된, 백신접종된 마우스로부터 단리된 백만개의 비장세포당 TERT-특이적 IFN-γ 스폿 형성 유닛(SFU)의 빈도.
도 18A 내지 도 18C를 포함하는 도 18은, 레서스 TERT-특이적 IFN-γ 반응의 특성규명을 나타낸다. (도 18A) 면역화 스케줄. 레서스 마카크(Rhesus macaque)(n = 5/군)는 IM/전기천공을 통해서 rhIL-12뿐만 아니라 천연 RhTERT 또는 합성 공통 hTERT에 의해서 0, 4, 8 및 12주에 면역화되었다. (도 18B 및 도 18C) 천연 레서스 펩타이드 및 합성 공통 hTERT 펩타이드를 이용하는 IFN-γ ELISpot 검정에 의해 결정된, 백신접종된 마우스로부터 단리된 백만개의 비장세포당 TERT-특이적 IFN-γ 스폿 형성 유닛(SFU)의 빈도.
도 19는 합성 공통 hTERT(pGX1434)가 마우스에서 강인한 T 세포 반응을 유도하고 TC-1 종양 성장을 늦추는 것을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. (좌측) 마우스는 0, 20, 40, 또는 60㎍의 pGX1434로 2주 간격으로 3회 면역화되었다. 마우스에서의 T 세포 반응은 5주에 평가되었고, 이것은 pGX1434가 강인한 T 세포 반응을 유도한 것을 입증한다. (우측) 마우스는 25 x 104개 TC-1 세포를 이식받았다. 이어서 마우스는 25㎍의 pGX1434로 1주 간격으로 4회 면역화되었다. 종양 용적은 32일에 걸쳐서 측정되었고, 이것은 pGX1434로 처리된 마우스가 미경험 마우스에 비해서 감소된 종양 용적을 가진 것을 입증하였다.
도 20은 마우스에서의 SynCon hTERT(pGX1434)의 면역원성을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 21A 내지 도 21B를 포함하는 도 21은, SynCon hTERT(pGX1434) 및 mut-hTERT(pGX1406)가 TC-1 종양 성장의 유사한 대조군을 제공하는 것을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 22A 내지 도 22B를 포함하는 도 22는, 비-인간 영장류(NHP)에서의 hTERT 면역원성을 입증하는 실험에 대한 실험 설계를 나타낸다. 도 22A는 예시적인 면역화 스케줄을 나타낸다. 도 22B는 상이한 군에 투여된 작제물을 입증하는 표를 나타낸다. pGX1434: hTERT; pGX1406: Mut-hTERT; pGX1447: Mut-rhTERT; pGX1404: WT-1; pGX1108: PSMA; pGX6006:rhIL-12.
도 23A 내지 도 23B를 포함하는 도 23은, SynCon hTERT가 NHP에서 자체-내성을 파괴하는 것을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 23A는 천연 레서스 TERT에 대한 반응이 제1군 동물에서의 검출된 PD3 및 PD4였던 것을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 23B는 천연 레서스 TERT에 대한 반응이 제2군 동물에서의 검출된 PD3 및 PD4였던 것을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 24A 내지 도 24C를 포함하는 도 24는, SynCon 설계가 자체-내성 파괴를 가능하게 하는 것을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 24A는 천연 서열에 대한 상이한 작제물의 퍼센트 동일성을 입증하는 표를 나타낸다. 도 24B는 TERT 특이적 IFNγ 반응을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 24C는 레서스 TERT 특이적 IFNγ 반응을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 25A 내지 도 25B를 포함하는 도 25는, SynCon hTERT의 NHP 면역원성을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 25A는 SynCon hTERT, PSMA, WT-1 및 IL-12의 조합을 이용하여 생성된 TERT 반응을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 25B는 mut-hTERT, PSMA, WT-1 및 IL-12의 조합을 이용하여 생성된 TERT 반응을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 26A 내지 도 26C를 포함하는 도 26은, SynCon hTERT의 NHP 면역원성을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 26A는 TERT, PSMA, WT-1 및 IL-12의 조합을 이용하여 생성된 TERT 반응을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 26B는 TERT, PSMA, WT-1 및 IL-12의 조합을 이용하여 생성된 PSMA 반응을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 26C는 TERT, PSMA, WT-1 및 IL-12의 조합을 이용하여 생성된 WT-1 반응을 입증하는 실험 결과를 나타낸다.
도 27A 내지 도 27B를 포함하는 도 27은, 다가 SynCon 백신의 폭을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 27A는 이용된 면역화 스케줄을 나타낸다. 도 27B는 면역화 후에 동정된 항원 특이적 T 세포의 백분율을 나타낸다.
도 28A 내지 도 28B를 포함하는 도 28은, 다가 SynCon 백신이 종양 부담을 저감시키고 생존율을 증가시키는 것을 입증하는 실험 결과를 나타낸다. 도 28A는 이용된 면역화 스케줄을 나타낸다. 도 28B는 WT1, PSMA 및 SynCon mTERT의 조합으로 면역화된 동물의 평균 종양 용적 및 생존율 %를 나타낸다.
본 발명은, 합성 공통 TERT 항원을 단독으로 또는 적어도 하나의 추가의 암 항원 또는 면역 관문 단백질의 저해제와 조합하여 포함하는 면역원성 조성물, 및 질환 또는 장애를 치료하기 위한 조성물의 사용 방법에 관한 것이다. 일 실시형태에 있어서, 면역원성 조성물은 TERT 및 적어도 하나의 추가의 암 항원 공통 서열을 포함한다. 타이로시나제(Tyr), 흑색종에서 우선적으로 발현되는 항원(preferentially expressed antigen in melanoma: PRAME), 타이로시나제 관련 단백질 1(Tyrp1), 암 정소 항원(NY-ESO-1), B형 간염 바이러스 항원, 전립선 특이적 항원(PSA), 전립선-특이적 막 항원(PSMA), 전립선(STEAP)의 6-막관통 상피 항원, 전립선 줄기세포 항원(PSCA), 섬유아세포 활성화 단백질(FAP), 여포 자극 호르몬 수용체(FSHR) 및 윌름스 종양 1 항원(WT-1)을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아닌 암 항원 공통 서열이 면역원성 조성물에 포함될 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 본 발명의 면역원성 조성물은 이를 필요로 하는 대상체의 암의 예방 또는 치료를 위한 암 항원의 조합을 제공할 수 있다.
핵산 및 재조합 암 항원의 대응하는 암호화된 아미노산 서열을 설계하는 하나의 방법은 천연 암 항원의 전체적인 아미노산 서열에서 특정 아미노산을 변화시키는 돌연변이를 도입하기 위한 것이다. 돌연변이의 도입은 암 항원을 많이 변경하지 않으므로, 이는 포유동물 대상체, 예를 들어, 인간 또는 개 대상체에 걸쳐 보편적으로 적용될 수 없지만, 얻어지는 아미노산 서열이 내성을 파괴하거나 면역 반응을 야기하기 위하여 외래 항원으로 고려되기에 충분할 만큼 변화된다. 또 다른 방식은 대응하는 천연 암 항원에 대해서 적어도 85% 최대 99%의 아미노산 서열 동일성, 적어도 90% 최대 98%의 아미노산 서열 동일성, 적어도 93% 최대 98%의 아미노산 서열 동일성, 또는 적어도 95% 최대 98%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 공통 재조합 암 항원을 작성할 수 있다. 일부 예시에서, 재조합 암 항원은 대응하는 천연 암 항원에 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 천연 암 항원은 특정 암 또는 암 종양과 일반적으로 연관된 항원이다. 암 항원에 따라, 암 항원의 공통 서열은 포유동물 종에 걸쳐서 또는 종의 하부 유형 내에서, 또는 바이러스 균주 또는 혈청형에 걸쳐서 있을 수 있다. 일부 암 항원은 암 항원의 야생형 아미노산 서열로부터 크게 변화하지 않는다. 일부 암 항원은 종에 걸쳐 상당히 다양하고, 공통 서열이 생성될 수 없는 핵산/아미노산 서열을 갖는다. 이러한 예시에서, 대응하는 천연 암 항원에 대해서 적어도 85% 최대 99%의 아미노산 서열 동일성; 적어도 90% 및 최대 98%의 아미노산 서열 동일성; 더욱 바람직하게는 적어도 93% 최대 98%의 아미노산 서열 동일성; 또는 적어도 95% 최대 98%의 서열 동일성을 갖는, 내성을 파괴하고 면역 반응을 생성할 것인 재조합 암 항원이 생성될 수 있다. 일부 예시에서, 재조합 암 항원은 대응하는 천연 암 항원에 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 상기 언급된 접근은 상기 검토된 바와 같이, 최종 재조합 암 항원이 위에서 논의된 바와 같은 천연 암 항원 아미노산 서열에 대한 퍼센트 유사성을 갖도록 조합될 수 있다.
재조합 암 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성 또는 세포성 및 체액성 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제기를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인 예컨대, IL-10 및 TFG-β 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
면역원성 조성물은 세포성 및 체액성 면역 반응의 자극을 증가시키기 위하여 PD-1 및 PDL-1와 같은 관문 저해제에 항체와 함께 더 조합될 수 있다. 항-PD-1 또는 항-PDL-1 항체를 사용하여, PD-1 또는 PDL-1이 T-세포 및/또는 B-세포 반응을 억제하는 것을 예방할 수 있다. 전체적으로, 암 항원을 면역계에 의하여 인식되도록 설계함으로써 종양 세포에 의한 면역 억제의 다른 형태를 극복할 수 있도록 도와주며, 이러한 면역원성 조성물은 T-세포 및/또는 B-세포 반응을 추가로 증가시키기 위하여 억압 또는 억제 요법(예컨대, 항-PD-1 또는 항-PDL-1 항체 요법)과 조합하여 사용될 수 있다.
1. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 이용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 상충 시, 정의를 포함하여 본 문서가 우선이 될 것이다. 예시적인 방법 및 재료가 아래 기재되지만, 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 평가에서 이용될 수 있다. 본 명세서에서 언급된 모든 공보, 특허 출원, 특허 및 다른 참고문헌은 이들의 전문이 참고로 도입된다. 본 명세서에 제시된 재료, 방법, 및 실시예는 단지 예시적인 것이며 제한하려는 것이 아니다. 본 명세서에 사용된 용어는 특정 실시형태를 설명하기 위한 것이지 제한하려고 의도되지 않음이 또한 이해되어야 한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "포함한다", "포함된다", "갖는", "갖는다", "할 수 있다", "함유한다" 및 이들의 변형어는 추가적인 행위 또는 구조의 가능성을 배제하지 않는 제약을 두지 않는 전이 어구, 용어 또는 단어로 의도된다. 문맥상 명백하게 달리 나타내지 않는 한, 단수 표현은 복수의 대상을 포함한다. 본 개시내용은 또한 명시적으로 나타내건 나타내지 않건, 본 명세서에 제시된 실시형태 또는 요소를 "포함하는", "이로 이루어진" 및 "본질적으로 이로 이루어진" 다른 실시형태를 상정한다.
본 명세서에서 수치 범위의 언급에 있어서, 동일한 정도의 정밀도를 갖는 그 사이의 각각의 개입 숫자가 명시적으로 고려된다. 예를 들어, 6 내지 9의 범위에 있어서, 숫자 7 및 8은 6 및 9에 부가하여 고려되며, 범위 6.0 내지 7.0에 있어서, 숫자 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 및 7.0이 명시적으로 고려된다.
본 명세서에서 사용된 "애주번트"는 핵산 분자에 의해 암호화되고 이후에 기술되는 핵산 서열을 암호화하는 항원의 항원성을 증대시키기 위하여 본 명세서에 기술된 면역원성 조성물에 부가된 임의의 분자를 의미할 수 있다.
"항체"는 Fab, F(ab')2, Fd, 및 단쇄 항체, 다이아바디, 이중특이적 항체, 이작용기 항체 및 이들의 유도체를 포함하는, 클래스 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE, 또는 단편의 항체, 이의 단편 또는 유도체를 의미할 수 있다. 항체는 원하는 에피토프 또는 이로부터 유래된 서열에 충분한 결합 특이성을 나타내는 포유동물 혈청 표본에서 단리된, 항체, 다클론성 항체, 친화도 정제된 항체, 또는 이들의 혼합물일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 "암호화 서열" 또는 "암호화 핵산"은 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산(RNA 또는 DNA 분자)을 지칭하는 것을 의미할 수 있다. 암호화 서열에는 핵산이 투여되는 개인 또는 포유류의 세포에서 발현을 지시할 수 있는 프로모터 및 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된 개시 및 종결 신호가 추가로 포함될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 "상보체" 또는 "상보적인"은 핵산이 핵산 분자의 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드 유사체 간 왓슨-크릭(예컨대, A-T/U 및 C-G) 또는 후그스틴(Hoogsteen) 염기쌍 형성을 의미할 수 있음을 의미할 수 있다.
본 명세서에 사용된 "공통" 또는 "공통 서열"은 상이한 유기체로부터의 동일한 유전자에 대한 다수의 하위유형의 배열의 분석에 기반한, 폴리펩타이드 서열을 의미할 수 있다. 공통 폴리펩타이드 서열을 암호화하는 핵산 서열이 제조될 수 있다. 그러한 단백질을 암호화하는 공통 서열 및/또는 핵산 분자를 포함하는 단백질을 포함하는 면역원성 조성물은 항원에 대하여 광범위한 면역성을 유도하는데 사용될 수 있다.
본 명세서에서 상호 교환적으로 이용되는 "전기천공", "전기-투과화", 또는 "전기-역학 증강"("EP")은 생체막에서 미시적 경로(기공)를 유도하기 위한 막관통 전기장 자극의 이용을 나타낼 수 있다; 이들의 존재는 생체분자, 예컨대, 플라스미드, 올리고뉴클레오타이드, siRNA, 약물, 이온, 및 물이 세포막의 한쪽에서 다른 쪽으로 이동할 수 있게 한다.
본 명세서에서 핵산 서열에 관하여 사용되는 바와 같은 "단편"은 본 명세서에 개시된 항원과 교차 반응하는 포유류에서 면역 반응을 일으킬 수 있는 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 서열 또는 이의 일부분을 의미한다. 단편은 이하에 제시된 단백질 단편을 암호화하는 다양한 뉴클레오타이드 서열 중 적어도 하나로부터 선택된 DNA 단편일 수 있다. 단편은 이하에 제시된 핵산 서열 중 하나 이상의 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 이하에 제시된 핵산 서열 중 적어도 하나의 적어도 20개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 30개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 40개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 50개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 60개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 70개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 80개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 90개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 100개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 150개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 200개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 250개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 300개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 350개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 400개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 450개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 500개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 550개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 600개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 650개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 700개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 750개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 800개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 850개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 900개 이상의 뉴클레오타이드, 적어도 950개 이상의 뉴클레오타이드, 또는 적어도 1000개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.
폴리펩타이드 서열에 관한 "단편" 또는 "면역원성 단편"은 본 명세서에 개시된 항원과 교차 반응하는 포유류에서 면역 반응을 일으킬 수 있는 폴리펩타이드를 의미한다. 단편은 이하의 각종 아미노산 서열 중 적어도 하나로부터 선택된 폴리펩타이드 단편일 수 있다. 공통 단백질의 단편은 공통 단백질의 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 단백질의 단편은 본 명세서에 개시된 단백질 서열의 적어도 20개 이상의 아미노산, 적어도 30개 이상의 아미노산, 적어도 40개 이상의 아미노산, 적어도 50개 이상의 아미노산, 적어도 60개 이상의 아미노산, 적어도 70개 이상의 아미노산, 적어도 80개 이상의 아미노산, 적어도 90개 이상의 아미노산, 적어도 100개 이상의 아미노산, 적어도 110개 이상의 아미노산, 적어도 120개 이상의 아미노산, 적어도 130개 이상의 아미노산, 적어도 140개 이상의 아미노산, 적어도 150개 이상의 아미노산, 적어도 160개 이상의 아미노산, 적어도 170개 이상의 아미노산, 적어도 180개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "유전적 작제물"은 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 DNA 또는 RNA 분자를 나타낸다. 상기 암호화 서열은 핵산 분자가 투여될 개체의 세포에서 발현을 지시할 수 있는 프로모터 및 폴리아데닐화 신호를 포함하는 조절 요소에 작동 가능하게 연결된 개시 및 종료 신호를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "발현 가능한 형태"는 개체의 세포에 존재하는 경우, 암호화 서열이 발현되도록 단백질을 암호화하는 암호화 서열에 작동 가능하게 연결된 필요한 조절 요소를 함유하는 유전자 작제물을 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "상동성"은 상보성의 정도를 나타낸다. 부분적 상동성 또는 완전 상동성(즉, 동일성)이 있을 수 있다. 표적 핵산에의 혼성화로부터 완전 상보적 서열을 적어도 부분적으로 억제하는 부분적으로 상보적인 서열은 기능 용어 "실질적으로 상동성"을 사용하는 것으로 지칭된다. cDNA 또는 게놈 클론과 같은 이중-가닥 핵산 서열을 참고하여 사용될 때, 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "실질적으로 상동성"은 낮은 엄격함의 상태 하에서 이중-가닥 핵산 서열의 가닥에 혼성화될 수 있는 프로브를 지칭한다. 단일-가닥 핵산 서열을 참고하여 사용될 때, 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "실질적으로 상동성"은 낮은 엄격함의 상태 하에서 단일-가닥 핵산 주형 서열에 혼성화될 수 있는(즉, 이의 상보체인) 프로브를 지칭한다.
둘 이상의 핵산 또는 폴리펩타이드 서열의 맥락에서 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "동일한" 또는 "동일성"은 서열이 명시된 영역에 걸쳐 동일한 명시된 잔기 백분율을 가짐을 의미할 수 있다. 백분율은 두 서열을 최적 정렬하고, 명시된 영역에 걸쳐 두 서열을 비교하고, 두 서열에서 동일한 잔기가 나오는 위치의 수를 결정하여 매칭된 위치의 수를 산출하고, 매칭된 위치의 수를 명시된 영역에서 위치의 총 수로 나누고, 그 결과에 100을 곱해서 서열 동일성 백분율을 산출함으로써 계산될 수 있다. 두 서열이 상이한 길이이거나 정렬로 하나 이상의 엇갈린 말단이 생성되고 명시된 비교 영역에 하나의 서열만 포함되는 경우, 단일 서열의 잔기는 계산의 분모에는 포함되지만 분자에는 포함되지 않는다. DNA 및 RNA를 비교하는 경우, 티민(T) 및 우라실(U)은 동등한 것으로 간주될 수 있다. 동일성은 수동으로 또는 BLAST 또는 BLAST 2.0과 같은 컴퓨터 서열 알고리즘을 이용하여 수행될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 "면역 반응"은 숙주의 면역계의 활성화, 예컨대, 포유동물의 면역계의 활성화를 의미할 수 있다. 면역 반응은 세포성 또는 체액성 반응의 형태 또는 둘 다일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "핵산" 또는 "올리고뉴클레오타이드" 또는 "폴리뉴클레오타이드"는 서로 공유 결합된 적어도 2개의 뉴클레오타이드를 의미할 수 있다. 단일 가닥의 도시는 또한 상보 가닥의 서열을 정의한다. 따라서, 핵산은 또한 묘사된 단일 가닥의 상보적 가닥을 포괄한다. 핵산의 여러 변이체가 주어진 핵산과 동일한 목적을 위해 이용될 수 있다. 따라서 핵산은 또한 실질적으로 동일한 핵산 및 이들의 상보체를 포괄한다. 단일쇄는 엄격한 혼성화 조건 하에 표적 서열에 혼성화할 수 있는 프로브를 제공한다. 따라서 핵산은 또한 엄격한 혼성화 조건 하에 혼성화하는 프로브를 포괄한다.
핵산은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수도 있고, 또는 이중 가닥 및 단일 가닥 서열을 모두 일부 함유할 수도 있다. 핵산은 DNA, 게놈 및 cDNA 둘 다, RNA, 또는 혼성체일 수 있고, 여기서 핵산은 데옥시리보- 및 리보-뉴클레오타이드의 조합 및 우라실, 아데닌, 티민, 시토신, 구아닌, 이노신, 잔틴 하이포잔틴, 아이소시토신 및 아이소구아닌을 포함하는 염기의 조합을 함유할 수 있다. 핵산은 화학적 합성 방법에 의해 또는 재조합 방법에 의해 수득될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "작동 가능하게 연결된"은 유전자의 발현이 이것이 공간적으로 연결된 프로모터의 제어 하에 있음을 의미할 수 있다. 프로모터는 그 제어 하 유전자의 5'(상류) 또는 3'(하류)에 배치될 수 있다. 프로모터 및 유전자 간 거리는 프로모터가 유래된 유전자에서 이것이 제어하는 프로모터 및 유전자 간의 거리와 대략 동일할 수 있다. 당분야에 공지된 바와 같이, 상기 거리의 변동은 프로모터 기능의 손실 없이 수용될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "펩타이드", "단백질" 또는 "폴리펩타이드"는 아미노산의 연결된 서열을 의미할 수 있고, 천연, 합성, 또는 천연 및 합성의 개질 또는 조합일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "프로모터"는 세포 내 핵산의 발현을 부여하거나, 활성화하거나, 증강시킬 수 있는 합성 또는 천연 유래 분자를 의미할 수 있다. 프로모터는 발현을 추가 증강시키고/시키거나 그 공간적 발현 및/또는 시간적 발현을 변경시키기 위해 하나 이상의 특정 전사 조절 서열을 포함할 수 있다. 프로모터는 또한 원위 인핸서 또는 억제유전자 요소를 포함할 수 있고, 이는 전사 개시 부위에서 수천 개 염기쌍만큼 떨어져 배치될 수 있다. 프로모터는 바이러스, 박테리아, 진균, 식물, 곤충, 및 동물을 포함하는 원천에서 유래될 수 있다. 프로모터는 발현이 일어나는 세포, 조직 또는 기관에 대해, 발현이 일어나는 발생 단계에 대해, 또는 외부 자극, 예컨대, 생리적 스트레스, 병원체, 금속 이온 또는 유도제에 반응하여 구성적으로 또는 차별적으로 유전자 성분의 발현을 조절할 수 있다. 프로모터의 대표예에는 박테리오파지 T7 프로모터, 박테리오파지 T3 프로모터, SP6 프로모터, lac 작동유전자-프로모터, tac 프로모터, SV40 후기 프로모터, SV40 조기 프로모터, RSV-LTR 프로모터, CMV IE 프로모터, SV40 조기 프로모터 또는 SV40 후기 프로모터 및 CMV IE 프로모터가 포함된다.
"신호 펩타이드" 및 "리더 서열"은 본 명세서에서 상호 교환적으로 사용되며, 본 명세서에 나타낸 단백질의 아미노 말단에 연결될 수 있는 아미노산 서열을 나타낸다. 신호 펩타이드/리더 서열은 전형적으로 단백질의 위치선정을 지시한다. 본 명세서에서 이용된 신호 펩타이드/리더 서열은 바람직하게는 이것이 생산되는 세포로부터 단백질의 분비를 촉진한다. 신호 펩타이드/리더 서열은 종종 세포로부터의 분비 시, 종종 성숙 단백질로 불리는 단백질의 나머지로부터 절단된다. 신호 펩타이드/리더 서열은 단백질의 아미노 말단(즉, N 말단)에 결합된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "엄격한 혼성화 조건"은 제1 핵산 서열(예컨대, 프로브)이 제2 핵산 서열(예컨대, 프로브)에, 예컨대, 핵산의 복합 혼합물로 혼성화할 조건을 의미할 수 있다. 엄격한 조건은 서열-의존성이고 서로 다른 상황에서 상이할 것이다. 엄격한 조건은 규정된 이온 강도 pH에서 특정 서열에 대한 열 용융점(Tm)보다 약 5 내지 10℃ 더 낮도록 선택될 수 있다. Tm은 표적에 상보적인 프로브의 50%가 평형 시(표적 서열이 과량으로 존재하므로, Tm에서 프로브의 50%가 평형 시 점유됨) 표적 서열에 혼성화하는 온도(정의된 이온 강도, pH 및 핵산 농도 하에)일 수 있다. 엄격한 조건은 염 농도가 약 1.0M 나트륨 이온 미만, 예컨대, pH 7.0 내지 8.3에서 약 0.01 내지 1.0M 나트륨 이온 농도(또는 다른 염)이고 온도가 짧은 프로브(예컨대, 약 10 내지 50개 뉴클레오타이드)에 대해 적어도 약 30℃이고 긴 프로브(예컨대, 약 50개 초과의 뉴클레오타이드)에 대해 적어도 약 60℃인 것들일 수 있다. 엄격한 조건은 또한 탈안정화 제제, 예컨대, 폼아마이드의 첨가로 달성될 수 있다. 선택적 또는 특이적 혼성화를 위해, 양성 신호는 배경 혼성화의 적어도 2 내지 10배일 수 있다. 예시적인 엄격한 혼성화 조건에는 하기가 포함된다: 50% 폼아마이드, 5x SSC, 및 1% SDS, 42℃에서 인큐베이션하거나, 또는, 5x SSC, 1% SDS, 65℃에서 인큐베이션하고, 0.2x SSC, 및 65℃에서 0.1% SDS에서 세척.
본 명세서에서 상호 교환적으로 이용되는 "대상체"는 본 명세서에 기술된 면역원성 조성물로 면역화되는 것을 원하거나 이를 필요로 하는 포유동물을 의미한다. 포유동물은 인간, 침팬지, 개, 고양이, 말, 소, 마우스, 또는 래트일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "실질적으로 상보성"은 제1 서열이 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 180, 270, 360, 450, 540개 또는 그 이상의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 영역에 걸쳐 제2 서열의 상보체와 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일함을, 또는 두 서열이 엄격한 혼성화 조건 하에 혼성화됨을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "실질적으로 동일한"은, 만약 제1 서열이 제2 서열의 상보체와 실질적으로 상보성이면, 제1 및 제2 서열이 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 180, 270, 360, 450, 540개 또는 그 이상의 뉴클레오타이드 또는 아미노산의 영역에 걸쳐 또는 핵산에 대해, 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일함을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "치료" 또는 "치료하는"은 질환의 예방, 억제, 진압 또는 완전 제거 수단을 통한 대상체의 질환으로부터의 보호를 의미할 수 있다. 질환의 예방에는 질환의 개시 전에 대상체에 대한 본 발명의 면역원성 조성물의 투여를 포함한다. 질환의 억제에는 질환의 유도 후 그러나 그 임상적 출현 전에 대상체에 대한 본 발명의 면역원성 조성물의 투여를 포함한다. 질환의 진압에는 질환의 임상적 출현 후 대상체에 대한 본 발명의 면역원성 조성물의 투여를 포함한다.
핵산에 대해 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "변이체"는 (i) 참조된 뉴클레오타이드 서열의 일부 또는 단편; (ii) 참조된 뉴클레오타이드 서열 또는 이들의 일부의 상보체; (iii) 참조된 핵산 또는 이들의 상보체와 실질적으로 동일한 핵산; 또는 (iv) 참조된 핵산, 이들의 상보체, 또는 이들과 실질적으로 동일한 서열에 엄격한 조건 하에 혼성화하는 핵산을 의미할 수 있다.
펩타이드 또는 폴리펩타이드에 대한 "변이체"는 아미노산의 삽입, 결실, 또는 보존적 치환에 의해 아미노산 서열이 상이하지만, 적어도 하나의 생물학적 활성을 유지한다. 변이체는 또한 적어도 하나의 생물학적 활성을 보유하는 아미노산 서열을 갖는 참조된 단백질과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질을 의미할 수 있다. 아미노산의 보존적 치환, 즉 유사한 특성(예컨대, 친수성, 하전된 영역의 정도 및 분포)의 상이한 아미노산을 이용한 아미노산 대체는 당분야에서 전형적으로 작은 변화를 포함하는 것으로 인식된다. 이러한 작은 변화는, 부분적으로 당분야에 이해되는 바와 같이 아미노산의 수치 지수를 고려하여 확인될 수 있다(Kyte et al., J. Mol. Biol. 157:105-132 (1982)). 아미노산의 수치요법 지수는 그 소수성 및 전하의 고려에 기반한다. 유사한 수치 지수의 아미노산이 치환되고 여전히 단백질 기능을 보유할 수 있음이 당분야에 공지되어 있다. 하나의 측면에서, ±2의 수치 지수를 갖는 아미노산이 치환된다. 아미노산의 친수성은 또한 생물학적 기능을 보유하는 단백질을 생성할 치환을 드러내기 위해 이용될 수 있다. 펩타이드의 맥락에서 아미노산의 친수성 고려는 항원성 및 면역원성과 잘 연관되는 것으로 보고된 유용한 척도인 해당 펩타이드의 가장 큰 국소 평균 친수성 계산을 허용한다. 미국 특허 제4,554,101호(이는 그의 전문이 본 명세서에 참고로 편입됨). 당분야에서 이해되는 바와 같은, 유사한 친수성값을 갖는 아미노산의 치환은 생물학적 활성, 예를 들어, 면역원성을 보유하는 펩타이드를 생성할 수 있다. 치환은 서로 ±2 내의 친수성값을 갖는 아미노산으로 수행될 수 있다. 아미노산의 소수성 지수 및 친수성값은 모두 아미노산의 특정 측쇄에 의해 영향을 받는다. 그 관찰과 일치하게, 생물학적 기능과 상용성인 아미노산 치환은 아미노산의 상대적 유사성, 특히 소수성, 친수성, 전하, 크기 및 다른 특성으로 드러나는 바와 같은 이들 아미노산의 측쇄에 근거하는 것으로 이해된다.
변이체는 전체 유전자 서열의 전장 또는 이의 단편에 비해서 실질적으로 동일한 핵산 서열일 수 있다. 핵산 서열은 유전자 서열의 전장 또는 이들의 단편에 비해서 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일할 수 있다. 변이체는 아미노산 서열의 전장 또는 이의 단편에 비해서 실질적으로 동일한 아미노산 서열일 수 있다. 아미노산 서열은 아미노산 서열의 전장 또는 이들의 단편에 비해서 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "벡터"는 복제 기원을 함유하는 핵산 서열을 의미할 수 있다. 벡터는 플라스미드, 박테리오파지, 박테리아 인공 염색체 또는 효모 인공 염색체일 수 있다. 벡터는 DNA 또는 RNA 벡터일 수 있다. 벡터는 자가-복제 염색체외 벡터일 수 있고, 일 실시형태에서, 발현 플라스미드일 수 있다. 벡터는 하나 이상의 이종성 핵산 서열을 함유 또는 포함할 수 있다.
2. 합성 공통 TERT
본 발명은 TERT 항원의 최적화된 공통 서열을 제공한다. 일 실시형태에 있어서, 최적화된 공통 서열에 의해 암호화된 항원은 포유동물에서 면역 반응을 유발시킬 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 최적화된 공통 서열에 의해 암호화된 항원은 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원성으로서 특히 유효하게 하는 에피토프(들)를 포함할 수 있다.
최적화된 공통 서열은 2개 이상의 천연 TERT 항원으로부터 유도된 공통 서열일 수 있다. 최적화된 공통 서열은 개선된 발현을 위하여 공통 서열 및/또는 변형(들)을 포함할 수 있다. 변형은 코돈 최적화, RNA 최적화, 증가된 번역 개시를 위한 코작 서열의 부가 및/또는 면역원성을 증가시키기 위한 면역글로불린 리더 서열의 부가를 포함할 수 있다. TERT 최적화된 공통 서열에 의해 암호화된 항원은 신호 펩타이드, 예컨대, 면역글로불린 신호 펩타이드, 예를 들어, 제한되지 않지만, 면역글로불린 E(IgE) 또는 면역글로불린(IgG) 신호 펩타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 최적화된 공통 서열에 의해 암호화된 항원은 헤마글루티닌(HA) 태그를 포함할 수 있다. TERT 최적화된 공통 서열에 의해 암호화된 항원은 대응하는 천연 항원보다 더 강력한 세포성 및/또는 체액성 면역 반응을 유발시키도록 설계될 수 있다. TERT 최적화된 공통 서열에 의해 암호화된 항원은 내성을 파괴하고 항-암 면역 요법과 상승작용하도록 설계될 수 있다.
일 실시형태에 있어서, 최적화된 공통 TERT는 천연 인간 TERT에 대한 내성을 파괴하도록 설계된다. 일 실시형태에 있어서, 인간 최적화된 공통 TERT 암호화 서열은 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55에 제시된 바와 같다. 일 실시형태에 있어서, 인간 최적화된 공통 TERT 암호화된 항원은 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다.
일 실시형태에 있어서, 최적화된 공통 TERT는 천연 마우스 TERT에 대한 내성을 파괴하도록 설계된다. 일 실시형태에 있어서, 마우스 최적화된 공통 TERT 암호화 서열은 서열번호 49 또는 서열번호 51에 제시된 바와 같다. 일 실시형태에 있어서, 마우스 최적화된 공통 TERT 암호화된 항원은 서열번호 50 또는 서열번호 52에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다.
일 실시형태에 있어서, 최적화된 공통 TERT는 천연 레서스 마카크 TERT에 대한 내성을 파괴시키도록 설계된다. 일 실시형태에 있어서, 레서스 마카크 최적화된 공통 TERT 암호화 서열은 서열번호 53 또는 서열번호 55에 제시된 바와 같다. 일 실시형태에 있어서, 마우스 최적화된 공통 TERT 암호화된 항원은 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다.
일 실시형태에 있어서, 최적화된 공통 암호화된 TERT 항원은 하나 이상의 조절 요소에 작동 가능하게 연결된다. 일 실시형태에 있어서, 조절 요소는 리더 서열이다. 일 실시형태에 있어서, IgE 리더 암호화 서열에 작동 가능하게 연결된 최적화된 공통 DNA 서열은 서열번호 45, 서열번호 49 및 서열번호 53에 제시된 바와 같다. 일 실시형태에 있어서, IgE 리더 서열에 작동 가능하게 연결된 최적화된 공통-암호화된 TERT 항원은 서열번호 46, 서열번호 50 및 서열번호 54에 제시된 바와 같다.
일 실시형태에 있어서, 조절 요소는 개시 코돈이다. 따라서, 일 실시형태에 있어서, 본 발명은 5' 말단에서 개시 코돈을 포함하는 뉴클레오타이드 서열에 작동 가능하게 연결된, 서열번호 47, 서열번호 51, 서열번호 55, 또는 이의 단편 또는 상동체에 제시된 바와 같은 핵산 서열에 관한 것이다. 일 실시형태에 있어서, 본 발명은 N-말단에서 개시 코돈(예컨대, 메티오닌)에 의해 암호화된 아미노산에 작동 가능하게 연결된, 서열번호 48, 서열번호 52 또는 서열번호 56, 또는 이의 단편 또는 상동체에 제시된 바와 같은 아미노산 서열에 관한 것이다.
일 실시형태에 있어서, 조절 요소는 적어도 하나의 정지 코돈이다. 따라서, 일 실시형태에 있어서, 본 발명은 3' 말단에 적어도 하나의 정지 코돈을 포함하는 뉴클레오타이드 서열에 작동 가능하게 연결된, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55에 제시된 바와 같은 핵산 서열, 또는 이의 단편 또는 상동체에 관한 것이다. 일 실시형태에 있어서, 뉴클레오타이드 서열은 번역 말단의 효율을 증대시키기 위하여 2개의 정지 코돈에 작동 가능하게 연결된다.
일 실시형태에 있어서, TERT 항원을 암호화하는 최적화된 공통 서열은 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열을 가진 펩타이드를 암호화할 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 최적화된 공통 서열은 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 가질 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열은 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 가진 뉴클레오타이드 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 서열은 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 최적화된 공통 TERT 항원은 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 가진 DNA 서열로부터의 전사체인 RNA에 의해 암호화될 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 최적화된 공통 TERT 항원은 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 RNA에 의해 암호화될 수 있다.
최적화된 공통-암호화된 TERT 항원은 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6 또는 서열번호 8에 제시된 아미노산 서열을 가진 펩타이드일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 항원은 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 면역원성 단편에 대해서 아미노산 서열 상동성을 가진 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 대해서 95% 상동성인 단백질의 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열과 96% 상동성을 가진 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 가진 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 가진 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 가진 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 면역원성 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 면역원성 단편에는 리더 서열이 없다.
일 실시형태에 있어서, 최적화된 공통 TERT 항원의 면역원성 단편은 전장 최적화된 공통 TERT 항원의 적어도 하나의 면역우성 또는 서브-면역우성 에피토프를 암호화한다.
몇몇 실시형태는 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 전장의 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함하는 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 면역원성 단편에 관한 것이다. 면역원성 단편은 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편에 대해서 적어도 96%, 적어도 97% 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 면역원성 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다.
3. 면역원성 조성물
일 실시형태에 있어서, 본 발명의 면역원성 조성물은 합성 공통 TERT 항원, 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다. 일 실시형태에 있어서, TERT 항원은 인간 TERT 항원(hTERT)이다. hTERT는 염색체의 부족으로 인한 세포사를 예방하기 위한 텔로머의 단부에서 TTAGGG 태그를 합성하는 인간 텔로머라제 역방향 전사효소이다. 과증식성 세포는 hTERT의 높은 발현을 비정상적으로 가질 수 있다. hTERT의 비정상 발현은 또한 HCV 및 HPV로 감염된 과증식성 세포에서 발생할 수 있다. 그러므로, HPV 및 HCV 모두에 대한 면역 요법은 hTERT를 비정상 수준에서 발현하는 세포를 표적화함으로써 개선될 수 있다. HPV 및 HCV 항원은 아래에 보다 자세히 고찰된다. 일 양상에서, hTERT 암 항원은 2013년 12월 23일자로 출원된, 미국 출원 제14/139,660호에 의하여 추가로 정의될 수 있으며, 이것은 그 전문이 참고로 본 명세서에 편입된다.
일 실시형태에 있어서, TERT 항원은 비-인간 TERT 항원이다. 비-인간 TERT 항원은, 마우스 TERT(mTERT) 및 레서스 마카크 TERT(rhTERT)를 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
TERT 유전자로 형질감염된 수지상 세포의 TERT 발현은 CD8+ 세포독성 T 세포를 유발시키고 항원-특이적 방식으로 CD4+ T 세포를 유발시킬 수 있다. 따라서, 선택 항원을 제공하는 능력을 유지하고 노쇠를 지연시키는 항원 제시 세포(APC) 내에서 hTERT 발현의 사용은 본 명세서에 기재된 방법에서와 같은 면역치료방법에 사용될 수 있다.
TERT 항원은, 흑색종, 전립선암, 간암, 자궁경부암, 재발성 호흡기 유두종증(RRP), 항문암, 두경부암 및 혈액암을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아닌 임의의 수의 암과 연관될 수 있거나 또는 발현될 수 있다. 따라서, 백신은, 본 명세서에 기재된 TERT 항원을 포함할 경우, 흑색종, 전립선암, 간암, 자궁경부암, 재발성 호흡기 유두종증(RRP), 항문암, 두경부암 및 혈액암을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아닌 임의의 수의 암을 앓고 있는 대상체를 치료하기 위하여 사용될 수 있다.
TERT 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도시킬 수 있고, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성 또는 세포성 및 체액성 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의해 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 이하에 더욱 상세히 기재되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
TERT 항원은 항-TERT 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 이것을 특히 효과적이도록 만드는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. TERT 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. TERT 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
TERT 항원 또는 공통 TERT 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. TERT 항원 또는 공통 TERT 항원을 암호화하는 핵산은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, TERT 항원 또는 공통 TERT 항원을 암호화하는 핵산은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작(Kozak) 서열(예컨대, GCC ACC)을 포함할 수 있다. TERT 항원 또는 공통 TERT 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예컨대, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
TERT 항원 또는 공통 TERT 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. TERT 항원 또는 공통 TERT 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 각각 펩타이드 결합에 의해 TERT 항원 또는 공통 TERT 항원의 아미노산 서열에 연결되도록 IgE 리더 서열을 더 암호화할 수 있다. TERT 항원 또는 공통 TERT 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, TERT 항원 또는 공통 TERT 항원을 암호화하는 핵산은IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 이를 함유하지 않는다.
몇몇 실시형태에 있어서, TERT 항원 또는 공통 TERT 항원을 암호화하는 핵산은 이종성 핵산 서열일 수 있고/있거나 하나 이상의 이종성 핵산 서열을 함유할 수 있다. TERT 항원 또는 공통 TERT 항원을 암호화하는 핵산은, TERT 항원 또는 공통 TERT 항원의 아미노산 서열에서의 1개 이상의 아미노산 또는 잔기가 각각 다른 아미노산 또는 잔기로 교체 또는 치환되도록 야생형 TERT 항원에 관하여 돌연변이될 수 있다. TERT 항원 또는 공통 TERT 항원을 암호화하는 핵산은, TERT 항원 또는 공통 TERT 항원의 아미노산 서열 내 하나 이상의 잔기가 각각 다른 잔기로 교체 또는 치환되도록 야생형 TERT 항원에 관하여 돌연변이될 수 있고, 이에 따라서 면역로 하여금 TERT 항원 또는 공통 TERT 항원을 암호화하는 핵산, TERT 항원 또는 공통 TERT 항원, 또는 이들의 조합이 투여된 포유동물에서 TERT에 더 이상 내성이 있지 않게 한다. TERT 항원 또는 공통 TERT 항원을 암호화하는 핵산은, TERT 항원 또는 공통 TERT 항원의 아미노산 서열 내 아르기닌 589, 아스파테이트 1005, 또는 both 아르기닌 589 및 아스파테이트 1005 둘 다가 타이로신 잔기로 교체 또는 치환되도록 야생형 TERT 항원에 대해서 돌연변이될 수 있다.
일 양상에 있어서, TERT 항원은 아미노산 서열 서열번호 24 및 서열번호 58을 각각 암호화하는 핵산 서열 서열번호 23 또는 서열번호 57일 수 있다. 서열번호 23 및 서열번호 57은 IgE 리더 서열에 연결된 TERT 항원을 암호화한다. 일 실시형태에 있어서, TERT 항원은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, TERT 항원은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있고/있거나 이에 연결되지 않을 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, TERT 항원은 서열번호 23 또는 서열번호 57에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 가진 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, TERT 항원은 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. TERT 항원은 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 TERT 항원에 대해 상동성인 단백질, TERT 항원의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 서열에 대해서 최대 98% 상동성 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 TERT 항원, TERT 항원의 면역원성 단편, 및 TERT 항원에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 TERT 서열에 대해서 최대 80% 동일성, 전장 TERT 서열에 대해서 최대 85% 동일성, 전장 TERT 서열에 대해서 최대 90% 동일성, 전장 TERT 서열에 대해서 최대 91% 동일성, 전장 TERT 서열에 대해서 최대 92% 동일성, 전장 TERT 서열에 대해서 최대 93% 동일성, 전장 TERT 서열에 대해서 최대 94% 동일성, 전장 TERT 서열에 대해서 최대 95% 동일성, 전장 TERT 서열에 대해서 최대 96% 동일성, 전장 TERT 서열에 대해서 최대 97% 동일성, 전장 TERT 서열에 대해서 최대 98% 동일성, 및 전장 TERT 서열에 대해서 99% 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 TERT 항원에 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 23 또는 서열번호 57의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, TERT 항원의 아미노산 서열은 서열번호 24 또는 서열번호 58이다. IgE 리더에 연결된 TERT 항원의 아미노산 서열은 서열번호 24 또는 서열번호 58이다. IgE 리더에 연결된 TERT 항원의 아미노산 서열은 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 단백질에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 단백질에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 단백질에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 단백질에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 단백질에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58과 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 단백질의 단편은 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 서열번호 24 또는 서열번호 58의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 24 또는 서열번호 58의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 24 또는 서열번호 58의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 18에 대해서 95% 이상 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 단백질 서열의 면역원성 단편에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 단백질 서열의 면역원성 단편에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 단백질 서열의 면역원성 단편에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 단백질 서열의 면역원성 단편에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 24 또는 서열번호 58의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 24 또는 서열번호 58에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 ?l마할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 30개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 45개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 60개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 75개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 90개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 120개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 150개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 180개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 210개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 240개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 270개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 300개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 360개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 420개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 480개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 540개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 600개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 300개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 660개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 720개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 780개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 840개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 900개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 960개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1020개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1080개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1140개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1200개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1260개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1320개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1380개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1440개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1500개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1560개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1620개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1680개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1740개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1800개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1860개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1920개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1980개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2040개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2100개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2160개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2220개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2280개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2340개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2400개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2460개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2520개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2580개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2640개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2700개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2760개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2820개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2880개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2940개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3000개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3060개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3120개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3180개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3240개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3300개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3360개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3420개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3480개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은, IgE 리더 서열에 대한 암호화 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 23 또는 서열번호 57의 단편은 IgE 리더 서열에 대한 암호화 서열을 포함하지 않는다.
단편은 60개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 75개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 90개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 120개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 150개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 180개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 210개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 240개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 270개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 300개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 360개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 420개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 480개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 540개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 600개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 660개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 720개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 780개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 840개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 900개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 960개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1020개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1080개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1140개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1200개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1260개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1320개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1380개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1440개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1500개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1560개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1620개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1680개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1740개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1800개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1860개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1920개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1980개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2040개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2100개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2160개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2220개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2280개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2340개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2400개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2460개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2520개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2580개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2640개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2700개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2760개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2820개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2860개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2940개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3000개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3060개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3120개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3180개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3240개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3300개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3360개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3420개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3480개 미만의 뉴클레오타이드, 그리고 몇몇 실시형태에 있어서 3510개 미만의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.
서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 15개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 18개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 21개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 24개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 30개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 36개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 42개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 48개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 54개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 60개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 66개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 72개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 90개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 120개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 150개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 180개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 210개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 240개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 270개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 300개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 330개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 360개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 390개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 420개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 450개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 480개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 510개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 540개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 570개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 600개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 630개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 660개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 690개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 720개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 750개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 780개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 810개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 840개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 870개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 900개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 930개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 960개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 990개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1020개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1050개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1080개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1110개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1140개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1170개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1200개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1230개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1260개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1290개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1320개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1350개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1380개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1410개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1440개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1470개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1500개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은 IgE 리더 서열에 대한 암호화 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 24 또는 서열번호 58의 단편은 IgE 리더 서열에 대한 암호화 서열을 포함하지 않는다.
단편은 24개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 30개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 36개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 42개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 48개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 54개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 60개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 72개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 90개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 120개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 150개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 180개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 210개 미만의 아미노산 몇몇 실시형태에 있어서 240개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 260개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 290개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 320개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 350개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 380개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 410개 미만의 아미노산 몇몇 실시형태에 있어서 440개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 470개 미만의 아미노산 몇몇 실시형태에 있어서 500개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 530개 미만의 아미노산 몇몇 실시형태에 있어서 560개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 590개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 620개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 650개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 680개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 710개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 740개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 770개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 800개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 830개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 860개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 890개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 920개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 950개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 980개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1010개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1040개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1070개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1200개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1230개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1260개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1290개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1320개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1350개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1380개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1410개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1440개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1470개 미만의 아미노산, 그리고 몇몇 실시형태에 있어서 1500개 미만의 아미노산을 포함할 수 있다.
일 실시형태에 있어서, TERT 항원은 합성 공통 TERT 항원이다. 소정의 실시형태에 있어서, 합성 공통 TERT는 천연 TERT 항원에 대해서 1개 이상, 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상, 10개 이상, 15개 이상, 20개 이상, 30개 이상, 또는 50개 이상의 아미노산 돌연변이를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 공통 hTERT 항원은 아미노산 서열 서열번호 46을 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 45일 수 있다. 서열번호 45는 IgE 리더 서열에 연결된 공통 hTERT 항원을 암호화한다. 공통 hTERT 항원은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 hTERT 항원은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있고/있거나 이에 연결되지 않을 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 공통 hTERT 항원은, 아미노산 서열 서열번호 48을 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 47일 수 있다. 서열번호 47은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없고/없거나 이에 연결되지 않은 공통 hTERT 항원을 암호화한다.
일 실시형태에 있어서, 공통 mTERT 항원은 아미노산 서열 서열번호 50을 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 49일 수 있다. 서열번호 49는 IgE 리더 서열에 연결된 공통 mTERT 항원을 암호화한다. 공통 mTERT 항원은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 mTERT 항원은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있고/있거나 이에 연결되지 않을 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 공통 mTERT 항원은 아미노산 서열 서열번호 52을 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 51일 수 있다. 서열번호 51은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없고/없거나 이에 연결되지 않은 공통 mTERT 항원을 암호화한다.
일 실시형태에 있어서, 공통 rhTERT 항원은 아미노산 서열 서열번호 54를 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 53일 수 있다. 서열번호 53은 IgE 리더 서열에 연결된 공통 rhTERT 항원을 암호화한다. 공통 rhTERT 항원은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 rhTERT 항원은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있고/있거나 이에 연결되지 않을 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 공통 rhTERT 항원은 아미노산 서열 서열번호 56을 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 55일 수 있다. 서열번호 55는 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없거나 또는 이에 연결되지 않은 공통 rhTERT 항원을 암호화한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 TERT 항원은 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 TERT 항원은 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 TERT 항원은 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 공통 TERT 항원에 대해서 상동성인 단백질, 공통 TERT 항원의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 서열에 대해서 최대 95%의 상동성, 서열에 대해서 최대 96%의 상동성, 서열에 대해서 최대 97%의 상동성, 서열에 대해서 최대 98%의 상동성 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 공통 TERT 항원, 공통 TERT 항원의 면역원성 단편, 및 공통 TERT 항원에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 공통 TERT 서열에 대해서 최대 80%의 동일성, 전장 서열에 대해서 최대 85%의 동일성, 전장 공통 TERT 서열에 대해서 최대 90%의 동일성, 전장 공통 TERT 서열에 대해서 최대 91%의 동일성, 전장 공통 TERT 서열에 대해서 최대 92%의 동일성, 전장 공통 TERT 서열에 대해서 최대 93%의 동일성, 전장 공통 TERT 서열에 대해서 최대 94%의 동일성, 전장 공통 TERT 서열에 대해서 최대 95%의 동일성, 전장 공통 TERT 서열에 대해서 최대 96%의 동일성, 전장 공통 TERT 서열에 대해서 최대 97%의 동일성, 전장 공통 TERT 서열에 대해서 최대 98%의 동일성, 및 전장 공통 TERT 서열에 대해서 최대 99%의 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 공통 TERT 항원에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 일 실시형태에 있어서, 공통 TERT 항원의 아미노산 서열은 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56이다. IgE 리더에 연결된 공통 TERT 항원의 아미노산 서열은 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56이다. IgE 리더에 연결된 공통 TERT 항원의 아미노산 서열은 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56와 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46에 제시된 바와 같은 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56과 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 바와 같은 전장 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 단백질의 단편은 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 대해서 95% 이상 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 단백질 서열의 면역원성 단편에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 단백질 서열의 면역원성 단편에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 단백질 서열의 면역원성 단편에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 단백질 서열의 면역원성 단편에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 30개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 45개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 60개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 75개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 90개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 120개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 150개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 180개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 210개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 240개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 270개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 300개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 360개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 420개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 480개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 540개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 600개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 300개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 660개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 720개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 780개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 840개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 900개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 960개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1020개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1080개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1140개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1200개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1260개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1320개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1380개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1440개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1500개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1560개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1620개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1680개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1740개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1800개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1860개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1920개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 1980개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2040개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2100개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2160개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2220개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2280개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2340개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2400개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2460개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2520개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2580개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2640개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2700개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2760개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2820개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2880개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 2940개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3000개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3060개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3120개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3180개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3240개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3300개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3360개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3420개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, 3480개 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은, 면역우성 에피토프를 암호화하는 서열을 포함하는, IgE 리더 서열에 대한 암호화 서열. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 45, 서열번호 47, 서열번호 49, 서열번호 51, 서열번호 53 또는 서열번호 55의 단편은 IgE 리더 서열에 대한 암호화 서열을 포함하지 않는다.
단편은 60개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 75개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 90개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 120개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 150개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 180개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 210개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 240개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 270개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 300개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 360개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 420개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 480개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 540개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 600개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 660개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 720개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 780개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 840개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 900개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 960개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1020개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1080개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1140개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1200개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1260개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1320개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1380개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1440개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1500개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1560개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1620개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1680개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1740개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1800개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1860개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1920개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 1980개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2040개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2100개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2160개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2220개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2280개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2340개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2400개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2460개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2520개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2580개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2640개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2700개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2760개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2820개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2860개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 2940개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3000개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3060개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3120개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3180개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3240개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3300개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3360개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3420개 미만의 뉴클레오타이드, 몇몇 실시형태에 있어서 3480개 미만의 뉴클레오타이드, 및 몇몇 실시형태에 있어서 3510개 미만의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.
서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 15개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 18개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 21개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 24개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 30개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 36개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 42개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 48개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 54개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 60개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 66개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 72개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 90개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 120개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 150개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 180개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 210개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 240개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 270개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 300개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 330개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 360개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 390개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 420개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 450개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 480개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 510개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 540개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 570개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 600개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 630개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 660개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 690개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 720개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 750개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 780개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 810개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 840개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 870개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 900개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 930개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 960개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 990개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1020개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1050개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1080개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1110개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1140개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1170개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1200개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1230개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1260개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1290개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1320개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1350개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1380개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1410개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1440개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1470개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은, 면역우성 에피토프를 포함하는 서열을 포함하는, 1500개 이상의 아미노산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은 IgE 리더 서열에 대한 암호화 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 또는 서열번호 56의 단편은 IgE 리더 서열에 대한 암호화 서열을 포함하지 않는다.
단편은 24개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 30개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 36개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 42개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 48개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 54개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 60개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 72개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 90개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 120개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 150개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 180개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 210개 미만의 아미노산 몇몇 실시형태에 있어서 240개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 260개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 290개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 320개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 350개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 380개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 410개 미만의 아미노산 몇몇 실시형태에 있어서 440개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 470개 미만의 아미노산 몇몇 실시형태에 있어서 500개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 530개 미만의 아미노산 몇몇 실시형태에 있어서 560개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 590개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 620개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 650개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 680개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 710개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 740개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 770개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 800개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 830개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 860개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 890개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 920개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 950개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 980개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1010개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1040개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1070개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1200개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1230개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1260개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1290개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1320개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1350개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1380개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1410개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1440개 미만의 아미노산, 몇몇 실시형태에 있어서 1470개 미만의 아미노산, 그리고 몇몇 실시형태에 있어서 1500개 미만의 아미노산을 포함할 수 있다.
본 발명은 항-암 면역원성 조성물에 관한 것이다. 면역원성 조성물은 하나 이상의 암 항원을 포함할 수 있다. 면역원성 조성물은 종양 성장을 예방할 수 있다. 면역원성 조성물은 종양 성장을 저감시킬 수 있다. 면역원성 조성물은 종양 세포의 전이를 예방할 수 있다. 암 항원에 따라서, 면역원성 조성물은, 간암, 전립선암, 흑색종, 혈액암, 두경부암, 교모세포종, 재발성 호흡기 유두종증, 항문암, 자궁경부암 및 뇌암을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아닌 암을 치료하도록 표적화될 수 있다.
면역원성 조성물의 발전에 있어 제1 단계는 면역계에 의하여 인식되지 않고 자가-항원인 암 항원을 인식하는 것이다. 동정된 암 항원은 면역계에 의하여 인식되도록 자가-항원으로부터 외래 항원으로 변화한다. 재조합 암 항원의 핵산 및 아미노산 서열의 자가 항원으로부터 외래 항원으로의 재설계는 면역계에 의한 항원의 내성을 파괴한다. 내성을 파괴하기 위하여, 몇몇의 재설계 수단이 아래와 같이 암 항원에 적용될 수 있다.
면역원성 조성물의 재조합 암 항원은 자가로 인식되지 않으며, 따라서 내성을 파괴한다. 내성의 파괴는 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있고, 이에 의해서 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 면역 관문 분자를 저감 또는 저해시킬 수 있다.
특정 실시형태에 있어서, 면역원성 조성물은 (1) 단핵구 화학유인성 단백질-1(MCP-1) 생성을 차단하여 골수 유래된 억제자 세포(MDSC)를 지연시키고 종양 성장을 억제하는 B 세포 반응을 통한 체액성 면역을 유도하는 것; (2) 종양 세포를 공격하고 사멸시키는 CD8+(CTL)와 같은 세포독성 T 림프구를 증가시키는 것; (3) T 헬퍼 세포 반응을 증가시키는 것; 및 (4) IFN-γ 및 TFN-α를 통하여, 또는 위에서 언급된 것의 조합을 통하여 염증성 반응을 증가시키는 것에 의하여 종양 세포의 제거를 매개하거나 이의 성장을 예방할 수 있다. 면역원성 조성물은 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44% 및 45%만큼 무종양 생존을 증가시킬 수 있다. 면역원성 조성물은 면역화 후 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59% 및 60%만큼 종양 질량을 저감시킬 수 있다. 면역원성 조성물은 단핵구 화학유인성 단백질 1(MCP-1), 골수 유래된 억제자 세포에 의하여 분비된 사이토카인의 증가를 예방 및 차단할 수 있다. 면역원성 조성물은 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59% 및 60%만큼 종양 생존을 증가시킬 수 있다.
면역원성 조성물은, 면역원성 조성물이 투여되지 않은 대상체의 세포성 면역 반응과 비교하여, 약 50배 내지 약 6000배, 약 50배 내지 약 5500배, 약 50배 내지 약 5000배, 약 50배 내지 약 4500배, 약 100배 내지 약 6000배, 약 150배 내지 약 6000배, 약 200배 내지 약 6000배, 약 250배 내지 약 6000배, 또는 약 300배 내지 약 6000배만큼 면역원성 조성물이 투여된 대상체의 세포성 면역 반응을 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서 면역원성 조성물은, 면역원성 조성물이 투여되지 않은 대상체의 세포성 면역 반응과 비교하여, 약 50배, 100배, 150배, 200배, 250배, 300배, 350배, 400배, 450배, 500배, 550배, 600배, 650배, 700배, 750배, 800배, 850배, 900배, 950배, 1000배, 1100배, 1200배, 1300배, 1400배, 1500배, 1600배, 1700배, 1800배, 1900배, 2000배, 2100배, 2200배, 2300배, 2400배, 2500배, 2600배, 2700배, 2800배, 2900배, 3000배, 3100배, 3200배, 3300배, 3400배, 3500배, 3600배, 3700배, 3800배, 3900배, 4000배, 4100배, 4200배, 4300배, 4400배, 4500배, 4600배, 4700배, 4800배, 4900배, 5000배, 5100배, 5200배, 5300배, 5400배, 5500배, 5600배, 5700배, 5800배, 5900배, 또는 6000배만큼 면역원성 조성물이 투여된 대상체의 세포성 면역 반응을 증가시킬 수 있다.
면역원성 조성물은, 면역원성 조성물이 투여되지 않은 대상체의 IFN-γ 수준과 비교하여, 약 50배 내지 약 6000배, 약 50배 내지 약 5500배, 약 50배 내지 약 5000배, 약 50배 내지 약 4500배, 약 100배 내지 약 6000배, 약 150배 내지 약 6000배, 약 200배 내지 약 6000배, 약 250배 내지 약 6000배, 또는 약 300배 내지 약 6000배만큼 면역원성 조성물이 투여된 대상체의 인터페론 감마(IFN-γ) 수준을 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서 면역원성 조성물은, 면역원성 조성물이 투여되지 않은 대상체의 IFN-γ 수준과 비교하여, 약 50배, 100배, 150배, 200배, 250배, 300배, 350배, 400배, 450배, 500배, 550배, 600배, 650배, 700배, 750배, 800배, 850배, 900배, 950배, 1000배, 1100배, 1200배, 1300배, 1400배, 1500배, 1600배, 1700배, 1800배, 1900배, 2000배, 2100배, 2200배, 2300배, 2400배, 2500배, 2600배, 2700배, 2800배, 2900배, 3000배, 3100배, 3200배, 3300배, 3400배, 3500배, 3600배, 3700배, 3800배, 3900배, 4000배, 4100배, 4200배, 4300배, 4400배, 4500배, 4600배, 4700배, 4800배, 4900배, 5000배, 5100배, 5200배, 5300배, 5400배, 5500배, 5600배, 5700배, 5800배, 5900배, 또는 6000배만큼 면역원성 조성물이 투여된 대상체의 IFN-γ 수준을 증가시킬 수 있다.
면역원성 조성물은 핵산 백신일 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 핵산 백신은 DNA 백신이다. DNA 백신은 미국 특허 제5,593,972호, 제5,739,118호, 제5,817,637호, 제5,830,876호, 제5,962,428호, 제5,981,505호, 제5,580,859호, 제5,703,055호 및 제5,676,594호에 개시되어 있으며, 이들은 참고로 전체로 본 명세서에 편입된다. DNA 백신은 염색체에 통합되는 것을 저해하는 요소 또는 시약을 더 포함할 수 있다.
면역원성 조성물은 RNA 백신일 수 있다. RNA 백신은 세포에 도입될 수 있다. RNA 백신은 염색체에 통합되는 것을 저해하는 요소 또는 시약을 더 포함할 수 있다.
면역원성 조성물은 약화된 생 백신, 항원을 전달하기 위한 재조합 벡터를 사용하는 백신, 서브유닛 백신 및 당단백질 백신, 예를 들어, 제한 없이, 미국 특허 제4,510,245호; 제4,797,368호; 제4,722,848호; 제4,790,987호; 제4,920,209호; 제5,017,487호; 제5,077,044호; 제5,110,587호; 제5,112,749호; 제5,174,993호; 제5,223,424호; 제5,225,336호; 제5,240,703호; 제5,242,829호; 제5,294,441호; 제5,294,548; 5,310,668호; 제5,387,744호; 제5,389,368호; 제5,424,065호; 제5,451,499호; 제5,453,3 64; 5,462,734호; 제5,470,734호; 제5,474,935호; 제5,482,713호; 제 5,591,439호; 제5,643,579호; 제5,650,309호; 제5,698,202호; 제5,955,088호; 제6,034,298호; 제6,042,836호; 제6,156,319호 및 제6,589,529호에 기재된 백신일 수 있으며, 이들 문헌은 각각 참고로 본 명세서에 편입된다.
본 발명의 면역원성 조성물은 백신 자체가 질병 또는 사망을 일으키지 않으므로 안전하고; 질병을 방어하며; 중화 항체를 유도하고; 보호성 T 세포 반응을 유도하고; 그리고 투여 용이성, 적은 부작용, 생물학적 안정성 및 낮은 용량별 비용을 제공하는 것과 같이 효과적인 백신에 요구되는 특징을 가질 수 있다. 면역원성 조성물은 이하에 논의된 바와 같은 암 항원을 함유함으로써 이들 특징의 일부 또는 전부를 달성할 수 있다.
이하에 더 상세하게 기술된 바와 같이, 면역원성 조성물은 하나 이상의 면역 관문 분자의 1종 이상의 저해제(즉, 면역 관문 저해제)를 더 포함할 수 있다. 면역 관문 분자는 이하에 보다 상세히 기재된다. 면역 관문 분자는 MHC 분류 제시, T 세포 제시 및/또는 분화, B 세포 제시 및/또는 분화, 임의의 사이토카인, 케모카인, 또는 면역 세포 증식 및/또는 분화에 대한 신호전달에서 임의의 성분의 억제를 예방하는 임의의 핵산 또는 단백질이다. 또한 이하에 더 자세히 기술되는 바와 같이, 면역원성 조성물은 세포성 면역 반응 및 체액성 면역 반응 둘 다의 자극을 증가시키기 위하여 PD-1, PDL-1, CTLA4, TIM3 및 LAG3와 같은 관문 저해제에 항체와 함께 추가로 조합될 수 있다. 면역 관문 단백질에 관한 항체를 사용하여, 면역 관문 단백질이 T-세포 및/또는 B-세포 반응을 억제하는 것을 예방할 수 있다.
면역원성 조성물은 또한 항원, 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 항원은 대상체에서 면역 반응을 유도하는 어느 것일 수 있다. 항원은 핵산 서열, 아미노산 서열, 또는 이들의 조합일 수 있다. 핵산 서열은 DNA, RNA, cDNA, 이의 변이체, 이의 단편, 또는 이들의 조합일 수 있다. 핵산 서열은 또한 펩타이드 결합에 의해 항원에 연결된 링커 또는 태그 서열을 암호화하는 추가의 서열을 포함할 수 있다. 아미노산 서열은 단백질, 펩타이드, 이의 변이체, 이의 단편, 또는 이들의 조합일 수 있다.
항원은 임의의 수의 유기체, 예를 들어, 바이러스, 기생충, 세균, 진균, 또는 포유동물로부터 단백질, 핵산, 또는 이의 단편, 또는 이의 변이체, 또는 이들의 조합에 포함될 수 있다. 항원은 자가면역 질환, 알러지, 또는 천식과 연관될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 항원은 암, 헤르페스, 인플루엔자, B형 간염, C형 간염, 인유두종 바이러스(HPV), 또는 인간 면역결핍 바이러스(HIV)에 연관될 수 있다.
몇몇 항원은 강력한 면역 반응을 유도할 수 있다. 다른 항원은 약한 면역 반응을 유도할 수 있다. 항원은 TERT 항원과 조합된 경우 더 큰 면역 반응을 유발시킬 수 있다.
a. 암 항원
면역원성 조성물은 하나 이상의 암 항원을 포함할 수 있다. 암 항원은 핵산 서열, 아미노산 서열, 또는 이들의 조합일 수 있다. 핵산 서열은 DNA, RNA, cDNA, 이들의 변이체, 이의 단편, 또는 이들의 조합일 수 있다. 핵산 서열은 또한 펩타이드 결합에 의해 암 항원에 연결되는 링커 또는 태그 서열을 암호화하는 추가의 서열을 포함할 수 있다. 아미노산 서열은 단백질, 펩타이드, 이들의 변형체, 이들의 단편, 또는 이들의 조합일 수 있다. 암 항원은 재조합 암 항원일 수 있다.
본 발명의 맥락에서, "종양 항원" 또는 "과증식 장애 항원" 또는 "과증식 장애와 연관된 항원"은 암과 같은 특정 과증식 장애에 공통인 항원을 지칭한다. 본 명세서에서 논의된 항원은 단지 예로써 포함된다. 이러한 나열은 배타적인 것으로 의도되지 않으며 추가의 예가 당업자에게 용이하게 명백해질 것이다.
암 항원, 또는 종양 항원은, 면역 반응, 특히 T-세포 매개 면역 반응을 유발시키는 종양 세포에 의해 생성되는 단백질이다. 본 발명의 항원 결합 모이어티의 선택은 치료될 특정 유형의 암에 따라 좌우될 것이다. 종양 항원은 당업계에 잘 알려져 있고, 예를 들어, 신경교종-연관 항원, 암배아 항원(CEA), β-인간 융모성 고나도트로핀, 알파페토 단백질(AFP), 렉틴-반응성 AFP, 티로글루불린, RAGE-1, MN-CA IX, 인간 텔로머라제 역전사효소, RU1, RU2 (AS), 내부 카복실 에스터라제, mut hsp70-2, M-CSF, 전립선, 전립선-특이적 항원(PSA), PAP, NY-ESO-1, LAGE-1a, p53, 프로스테인, PSMA, Her2/neu, 서바이빈 및 텔로머라제, 전립선-암종 종양 항원-1(PCTA-1), MAGE, ELF2M, 호중구 엘라스타제, 에프린B2, CD22, 인슐린 성장 인자(IGF)-I, IGF-II, IGF-I 수용체 및 메소텔린을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 종양 항원은 악성 종양과 연관된 하나 이상의 항원성 암 에피토프를 포함한다. 악성 종양은 면역 공격에 대한 표적 항원으로서 제공될 수 있는 많은 단백질을 발현한다. 이들 분자는 조직-특이적 항원, 예컨대, 흑색종의 MART-1, 타이로시나제 및 GP 100 및 전립선암의 전립선 산 인산분해효소(PAP) 및 전립선-특이적 항원(PSA)을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. 기타 표적 분자는 종양유전자 HER-2/Neu/ErbB-2와 같은 형질전환-관련 분자의 군에 속한다. 표적 항원의 또 다른 군은 암배아 항원(CEA)과 같은 태아 종양성 항원이다. B-세포 림프종에서, 종양-특이적 이디오타입(idiotype) 면역글로불린은 개별 종양에 고유한 진성 종양-특이적 면역글로불린 항원을 구성한다. B-세포 분화 항원, 예컨대, CD19, CD20 및 CD37은 B-세포 림프종에서 표적 항원에 대한 다른 후보자이다. 이들 항원(CEA, HER-2, CD19, CD20, 이디오타입)의 몇몇은 제한된 성공으로 단클론성 항체를 이용한 수동 면역요법에 대한 표적으로 사용되어 왔다.
본 발명에 관한 종양 항원의 유형은 또한 종양-특이적 항원(TSA) 또는 종양-연관 항원(TAA)일 수 있다. TSA는 종양 세포에 고유하고 체내에서 다른 세포 상에서 생기지 않는다. TAA 연관 항원은 종양 세포에 고유하지 않고, 대산에 또한 항원에 대한 면역학적 내성 상태를 유도하는 것을 실패하는 조건 하에서 정상 세포 상에서 과발현된다. 종양에 대한 항원의 발현은 면역계가 항원에 반응하는 것을 가능하게 하는 조건 하에서 일어날 수 있다. TAA는 면역계가 미성숙하고 반응할 수 없는 경우에 태아 발달 동안 정상 세포 상에서 발현되는 항원일 수 있거나, 또는 종양 세포 상에서 더 높은 수준에서 발현되지만 정상 세포 상에서 극히 낮은 수준에서 정상적으로 존재하는 항원일 수 있다.
TSA 또는 TAA 항원의 비제한적인 예는 하기를 포함한다: 분화 항원, 예컨대, MART-1/MelanA(MART-I), gp100(Pmel 17), 타이로시나제, TRP-1, TRP-2 및 종양-특이적 다계열 항원, 예컨대, MAGE-1, MAGE-3, BAGE, GAGE-1, GAGE-2, p15; 과발현 배아 항원, 예컨대, CEA; 과발현 종양유전자 및 돌연변이된 종양-억제 유전자, 예컨대, p53, Ras, HER-2/neu; 염색체 전위에 기인하는 고유한 종양 항원; 예컨대, BCR-ABL, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR; 및 바이러스 항원, 예컨대, 엡스타인-바 바이러스 항원 EBVA 및 인간 유두종바이러스(HPV) 항원 E6 및 E7. 기타 거대한 단백질-기반 항원은 TSP-180, MAGE-4, MAGE-5, MAGE-6, RAGE, NY-ESO, p185erbB2, p180erbB-3, c-met, nm-23H1, PSA, TAG-72, CA 19-9, CA 72-4, CAM 17.1, NuMa, K-ras, 베타-카테닌, CDK4, Mum-1, p 15, p 16, 43-9F, 5T4, 791Tgp72, 알파-페토단백질, beta-HCG, BCA225, BTAA, CA 125, CA 15-3＼CA 27.29＼BCAA, CA 195, CA 242, CA-50, CAM43, CD68\P1, CO-029, FGF-5, G250, Ga733＼EpCAM, HTgp-175, M344, MA-50, MG7-Ag, MOV18, NB/70K, NY-CO-1, RCAS1, SDCCAG16, TA-90＼Mac-2 결합 단백질＼사이클로필린 C-연관 단백질, TAAL6, TAG72, TLP 및 TPS를 포함한다.
TERT 항원 및 선택적으로 하나 이상의 면역 관문 단백질을 표적으로 하는 하나 이상의 항체는 종양 항원 또는 이의 단편 또는 변이체와 연관되거나 조합될 수 있다. 암 마커는 특정 암세포에 대해 존재하거나 상향 조절되는 알려진 단백질이다. 자체에 대한 내성을 파괴하는 방법으로 그러한 마커를 나타내는 항원을 생성하는 방법에 의해, 암 백신이 생성될 수 있다. 이러한 암 백신은 TERT 항원 및 선택적으로 하나 이상의 면역 관문 단백질을 표적으로 하는 하나 이상의 항체를 포함하여 면역 반응 및 선택적으로 하나 이상의 추가의 종양 항원을 포함할 수 있다. 이하는 몇몇 예시적인 종양 항원이다:
(1) 타이로시나제(Tyr)
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 타이로시나제(Tyr), 이의 단편, 이의 변이체를 포함할 수 있다. 타이로시나제는 미생물 및 식물 및 유기체 조직에서 발견될 수 있는 타이로시나제 수산화효소 및 도파 산화효소 촉매적 활성을 갖는 구리-함유 효소이다. 특히, 타이로시나제는 티로신과 같은 페놀의 산화에 의하여 멜라닌 및 다른 색소의 생성을 촉진한다. TYR 유전자에서의 돌연변이는 포유류에서의 범발성 백색증을 야기하고, TYR 유전자에서의 비-병리학적 다형성은 피부 색소침착의 변화에 기여한다.
추가적으로, 흑색종과 같은 암 또는 종양에서, 타이로시나제는 비조절되어 증가된 멜라닌 합성을 야기할 수 있다. 따라서, 타이로시나제는 흑색종과 연관된 암 항원일 수 있다. 흑색종을 앓고 있는 대상체에서, 타이로시나제는 세포독성 T 세포 인식의 표적일 수 있다. 일부 예시에서, 그러나, 암 또는 종양(흑색종 포함)의 면역 반응은 억제되어 종양 형성 및/또는 성장을 지지하는 미세환경을 야기하고, 따라서 질환 진행을 야기할 수 있다.
면역 억제는 골수 유래 억제자 세포(MDSC)에 의하여 촉진될 수 있으며, 이는 미성숙 대식세포, 과립구, 수지상 세포, 및 골수 세포의 혼합 집단이다. 골수 세포는 골수 전구 세포 및 미성숙 골수 세포(IMC)의 이종성 집단일 수 있다. MDSC의 마커는 Gr-1 및 CD11b(즉, Gr-1+ 및 CD11b+ 세포)의 발현을 포함할 수 있다.
MDSC의 순환은 만성 염증으로 인해 증가할 수 있으며, MDSC 집단의 확대는 자가 면역 및 염증과 연관될 수 있다. 특히, MDSC 확대(또는 종양 또는 암성 조직에서의 존재)는 종양 성장을 촉진하고 면역 검출 및/또는 조절에서 회피할 수 있으며, 따라서, MDSC는 항암 백신에 대한 면역 반응에 영향을 미칠 수 있다.
MDSC는 G-단백질 신호 2(Rgs2)의 조절자에 의하여 조절될 수 있고, Rgs2는 종양으로부터 유래된 MDSC에서 높은 정도로 발현될 수 있다. Rgs2는 또한 다양한 세포, 예를 들어, 골수 세포에서 널리 발현될 수 있다. 종양 보유 마우스로부터 유래된 MDSC는 비-종양 보유 마우스로부터 유래된 MDSC와 상이하게 작용할 수 있다. 그러한 차이는 MDSC에 의하여 분비된, 케모카인 MCP-1의 생성의 상향-조절일 수 있다. MCP-1는 단핵구, 내피 세포 및 T 세포 상에서 발견된 CCR2, G-단백질 결합된 수용체(GPCR)를 통한 신호화에 의하여 세포 이주를 촉진할 수 있다. 따라서, MCP-1는 내피 세포의 이주를 야기하여, 이로써 혈관신생을 촉진할 수 있다. 중화 항체를 통하여 MCP-1를 차단하는 것은 혈관형성을 억제할 수 있으며, 따라서, 감소된 종양 전이 및 증가된 생존을 유도할 수 있다. 따라서, MCP-1는 혈관형성 인자로 고려될 수 있다. MCP-1를 분비하는 것 외에도, MDSC는 성장 인자를 분비하여, 이로써 종양 성장에 추가로 기여할 수 있다.
Tyr 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성 또는 세포성 및 체액성 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 예를 들어, 비제한적으로 MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자와 같은 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자를 저감시키거나 저해할 수 있다.
본 명세서에 입증되는 바와 같이, Tyr 항원은 암성 또는 종양 세포(예컨대, 흑색종 세포)에 대해 항원-특이적 T-세포 및 높은 역가 항체 반응을 유도한다. 구체적으로, Tyr 항원은 (1) 단핵구 화학유인성 단백질-1(MCP-1) 생성을 차단하여 골수 유래된 억제자 세포(MDSC)를 지연시키고 종양 성장을 억제하는 B 세포 반응을 통한 체액성 면역을 유도하는 것; (2) 종양 세포를 공격하고 사멸시키는 CD8+(CTL)와 같은 세포독성 T 림프구를 증가시키는 것; (3) T 헬퍼 세포 반응을 증가시키는 것; 및 (4) IFN-γ 및 TFN-α을 통하여, 또는 상기 언급된 것의 조합을 통하여 염증성 반응을 증가시키는 것에 의하여 면역 매개된 제거를 위한 중요한 표적이다. 따라서, Tyr 항원(예컨대, 아래에서 더 자세히 기술된, 공통 Tyr 항원)을 포함하는 면역원성 조성물에 의한 종양 형성 및 종양 성장에 대한 보호성 면역 반응이 제공되고, 이는 이러한 면역원성 조성물이 암성 또는 종양성 조직 내에서 발견되는 MDSC의 집단을 감소시킴으로써 면역 억제를 예방하고 MCP-1의 생성 또는 분비를 감소시킴으로써 암성 또는 종양성 조직의 혈관신생을 차단하기 때문이다. 따라서, 임의의 사용자는 종양 형성, 종양 전이 및 종양 성장에 대한 광범위한 면역을 제공하기 위하여 Tyr 항원을 포함하도록 본 발명의 면역원성 조성물을 설계할 수 있다.
Tyr 항원은 항-Tyr면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 그들이 특히 효과적이도록 만드는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. Tyr 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. Tyr 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
공통 Tyr 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. 공통 Tyr 항원을 암호화하는 핵산은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 Tyr 항원을 암호화하는 핵산 서열은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작 서열(예를 들면, GCC ACC)을 포함할 수 있다. 공통 Tyr 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예를 들면, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
공통 Tyr 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. 공통 Tyr 항원을 암호화하는 핵산 서열은 추가적으로 IgE 리더 서열을 암호화할 수 있으며, 이는 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 펩타이드 결합에 의해 공통 Tyr 항원의 아미노산 서열에 연결되도록 한다. 공통 Tyr 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 Tyr 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 이를 함유하지 않는다.
공통 Tyr 항원은 아미노산 서열 서열번호 2를 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 1일 수 있다. 서열번호 1은 IgE 리더 서열에 연결된 공통 Tyr 단백질을 암호화한다. 공통 Tyr 단백질은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 Tyr 단백질은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있거나 또는 이에 연결되지 않을 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 Tyr 항원은 서열번호 1에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 Tyr 항원은 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 Tyr 항원은 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 Tyr 공통 단백질에 대해서 상동성인 단백질, Tyr 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 공통 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 98% 상동성 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 Tyr 공통 단백질, Tyr 공통 단백질의 면역원성 단편의 면역원성 단편, 및 Tyr 공통 단백질에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 Tyr 공통 서열에 대해서 최대 80%의 동일성, 전장 공통 서열에 대해서 최대 85%의 동일성, 전장 Tyr 공통 서열에 대해서 최대 90%의 동일성, 전장 Tyr 공통 서열에 대해서 최대 91%의 동일성, 전장 Tyr 공통 서열에 대해서 최대 92%의 동일성, 전장 Tyr 공통 서열에 대해서 최대 93%의 동일성, 전장 Tyr 공통 서열에 대해서 최대 94%의 동일성, 전장 Tyr 공통 서열에 대해서 최대 95%의 동일성, 전장 Tyr 공통 서열에 대해서 최대 96%의 동일성, 전장 Tyr 공통 서열에 대해서 최대 97%의 동일성, 전장 Tyr 공통 서열에 대해서 최대 98%의 동일성, 및 전장 Tyr 공통 서열에 대해서 최대 99%의 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 Tyr 단백질에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 1의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 1의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 1의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 1의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 공통 Tyr 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 2이다. IgE 리더에 연결된 공통 Tyr 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 2이다. IgE 리더에 연결된 공통 Tyr 단백질의 아미노산 서열은 HA 태그에 연결될 수도 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 2와 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 2와 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열과 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열과 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열과 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열과 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 2에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 공통 단백질의 단편은 공통 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 서열번호 2의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 2의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 2의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 2에 대해서 95% 이상의 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 2의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
(2) 타이로시나제-관련 단백질 1(TYRP1)
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 타이로시나제-관련 단백질 1(TYRP1), 이의 단편, 이의 변이체를 포함할 수 있다. TYRP1 유전자에 의하여 암호화된 TYRP1는 75kDa막관통 당단백질이고, 정상 및 악성 멜라닌 세포 및 흑색종 세포 모두에서 발현된다. 타이로시나제와 같이, TYRP1는 소안구 전사 인자(MITF)에 결합될 수 있는 개질된 소위 M-박스(M-box)를 포함하며, 이는 색소침착, 세포 증식 및 분화를 활성화하는데 멜라닌 세포 내에서 중요한 역할을 한다. TYRP1는 타이로시나제를 안정화시키는데 도움을 줄 수 있고, 이형이량체를 형성할 수 있으며, 이는 타이로시나제-매개된 세포독성을 약화시킴으로써 멜라닌 세포의 조기 사망을 예방할 수 있다.
타이로시나제에 대하여 위에서 기술된 바와 같이, 타이로시나제-관련 단백질 1(TYRP-1)은 또한 멜라닌 세포의 멜라닌 및 색소 기작의 합성에 관련되며, 흑색종을 앓고 있는 대상체에서 면역계에 의하여 인식될 수 있다. 따라서, TYRP-1은 흑색종과 연관된 암 항원일 수 있다.
TRYP-1 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성 또는 세포성 및 체액성 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 예를 들어, 비제한적으로 MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자와 같은 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진하는 하나 이상의 면역 억제 인자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
TYRP-1 항원은 이에 대해 항-TYRP-1면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 그들이 특히 효과적이도록 만드는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. TYRP-1 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. TYRP-1 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
공통 TYRP-1 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. 공통 TYRP-1 항원을 암호화하는 핵산은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 TYRP-1 항원을 암호화하는 핵산 서열은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작 서열(예를 들면, GCC ACC)을 포함할 수 있다. 공통 TYRP-1 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예를 들면, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
공통 TYRP-1 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. 공통 TYRP-1 항원을 암호화하는 핵산 서열은 추가적으로 IgE 리더 서열을 암호화할 수 있으며, 이는 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 펩타이드 결합에 의해 공통 TYRP-1 항원의 아미노산 서열에 연결되도록 한다. 공통 TYRP-1 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 TYRP-1 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 함유하지 않는다.
공통 TYRP-1 항원은, 아미노산 서열 서열번호 4를 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 3일 수 있다. 서열번호 3은 IgE 리더 서열에 연결된 공통 TYRP-1 단백질을 암호화한다. 공통 TYRP-1 단백질은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 TYRP-1 단백질은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있거나 또는 이에 연결되지 않을 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 TYRP-1 항원은 서열번호 3에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 TYRP-1 항원은 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 TYRP-1 항원은 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 TYRP-1 공통 단백질에 대해서 상동성인 단백질, TYRP-1 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 공통 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 98% 상동성, 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 TYRP-1 공통 단백질, TYRP-1 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 TYRP-1 공통 단백질에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 TYRP-1 공통 서열에 대해서 최대 80%의 동일성, 전장 TYRP-1 공통 서열에 대해서 최대 85%의 동일성, 전장 TYRP-1 공통 서열에 대해서 최대 90%의 동일성, 전장 TYRP-1 공통 서열에 대해서 최대 91%의 동일성, 전장 TYRP-1 공통 서열에 대해서 최대 92%의 동일성, 전장 TYRP-1 공통 서열에 대해서 최대 93%의 동일성, 전장 TYRP-1 공통 서열에 대해서 최대 94%의 동일성, 전장 TYRP-1 공통 서열에 대해서 최대 95%의 동일성, 전장 TYRP-1 공통 서열에 대해서 최대 96%의 동일성, 전장 TYRP-1 공통 서열에 대해서 최대 97%의 동일성, 전장 TYRP-1 공통 서열에 대해서 최대 98%의 동일성, 및 전장 TYRP-1 공통 서열에 대해서 최대 99%의 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 TYRP-1 단백질에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 3의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 3의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 3의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 3의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 공통 TYRP-1 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 4이다. IgE 리더에 연결된 공통 TYRP-1 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 4이다. IgE 리더에 연결된 공통 TYRP-1 단백질의 아미노산 서열은 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 4와 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 4와 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 4에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 공통 단백질의 단편은 공통 TYRP-1 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 서열번호 4의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 4의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 4의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 4에 대해서 95% 이상의 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 4의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
(3) 타이로시나제-관련 단백질 2(TYRP2)
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 타이로시나제-관련 단백질 2(TYRP2, 또는 도파크롬 호변이성화효소(DCT)로 또한 알려짐), 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다. TYRP2/DCT 유전자에 의하여 암호화된 TYRP2/DCT는 519개 아미노산이고, 정상 및 악성 멜라닌 세포 및 흑색종 세포 모두에서 발현된다. TYRP2/DCT는, 타이로시나제 및 TYRP1과 결합하여, 멜라닌 세포에서 L-티로신을 멜라닌으로 전환하는데 있어 기능하는 잘-특성화된 멜라닌세포-특이적 효소이다. DCT는 특히 5,6-다이하이드로인돌-2-카복실산(DHICA)에 대한 멜라닌 전구체 L-도파크롬(DOPAchrome)의 토토머화를 촉진하고, 이는 이후 TYRP1에 의하여 산화되어 (상기 언급된 바와 같이) 유멜라닌(eumelanin)을 형성한다. 연구는 TYRP2/DCT이 DNA-손상성 제제에 대한 특이성을 갖는, 흑색종 세포에서의 약물 내성의 매개자일 수 있는 것을 보여주었다. TYRP2/DCT는 흑색종에서 높은 정도로 발현되는 것으로 종종 보고되어 왔으며, 이러한 멜라닌세포-특이적 효소는 다양한 항암 DNA-손상성 약물에 대한 흑색종의 내재적 약물 내성 표현형에 기여하는 중요한 역할을 한다.
타이로시나제에 대하여 위에서 기술된 바와 같이, 타이로시나제-관련 단백질 2(TYRP-2)는 또한 멜라닌 세포의 멜라닌 및 색소 기작의 합성에 관련되며, 흑색종을 앓고 있는 대상체에서 면역계에 의하여 인식될 수 있다. 추가적으로, TYRP-2는 흑색종 세포에서 약물 내성을 매개할 수 있다. 따라서, TYRP-2는 흑색종과 연관된 항원일 수 있다.
TRYP-2 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
TYRP2 항원은 항-TYRP2 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 이들이 특히 효과적이게 하는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. TYRP2 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. TYRP2 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
공통 TYRP2 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. 공통 TYRP2 항원을 암호화하는 핵산은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 TYRP2 항원을 암호화하는 핵산 서열은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작 서열(예를 들면, GCC ACC)을 포함할 수 있다. 공통 TYRP2 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예를 들면, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
공통 TYRP2 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. 공통 TYRP2 항원을 암호화하는 핵산은 추가적으로 IgE 리더 서열을 암호화할 수 있으며, 이는 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 펩타이드 결합에 의해 공통 TYRP2 항원의 아미노산 서열에 연결되도록 한다. 공통 TYRP2 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 TYRP2 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 함유하지 않는다.
공통 TYRP2 항원은 아미노산 서열 서열번호 6을 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 5일 수 있다. 서열번호 5는 IgE 리더 서열에 연결된 공통 TYRP2 단백질을 암호화한다. 공통 TYRP2 단백질은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 TYRP2 단백질은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있거나 또는 이에 연결되지 않을 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 TYRP2 항원은 서열번호 5에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 가진 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 TYRP2 항원은 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 TYRP2 항원은 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 TYRP2 공통 단백질에 대해서 상동성인 단백질, TYRP2 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 공통 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 98% 상동성, 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 TYRP2 공통 단백질, TYRP2 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 TYRP2 공통 단백질에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 TYRP2 공통 서열에 대해서 최대 80%의 동일성, 전장 공통 서열에 대해서 최대 85%의 동일성, 전장 TYRP2 공통 서열에 대해서 최대 90%의 동일성, 전장 TYRP2 공통 서열에 대해서 최대 91%의 동일성, 전장 TYRP2 공통 서열에 대해서 최대 92%의 동일성, 전장 TYRP2 공통 서열에 대해서 최대 93%의 동일성, 전장 TYRP2 공통 서열에 대해서 최대 94%의 동일성, 전장 TYRP2 공통 서열에 대해서 최대 95%의 동일성, 전장 TYRP2 공통 서열에 대해서 최대 96%의 동일성, 전장 TYRP2 공통 서열에 대해서 최대 97%의 동일성, 전장 TYRP2 공통 서열에 대해서 최대 98%의 동일성, 및 전장 TYRP2 공통 서열에 대해서 최대 99%의 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 TYRP2 단백질에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 5의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 5의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 5의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 5의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 공통 TYRP2 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 6이다. IgE 리더에 연결된 공통 TYRP2 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 6이다. IgE 리더에 연결된 공통 TYRP2 단백질의 아미노산 서열은 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 6과 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 6과 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 6에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 공통 단백질의 단편은 공통 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 서열번호 6의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 6의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 6의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 6에 대해서 95% 이상의 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 6의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
(4) 흑색종-연관 항원 4(MAGEA4)
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 흑색종-연관 항원 4(MAGEA4), 이의 단편 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다. MAGE-A4 유전자에 의하여 암호화된 MAGE-A4는 317개 아미노산이고, 위장, 식도, 및 폐 암종과 같은 다양한 조직학적 유형의 남성 생식 세포에서 발현된다. MAGE-A4는 종양단백질, 갠키린(Gankyrin)을 결합한다. 이러한 MAGE-A4 특이적 결합은 그의 C-말단에 의하여 매개된다. 연구는 외인성 MAGE-A4가 체외 갠키린-과발현 세포의 부착-의존적 성장을 부분적으로 억제하고 누드 마우스에서 이러한 세포로부터의 이주된 종양의 형성을 억제할 수 있다는 것을 보여주었다. 이러한 억제는 MAGE-A4 및 갠키린 사이의 결합에 의존적이며, 이는 갠키린 및 MAGE-A4 사이의 상호작용이 갠키린-매개된 발암을 억제한다는 것을 시사한다. 종양 조직에서의 MAGE 발현은 요인이 아니며, 종양 형성의 결과이고, MAGE 유전자는 파괴를 위하여 조기 종양 세포를 표적화함으로써 면역 과정에 참여하는 것으로 추정된다.
흑색종-연관 항원 4 단백질(MAGEA4)은 배아 발달 및 종양 변형 및/또는 진행에 관련될 수 있다. MAGEA4는 일반적으로 정소 및 태반에 발현된다. MAGEA4는, 그러나, 많은 상이한 유형의 종양, 예를 들어, 흑색종, 두경부 편평상피세포 암종, 폐 암종, 및 유방 암종에서 발현될 수 있다. 따라서, MAGEA4는 각종 종양과 연관된 항원일 수 있다.
MAGEA4 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
MAGEA4 항원은 항-MAGEA4 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 이들이 특히 효과적이게 하는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. MAGEA4 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. MAGEA4 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
공통 MAGEA4 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. 공통 MAGEA4 항원을 암호화하는 핵산은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 MAGEA4 항원을 암호화하는 핵산 서열은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작 서열(예를 들면, GCC ACC)을 포함할 수 있다. 공통 MAGEA4 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예를 들면, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
공통 MAGEA4 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. 공통 Tyr 항원을 암호화하는 핵산은 추가적으로 IgE 리더 서열을 암호화할 수 있으며, 이는 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 펩타이드 결합에 의해 공통 MAGEA4 항원의 아미노산 서열에 연결되도록 한다. 공통 MAGEA4 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 MAGEA4 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 함유하지 않는다.
공통 MAGEA4 항원은 아미노산 서열 서열번호 8을 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 7일 수 있다. 서열번호 7은 IgE 리더 서열에 연결된 공통 MAGEA4 단백질을 암호화한다. 공통 MAGEA4 단백질은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 MAGEA4 단백질은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있거나 또는 이에 연결되지 않을 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 MAGEA4 항원은 서열번호 7에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 MAGEA4 항원은 서열번호 8에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 MAGEA4 항원은 서열번호 8에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 MAGEA4 공통 단백질에 대해서 상동성인 단백질, MAGEA4 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 공통 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 98% 상동성, 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 MAGEA4 공통 단백질, MAGEA4 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 MAGEA4 공통 단백질에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 MAGEA4 공통 서열에 대해서 최대 80% 동일성, 전장 공통 서열에 대해서 최대 85% 동일성, 전장 MAGEA4 공통 서열에 대해서 최대 90% 동일성, 전장 MAGEA4 공통 서열에 대해서 최대 91% 동일성, 전장 MAGEA4 공통 서열에 대해서 최대 92% 동일성, 전장 MAGEA4 공통 서열에 대해서 최대 93% 동일성, 전장 MAGEA4 공통 서열에 대해서 최대 94% 동일성, 전장 MAGEA4 공통 서열에 대해서 최대 95% 동일성, 전장 MAGEA4 공통 서열에 대해서 최대 96% 동일성, 전장 MAGEA4 공통 서열에 대해서 최대 97% 동일성, 전장 MAGEA4 공통 서열에 대해서 최대 98% 동일성 및 전장 MAGEA4 공통 서열에 대해서 최대 99% 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 MAGEA4 단백질에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 7의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 7의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 7의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 7의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 공통 MAGEA4 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 8이다. IgE 리더에 연결된 공통 MAGEA4 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 8이다. IgE 리더에 연결된 공통 MAGEA4 단백질의 아미노산 서열은 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 8과 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 8과 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 8에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 공통 단백질의 단편은 공통 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 서열번호 8의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 8의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 8의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 8에 대해서 95% 이상의 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 8의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 8에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
(5) 성장 호르몬 방출 호르몬(GHRH)
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 성장 호르몬 방출 호르몬(GHRH; 또한 성장-호르몬-방출 인자(GRF 또는 GHRF) 또는 소마토크리닌), 이의 단편, 이의 변이체를 포함할 수 있다. GHRH는 시상하부의 궁상핵에서 생성된 44개의 아미노산 펩타이드 호르몬이다. GHRH는 시상하부에 의하여 분비되고, 뇌하수체로부터의 성장 호르몬, 성장, 대사 및 신체 구조의 조절 물질의 방출을 자극한다. GHRH는 또한 성장 호르몬의 생성물을 자극한다. GHRH의 길항제는 각종 암, 예를 들어, 골육종, 교모세포종, 전립선암, 신장암, 췌장암, 결장암, 및 유방암의 성장을 저해시킬 수 있다. 따라서, GHRH는 각종 종양과 연관된 항원일 수 있다.
GHRH 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
GHRH 항원은 항-GHRH 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 이들이 특히 효과적이게 하는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. GHRH 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. GHRH 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
공통 GHRH 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. 공통 GHRH 항원을 암호화하는 핵산은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 GHRH 항원을 암호화하는 핵산 서열은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작 서열(예를 들면, GCC ACC)을 포함할 수 있다. 공통 GHRH 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예를 들면, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
공통 GHRH 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. 공통 GHRH 항원을 암호화하는 핵산은 추가적으로 IgE 리더 서열을 암호화할 수 있으며, 이는 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 펩타이드 결합에 의해 공통 GHRH 항원의 아미노산 서열에 연결되도록 한다. 공통 GHRH 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 GHRH 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 함유하지 않는다.
공통 GHRH 항원은 아미노산 서열 서열번호 10을 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 9일 수 있다. 서열번호 9는 IgE 리더 서열에 연결된 공통 GHRH 단백질을 암호화한다. 공통 GHRH 단백질은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 GHRH 단백질은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있거나 또는 이에 연결되지 않을 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 GHRH 항원은 서열번호 9에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 GHRH 항원은 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 GHRH 항원은 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 GHRH 공통 단백질에 대해서 상동성인 단백질, GHRH 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 공통 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 98% 상동성, 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 GHRH 공통 단백질, GHRH 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 GHRH 공통 단백질에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 GHRH 공통 서열에 대해서 최대 80% 동일성, 전장 공통 서열에 대해서 최대 85% 동일성, 전장 GHRH 공통 서열에 대해서 최대 90% 동일성, 전장 GHRH 공통 서열에 대해서 최대 91% 동일성, 전장 GHRH 공통 서열에 대해서 최대 92% 동일성, 전장 GHRH 공통 서열에 대해서 최대 93% 동일성, 전장 GHRH 공통 서열에 대해서 최대 94% 동일성, 전장 GHRH 공통 서열에 대해서 최대 95% 동일성, 전장 GHRH 공통 서열에 대해서 최대 96% 동일성, 전장 GHRH 공통 서열에 대해서 최대 97% 동일성, 전장 GHRH 공통 서열에 대해서 최대 98% 동일성 및 전장 GHRH 공통 서열에 대해서 최대 99% 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 GHRH 단백질에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 9의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 9의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 9의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 9의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 공통 GHRH 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 10이다. IgE 리더에 연결된 공통 GHRH 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 10이다. IgE 리더에 연결된 공통 GHRH 단백질의 아미노산 서열은 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 10과 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 10과 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 10에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 공통 단백질의 단편은 공통 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 서열번호 10의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 10의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 10의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 10에 대해서 95% 이상의 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 10의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
(6) MART-1/Melan-A
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 MART-1(또한 Melan-A로 알려짐), 이의 단편, 이의 변이체를 포함할 수 있다. MLANA 유전자에 의하여 암호화된 MART-1은 단일 막관통 도메인을 함유하는 118-아미노산 단백질이고, 대부분의 흑색종 세포에서 발현한다. MART-1는 구조 단백질을 갖는 착물을 형성하고, 멜라노솜 구조 및 성숙을 위하여 필요한 그의 발현, 안정성, 수송 및 전개에 영향을 준다. 따라서, MART-1는 포유동물 색소침착을 조절하기 위하여 필수적이다. 멜라노솜 성숙의 결함은 암에 대한 민감성과 연관되어 왔다. MART-1은 흑색종을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아닌 다수의 암에서 발현될 수 있다.
T 세포(MART-1)에 의하여 인식된 흑색종 항원으로 또한 알려진 Melan-A는 멜라닌 세포 분화 항원이고, 정상 피부, 망막, 및 멜라닌 세포에서 발견될 수 있다. Melan-a는 소포체 및 멜라노솜과 연관될 수 있다. Melan-A는 흑색종 세포 상의 항원으로서 세포독성 T 세포에 의하여 인식될 수 있으나, 예를 들어, 투명 세포 육종 및 흑색증의 신경 섬유종과 같은 멜라닌 세포 기원 또는 분화를 갖는 다른 종양(즉, 멜라노솜을 갖는 세포)와 또한 연관될 수 있다. 따라서, Melan-A는 멜라노솜을 갖는 세포로부터 유래된 다양한 종양과 연관된 항원일 수 있다.
Melan-A 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
Melan-A 항원은 항-Melan-A 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 이들이 특히 효과적이게 하는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. Melan-A 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. Melan-A 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
공통 Melan-A 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. 공통 Melan-A 항원을 암호화하는 핵산은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 Melan-A 항원을 암호화하는 핵산 서열은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작 서열(예를 들면, GCC ACC)을 포함할 수 있다. 공통 Melan-A 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예를 들면, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
공통 Melan-A 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. 공통 Melan-A항원을 암호화하는 핵산 서열은 추가적으로 IgE 리더 서열을 암호화할 수 있으며, 이는 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 펩타이드 결합에 의해 공통 Melan-A 항원의 아미노산 서열에 연결되도록 한다. 공통 Melan-A 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 Melan-A 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 함유하지 않는다.
공통 Melan-A 항원은 아미노산 서열 서열번호 12를 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 11일 수 있다. 서열번호 11은 IgE 리더 서열에 연결된 공통 MELAN-A 단백질을 암호화한다. 공통 Melan-A 단백질은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 Melan-A 단백질은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있거나 또는 이에 연결되지 않을 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 Melan-A 항원은 서열번호 11에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 Melan-A 항원은 서열번호 12에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 Melan-A 항원은 서열번호 12에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 Melan-A 공통 단백질에 대해서 상동성인 단백질, Melan-A 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 공통 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 98% 상동성, 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 Melan-A 공통 단백질, Melan-A 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 Melan-A 공통 단백질에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 Melan-A 공통 서열에 대해서 최대 80% 동일성, 전장 Melan-A 공통 서열에 대해서 최대 85% 동일성, 전장 Melan-A 공통 서열에 대해서 최대 90% 동일성, 전장 Melan-A 공통 서열에 대해서 최대 91% 동일성, 전장 Melan-A 공통 서열에 대해서 최대 92% 동일성, 전장 Melan-A 공통 서열에 대해서 최대 93% 동일성, 전장 Melan-A 공통 서열에 대해서 최대 94% 동일성, 전장 Melan-A 공통 서열에 대해서 최대 95% 동일성, 전장 Melan-A 공통 서열에 대해서 최대 96% 동일성, 전장 Melan-A 공통 서열에 대해서 최대 97% 동일성, 전장 Melan-A 공통 서열에 대해서 최대 98% 동일성 및 전장 Melan-A 공통 서열에 대해서 최대 99% 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 Melan-A 단백질에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 11의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 11의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 11의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 11의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 공통 Melan-A 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 12이다. IgE 리더에 연결된 공통 Melan-A 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 12이다. IgE 리더에 연결된 공통 Melan-A 단백질의 아미노산 서열은 또한 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 12와 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 12와 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 12에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 공통 단백질의 단편은 공통 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 서열번호 12의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 12의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 12의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 12에 대해서 95% 이상의 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 12의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 12에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
(7) NY-ESO-1
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 뉴욕(New York)-식도암-1(NY-ESO-1; 또한 CTAG1로 불림), 이의 단편, 이의 변이체를 포함할 수 있다. CTAG1B 유전자에 의하여 암호화된 NY-ESO-1는 글리신-풍부 N-말단 영역 및 극도로 소수성의 C-말단을 갖는 180-아미노산 긴 단백질이다. NY-ESO-1는 정상 조직에서 발현이 제한적이나, 암에서는 발생 빈도가 높다. NY-ESO-1는 방광, 결장, 식도, 위, 간암종, 두경부, 흑색종, 소세포 폐, 방광, 췌장, 윤활 암종 및 전립선암을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아닌 많은 암에서 발현될 수 있다.
암-정소 항원(NY-ESO-1)은 정소 및 난소에서 발현될 수 있다. NY-ESO-1는 다양한 암과 연관될 수 있으며, 체액성 면역 반응을 유도할 수 있다. 암 또는 종양을 앓고 있는 대상체는 NY-ESO-1에 면역원성을 발달시킨다. 따라서, NY-ESO-1는 다양한 종양과 연관된 항원일 수 있다.
NY-ESO-1 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
NY-ESO-1 항원은, NY-ESO-1 항원이 투여되지 않은 대상체의 세포성 면역 반응과 비교하여, NY-ESO-1 항원이 투여된 대상체에서 약 50배 내지 약 6000배, 약 50배 내지 약 5500배, 약 50배 내지 약 5000배, 약 50배 내지 약 4500배, 약 100배 내지 약 6000배, 약 150배 내지 약 6000배, 약 200배 내지 약 6000배, 약 250배 내지 약 6000배, 또는 약 300배 내지 약 6000배만큼 세포성 면역 반응을 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서 NY-ESO-1 항원은, NY-ESO-1 항원이 투여되지 않은 대상체의 세포성 면역 반응과 비교하여, NY-ESO-1 항원이 투여된 대상체에서 약 50배, 100배, 150배, 200배, 250배, 300배, 350배, 400배, 450배, 500배, 550배, 600배, 650배, 700배, 750배, 800배, 850배, 900배, 950배, 1000배, 1100배, 1200배, 1300배, 1400배, 1500배, 1600배, 1700배, 1800배, 1900배, 2000배, 2100배, 2200배, 2300배, 2400배, 2500배, 2600배, 2700배, 2800배, 2900배, 3000배, 3100배, 3200배, 3300배, 3400배, 3500배, 3600배, 3700배, 3800배, 3900배, 4000배, 4100배, 4200배, 4300배, 4400배, 4500배, 4600배, 4700배, 4800배, 4900배, 5000배, 5100배, 5200배, 5300배, 5400배, 5500배, 5600배, 5700배, 5800배, 5900배, 또는 6000배만큼 세포성 면역 반응을 증가시킬 수 있다.
NY-ESO-1 항원은, NY-ESO-1 항원이 투여되지 않은 대상체의 인터페론 감마(IFN-γ) 수준과 비교하여, NY-ESO-1 항원이 투여된 대상체에서 약 50배 내지 약 6000배, 약 50배 내지 약 5500배, 약 50배 내지 약 5000배, 약 50배 내지 약 4500배, 약 100배 내지 약 6000배, 약 150배 내지 약 6000배, 약 200배 내지 약 6000배, 약 250배 내지 약 6000배, 또는 약 300배 내지 약 6000배만큼 IFN-γ 수준을 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, NY-ESO-1 항원은, NY-ESO-1 항원이 투여되지 않은 대상체의 IFN-γ 수준과 비교하여, NY-ESO-1 항원이 투여된 대상체에서 약 50배, 100배, 150배, 200배, 250배, 300배, 350배, 400배, 450배, 500배, 550배, 600배, 650배, 700배, 750배, 800배, 850배, 900배, 950배, 1000배, 1100배, 1200배, 1300배, 1400배, 1500배, 1600배, 1700배, 1800배, 1900배, 2000배, 2100배, 2200배, 2300배, 2400배, 2500배, 2600배, 2700배, 2800배, 2900배, 3000배, 3100배, 3200배, 3300배, 3400배, 3500배, 3600배, 3700배, 3800배, 3900배, 4000배, 4100배, 4200배, 4300배, 4400배, 4500배, 4600배, 4700배, 4800배, 4900배, 5000배, 5100배, 5200배, 5300배, 5400배, 5500배, 5600배, 5700배, 5800배, 5900배, 또는 6000배만큼 IFN-γ 수준을 증가시킬 수 있다.
NY-ESO-1 항원은 항-NY-ESO-1 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 이들이 특히 효과적이게 하는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. NY-ESO-1 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. NY-ESO-1 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
공통 NY-ESO-1 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. 공통 NY-ESO-1 항원을 암호화하는 핵산은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 NY-ESO-1 항원을 암호화하는 핵산 서열은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작 서열(예를 들면, GCC ACC)을 포함할 수 있다. 공통 NY-ESO-1 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예를 들면, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
공통 NY-ESO-1 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. 공통 NY-ESO-1 항원을 암호화하는 핵산은 추가적으로 IgE 리더 서열을 암호화할 수 있으며, 이는 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 펩타이드 결합에 의해 공통 NY-ESO-1 항원의 아미노산 서열에 연결되도록 한다. 공통 NY-ESO-1 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 NY-ESO-1 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 함유하지 않는다.
공통 NY-ESO-1 항원은 아미노산 서열 서열번호 14를 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 13일 수 있다. 서열번호 13은 IgE 리더 서열에 연결된 공통 NY-ESO-1 단백질을 암호화한다. 공통 NY-ESO-1 단백질은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 NY-ESO-1 단백질은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있거나 또는 이에 연결되지 않을 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 NY-ESO-1 항원은 서열번호 13에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 NY-ESO-1 항원은 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 NY-ESO-1 항원은 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 NY-ESO-1 공통 단백질에 대해서 상동성인 단백질, NY-ESO-1 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 공통 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 98% 상동성, 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 NY-ESO-1 공통 단백질, NY-ESO-1 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 NY-ESO-1 공통 단백질에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 NY-ESO-1 공통 서열에 대해서 최대 80% 동일성, 전장 공통 서열에 대해서 최대 85% 동일성, 전장 NY-ESO-1 공통 서열에 대해서 최대 90% 동일성, 전장 NY-ESO-1 공통 서열에 대해서 최대 91% 동일성, 전장 NY-ESO-1 공통 서열에 대해서 최대 92% 동일성, 전장 NY-ESO-1 공통 서열에 대해서 최대 93% 동일성, 전장 NY-ESO-1 공통 서열에 대해서 최대 94% 동일성, 전장 NY-ESO-1 공통 서열에 대해서 최대 95% 동일성, 전장 NY-ESO-1 공통 서열에 대해서 최대 96% 동일성, 전장 NY-ESO-1 공통 서열에 대해서 최대 97% 동일성, 전장 NY-ESO-1 공통 서열에 대해서 최대 98% 동일성 및 전장 NY-ESO-1 공통 서열에 대해서 최대 99% 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 NY-ESO-1에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 13의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 13의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 13의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 13의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 공통 NY-ESO-1 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 14이다. IgE 리더에 연결된 공통 NY-ESO-1 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 14이다. IgE 리더에 연결된 공통 NY-ESO-1 단백질의 아미노산 서열은 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 14와 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 14와 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 14에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 공통 단백질의 단편은 공통 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 서열번호 14의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 14의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 14의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 14에 대해서 95% 이상의 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 14의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
(8) NY-ESO-2
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 뉴욕-식도암-2(NY-ESO-2; 또한 암/정소 항원 2, ESO2, 및 LAGE1로 불림), 이의 단편, 이의 변이체를 포함할 수 있다. NY-ESO-2는 암-정소 항원의 ESO/LAGE 패밀리에 속한 자가면역성 종양 항원이다. NY-ESO-2는 흑색종, 유방암, 방광암, 및 전립선암을 포함한 다양한 암에 발현될 수 있으며, 일반적으로 정소 조직에서 발현된다. 추가적으로, NY-ESO-2는 흑색종, 비-소세포 폐 암종, 방광, 전립선 및 두경부 암의 종양 표본의 25-50%에서 관찰될 수 있다. NY-ESO-2를 암호화하는 유전자는 또한 CAMEL로 불리는 단백질, 흑색종-특이적 세포독성 T-림프구에 의하여 인식되는 종양 항원을 암호화하는 대안적인 개방 판독 프레임을 함유한다.
NY-ESO-1과 유사하게, NY-ESO-2는 정소 및 난소에서 발현될 수 있다. NY-ESO-2는 다양한 암과 연관되고, 암 또는 종양을 앓고 있는 대상체에서 면역원성일 수 있다. 따라서, NY-ESO-2는 다양한 종양과 연관된 항원일 수 있다.
NY-ESO-2 항원은 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
NY-ESO-2 항원은, NY-ESO-2 항원이 투여되지 않은 대상체의 세포성 면역 반응과 비교하여, NY-ESO-2 항원이 투여된 대상체에서 약 50배 내지 약 6000배, 약 50배 내지 약 5500배, 약 50배 내지 약 5000배, 약 50배 내지 약 4500배, 약 100배 내지 약 6000배, 약 150배 내지 약 6000배, 약 200배 내지 약 6000배, 약 250배 내지 약 6000배, 또는 약 300배 내지 약 6000배만큼 세포성 면역 반응을 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서 NY-ESO-2 항원은, NY-ESO-2 항원이 투여되지 않은 대상체의 세포성 면역 반응과 비교하여, NY-ESO-2 항원이 투여된 대상체에서 약 50배, 100배, 150배, 200배, 250배, 300배, 350배, 400배, 450배, 500배, 550배, 600배, 650배, 700배, 750배, 800배, 850배, 900배, 950배, 1000배, 1100배, 1200배, 1300배, 1400배, 1500배, 1600배, 1700배, 1800배, 1900배, 2000배, 2100배, 2200배, 2300배, 2400배, 2500배, 2600배, 2700배, 2800배, 2900배, 3000배, 3100배, 3200배, 3300배, 3400배, 3500배, 3600배, 3700배, 3800배, 3900배, 4000배, 4100배, 4200배, 4300배, 4400배, 4500배, 4600배, 4700배, 4800배, 4900배, 5000배, 5100배, 5200배, 5300배, 5400배, 5500배, 5600배, 5700배, 5800배, 5900배, 또는 6000배만큼 세포성 면역 반응을 증가시킬 수 있다.
NY-ESO-2 항원은, NY-ESO-2 항원이 투여되지 않은 대상체의 인터페론 감마(IFN-γ) 수준과 비교하여, NY-ESO-2 항원이 투여된 대상체에서 약 50배 내지 약 6000배, 약 50배 내지 약 5500배, 약 50배 내지 약 5000배, 약 50배 내지 약 4500배, 약 100배 내지 약 6000배, 약 150배 내지 약 6000배, 약 200배 내지 약 6000배, 약 250배 내지 약 6000배, 또는 약 300배 내지 약 6000배만큼 IFN-γ 수준을 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, NY-ESO-2 항원은, NY-ESO-2 항원이 투여되지 않은 대상체의 IFN-γ 수준과 비교하여, NY-ESO-2 항원이 투여된 대상체에서 약 50배, 100배, 150배, 200배, 250배, 300배, 350배, 400배, 450배, 500배, 550배, 600배, 650배, 700배, 750배, 800배, 850배, 900배, 950배, 1000배, 1100배, 1200배, 1300배, 1400배, 1500배, 1600배, 1700배, 1800배, 1900배, 2000배, 2100배, 2200배, 2300배, 2400배, 2500배, 2600배, 2700배, 2800배, 2900배, 3000배, 3100배, 3200배, 3300배, 3400배, 3500배, 3600배, 3700배, 3800배, 3900배, 4000배, 4100배, 4200배, 4300배, 4400배, 4500배, 4600배, 4700배, 4800배, 4900배, 5000배, 5100배, 5200배, 5300배, 5400배, 5500배, 5600배, 5700배, 5800배, 5900배, 또는 6000배만큼 IFN-γ 수준을 증가시킬 수 있다.
NY-ESO-2 항원은 항-NY-ESO-2 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 이들이 특히 효과적이게 하는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. NY-ESO-2 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. NY-ESO-2 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
공통 NY-ESO-2 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. 공통 NY-ESO-2 항원을 암호화하는 핵산은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 NY-ESO-2 항원을 암호화하는 핵산 서열은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작 서열(예를 들면, GCC ACC)을 포함할 수 있다. 공통 NY-ESO-2 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예를 들면, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
공통 NY-ESO-2 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. 공통 NY-ESO-2 항원을 암호화하는 핵산은 추가적으로 IgE 리더 서열을 암호화할 수 있으며, 이는 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 펩타이드 결합에 의해 공통 NY-ESO-2 항원의 아미노산 서열에 연결되도록 한다. 공통 NY-ESO-2 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 NY-ESO-2 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 함유하지 않는다.
공통 NY-ESO-2 항원은 아미노산 서열 서열번호 16을 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 15일 수 있다. 서열번호 1은 IgE 리더 서열에 연결된 공통 NY-ESO-2 단백질을 암호화한다. 공통 NY-ESO-2 단백질은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 NY-ESO-2 단백질은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있거나 또는 이에 연결되지 않을 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 NY-ESO-2 항원은 서열번호 15에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 NY-ESO-2 항원은 서열번호 16에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 NY-ESO-2 항원은 서열번호 16에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 NY-ESO-2 공통 단백질에 대해서 상동성인 단백질, NY-ESO-2 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 공통 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 98% 상동성, 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 NY-ESO-2 공통 단백질, NY-ESO-2 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 NY-ESO-2 공통 단백질에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 NY-ESO-2 공통 서열에 대해서 최대 80% 동일성, 전장 공통 서열에 대해서 최대 85% 동일성, 전장 NY-ESO-2 공통 서열에 대해서 최대 90% 동일성, 전장 NY-ESO-2 공통 서열에 대해서 최대 91% 동일성, 전장 NY-ESO-2 공통 서열에 대해서 최대 92% 동일성, 전장 NY-ESO-2 공통 서열에 대해서 최대 93% 동일성, 전장 NY-ESO-2 공통 서열에 대해서 최대 94% 동일성, 전장 NY-ESO-2 공통 서열에 대해서 최대 95% 동일성, 전장 NY-ESO-2 공통 서열에 대해서 최대 96% 동일성, 전장 NY-ESO-2 공통 서열에 대해서 최대 97% 동일성, 전장 NY-ESO-2 공통 서열에 대해서 최대 98% 동일성 및 전장 NY-ESO-2 공통 서열에 대해서 최대 99% 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 NY-ESO-2에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 15의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 15의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 15의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 15의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 공통 NY-ESO-2 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 16이다. IgE 리더에 연결된 공통 NY-ESO-2 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 16이다. IgE 리더에 연결된 공통 NY-ESO-2 단백질의 아미노산 서열은 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 16과 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 16과 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 공통 단백질의 단편은 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 공통 단백질을 포함할 수 있다. 서열번호 16의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 16의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 16의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 16에 대해서 95% 이상의 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 16의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 16에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
(9) PRAME
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 PRAME, 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다. PRAME 유전자에 의하여 암호화된 PRAME은 509개 아미노산으로 구성된 단백질이고, 정소, 태반, 자궁내막, 난소, 부신에서, 그리고 흑색종, 폐, 신장, 및 두경부 암종에서 유래된 조직에서 발현된다. PRAME은 또한 성인 및 소아의 급성 백혈병 및 다발성 골수종에서 발현된다. PRAME은 HLA-A24에 의하여 제시될 때, 세포성 반응을 야기할 수 있는 면역원성 노나펩타이드를 함유한다. 연구는 배양된 세포에서 PRAME의 과발현이 보다 느린 증식 속도에 책임이 있는 카스파제-의존적 세포사를 유도한다는 것을 보여준다. 다른 연구는 PRAME의 과발현이 또한 레티노산 수용체(RAR) 신호를 길항함으로써 성장 또는 생존 이점을 부여하고, 인과적으로 종양 형성 과정에 관여한다는 것을 입증한다. RAR 신호의 간섭은 세포성 증식, 전개 및 분화를 조절하는데 있어 손실을 야기한다.
PRAME은 암-정소 항원 MAGE, BAGE, 및 GAGE와 유사한 발현 패턴, 즉 정소에서의 발현을 가질 수 있다. PRAME은 그러나, 인간 흑색종 및 급성 백혈병에서 발현될 수 있다. PRAME은 세포독성 T 림프구에 의하여 인식될 수 있다. 따라서, PRAME은 흑색종 및 백혈병과 연관된 항원일 수 있다.
PRAME 항원은 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
PRAME 항원은, PRAME 항원이 투여되지 않은 대상체의 세포성 면역 반응과 비교하여, PRAME 항원이 투여된 대상체에서 약 50배 내지 약 6000배, 약 50배 내지 약 5500배, 약 50배 내지 약 5000배, 약 50배 내지 약 4500배, 약 100배 내지 약 6000배, 약 150배 내지 약 6000배, 약 200배 내지 약 6000배, 약 250배 내지 약 6000배, 또는 약 300배 내지 약 6000배만큼 세포성 면역 반응을 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서 PRAME 항원은, PRAME 항원이 투여되지 않은 대상체에서의 세포성 면역 반응과 비교하여, PRAME 항원을 투여한 대상체에서 약 50배, 100배, 150배, 200배, 250배, 300배, 350배, 400배, 450배, 500배, 550배, 600배, 650배, 700배, 750배, 800배, 850배, 900배, 950배, 1000배, 1100배, 1200배, 1300배, 1400배, 1500배, 1600배, 1700배, 1800배, 1900배, 2000배, 2100배, 2200배, 2300배, 2400배, 2500배, 2600배, 2700배, 2800배, 2900배, 3000배, 3100배, 3200배, 3300배, 3400배, 3500배, 3600배, 3700배, 3800배, 3900배, 4000배, 4100배, 4200배, 4300배, 4400배, 4500배, 4600배, 4700배, 4800배, 4900배, 5000배, 5100배, 5200배, 5300배, 5400배, 5500배, 5600배, 5700배, 5800배, 5900배, 또는 6000배만큼 세포성 면역 반응을 증가시킬 수 있다.
PRAME 항원은, PRAME 항원이 투여되지 않은 대상체의 인터페론 감마(IFN-γ) 수준과 비교하여, PRAME 항원이 투여된 대상체에서 약 50배 내지 약 6000배, 약 50배 내지 약 5500배, 약 50배 내지 약 5000배, 약 50배 내지 약 4500배, 약 100배 내지 약 6000배, 약 150배 내지 약 6000배, 약 200배 내지 약 6000배, 약 250배 내지 약 6000배, 또는 약 300배 내지 약 6000배만큼 IFN-γ 수준을 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, PRAME 항원은, PRAME 항원이 투여되지 않은 대상체에서의 IFN-γ 수준과 비교하여, PRAME 항원을 투여한 대상체에서 약 50배, 100배, 150배, 200배, 250배, 300배, 350배, 400배, 450배, 500배, 550배, 600배, 650배, 700배, 750배, 800배, 850배, 900배, 950배, 1000배, 1100배, 1200배, 1300배, 1400배, 1500배, 1600배, 1700배, 1800배, 1900배, 2000배, 2100배, 2200배, 2300배, 2400배, 2500배, 2600배, 2700배, 2800배, 2900배, 3000배, 3100배, 3200배, 3300배, 3400배, 3500배, 3600배, 3700배, 3800배, 3900배, 4000배, 4100배, 4200배, 4300배, 4400배, 4500배, 4600배, 4700배, 4800배, 4900배, 5000배, 5100배, 5200배, 5300배, 5400배, 5500배, 5600배, 5700배, 5800배, 5900배, 또는 6000배만큼 IFN-γ 수준을 증가시킬 수 있다.
PRAME 항원은 항-PRAME 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 이들이 특히 효과적이게 하는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. PRAME 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. PRAME 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
공통 PRAME 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. 공통 PRAME 항원을 암호화하는 핵산은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 PRAME 항원을 암호화하는 핵산 서열은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작 서열(예를 들면, GCC ACC)을 포함할 수 있다. 공통 PRAME 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예를 들면, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
공통 PRAME 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. 공통 PRAME 항원을 암호화하는 핵산 서열은 추가적으로 IgE 리더 서열을 암호화할 수 있으며, 이는 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 펩타이드 결합에 의해 공통 PRAME 항원의 아미노산 서열에 연결되도록 한다. 공통 PRAME 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 PRAME 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 함유하지 않는다.
공통 PRAME 항원은 아미노산 서열 서열번호 18을 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 17일 수 있다. 서열번호 17은 IgE 리더 서열에 연결된 공통 PRAME 단백질을 암호화한다. 공통 PRAME 단백질은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 PRAME 단백질은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있거나 또는 이에 연결되지 않을 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 PRAME 항원은 서열번호 17에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 PRAME 항원은 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 PRAME 항원은 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 PRAME 공통 단백질에 대해서 상동성인 단백질, PRAME 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 공통 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 98% 상동성, 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 PRAME 공통 단백질, PRAME 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 PRAME 공통 단백질에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 PRAME 공통 서열에 대해서 최대 80% 동일성, 전장 공통 서열에 대해서 최대 85% 동일성, 전장 PRAME 공통 서열에 대해서 최대 90% 동일성, 전장 PRAME 공통 서열에 대해서 최대 91% 동일성, 전장 PRAME 공통 서열에 대해서 최대 92% 동일성, 전장 PRAME 공통 서열에 대해서 최대 93% 동일성, 전장 PRAME 공통 서열에 대해서 최대 94% 동일성, 전장 PRAME 공통 서열에 대해서 최대 95% 동일성, 전장 PRAME 공통 서열에 대해서 최대 96% 동일성, 전장 PRAME 공통 서열에 대해서 최대 97% 동일성, 전장 PRAME 공통 서열에 대해서 최대 98% 동일성 및 전장 PRAME 공통 서열에 대해서 최대 99% 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 PRAME 단백질에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 17의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 17의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 17의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 17의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 공통 PRAME 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 18이다. IgE 리더에 연결된 공통 PRAME 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 18이다. IgE 리더에 연결된 공통 PRAME 단백질의 아미노산 서열은 또한 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 18과 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 18과 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 18에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 공통 단백질의 단편은 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 공통 단백질을 포함할 수 있다. 서열번호 18의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 18의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 18의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 18에 대해서 95% 이상의 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 18의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
(10) PSA
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 전립선-특이적 항원(PSA; 또한 감마-세미노프로테인 또는 칼리크레인-3(KLK3)으로 불림), 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다. PSA는 전립선 상피 세포 및 전립선암 세포에 의하여 생성되고 KLK3 유전자에 의하여 암호화된 안드로젠-조절된 세린 프로테아제이다. PSA는 종종 전립선암에 대한 혈청 마커로서 사용된다. PSA는 조직 칼리크레인 패밀리의 구성원이고, 활성 효소를 방출하는 전구효소의 절단 후 정액 응고물에서 정낭 분비물을 절단하고, 이로써 정액을 액화하여 정자가 자유롭게 유영하게 한다. 추가적으로, PSA 효소 활성은 아연 농도에 의하여 조절되며, 즉 높은 아연 농도는 PSA의 효소 활성을 저해한다.
PSA 항원은 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
PSA 항원은 항-PSA 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 이들이 특히 효과적이게 하는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. PSMA 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. PSA 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
공통 PSA 항원은 아미노산 서열 서열번호 64를 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 63일 수 있다. 공통 PSA 단백질은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 PSA 단백질은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있거나 또는 이에 연결되지 않을 수 있다. 공통 PSA 서열은 개시 코돈 및 적어도 하나의 정지 코돈을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아닌 조절 서열에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 PSA 항원은 서열번호 63에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 PSA 항원은 서열번호 64에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 PSA 항원은 서열번호 64에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 PSA 공통 단백질에 대해서 상동성인 단백질, PSA 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 공통 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 98% 상동성, 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 PSA 공통 단백질, PSA 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 PSA 공통 단백질에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 PSA 공통 서열에 대해서 최대 80% 동일성, 전장 공통 서열에 대해서 최대 85% 동일성, 전장 PSA 공통 서열에 대해서 최대 90% 동일성, 전장 PSA 공통 서열에 대해서 최대 91% 동일성, 전장 PSA 공통 서열에 대해서 최대 92% 동일성, 전장 PSA 공통 서열에 대해서 최대 93% 동일성, 전장 PSA 공통 서열에 대해서 최대 94% 동일성, 전장 PSA 공통 서열에 대해서 최대 95% 동일성, 전장 PSA 공통 서열에 대해서 최대 96% 동일성, 전장 PSA 공통 서열에 대해서 최대 97% 동일성, 전장 PSA 공통 서열에 대해서 최대 98% 동일성 및 전장 PSA 공통 서열에 대해서 최대 99% 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 PSA 단백질에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 63의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 63의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 63의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 63의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 공통 PSA 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 64이다. IgE 리더에 연결된 공통 PSA 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 64이다. IgE 리더에 연결된 공통 PSA 단백질의 아미노산 서열은 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 64와 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 64와 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 64에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 공통 단백질의 단편은 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 공통 단백질을 포함할 수 있다. 서열번호 64의 면역원성 단편이 제공된다. 면역원성 단편은 서열번호 64의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 64의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 64에 대해서 95% 이상의 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 64의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 64에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
공통 PSA 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. 공통 PSA 항원을 암호화하는 핵산은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 PSA 항원을 암호화하는 핵산 서열은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작 서열(예를 들면, GCC ACC)을 포함할 수 있다. 공통 PSA 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예를 들면, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
공통 PSA 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. 공통 PSA 항원을 암호화하는 핵산 서열은 추가적으로 IgE 리더 서열을 암호화할 수 있으며, 이는 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 펩타이드 결합에 의해 공통 PSAP 항원의 아미노산 서열에 연결되도록 한다. 공통 PSA 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 PSA 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 함유하지 않는다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 PSA 항원을 암호화하는 핵산은 이종성 핵산 서열일 수 있고/있거나 하나 이상의 이종성 핵산 서열을 함유할 수 있다.
(11) PSMA
본 발명의 면역원성 조성물은 PSMA는 암 항원 전립선 특이적 막 항원(PSMA; 글루타메이트 카르복시펩티다아제 II(GCPII), N-아세틸-L-아스파르틸-L-글루타메이트 펩티다아제 I(NAALADase I), NAAG 펩티다아제로 알려짐), 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다. PSMA는 엽산 가수분해효소 1(FOLH1) 유전자에 의하여 암호화된다. PSMA는 막 및 세포외 공간에 거주하는 것으로 발견된 아연 금속효소이다. PSMA는 인간 전립선에서 높은 정도로 발현되고, 전립선암에서 상향조절된다. PSMA는 또한 신장, 유방, 및 결장의 고형암과 같은 다른 암에서 과발현되는 것으로 확인되어 있다.
PSMA 항원은 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
PSMA 항원은 항-PSMA 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 이들이 특히 효과적이게 하는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. PSMA 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. PSMA 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
공통 PSMA 항원은 아미노산 서열 서열번호 66을 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 65일 수 있다. 공통 PSMA 단백질은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 PSMA 단백질은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있거나 또는 이에 연결되지 않을 수 있다. 공통 PSMA 서열은 개시 코돈 및 적어도 하나의 정지 코돈을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아닌 조절 서열에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 PSMA 항원은 서열번호 65에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 PSMA 항원은 서열번호 66에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 PSMA 항원은 서열번호 66에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 PSMA 공통 단백질에 대해서 상동성인 단백질, PSMA 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 공통 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 98% 상동성, 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 PSMA 공통 단백질, PSMA 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 PSMA 공통 단백질에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 PSMA 공통 서열에 대해서 최대 80% 동일성, 전장 공통 서열에 대해서 최대 85% 동일성, 전장 PSMA 공통 서열에 대해서 최대 90% 동일성, 전장 PSMA 공통 서열에 대해서 최대 91% 동일성, 전장 PSMA 공통 서열에 대해서 최대 92% 동일성, 전장 PSMA 공통 서열에 대해서 최대 93% 동일성, 전장 PSMA 공통 서열에 대해서 최대 94% 동일성, 전장 PSMA 공통 서열에 대해서 최대 95% 동일성, 전장 PSMA 공통 서열에 대해서 최대 96% 동일성, 전장 PSMA 공통 서열에 대해서 최대 97% 동일성, 전장 PSMA 공통 서열에 대해서 최대 98% 동일성 및 전장 PSMA 공통 서열에 대해서 최대 99% 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 PSMA 단백질에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 65의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 65의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 65의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 65의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 공통 PSMA 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 66이다. IgE 리더에 연결된 공통 PSMA 단백질의 아미노산 서열은서열번호 66이다. IgE 리더에 연결된 공통 PSMA 단백질의 아미노산 서열은 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 66과 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 66과 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 66에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 공통 단백질의 단편은 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 공통 단백질을 포함할 수 있다. 서열번호 66의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 66의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 66의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 66에 대해서 95% 이상의 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 66의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 66에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
공통 PSMA 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. 공통 PSMA 항원을 암호화하는 핵산은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 PSMA 항원을 암호화하는 핵산 서열은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작 서열(예를 들면, GCC ACC)을 포함할 수 있다. 공통 PSMA 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예를 들면, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
공통 PSMA 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. 공통 PSMA 항원을 암호화하는 핵산 서열은 추가적으로 IgE 리더 서열을 암호화할 수 있으며, 이는 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 펩타이드 결합에 의해 공통 PSMA P항원의 아미노산 서열에 연결되도록 한다. 공통 PSMA 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 PSMA 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 함유하지 않는다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 PSMA 항원을 암호화하는 핵산은 이종성 핵산 서열일 수 있고/있거나 하나 이상의 이종성 핵산 서열을 함유할 수 있다.
(12) STEAP
본 발명의 면역원성 조성물은 전립선 항원의 암 항원 6-막관통 상피 항원(STEAP), 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다. STEAP는 STEAP1 유전자에 의하여 암호화된 금속 환원효소이다. STEAP는 전립선 조직에 널리 발현되고, 암 세포에서 상향 조절된다. STEAP는 6-막관통 단백질로 예측되고, 세포-세포 접합부에서 발견된 세포 표면 항원이다.
STEAP 항원은 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
STEAP 항원은 항-STEAP 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 이들이 특히 효과적이게 하는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. STEAP 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. STEAP 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
공통 STEAP 항원은 아미노산 서열 서열번호 68을 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 67일 수 있다. 공통 STEAP 단백질은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 STEAP 단백질은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있거나 또는 이에 연결되지 않을 수 있다. 공통 STEAP 서열은 개시 코돈 및 적어도 하나의 정지 코돈을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아닌 조절 서열에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 STEAP 항원은 서열번호 67에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 STEAP 항원은 서열번호 68에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 STEAP 항원은 서열번호 68에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 STEAP 공통 단백질에 대해서 상동성인 단백질, STEAP 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 공통 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 98% 상동성, 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 STEAP 공통 단백질, STEAP 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 STEAP 공통 단백질에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 STEAP 공통 서열에 대해서 최대 80% 동일성, 전장 공통 서열에 대해서 최대 85% 동일성, 전장 STEAP 공통 서열에 대해서 최대 90% 동일성, 전장 STEAP 공통 서열에 대해서 최대 91% 동일성, 전장 STEAP 공통 서열에 대해서 최대 92% 동일성, 전장 STEAP 공통 서열에 대해서 최대 93% 동일성, 전장 STEAP 공통 서열에 대해서 최대 94% 동일성, 전장 STEAP 공통 서열에 대해서 최대 95% 동일성, 전장 STEAP 공통 서열에 대해서 최대 96% 동일성, 전장 STEAP 공통 서열에 대해서 최대 97% 동일성, 전장 STEAP 공통 서열에 대해서 최대 98% 동일성 및 전장 STEAP 공통 서열에 대해서 최대 99% 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 STEAP 단백질에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 67의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 67의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 67의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 67의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 공통 STEAP 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 68이다. IgE 리더에 연결된 공통 STEAP 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 68이다. IgE 리더에 연결된 공통 STEAP 단백질의 아미노산 서열은 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 68과 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 68과 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 68에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 공통 단백질의 단편은 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 공통 단백질을 포함할 수 있다. 서열번호 68의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 68의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 68의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 68에 대해서 95% 이상의 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 68의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 68에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
공통 STEAP 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. 공통 STEAP 항원을 암호화하는 핵산 서열은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 STEAP 항원을 암호화하는 핵산은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작 서열(예를 들면, GCC ACC)을 포함할 수 있다. 공통STEAP 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예를 들면, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
공통 STEAP 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. 공통 STEAP 항원을 암호화하는 핵산 서열은 추가적으로 IgE 리더 서열을 암호화할 수 있으며, 이는 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 펩타이드 결합에 의해 공통 STEAP 항원의 아미노산 서열에 연결되도록 한다. 공통 STEAP 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 STEAP 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 함유하지 않는다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 STEAP 항원을 암호화하는 핵산은 이종성 핵산 서열일 수 있고/있거나 하나 이상의 이종성 핵산 서열을 함유할 수 있다.
(13) PSCA
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 특이적 줄기 세포 항원(PSCA), 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다. PSCA는 글리코실포스파티딜(GPI)-고정된 세포 표면 단백질이고, 안드로젠-반응성 유전자에 의하여 암호화된다. PSCA는 GPI-고정된 세포 표면 항원의 Thy-1/Ly-6 패밀리의 구성원이다. PSCA는 전립선, 방광, 및 췌장 암을 포함하는 많은 암에서 상향조절된다.
PSCA 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
PSCA 항원은 항-PSCA 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 이들이 특히 효과적이게 하는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. PSCA 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. PSCA 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
공통 PSCA 항원은 아미노산 서열 서열번호 70을 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 69일 수 있다. 공통 PSCA 단백질은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 PSCA 단백질은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있거나 또는 이에 연결되지 않을 수 있다. 공통 PSCA 서열은 개시 코돈 및 적어도 하나의 정지 코돈을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아닌 조절 서열에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 PSCA 항원은 서열번호 69에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 PSCA 항원은 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 PSCA 항원은 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 PSCA 공통 단백질에 대해서 상동성인 단백질, PSCA 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 공통 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 98% 상동성, 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 PSCA 공통 단백질, PSCA 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 PSCA 공통 단백질에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 PSCA 공통 서열에 대해서 최대 80%의 동일성, 전장 공통 서열에 대해서 최대 85%의 동일성, 전장 PSCA 공통 서열에 대해서 최대 90%의 동일성, 전장 PSCA 공통 서열에 대해서 최대 91%의 동일성, 전장 PSCA 공통 서열에 대해서 최대 92%의 동일성, 전장 PSCA 공통 서열에 대해서 최대 93%의 동일성, 전장 PSCA 공통 서열에 대해서 최대 94%의 동일성, 전장 PSCA 공통 서열에 대해서 최대 95%의 동일성, 전장 PSCA 공통 서열에 대해서 최대 96%의 동일성, 전장 PSCA 공통 서열에 대해서 최대 97%의 동일성, 전장 PSCA 공통 서열에 대해서 최대 98%의 동일성, 및 전장 PSCA 공통 서열에 대해서 최대 99%의 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 PSCA 단백질에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 69의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 69의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 69의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 69의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 공통 PSCA 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 70이다. IgE 리더에 연결된 공통 PSCA 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 70이다. IgE 리더에 연결된 공통 PSCA 단백질의 아미노산 서열은 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 70과 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 70과 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 70에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 공통 단백질의 단편은 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 공통 단백질을 포함할 수 있다. 서열번호 70의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 70의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 70의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 70에 대해서 95% 이상의 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 70의 면역원성 단편에 대해서 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 70에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
공통 PSCA 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. 공통 PSCA 항원을 암호화하는 핵산 서열은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 PSCA 항원을 암호화하는 핵산은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작 서열(예를 들면, GCC ACC)을 포함할 수 있다. 공통 PSCA 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예를 들면, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
공통 PSCA 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. 공통 PSCA 항원을 암호화하는 핵산 서열은 추가적으로 IgE 리더 서열을 암호화할 수 있으며, 이는 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 펩타이드 결합에 의해 공통 PSCA 항원의 아미노산 서열에 연결되도록 한다. 공통 PSCA 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 PSCA 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 함유하지 않는다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 PSCA 항원을 암호화하는 핵산은 이종성 핵산 서열일 수 있고/있거나 하나 이상의 이종성 핵산 서열을 함유할 수 있다.
(14) MAGE A1
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 흑색종-연관 항원 1(MAGE A1), 이의 단편, 이의 변이체를 포함할 수 있다. MAGEA1 유전자에 의하여 암호화된 MAGE A1는 280-아미노산 단백질이고, 오직 종양 세포 또는 생식 세포에 의하여 발현되는 것으로 발견되었다. MAGE A1는 정상 체세포에서 그의 억제에 대한 DNA 메틸화에 의존한다. 이러한 유전자는 게놈-전체 탈메틸화(genome-wide demethylation) 과정의 전개에서 종양의 많은 유형에서 활성화되며, 이는 종종 종양발생을 수반한다. 특히, 종양신생 변형 중에서, 이러한 유전자들이 활성화되고, 발현되고, 그리고 면역계에 의하여 인식되고 공격받는 항원성 표적이 될 수 있다. 그러므로, MAGE 유전자는 면역 파괴에 대한 일부 조기 종양 세포를 표적화함으로써 면역 과정에 참여한다. MAGE A1은 흑색종, 폐 암종, 및 식도 편평상피-세포 암종을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아닌 다수의 암에서 발현될 수 있다.
MAGE A1 항원은 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
(15) WT1
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 윌름스 종양 1(WT1), 이의 단편, 이의 변이체를 포함할 수 있다. WT1은 N-말단에 프롤린/글루타민-풍부 DNA-결합 도메인을, 그리고 C-말단에 4개의 아연 핑거 모티프를 함유하는 전사 인자이다. WT1은 비뇨생식계의 정상 발달에서 역할을 수행하며, 여러 인자, 예를 들어, 공지된 종양 억제인자인 p53 및 세포독성 약물의 처리 후 여러 부위에서 WT1을 절단하는 세린 프로테아제 HtrA2와 상호작용한다.
WT1의 돌연변이는 종양 또는 암 형성, 예를 들어, 윌름스 종양 또는 WT1을 발현하는 종양을 야기할 수 있다. 윌름스 종양은 종종 다른 조직, 예를 들어, 비제한적으로 간 조직, 요도계 조직, 림프 조직, 및 폐 조직으로 전이되기 전 하나 또는 두개의 신장에서 형성된다. 따라서, 윌름스 종양은 전이성 종양으로 고려될 수 있다. 윌름스 종양은 보통 유아(예컨대, 5세 미만)에서 산발적이고 유전적인 형태로 발생한다. WT1 암 항원은 2013년 12월 23일자로 출원된, 미국 출원 제PCT/US13/75141호에 의하여 추가로 정의되며, 이것은 그 전문이 참고로 본 명세서에 편입된다.
WT-1 항원은 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
따라서, 면역원성 조성물은 윌름스 종양을 앓고 있는 대상체를 치료하기 위하여 사용될 수 있다. 면역원성 조성물은, 비제한적으로 흑색종, 전립선암, 간암, 자궁경부암, 재발성 호흡기 유두종증(RRP), 항문암, 두경부암, 및 혈액암을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아닌 임의의 수의 암을 앓고 있는 대상체를 치료하기 위하여 사용될 수 있다. 면역원성 조성물은 또한 대상체에서 그러한 종양의 발병을 예방하기 위하여 WT1를 발현하는 암 또는 종양을 갖는 대상체를 치료하기 위하여 사용될 수 있다. WT1 항원은 원산, "정상" WT1 유전자와 다를 수 있으며, 따라서, WT1 항원-발현 종양에 대하여 요법 또는 예방을 제공할 수 있다. 따라서, 천연 WT1 유전자(즉, 돌연변이화된 WT1 유전자 또는 서열)과 다른 WT1 항원 서열이 본 명세서에 제공된다.
천연 WT1 유전자의 전사체는 다양한 mRNA로 처리되고, 수득된 단백질은 면역 반응을 유도하기 위한 값이 모두 동등한 것은 아니다. 본 명세서에 기술된 돌연변이화된 WT1 유전자는 대한적이 처리를 회피하여 하나의 전장 전사체를 생성하고, 효과기 T 및 B 세포 반응의 더 강한 유도를 야기한다. 제1 돌연변이화된 WTI 서열은 개질된 아연 핑거 또는 ConWT1-L을 갖는 CON WT1로 지칭된다. 서열번호 19는 개질된 아연 핑거를 갖는 WT1 항원 CON WT1를 암호화하는 핵산 서열이다. 서열번호 20은 개질된 아연 핑거를 갖는 WT1 항원 CON WT1의 핵산 서열이다. 제2 돌연변이화된 WT1 서열은 아연 핑거 또는 ConWT1-S가 없는 CON WT1로 지칭된다. 서열번호 21은 아연 핑거가 없는 WTI 항원 CON WT1를 암호화하는 핵산 서열이다. 서열번호 22는 개질된 아연 핑거를 갖는 WT1 항원 CON WT1의 핵산 서열이다.
WT1 항원은 2개 또는 그 이상의 종으로부터 유래된 공통 항원(또는 면역원) 서열일 수 있다. WT1 항원은 공통 서열 및/또는 개선된 발현을 위한 하나 이상의 개질을 포함할 수 있다. 개질은 코돈 최적화, RNA 최적화; 증가된 번역 개시를 위한 코작 서열(예로, GCC ACC)의 부가, 및/또는 WT1 항원의 면역원성을 증가시키기 위한 면역글로불린 리더 서열의 부가를 포함할 수 있다. WT1 항원은 면역글로불린 신호 펩타이드, 예를 들어, 비제한적으로 면역글로불린 E(IgE) 신호 펩타이드 또는 면역글로불린 G(IgG) 신호 펩타이드를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, WT1 공통 항원은 헤마글루티닌(HA) 태그를 포함할 수 있다. WT1 공통 항원은 대응하는 코돈 최적화 WT1 항원보다 강하고 광범위한 세포성 및/또는 체액성 면역 반응을 유도하기 위해 설계될 수 있다.
WT1 공통 항원은 대응하는 코돈 최적화 WT1 항원보다 강하고 광범위한 세포성 면역 반응을 유도하도록 하나 이상의 아연 핑거에서 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. 하나 이상의 돌연변이는 하나 이상의 아연 핑거에서 아연 이온을 조정하는 하나 이상의 아미노산의 치환일 수 있다. 아연 이온을 조정하는 하나 이상의 아미노산은 CCHH 모티프일 수 있다. 따라서, 몇몇 실시형태에 있어서, 상기 하나 이상의 돌연변이는 CCHH 모티프중 1개, 2개, 3개, 또는 4개 모두를 교체할 수 있다.
다른 실시형태에 있어서, 하나 이상의 돌연변이는 서열번호 20의 잔기 312, 317, 342 및 347은 시스테인(C) 이외의 임의의 잔기이고, 서열번호 20의 잔기 330, 334, 360, 및 364는 히스티딘(H) 이외의 임의의 잔기이도록 한다. 특히, 하나 이상의 돌연변이는 서열번호 20의 잔기 312, 317, 330, 334, 342, 347, 360 및 364가 글리신(G)이도록 한다.
다른 실시형태에 있어서, 하나 이상의 아연 핑거는 상기 공통 WT1 항원으로부터 제거될 수 있다. 상기 아연 핑거 중 1개, 2개, 3개 또는 4개 모두는 상기 공통 WT1 항원으로부터 제거될 수 있다.
WT1 공통 항원은 아미노산 서열 서열번호 20을 암호화하는 핵산 서열 서열번호 19일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, WT1 공통 항원은 서열번호 19에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, WT1 공통 항원은 서열번호 20에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다.
또 다른 실시형태에 있어서, WT1 공통 항원은 서열번호 20에 개시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있으며, 단, 서열번호 20의 잔기 312, 317, 342 및 347은 시스테인(C) 이외의 임의의 잔기이고, 서열번호 20의 잔기 330, 334, 360, 및 364는 히스티딘(H) 이외의 임의의 잔기이다. 다른 실시형태에 있어서, WT1 공통 항원은 서열번호 20에 개시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있으며, 단, 서열번호 20의 잔기 312, 317, 330, 334, 342, 347, 360, 및 364가 글리신(G)이다.
WT1 공통 항원은 아미노산 서열 서열번호 20일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, WT1 공통 항원은 서열번호 20에 개시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다. WT1 공통 항원은 서열번호 20에 개시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있으며, 단, 서열번호 20의 잔기 312, 317, 342 및 347은 시스테인(C) 이외의 임의의 잔기이고, 서열번호 20의 잔기 330, 334, 360, 및 364는 히스티딘(H) 이외의 임의의 잔기이다. 몇몇 실시형태에 있어서, WT1 공통 항원은 서열번호 20에 개시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있으며, 단, 서열번호 20의 잔기 312, 317, 330, 334, 342, 347, 360, 및 364가 글리신(G)이다.
WT1 공통 항원은 서열번호 22를 암호화하는 핵산 서열번호 21일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, WT1 공통 항원은 서열번호 21에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, WT1 공통 항원은 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 8% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다.
WT1 공통 항원은 아미노산 서열 서열번호 22일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, WT1 공통 항원은 서열번호 22에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 8% 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
서열번호 20 및 서열번호 22의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 20 및/또는 서열번호 22의 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 면역원성 단편은 서열번호 20의 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%를 포함할 수 있되, 단, 서열번호 20의 잔기 312, 317, 342 및 347번이 면역원성 단편에 존재한다면, 이들 잔기는 시스테인(C) 이외의 임의의 잔기이고, 그리고 서열번호 20의 잔기 330, 334, 360 및 364번이 면역원성 단편에 존재한다면, 이들 잔기는 히스티딘(H) 이외의 임의의 잔기이다. 다른 실시형태에 있어서, 면역원성 단편은 서열번호 20의 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%를 포함할 수 있되, 단 서열번호 20의 잔기 312, 317, 330, 334, 342, 347, 360 및 364번이 면역원성 단편에 존재한다면, 이들 잔기는 글리신(G)이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 면역원성 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더 서열, 예컨대, 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 면역원성 단편에는 리더 서열이 없다.
서열번호 20 및 22의 면역원성 단편에 대해서 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가진 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 단편은 서열번호 20 및/또는 서열번호 22에 대해서 95% 이상의 동일성을 갖는 단백질의 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 WT1 단백질 서열의 면역원성 단편에 대해서 96% 이상의 동일성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 WT1 단백질 서열의 면역원성 단편에 대해서 97% 이상의 동일성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 WT1 단백질 서열의 면역원성 단편에 대해서 98% 이상의 동일성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 WT1 단백질 서열의 면역원성 단편에 대해서 99% 이상의 동일성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 면역원성 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더 서열, 예컨대, IgE 리더 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 면역원성 단편에는 리더 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 19 및 서열번호 21의 면역원성 단편에 관한 것이다. 면역원성 단편은 서열번호 19 및/또는 서열번호 21의 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 면역원성 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더 서열, 예컨대, IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 면역원성 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다.
서열번호 19 및 서열번호 21의 면역원성 단편에 대해서 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 가진 핵산의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 단편은 서열번호 19 및/또는 서열번호 21에 대해서 95% 이상의 동일성을 갖는 핵산의 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 WT1 핵산 서열의 면역원성 단편에 대해서 96% 이상의 동일성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 WT1 핵산 서열의 면역원성 단편에 대해서 97% 이상의 동일성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 WT1 핵산 서열의 면역원성 단편에 대해서 98% 이상의 동일성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 WT1 핵산 서열의 면역원성 단편에 대해서 99% 이상의 동일성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 면역원성 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더 서열, 예컨대, IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 면역원성 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다.
(16) FAP
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 섬유아세포 활성화 단백질(FAP), 이의 단편 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다. FAP 항원은 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
FAP 항원은 항-FAP 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 이들이 특히 효과적이게 하는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. PSMA 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. FAP 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
공통 FAP 항원은 아미노산 서열 서열번호 60을 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 59일 수 있다. 공통 FAP 단백질은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 FAP 단백질은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있거나 또는 이에 연결되지 않을 수 있다. 공통 FAP 서열은 개시 코돈 및 적어도 하나의 정지 코돈을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아닌 조절 서열에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 FAP 항원은 서열번호 59에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 FAP 항원은 서열번호 60에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 FAP 항원은 서열번호 60에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 FAP 공통 단백질에 대해서 상동성인 단백질, FAP 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 공통 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 98% 상동성, 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 FAP 공통 단백질, FAP 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 FAP 공통 단백질에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 FAP 공통 서열에 대해서 최대 80% 동일성, 전장 공통 서열에 대해서 최대 85% 동일성, 전장 FAP 공통 서열에 대해서 최대 90% 동일성, 전장 FAP 공통 서열에 대해서 최대 91% 동일성, 전장 FAP 공통 서열에 대해서 최대 92% 동일성, 전장 FAP 공통 서열에 대해서 최대 93% 동일성, 전장 FAP 공통 서열에 대해서 최대 94% 동일성, 전장 FAP 공통 서열에 대해서 최대 95% 동일성, 전장 FAP 공통 서열에 대해서 최대 96% 동일성, 전장 FAP 공통 서열에 대해서 최대 97% 동일성, 전장 FAP 공통 서열에 대해서 최대 98% 동일성 및 전장 FAP 공통 서열에 대해서 최대 99% 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 FAP 단백질에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 59의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 59의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 59의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 59의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 공통 FAP 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 60이다. IgE 리더에 연결된 공통 FAP 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 60이다. IgE 리더에 연결된 공통 FAP 단백질의 아미노산 서열은 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 60과 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 60과 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 60에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 공통 단백질의 단편은 공통 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 서열번호 60의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 60의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 60의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 60에 대해서 95% 이상의 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 60의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 60에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
공통 FAP 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. 공통 FAP 항원을 암호화하는 핵산은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 FAP 항원을 암호화하는 핵산 서열은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작 서열(예를 들면, GCC ACC)을 포함할 수 있다. 공통 FAP 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예를 들면, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
공통 FAP 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. 공통 FAP 항원을 암호화하는 핵산 서열은 추가적으로 IgE 리더 서열을 암호화할 수 있으며, 이는 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 펩타이드 결합에 의해 공통 FAP 항원의 아미노산 서열에 연결되도록 한다. 공통 FAP 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 FAP 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 함유하지 않는다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 FAP 항원을 암호화하는 핵산은 이종성 핵산 서열일 수 있고/있거나 하나 이상의 이종성 핵산 서열을 함유할 수 있다.
(17) FSHR
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 여포 자극 호르몬 수용체(FSHR), 이의 단편 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다. FSHR 항원은 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
FSHR 항원은 항-FSHR 면역 반응이 유도될 수 있는 면역원으로서 이들이 특히 효과적이게 하는 단백질 에피토프를 포함할 수 있다. PSMA 항원은 전장 번역 산물, 이의 변이체, 이의 단편 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. FSHR 항원은 공통 단백질을 포함할 수 있다.
공통 FSHR 항원은 아미노산 서열 서열번호 62를 암호화하는, 핵산 서열 서열번호 61일 수 있다. 공통 FSHR 단백질은 IgE 리더 서열 및 HA 태그에 연결될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 FSHR 단백질은 IgE 리더 서열 및/또는 HA 태그가 없을 수 있거나 또는 이에 연결되지 않을 수 있다. 공통 FSHR 서열은 개시 코돈 및 적어도 하나의 정지 코돈을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아닌 조절 서열에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 FSHR 항원은 서열번호 61에 제시된 핵산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 공통 FSHR 항원은 서열번호 62에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열일 수 있다. 공통 FSHR 항원은 서열번호 62에 제시된 아미노산 서열의 전장에 걸쳐서 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 동일성을 갖는 아미노산 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태는 FSHR 공통 단백질에 상동성인 단백질, FSHR 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 상동성 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 공통 서열에 대해서 최대 95% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 96% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 97% 상동성, 공통 서열에 대해서 최대 98% 상동성, 및 최대 99%를 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 개시된 단백질과 상동성인 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 핵산 암호화 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 개시된 공통 단백질의 암호화 서열에 대해서 상동성인 본 명세서에 개시된 암호화 서열을 갖는 핵산 분자는 본 명세서에 개시된 상동성 단백질 서열을 암호화하는 암호화 서열의 5' 단부에 연결된 IgE 리더 서열을 암호화하는 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태는 전장 FSHR 공통 단백질, FSHR 공통 단백질의 면역원성 단편, 및 FSHR 공통 단백질에 대해서 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편에 대해서 특정 퍼센트 동일성을 갖는 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 전장 FSHR 공통 서열에 대해서 최대 80% 동일성, 전장 공통 서열에 대해서 최대 85% 동일성, 전장 FSHR 공통 서열에 대해서 최대 90% 동일성, 전장 FSHR 공통 서열에 대해서 최대 91% 동일성, 전장 FSHR 공통 서열에 대해서 최대 92% 동일성, 전장 FSHR 공통 서열에 대해서 최대 93% 동일성, 전장 FSHR 공통 서열에 대해서 최대 94% 동일성, 전장 FSHR 공통 서열에 대해서 최대 95% 동일성, 전장 FSHR 공통 서열에 대해서 최대 96% 동일성, 전장 FSHR 공통 서열에 대해서 최대 97% 동일성, 전장 FSHR 공통 서열에 대해서 최대 98% 동일성 및 전장 FSHR 공통 서열에 대해서 최대 99% 동일성을 갖는 면역원성 단백질을 암호화하는 이러한 핵산 분자가 제공될 수 있다. 마찬가지로, 본 명세서에 제시된 면역원성 단편 및 본 명세서에 제시된 FSHR 단백질에 대해서 위에 나타낸 바와 같은 유사한 퍼센트 동일성을 갖는 단백질의 면역원성 단편을 암호화하는 핵산 서열이 또한 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 서열에는 IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
몇몇 실시형태는 서열번호 61의 단편에 관한 것이다. 단편은 서열번호 61의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%일 수 있다. 단편은 서열번호 61의 단편에 대해서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동성일 수 있다. 단편은 서열번호 61의 단편에 대해서 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 암호화하는 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열을 암호화하는 암호화 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더를 암호화하는 암호화 서열이 없다.
또한, 공통 FSHR 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 62이다. IgE 리더에 연결된 공통 FSHR 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 62이다. IgE 리더에 연결된 공통 FSHR 단백질의 아미노산 서열은 HA 태그에 연결될 수 있다.
몇몇 실시형태는 서열번호 62와 상동성인 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 95% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 공통 단백질 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 공통 단백질 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태는 서열번호 62와 동일한 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 80% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 91% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 92% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 93% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 94% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 96% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 97% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 98% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 서열번호 62에 제시된 바와 같은 전장 공통 아미노산 서열에 대해서 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 면역원성 단백질에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단백질에는 IgE 리더가 없다. 공통 단백질의 단편은 공통 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 서열번호 62의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 면역원성 단편은 서열번호 62의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 62의 면역원성 단편에 대해서 상동성인 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공된다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 62에 대해서 95% 이상의 상동성인 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 96% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 97% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 98% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태는 본 명세서에서의 면역원성 공통 단백질의 단편 서열에 대해서 99% 상동성을 갖는 면역원성 단편에 관한 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
서열번호 62의 면역원성 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질의 면역원성 단편이 제공될 수 있다. 이러한 면역원성 단편은 서열번호 62에 제시된 아미노산 서열에 대해서 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 단백질의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55% 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99%를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편은 리더 서열, 예를 들어, 면역글로불린 리더, 예컨대, IgE 리더를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열이 없다. 몇몇 실시형태에 있어서, 단편에는 리더 서열, 예를 들어, IgE 리더가 없다.
단백질의 N 말단에 신호 펩타이드 또는 리더 서열을 연결하는 것과 관련하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이, 신호 펩타이드/리더 서열은 신호 펩타이드 암호화 서열 없는 단백질을 암호화하는 것보다 핵산 서열의 개시 코돈에 의해 암호화되는 단백질의 N 말단 메티오닌을 교체한다.
공통 FSHR 항원을 암호화하는 핵산 서열은 코돈 사용 및 대응하는 RNA 전사체에 관해 최적화될 수 있다. 공통 FSHR 항원을 암호화하는 핵산은 발현에 대해 최적화된 RNA 및 코돈일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 FSHR 항원을 암호화하는 핵산 서열은 번역의 효율을 증가시키기 위해 코작 서열(예를 들면, GCC ACC)을 포함할 수 있다. 공통 FSHR 항원을 암호화하는 핵산은 번역 종료의 효율을 증가시키기 위해 다중 정지 코돈(예를 들면, TGA TGA)을 포함할 수 있다.
공통 FSHR 항원을 암호화하는 핵산은 또한 면역글로불린 E(IgE) 리더 서열을 암호화할 수 있다. 공통 FSHR 항원을 암호화하는 핵산은 추가적으로 IgE 리더 서열을 암호화할 수 있으며, 이는 IgE 리더 서열의 아미노산 서열이 펩타이드 결합에 의해 공통 FSHR P 항원의 아미노산 서열에 연결되도록 한다. 공통 FSHR 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 공통 FSHRA 항원을 암호화하는 핵산은 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 없거나 또는 함유하지 않는다.
몇몇 실시형태에 있어서, 공통 FSHR 항원을 암호화하는 핵산은 이종성 핵산 서열일 수 있고/있거나 하나 이상의 이종성 핵산 서열을 함유할 수 있다.
(18) gp100
본 발명의 면역원성 조성물은 암 항원 당단백질 100(gp100; 또한 Trp2 및 전멜라닌소체 단백질(PMEL)로 알려짐), 이의 단편, 이의 변이체를 포함할 수 있다. gp100은 PMEL 유전자에 의하여 암호화된다. 이는 70 kDa 유령 1 막관통 당단백질이며, 이는 이것이 단계 I로부터 II로의 멜라노솜의 성숙과 연관될 때, 멜라노솜의 생물발생에서 중추적 역할을 하는 661개 아미노산으로 구성된다. gp100은 다포성 소체 내에 줄무늬 형성을 견인하고, 전멜라닌소체의 생물발생과 직접적으로 연관된다. gp100는 성숙한 멜라노솜에 관한 전멜라닌소체에서 농축되나, 신생아 멜라닌 세포를 증식시킴으로써, 그리고 종양 성장 동안 과발현된다. gp100 단백질은 다양한 면역우성 에피토프를 포함하며, 이는 흑색종 환자의 말초 혈액으로부터의, 그리고 종양 침윤성 림프구로부터의 세포독성 T 림프구에 의하여 인식된다.
gp100 항원은 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
(19) 바이러스 항원
암 항원은 바이러스 항원, 이의 단편 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다. 바이러스 항원은 B형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, 또는 인간 유두종 바이러스(HPV)일 수 있다. HPV는, 이하에 논의되는 바와 같이, HPV 6, HPV 11, HPV 16, 또는 HPV 18일 수 있다.
바이러스 항원은 항원은 항원-특이적 T 세포 및/또는 높은 역가 항체 반응을 유도할 수 있으며, 이로써 항원을 발현하는 암 또는 종양에 관한 것이거나 또는 이에 대해 반응성인 면역 반응을 유도 또는 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은 세포성, 체액성, 또는 세포성과 체액성 둘 다의 면역 반응일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 세포성 면역 반응은 인터페론-감마(IFN-γ) 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNF-α)의 유도 또는 분비를 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 유도된 또는 유발된 면역 반응은, 항원을 발현하는 종양 또는 암의 성장을 촉진시키는 하나 이상의 면역 억제 인자, 예를 들어, 제한 없이, MHC 제시를 하향 조절하는 인자, 항원-특이적 조절 T 세포(Treg)를 상향 조절하는 인자, PD-L1, FasL, 사이토카인, 예컨대, IL-10 및 TFG-β, 종양 연관된 대식세포, 종양 연관된 섬유아세포, 면역 억제 세포에 의하여 생성된 용해성 인자, CTLA-4, PD-1, MDSC, MCP-1, 및 하기에 더욱 상세히 기술되는 면역 관문 분자를 저감시키거나 저해시킬 수 있다.
(a) B형 간염 바이러스 항원
바이러스 항원은 B형 간염 바이러스(HBV), 이의 단편, 또는 이들의 변이체로부터의 항원일 수 있다. HBV 항원은 간암과 연관되거나 이를 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV로부터의 항원 중 하나 이상을 암호화하는 이종기원의 핵산 분자(들), 예컨대, 플라스미드(들)일 수 있다. HBV 항원은 전장 또는 전장 단백질의 면역원성 단편일 수 있다.
HBV 항원은 공통 서열 및/또는 개선된 발현을 위한 하나 이상의 변이를 포함할 수 있다. 작제물에 대한 면역원성을 증가하기 위해 코돈 최적화, RNA 최적화 및 매우 효율적인 면역글로불린 리더 서열의 부가를 포함하는 유전적 변이가 개질된 공통 서열에 포함될 수 있다. 공통 HBV 항원은 신호 펩타이드, 예컨대, 면역글로불린 신호 펩타이드, 예컨대, IgE 또는 IgG 신호 펩타이드를 포함할 수 있고, 그리고 몇몇 실시형태에 있어서, HA 태그를 포함할 수 있다. 면역원은 대응하는 코돈 최적화 면역원보다 강하고 광범위한 세포성 면역 반응을 유도하기 위해 설계될 수 있다.
HBV 항원은 HBV 코어 단백질, HBV 표면 단백질, HBV DNA 중합효소, 유전자 X에 의해 코드된 HBV 단백질, 이들의 단편, 이들의 변형체, 또는 이들의 조합일 수 있다. HBV 항원은 HBV 유전자형 A 코어 단백질, HBV 유전자형 B 코어 단백질, HBV 유전자형 C 코어 단백질, HBV 유전자형 D 코어 단백질, HBV 유전자형 E 코어 단백질, HBV 유전자형 F 코어 단백질, HBV 유전자형 G 코어 단백질, HBV 유전자형 H 코어 단백질, HBV 유전자형 A 표면 단백질, HBV 유전자형 B 표면 단백질, HBV 유전자형 C 표면 단백질, HBV 유전자형 D 표면 단백질, HBV 유전자형 E 표면 단백질, HBV 유전자형 F 표면 단백질, HBV 유전자형 G 표면 단백질, HBV 유전자형 H 표면 단백질, 이들의 단편, 이들의 변형체, 또는 이들의 조합일 수 있다. HBV 항원은 공통 HBV 코어 단백질, 또는 공통 HBV 표면 단백질일 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 A 공통 코어 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 A 코어 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 A 공통 코어 단백질 서열일 수 있다.
다른 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 B 공통 코어 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 B 코어 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 B 공통 코어 단백질 서열일 수 있다.
또 다른 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 C 공통 코어 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 C 코어 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 C 공통 코어 단백질 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 D 공통 코어 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 D 코어 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 D 공통 코어 단백질 서열일 수 있다.
다른 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 E 공통 코어 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 E 코어 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 E 공통 코어 단백질 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 F 공통 코어 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 F 코어 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 F 공통 코어 단백질 서열일 수 있다.
다른 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 G 공통 코어 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 G 코어 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 G 공통 코어 단백질 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 H 공통 코어 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 H 코어 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 H 공통 코어 단백질 서열일 수 있다.
또 다른 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 A 공통 표면 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 A 표면 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 A 공통 표면 단백질 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 B 공통 표면 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 B 표면 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 B 공통 표면 단백질 서열일 수 있다.
다른 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 C 공통 표면 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 C 표면 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 C 공통 표면 단백질 서열일 수 있다.
또 다른 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 D 공통 표면 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 D 표면 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 D 공통 표면 단백질 서열일 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 E 공통 표면 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 E 표면 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 E 공통 표면 단백질 서열일 수 있다.
다른 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 F 공통 표면 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 F 표면 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 F 공통 표면 단백질 서열일 수 있다.
또 다른 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 G 공통 표면 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 G 표면 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 G 공통 표면 단백질 서열일 수 있다.
다른 실시형태에 있어서, HBV 항원은 HBV 유전자형 H 공통 표면 핵산 서열 작제물, HBV 유전자형 H 표면 단백질에 대한 공통 서열에 결합된 IgE 리더 서열, 또는 HBV 유전자형 H 공통 표면 단백질 서열일 수 있다.
(b) C형 간염 바이러스 항원
바이러스 항원은 C형 간염 바이러스(HCV), 이의 단편, 또는 이들의 변이체로부터의 항원일 수 있다. HCV 항원은 간암과 연관되거나 이를 유발할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, HCV항원은 HCV로부터의 항원을 암호화하는 이종기원의 핵산 분자(들), 예컨대, 플라스미드(들)일 수 있다. HCV 항원은 전장 또는 전장 단백질의 면역원성 단편일 수 있다.
HCV 항원은 공통 서열 및/또는 개선된 발현을 위한 하나 이상의 변이를 포함할 수 있다. 작제물에 대한 면역원성을 증가하기 위해 코돈 최적화, RNA 최적화 및 매우 효율적인 면역글로불린 리더 서열의 부가를 포함하는 유전적 변이가 개질된 공통 서열에 포함될 수 있다. 공통 HCV 항원은 신호 펩타이드, 예컨대, 면역글로불린 신호 펩타이드, 예컨대, IgE 또는 IgG 신호 펩타이드를 포함할 수 있고, 그리고 몇몇 실시형태에 있어서, HA 태그를 포함할 수 있다. 면역원은 대응하는 코돈 최적화 면역원보다 강하고 광범위한 세포성 면역 반응을 유도하기 위해 설계될 수 있다.
HCV 항원은 HCV 뉴클레오캡시드 단백질(즉, 코어 단백질), HCV 외피 단백질(예를 들면, E1 및 E2), HCV 비-구조 단백질(예를 들면, NS1, NS2, NS3, NS4a, NS4b, NS5a, 및 NS5b), 이들의 단편, 이들의 변형체, 또는 이들의 조합일 수 있다.
(c) 인유두종 바이러스
바이러스 항원은 HPV로부터의 항원, 이의 단편, 또는 이들의 변이체일 수 있다. HPV 항원은 자궁경부암, 직장암 및/또는 기타 암을 야기하는 HPV 유형 16, 18, 31, 33, 35, 45, 52 및 58로부터 유래할 수 있다. HPV 항원은 생식기 혹을 야기하고 그리고 두경부암의 원인이 되는 것으로 알려진 HPV 유형 6 및 11로부터 유래할 수 있다. HPV 항원은 자궁경부암의 원인으로 알려져 있는 HPV 유형 16 및 18에서 유래될 수 있다. HPV 항원은 RRP 및 항문암의 원인으로 알려져 있는 HPV 유형 6, 11 및/또는 16에서 유래될 수 있다. HPV 암 항원은 2007년 7월 30일자로 출원된 미국 특허 제8,168,769호, 2010년 1월 21일자로 출원된 미국 특허 제8,389,706호, 2011년 10월 21일자로 출원된 미국 특허 출원 제13/271,576호, 및 2013년 3월 12일 출원된 미국 특허 출원 제61/777,198호에 의하여 추가로 정의되며, 이들은 그들의 전문이 참고로 본 명세서에 편입된다.
HPV 항원은 각 HPV 유형으로부터의 HPV E6 또는 E7 도메인일 수 있다. 예를 들어, HPV 유형 16(HPV16)에 대해서는, HPV16 항원은 HPV16 E6 항원, HPV16 E7 항원, 이들의 단편, 변형체 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 유사하게, HPV 항원은 HPV 6 E6 및/또는 E7, HPV 11 E6 및/또는 E7, HPV 16 E6 및/또는 E7, HPV 18 E6 및/또는 E7, HPV 31 E6 및/또는 E7, HPV 33 E6 및/또는 E7, HPV 52 E6 및/또는 E7, 또는 HPV 58 E6 및/또는 E7, 이들의 단편, 변형체 또는 이들의 조합일 수 있다.
(d) 헤르페스 바이러스
바이러스 항원은 헤르페스 바이러스 항원일 수 있다. 헤르페스 바이러스 항원은 CMV, HSV1, HSV2, VZV, CeHV1, EBV, 로세올로 바이러스(roseolovirus), 카포시 육종-연관된 헤르페스 바이러스 및 MuHV로 이루어진 군으로부터 선택된 항원일 수 있다.
공통 단백질 HCMV-gB(서열번호 26), 공통 단백질 HCMV-gM(서열번호 28), 공통 단백질 HCMV-gN(서열번호 30), 공통 단백질 HCMV-gH(서열번호 32), 공통 단백질 HCMV-gL(서열번호 34), 공통 단백질 HCMV-gO(서열번호 36), 공통 단백질 HCMV-UL128(서열번호 38), 공통 단백질 HCMV-UL130(서열번호 40), 공통 단백질 HCMV-UL-131A(서열번호 42), 공통 단백질 HCMV-UL-83(pp65)(서열번호 44).
핵산 서열은 서열번호 26, 서열번호 28, 서열번호 30, 서열번호 32, 서열번호 34, 서열번호 36, 서열번호 38, 서열번호 40, 서열번호 42 또는 서열번호 44를 암호화하는 서열을 포함한다. 공통 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 분자가 생성되었다. 백신은 인간에서 안정성 및 발현을 최적화하기 위하여 생성된 이러한 그룹의 서열들로부터 선택된 면역원성 단백질의 공통 버전 중 하나 또는 그 이상을 암호화하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함할 수 있다. 공통 단백질 HCMV-gB(서열번호 25)를 암호화하는 핵산 서열, 공통 단백질 HCMV-gM(서열번호 27)을 암호화하는 핵산 서열, 공통 단백질 HCMV-gN(서열번호 29)을 암호화하는 핵산 서열, 공통 단백질 HCMV-gH(서열번호 31)를 암호화하는 핵산 서열, 공통 단백질 HCMV-gL(서열번호 33)을 암호화하는 핵산 서열, 공통 단백질 HCMV-gO(서열번호 35)를 암호화하는 핵산 서열, 공통 단백질 HCMV-UL128(서열번호 37)을 암호화하는 핵산 서열, 공통 단백질 HCMV-UL130(서열번호 39)을 암호화하는 핵산 서열, 공통 단백질 HCMV-UL-131A(서열번호 41)을 암호화하는 핵산 서열, 공통 단백질 HCMV-UL-83(pp65)(서열번호 43)을 암호화하는 핵산 서열. 핵산 서열은 추가적으로 5' 말단에 연결된 암호화 IgE 리더를 가질 수 있다.
우세 순환성 인간 균주 중 임상 단리물 및 확장성 유전적 차이로부터의 진화적 분기의 관점에서, 면역원성 단백질 각각에 대한 공통 아미노산 서열이 생성되었다. gB, gM, gH, gL, gE, gI, gK, gC, gD, UL128, UL130, UL-131A 및 UL-83(pp65)에 대한 공통 아미노산 서열은 인간 임상 단리물로부터의 서열 상에 기반하였다. gN 단백질의 중대한 진화적 분기로 인하여, 공통 서열은 가장 혈청-우세한 (gN-4)를 나타내는 7개의 혈청형 중 오직 하나(gN-4c)로부터 생성되었다. 유사하게, gO 경우에서, 공통 아미노산 서열은, 특정 혈청형이 gN-4c 혈청-유형을 갖는 결합으로 보고됨으로 인하여, 8개의 혈청 유형 중 하나(gO-5)로부터 생성되었다.
위에서 기술된 바와 같이, 헤르페스 바이러스 항원은 공통 헤르페스 바이러스 항원일 수 있다. 공통 헤르페스 바이러스 항원에 신호 펩타이드가 공급될 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, IgE 리더는 N 말단과 결합된다. 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 공통 서열의 N 말단에 결합된 신호펩타이드를 지칭할 때, 이는 공통 서열의 N 말단 Xaa 잔기가 신호 펩타이드로 교체되는 실시형태를 특이적으로 포함하는 것으로 의도된다. 즉, 본 명세서에서 사용되는 Xaa는 임의의 아미노산 또는 비아미노산을 지칭하는 것으로 의도된다. 본 명세서에서 서열번호 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44에 제시된 바와 같은 공통 서열을 포함하는 단백질은 N 말단 Xaa가 없는 그러한 서열들을 포함할 수 있다.
각각의 특정 경우에서, 헤르페스 바이러스 면역원성 단백질 공통 서열의 N 말단에서 IgE 리더 서열로 구성된 아미노산 서열이 생성되었다. 몇몇 실시형태에 있어서, 2개 또는 그 이상의 헤르페스 바이러스 항원이 단백질 가수분해 절단 부위에 의하여 각각 결합된 융합 단백질로서 발현되는 핵산 작제물이 제공된다. 퓨린 단백질 가수분해 절단 부위는 작제물에 의하여 발현된 융합 단백질에서 헤르페스 바이러스 항원을 결합할 수 있는 단백질 가수분해 절단 부위의 예시이다. 헤르페스의 바이러스 암 항원은 미국 특허 출원 제13/982,457호에 의하여 추가로 정의될 수 있으며, 이것은 그 전체가 참고로 본 명세서에 편입된다.
4. 면역관문 저해제와 조합된 면역원성 조성물
면역원성 조성물은 하나 이상의 면역 관문 분자의 하나 이상의 저해제(즉, 면역 관문 저해제)를 더 포함할 수 있다. 면역 관문 분자는 아래에 보다 상세히 기재된다. 면역 관문 분자는 MHC 분류 제시, T 세포 제시 및/또는 분화, B 세포 제시 및/또는 분화, 임의의 사이토카인, 케모카인, 또는 면역 세포 증식 및/또는 분화와 같은 면역계에서 임의의 성분의 억제를 예방하는 임의의 핵산 또는 단백질이다.
그러한 저해제는 핵산 서열, 아미노산 서열, 소분자, 또는 이들의 조합일 수 있다. 핵산 서열은 DNA, RNA, cDNA, 이들의 변이체, 이의 단편, 또는 이들의 조합일 수 있다. 핵산 서열은 또한 펩타이드 결합에 의해 항원에 연결되는 태그 서열 또는 링커를 암호화하는 부가적 서열을 포함할 수 있다. 소분자는 저분자량, 예를 들어, 800 달튼 미만의, 효소 기질, 단백질 또는 핵산에 의하여 결합된 리간드(또는 이의 유사체), 또는 생물학적 과정의 조절자로 작용하는 유기 또는 무기 화합물일 수 있다. 아미노산 서열은 단백질, 펩타이드, 이들의 변형체, 이들의 단편, 또는 이들의 조합일 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 면역 관문 저해제는 항체, 이의 단편, 이들의 변이체, 또는 이들의 조합을 암호화하는 하나 이상의 핵산 서열일 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 면역 관문 저해제는 항체, 이의 단편, 이들의 변이체, 또는 이들의 조합일 수 있다.
a. 면역 관문 분자
면역 관문 분자는 핵산 서열, 아미노산 서열, 소분자, 또는 이들의 조합일 수 있다. 핵산 서열은 DNA, RNA, cDNA, 이들의 변이체, 이의 단편, 또는 이들의 조합일 수 있다. 핵산 서열은 또한 펩타이드 결합에 의해 항원에 연결되는 태그 서열 또는 링커를 암호화하는 부가적 서열을 포함할 수 있다. 소분자는 저분자량, 예를 들어, 800 달튼 미만의, 효소 기질, 단백질 또는 핵산에 의하여 결합된 리간드(또는 이의 유사체), 또는 생물학적 과정의 조절자로 작용하는 유기 또는 무기 화합물일 수 있다. 아미노산 서열은 단백질, 펩타이드, 이들의 변형체, 이들의 단편, 또는 이들의 조합일 수 있다. 면역 관문 분자는 적어도 하나의 면역 관문 단백질의 저해제일 수 있다. 면역 관문 단백질은 PD-1, PD-L1, CTLA4, TIM3 및 LAG3을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
b. 항-면역 관문 분자 항체
위에서 기술된 바와 같이, 면역 관문 저해제는 항체일 수 있다. 항체는 항원(즉, 위에서 기술된 면역 관문 분자)에 결합하거나 이와 반응할 수 있다. 따라서, 항체는 항-면역 관문 분자 항체 또는 면역 관문 분자 항체로 고려될 수 있다. 항체는 에 함유된 핵산 서열에 의하여 암호화될 수 있다.
항체는 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 중쇄 폴리펩타이드는 가변 중쇄(VH) 영역 및/또는 적어도 하나의 불변 중쇄(CH) 영역을 포함할 수 있다. 적어도 하나의 불변 중쇄 영역은 불변 중쇄 영역 1(CH1), 불변 중쇄 영역 2(CH2), 및 불변 중쇄 영역 3(CH3), 및/또는 힌지 영역을 포함할 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 중쇄 폴리펩타이드는 VH 영역 및 CH1 영역을 포함할 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 중쇄 폴리펩타이드는 VH 영역, CH1 영역, 힌지 영역, CH2 영역, 및 CH3 영역을 포함할 수 있다.
중쇄 폴리펩타이드는 상보성 결정 영역("CDR") 세트를 포함할 수 있다. CDR 세트는 VH 영역의 3개의 초가변 영역을 함유할 수 있다. 중쇄 폴리펩타이드의 N-말단에서 시작하여, 이들 CDR은 각각 "CDR1", "CDR2", 및 "CDR3"으로 표시된다. 중쇄 폴리펩타이드의 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 항원의 결합 또는 인식에 기여할 수 있다.
경쇄 폴리펩타이드는 가변 경쇄(VL) 영역 및/또는 불변 경쇄(CL) 영역을 포함될 수 있다. 경쇄 폴리펩타이드는 상보성 결정 영역("CDR") 세트를 포함할 수 있다. CDR 세트는 VL 영역의 세 초가변 영역을 함유할 수 있다. 경쇄 폴리펩타이드의 N-말단에서 시작하여, 이들 CDR은 각각 "CDR1", "CDR2", 및 "CDR3"으로 표시된다. 경쇄 폴리펩타이드의 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 항원의 결합 또는 인식에 기여할 수 있다.
항체는 CDR에 대한 지지를 제공하고 서로에 대해 CDR의 공간적 관계를 정의하는, 중쇄 및 경쇄 틀("FR") 세트 사이에 각각 배치된 중쇄 및 경쇄 상보성 결정 영역("CDR") 세트를 포함할 수 있다. CDR 세트는 중쇄 또는 경쇄 V 영역의 세 초가변 영역을 함유할 수 있다. 중쇄 또는 경쇄의 N-말단에서 시작하여, 이들 영역은 각각 "CDR1", "CDR2" 및 "CDR3"으로 표시된다. 따라서 항원-결합 부위는 중쇄 또는 경쇄 V 영역 각각으로부터의 CDR 세트를 포함하는 6개의 CDR을 포함할 수 있다.
항체는 면역글로불린(Ig)일 수 있다. Ig는, 예를 들어, IgA, IgM, IgD, IgE, 및 IgG일 수 있다. 면역글로불린에는 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드가 포함될 수 있다. 면역글로불린의 중쇄 폴리펩타이드에는 VH 영역, CH1 영역, 힌지 영역, CH2 영역, 및 CH3 영역이 포함될 수 있다. 면역글로불린의 경쇄 폴리펩타이드에는 VL 영역 및 CL 영역이 포함될 수 있다.
또한, 단백분해 효소 파파인(papain)은 우선적으로 IgG 분자를 절단하여 몇몇 단편을 생성하며, 그 중 둘(F(ab) 단편)은 각각 온전한 항원-결합 부위가 포함되는 공유 이종이량체를 포함한다. 효소 펩신은 IgG 분자를 절단하여 F(ab')2 단편을 포함하는 몇몇 단편을 제공할 수 있고, 이는 두 항원-결합 부위를 모두 포함한다. 따라서 항체는 Fab 또는 F(ab')2일 수 있다. Fab는 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. Fab의 중쇄 폴리펩타이드는 VH 영역 및 CH1 영역을 포함할 수 있다. Fab의 경쇄는 VL 영역 및 CL 영역을 포함할 수 있다.
항체는 다클론성 또는 단클론성 항체일 수 있다. 항체는 키메라 항체, 단일쇄 항체, 친화도 성숙된 항체, 인간 항체, 인간화된 항체, 또는 완전 인간 항체일 수 있다. 인간화된 항체는 비인간 종으로부터의 하나 이상의 상보성 결정 영역(CDR) 및 인간 면역글로불린 분자로부터의 틀 영역을 갖고 원하는 항원에 결합하는 비인간 종으로부터의 항체일 수 있다.
(1) PD-1 항체
항-면역 관문 분자는 항-PD-1 항체(또한 본 명세서에서 "PD-1 항체"로도 지칭됨), 이의 단편, 이들의 변이체, 또는 이들의 조합일 수 있다. PD-1 항체는 니볼루맙(Nivolumab)일 수 있다. 항-PD-1 항체는 PD-1 활성을 저해하여, 이로써 종양 또는 암에 대한 면역 반응을 유도, 유발 또는 증가시키고 종양 성장을 감소시킬 수 있다.
(2) PD-L1 항체
항-면역 관문 분자는 항-PD-L1 항체(또한 본 명세서에서 "PD-L1 항체"로도 지칭됨), 이의 단편, 이들의 변이체, 또는 이들의 조합일 수 있다. 항-PD-L1 항체는 PD-L1 활성을 저해시킴으로써, 종양 또는 암에 대한 면역 반응을 유도, 유발 또는 증가시키고 종양 성장을 감소시킬 수 있다.
(3) CTLA4 항체
항-면역 관문 분자 항체는 항-CTLA4 항체(또한 본 명세서에서 "CTLA4 항체"로도 지칭됨), 이의 변이체, 이의 단편, 또는 이들의 조합일 수 있다. 항-CTLA4 항체는 CTLA4 활성을 저해시킴으로써, 종양 또는 암에 대한 면역 반응을 유도, 유발 또는 증가시키고 종양 성장을 감소시킬 수 있다.
(4) TIM3 항체
항-면역 관문 분자 항체는 항-TIM3 항체(또한 본 명세서에서 "TIM3 항체"로도 지칭됨), 이의 변이체, 이의 단편, 또는 이들의 조합일 수 있다. 항-TIM3 항체는 TIM3 활성을 저해시킴으로써, 종양 또는 암에 대한 면역 반응을 유도, 유발 또는 증가시키고 종양 성장을 감소시킬 수 있다.
(5) LAG3 항체
항-면역 관문 분자 항체는 항-LAG3 항체(또한 본 명세서에서 "LAG3 항체"로도 지칭됨), 이의 변이체, 이의 단편, 또는 이들의 조합일 수 있다. 항-LAG3 항체는 LAG3 활성을 저해시킴으로써, 종양 또는 암에 대한 면역 반응을 유도, 유발 또는 증가시키고 종양 성장을 감소시킬 수 있다.
5. 작제물 및 플라스미드
면역원성 조성물은 위에서 기술된 항원 및/또는 항체를 암호화하는 핵산 작제물 또는 플라스미드를 포함할 수 있다. 핵산 작제물 또는 플라스미드는 하나 이상의 이종성 핵산 서열을 함유 또는 포함할 수 있다. 위에서 기술된 항원 및/또는 항체를 암호화하는 핵산 서열을 포함할 수 있는 유전적 작제물이 본 명세서에 제공된다. 유전적 작제물은 기능성 염색체외 분자로서 세포 내에 존재할 수 있다. 유전적 작제물은 동원체, 말단소립, 또는 플라스미드 또는 코스미드를 포함하는 선형 소염색체일 수 있다. 유전적 작제물은 하나 이상의 이종성 핵산 서열을 함유 또는 포함할 수 있다.
유전적 작제물은 위에서 기술된 항원 및/또는 항체를 암호화하는 핵산으로 세포를 형질감염시키는데 유용할 수 있으며, 형질전환된 숙주세포는 항원의 발현이 일어나는 조건 하에서 배양되고 유지된다.
암호화 서열은 안정성 및 높은 수준의 발현에 대해 최적화될 수 있다. 일부 경우에서, 코돈은 분자내 결합으로 인하여 생성된 것과 같은 RNA의 2차 구조 형성을 감소시키기 위하여 선택된다.
유전적 작제물은 위에서 기술된 항원 및/또는 항체를 임의의 순서로 발현하는 플라스미드의 형태일 수 있다.
발현 벡터
벡터는 원형 플라스미드 또는 선형 핵산일 수 있다. 원형 플라스미드 및 선형 핵산은 적절한 대상 세포에서 특정 뉴클레오타이드 서열의 발현을 유도할 수 있다. 벡터는, 종결 신호에 작동 가능하게 연결될 수 있는 항원-암호화 뉴클레오타이드 서열에 작동 가능하게 연결된 프로모터를 가질 수 있다. 벡터는 또한 뉴클레오타이드 서열의 적절한 번역을 필요로 하는 서열을 함유할 수 있다. 관심 대상 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 벡터는 키메라일 수 있는데, 이는 그의 성분의 적어도 하나가 그의 다른 성분 중 적어도 하나에 관하여 이종성인 것을 의미한다. 발현 카세트 내 뉴클레오타이드 서열의 발현은, 숙주 세포가 몇몇 특정 외부 자극에 노출될 경우에만 전사를 개시하는, 연속성 프로모터의 또는 유도성 프로모터의 제어 하에 있을 수 있다. 다세포 유기체의 경우에, 프로모터는 또한 특정 조직 또는 기관 또는 발생의 단계에 특이적일 수 있다.
RNA 벡터
일 실시형태에 있어서, 핵산은 RNA 분자이다. 따라서, 일 실시형태에 있어서, 본 발명은 하나 이상의 MAYV 항원을 암호화하는 RNA 분자를 제공한다. RNA는 플러스-가닥일 수 있다. 따라서, 몇몇 실시형태에 있어서, RNA 분자는 역전사와 같은 임의의 개입 복제 단계를 필요로 하는 일 없이 세포에 의해 번역될 수 있다. 본 발명에서 유용한 RNA 분자는 5' 캡(예컨대, 7-메틸구아노신)을 가질 수 있다. 이 캡은 RNA의 생체내 번역을 증대시킬 수 있다. 본 발명에서 유용한 RNA 분자의 5' 뉴클레오타이드는 5' 트라이포스페이트기를 가질 수 있다. 캐핑된 RNA에 있어서, 이것은 5'-대-5' 브리지를 통해서 7-메틸구아노신에 연결될 수 있다. RNA 분자는 3' 폴리-A 테일을 가질 수 있다. 이것은 또한 그의 3' 단부 부근에 폴리-A 중합효소 인식 서열(예컨대, AAUAAA)을 포함할 수 있다. 본 발명에서 유용한 RNA 분자는 단일-가닥일 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, RNA 분자는 네이키드 RNA 분자이다. 일 실시형태에 있어서, RNA 분자는 벡터 내에 포함된다.
일 실시형태에 있어서, RNA는 5' 및 3' UTR을 갖는다. 일 실시형태에 있어서, 5' UTR은 길이가 0 내지 3000개의 뉴클레오타이드이다. 암호화 영역에 부가될 5' 및 3' UTR 서열의 길이는, UTR의 상이한 영역으로 어닐링하는 PCR용의 프라이머의 설계를 포함하지만, 이것으로 제한되는 것은 아닌 상이한 방법에 의해 변경될 수 있다. 이 접근법을 이용해서, 당업자는 전사된 RNA의 형질감염 후의 최적 번역 효율을 달성하기 위하여 요구되는 5' 및 3' UTR 길이를 변경시킬 수 있다.
5' 및 3' UTR은 관심 대상 유전자에 대해서 관심 대상 유전자에 대한 천연형 내인성 5' 및 3' UTR일 수 있다. 대안적으로, 관심 대상 유전자에 대해서 내인성이 아닌 UTR 서열은 UTR 서열을 순방향 및 역방향 프라이머에 편입시킴으로써 또는 주형의 임의의 다른 변형에 의해 부가될 수 있다. 관심 대상 유전자에 대해서 내인성이 아닌 UTR 서열의 사용은 RNA의 안정성 및/또는 번역 효율을 변형시키는데 유용할 수 있다. 예를 들어, 3' UTR 서열의 AU-풍부 요소가 RNA의 안정성을 감소시킬 수 있음은 공지되어 있다. 따라서, 3' UTR은 당업계에 잘 알려진 UTR의 특성에 기초하여 전사된 RNA의 안정성을 증가시키도록 선택 또는 설계될 수 있다.
일 실시형태에 있어서, 5' UTR은 내인성 유전자의 코작 서열을 함유할 수 있다. 대안적으로, 관심 대상 유전자에 대한 내인성이 아닌 5' UTR이 위에서 기재된 바와 같이 PCR에 의해 부가될 경우, 공통 코작 서열은 5' UTR 서열을 부가함으로써 재설계될 수 있다. 코작 서열은 일부 RNA 전사체의 번역 효율을 증가시킬 수 있지만, 효율적인 번역을 가능하게 하기 위하여 모든 RNA에 대해서 요구되는 것으로 보이지 않는다. 많은 RNA를 위한 코작 서열에 대한 요건은 당업계에 공지되어 있다. 다른 실시형태에 있어서, 5' UTR은 RNA 게놈이 셀에 안정적인 RN바이러스로부터 유래될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 각종 뉴클레오타이드 유사체가 RNA의 엑소뉴클레아제 분해를 저지시키기 위하여 3' 또는 5' UTR에서 사용될 수 있다.
일 실시형태에 있어서, RNA는, 리보솜 결합, 번역의 개시 및 세포 내 RNA의 안정성을 결정하는, 5' 말단 상의 캡과 3' 폴리(A) 테일을 둘 다 갖는다.
일 실시형태에 있어서, RNA는 뉴클레오사이드-변형된 RNA이다. 뉴클레오사이드-변형된 RNA는, 비변형 RNA에 비해서, 예를 들어, 증가된 안정성, 낮은 또는 없는 선천적 면역원성 및 증대된 번역을 비롯한 특정 이점을 갖는다.
원형 및 선형 벡터
벡터는 세포 게놈에의 통합에 의해 표적 세포를 형질전환시키거나 또는 염색체외에 존재(예컨대, 복제 기원으로 플라스미드를 자가 복제)할 수 있는 원형 플라스미드일 수 있다.
벡터는 pVAX, pcDNA3.0, 또는 provax, 또는 항원을 암호화하는 DNA를 발현 가능하고 세포가 면역계에 의해 인식되는 항원으로 서열을 번역할 수 있게 하는 임의의 다른 발현 벡터일 수 있다.
또한 본 명세서에서는, 전기천공을 통해서 대상체에게 효율적으로 전달되고 하나 이상의 목적하는 항원을 발현 가능한, 선형 핵산면역원성 조성물 또는 선형 발현 카세트("LEC")가 제공된다. LEC는 임의의 포스페이트 골격이 결여된 임의의 선형 DNA일 수 있다. DNA는 하나 이상의 항원을 암호화할 수 있다. LEC는 프로모터, 인트론, 정지 코돈, 및/또는 폴리아데닐화 신호를 함유할 수 있다. 항원의 발현은 프로모터에 의해 제어될 수 있다. LEC는 임의의 항생제 내성 유전자 및/또는 포스페이트 골격을 함유하지 않을 수 있다. LEC는 목적하는 항원 유전자 발현과 관련되지 않는 다른 뉴클레오타이드 서열을 함유하지 않을 수 있다.
LEC는 선형화 가능한 임의의 플라스미드로부터 유래될 수 있다. 플라스미드는 항원을 발현 가능할 수 있다. 플라스미드는 pNP(푸에르토리코/34) 또는 pM2(뉴칼레도니아/99)일 수 있다. 플라스미드는 WLV009, pVAX, pcDNA3.0, 또는 provax, 또는 항원을 암호화하는 DNA를 발현 가능하고 세포가 면역계에 의해 인식되는 항원으로 서열을 번역할 수 있게 하는 임의의 다른 발현 벡터일 수 있다.
LEC는 pcrM2일 수 있다. LEC는 pcrNP일 수 있다. pcrNP 및 pcrMR은 각각 pNP(푸에르토리코/34) 및 pM2(뉴칼레도니아/99)로부터 유래될 수 있다.
프로모터, 인트론, 정지 코돈, 및 폴리아데닐화 신호
벡터는 위에서 기술된 항원 및/또는 항체를 암호화하는 이종성 핵산을 포함할 수 있고, 하나 이상의 암 항원 암호화 서열(들)의 상류에 있을 수 있는 개시 코돈, 및 위에서 기술된 항원 및/또는 항체의 암호화 서열(들)의 하류에 있을 수 있는 정지 코돈을 더 포함할 수 있다.
벡터는 프로모터를 가질 수 있다. 프로모터는 유전자 발현을 구동시키고 단리된 핵산의 발현을 조절할 수 있는 임의의 프로모터일 수 있다. 이러한 프로모터는 DNA 의존적 RNA 중합효소를 통해서 전사를 필요로 하는 시스-작용성 서열 요소이며, 이는 본 명세서에 기술된 항원 서열을 전사시킨다. 이종성 핵산의 직접 발현에 사용되는 프로모터의 선택은 특정 용도에 좌우된다. 프로모터는 천연 세팅에서 전사 개시 부위로부터 유래되는 것처럼 벡터에서 전사 개시로부터 동일한 거리에 위치될 수 있다. 그러나, 이 거리의 변동은 프로모터 기능의 손실 없이 동반될 수도 있다.
개시 및 종료 코돈은 위에서 기술된 항원 및/또는 항체의 암호화 서열(들)과 틀이 맞을 수 있다. 벡터는 위에서 기술된 항원 및/또는 항체의 암호화 서열과 작동가능하게 연결된 프로모터를 또한 포함할 수 있다. 위에서 기술된 항원 및/또는 항체의 암호화 서열(들)에 작동 가능하게 연결된 프로모터는 원숭이 바이러스 40(SV40)에서 유래된 프로모터, 마우스 유방암 바이러스(MMTV) 프로모터, 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 프로모터, 예컨대, 소 면역결핍 바이러스(BIV) 긴 말단 반복서열(LTR) 프로모터, 몰로니 바이러스 프로모터, 조류 백혈증 바이러스(ALV) 프로모터, 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터, 예컨대, CMV 최조기 프로모터, 엡스타인 바 바이러스(EBV) 프로모터, 또는 라우스 육종 바이러스(RSV) 프로모터일 수 있다. 상기 프로모터는 인간 유전자, 예컨대, 인간 액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴, 또는 인간 메탈로티오네인 유래의 프로모터일 수 있다. 프로모터는 또한 천연 또는 합성의 조직 특이적 프로모터, 예컨대, 근육 또는 피부 특이적 프로모터일 수 있다. 이러한 프로모터의 예는 미국 특허 출원 공개 제US20040175727호에 기재되며, 그 내용은 전문이 본 명세서에 도입된다.
벡터는 위에서 기술된 항원 및/또는 항체의 암호화 서열의 하류에 있을 수 있는 폴리아데닐화 신호를 또한 포함할 수 있다. 폴리아데닐화 신호는 SV40 폴리아데닐화 신호, LTR 폴리아데닐화 신호, 소 성장 호르몬(bGH) 폴리아데닐화 신호, 인간 성장 호르몬(hGH) 폴리아데닐화 신호, 또는 인간 β-글로빈 폴리아데닐화 신호일 수 있다. SV40 폴리아데닐화 신호는 pCEP4 플라스미드(Invitrogen, 캘리포니아주 샌디에이고 소재)로부터의 폴리아데닐화 신호일 수 있다.
벡터는 위에서 기술된 항원 및/또는 항체의 암호화 서열의 상류의 인핸서를 또한 포함할 수 있다. 인핸서는 발현에 필요할 수 있다. 인핸서는 인간 액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴 또는 바이러스 인핸서, 예컨대, CMV, HA, RSV 또는 EBV 유래의 인핸서일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드 기능 인핸서는, 각각의 내용이 전체가 참조로써 본 명세서에 통합되어 있는, 미국 특허 제5,593,972호, 제5,962,428호 및 제WO94/016737호에 기술되며, 이들 각각의 내용은 전체가 참고로 본 명세서에 포함되어 있다.
벡터는 기능성 스플라이스 공여체 및 수용체 부위를 가진 인트론 및 인핸서를 포함할 수 있다. 벡터는 효율적인 종료를 제공하기 위하여 구조적 유전자의 하류에 전사 종료 영역을 함유할 수 있다. 종료 영역은 프로모터 서열과 같은 유전자로부터 얻어질 수 있거나 또는 상이한 유전자로부터 얻어질 수 있다.
다수 벡터
면역원성 조성물은 단일 플라스미드와 같은 단일 핵산 분자의 복수의 카피, 또는 2개 이상의 상이한 플라스미드와 같은 2개 이상의 상이한 핵산 분자의 복수의 카피를 포함할 수 있다. 예를 들어, 면역원성 조성물은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 이상의 상이한 핵산 분자를 포함할 수 있다. 이러한 조성물은 복수의 2, 3, 4, 5, 6개 이상의 상이한 플라스미드를 포함할 수 있다.
면역원성 조성물은 단일 항원을 위한 암호화 서열을 일괄적으로 함유하는, 플라스미드와 같은 핵산 분자를 포함할 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 항원은 FAP이다. 면역원성 조성물은 다수의 항원을 위한 암호화 서열을 일괄적으로 함유하는, 플라스미드와 같은 핵산 분자를 포함할 수 있다. 일례로써, 일 실시형태에 있어서, 항원은 TERT 및 추가의 암 항원으로부터 선택된 다수의 항원이다. 하나의 예시적인 실시형태에 있어서, 항원은 WT-1 및 TERT이다. 하나의 예시적인 실시형태에 있어서, 항원은 PSMA 및 TERT이다. 다른 예시적인 실시형태에 있어서, 항원은 TERT, WT-1 및 PSMA이다. 면역원성 조성물은 하나 이상의 항원 및 하나 이상의 암 항원을 위한 암호화 서열을 일괄적으로 함유하는, 플라스미드와 같은 핵산 분자를 포함할 수 있다.
복제의 기원
벡터는 또한 염색체외로 벡터를 유지하고 세포에서 복수의 벡터 사본을 생산하기 위해 포유류 복제 기원을 포함할 수 있다. 벡터는 Invitrogen(캘리포니아주 샌디에이고 소재)의 pVAX1, pCEP4 또는 pREP4일 수 있고, 이는 엡스타인 바 바이러스 복제 기원 및 핵 항원 EBNA-1 코딩 영역을 포함할 수 있고, 이는 통합 없이 고사본 에피솜 복제를 생산할 수 있다. 벡터는 본 명세서에 기술된 변이체 플라스미드와 같은 변화를 갖는 pVAX1 또는 pVax1일 수 있다. 변이체 pVax1 플라스미드는 뼈대 벡터 플라스미드 pVAX1의 2998 염기쌍 변이체이다(Invitrogen, 캘리포니아주 칼스배드 소재). CMV 프로모터는 염기 137-724에 위치한다. T7 프로모터/프라이밍 부위는 염기 664-683에 있다. 다수 클로닝 부위는 염기 696-811에 있다. 소 GH 폴리아데닐화 신호는 염기 829-1053에 있다. 카나마이신 저항성 유전자는 염기 1226-2020에 있다. pUC 기원은 염기 2320-2993에 있다.
인비트로젠(Invitrogen)으로부터 입수 가능한 pVAX1의 서열을 기초로 하여, 하기 돌연변이가 본 명세서에 제시된 플라스미드 1 내지 6에 대한 골격으로 사용되었던 pVAX1의 서열에서 발견되었다:
C>G241 CMV 프로모터에서
C>T 1942 뼈대, 소 성장 호르몬 폴리아데닐화 신호(bGHpolyA)의 하류
A> - 2876 뼈대, 카나마이신 유전자의 하류
C>T 3277 pUC 복제 기원(Ori) 높은 카피 수(high copy number) 돌연변이에서 (핵산 연구 1985 참고)
G>C 3753 RNASeH 부위의 pUC Ori 상류의 최말단에서
염기쌍 2, 3, 및 4는 뼈대, CMV 프로모터의 상류에서 ACT에서 CTG로 변화한다.
상기 벡터의 골격은 pAV0242일 수 있다. 상기 벡터는 복제 결함이 있는 아데노바이러스 유형 5(Ad5) 벡터일 수 있다.
벡터는 또한 조절 서열을 포함할 수 있고, 이는 벡터가 투여되는 세포에서 유전자 발현에 매우 적합할 수 있다. 본 명세서에 개시된 하나 이상의 암 함원 서열은 코돈을 포함할 수 있으며, 이는 숙주 세포에서 암호화 서열의 더욱 효과적인 전사를 허용할 수 있다.
벡터는 pSE420(Invitrogen, 캘리포니아주 샌디에이고 소재)일 수 있고, 이는 대장균(E.coli)에서 단백질 생산을 위해 이용될 수 있다. 벡터는 또한 pYES2(Invitrogen, 캘리포니아주 샌디에이고 소재)일 수 있으며, 이는 효모의 사카로마이세스 세레비시애 균주에서 단백질 생산을 위해 이용될 수 있다. 플라스미드는 또한 MAXBAC™ 완전 배큘로바이러스 발현 시스템(Invitrogen, 캘리포니아주 샌디에이고 소재)일 수 있고, 이는 곤충 세포에서 단백질 생산을 위해 이용될 수 있다. 상기 플라스미드는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포와 같은 포유동물 세포에서의 단백질 생산에 사용될 수 있는, pcDNA I 또는 pcDNA3(Invitrogen, 캘리포니아주 샌디에이고 소재)일 수 있다. 벡터는 일반적인 기술 및 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning and Laboratory Manual, Second Ed., Cold Spring Harbor (1989)]을 포함하는, 용이하게 입수 가능한 기초 자료에 의하여 단백질을 생산하는 발현 벡터 또는 시스템일 수 있으며, 이는 그 전체가 참고로 포함된다.
6. 약제학적 조성물
면역원성 조성물은 약제학적 조성물의 형태일 수 있다. 약제학적 조성물은 면역원성 조성물을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 약 5나노그램 내지 약 10㎎의 본 발명의 항원을 암호화하는 핵산 분자를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약 25나노그램 내지 약 5㎎의 핵산을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 약 50나노그램 내지 약 1㎎의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 0.1 내지 약 500마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 1 내지 약 350마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 5 내지 약 250마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 10 내지 약 200마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 15 내지 약 150마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 20 내지 약 100마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 25 내지 약 75마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 30 내지 약 50마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 35 내지 약 40마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 100 내지 약 200마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약 10마이크로그램 내지 약 100마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약 20마이크로그램 내지 약 80마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약 25마이크로그램 내지 약 60마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 30나노그램 내지 약 50마이크로그램의 핵산을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 35나노그램 내지 약 45마이크로그램의 핵산을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 0.1 내지 약 500마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 1 내지 약 350마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 25 내지 약 250마이크로그램의 핵산을 함유한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 약 100 내지 약 200마이크로그램의 핵산을 함유한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 100나노그램의 핵산을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 적어도 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95,100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 295, 300, 305, 310, 315, 320, 325, 330, 335, 340, 345, 350, 355, 360, 365, 370, 375, 380, 385, 390, 395, 400, 405, 410, 415, 420, 425, 430, 435, 440, 445, 450, 455, 460, 465, 470, 475, 480, 485, 490, 495, 500, 605, 610, 615, 620, 625, 630, 635, 640, 645, 650, 655, 660, 665, 670, 675, 680, 685, 690, 695, 700, 705, 710, 715, 720, 725, 730, 735, 740, 745, 750, 755, 760, 765, 770, 775, 780, 785, 790, 795, 800, 805, 810, 815, 820, 825, 830, 835, 840, 845, 850, 855, 860, 865, 870, 875, 880, 885, 890, 895. 900, 905, 910, 915, 920, 925, 930, 935, 940, 945, 950, 955, 960, 965, 970, 975, 980, 985, 990, 995 또는 1000마이크로그램의 핵산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 적어도 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5 또는 10㎎ 이상의 핵산을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 최대 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 100나노그램의 핵산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 최대 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95,100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 295, 300, 305, 310, 315, 320, 325, 330, 335, 340, 345, 350, 355, 360, 365, 370, 375, 380, 385, 390, 395, 400, 405, 410, 415, 420, 425, 430, 435, 440, 445, 450, 455, 460, 465, 470, 475, 480, 485, 490, 495, 500, 605, 610, 615, 620, 625, 630, 635, 640, 645, 650, 655, 660, 665, 670, 675, 680, 685, 690, 695, 700, 705, 710, 715, 720, 725, 730, 735, 740, 745, 750, 755, 760, 765, 770, 775, 780, 785, 790, 795, 800, 805, 810, 815, 820, 825, 830, 835, 840, 845, 850, 855, 860, 865, 870, 875, 880, 885, 890, 895. 900, 905, 910, 915, 920, 925, 930, 935, 940, 945, 950, 955, 960, 965, 970, 975, 980, 985, 990, 995, 또는 1000마이크로그램의 핵산을 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 약제학적 조성물은 최대 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5 또는 10㎎의 핵산을 포함할 수 있다.
약제학적 조성물은 사용될 투여 경로에 따른 제형화 목적을 위하여 다른 제제를 추가로 포함할 수 있다. 약제학적 조성물이 주사가능한 약제학적 조성물인 경우, 이는 멸균 무-발열원 및 무-입자이다. 일 실시형태에 있어서, 등장성 제형이 사용된다. 일반적으로, 등장성을 위한 첨가제에는 염화나트륨, 덱스트로스, 만니톨, 소르비톨 및 락토스가 포함될 수 있다. 일부 경우에, 인산염 완충 염수와 같은 등장성 용액이 사용된다. 안정화제는 젤라틴 및 알부민을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 혈관수축 제제는 상기 제형에 부가된다.
면역원성 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 더 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 부형제는 기능적 분자, 예컨대, 운반체, 담체, 또는 희석제일 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 부형제는 형질감염 촉진 제제일 수 있고, 이는 표면 활성 제제, 예컨대, 면역 자극 복합체(ISCOMS), 프로인트(Freunds) 불완전 애주번트, 모노포스포릴 지질 A, 무라밀 펩타이드, 퀴논 유사체, 소포체, 예컨대, 스쿠알렌 및 스쿠알렌, 히알루론산, 지질, 리포좀, 칼슘 이온, 바이러스 단백질, 다중 음이온, 다중 양이온, 또는 나노입자를 포함하는 LPS 유사체, 또는 다른 알려진 형질감염 촉진 제제일 수 있다.
형질감염 촉진 제제는 폴리-L-글루타메이트(LGS)를 포함하는, 다중 음이온, 다중 양이온, 또는 지질이다. 형질감염 촉진 제제는 폴리-L-글루타메이트이다. 일 실시형태에 있어서, 폴리-L-글루타메이트는 6mg/㎖ 미만의 농도로 면역원성 조성물에 존재할 수 있다. 형질감염 촉진제는 계면 활성제 예컨대, 면역-자극 복합체(ISCOMS), 프로인트 불완전 애주번트, 모노포스포릴 지질 A를 포함하는 LPS 유사체, 뮤라밀 펩타이드, 퀴논 유사체 및 소포, 예컨대, 스쿠알렌 및 스쿠알렌을 포함할 수 있고, 히알루론산은 유전적 작제물과 함께 투여되어 사용될 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 면역원성 조성물은 또한 형질감염 촉진제, 예컨대, 지질, DNA-리포좀 혼합물(예를 들면 W09324640 참고)로서 레시틴 리포좀 또는 본 기술분야에 알려진 다른 리포좀을 포함하는 리포좀, 칼슘 이온, 바이러스 단백질, 다중음이온, 다중양이온, 또는 나노입자, 또는 다른 알려진 형질감염 촉진제를 포함할 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 형질감염 촉진 제제는 폴리-L-글루타메이트(LGS)를 포함하는, 다중 음이온, 다중 양이온, 또는 지질이다. 면역원성 조성물 중 전달감염 제제의 농도는 4㎎/㎖ 미만, 2㎎/㎖ 미만, 1㎎/㎖ 미만, 0.750㎎/㎖ 미만, 0.500㎎/㎖ 미만, 0.250㎎/㎖ 미만, 0.100㎎/㎖ 미만, 0.050㎎/㎖ 미만, 또는 0.010㎎/㎖ 미만이다.
약제학적으로 허용 가능한 부형제는 하나 이상의 애주번트일 수 있다. 애주번트는 동일한 플라스미드 또는 대안적인 플라스미드로부터 발현되거나, 면역원성 조성물 내의 상기 플라스미드와 조합된 단백질로서 전달되는 다른 유전자일 수 있다. 애주번트는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: 결실된 신호 서열을 갖고 IgE로부터의 신호 펩타이드를 임의로 포함하는 IL-15 포함하여, α-인터페론(IFN-α), β-인터페론(IFN-β), γ-인터페론, 혈소판 유도된 성장 인자(PDGF), TNFα, TNFβ, GM-CSF, 표피 성장 인자(EGF), 피부 T 세포-유인 케모카인(CTACK), 상피 흉선-발현된 케모카인(TECK), 점막-연관된 상피 케모카인(MEC), IL-12, IL-15, MHC, CD80, CD86. 애주번트는 IL-12, IL-15, IL-28, CTACK, TECK, 혈소판 유도된 성장 인자(PDGF), TNFα, TNFβ, GM-CSF, 표피 성장 인자(EGF), IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12, IL-18, 또는 이들의 조합일 수 있다. 일 예시적인 실시형태에서, 애주번트는 IL-12이다.
유용한 애주번트가 될 수 있는 다른 유전자는 하기를 암호화하는 것들을 포함할 수 있다: MCP-1, MIP-1a, MIP-1p, IL-8, RANTES, L-셀렉틴, P-셀렉틴, E-셀렉틴, CD34, GlyCAM-1, MadCAM-1, LFA-1, VLA-1, Mac-1, pl50.95, PECAM, ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3, CD2, LFA-3, M-CSF, G-CSF, IL-4, IL-18, CD40, CD40L의 돌연변이 형태, 혈관 성장 인자, 섬유아세포 성장 인자, IL-7, 신경 성장 인자, 혈관 내피 성장 인자, Fas, TNF 수용체, Flt, Apo-1, p55, WSL-1, DR3, TRAMP, 아포-3, AIR, LARD, NGRF, DR4, DR5, KILLER, TRAIL-R2, TRICK2, DR6, 카스파제 ICE, Fos, c-jun, Sp-1, Ap-1, Ap-2, p38, p65Rel, MyD88, IRAK, TRAF6, IkB, 비활성 NIK, SAP K, SAP-1, JNK, 인터페론 반응 유전자, NFkB, Bax, TRAIL, TRAILrec, TRAILrecDRC5, TRAIL-R3, TRAIL-R4, RANK, RANK 리간드, Ox40, Ox40 리간드, NKG2D, MICA, MICB, NKG2A, NKG2B, NKG2C, NKG2E, NKG2F, TAP1, TAP2 및 그의 기능성 단편.
7.
특정 암을 치료하기 위한 조합 면역원성 조성물
면역원성 조성물은 특정 암 또는 종양을 치료하기 위하여 위에서 언급된 바와 같이 TERT 항원과 하나 이상의 암 항원의 다양한 조합의 형태일 수 있다. 하나 이상의 암 항원의 조합에 따라서, 다양한 암 또는 다른 종양 유형이 면역원성 조성물로 표적화될 수 있다. 이들 암은 흑색종, 혈액암(예컨대, 백혈병, 림프종, 골수종), 폐 암종, 식도 편평상피 세포 암종, 방광암, 결장암, 식도, 위선암(gastric cancer), 간암종, 두경부, 뇌, 항문암, 소-세포 폐 암종, 췌장암, 활막 암종, 전립선암, 고환암, 간암, 자궁경부암, 재발성 호흡기 유두종증, 피부암, 및 위암(stomach cancer)을 포함할 수 있다.
a. 흑색종
면역원성 조성물은 흑색종을 치료 또는 예방하기 위하여 TERT 항원과 하나 이상의 암 항원, 예컨대, 타이로시나제, PRAME, 또는 GP100-Trp2를 조합할 수 있다. 면역원성 조성물은 흑색종을 치료 또는 예방하기 위하여 하나 이상의 암 항원 타이로시나제, PRAME, 또는 GP100-Trp2를 임의의 하나 이상의 암 항원 NY-ESO-1, MAGE-A1 또는 WTI과 더 조합할 수 있다. 암 항원의 다른 조합이 또한 흑색종을 치료 또는 예방하기 위하여 적용될 수 있다.
b. 두경부암
면역원성 조성물은 두경부암을 치료 또는 예방하기 위하여 TERT 항원과 하나 이상의 암 항원 HPV 16 E6/E7과 조합할 수 있다. 면역원성 조성물은 두경부암을 치료 또는 예방하기 위하여 암 항원 HPV 16 E6/E7을 임의의 하나 이상의 암 항원 NY-ESO-1, MAGE-A1 또는 WTI와 더 조합할 수 있다. 암 항원의 다른 조합이 또한 두경부암을 치료 또는 예방하기 위하여 적용될 수 있다.
c. 재발성 호흡기 유두종증/항문암
면역원성 조성물은 재발성 호흡기 유두종증 또는 항문암의 치료 또는 예방을 위하여 TERT 항원과 하나 이상의 암 항원 하나 이상의 암 항원, 예컨대, HPV 6, HPV11 또는 HPV 16을 조합할 수 있다. 면역원성 조성물은 재발성 호흡기 유두종증 또는 항문암의 치료 또는 예방을 위하여 하나 이상의 암 항원 HPV 6, HPV11 또는 HPV16을 하나 이상의 암 항원, NY-ESO-1, MAGE-A1 또는 WTI와 조합할 수 있다. 암 항원의 다른 조합이 또한 재발성 호흡기 유두종증 또는 항문 암을 치료 또는 예방하기 위하여 적용될 수 있다.
d. 자궁경부암
면역원성 조성물은 자궁경부암의 치료 또는 예방을 위하여 TERT 항원과 하나 이상의 암 항원 하나 이상의 암 항원, 예컨대, HPV 16 E6/E7 또는 HPV 18 E6/E7를 조합할 수 있다. 면역원성 조성물은 자궁경부암의 치료 또는 예방을 위하여 하나 이상의 암 항원, 예컨대, HPV 16 E6/E7 또는 HPV 18 E6/E7을 하나 이상의 암 항원 NY-ESO-1, MAGE-A1 또는 WTI과 더 조합할 수 있다. 암 항원의 다른 조합이 또한 자궁경부암을 치료 또는 예방하기 위하여 적용될 수 있다.
e. 간암
면역원성 조성물은 간암의 치료 또는 예방을 위하여 TERT 항원과 하나 이상의 암 항원, 예컨대, HBV 코어 항원, HBV 표면 항원, HCVNS34A, HCVNS5A, HCV NS5B, 또는 HCVNS4B를 조합할 수 있다. 면역원성 조성물은 간암의 치료 또는 예방을 위하여 하나 이상의 암 항원 HBV 코어 항원, HBV 표면 항원, HCVNS34A, HCVNS5A, HCV NS5B, 또는 HCVNS4B를 하나 이상의 암 항원 NY-ESO-1, MAGE-A1, 또는 WTI과 더 조합할 수 있다. 암 항원의 다른 조합이 또한 간암을 치료 또는 예방하기 위하여 적용될 수 있다.
f. 교모세포종
면역원성 조성물은 교모세포종을 치료 또는 예방하기 위하여 TERT 항원과 하나 이상의 암 항원 CMV를 포함할 수 있다. 면역원성 조성물은 교모세포종의 치료 또는 예방을 위하여 CMV와 하나 이상의 암 항원 NY-ESO-1, MAGE-A1 또는 WTI를 더 조합할 수 있다. 암 항원의 다른 조합이 또한 교모세포종을 치료 또는 예방하기 위하여 적용될 수 있다.
g. 전립선
면역원성 조성물은 전립선암의 치료 또는 예방을 위하여 TERT 항원과 PSA, PSMA 또는 STEAP와 같은 하나 이상의 암 항원을 조합할 수 있다. 면역원성 조성물은 전립선암의 치료 또는 예방을 위하여 PSA, PSMA, 또는 STEAP와 같은 하나 이상의 암 항원과 하나 이상의 암 항원 NY-ESO-1, MAGE-A1 또는 WTI를 더 조합할 수 있다. 암 항원의 다른 조합이 또한 전립선암을 치료 또는 예방하기 위하여 적용될 수 있다.
h. 혈액암(예컨대, 백혈병, 림프종, 골수종)
면역원성 조성물은 백혈병, 림프종 및 골수종과 같은 혈액암의 치료 또는 예방을 위하여 TERT 항원과 하나 이상의 암 항원, 예컨대, PRAME 및 WT-1을 조합할 수 있다. 면역원성 조성물은 백혈병, 림프종 및 골수종과 같은 혈액암의 치료 또는 예방을 위하여 하나 이상의 암 항원 PRAME 및 WT-1과 암 항원 NY-ESO-1 또는 MAGE-A1 중 하나 이상을 더 조합할 수 있다. 암 항원의 다른 조합이 또한 백혈병, 림프종, 및 골수종과 같은 혈액암을 치료 또는 예방하기 위하여 적용될 수 있다.
i. 난소암
면역원성 조성물은 난소암의 치료 또는 예방을 위하여 TERT 항원과 하나 이상의 암 항원, 예컨대, 여포 자극 호르몬 수용체(FSHR) 항원을 조합할 수 있다. 면역원성 조성물은 난소암을 치료 또는 예방하기 위하여 FSHR을 암 항원 NY-ESO-1 또는 MAGE-A1 중 하나 이상과 더 조합할 수 있다. 암 항원의 기타 조합은 또한 난소암을 치료 또는 예방하기 위하여 적용될 수 있다.
j. 기타 암
면역원성 조성물은 암의 치료 또는 예방을 위하여 TERT 항원과 하나 이상의 암 항원, 예컨대, FAP를 조합할 수 있다. 면역원성 조성물은 암을 치료 또는 예방하기 위하여 FAP를 암 항원 NY-ESO-1 또는 MAGE-A1 중 하나 이상과 더 조합할 수 있다. 암 항원의 기타 조합은 또한 암을 치료 또는 예방하기 위하여 적용될 수 있다.
8. 백신접종의 방법
본 명세서에 위에서 기술된 바와 같은 유전 작제물 및 상기 공통 항원의 단백질을 제공하기 위하여 약제학적 제형을 사용하여 암을 치료 또는 예방하기 위한 방법이 제공되며, 이는 이들이, 하나 이상의 암 항원이 유도될 수 있는 면역원에 대해 특별하게 효과적으로 만드는 에피토프를 포함한다. 면역원성 조성물을 투여하는 방법 또는 백신접종은 치료적 및 예방적 면역 반응을 유도하기 위해 제공될 수 있다. 백신접종 공정은 본 명세서에 기술된 바와 같이 포유동물에서 하나 이상의 암 항원에 대한 면역 반응을 생성할 수 있다. 면역원성 조성물은 포유동물의 면역계의 활성을 조절하고 면역 반응을 향상시키기 위해 개체에게 투여될 수 있다. 면역원성 조성물의 투여는, 본 명세서에 기술된 바와 같이, 세포에서 발현되고 면역계가 인식하는 세포의 표면으로 전달되어 세포성, 체액성, 또는 세포성 및 체액성 반응을 유도하는 핵산 분자로서 하나 이상의 암 항원의 형질감염일 수 있다. 면역원성 조성물의 투여는 상기에서 논의된 바와 같은 면역원성 조성물을 포유동물에게 투여함으로써 하나 이상의 암 항원에 대해 포유동물에서 면역 반응을 유도하거나 유발하는데 사용될 수 있다.
포유류에 면역원성 조성물을 투여함에 있어서, 그리고 포유류의 세포 상에 벡터를 투여함에 있어서, 형질감염된 세포는 본 명세서에 개시된 바와 같은 암 항원 중 하나 또는 그 이상을 발현 및 분비할 것이다. 이러한 분비된 단백질 또는 합성 항원은 면역계에 의하여 외래의 것으로 인식될 것이며, 이는 하나 이상의 암 항원에 대해 만들어진 항체 및 하나 이상의 암 항원에 대해 특이적인 T-세포 반응을 포함할 수 있는 면역 반응을 개시할 것이다. 일부 예시에서, 본 명세서에 검토된 면역원성 조성물로 백신접종된 포유류는 프라이밍된 면역계를 가질 것이고, 하나 이상의 암 항원으로 유발될 때, 프라이밍된 면역계는, 점액성(예컨대, 중화 항체), 세포성, 또는 둘다 중 어느 것을 통해서라도, 본 명세서에 개시된 차후의 암 항원의 빠른 제거를 허용할 것이다. 면역원성 조성물은 포유동물의 면역계의 활성을 조절하고 면역 반응을 향상시키기 위해 개체에게 투여될 수 있다.
면역원성 조성물을 투여하는 방법은 미국 특허 제4,945,050호 및 제5,036,006호에 기술되어 있고, 이들은 둘 다 그들의 전문이 참고로 본 명세서에 편입된다.
백신은 포유동물에게 투여되어 포유동물에서 면역 반응을 유발할 수 있다. 포유동물은 인간, 비-인간 영장류, 소, 양, 염소, 영양, 들소, 물소, 들소, 소과, 사슴, 헤지혹, 코끼리, 라마, 알파카, 마우스, 래트 또는 닭일 수 있다.
면역원성 조성물 투여량은 1㎍ 내지 10㎎ 활성성분/kg 체중/시간일 수 있고, 20㎍ 내지 10㎎ 성분/kg 체중/시간일 수 있다. 면역원성 조성물은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 또는 31일마다 투여될 수 있다. 효과적인 치료를 위한 면역원성 조성물 투여량의 수는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10회 이상의 투여량일 수 있다.
a. 면역원성 조성물에 의해 면역 반응을 생성하는 방법
면역원성 조성물은 치료적 또는 예방적 면역 반응을 포함하는 면역 반응을 포유류에서 생성하는데 사용될 수 있다. 면역 반응은 항체 및/또는 킬러 T 세포를 생성할 수 있으며, 이는 본 명세서에 개시된 바와 같은 하나 이상의 암 항원에 관한 것이다. 이러한 항체 및 T 세포는 단리될 수 있다.
몇몇 실시형태는 하나 이상의 암 항원에 대해 면역 반응을 생성하는 방법을 제공하며, 이는 면역원성 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함한다. 몇몇 실시형태는 위에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 암 항원을 발현하는 암 또는 종양에 대해 개체를 예방적으로 백신접종하는 방법을 제공하며, 이는 면역원성 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 몇몇 실시형태는 위에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 암 항원을 발현하는 암 또는 종양에 대해 개체를 치료적으로 백신접종하는 방법을 제공하며, 이는 면역원성 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 면역원성 조성물 투여 전에 본 명세서에 개시된 바와 같은 하나 이상의 암 항원을 발현하는 암 또는 종양의 진단이 일상적으로 행해질 수 있다.
b. 면역원성 조성물에 의한 암 치료 방법
면역원성 조성물은 이를 필요로 하는 포유동물 또는 대상체의 암 또는 종양(예컨대, 흑색종, 두경부, 자궁경부, 간, 전립선, 혈액암, 식도 편평상피, 위선)에 반응성이거나 이에 관한, 포유동물에서 면역반응을 생성 또는 유발시키기 위하여 사용될 수 있다. 유발된 면역 반응은 암 또는 종양 성장을 예방할 수 있다.
유발된 면역 반응은 암성 또는 종양 세포의 전이를 예방 및/또는 감소시킬 수 있다. 따라서, 면역원성 조성물은 면역원성 조성물이 투여된 포유동물 또는 대상체에서 암 또는 종양을 치료 및/또는 예방하는 방법에서 사용될 수 있다. 면역원성 조성물에서 사용되는 항원에 따라서, 상기 치료된 암 또는 종양 기반 성장은, 제한 없이, 흑색종, 혈액암(예컨대, 백혈병, 림프종, 골수종), 폐 암종, 식도 편평상피 세포 암종, 방광암, 결장암, 식도, 위선암, 간암종, 두경부, 뇌, 항문암, 소-세포 폐 암종, 췌장암, 활막 암종, 전립선암, 고환암, 간암, 자궁경부암, 재발성 호흡기 유두종증, 피부암, 및 위암과 같은 암의 임의의 유형일 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 투여된 면역원성 조성물은 (1) 단핵구 화학유인성 단백질-1(MCP-1) 생성을 차단하여 골수 유래된 억제자 세포(MDSC)를 지연시키고 종양 성장을 억제하는 B 세포 반응을 통한 체액성 면역을 유도하는 것; (2) 종양 세포를 공격하고 사멸시키는 CD8+(CTL)와 같은 세포독성 T 림프구를 증가시키는 것; (3) T 헬퍼 세포 반응을 증가시키는 것; 및 (4) IFN-γ 및 TFN-α을 통하여, 또는 상기 언급된 것의 조합을 통하여 염증성 반응을 증가시키는 것에 의하여 종양 세포의 제거를 매개하거나 이의 성장을 예방할 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 면역 반응은 면역원성 조성물이 투여된 대상체에서 다양한 조직 또는 계통(예컨대, 뇌 또는 신경계 등)에 대한 손상 또는 이의 염증을 야기시키지 않는 체액성 면역 반응 및/또는 항원-특이적 세포독성 T 림프구(CTL) 반응을 일으킬 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 투여된 면역원성 조성물은 대상체에서 무종양 생존을 증가시키거나, 종양 질량을 저감시키거나, 종양 생존을 증가시키거나, 또는 이들의 조합일 수 있다. 투여된 면역원성 조성물은 대상체에서 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59% 및 60%만큼 무종양 생존을 증가시킬 수 있다. 투여된 면역원성 조성물은 면역화 후 대상체에서 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69% 및 70%만큼 종양 질량을 저감시킬 수 있다. 투여된 면역원성 조성물은 대상체에서 단핵구 화학유인성 단백질 1(MCP-1), 골수 유래된 억제자 세포에 의하여 분비된 사이토카인의 증가를 예방 및 차단할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 투여된 면역원성 조성물은 대상체에서 암성 또는 종양 조직 내의 MCP-1 에서의 증가를 예방 및 차단할 수 있으며, 이로써 대상체에서 암성 또는 종양 조직의 혈관신생을 저감시킬 수 있다.
투여된 면역원성 조성물은 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69% 및 70%만큼 종양 생존율을 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 면역원성 조성물은 면역원성 조성물이 투여된 대상체에서 손상 또는 질병 또는 사망을 일으키는 일 없이 하나 이상의 암 항원을 발현하는 암 또는 종양을 청소 또는 제거하기 위하여 암성 또는 종양 세포 또는 조직을 표적화하는 항원-특이적 면역 반응을 확립하도록 (이하에 더욱 상세히 기술되는 바와 같이) 말초계에 투여될 수 있다.
투여된 면역원성 조성물은 대상체에서 세포성 면역 반응을 약 50배 내지 약 6000배, 약 50배 내지 약 5500배, 약 50배 내지 약 5000배, 약 50배 내지 약 4500배, 약 100배 내지 약 6000배, 약 150배 내지 약 6000배, 약 200배 내지 약 6000배, 약 250배 내지 약 6000배, 또는 약 300배 내지 약 6000배만큼 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 투여된 면역원성 조성물은 대상체에서 세포성 면역 반응을 약 50배, 100배, 150배, 200배, 250배, 300배, 350배, 400배, 450배, 500배, 550배, 600배, 650배, 700배, 750배, 800배, 850배, 900배, 950배, 1000배, 1100배, 1200배, 1300배, 1400배, 1500배, 1600배, 1700배, 1800배, 1900배, 2000배, 2100배, 2200배, 2300배, 2400배, 2500배, 2600배, 2700배, 2800배, 2900배, 3000배, 3100배, 3200배, 3300배, 3400배, 3500배, 3600배, 3700배, 3800배, 3900배, 4000배, 4100배, 4200배, 4300배, 4400배, 4500배, 4600배, 4700배, 4800배, 4900배, 5000배, 5100배, 5200배, 5300배, 5400배, 5500배, 5600배, 5700배, 5800배, 5900배, 또는 6000배만큼 증가시킬 수 있다.
투여된 면역원성 조성물은 대상체에서 인터페론 감마(IFN-γ) 수준을 약 50배 내지 약 6000배, 약 50배 내지 약 5500배, 약 50배 내지 약 5000배, 약 50배 내지 약 4500배, 약 100배 내지 약 6000배, 약 150배 내지 약 6000배, 약 200배 내지 약 6000배, 약 250배 내지 약 6000배, 또는 약 300배 내지 약 6000배만큼 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 투여된 면역원성 조성물 대상체에서 IFN-γ 수준을 약 50배, 100배, 150배, 200배, 250배, 300배, 350배, 400배, 450배, 500배, 550배, 600배, 650배, 700배, 750배, 800배, 850배, 900배, 950배, 1000배, 1100배, 1200배, 1300배, 1400배, 1500배, 1600배, 1700배, 1800배, 1900배, 2000배, 2100배, 2200배, 2300배, 2400배, 2500배, 2600배, 2700배, 2800배, 2900배, 3000배, 3100배, 3200배, 3300배, 3400배, 3500배, 3600배, 3700배, 3800배, 3900배, 4000배, 4100배, 4200배, 4300배, 4400배, 4500배, 4600배, 4700배, 4800배, 4900배, 5000배, 5100배, 5200배, 5300배, 5400배, 5500배, 5600배, 5700배, 5800배, 5900배, 또는 6000배만큼 증가시킬 수 있다.
면역원성 조성물 투여량은 1㎍ 내지 10㎎ 활성 성분/kg 체중/시간일 수 있고, 20㎍ 내지 10㎎ 성분/kg 체중/시간일 수 있다. 면역원성 조성물은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 또는 31일마다 투여될 수 있다. 효과적인 치료를 위한 면역원성 조성물 투여량의 수는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10일 수 있다.
(1)
면역 관문 표적화 항체에 의한 조합 요법
본 발명은 또한 위에서 기술된 바와 같은 면역원성 조성물을 사용하여 포유동물에서 면역 반응을 증가시키는 방법에 관한 것이다. 위에서 기술된 바와 같은 면역원성 조성물은 위에서 기술된 바와 같은 암 항원 및 PD1 항체 및/또는 PDL1 항체를 포함할 수 있다. 상기 조합은 단일 제형일 수 있거나, 또는 개별적일 수 있고 그리고 차례로(우선 암 항원, 이후 면역 관문 항체, 또는 우선 면역 관문 항체, 이후 암 항원) 투여될 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 암 항원은 면역 관문 항체가 대상체에 투여되기 전 약 30초, 1분, 2분, 3분, 4분, 5분, 10분, 15분, 20분, 25분, 30분, 35분, 40분, 45분, 50분, 55분, 60분, 0.25시간, 0.5시간, 0.75시간, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 36시간, 48시간, 60시간, 72시간, 84시간, 96시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 22일, 23일, 24일, 25일, 26일, 27일, 28일, 29일, 30일, 31일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 또는 8주에 대상체에 투여될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 면역 관문 항체는 암 항원이 대상체에게 투여되기 전 약 30초, 1분, 2분, 3분, 4분, 5분, 10분, 15분, 20분, 25분, 30분, 35분, 40분, 45분, 50분, 55분, 60분, 0.25시간, 0.5시간, 0.75시간, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 36시간, 48시간, 60시간, 72시간, 84시간, 96시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 22일, 23일, 24일, 25일, 26일, 27일, 28일, 29일, 30일, 31일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 또는 8주에 대상체에게 투여될 수 있다.
암 항원과 면역 관문 항체의 조합은 암 항원 단독을 포함하는 면역원성 조성물보다 더 효율적으로 면역계를 유도한다. 이러한 더욱 효과적인 면역 반응은 특정 암의 치료 및/또는 예방에 있어서 증가된 효능을 제공한다. 면역 관문 항체와 조합된 면역원성 조성물에서 사용된 항원에 따라서, 치료된 암 또는 종양 기반 성장은, 제한 없이, 흑색종, 혈액암(예컨대, 백혈병, 림프종, 골수종), 폐 암종, 식도 편평상피 세포 암종, 방광암, 결장암, 식도, 위선암, 간암종, 두경부, 뇌, 항문암, 소-세포 폐 암종, 췌장암, 활막 암종, 전립선암, 고환암, 간암, 자궁경부암, 재발성 호흡기 유두종증, 피부암 및 위암과 같은 암의 임의의 유형일 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 면역 반응은 약 0.5배 내지 15배, 약 0.5배 내지 약 10배, 또는 약 0.5배 내지 약 8배만큼 증가될 수 있다. 대안적으로, 면역원성 조성물이 투여된 대상체에서의 면역 반응은 적어도 약 0.5배, 적어도 약 1.0배, 적어도 약 1.5배, 적어도 약 2.0배, 적어도 약 2.5배, 적어도 약 3.0배, 적어도 약 3.5배, 적어도 약 4.0배, 적어도 약 4.5배, 적어도 약 5.0배, 적어도 약 5.5배, 적어도 약 6.0배, 적어도 약 6.5배, 적어도 약 7.0배, 적어도 약 7.5배, 적어도 약 8.0배, 적어도 약 8.5배, 적어도 약 9.0배, 적어도 약 9.5배, 적어도 약 10.0배, 적어도 약 10.5배, 적어도 약 11.0배, 적어도 약 11.5배, 적어도 약 12.0배, 적어도 약 12.5배, 적어도 약 13.0배, 적어도 약 13.5배, 적어도 약 14.0배, 적어도 약 14.5배, 또는 적어도 약 15.0배만큼 증가될 수 있다.
또 다른 대안적인 실시형태에 있어서, 면역원성 조성물이 투여된 대상체에서의 면역 반응은 약 50% 내지 약 1500%, 약 50% 내지 약 1000%, 또는 약 50% 내지 약 800% 증가될 수 있다. 다른 실시형태에 있어서, 면역원성 조성물이 투여된 대상체에서의 면역 반응은 적어도 약 50%, 적어도 약 100%, 적어도 약 150%, 적어도 약 200%, 적어도 약 250%, 적어도 약 300%, 적어도 약 350%, 적어도 약 400%, 적어도 약 450%, 적어도 약 500%, 적어도 약 550%, 적어도 약 600%, 적어도 약 650%, 적어도 약 700%, 적어도 약 750%, 적어도 약 800%, 적어도 약 850%, 적어도 약 900%, 적어도 약 950%, 적어도 약 1000%, 적어도 약 1050%, 적어도 약 1100%, 적어도 약 1150%, 적어도 약 1200%, 적어도 약 1250%, 적어도 약 1300%, 적어도 약 1350%, 적어도 약 1450%, 또는 적어도 약 1500%만큼 증가될 수 있다.
면역원성 조성물 투여량은 1㎍ 내지 10㎎ 활성 성분/㎏ 체중/시간일 수 있고, 20㎍ 내지 10㎎ 성분/kg 체중/시간일 수 있다. 면역원성 조성물은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 또는 31일마다 투여될 수 있다. 효과적인 치료를 위한 면역원성 조성물 투여량의 횟수는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10일 수 있다.
(2) 암
면역원성 조성물은 이를 필요로 하는 포유동물 또는 대상체의 종양에 반응성이거나 이에 관한, 포유동물에서 면역반응을 생성 또는 유발하기 위하여 사용될 수 있다. 유발된 면역 반응은 종양 성장을 예방할 수 있다. 유발된 면역 반응은 종양 성장을 저감시킬 수 있다. 유발된 면역 반응은 암성 또는 종양 세포의 전이를 예방 및/또는 저감시킬 수 있다. 따라서, 면역원성 조성물은 면역원성 조성물이 투여된 포유동물 또는 대상체에서 암을 치료 및/또는 예방하는 방법에서 사용될 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 투여된 면역원성 조성물은 (1) 단핵구 화학유인성 단백질-1(MCP-1) 생성을 차단하여 골수 유래된 억제자 세포(MDSC)를 지연시키고 종양 성장을 억제하는 B 세포 반응을 통한 체액성 면역을 유도하는 것; (2) 흑색종 세포를 공격하고 사멸시키는 CD8+(CTL)와 같은 세포독성 T 림프구를 증가시키는 것; (3) T 헬퍼 세포 반응을 증가시키는 것; 및 (4) IFN-γ 및 TFN-α을 통하여, 또는 상기 언급된 것의 조합을 통하여 염증성 반응을 증가시키는 것에 의하여 종양 세포의 제거를 매개하거나 이의 성장을 예방할 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 투여된 면역원성 조성물은 대상체에서 무종양 생존율을 증가시킬 수 있거나, 종양 질량을 저감시킬 수 있거나, 무종양 생존율을 증가시킬 수 있거나 또는 이들의 조합일 수 있다. 투여된 면역원성 조성물은 대상체에서 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44% 및 45%만큼 무종양 생존율을 증가시킬 수 있다. 투여된 면역원성 조성물은 면역화 후에 대상체에서 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59% 및 60%만큼 종양 질량을 저감시킬 수 있다. 투여된 면역원성 조성물은 대상체에서 종양 조직의 혈관신생을 저감시킬 수 있다. 투여된 면역원성 조성물은 대상체에서 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59% 및 60%만큼 종양 생존율을 증가시킬 수 있다.
9. 투여 경로
면역원성 조성물 또는 약제학적 조성물은 경구, 비경구, 설하, 경피, 직장, 경점막, 국소, 흡입을 통해, 협측 투여를 통해, 흉막내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 피하, 근육내, 비강내 경막내, 및 관절내 또는 이들의 조합을 포함하는 상이한 경로에 의해 투여될 수 있다. 수의학적 용도를 위해, 조성물은 정상적인 수의학적 관례에 따라 적합하게 허용 가능한 제형으로 투여될 수 있다. 수의사는 특정 동물에 가장 적절한 투여 방식 및 투여 경로를 쉽게 결정할 수 있다. 면역원성 조성물은 전통적 주사기, 무바늘 주사 장치, "미세투사 충격 고운 건(microprojectile bombardment gone guns)", 또는 전기천공("EP"), "유체역학적 방법" 또는 초음파와 같은 다른 물리적 방법에 의해 투여될 수 있다.
면역원성 조성물의 벡터는 생체내 전기천공을 이용하여 그리고 이를 이용하지 않고 DNA 주사(또한 DNA 백신접종으로도 불림), 리포좀 매개된, 나노입자 촉진된, 재조합 벡터, 예컨대, 재조합 아데노바이러스, 재조합 아데노바이러스 연관된 바이러스 및 재조합 우두를 포함하는 널리 공지된 몇 가지 기술에 의해 포유동물에게 투여될 수 있다. 면역원성 조성물의 하나 이상의 암 항원은 DNA 주사를 통해 그리고 생체내 전기천공과 함께 투여될 수 있다.
a. 전기천공
면역원성 조성물 또는 약제학적 조성물은 전기천공에 의하여 투여될 수 있다. 면역원성 조성물의 전기천공을 통한 백신의 투여는 가역적 기공이 세포막에 형성되게 하는데 효과적인 에너지의 펄스를 포유동물의 원하는 조직에 전달하도록 구성될 수 있는 전기천공 장치를 이용하여 달성될 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 에너지의 펄스는 사용자에 의해 입력된 미리 조정된 전류와 유사한 정전류이다. 전기천공 장치는 전기천공 성분 및 전극 어셈블리 또는 핸들 어셈블리를 포함한다. 전기천공 성분에는 하기를 포함하는 전기천공 장치의 다양한 요소의 하나 이상이 포함되고 도입될 수 있다: 컨트롤러, 전류 파형 생성기, 임피던스 평가기, 파형 로거, 입력 요소, 상태 보고 요소, 커뮤니케이션 포트, 메모리 성분, 전원 및 전력 스위치. 상기 전기천공은 플라스미드에 의해 세포의 형질감염을 촉진하는 생체내 전기천공 디바이스, 예를 들면, CELLECTRA® EP 시스템(Inovio Pharmaceuticals, 팬실베니아주 블루 벨 소재) 또는 Elgen 전기천공기(Genetronics, 캘리포니아주 샌디에이고 소재)를 이용하여 달성될 수 있다.
본 발명의 면역원성 조성물의 투여를 용이하게 할 수 있는 전기천공 장치 및 전기천공 방법의 예는, 미국 특허 제7,245,963호(Draghia-Akli 등), 미국 특허 공개 제2005/0052630호(Smith 등)에 기재된 것들을 포함하며, 이들 특허의 내용은 그들의 전문이 본 명세서에 참고로 편입된다. 투여를 용이하게 하는데 사용될 수 있는 다른 전기천공 장치 및 전기천공 방법은, 미국 가출원 제60/852,149호(출원일: 2006년 10월 17일) 및 제60/978,982호(2007년 10월 10일 출원)에 대해 35 USC 119(e) 하에 우선권을 주장하는, 공동 계류중이고 공동 소유인 미국 특허 출원 제11/874072호(출원일: 2007년 10월 17일)에 제공된 것들을 포함하며, 이들 모두는 그들의 전문이 참고로써 본 명세서에 편입된다.
미국 특허 제7,245,963호(Draghia-Akli 등)는 신체 또는 식물 내 선택된 조직의 세포 내로 생체분자의 도입을 용이하게 하기 위한 모듈식 전극 시스템 및 그의 용도를 기술하고 있다. 상기 모듈식 전극 시스템은 복수의 바늘 전극; 피하 주사침; 프로그램가능한 정전류 펄스 컨트롤러로부터 복수의 바늘 전극까지 전도성 링크를 제공하는 전기적 커넥터; 및 전원을 포함할 수 있다. 조작자는 지지 구조 상에 장착된 복수의 바늘 전극을 쥐고 이들을 체내 또는 식물에서 선택된 조직 내로 단단히 삽입할 수 있다. 생체분자는 이후 선택된 조직 내로 피하 주사침을 통해 투여된다. 프로그래밍 가능한 정전류 자극 컨트롤러가 활성화되며 정전류 전기 자극이 복수의 바늘 전극에 적용된다. 적용된 정전류 전기 자극은 복수의 전극 간에서 세포 내로 생체분자의 도입을 촉진한다. 미국 특허 제7,245,963호의 전체 내용은 그 전문이 참고로 본 명세서에 편입된다.
미국 특허 공개 제2005/0052630호(Smith 등)는 신체 또는 식물 내 선택된 조직의 세포 내로 생체분자의 도입을 효과적으로 용이하게 하기 위해 이용될 수 있는 전기천공 장치를 기재한다. 전기천공 장치는 그 작동이 소프트웨어 또는 펌웨어에 의해 특정되는 전기-역학 장치("EKD 장치")를 포함한다. EKD 장치는 자극 파라미터의 입력 및 사용자 제어에 기반하여 어레이 내 전극 간에 일련의 프로그래밍 가능한 정전류 자극 패턴을 생성하며, 전류 파형 데이터의 저장 및 획득을 허용한다. 전기천공 장치는 또한 바늘 전극 어레이, 주입 바늘을 위한 중심 주입 채널, 및 제거 가능한 가이드 디스크를 갖는 대체 가능한 전극 디스크를 포함한다. 미국 특허 공개 제2005/0052630호의 전체 내용이 본 명세서에 참고로 완전히 편입된다.
미국 특허 제7,245,963호 및 미국 특허 공개 제2005/0052630호에 기재된 전극 어레이 및 방법은 근육과 같은 조직뿐만 아니라 다른 조직 또는 기관 내로의 심부 침투를 위해 개작될 수 있다. 전극 어레이의 구성 때문에, 주사 바늘(선택한 생체분자를 전달함)은 또한 표적 장기 내로 완전히 삽입되며, 주사는 전극에 의해 미리 기술된 영역 내에서, 표적 조직에 수직으로 전달된다. 미국 특허 제7,245,963호 및 미국 특허 공개 제2005/005263호에 기술된 전극은 바람직하게는 20㎜ 길이 및 21 게이지이다.
또한, 전기천공 장치 및 이의 사용을 포함하는 상정된 몇몇 실시형태에 있어서, 하기 특허들에 기재된 것들인 전기천공 장치가 있다: 미국 특허 제5,273,525호(1993년 12월 28일 발행), 미국 특허 제6,110,161호(2000년 8월 29일 발행), 제6,261,281호(2001년 7월 17일 발행), 및 제6,958,060호(2005년 10월 25일 발행), 및 미국 특허 제6,939,862호(2005년 9월 6일 발행). 게다가, 다양한 장치 중 어느 것인가를 사용한 DNA 투여에 대한 2004년 2월 24일자로 발행된 미국 특허 제6,697,669호, 및 DNA의 주입 방법에 대한 2008년 2월 5일자로 발행된 미국 특허 7,328,064에서 제공된 주제를 포괄하는 특허가 본 명세서에서 상정된다. 상기 특허는 그들의 전문이 참고로 본 명세서에 편입된다.
10. 면역원성 조성물을 제조하는 방법
본 명세서에 논의된 면역원성 조성물을 포함하는 핵산 분자를 제조하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 핵산 분자는, 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여, 대규모 발효 탱크에서 세포 배양물을 접종하는 데 사용될 수 있다.
본 발명의 EP 장치를 사용하기 위한 핵산 분자는 공지된 장치 및 기술의 조합을 이용하여 제형화되거나 제조될 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 이들은 미국 출원 공개 제20090004716호(출원일: 2007년 5월 23일)에 기재된 최적화된 플라스미드 제조 기술을 이용하여 제조된다. 일부 예에서, 이들 연구에 사용된 핵산 분자는 10㎎/㎖ 이상의 농도로 제형화될 수 있다. 제조 기법에는 또한 미국 일련 번호 제60/939,792호에 기재된 것에 부가하여, 2007년 7월 3일자로 발행된 허가된 특허인, 미국 특허 제7,238,522호에 기재된 것들을 포함하는 당업자에게 일반적으로 공지된 다양한 장치 및 프로토콜이 포함되거나 도입된다. 상기 인용된 출원 및 특허인 미국 일련 번호 제60/939792호 및 미국 특허 제7,238,522호는 각각 이들의 전문이 본 명세서에 편입된다.
본 발명은 하기 비제한적 실시예에 의해 예시된 다수의 양상을 갖는다.
11. 실시예
실시예 1
pTyr의 구성
도 1A 및 9에 나타낸 바와 같이, 타이로시나제(Tyr)는 많은 상이한 유기체에서 발견될 수 있다. 따라서, 공통 Tyr은 도 1A에 나타낸 유기체로부터의 Tyr에 대응하는 서열을 정렬함으로써, 그리고 공통 Tyr에 대한 가장 공통적인 아미노산 및/또는 뉴클레오타이드를 선택함으로써 생성되었다. 각 유기체에 대응하는 Tyr 서열은 젠뱅크(GenBank)(NCBI)로부터 얻었다. 따라서, 공통 Tyr은 종에 걸친 Tyr 서열의 보존적 요소를 반영하였다.
공통 Tyr 항원을 암호화하는 핵산은 또한 IgE 리더 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하도록 조정될 수 있다. 특히, IgE 리더 서열은 공통 Tyr 핵산 서열의 프레임 상류에 융합될 수 있다(도 1B). 수득한 서열은 이후 pVax1 발현 벡터에 삽입되어 타이로시나제 작제물 또는 플라스미드(pTyr)를 생성하고, 이로써 코작 서열은 IgE 리더 서열 및 공통 Tyr을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 선행하였다.
공통 Tyr 핵산 서열의 pVax1로의 삽입은 제한 효소 분석에 의하여 확인되었다. 도 1C에 나타낸 바와 같이, 공통 Tyr 핵산 서열은 DNA 아가로스 겔(즉, BamH1/Xho1로 표지된 레인) 상에서 pVax1 플라스미드로부터 분리되었으며, 이로써 pVax1가 공통 Tyr 핵산 서열을 함유하였다는 것을 확인하였다.
공통 Tyr의 발현은 pTyr로의 HeLa 세포를 형질감염시킴으로써 확인되었다. 인간 항-Tyr 항체로의 웨스턴 블롯팅은 HeLa 세포에서의 공통 Tyr의 발현을 확인하였다(도 1D). GPF 염색은 형질감염된 HeLa 세포에서의 공통 Tyr 단백질의 발현을 나타내었다(도 1E). 웨스턴 블롯팅 및 염색 실험 둘 다에서,
실시예 2
pTyr로의 백신 접종은 세포 매개된 면역 반응을 야기하였다
위에서 기술된 pTyr은 pTyr에 의하여 세포성 면역 반응이 야기되었는지를 평가하기 위하여 마우스를 백신접종하는데 사용되었다. C57/B6 마우스는 도 2A에 나타낸 바와 같은 면역화 전략을 사용하여 면역화되었다. 일부 마우스는 다른 마우스가 pTyr로 면역화될 동안 pVax1로 면역화되었다. pTyr로 면역화된 마우스는 하기 군으로 추가로 분열되었다: (1) 5㎍ 투여량의 pTyr; (2) 20㎍ 투여량 pTyr; (3) 30㎍ 투여량의 pTyr; 및 (4) 60㎍ 투여량의 pTyr.
면역화 전략의 35일째에, 비장세포는 C57B/6 마우스로부터 단리되었고 IFN-γ ELISpot 분석에 의하여 인터페론-γ(IFN-γ)의 유도에 대하여 평가되었다. 도 2B에 나타낸 바와 같이, pTyr의 20㎍ 투여량은 IFN-γ를 가장 높은 수준을 유도하였다.
pTyr에 대한 세포성 면역 반응은 면역화된 Balb/c 및 C57B/6 마우스에서 추가로 평가되었다. 마우스는 pVax1 또는 pTyr로 면역화되었다. 비장세포는 제3 면역화 후 2주에 단리되었으며, 공통 Tyr 펩타이드로 자극되었다. 자극 후, IFN-γ 분비 비장세포의 수가 3부의 자극제 웰에서의 스팟의 평균 수로서 계수되었다. 이러한 검정은 C57/B6 마우스가 pTyr 백신접종에 적절하다는 것을 나타내었다(데이터 제시 생략).
실시예 3
pTyr 백신접종이 사이토카인 IFN-γ및 TNF-α를 증가시켰다
사이토카인 생성은 pTyr 및 pVax1로 면역화된 마우스에서 관찰되었다. 마우스는 도 2A에 나타낸 바와 같은 면역화 전략을 사용하여 면역화되었다. 면역화 전략의 35일째에, 면역화된 마우스로부터 단리된 세포는 Tyr 펩타이드로 밤새 자극되었다. 자극 후, 다기능 반응의 분석은 FACS에 의하여 측정되었다. 특히, 상기 분석은 CD8+ 및 CD4+ T 세포를 관찰하였다. FACS는 사이토카인 IL-2, TNF-α 및 IFN-γ에 대하여 양성인 T 세포의 식별을 허용하였다. CD44 hi 세포 중에서, pVax1로 면역화된 마우스와 비교하여, pTyr로 면역화된 마우스에서 유의미한 백분율의 CD8+ T 세포가 생성되었다(도 3).
실시예 4
Tyr 특이적 항체는 pTyr 백신접종에 대응하여 생성된다
체액성 면역 반응이 pTyr로 백신접종된 마우스에서 관찰되었다. 특히, C57BI/6 마우스(n=4)는 pTyr 또는 pVax1로 2주 간격으로 3회 면역화시켰다. 각 면역화는 20㎍/근육내 주사 이후 MID-EP로의 전기천공으로 구성되었다. 제3 면역화(즉, 35일째) 후, 혈청은 마우스로부터 수집되었고, 항체 역가는 2차 항체로 표지된 총 IgG-특이적 HRP를 사용한 ELISA에 의하여 측정되었다. 혈청은 도 4A에 나타낸 바와 같이 희석되었다. 도 4A에 나타낸 바와 같이, Tyr에 대한 특이적 항체는 pTyr로 면역화된 마우스에 의하여 생성되었다. pTyr로 면역화된 마우스는 도 4A에서 안이 채워진 원으로 대표되고, 한편 pVax1로 면역화된 마우스는 도 4A에서 안이 채워지지 않은 삼각형으로 대표된다.
추가적으로, 면역화된 마우스로부터의 혈청은 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320, 및 1:640으로 연속으로 희석되었다. 각 혈청 희석은 Tyr 펩타이드를 함유하는 개별 웰(50㎕/웰)에 세 벌로 부가되었다. 면역전 혈청과 비교하여, Tyr-특이적 역가의 가장 높은 증가는, 재검사 90 및 120일째에 마우스의 모든 면역화된 군에 대해 검출되었다. 각 연속 희석 지점에서 3개의 독립 실험에 대한 대표 결과는 도 4b에 나타낸다. 이러한 데이터는 추가로, pTyr로의 면역화가 pTyr로 면역화된 마우스에서 Tyr 특이적 항체의 생성을 유도하였다는 것을 나타냈다.
실시예 5
pTyr로 백신접종된 마우스는 종양 시험감염에 대한 생존을 증가시켰다
pTry는 추가로, pTyr 백신접종이 종양으로부터 예방을 제공할 수 있는지를 결정하기 위하여 분석되었다. 특히, C57BI/6 마우스(군당 10마리)는 pTyr 또는 pVax1로 2주 간격으로 면역화되었다. 각 면역화는 20㎍/근육내 주사 이후MID-EP로의 전기천공으로 구성되었다. 제3 면역화(즉, 35일째) 1주 후, 면역화된 마우스는 종양 직경이 200㎟를 초과할 때까지 B16 흑색종으로 피내 유발되었다.
이후, 무종양 생존 및 종양 용적은마우스의 면역화된 군에서 평가되었다. 도 5A(카플란-마이어 생존 곡선)에 나타낸 바와 같이, pTyr로 면역화된 마우스는, 종양 시험감염 20일 후 모두 사망하였던 pVax1(p=0.05)로 백신접종된 마우스와 비교하여, 무종양 생존에서 개선(즉, 40일째에 및 종양 시험감염 후 40%)되었다. pVax1로 면역화된 마우스와 비교하여, pTyr로 면역화된 마우스는 또한 종양 용적을 감소시켰다(즉, 약 50%)(도 5A). 도 5A 및 도 5B 둘 다에 대하여, pVax1로 면역화된 마우스는 안이 채워진 사각형으로 대표되고, 한편 pTyr로 면역화된 마우스는 안이 채워진 원으로 대표된다. 따라서, 이러한 데이터는 pTyr 백신접종이 흑색종에 대한 예방, 즉 증가된 무종양 생존 및 종양 용적의 감소를 제공하였음을 나타내었다.
실시예 6
MDSC 집단은 pTyr로 백신접종된 마우스로부터의 종양에서 감소된다
MDSC 집단은, pTyr로의 백신접종이 마우스의 각 군으로부터의 종양에서 MDSC의 수준을 변경하였는지의 여부를 관찰하기 위하여 pTyr로 면역화된 마우스 및 비-면역화된 마우스에서 관찰되었다. 특히, Gr-1+ 및 CD11b+ 세포의 백분율은 면역화된, 그리고 비-면역화된 마우스에서 관찰되었다.
도 6 및 도 7에 나타낸 바와 같이, 비-면역화된 마우스(p=0.0004)와 비교하여, pTyr로 면역화된 마우스로부터의 종양 내에서 MDSC 수준은 뚜렷하게 감소하였다. 비-면역화된 마우스에서의 MDSC 집단의 백분율은 40.00 ± 4.826였다. 면역화된 마우스에서의 MDSC 집단의 백분율은 5.103 ± 0.7718였다. 따라서, 이러한 데이터는 pTyr로의 면역화가 pTyr로 백신접종된 마우스의 종양 내에서 MDSC 집단을 감소시켰다는 것을 나타내었다.
실시예 7
MCP-1 수준은 pTyr 백신접종에 의하여 감소된다
MDSC는사이토카인 MCP-1을 분비할 수 있으며, 이는 내피 세포의 이주에 의한 혈관형성 또는 혈관신생을 촉진시킨다. 종양에서의 MDSC 수준 상의 pTyr 백신접종의 위에서 기술된 효과를 근거하여, pTyr로의 백신접종 후 MCP-1 수준이 관찰되었다.
도 8A에 나타낸 바와 같이, B16 흑색종 내의 MDSC는 MCP-1를 분비할 수 있다. 따라서, pTyr로 면역화된 마우스 및 pVax1로 면역화된 마우스는 pTyr 면역화가 MCP-1 수준을 변경하였는지의 여부를 관찰하기 위하여 B16 흑색종으로 유발되었다. 비처리 마우스는 추가적인 대조군으로서 포함되었다. 유발 후, MDSC는 종양 조직으로부터 직접적으로 단리되었고, MCP-1 사이토카인 수준은 ELISA에 의하여 분석되었다. 실험은 세 벌로 수행되었고, 2번 반복되었다.
도 8B에 나타낸 바와 같이, B16 흑색종 또는 종양 조직 내의 MDSC는 MCP-1를 뚜렷하게 분비하였다(pVax1 면역화된 마우스 참고). pTyr로 면역화된 마우스는, 그러나, MCP-1 수준이 뚜렷하게 증가하지 않았다. 대신, pTyr로 면역화된 마우스에서의 MCP-1 수준은 pVax1로 면역화된 마우스보다 약 3배 낮았다. 따라서, 이러한 데이터는 pTyr로의 면역화가 pTyr로 백신접종된 마우스의 종양 내에서 MDSC에 MCP-1 분비 수준을 감소시켰다는 것을 나타내었다.
실시예 8
pPRAME의 구성
공통 서열은 PRAME에 대하여 생성되었고, 공통 PRAME 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 발현 벡터 또는 플라스미드 pVAX(또한 본 명세서에서 pVAX1로 알려짐)의 BamHI 및 XhoI 제한 효소 부위로 삽입되어 pGX1411(또한 본 명세서에서 pPRAME으로 알려짐)을 생성하였다(도 10A 참고).
pPRAME이 결과로 공통 PRAME 항원의 발현을 야기하는지 확인하기 위하여, pVAX 및 pPRAME은 RD 세포 및 293T 세포로 형질감염되었다. DAPI는 핵 염색에 사용되었고, 공통 PRAME 항원은 또한 형광으로 염색되었다. 이러한 염색은, DAPI 및 공통 PRAME 항원 염색의 병합과 함께, 도 10B에 나타낸다. 이러한 염색은 PRAME 공통 항원은 pPRAME 으로부터 발현되었고, 어떤 공통 PRAME 항원도 pVAX로 형질감염된 세포(즉, 음성 대조군)에서 검출되지 않았다는 것을 도시한다.
추가적으로, 형질감염된 세포로부터의 용해물의 웨스턴 블롯팅 분석은 형질감염된 세포에서 공통 PRAME 항원의 발현을 확인하기 위하여 사용되었다(도 10C). 비-형질감염된 세포 및 pVAX 로 형질감염된 세포는 음성 대조군으로 사용되었다(도 10C에서 각각 "대조군" 및 "pVAX"로 표지된 레인(lane 참고). 도 10C에서, 베타-액틴 검출은 로딩 대조군(loading control)으로서 사용되었다. 요약하여, 형질감염된 세포의 염색 및 형질감염된 세포로부터의 용해물의 웨스턴 블롯팅은 벡터 pPRAME이 세포내 공통 PRAME 항원의 발현을 제공하였다는 것을 도시하였다.
실시예 9
pPRAME으로의 백신접종에 대응하는 인터페론 감마
위에서 기술된 pPRAME은 pPRAME에 의하여 세포성 면역 반응이 야기되었는지를 평가하기 위하여 마우스를 백신접종하는데 사용되었다. C57BL/6 마우스는 군으로 분리되었다. 제1 군은 비처리되었고, pPRAME을 수용하지 않았다. 마우스의 제2, 제3, 제4, 제5, 및 제5 군은 각각 pPRAME의 5㎍, 10㎍, 15㎍, 25㎍ 및 50㎍를 수용하였다.
면역화 후, 비장세포는 C57BL/6 마우스로부터 단리되었고 IFN-γ ELISpot 분석에 의하여 인터페론-감마(IFN-γ)의 유도에 대하여 평가되었다. 도 11A 및 도 11B에 나타낸 바와 같이, pPRAME의 각 용량은, 음성 대조군 비처리 마우스와 달리, IFN-γ의 생성 또는 분비를 유도하였다. 특히, IFN-γ수준은 비-백신접종된 마우스와 비교하여 백신접종된 마우스에서 약 3000배 내지 약 4500배만큼 증가하였다. 따라서, 이러한 데이터는 공통 PRAME 항원을 암호화하는 pPRAME으로의 백신접종이 비-백신접종과 비교하여 증가된 IFN-γ수준으로서 증명된 바와 같이 세포성 면역 반응을 유도하였다는 것을 도시하였다.
실시예 10
pNY-ESO-1의 구성
공통 서열은 NY-ESO-1에 대하여 생성되었고, 공통 NY-ESO-1 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 발현 벡터 또는 플라스미드 pVAX(또한 본 명세서에서 pVAX1로 알려짐)의 BamHI 및 XhoI 제한 효소 부위로 삽입되어 pGX1409(또한 본 명세서에서 pNY-ESO-1로 알려짐)을 생성하였다(도 12A 참고).
pNY-ESO-1이 결과로 공통 NY-ESO-1 항원의 발현을 야기하는지 확인하기 위하여, pVAX 및 pNY-ESO-1은 세포로 형질감염되었다. DAPI는 핵 염색에 사용되었고, 공통 NY-ESO-1 항원은 또한 형광으로 염색되었다. 이러한 염색은, DAPI 및 공통 NY-ESO-1 항원 염색의 병합과 함께, 도 12B에 나타낸다. 이러한 염색은 NY-ESO-1 공통 항원은 pNY-ESO-1로부터 발현되었고, 어떤 공통 NY-ESO-1 항원도 pVAX로 형질감염된 세포(즉, 음성 대조군)에서 검출되지 않았다는 것을 도시한다.
추가적으로, 293T 및 RD형질감염된 세포로부터의 용해물의 웨스턴 블롯팅 분석은 형질감염된 세포에서 공통 NY-ESO-1 항원의 발현을 확인하기 위하여 사용되었다(도 12C). 비-형질감염된 세포 및 pVAX 로 형질감염된 세포는 음성 대조군으로 사용되었다(도 12C에서 각각 "대조군" 및 "pVAX"로 표지된 레인 참고). 도 12C에서, 베타-액틴 검출은 로딩 대조군(loading control)으로서 사용되었다. 요약하여, 형질감염된 세포의 염색 및 형질감염된 세포로부터의 용해물의 웨스턴 블롯팅은 벡터 pNY-ESO-1이 세포내 공통 NY-ESO-1 항원의 발현을 제공하였다는 것을 도시하였다.
실시예 11
pNY-ESO-1로의 백신접종에 대응하는 인터페론 감마
위에서 기술된 pNY-ESO-1은 pNY-ESO-1에 의하여 세포성 면역 반응이 야기되었는지를 평가하기 위하여 마우스를 백신접종하는데 사용되었다. C57BL/6 마우스는 군으로 분리되었다. 제1 군은 비처리되었고, pNY-ESO-1을 수용하지 않았다. 마우스의 제2 및 제3 군은 각각 pNY-ESO-1의 25㎍ 및 50㎍을 수용하였다.
면역화 후, 비장세포는 C57B/6 마우스로부터 단리되었고 IFN-γ ELISpot 분석에 의하여 인터페론-감마(IFN-γ)의 유도에 대하여 평가되었다. 도 13에 나타낸 바와 같이, pPRAME의 각 용량은, 음성 대조군 비처리 마우스와 달리, IFN-γ의 생성 또는 분비를 유도하였다. 특히, IFN-γ 수준은 비-백신접종된 마우스와 비교하여 백신접종된 마우스에서 약 700배 내지 약 1100배만큼 증가하였다. 따라서, 이러한 데이터는 공통 NY-ESO-1 항원을 암호화하는 pNY-ESO-1로의 백신접종이 비-백신접종과 비교하여 증가된 IFN-γ 수준으로서 증명된 바와 같이 세포성 면역 반응을 유도하였다는 것을 도시하였다.
실시예 12
pNY-ESO-2 백신접종에 대한 인터페론 감마 반응
공통 서열은 NY-ESO-2에 대하여 생성되었고, 공통 NY-ESO-2 항원을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 발현 벡터 또는 플라스미드 pVAX(또한 본 명세서에서 pVAX1로 알려짐)의 다중 클로닝 부위로 삽입되어 pNY-ESO-2를 생성하였다.
이 pNY-ESO-2는 pNY-ESO-2에 의하여 세포성 면역 반응이 야기되었는지를 평가하기 위하여 마우스를 백신접종하는데 사용되었다. C57BL/6 마우스는 군으로 분리되었다. 제1 군은 비처리되었고, pNY-ESO-2를 수용하지 않았다. 마우스의 제2 및 제3 군은 각각 pNY-ESO-2의 25 ㎍ 및 50 ㎍을 수용하였다.
면역화 후, 비장세포는 C57B/6 마우스로부터 단리되었고 IFN-γ ELISpot 분석에 의하여 인터페론-감마(IFN-γ)의 유도에 대하여 평가되었다. 도 14에 나타낸 바와 같이, pNY-ESO-2의 각 용량은, 음성 대조군 비처리 마우스와 달리, IFN-γ의 생성 또는 분비를 유도하였다. 특히, IFN-γ 수준은 비-백신접종된 마우스와 비교하여 백신접종된 마우스에서 약 400배 내지 약 500배만큼 증가하였다. 따라서, 이러한 데이터는 공통 pNY-ESO-2 항원을 암호화하는 NY-ESO-2 백신접종이 비-백신접종과 비교하여 증가된 IFN-γ 수준으로서 증명된바와 같이 세포성 면역 반응을 유도하였다는 것을 도시하였다.
상기 상세한 설명 및 동반 실시예는 단지 예시적인 것이며, 오로지 첨부된 특허청구범위 및 이들의 균등부에 의해 정의되는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 간주되어서는 안 된다는 것이 이해된다.
개시된 실시형태에 대한 다양한 변화 및 개질은 당분야 숙련가에게 자명할 것이다. 비제한적으로 본 발명의 화학적 구조, 치환체, 유도체, 중간체, 합성, 조성물, 제형 또는 이용 방법에 관한 것들을 포함하는 이러한 변화 및 개질이 발명의 요지 및 범위에서 벗어나지 않고 수행될 수 있다.
실시예 13
합성 공통 hTERT
본 명세서에서 제시된 실험은, 비-인간 영장류의 내성을 파괴하기 위하여 본 명세서에 기재된 방법을 이용해서 설계되고 제조된 합성 공통 hTERT의 능력을 평가하도록 설계되었다. 레서스 마카크 TERT에 대해서 대략 96% 동일한 합성 공통 hTERT(pGX1434)가 설계되었다. 레서스 마카크는 IL12 애주번트의 존재 하에 천연 RhTERT를 암호화하는 플라스미드 또는 합성 공통 hTERT를 암호화하는 플라스미드 중 어느 하나로 면역화되었다. 합성 공통 hTERT(pGX1434)을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 45에 의해 제공된다. 합성 공통 hTERT(pGX1434)의아미노산 서열은 서열번호 46에 의해 제공된다. 원숭이는 4회 면역화되었고, 세포성 면역 반응은 ELISpot 검정에 의해 평가되었다. 천연 RhTERT에 비해서, 합성 공통 hTERT에 의한 면역화가 더 강력한 면역 반응을 유발시킨 것(1200SFU/106 대 400 SFU/106)이 관찰되었다.
합성 공통 hTERT는 인간 TERT에 대해서 그의 기능을 파괴하는 5개의 돌연변이를 갖도록 설계되었다. 천연 RhTERT는 2개의 돌연변이를 가진 레서스 TERT를 암호화한다. 두 작제물이 최적화되었다. TERT 작제물의 개략적 설계는 도 16(상부)에 제공되어 있다. 도 16은 또한 인간, 레서스 및 마우스에서 동정된 천연 TERT와 최적화된 TERT 간에 상동성인 단백질을 나타낸다(도 16(하부)).
실험은 레서스 천연 펩타이드에 대해서 마우스 TERT-특이적 IFN-γ 반응을 특성규명하기 위하여 수행되었다. 마우스(n = 8/군)는 IM/전기천공을 통해서 천연 RhTERT 및 합성 공통 hTERT로 0, 2 및 4주에 면역화되었다. DNA 백신 면역화 스케줄은 도 17A에 도시되어 있다. 백신접종된 마우스로부터 분리된 백만개의 비장세포당 TERT-특이적 IFN-γ 스폿 형성 유닛(SFU)의 빈도는 레서스 펩타이드를 이용해서 IFN-γ ELISpot 검정에 의해 결정되었다. RhTERT 및 합성 공통 hTERT로 유발된 면역화가 강인한 세포성 면역 반응을 유발시킨 것이 관찰되었다(도 17B).
실험은 레서스 TERT-특이적 IFN-γ 반응을 특성규명하기 위하여 수행되었다. 레서스 마카크(n = 5/군)는 IM/전기천공을 통해서 rhIL-12뿐만 아니라 천연 RhTERT 또는 합성 공통 hTERT로 0, 4, 8 및 12주에 면역화되었다. DNA 백신 면역화 스케줄은 도 18A에 제공된다. 백신접종된 마우스로부터 단리된 백만개의 비장세포당 TERT-특이적 IFN-γ 스폿 형성 유닛(SFU)의 빈도는 천연 레서스 펩타이드 및 SynCon hTERT 펩타이드를 이용해서 IFN-γ ELISpot 검정에 의해 결정되었다. 합성 공통 hTERT는, RhTERT에 비해서, 비-인간 영장류에서 내성을 파괴하는 더 양호한 능력을 나타내는 것이 관찰되었다(도 18B 및 도 18C).
추가의 실험은 T 세포 반응 및 종양 성장에 대한 합성 공통 hTERT(pGX1434)의 효과를 평가하기 위하여 수행되었다. 마우스는 0, 20, 40 또는 60㎍의 pGX1434으로 2주 간격으로 3회 면역화되었다. 마우스에서의 T 세포 반응은 5주에 평가되었고, 이는 pGX1434가 강인한 T 세포 반응을 유도시킨 것을 입증하고 있다(도 19(좌측). 종양 성장을 평가하기 위하여, 마우스는 25 x 104 TC-1 세포로 이식하였다. 이어서, 마우스는 25㎍의 pGX1434로 1주 간격으로 4회 면역화되었다. 종양 용적은 32일에 걸쳐서 측정되었고, 이는 pGX1434로 처리된 마우스가 미경험 마우스에 비해서 감소된 종양 용적을 가진 것을 입증하고 있다(도 19(우측), 도 20 및 도 21).
여기에 제시된 실험은, 합성 공통 hTERT가 내성을 파괴하고 강력한 세포성 면역 반응을 유도하고 그리고 종양 성장을 저감시킬 수 있었음을 입증하고 있다. 합성 공통 hTERT는 내성을 파괴시키는 네오-항원-유사 면역 반응을 유발시키는 능력에 관하여 천연 자체-항원에 비해서 우수하다.
실시예 14
SynCon hTERT는 NHP에서 내성을 파괴한다
실험은 NHP +/- IL-12에서 pGX1434에 의해 유도된 면역 반응을 평가하고(도 22B, 제1군 및 제2군), Wave 1 항원 조합에서 pGX1434에 의해 유도된 면역 반응을 평가하기(도 22B, 제3군) 위하여 수행되었다. 실험은 또한, SynCon 설계가 내성을 파괴할 수 있는지의 여부를 결정하고(도 22B, 제4군) 그리고 NHP에서 내성을 파괴하는 SynCon hTERT의 능력을 평가하기(도 22B, 제1 내지 제4군) 위하여 설계되었다.
실험 설계는 도 22A에 제공되어 있다. 이들 실험에 이용된 제형은 다음과 같았다: 3.0㎎/1.0㎖ 20X SSC 중 작제물, 1㎖ 주입 용적으로.
이 실험으로부터의 결과는 도 23 내지 도 26에서 제공된다. 천연 레서스 TERT에 대한 반응은 pGX1434 + pGX6006군에서의 검출된 PD3 및 PD4였다(도 23). pGX1406은 0.20㎎ pGX6006을 가진 다가 Wave 1 제형된 경우 pGX1434에 비해서 더 강인한 TERT 반응을 유도한다(도 25). SynCon PSMA 및 SynCon WT-1 특이적 반응 PD4는 pGX1434 및 pGX1406을 함유하는 군과 유사하다.
WT-1, TERT, 및 PSMA의 다가 제형은 IFNγ ELISpot에 의해 그리고 CD8+ T 세포 구획 내에 있는 마우스에서 강인한 면역 반응을 유도하였고(도 27), WT1, PSMA 및 공통 mTERT의 조합에 의해 면역화된 마우스는 저감된 종양 부담 및 증가된 생존율을 나타내었다(도 28).
여기에서 제시된 실험은 합성 공통 hTERT가 내성을 파괴하여 비-인간 영장류에서 강력한 세포성 면역 반응을 유도할 수 있었음을 입증하고 있다.
실시예 15
서열
SEQUENCE LISTING
<110> Weiner, David
Yan, Jian
<120> TERT IMMUNOGENIC COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT USING THE
SAME
<130> WO 2018/064588
<140> PCT/US2017/054519
<141> 2017-09-29
<150> US 62/402,695
<151> 2016-09-30
<150> US 62/468,124
<151> 2017-03-07
<160> 70
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1608
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus Tyrosinase
<400> 1
atggattgga cttggatctt atttttagtt gctgctgcta ctagagttca ttctgactgg 60
acttggattc tgttcctggt cgccgccgct acccgagtgc attccgaaaa agagtgttgc 120
ccaccttggt ctggagatcg aagcccatgc ggacagctga gtgggcgggg atcatgtcag 180
aacatcctgc tgagcaatgc ccccctggga cctcagttcc ccttcaccgg cgtggacgat 240
agagagtctt ggcccagtgt cttttacaac aggacttgcc agtgtagcgg gaatttcatg 300
ggcttcaact gcggcaattg taagttcggc ttttgggggc caaactgcac cgagcggaga 360
ctgctggtga ggcgcaatat cttcgatctg tccgcccccg aaaaggacaa attctttgcc 420
tatctgaccc tggctaagca cacaattagc tccgattatg tcatccccat tggaacatac 480
ggccagatga aaaacggcag cactcctatg tttaacgata tcaatatcta cgacctgttc 540
gtgtggatgc attactatgt ctccatggac gctctgctgg gcgggtctga gatctggcgg 600
gacattgatt tcgcacacga agctccagca tttctgccct ggcataggct gttcctgctg 660
cgctgggagc aggaaatcca gaagctgact ggggacgaga actttaccat tccctattgg 720
gattggcggg acgccgagaa atgcgatatc tgtactgacg aatacatggg aggccagcac 780
cccaccaacc ctaatctgct gtcacctgcc agcttctttt ctagttggca gatcgtgtgc 840
agccggctgg aggaatacaa ctcccaccag agcctgtgca atgggactcc agagggacca 900
ctgcgacgaa accctggaaa tcatgataag agccgaaccc ctcgactgcc atcaagcgcc 960
gacgtggagt tttgcctgtc cctgacacag tatgaaagcg gcagcatgga taaagccgct 1020
aacttctctt ttaggaatac cctggaaggg ttcgcaagtc cactgacagg aatcgccgac 1080
gcttcacagt cctctatgca caacgctctg catatctaca tgaatggcac aatgtcacag 1140
gtgcagggga gcgcaaacga tcctatcttc ctgctgcacc atgccttcgt ggactccatt 1200
tttgagcagt ggctgagaag gcaccgccca ctgcaggagg tgtatcctga agcaaacgcc 1260
ccaatcggcc ataatcgcga atcttatatg gtccccttta tccctctgta ccgaaacgga 1320
gatttcttta ttagttcaaa ggatctgggc tacgactata gttacctgca ggacagcgat 1380
cctgactcct tccaggacta tatcaaatct tacctggagc aggcctctag aatttggagt 1440
tggctgctgg gagcagcaat ggtgggagct gtcctgaccg ctctgctggc aggactggtg 1500
tccctgctgt gccggcacaa gagaaaacag ctgcccgagg aaaagcagcc actgctgatg 1560
gaaaaagaag actaccactc actgctgtac cagacccacc tgtgataa 1608
<210> 2
<211> 517
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus Tyrosinase
<400> 2
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Glu Lys Glu Cys Cys Pro Pro Trp Ser Gly Asp Arg Ser Pro
20 25 30
Cys Gly Gln Leu Ser Gly Arg Gly Ser Cys Gln Asn Ile Leu Leu Ser
35 40 45
Asn Ala Pro Leu Gly Pro Gln Phe Pro Phe Thr Gly Val Asp Asp Arg
50 55 60
Glu Ser Trp Pro Ser Val Phe Tyr Asn Arg Thr Cys Gln Cys Ser Gly
65 70 75 80
Asn Phe Met Gly Phe Asn Cys Gly Asn Cys Lys Phe Gly Phe Trp Gly
85 90 95
Pro Asn Cys Thr Glu Arg Arg Leu Leu Val Arg Arg Asn Ile Phe Asp
100 105 110
Leu Ser Ala Pro Glu Lys Asp Lys Phe Phe Ala Tyr Leu Thr Leu Ala
115 120 125
Lys His Thr Ile Ser Ser Asp Tyr Val Ile Pro Ile Gly Thr Tyr Gly
130 135 140
Gln Met Lys Asn Gly Ser Thr Pro Met Phe Asn Asp Ile Asn Ile Tyr
145 150 155 160
Asp Leu Phe Val Trp Met His Tyr Tyr Val Ser Met Asp Ala Leu Leu
165 170 175
Gly Gly Ser Glu Ile Trp Arg Asp Ile Asp Phe Ala His Glu Ala Pro
180 185 190
Ala Phe Leu Pro Trp His Arg Leu Phe Leu Leu Arg Trp Glu Gln Glu
195 200 205
Ile Gln Lys Leu Thr Gly Asp Glu Asn Phe Thr Ile Pro Tyr Trp Asp
210 215 220
Trp Arg Asp Ala Glu Lys Cys Asp Ile Cys Thr Asp Glu Tyr Met Gly
225 230 235 240
Gly Gln His Pro Thr Asn Pro Asn Leu Leu Ser Pro Ala Ser Phe Phe
245 250 255
Ser Ser Trp Gln Ile Val Cys Ser Arg Leu Glu Glu Tyr Asn Ser His
260 265 270
Gln Ser Leu Cys Asn Gly Thr Pro Glu Gly Pro Leu Arg Arg Asn Pro
275 280 285
Gly Asn His Asp Lys Ser Arg Thr Pro Arg Leu Pro Ser Ser Ala Asp
290 295 300
Val Glu Phe Cys Leu Ser Leu Thr Gln Tyr Glu Ser Gly Ser Met Asp
305 310 315 320
Lys Ala Ala Asn Phe Ser Phe Arg Asn Thr Leu Glu Gly Phe Ala Ser
325 330 335
Pro Leu Thr Gly Ile Ala Asp Ala Ser Gln Ser Ser Met His Asn Ala
340 345 350
Leu His Ile Tyr Met Asn Gly Thr Met Ser Gln Val Gln Gly Ser Ala
355 360 365
Asn Asp Pro Ile Phe Leu Leu His His Ala Phe Val Asp Ser Ile Phe
370 375 380
Glu Gln Trp Leu Arg Arg His Arg Pro Leu Gln Glu Val Tyr Pro Glu
385 390 395 400
Ala Asn Ala Pro Ile Gly His Asn Arg Glu Ser Tyr Met Val Pro Phe
405 410 415
Ile Pro Leu Tyr Arg Asn Gly Asp Phe Phe Ile Ser Ser Lys Asp Leu
420 425 430
Gly Tyr Asp Tyr Ser Tyr Leu Gln Asp Ser Asp Pro Asp Ser Phe Gln
435 440 445
Asp Tyr Ile Lys Ser Tyr Leu Glu Gln Ala Ser Arg Ile Trp Ser Trp
450 455 460
Leu Leu Gly Ala Ala Met Val Gly Ala Val Leu Thr Ala Leu Leu Ala
465 470 475 480
Gly Leu Val Ser Leu Leu Cys Arg His Lys Arg Lys Gln Leu Pro Glu
485 490 495
Glu Lys Gln Pro Leu Leu Met Glu Lys Glu Asp Tyr His Ser Leu Leu
500 505 510
Tyr Gln Thr His Leu
515
<210> 3
<211> 1668
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus Tyrosinase-related protein 1
<400> 3
atggactgga cctggattct gttcctggtc gccgccgcaa cccgcgtgca ttcctctgcc 60
ccaaaactgc tgtctctggg atgtatcttc tttccactgc tgctgttcca gcaggcacgc 120
gcccagtttc cacgacagtg cgcaaccgtc gaggccctga ggagcgggat gtgctgtcca 180
gacctgtcac ccgtgagcgg acctggcaca gatcgctgcg gaagctcctc tgggcgggga 240
agatgtgagg ccgtgactgc tgactcacgg ccccacagcc ctcagtaccc acatgatggc 300
agggacgatc gcgaagtgtg gcccctgcga ttctttaacc ggacttgcca ctgtaacggc 360
aatttctccg ggcataattg cggaacctgt agacctggat ggaggggcgc cgcttgtgac 420
cagcgcgtgc tgatcgtccg gagaaacctg ctggatctgt ctaaggagga gaagaaccac 480
ttcgtccgag ctctggacat ggcaaagaga accacacatc ctctgtttgt gatcgccacc 540
aggcgcagcg aggaaattct ggggccagat ggaaacacac cccagttcga gaacatctca 600
atctacaatt atttcgtgtg gacccactac tatagcgtca agaaaacatt cctgggcgtg 660
gggcaggaga gtttcggaga agtggacttt tcacatgagg gccccgcttt tctgacatgg 720
caccggtacc atctgctgag actggaaaag gatatgcagg agatgctgca ggaacctagt 780
ttctcactgc catattggaa ctttgcaaca ggaaaaaacg tgtgcgacat ctgtactgac 840
gatctgatgg gcagcagatc caacttcgat tctacactga tttccccaaa tagcgtgttc 900
agccagtgga gggtggtctg cgactccctg gaggactacg ataccctggg caccctgtgc 960
aattctactg aagatgggcc catccgacgg aaccctgccg gaaatgtggc taggccaatg 1020
gtccagcgcc tgcctgagcc acaggacgtg gcccagtgcc tggaagtcgg cctgttcgat 1080
actccccctt tttattctaa cagtacaaac tctttccgca acactgtcga gggctacagt 1140
gaccctaccg ggaaatatga tccagccgtg cggagtctgc acaacctggc tcatctgttc 1200
ctgaatggaa ctggcgggca gacccacctg tccccaaatg accctatttt tgtcctgctg 1260
catactttca ccgacgccgt gtttgatgag tggctgagaa ggtacaacgc agatatcagc 1320
acctttccac tggaaaatgc ccccattggc cacaaccggc agtataatat ggtgcctttc 1380
tggccacccg tcacaaacac tgagatgttt gtgactgctc cagacaatct ggggtacacc 1440
tatgaaatcc agtggccctc cagagagttc tctgtgcctg aaatcattgc tattgcagtg 1500
gtcggcgcac tgctgctggt ggccctgatc tttgggaccg ctagctacct gattagggca 1560
cgccgatcca tggacgaggc caaccagccc ctgctgacag atcagtacca gtgctatgcc 1620
gaagagtatg aaaagctgca gaaccctaac cagtccgtcg tgtgataa 1668
<210> 4
<211> 554
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus Tyrosinase-related protein 1
<400> 4
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Ser Ala Pro Lys Leu Leu Ser Leu Gly Cys Ile Phe Phe Pro
20 25 30
Leu Leu Leu Phe Gln Gln Ala Arg Ala Gln Phe Pro Arg Gln Cys Ala
35 40 45
Thr Val Glu Ala Leu Arg Ser Gly Met Cys Cys Pro Asp Leu Ser Pro
50 55 60
Val Ser Gly Pro Gly Thr Asp Arg Cys Gly Ser Ser Ser Gly Arg Gly
65 70 75 80
Arg Cys Glu Ala Val Thr Ala Asp Ser Arg Pro His Ser Pro Gln Tyr
85 90 95
Pro His Asp Gly Arg Asp Asp Arg Glu Val Trp Pro Leu Arg Phe Phe
100 105 110
Asn Arg Thr Cys His Cys Asn Gly Asn Phe Ser Gly His Asn Cys Gly
115 120 125
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Arg Gly Ala Ala Cys Asp Gln Arg Val Leu
130 135 140
Ile Val Arg Arg Asn Leu Leu Asp Leu Ser Lys Glu Glu Lys Asn His
145 150 155 160
Phe Val Arg Ala Leu Asp Met Ala Lys Arg Thr Thr His Pro Leu Phe
165 170 175
Val Ile Ala Thr Arg Arg Ser Glu Glu Ile Leu Gly Pro Asp Gly Asn
180 185 190
Thr Pro Gln Phe Glu Asn Ile Ser Ile Tyr Asn Tyr Phe Val Trp Thr
195 200 205
His Tyr Tyr Ser Val Lys Lys Thr Phe Leu Gly Val Gly Gln Glu Ser
210 215 220
Phe Gly Glu Val Asp Phe Ser His Glu Gly Pro Ala Phe Leu Thr Trp
225 230 235 240
His Arg Tyr His Leu Leu Arg Leu Glu Lys Asp Met Gln Glu Met Leu
245 250 255
Gln Glu Pro Ser Phe Ser Leu Pro Tyr Trp Asn Phe Ala Thr Gly Lys
260 265 270
Asn Val Cys Asp Ile Cys Thr Asp Asp Leu Met Gly Ser Arg Ser Asn
275 280 285
Phe Asp Ser Thr Leu Ile Ser Pro Asn Ser Val Phe Ser Gln Trp Arg
290 295 300
Val Val Cys Asp Ser Leu Glu Asp Tyr Asp Thr Leu Gly Thr Leu Cys
305 310 315 320
Asn Ser Thr Glu Asp Gly Pro Ile Arg Arg Asn Pro Ala Gly Asn Val
325 330 335
Ala Arg Pro Met Val Gln Arg Leu Pro Glu Pro Gln Asp Val Ala Gln
340 345 350
Cys Leu Glu Val Gly Leu Phe Asp Thr Pro Pro Phe Tyr Ser Asn Ser
355 360 365
Thr Asn Ser Phe Arg Asn Thr Val Glu Gly Tyr Ser Asp Pro Thr Gly
370 375 380
Lys Tyr Asp Pro Ala Val Arg Ser Leu His Asn Leu Ala His Leu Phe
385 390 395 400
Leu Asn Gly Thr Gly Gly Gln Thr His Leu Ser Pro Asn Asp Pro Ile
405 410 415
Phe Val Leu Leu His Thr Phe Thr Asp Ala Val Phe Asp Glu Trp Leu
420 425 430
Arg Arg Tyr Asn Ala Asp Ile Ser Thr Phe Pro Leu Glu Asn Ala Pro
435 440 445
Ile Gly His Asn Arg Gln Tyr Asn Met Val Pro Phe Trp Pro Pro Val
450 455 460
Thr Asn Thr Glu Met Phe Val Thr Ala Pro Asp Asn Leu Gly Tyr Thr
465 470 475 480
Tyr Glu Ile Gln Trp Pro Ser Arg Glu Phe Ser Val Pro Glu Ile Ile
485 490 495
Ala Ile Ala Val Val Gly Ala Leu Leu Leu Val Ala Leu Ile Phe Gly
500 505 510
Thr Ala Ser Tyr Leu Ile Arg Ala Arg Arg Ser Met Asp Glu Ala Asn
515 520 525
Gln Pro Leu Leu Thr Asp Gln Tyr Gln Cys Tyr Ala Glu Glu Tyr Glu
530 535 540
Lys Leu Gln Asn Pro Asn Gln Ser Val Val
545 550
<210> 5
<211> 1614
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus Tyrosinase-related protein 2
<400> 5
atggactgga cctggattct gttcctggtc gccgctgcta cccgcgtgca ttcatctcct 60
ctgtggtggg gatttctgct gtcttgcctg ggatgcaaga tcctgccagg agcacaggga 120
cagttccccc gggtgtgcat gaccgtcgac tctctggtga acaaagagtg ctgtcctagg 180
ctgggagccg aaagcgccaa cgtgtgcggc tcccagcagg gacgaggaca gtgtactgag 240
gtgcgcgcag atacccgacc atggagtgga ccctacattc tgaggaacca ggacgatcgc 300
gaactgtggc cccgaaagtt ctttcaccgg acatgcaaat gtactggaaa cttcgccggc 360
tataattgcg gggactgtaa gtttggctgg accgggccca actgcgagag aaagaaaccc 420
cctgtgatca ggcagaatat tcattctctg agtcctcagg agcgggaaca gttcctgggc 480
gcactggacc tggccaagaa aagagtccac ccagattacg tgatcaccac acagcattgg 540
ctgggactgc tgggccctaa cgggacacag ccacagtttg ccaattgctc cgtctatgac 600
ttcttcgtgt ggctgcacta ctattctgtg cgggatacac tgctgggacc aggccgaccc 660
taccgagcaa tcgacttcag ccatcaggga ccagcctttg tgacttggca cagatatcat 720
ctgctgtgcc tggagcggga tctgcagaga ctgattggca acgaatcctt cgctctgccc 780
tactggaact ttgcaaccgg gcggaatgag tgcgacgtgt gcacagatca gctgttcgga 840
gccgctagac ctgacgatcc aactctgatc tcaagaaata gcaggtttag ctcctgggag 900
accgtctgcg actctctgga cgattacaac cacctggtga ccctgtgcaa tggaacatat 960
gaaggcctgc tgcggagaaa ccagatgggc cgcaatagta tgaagctgcc caccctgaaa 1020
gacattcgag attgtctgtc actgcagaag ttcgacaacc cacccttctt tcagaattcc 1080
accttctctt ttaggaacgc cctggagggg tttgacaaag ctgatggaac actggatagt 1140
caggtcatgt cactgcacaa cctggtgcat tcattcctga acgggactaa tgccctgcct 1200
cacagcgcag ccaatgaccc aatctttgtg gtcctgcata gcttcaccga cgctattttt 1260
gatgagtgga tgaagaggtt caaccctcca gctgatgcat ggccccagga actggcacct 1320
atcggacaca accgcatgta caatatggtc cccttctttc cccctgtgac aaatgaggaa 1380
ctgtttctga cttctgacca gctgggctac agttatgcta ttgatctgcc cgtgagcgtc 1440
gaggaaacac ccgggtggcc tactaccctg ctggtggtca tgggcactct ggtggctctg 1500
gtcgggctgt tcgtgctgct ggcatttctg cagtataggc gcctgcgcaa aggatacacc 1560
ccactgatgg aaacccacct gtcctccaag agatacaccg aagaagcatg ataa 1614
<210> 6
<211> 536
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus Tyrosinase-related protein 2
<400> 6
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Ser Pro Leu Trp Trp Gly Phe Leu Leu Ser Cys Leu Gly Cys
20 25 30
Lys Ile Leu Pro Gly Ala Gln Gly Gln Phe Pro Arg Val Cys Met Thr
35 40 45
Val Asp Ser Leu Val Asn Lys Glu Cys Cys Pro Arg Leu Gly Ala Glu
50 55 60
Ser Ala Asn Val Cys Gly Ser Gln Gln Gly Arg Gly Gln Cys Thr Glu
65 70 75 80
Val Arg Ala Asp Thr Arg Pro Trp Ser Gly Pro Tyr Ile Leu Arg Asn
85 90 95
Gln Asp Asp Arg Glu Leu Trp Pro Arg Lys Phe Phe His Arg Thr Cys
100 105 110
Lys Cys Thr Gly Asn Phe Ala Gly Tyr Asn Cys Gly Asp Cys Lys Phe
115 120 125
Gly Trp Thr Gly Pro Asn Cys Glu Arg Lys Lys Pro Pro Val Ile Arg
130 135 140
Gln Asn Ile His Ser Leu Ser Pro Gln Glu Arg Glu Gln Phe Leu Gly
145 150 155 160
Ala Leu Asp Leu Ala Lys Lys Arg Val His Pro Asp Tyr Val Ile Thr
165 170 175
Thr Gln His Trp Leu Gly Leu Leu Gly Pro Asn Gly Thr Gln Pro Gln
180 185 190
Phe Ala Asn Cys Ser Val Tyr Asp Phe Phe Val Trp Leu His Tyr Tyr
195 200 205
Ser Val Arg Asp Thr Leu Leu Gly Pro Gly Arg Pro Tyr Arg Ala Ile
210 215 220
Asp Phe Ser His Gln Gly Pro Ala Phe Val Thr Trp His Arg Tyr His
225 230 235 240
Leu Leu Cys Leu Glu Arg Asp Leu Gln Arg Leu Ile Gly Asn Glu Ser
245 250 255
Phe Ala Leu Pro Tyr Trp Asn Phe Ala Thr Gly Arg Asn Glu Cys Asp
260 265 270
Val Cys Thr Asp Gln Leu Phe Gly Ala Ala Arg Pro Asp Asp Pro Thr
275 280 285
Leu Ile Ser Arg Asn Ser Arg Phe Ser Ser Trp Glu Thr Val Cys Asp
290 295 300
Ser Leu Asp Asp Tyr Asn His Leu Val Thr Leu Cys Asn Gly Thr Tyr
305 310 315 320
Glu Gly Leu Leu Arg Arg Asn Gln Met Gly Arg Asn Ser Met Lys Leu
325 330 335
Pro Thr Leu Lys Asp Ile Arg Asp Cys Leu Ser Leu Gln Lys Phe Asp
340 345 350
Asn Pro Pro Phe Phe Gln Asn Ser Thr Phe Ser Phe Arg Asn Ala Leu
355 360 365
Glu Gly Phe Asp Lys Ala Asp Gly Thr Leu Asp Ser Gln Val Met Ser
370 375 380
Leu His Asn Leu Val His Ser Phe Leu Asn Gly Thr Asn Ala Leu Pro
385 390 395 400
His Ser Ala Ala Asn Asp Pro Ile Phe Val Val Leu His Ser Phe Thr
405 410 415
Asp Ala Ile Phe Asp Glu Trp Met Lys Arg Phe Asn Pro Pro Ala Asp
420 425 430
Ala Trp Pro Gln Glu Leu Ala Pro Ile Gly His Asn Arg Met Tyr Asn
435 440 445
Met Val Pro Phe Phe Pro Pro Val Thr Asn Glu Glu Leu Phe Leu Thr
450 455 460
Ser Asp Gln Leu Gly Tyr Ser Tyr Ala Ile Asp Leu Pro Val Ser Val
465 470 475 480
Glu Glu Thr Pro Gly Trp Pro Thr Thr Leu Leu Val Val Met Gly Thr
485 490 495
Leu Val Ala Leu Val Gly Leu Phe Val Leu Leu Ala Phe Leu Gln Tyr
500 505 510
Arg Arg Leu Arg Lys Gly Tyr Thr Pro Leu Met Glu Thr His Leu Ser
515 520 525
Ser Lys Arg Tyr Thr Glu Glu Ala
530 535
<210> 7
<211> 1008
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus Melanoma-associated antigen 4
<400> 7
atggattgga catggattct gttcctggtc gccgccgcaa ctagagtgca ttcatcatca 60
gagcagaagt cacagcattg taaacctgag gaaggcgtcg aggctcagga ggaagcactg 120
ggactggtgg gagctcaggc accaaccaca gaggaacagg aggccgctgt gagctcctct 180
agtccactgg tccccggcac tctggaggaa gtgcctgcag cagagagcgc cggaccccct 240
cagagtccac agggagcctc agctctgccc actaccatca gcttcacatg ctggaggcag 300
cctaacgagg gctcaagctc ccaggaggaa gaggggcctt ctactagtcc agacgcagag 360
agcctgttcc gggaagccct gtccaataag gtggatgagc tggcccactt tctgctgcgg 420
aagtacagag ctaaagaact ggtcaccaaa gcagagatgc tggaacgagt gatcaagaac 480
tataaacggt gcttccctgt gatttttgga aaggcctcag agagcctgaa aatgatcttc 540
ggcattgacg tgaaggaagt cgatccagct tctaatacat acactctggt gacatgtctg 600
ggcctgagtt atgacggact gctgggcaac aatcagattt ttcccaaaac cgggctgctg 660
atcattgtgc tgggcacaat cgccatggag ggggattccg cttctgaaga ggaaatttgg 720
gaggaactgg gcgtgatggg agtctacgac gggcgcgagc acaccgtgta cggagaacca 780
cgaaagctgc tgacccagga ttgggtccag gagaactacc tggaatatcg gcaggtgccc 840
gggtccaatc ctgcaagata cgagtttctg tggggaccca gggcactggc cgagacatct 900
tatgtgaaag tcctggaaca tgtggtcagg gtgaacgctc gcgtgcgaat tgcctaccca 960
agcctgcgcg aagccgctct gctggaagaa gaggaaggag tgtgataa 1008
<210> 8
<211> 334
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus Melanoma-associated antigen 4
<400> 8
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Ser Ser Glu Gln Lys Ser Gln His Cys Lys Pro Glu Glu Gly
20 25 30
Val Glu Ala Gln Glu Glu Ala Leu Gly Leu Val Gly Ala Gln Ala Pro
35 40 45
Thr Thr Glu Glu Gln Glu Ala Ala Val Ser Ser Ser Ser Pro Leu Val
50 55 60
Pro Gly Thr Leu Glu Glu Val Pro Ala Ala Glu Ser Ala Gly Pro Pro
65 70 75 80
Gln Ser Pro Gln Gly Ala Ser Ala Leu Pro Thr Thr Ile Ser Phe Thr
85 90 95
Cys Trp Arg Gln Pro Asn Glu Gly Ser Ser Ser Gln Glu Glu Glu Gly
100 105 110
Pro Ser Thr Ser Pro Asp Ala Glu Ser Leu Phe Arg Glu Ala Leu Ser
115 120 125
Asn Lys Val Asp Glu Leu Ala His Phe Leu Leu Arg Lys Tyr Arg Ala
130 135 140
Lys Glu Leu Val Thr Lys Ala Glu Met Leu Glu Arg Val Ile Lys Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Arg Cys Phe Pro Val Ile Phe Gly Lys Ala Ser Glu Ser Leu
165 170 175
Lys Met Ile Phe Gly Ile Asp Val Lys Glu Val Asp Pro Ala Ser Asn
180 185 190
Thr Tyr Thr Leu Val Thr Cys Leu Gly Leu Ser Tyr Asp Gly Leu Leu
195 200 205
Gly Asn Asn Gln Ile Phe Pro Lys Thr Gly Leu Leu Ile Ile Val Leu
210 215 220
Gly Thr Ile Ala Met Glu Gly Asp Ser Ala Ser Glu Glu Glu Ile Trp
225 230 235 240
Glu Glu Leu Gly Val Met Gly Val Tyr Asp Gly Arg Glu His Thr Val
245 250 255
Tyr Gly Glu Pro Arg Lys Leu Leu Thr Gln Asp Trp Val Gln Glu Asn
260 265 270
Tyr Leu Glu Tyr Arg Gln Val Pro Gly Ser Asn Pro Ala Arg Tyr Glu
275 280 285
Phe Leu Trp Gly Pro Arg Ala Leu Ala Glu Thr Ser Tyr Val Lys Val
290 295 300
Leu Glu His Val Val Arg Val Asn Ala Arg Val Arg Ile Ala Tyr Pro
305 310 315 320
Ser Leu Arg Glu Ala Ala Leu Leu Glu Glu Glu Glu Gly Val
325 330
<210> 9
<211> 381
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus Growth hormone releasing hormone
<400> 9
atggactgga cctggattct gttcctggtg gctgccgcaa ctcgcgtgca ttctcctctg 60
tgggtgttct tctttgtgat tctgactctg tctaacagct cccactgcag tccccctcca 120
cccctgaccc tgcgaatgcg gagatacgcc gacgctatct tcacaaattc ctatagaaag 180
gtgctgggac agctgtctgc taggaaactg ctgcaggata ttatgtcacg ccagcagggc 240
gagagcaacc aggaacgagg cgcaagggcc cgactggggc ggcaggtcga cagcatgtgg 300
gccgagcaga agcagatgga actggaaagc atcctggtcg cactgctgca gaaacatagc 360
cgaaatagcc agggatgata a 381
<210> 10
<211> 125
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus Growth hormone releasing hormone
<400> 10
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Pro Leu Trp Val Phe Phe Phe Val Ile Leu Thr Leu Ser Asn
20 25 30
Ser Ser His Cys Ser Pro Pro Pro Pro Leu Thr Leu Arg Met Arg Arg
35 40 45
Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Asn Ser Tyr Arg Lys Val Leu Gly Gln
50 55 60
Leu Ser Ala Arg Lys Leu Leu Gln Asp Ile Met Ser Arg Gln Gln Gly
65 70 75 80
Glu Ser Asn Gln Glu Arg Gly Ala Arg Ala Arg Leu Gly Arg Gln Val
85 90 95
Asp Ser Met Trp Ala Glu Gln Lys Gln Met Glu Leu Glu Ser Ile Leu
100 105 110
Val Ala Leu Leu Gln Lys His Ser Arg Asn Ser Gln Gly
115 120 125
<210> 11
<211> 411
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus Melan-A
<400> 11
atggactgga catggattct gttcctggtc gctgctgcta caagggtgca ttccccacgg 60
gaggacgccc acttcatcta tggataccca aagaaaggcc acgggcattc ttacaccaca 120
gctgaggaag ccgctggaat cggcattctg acagtgatcc tgggggtcct gctgctgatt 180
ggatgctggt actgtcggag aaggaacggc tatagagcac tgatggacaa gagcctgcac 240
gtgggaactc agtgcgcact gacccgccga tgtccacagg agggattcga ccatcgggat 300
agcaaggtct ccctgcagga gaaaaattgc gaacccgtgg tccctaatgc cccacccgct 360
tacgaaaaac tgtccgcaga gcagagccca ccaccttatt caccttgata a 411
<210> 12
<211> 135
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus Melan-A
<400> 12
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Pro Arg Glu Asp Ala His Phe Ile Tyr Gly Tyr Pro Lys Lys
20 25 30
Gly His Gly His Ser Tyr Thr Thr Ala Glu Glu Ala Ala Gly Ile Gly
35 40 45
Ile Leu Thr Val Ile Leu Gly Val Leu Leu Leu Ile Gly Cys Trp Tyr
50 55 60
Cys Arg Arg Arg Asn Gly Tyr Arg Ala Leu Met Asp Lys Ser Leu His
65 70 75 80
Val Gly Thr Gln Cys Ala Leu Thr Arg Arg Cys Pro Gln Glu Gly Phe
85 90 95
Asp His Arg Asp Ser Lys Val Ser Leu Gln Glu Lys Asn Cys Glu Pro
100 105 110
Val Val Pro Asn Ala Pro Pro Ala Tyr Glu Lys Leu Ser Ala Glu Gln
115 120 125
Ser Pro Pro Pro Tyr Ser Pro
130 135
<210> 13
<211> 597
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus NY-ESO-1
<400> 13
atggactgga catggattct gtttctggtg gctgccgcaa ctagagtgca ttcacaggcc 60
gctggacagg gaactggagg ctcaaccgga gacgcagatg gccctggcgg gccaggggtg 120
cccgacggac ctggaggcaa cgctggggga cccggggagg ccggagctac aggcggggga 180
ggccctcagg gagccggcgc cgccagagcc agcggacccc ggggcggggc accccggggg 240
cctcacggcg gggcagcatc aggcctgaat ggatgctgtc gatgcggagc acggagacct 300
gagagcaggc tgctggaatt ctacctgact atgccttttg ccaccccaat ggaggcagaa 360
ctggcaaggc gctccctggc tcgggacgca ccccctctgc cagtgcccgg cgtcctgctg 420
aaggaattca ccgtctctgg caacatcctg accattaggc tgacagctgc agatcatcgc 480
cagctgcagc tgtctatcag ctcctgtctg cagcagctga gtctgctgat gtggattacc 540
cagtgctttc tgcccgtctt cctggctcag cctccttccg gacagcgccg atgataa 597
<210> 14
<211> 197
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus NY-ESO-1
<400> 14
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Gln Ala Ala Gly Gln Gly Thr Gly Gly Ser Thr Gly Asp Ala
20 25 30
Asp Gly Pro Gly Gly Pro Gly Val Pro Asp Gly Pro Gly Gly Asn Ala
35 40 45
Gly Gly Pro Gly Glu Ala Gly Ala Thr Gly Gly Gly Gly Pro Gln Gly
50 55 60
Ala Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Arg Gly Gly Ala Pro Arg Gly
65 70 75 80
Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Gly Leu Asn Gly Cys Cys Arg Cys Gly
85 90 95
Ala Arg Arg Pro Glu Ser Arg Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Thr Met Pro
100 105 110
Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Arg
115 120 125
Asp Ala Pro Pro Leu Pro Val Pro Gly Val Leu Leu Lys Glu Phe Thr
130 135 140
Val Ser Gly Asn Ile Leu Thr Ile Arg Leu Thr Ala Ala Asp His Arg
145 150 155 160
Gln Leu Gln Leu Ser Ile Ser Ser Cys Leu Gln Gln Leu Ser Leu Leu
165 170 175
Met Trp Ile Thr Gln Cys Phe Leu Pro Val Phe Leu Ala Gln Pro Pro
180 185 190
Ser Gly Gln Arg Arg
195
<210> 15
<211> 687
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus NY-ESO-2
<400> 15
atggactgga catggattct gtttctggtc gccgccgcaa cacgggtgca ttctcaggcc 60
gaggggcagg gaactggagg ctcaaccgga gacgcagatg gacctggcgg gccaggcatc 120
cccgacggac ctggaggcaa cgccggggga cctggggagg ccggagctac aggcgggaga 180
ggcccaaggg gcgcaggggc cgctagggcc agtggacccc gcggaggcgc cccacgaggc 240
ccacacgggg gagcagcctc cgcccaggac ggcagatgcc catgtggagc tcggagaccc 300
gattctaggc tgctgcagct gcatatcact atgcccttca gctcccctat ggaggctgaa 360
ctggtgaggc gcattctgtc ccgcgacgct gcacctctgc cacgaccagg ggccgtgctg 420
aaggatttca ccgtctcagg caatctgctg tttatgagcg tccgggacca ggatagagag 480
ggagcaggac gaatgcgagt ggtcggatgg ggactgggct ctgctagtcc tgaaggccag 540
aaagcacgcg atctgcgaac ccccaagcac aaagtgagcg agcagcgccc tggcacacca 600
gggccccctc cacccgaagg cgcccaggga gacggatgta gaggagtcgc cttcaatgtc 660
atgtttagtg caccccatat ttgataa 687
<210> 16
<211> 227
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus NY-ESO-2
<400> 16
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Gln Ala Glu Gly Gln Gly Thr Gly Gly Ser Thr Gly Asp Ala
20 25 30
Asp Gly Pro Gly Gly Pro Gly Ile Pro Asp Gly Pro Gly Gly Asn Ala
35 40 45
Gly Gly Pro Gly Glu Ala Gly Ala Thr Gly Gly Arg Gly Pro Arg Gly
50 55 60
Ala Gly Ala Ala Arg Ala Ser Gly Pro Arg Gly Gly Ala Pro Arg Gly
65 70 75 80
Pro His Gly Gly Ala Ala Ser Ala Gln Asp Gly Arg Cys Pro Cys Gly
85 90 95
Ala Arg Arg Pro Asp Ser Arg Leu Leu Gln Leu His Ile Thr Met Pro
100 105 110
Phe Ser Ser Pro Met Glu Ala Glu Leu Val Arg Arg Ile Leu Ser Arg
115 120 125
Asp Ala Ala Pro Leu Pro Arg Pro Gly Ala Val Leu Lys Asp Phe Thr
130 135 140
Val Ser Gly Asn Leu Leu Phe Met Ser Val Arg Asp Gln Asp Arg Glu
145 150 155 160
Gly Ala Gly Arg Met Arg Val Val Gly Trp Gly Leu Gly Ser Ala Ser
165 170 175
Pro Glu Gly Gln Lys Ala Arg Asp Leu Arg Thr Pro Lys His Lys Val
180 185 190
Ser Glu Gln Arg Pro Gly Thr Pro Gly Pro Pro Pro Pro Glu Gly Ala
195 200 205
Gln Gly Asp Gly Cys Arg Gly Val Ala Phe Asn Val Met Phe Ser Ala
210 215 220
Pro His Ile
225
<210> 17
<211> 1584
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus PRAME
<400> 17
atggactgga catggattct gttcctggtc gctgctgcta cacgggtgca ttcagagaga 60
cgaagactgc ggggctcaat tcagagtagg tacatcagta tgtcagtctg gacctcacca 120
cggagactgg tggaactggc cgggcagagc ctgctgaagg atgaggccct ggctattgcc 180
gctctggaac tgctgccccg agagctgttc cctcccctgt tcatggcagc cttcgacgga 240
cgccacagcc agactctgaa ggctatggtc caggcatggc cctttacctg cctgcctctg 300
ggcgtgctga tgaaggggca gcagctgcat ctggagactt tcaaagcagt gctggatggc 360
ctggacgtgc tgctggccca ggaagtgagg cctaggcgct ggaagctgga ggtcctggat 420
ctgcgcaaaa acagccacca ggacttttgg accgtgtggt ccgggaatcg ggccagtctg 480
tactcattcc cagaacccga ggctgcacag ccaatgcgga agaaaagaaa ggtggatgga 540
ctgtccaccg aagctgagca gccttttaca ccaatcgaag tgctggtcga tctgtccctg 600
aaagaaggcg catgcgacga gctgttctct tatctgatgg agaaggtcaa aagacagaag 660
aacgtgctgc acctgtgctg taagaaactg aaaatctttg ctatgcccat gcaggacatc 720
aagatgattc tgaaaatggt ccagctggat tccattgaag acctggaggt cacttgtacc 780
tggaagctgc caacactggc caaattctct ccctacctgg gacagatgat caatctgcga 840
cggctgctgc tgtctcacat ccatgctagc tcctctatta gtcctgagaa ggaggaagag 900
tacattgcac agtttacttc tcagttcctg agtctgcagt gcctgcaggc cctgtatgtg 960
gatagcctgt tctttctgag aggcaggctg gaccagctgc tgcgacacgt catgaacccc 1020
ctggaaacac tgagtgtgac taattgtaga ctgtcagagg gcgatgtgat gcatctgagc 1080
cagtccccta acgtgagcca gctgtccgtc ctgtctctga gtggcgtgat gctgacagac 1140
gtgagccctg aaccactgca ggccctgctg gagcgagcat ctgccactct gcaggacctg 1200
gattttgacg agtgtgggat catggacgat cagctgctgg tgctgctgcc ttcactgagc 1260
cactgctccc agctgaccac actgtctttc tgtgggaacc caatctccat ttctgtgctg 1320
cagaatctgc tgcaccatct gattggactg agcaacctga cccatgtgct gtaccccgtc 1380
cctctggaaa gctatgagga tgtgcacgga acactgcatc tgggcaggct ggcctatctg 1440
cacgctcgcc tgcgagaact gctgtgcgag ctgggcagac cctcaatggt gtggctgagc 1500
gccaatccat gtccccattg cggcgaccgg acattctacg accccgaacc tattctgtgc 1560
ccctgcttca tgcctaactg ataa 1584
<210> 18
<211> 526
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Consensus PRAME
<400> 18
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Glu Arg Arg Arg Leu Arg Gly Ser Ile Gln Ser Arg Tyr Ile
20 25 30
Ser Met Ser Val Trp Thr Ser Pro Arg Arg Leu Val Glu Leu Ala Gly
35 40 45
Gln Ser Leu Leu Lys Asp Glu Ala Leu Ala Ile Ala Ala Leu Glu Leu
50 55 60
Leu Pro Arg Glu Leu Phe Pro Pro Leu Phe Met Ala Ala Phe Asp Gly
65 70 75 80
Arg His Ser Gln Thr Leu Lys Ala Met Val Gln Ala Trp Pro Phe Thr
85 90 95
Cys Leu Pro Leu Gly Val Leu Met Lys Gly Gln Gln Leu His Leu Glu
100 105 110
Thr Phe Lys Ala Val Leu Asp Gly Leu Asp Val Leu Leu Ala Gln Glu
115 120 125
Val Arg Pro Arg Arg Trp Lys Leu Glu Val Leu Asp Leu Arg Lys Asn
130 135 140
Ser His Gln Asp Phe Trp Thr Val Trp Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu
145 150 155 160
Tyr Ser Phe Pro Glu Pro Glu Ala Ala Gln Pro Met Arg Lys Lys Arg
165 170 175
Lys Val Asp Gly Leu Ser Thr Glu Ala Glu Gln Pro Phe Thr Pro Ile
180 185 190
Glu Val Leu Val Asp Leu Ser Leu Lys Glu Gly Ala Cys Asp Glu Leu
195 200 205
Phe Ser Tyr Leu Met Glu Lys Val Lys Arg Gln Lys Asn Val Leu His
210 215 220
Leu Cys Cys Lys Lys Leu Lys Ile Phe Ala Met Pro Met Gln Asp Ile
225 230 235 240
Lys Met Ile Leu Lys Met Val Gln Leu Asp Ser Ile Glu Asp Leu Glu
245 250 255
Val Thr Cys Thr Trp Lys Leu Pro Thr Leu Ala Lys Phe Ser Pro Tyr
260 265 270
Leu Gly Gln Met Ile Asn Leu Arg Arg Leu Leu Leu Ser His Ile His
275 280 285
Ala Ser Ser Ser Ile Ser Pro Glu Lys Glu Glu Glu Tyr Ile Ala Gln
290 295 300
Phe Thr Ser Gln Phe Leu Ser Leu Gln Cys Leu Gln Ala Leu Tyr Val
305 310 315 320
Asp Ser Leu Phe Phe Leu Arg Gly Arg Leu Asp Gln Leu Leu Arg His
325 330 335
Val Met Asn Pro Leu Glu Thr Leu Ser Val Thr Asn Cys Arg Leu Ser
340 345 350
Glu Gly Asp Val Met His Leu Ser Gln Ser Pro Asn Val Ser Gln Leu
355 360 365
Ser Val Leu Ser Leu Ser Gly Val Met Leu Thr Asp Val Ser Pro Glu
370 375 380
Pro Leu Gln Ala Leu Leu Glu Arg Ala Ser Ala Thr Leu Gln Asp Leu
385 390 395 400
Asp Phe Asp Glu Cys Gly Ile Met Asp Asp Gln Leu Leu Val Leu Leu
405 410 415
Pro Ser Leu Ser His Cys Ser Gln Leu Thr Thr Leu Ser Phe Cys Gly
420 425 430
Asn Pro Ile Ser Ile Ser Val Leu Gln Asn Leu Leu His His Leu Ile
435 440 445
Gly Leu Ser Asn Leu Thr His Val Leu Tyr Pro Val Pro Leu Glu Ser
450 455 460
Tyr Glu Asp Val His Gly Thr Leu His Leu Gly Arg Leu Ala Tyr Leu
465 470 475 480
His Ala Arg Leu Arg Glu Leu Leu Cys Glu Leu Gly Arg Pro Ser Met
485 490 495
Val Trp Leu Ser Ala Asn Pro Cys Pro His Cys Gly Asp Arg Thr Phe
500 505 510
Tyr Asp Pro Glu Pro Ile Leu Cys Pro Cys Phe Met Pro Asn
515 520 525
<210> 19
<211> 1332
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Con WT1-L with modified Zinc Fingers nucleic acid sequence
<400> 19
ggatccgcca ccatggactg gacctggatt ctgttcctgg tcgccgccgc aacacgggtg 60
catagtggga gtgatgtgag agacctgaac gccctgctgc cagcagtgcc atccctgcct 120
ggcgggggag gctgcgctct gccagtctct ggagcagctc agtgggctcc cgtgctggac 180
tttgcacccc ctgcagcccc ttacggaagt ctgggcggcc cacactcatt catcaaacag 240
gagccaagct ggggcggggc agatcctcat gaggaacagt gcctgtcagc cttcacagtc 300
cactttagcg ggcagttcac tggaaccgca ggagcttgta gatacggacc ctttggagca 360
ccaccccctt cccaggcacc ttctggacag gcacgcatgt tcccaaacgc tccctatctg 420
cctaattgtc tggaaagcca gcccgctatt aggaaccagg gctactccac agtggcattt 480
gacgggactc ctagctatgg acatacccca tcccaccatg ctgcacagtt tcctaatcac 540
tccttcaagc atgaggaccc catgggacag caggggtccc tgggagaaca gcagtactct 600
gtgccccctc ccgtgtacgg atgccacaca ccaactgaca gttgtacagg ctcacaggcc 660
ctgctgctgc gaactccata caacagtgat aatctgtatc agatgacctc acagctggag 720
tgcatgacat ggaaccagat gaatctgggc agcacactga aaggccatgc cactgggtac 780
gaatctgaca accacaccac acctatgctg tacagttgtg gagcccagta tagaatccac 840
actcatggag tcttcagagg cattcaggat gtgcggagag tcccaggagt ggcaccaact 900
atcgtgcgga gcgcctccga gaccaacgaa aagcgcccct ttatgggcgc ctaccctgga 960
ggcaataagc ggtatttcaa actgtctcac ctgcagatgg ggagtagaaa ggggaccgga 1020
gagaaacctt atcagggcga ctttaaagat ggggaaaggc gcttctctcg cagtgaccag 1080
ctgaagcgag gacagcgacg aggaaccggg gtgaagccat ttcagtgcaa aacatgtcag 1140
agaaagttct caaggagcga tcacctgaag acccatacaa gaactcacac cggcaagacc 1200
agcgagaaac cattttcctg ccgatggccc tcttgtcaga agaaattcgc ccgctccgac 1260
gaactggtcc gacaccacaa tatgcatcag agaaatatga caaaactgca gctggctctg 1320
tgataactcg ag 1332
<210> 20
<211> 436
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Con WT1-L with modified Zinc Fingers protein sequence
<400> 20
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Gly Ser Asp Val Arg Asp Leu Asn Ala Leu Leu Pro Ala Val
20 25 30
Pro Ser Leu Pro Gly Gly Gly Gly Cys Ala Leu Pro Val Ser Gly Ala
35 40 45
Ala Gln Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Ala Ala Pro Tyr
50 55 60
Gly Ser Leu Gly Gly Pro His Ser Phe Ile Lys Gln Glu Pro Ser Trp
65 70 75 80
Gly Gly Ala Asp Pro His Glu Glu Gln Cys Leu Ser Ala Phe Thr Val
85 90 95
His Phe Ser Gly Gln Phe Thr Gly Thr Ala Gly Ala Cys Arg Tyr Gly
100 105 110
Pro Phe Gly Ala Pro Pro Pro Ser Gln Ala Pro Ser Gly Gln Ala Arg
115 120 125
Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Asn Cys Leu Glu Ser Gln Pro
130 135 140
Ala Ile Arg Asn Gln Gly Tyr Ser Thr Val Ala Phe Asp Gly Thr Pro
145 150 155 160
Ser Tyr Gly His Thr Pro Ser His His Ala Ala Gln Phe Pro Asn His
165 170 175
Ser Phe Lys His Glu Asp Pro Met Gly Gln Gln Gly Ser Leu Gly Glu
180 185 190
Gln Gln Tyr Ser Val Pro Pro Pro Val Tyr Gly Cys His Thr Pro Thr
195 200 205
Asp Ser Cys Thr Gly Ser Gln Ala Leu Leu Leu Arg Thr Pro Tyr Asn
210 215 220
Ser Asp Asn Leu Tyr Gln Met Thr Ser Gln Leu Glu Cys Met Thr Trp
225 230 235 240
Asn Gln Met Asn Leu Gly Ser Thr Leu Lys Gly His Ala Thr Gly Tyr
245 250 255
Glu Ser Asp Asn His Thr Thr Pro Met Leu Tyr Ser Cys Gly Ala Gln
260 265 270
Tyr Arg Ile His Thr His Gly Val Phe Arg Gly Ile Gln Asp Val Arg
275 280 285
Arg Val Pro Gly Val Ala Pro Thr Ile Val Arg Ser Ala Ser Glu Thr
290 295 300
Asn Glu Lys Arg Pro Phe Met Gly Ala Tyr Pro Gly Gly Asn Lys Arg
305 310 315 320
Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met Gly Ser Arg Lys Gly Thr Gly
325 330 335
Glu Lys Pro Tyr Gln Gly Asp Phe Lys Asp Gly Glu Arg Arg Phe Ser
340 345 350
Arg Ser Asp Gln Leu Lys Arg Gly Gln Arg Arg Gly Thr Gly Val Lys
355 360 365
Pro Phe Gln Cys Lys Thr Cys Gln Arg Lys Phe Ser Arg Ser Asp His
370 375 380
Leu Lys Thr His Thr Arg Thr His Thr Gly Lys Thr Ser Glu Lys Pro
385 390 395 400
Phe Ser Cys Arg Trp Pro Ser Cys Gln Lys Lys Phe Ala Arg Ser Asp
405 410 415
Glu Leu Val Arg His His Asn Met His Gln Arg Asn Met Thr Lys Leu
420 425 430
Gln Leu Ala Leu
435
<210> 21
<211> 954
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Con WT1-S without Zinc fingers nucleic acid sequence
<400> 21
ggatccgcca ccatggactg gacctggatt ctgtttctgg tggctgctgc tacacgggtg 60
cattctggga gcgatgtgag agacctgaac gccctgctgc cagctgtgcc aagtctgcct 120
ggcgggggag gctgcgcact gccagtgagc ggagcagctc agtgggctcc cgtcctggac 180
tttgcacccc ctgcagcacc ttacggctca ctgggcggcc cacacagctt catcaagcag 240
gagccatctt ggggcggggc cgatcctcac gaggaacagt gcctgagtgc tttcacagtg 300
catttttcag gccagttcac tggaaccgca ggagcttgtc gatacggacc ctttggagcc 360
ccacccccta gccaggcacc ttccggacag gccagaatgt tcccaaacgc tccctatctg 420
cctaattgtc tggaatcaca gcctgcaatt cggaaccagg gctacagcac cgtcgccttt 480
gacgggacac catcctatgg acacactccc tctcaccatg ctgcacagtt tcctaatcac 540
agcttcaagc atgaggaccc catgggacag caggggagcc tgggagaaca gcagtactcc 600
gtgccacccc ctgtctatgg ctgccataca ccaactgact cttgtacagg gagtcaggcc 660
ctgctgctgc gaactccata caactctgat aatctgtatc agatgactag tcagctggag 720
tgcatgacct ggaaccagat gaatctgggg tccaccctga aaggccacgc cacagggtat 780
gaatccgaca accataccac acccatgctg tactcttgtg gcgcccagta tagaatccac 840
acccatggag tgttccgcgg cattcaggat gtgcggagag tcccaggagt cgctcccacc 900
atcgtgagat ccgccagtga gaccaatgaa aagagaccct tctgataact cgag 954
<210> 22
<211> 310
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Con WT1-S without Zinc fingers protein sequence
<400> 22
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Gly Ser Asp Val Arg Asp Leu Asn Ala Leu Leu Pro Ala Val
20 25 30
Pro Ser Leu Pro Gly Gly Gly Gly Cys Ala Leu Pro Val Ser Gly Ala
35 40 45
Ala Gln Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Ala Ala Pro Tyr
50 55 60
Gly Ser Leu Gly Gly Pro His Ser Phe Ile Lys Gln Glu Pro Ser Trp
65 70 75 80
Gly Gly Ala Asp Pro His Glu Glu Gln Cys Leu Ser Ala Phe Thr Val
85 90 95
His Phe Ser Gly Gln Phe Thr Gly Thr Ala Gly Ala Cys Arg Tyr Gly
100 105 110
Pro Phe Gly Ala Pro Pro Pro Ser Gln Ala Pro Ser Gly Gln Ala Arg
115 120 125
Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Asn Cys Leu Glu Ser Gln Pro
130 135 140
Ala Ile Arg Asn Gln Gly Tyr Ser Thr Val Ala Phe Asp Gly Thr Pro
145 150 155 160
Ser Tyr Gly His Thr Pro Ser His His Ala Ala Gln Phe Pro Asn His
165 170 175
Ser Phe Lys His Glu Asp Pro Met Gly Gln Gln Gly Ser Leu Gly Glu
180 185 190
Gln Gln Tyr Ser Val Pro Pro Pro Val Tyr Gly Cys His Thr Pro Thr
195 200 205
Asp Ser Cys Thr Gly Ser Gln Ala Leu Leu Leu Arg Thr Pro Tyr Asn
210 215 220
Ser Asp Asn Leu Tyr Gln Met Thr Ser Gln Leu Glu Cys Met Thr Trp
225 230 235 240
Asn Gln Met Asn Leu Gly Ser Thr Leu Lys Gly His Ala Thr Gly Tyr
245 250 255
Glu Ser Asp Asn His Thr Thr Pro Met Leu Tyr Ser Cys Gly Ala Gln
260 265 270
Tyr Arg Ile His Thr His Gly Val Phe Arg Gly Ile Gln Asp Val Arg
275 280 285
Arg Val Pro Gly Val Ala Pro Thr Ile Val Arg Ser Ala Ser Glu Thr
290 295 300
Asn Glu Lys Arg Pro Phe
305 310
<210> 23
<211> 3447
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> hTERT
<400> 23
atggactgga cctggatcct gttcctggtg gccgctgcca caagagtgca cagccccagg 60
gcccccaggt gcagagccgt gcggagcctg ctgcggagcc actaccggga ggtgctgccc 120
ctggccacct tcgtgcggag gctgggccct caggggtggc ggctggtgca gagaggcgac 180
cctgccgcct tcagagccct ggtggcccag tgcctggtgt gcgtgccctg ggacgccaga 240
cctccccctg ccgcccctag cttccggcag gtgtcctgcc tgaaagaact ggtggcccgg 300
gtgctgcagc ggctgtgcga gaggggcgcc aagaacgtgc tggccttcgg cttcgccctg 360
ctggacggcg ccagaggcgg ccctcccgag gccttcacca cctccgtgag aagctacctg 420
cccaacaccg tgaccgacgc cctgagaggc agcggcgctt ggggcctgct gctgcgcaga 480
gtgggcgacg acgtgctggt gcacctgctg gccagatgcg ccctgttcgt gctggtcgcc 540
cccagctgcg cctaccaggt gtgcggccca cccctgtacc agctgggagc cgccacccag 600
gccagacccc ctcctcacgc ctccggcccc aggcggagac tgggctgcga gcgggcctgg 660
aaccacagcg tgcgggaggc cggcgtgccc ctgggcctgc cagcccctgg cgccagaaga 720
aggggcggca gcgccagcag aagcctgccc ctgcccaagc ggcccagacg cggagccgcc 780
cctgagcccg agagaacccc cgtgggccag ggctcttggg cccaccctgg ccggaccaga 840
ggccccagcg accggggctt ctgcgtggtg tcccccgcca gacccgccga ggaagccacc 900
tccctggaag gcgccctgag cggcaccagg cacagccacc ccagcgtggg ccgccagcac 960
cacgccggac cccccagcac ctccaggccc cccaggccct gggacacccc ttgcccccct 1020
gtgtacgccg agaccaagca cttcctgtac agcagcggcg acaaagagca gctgcggccc 1080
agcttcctgc tgtccagcct gaggccctcc ctgaccggcg ctaggcgcct ggtggagacc 1140
atctttctgg gcagccggcc ctggatgccc ggcaccccca ggcggctgcc caggctgccc 1200
cagcggtact ggcagatgag gcctctgttc ctggaactgc tgggcaacca cgcccagtgc 1260
ccctacggcg tgctgctgaa aacccactgc cccctgagag ccgccgtgac cccagccgcc 1320
ggagtgtgcg ccagagagaa gcctcagggc agcgtggccg ctcccgagga agaggacacc 1380
gaccccagac gcctggtgca gctgctgcgg cagcacagca gcccttggca ggtgtacggc 1440
ttcgtgcggg cctgcctgag aaggctggtg ccccctggcc tgtggggcag caggcacaac 1500
gagcggcggt ttctgcggaa caccaagaag ttcatcagcc tggggaagca cgccaagctg 1560
tccctgcagg aactgacctg gaagatgagc gtgcggggct gcgcctggct gagaagatcc 1620
cctggcgtgg gctgcgtgcc tgccgccgag caccggctgc gggaggaaat cctggccaag 1680
ttcctgcact ggctgatgag cgtgtacgtg gtggagctgc tgagatcctt cttctacgtg 1740
accgagacca ccttccagaa gaactacctg ttcttctacc ggaagagcgt gtggagcaag 1800
ctgcagagca tcggcatccg gcagcacctg aagcgggtgc agctgagaga gctgtccgag 1860
gccgaagtga ggcagcaccg ggaggccaga cctgccctgc tgaccagccg gctgcggttc 1920
atccccaagc ccgacggcct gcggcccatc gtgaacatgg actacgtggt gggcgccagg 1980
accttccggc gggagaagcg ggccgagcgg ctgacctcga gggtgaaggc cctgttcagc 2040
gtgctgaact acgagcgggc caggcggcca ggcctgctgg gcgccagcgt gctgggcctg 2100
gacgacatcc accgggcctg gcggaccttc gtgctgagag tgcgggccca ggacccccct 2160
cccgagctgt acttcgtgaa ggtggacgtg acaggcgcct acgacaccat cccccaggac 2220
cggctgaccg aggtgatcgc cagcatcatc aagccccaga acacctactg cgtgcggaga 2280
tacgccgtgg tgcagaaggc cgcccacggc cacgtgcgga aggccttcaa gagccacgtg 2340
agcaccctga ccgacctgca gccctacatg cggcagttcg tggcccacct gcaggaaacc 2400
agccccctgc gggatgccgt ggtgatcgag cagagcagca gcctgaacga ggccagcagc 2460
ggcctgttcg acgtgttcct gagattcatg tgccaccacg ccgtgcggat ccggggcaag 2520
agctacgtgc agtgccaggg catcccacag ggcagcatcc tgtccaccct gctgtgctcc 2580
ctgtgctacg gcgacatgga aaacaagctg ttcgccggca tcaggcggga cggactgctg 2640
ctgagactgg tggacgactt cctgctggtg accccccacc tgacccacgc caagaccttt 2700
ctgcggaccc tggtgcgcgg cgtgcccgag tacggctgcg tggtgaacct gagaaagacc 2760
gtggtgaact tccccgtgga ggacgaggcc ctgggcggca cagccttcgt gcagatgcct 2820
gcccatggac tgttcccttg gtgcgggctg ctgctggaca cccggaccct ggaagtgcag 2880
agcgactaca gcagctacgc ccggaccagc atccgggcct ccctgacctt caacaggggc 2940
ttcaaggccg gcaggaacat gcggcggaag ctgtttggcg tgctgcggct gaagtgccac 3000
agcctgtttc tgtacctgca ggtgaacagc ctgcagaccg tgtgcaccaa catctacaag 3060
atcctgctgc tgcaggccta ccggttccac gcctgcgtgc tgcagctgcc ctttcaccag 3120
caggtgtgga agaaccctac cttcttcctg cgggtgatca gcgacaccgc cagcctgtgc 3180
tacagcatcc tgaaggccaa gaacgccggc atgagcctgg gcgccaaggg agccgccgga 3240
cctctgccca gcgaggccgt gcagtggctg tgccaccagg cctttctgct gaagctgacc 3300
cggcaccggg tgacctacgt gcccctgctg ggcagcctgc ggaccgccca gacccagctg 3360
tcccggaagc tgcctggcac caccctgaca gccctggaag ccgccgccaa ccccgccctg 3420
ccctccgact tcaagaccat cctggac 3447
<210> 24
<211> 1149
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> hTERT
<400> 24
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Pro Arg Ala Pro Arg Cys Arg Ala Val Arg Ser Leu Leu Arg
20 25 30
Ser His Tyr Arg Glu Val Leu Pro Leu Ala Thr Phe Val Arg Arg Leu
35 40 45
Gly Pro Gln Gly Trp Arg Leu Val Gln Arg Gly Asp Pro Ala Ala Phe
50 55 60
Arg Ala Leu Val Ala Gln Cys Leu Val Cys Val Pro Trp Asp Ala Arg
65 70 75 80
Pro Pro Pro Ala Ala Pro Ser Phe Arg Gln Val Ser Cys Leu Lys Glu
85 90 95
Leu Val Ala Arg Val Leu Gln Arg Leu Cys Glu Arg Gly Ala Lys Asn
100 105 110
Val Leu Ala Phe Gly Phe Ala Leu Leu Asp Gly Ala Arg Gly Gly Pro
115 120 125
Pro Glu Ala Phe Thr Thr Ser Val Arg Ser Tyr Leu Pro Asn Thr Val
130 135 140
Thr Asp Ala Leu Arg Gly Ser Gly Ala Trp Gly Leu Leu Leu Arg Arg
145 150 155 160
Val Gly Asp Asp Val Leu Val His Leu Leu Ala Arg Cys Ala Leu Phe
165 170 175
Val Leu Val Ala Pro Ser Cys Ala Tyr Gln Val Cys Gly Pro Pro Leu
180 185 190
Tyr Gln Leu Gly Ala Ala Thr Gln Ala Arg Pro Pro Pro His Ala Ser
195 200 205
Gly Pro Arg Arg Arg Leu Gly Cys Glu Arg Ala Trp Asn His Ser Val
210 215 220
Arg Glu Ala Gly Val Pro Leu Gly Leu Pro Ala Pro Gly Ala Arg Arg
225 230 235 240
Arg Gly Gly Ser Ala Ser Arg Ser Leu Pro Leu Pro Lys Arg Pro Arg
245 250 255
Arg Gly Ala Ala Pro Glu Pro Glu Arg Thr Pro Val Gly Gln Gly Ser
260 265 270
Trp Ala His Pro Gly Arg Thr Arg Gly Pro Ser Asp Arg Gly Phe Cys
275 280 285
Val Val Ser Pro Ala Arg Pro Ala Glu Glu Ala Thr Ser Leu Glu Gly
290 295 300
Ala Leu Ser Gly Thr Arg His Ser His Pro Ser Val Gly Arg Gln His
305 310 315 320
His Ala Gly Pro Pro Ser Thr Ser Arg Pro Pro Arg Pro Trp Asp Thr
325 330 335
Pro Cys Pro Pro Val Tyr Ala Glu Thr Lys His Phe Leu Tyr Ser Ser
340 345 350
Gly Asp Lys Glu Gln Leu Arg Pro Ser Phe Leu Leu Ser Ser Leu Arg
355 360 365
Pro Ser Leu Thr Gly Ala Arg Arg Leu Val Glu Thr Ile Phe Leu Gly
370 375 380
Ser Arg Pro Trp Met Pro Gly Thr Pro Arg Arg Leu Pro Arg Leu Pro
385 390 395 400
Gln Arg Tyr Trp Gln Met Arg Pro Leu Phe Leu Glu Leu Leu Gly Asn
405 410 415
His Ala Gln Cys Pro Tyr Gly Val Leu Leu Lys Thr His Cys Pro Leu
420 425 430
Arg Ala Ala Val Thr Pro Ala Ala Gly Val Cys Ala Arg Glu Lys Pro
435 440 445
Gln Gly Ser Val Ala Ala Pro Glu Glu Glu Asp Thr Asp Pro Arg Arg
450 455 460
Leu Val Gln Leu Leu Arg Gln His Ser Ser Pro Trp Gln Val Tyr Gly
465 470 475 480
Phe Val Arg Ala Cys Leu Arg Arg Leu Val Pro Pro Gly Leu Trp Gly
485 490 495
Ser Arg His Asn Glu Arg Arg Phe Leu Arg Asn Thr Lys Lys Phe Ile
500 505 510
Ser Leu Gly Lys His Ala Lys Leu Ser Leu Gln Glu Leu Thr Trp Lys
515 520 525
Met Ser Val Arg Gly Cys Ala Trp Leu Arg Arg Ser Pro Gly Val Gly
530 535 540
Cys Val Pro Ala Ala Glu His Arg Leu Arg Glu Glu Ile Leu Ala Lys
545 550 555 560
Phe Leu His Trp Leu Met Ser Val Tyr Val Val Glu Leu Leu Arg Ser
565 570 575
Phe Phe Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys Asn Tyr Leu Phe Phe
580 585 590
Tyr Arg Lys Ser Val Trp Ser Lys Leu Gln Ser Ile Gly Ile Arg Gln
595 600 605
His Leu Lys Arg Val Gln Leu Arg Glu Leu Ser Glu Ala Glu Val Arg
610 615 620
Gln His Arg Glu Ala Arg Pro Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe
625 630 635 640
Ile Pro Lys Pro Asp Gly Leu Arg Pro Ile Val Asn Met Asp Tyr Val
645 650 655
Val Gly Ala Arg Thr Phe Arg Arg Glu Lys Arg Ala Glu Arg Leu Thr
660 665 670
Ser Arg Val Lys Ala Leu Phe Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg
675 680 685
Arg Pro Gly Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile His
690 695 700
Arg Ala Trp Arg Thr Phe Val Leu Arg Val Arg Ala Gln Asp Pro Pro
705 710 715 720
Pro Glu Leu Tyr Phe Val Lys Val Asp Val Thr Gly Ala Tyr Asp Thr
725 730 735
Ile Pro Gln Asp Arg Leu Thr Glu Val Ile Ala Ser Ile Ile Lys Pro
740 745 750
Gln Asn Thr Tyr Cys Val Arg Arg Tyr Ala Val Val Gln Lys Ala Ala
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785 790 795 800
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805 810 815
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820 825 830
His Ala Val Arg Ile Arg Gly Lys Ser Tyr Val Gln Cys Gln Gly Ile
835 840 845
Pro Gln Gly Ser Ile Leu Ser Thr Leu Leu Cys Ser Leu Cys Tyr Gly
850 855 860
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865 870 875 880
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885 890 895
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Phe Pro Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp Thr Arg Thr Leu Glu Val Gln
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Ser Asp Tyr Ser Ser Tyr Ala Arg Thr Ser Ile Arg Ala Ser Leu Thr
965 970 975
Phe Asn Arg Gly Phe Lys Ala Gly Arg Asn Met Arg Arg Lys Leu Phe
980 985 990
Gly Val Leu Arg Leu Lys Cys His Ser Leu Phe Leu Tyr Leu Gln Val
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Asn Ser Leu Gln Thr Val Cys Thr Asn Ile Tyr Lys Ile Leu Leu
1010 1015 1020
Leu Gln Ala Tyr Arg Phe His Ala Cys Val Leu Gln Leu Pro Phe
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His Gln Gln Val Trp Lys Asn Pro Thr Phe Phe Leu Arg Val Ile
1040 1045 1050
Ser Asp Thr Ala Ser Leu Cys Tyr Ser Ile Leu Lys Ala Lys Asn
1055 1060 1065
Ala Gly Met Ser Leu Gly Ala Lys Gly Ala Ala Gly Pro Leu Pro
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Ser Glu Ala Val Gln Trp Leu Cys His Gln Ala Phe Leu Leu Lys
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Leu Thr Arg His Arg Val Thr Tyr Val Pro Leu Leu Gly Ser Leu
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1130 1135 1140
Phe Lys Thr Ile Leu Asp
1145
<210> 25
<211> 2724
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> gB consensus nucleic acid sequence
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 25
nnngagagca gaatctggtg cctggtcgtg tgcgtgaacc tgtgcatcgt gtgcctggga 60
gccgccgtgt ccagcagcag cacccggggc acaagcgcca cacacagcca ccacagcagc 120
cacaccacca gcgccgccca cagccggagc ggaagcgtga gcagccagcg ggtgaccagc 180
agcgaggccg tgtcccaccg ggccaacgag acaatctaca acaccaccct gaagtacggc 240
gacgtcgtgg gagtgaacac caccaagtac ccctacagag tgtgcagcat ggcccagggc 300
accgacctga tcagattcga gcggaacatc gtgtgtacca gcatgaagcc catcaacgag 360
gacctggacg agggcatcat ggtggtgtac aagagaaaca tcgtggccca caccttcaaa 420
gtgcgggtgt accagaaggt gctgaccttc cggcggagct acgcctacat ccacaccacc 480
tacctgctgg gcagcaacac cgagtacgtg gcccctccca tgtgggagat ccaccacatc 540
aacagccaca gccagtgcta cagcagctac agccgcgtga tcgccggcac cgtgttcgtg 600
gcctaccacc gggacagcta cgagaacaag accatgcagc tgatgcccga cgactacagc 660
aacacccaca gcaccagata cgtgaccgtg aaggaccagt ggcacagccg gggaagcacc 720
tggctgtaca gagagacatg caacctgaac tgcatggtca ccatcaccac cgccagaagc 780
aagtaccctt accacttctt cgccaccagc accggcgacg tggtggacat cagccccttc 840
tacaacggca ccaaccggaa cgccagctac ttcggcgaga acgccgacaa gttcttcatc 900
ttccccaact acaccatcgt gtccgacttc ggcagaccca acagcgcccc tgagacacac 960
cggctggtgg cctttctgga acgggccgac agcgtgatca gctgggacat ccaggacgag 1020
aagaacgtga cctgccagct gaccttctgg gaggctagcg agcggaccat cagaagcgag 1080
gccgaggaca gctaccactt cagcagcgcc aagatgaccg ccaccttcct gagcaagaaa 1140
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ctgcagcaga tcttcaacac cagctacaac cagacctacg agaagtatgg caacgtgtcc 1260
gtgttcgaga caacaggcgg cctggtggtg ttctggcagg gcatcaagca gaagtccctg 1320
gtcgagctgg aacggctggc caacagaagc agcctgaacc tgacccaccg gaccaagcgg 1380
agcaccgacg gcaacaatac cacccacctg agcaacatgg aaagcgtcca caacctggtg 1440
tacgcccagc tgcagttcac ctacgacacc ctgcggggct acatcaaccg ggccctggcc 1500
cagatcgccg aggcttggtg tgtggaccag cggcggaccc tggaagtgtt caaagagctg 1560
agcaagatca accccagcgc catcctgagc gccatctaca acaagcctat cgccgccaga 1620
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atcttcaact tcgccaacag ctcctacgtg cagtacggcc agctgggcga ggacaacgag 1800
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<210> 26
<211> 907
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> gB consensus amino acid sequenc
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 26
Xaa Glu Ser Arg Ile Trp Cys Leu Val Val Cys Val Asn Leu Cys Ile
1 5 10 15
Val Cys Leu Gly Ala Ala Val Ser Ser Ser Ser Thr Arg Gly Thr Ser
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50 55 60
Ser His Arg Ala Asn Glu Thr Ile Tyr Asn Thr Thr Leu Lys Tyr Gly
65 70 75 80
Asp Val Val Gly Val Asn Thr Thr Lys Tyr Pro Tyr Arg Val Cys Ser
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Thr Ser Met Lys Pro Ile Asn Glu Asp Leu Asp Glu Gly Ile Met Val
115 120 125
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130 135 140
Gln Lys Val Leu Thr Phe Arg Arg Ser Tyr Ala Tyr Ile His Thr Thr
145 150 155 160
Tyr Leu Leu Gly Ser Asn Thr Glu Tyr Val Ala Pro Pro Met Trp Glu
165 170 175
Ile His His Ile Asn Ser His Ser Gln Cys Tyr Ser Ser Tyr Ser Arg
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Val Ile Ala Gly Thr Val Phe Val Ala Tyr His Arg Asp Ser Tyr Glu
195 200 205
Asn Lys Thr Met Gln Leu Met Pro Asp Asp Tyr Ser Asn Thr His Ser
210 215 220
Thr Arg Tyr Val Thr Val Lys Asp Gln Trp His Ser Arg Gly Ser Thr
225 230 235 240
Trp Leu Tyr Arg Glu Thr Cys Asn Leu Asn Cys Met Val Thr Ile Thr
245 250 255
Thr Ala Arg Ser Lys Tyr Pro Tyr His Phe Phe Ala Thr Ser Thr Gly
260 265 270
Asp Val Val Asp Ile Ser Pro Phe Tyr Asn Gly Thr Asn Arg Asn Ala
275 280 285
Ser Tyr Phe Gly Glu Asn Ala Asp Lys Phe Phe Ile Phe Pro Asn Tyr
290 295 300
Thr Ile Val Ser Asp Phe Gly Arg Pro Asn Ser Ala Leu Glu Thr His
305 310 315 320
Arg Leu Val Ala Phe Leu Glu Arg Ala Asp Ser Val Ile Ser Trp Asp
325 330 335
Ile Gln Asp Glu Lys Asn Val Thr Cys Gln Leu Thr Phe Trp Glu Ala
340 345 350
Ser Glu Arg Thr Ile Arg Ser Glu Ala Glu Asp Ser Tyr His Phe Ser
355 360 365
Ser Ala Lys Met Thr Ala Thr Phe Leu Ser Lys Lys Gln Glu Val Asn
370 375 380
Met Ser Asp Ser Ala Leu Asp Cys Val Arg Asp Glu Ala Ile Asn Lys
385 390 395 400
Leu Gln Gln Ile Phe Asn Thr Ser Tyr Asn Gln Thr Tyr Glu Lys Tyr
405 410 415
Gly Asn Val Ser Val Phe Glu Thr Thr Gly Gly Leu Val Val Phe Trp
420 425 430
Gln Gly Ile Lys Gln Lys Ser Leu Val Glu Leu Glu Arg Leu Ala Asn
435 440 445
Arg Ser Ser Leu Asn Leu Thr His Arg Thr Lys Arg Ser Thr Asp Gly
450 455 460
Asn Asn Thr Thr His Leu Ser Asn Met Glu Ser Val His Asn Leu Val
465 470 475 480
Tyr Ala Gln Leu Gln Phe Thr Tyr Asp Thr Leu Arg Gly Tyr Ile Asn
485 490 495
Arg Ala Leu Ala Gln Ile Ala Glu Ala Trp Cys Val Asp Gln Arg Arg
500 505 510
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515 520 525
Leu Ser Ala Ile Tyr Asn Lys Pro Ile Ala Ala Arg Phe Met Gly Asp
530 535 540
Val Leu Gly Leu Ala Ser Cys Val Thr Ile Asn Gln Thr Ser Val Lys
545 550 555 560
Val Leu Arg Asp Met Asn Val Lys Glu Ser Pro Gly Arg Cys Tyr Ser
565 570 575
Arg Pro Val Val Ile Phe Asn Phe Ala Asn Ser Ser Tyr Val Gln Tyr
580 585 590
Gly Gln Leu Gly Glu Asp Asn Glu Ile Leu Leu Gly Asn His Arg Thr
595 600 605
Glu Glu Cys Gln Leu Pro Ser Leu Lys Ile Phe Ile Ala Gly Asn Ser
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Ala Tyr Glu Tyr Val Asp Tyr Leu Phe Lys Arg Met Ile Asp Leu Ser
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Ser Ile Ser Thr Val Asp Ser Met Ile Ala Leu Asp Ile Asp Pro Leu
645 650 655
Glu Asn Thr Asp Phe Arg Val Leu Glu Leu Tyr Ser Gln Lys Glu Leu
660 665 670
Arg Ser Ser Asn Val Phe Asp Leu Glu Glu Ile Met Arg Glu Phe Asn
675 680 685
Ser Tyr Lys Gln Arg Val Lys Tyr Val Glu Asp Lys Val Val Asp Pro
690 695 700
Leu Pro Pro Tyr Leu Lys Gly Leu Asp Asp Leu Met Ser Gly Leu Gly
705 710 715 720
Ala Ala Gly Lys Ala Val Gly Val Ala Ile Gly Ala Val Gly Gly Ala
725 730 735
Val Ala Ser Val Val Glu Gly Val Ala Thr Phe Leu Lys Asn Pro Phe
740 745 750
Gly Ala Phe Thr Ile Ile Leu Val Ala Ile Ala Val Val Ile Ile Thr
755 760 765
Tyr Leu Ile Tyr Thr Arg Gln Arg Arg Leu Cys Thr Gln Pro Leu Gln
770 775 780
Asn Leu Phe Pro Tyr Leu Val Ser Ala Asp Gly Thr Thr Val Thr Ser
785 790 795 800
Gly Ser Thr Lys Asp Thr Ser Leu Gln Ala Pro Pro Ser Tyr Glu Glu
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Ser Val Tyr Asn Ser Gly Arg Lys Gly Pro Gly Pro Pro Ser Ser Asp
820 825 830
Ala Ser Thr Ala Ala Pro Pro Tyr Thr Asn Glu Gln Ala Tyr Gln Met
835 840 845
Leu Leu Ala Leu Ala Arg Leu Asp Ala Glu Gln Arg Ala Gln Gln Asn
850 855 860
Gly Thr Asp Ser Leu Asp Gly Gln Thr Gly Thr Gln Asp Lys Gly Gln
865 870 875 880
Lys Pro Asn Leu Leu Asp Arg Leu Arg His Arg Lys Asn Gly Tyr Arg
885 890 895
His Leu Lys Asp Ser Asp Glu Glu Glu Asn Val
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<210> 27
<211> 1119
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> gM consensus nucleic acid sequence
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 27
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ctgatcgtga acctggtgga agtggccctg ggcttcaaca ccaccgtggt ggctatggct 660
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tggtccttcg gcatgctgtt cttcatctgg gccatgttca ccacctgtcg ggccgtgcgg 960
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<210> 28
<211> 372
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> gM consensus amino acid sequence
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 28
Xaa Ala Pro Ser His Val Asp Lys Val Asn Thr Arg Thr Trp Ser Ala
1 5 10 15
Ser Ile Val Phe Met Val Leu Thr Phe Val Asn Val Ser Val His Leu
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Val Leu Ser Asn Phe Pro His Leu Gly Tyr Pro Cys Val Tyr Tyr His
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Leu His Thr Pro Met Leu Phe Leu Asp Ser Val Gln Leu Val Cys Tyr
65 70 75 80
Ala Val Phe Met Gln Leu Val Phe Leu Ala Val Thr Ile Tyr Tyr Leu
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Val Cys Trp Ile Lys Ile Ser Met Arg Lys Asp Lys Gly Met Ser Leu
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Asn Gln Ser Thr Arg Asp Ile Ser Tyr Met Gly Asp Ser Leu Thr Ala
115 120 125
Phe Leu Phe Ile Leu Ser Met Asp Thr Phe Gln Leu Phe Thr Leu Thr
130 135 140
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Ser Tyr Lys Arg Ser Leu Phe Phe Phe Ser Arg Leu His Pro Lys Leu
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Ala Leu Gly Phe Asn Thr Thr Val Val Ala Met Ala Leu Cys Tyr Gly
210 215 220
Phe Gly Asn Asn Phe Phe Val Arg Thr Gly His Met Val Leu Ala Val
225 230 235 240
Phe Val Val Tyr Ala Ile Ile Ser Ile Ile Tyr Phe Leu Leu Ile Glu
245 250 255
Ala Val Phe Phe Gln Tyr Val Lys Val Gln Phe Gly Tyr His Leu Gly
260 265 270
Ala Phe Phe Gly Leu Cys Gly Leu Ile Tyr Pro Ile Val Gln Tyr Asp
275 280 285
Thr Phe Leu Ser Asn Glu Tyr Arg Thr Gly Ile Ser Trp Ser Phe Gly
290 295 300
Met Leu Phe Phe Ile Trp Ala Met Phe Thr Thr Cys Arg Ala Val Arg
305 310 315 320
Tyr Phe Arg Gly Arg Gly Ser Gly Ser Val Lys Tyr Gln Ala Leu Ala
325 330 335
Thr Ala Ser Gly Glu Glu Val Ala Ala Leu Ser His His Asp Ser Leu
340 345 350
Glu Ser Arg Arg Leu Arg Glu Glu Glu Asp Asp Asp Asp Asp Glu Asp
355 360 365
Phe Glu Asp Ala
370
<210> 29
<211> 411
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> gN consensus nucleic acid sequence
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 29
nnngagtgga acaccctggt gctgggtctg ctggtgctgt ctgtggccgc cagcagcaac 60
aacaccagca ctgccagcac ccccagccct agcagcagca cccacacctc caccaccgtg 120
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aacgacttct acaaggccca ctgcaccagc catatgtacg agctgagcct gagcagcttc 300
gccgcctggt ggaccatgct gaacgccctg atcctgatgg gcgccttctg catcgtgctg 360
cggcactgct gcttccagaa cttcaccgcc acaaccacca agggctactg a 411
<210> 30
<211> 136
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> N consensus amino acid sequence
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 30
Xaa Glu Trp Asn Thr Leu Val Leu Gly Leu Leu Val Leu Ser Val Ala
1 5 10 15
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65 70 75 80
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100 105 110
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130 135
<210> 31
<211> 2232
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> gH consensus nucleic acid sequence
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 31
nnncgacccg gcctgcccag ctacctgacc gtgttcgccg tgtacctgct gagccatctg 60
cccagccaga gatacggcgc cgatgccgcc tctgaggccc tggatcctca cgccttccat 120
ctgctgctga acacctacgg cagacctatc cggttcctgc gcgagaacac cacccagtgc 180
acctacaaca gcagcctgcg gaacagcacc gtcgtgcgcg agaatgctat cagcttcaac 240
ttcttccaga gctacaacca gtactacgtg ttccacatgc cccggtgcct gttcgccgga 300
cctctggccg agcagttcct gaaccaggtg gacctgaccg agacactgga aagataccag 360
cagcggctga atacctacgc cctggtgtcc aaggacctgg ccagctaccg gtccttcagc 420
cagcagctga aggctcagga cagcctgggc gagcagccta ccaccgtgcc ccctccaatc 480
gacctgagca tcccccacgt gtggatgccc ccccagacca cacctcacgg ctggaaagag 540
agccacacca ccagcggcct gcacagaccc cacttcaacc agacctgcat tctgttcgac 600
ggccacgacc tgctgttcag caccgtgacc ccctgcctgc accagggctt ctacctgatc 660
gacgagctga gatacgtgaa gatcaccctg accgaggatt tcttcgtggt caccgtgtcc 720
atcgacgacg acacccccat gctgctgatc ttcggccatc tgcctcgggt gctgttcaag 780
gccccctacc agcgggacaa cttcatcctg cggcagaccg agaagcacga gctgctggtg 840
ctggtcaaga aggaccagct gaaccggcac tcctacctga aggaccccga cttcctggac 900
gccgccctgg acttcaacta cctggacctg agcgccctgc tgagaaacag cttccacaga 960
tacgccgtgg acgtgctgaa gtccggccgg tgccagatgc tggacagacg gaccgtggaa 1020
atggccttcg cctatgccct ggccctgttt gccgccgctc ggcaggaaga ggctggcgct 1080
gaagtgtccg tgcccagagc cctggacaga caggccgctc tgctgcagat ccaggaattc 1140
atgatcacct gtctgagcca gaccccccct cggaccaccc tgctgctgta ccctaccgcc 1200
gtggatctgg ccaagcgggc cctgtggacc cccaaccaga tcaccgacat cacaagcctc 1260
gtgcggctgg tgtacatcct gagcaagcag aaccagcagc acctgatccc ccagtgggcc 1320
ctgagacaga tcgccgactt cgccctgaag ctgcacaaga cccacctggc tagctttctg 1380
agcgccttcg ctaggcagga actgtacctg atgggcagcc tggtgcactc catgctggtg 1440
cacaccaccg agaggcggga aatcttcatc gtggaaaccg gcctgtgcag cctggccgag 1500
ctgagccact tcacccagct gctggcccac ccccaccacg agtacctgag cgacctgtac 1560
accccctgca gctctagcgg cagacgggat cacagcctgg aacggctgac ccggctgttc 1620
cccgatgcca cagtgcctgc cactgtgcca gccgccctgt ccatcctgtc caccatgcag 1680
cccagcaccc tggaaacctt ccccgacctg ttctgcctgc ccctgggcga gagcttcagc 1740
gccctgacag tgtccgagca cgtgtcctac gtggtcacca accagtacct gatcaagggc 1800
atcagctacc ccgtgtccac caccgtcgtg ggccagagcc tgatcatcac ccagaccgac 1860
agccagacca agtgcgagct gacccggaac atgcacacca cacacagcat cactgccgcc 1920
ctgaacatca gcctggaaaa ctgcgccttc tgccagtctg ccctgctgga atacgacgat 1980
acccagggcg tgatcaacat catgtacatg cacgacagcg acgacgtgct gttcgccctg 2040
gacccctaca acgaggtggt ggtgtccagc ccccggaccc actacctgat gctgctgaag 2100
aacggcaccg tgctggaagt gaccgacgtg gtggtggacg ccaccgacag cagactgctg 2160
atgatgagcg tgtacgccct gagcgccatc atcggcatct acctgctgta ccggatgctg 2220
aaaacctgct ga 2232
<210> 32
<211> 743
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> gH consensus amino acid sequence
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 32
Xaa Arg Pro Gly Leu Pro Ser Tyr Leu Thr Val Phe Ala Val Tyr Leu
1 5 10 15
Leu Ser His Leu Pro Ser Gln Arg Tyr Gly Ala Asp Ala Ala Ser Glu
20 25 30
Ala Leu Asp Pro His Ala Phe His Leu Leu Leu Asn Thr Tyr Gly Arg
35 40 45
Pro Ile Arg Phe Leu Arg Glu Asn Thr Thr Gln Cys Thr Tyr Asn Ser
50 55 60
Ser Leu Arg Asn Ser Thr Val Val Arg Glu Asn Ala Ile Ser Phe Asn
65 70 75 80
Phe Phe Gln Ser Tyr Asn Gln Tyr Tyr Val Phe His Met Pro Arg Cys
85 90 95
Leu Phe Ala Gly Pro Leu Ala Glu Gln Phe Leu Asn Gln Val Asp Leu
100 105 110
Thr Glu Thr Leu Glu Arg Tyr Gln Gln Arg Leu Asn Thr Tyr Ala Leu
115 120 125
Val Ser Lys Asp Leu Ala Ser Tyr Arg Ser Phe Ser Gln Gln Leu Lys
130 135 140
Ala Gln Asp Ser Leu Gly Glu Gln Pro Thr Thr Val Pro Pro Pro Ile
145 150 155 160
Asp Leu Ser Ile Pro His Val Trp Met Pro Pro Gln Thr Thr Pro His
165 170 175
Gly Trp Lys Glu Ser His Thr Thr Ser Gly Leu His Arg Pro His Phe
180 185 190
Asn Gln Thr Cys Ile Leu Phe Asp Gly His Asp Leu Leu Phe Ser Thr
195 200 205
Val Thr Pro Cys Leu His Gln Gly Phe Tyr Leu Ile Asp Glu Leu Arg
210 215 220
Tyr Val Lys Ile Thr Leu Thr Glu Asp Phe Phe Val Val Thr Val Ser
225 230 235 240
Ile Asp Asp Asp Thr Pro Met Leu Leu Ile Phe Gly His Leu Pro Arg
245 250 255
Val Leu Phe Lys Ala Pro Tyr Gln Arg Asp Asn Phe Ile Leu Arg Gln
260 265 270
Thr Glu Lys His Glu Leu Leu Val Leu Val Lys Lys Asp Gln Leu Asn
275 280 285
Arg His Ser Tyr Leu Lys Asp Pro Asp Phe Leu Asp Ala Ala Leu Asp
290 295 300
Phe Asn Tyr Leu Asp Leu Ser Ala Leu Leu Arg Asn Ser Phe His Arg
305 310 315 320
Tyr Ala Val Asp Val Leu Lys Ser Gly Arg Cys Gln Met Leu Asp Arg
325 330 335
Arg Thr Val Glu Met Ala Phe Ala Tyr Ala Leu Ala Leu Phe Ala Ala
340 345 350
Ala Arg Gln Glu Glu Ala Gly Ala Glu Val Ser Val Pro Arg Ala Leu
355 360 365
Asp Arg Gln Ala Ala Leu Leu Gln Ile Gln Glu Phe Met Ile Thr Cys
370 375 380
Leu Ser Gln Thr Pro Pro Arg Thr Thr Leu Leu Leu Tyr Pro Thr Ala
385 390 395 400
Val Asp Leu Ala Lys Arg Ala Leu Trp Thr Pro Asn Gln Ile Thr Asp
405 410 415
Ile Thr Ser Leu Val Arg Leu Val Tyr Ile Leu Ser Lys Gln Asn Gln
420 425 430
Gln His Leu Ile Pro Gln Trp Ala Leu Arg Gln Ile Ala Asp Phe Ala
435 440 445
Leu Lys Leu His Lys Thr His Leu Ala Ser Phe Leu Ser Ala Phe Ala
450 455 460
Arg Gln Glu Leu Tyr Leu Met Gly Ser Leu Val His Ser Met Leu Val
465 470 475 480
His Thr Thr Glu Arg Arg Glu Ile Phe Ile Val Glu Thr Gly Leu Cys
485 490 495
Ser Leu Ala Glu Leu Ser His Phe Thr Gln Leu Leu Ala His Pro His
500 505 510
His Glu Tyr Leu Ser Asp Leu Tyr Thr Pro Cys Ser Ser Ser Gly Arg
515 520 525
Arg Asp His Ser Leu Glu Arg Leu Thr Arg Leu Phe Pro Asp Ala Thr
530 535 540
Val Pro Ala Thr Val Pro Ala Ala Leu Ser Ile Leu Ser Thr Met Gln
545 550 555 560
Pro Ser Thr Leu Glu Thr Phe Pro Asp Leu Phe Cys Leu Pro Leu Gly
565 570 575
Glu Ser Phe Ser Ala Leu Thr Val Ser Glu His Val Ser Tyr Val Val
580 585 590
Thr Asn Gln Tyr Leu Ile Lys Gly Ile Ser Tyr Pro Val Ser Thr Thr
595 600 605
Val Val Gly Gln Ser Leu Ile Ile Thr Gln Thr Asp Ser Gln Thr Lys
610 615 620
Cys Glu Leu Thr Arg Asn Met His Thr Thr His Ser Ile Thr Ala Ala
625 630 635 640
Leu Asn Ile Ser Leu Glu Asn Cys Ala Phe Cys Gln Ser Ala Leu Leu
645 650 655
Glu Tyr Asp Asp Thr Gln Gly Val Ile Asn Ile Met Tyr Met His Asp
660 665 670
Ser Asp Asp Val Leu Phe Ala Leu Asp Pro Tyr Asn Glu Val Val Val
675 680 685
Ser Ser Pro Arg Thr His Tyr Leu Met Leu Leu Lys Asn Gly Thr Val
690 695 700
Leu Glu Val Thr Asp Val Val Val Asp Ala Thr Asp Ser Arg Leu Leu
705 710 715 720
Met Met Ser Val Tyr Ala Leu Ser Ala Ile Ile Gly Ile Tyr Leu Leu
725 730 735
Tyr Arg Met Leu Lys Thr Cys
740
<210> 33
<211> 837
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> gL consensus nucleic acid sequence
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 33
nnntgcaggc ggcccgactg cggcttcagc ttcagccctg gccccgtgat cctgctgtgg 60
tgctgcctgc tgctgcccat cgtgtcctct gccgccgtgt ctgtggcccc tacagccgcc 120
gagaaggtgc cagccgagtg ccctgagctg accagacggt gtctgctggg cgaggtgttc 180
cagggcgata agtacgagag ctggctgcgg cccctggtca acgtgaccgg cagagatggc 240
cccctgagcc agctgatccg gtacagaccc gtgacccctg aggccgccaa cagcgtgctg 300
ctggacgaag cctttctgga cacactggcc ctgctgtaca acaaccccga ccagctgcgg 360
gccctgctga cactgctgag cagcgatacc gcccccagat ggatgaccgt gatgcggggc 420
tacagcgagt gcggcgacgg atctcccgcc gtgtacacct gtgtggacga cctgtgccgg 480
ggctacgacc tgaccagact gagctacggc cggtccatct tcacagagca cgtgctgggc 540
ttcgagctgg tgccccccag cctgttcaat gtggtggtgg ccatccggaa cgaggccacc 600
cggaccaaca gagcagtgcg gctgcctgtg tccaccgctg ctgctccaga gggcatcacc 660
ctgttctacg gcctgtacaa cgccgtgaaa gagttctgcc tgagacacca gctggacccc 720
cccctgctgc ggcacctgga caagtactac gccggcctgc ctcccgagct gaagcagacc 780
agagtgaacc tgcccgccca cagcagatac ggccctcagg ccgtggacgc cagatga 837
<210> 34
<211> 278
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> gL consensus amino acid sequence
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 34
Xaa Cys Arg Arg Pro Asp Cys Gly Phe Ser Phe Ser Pro Gly Pro Val
1 5 10 15
Ile Leu Leu Trp Cys Cys Leu Leu Leu Pro Ile Val Ser Ser Ala Ala
20 25 30
Val Ser Val Ala Pro Thr Ala Ala Glu Lys Val Pro Ala Glu Cys Pro
35 40 45
Glu Leu Thr Arg Arg Cys Leu Leu Gly Glu Val Phe Gln Gly Asp Lys
50 55 60
Tyr Glu Ser Trp Leu Arg Pro Leu Val Asn Val Thr Gly Arg Asp Gly
65 70 75 80
Pro Leu Ser Gln Leu Ile Arg Tyr Arg Pro Val Thr Pro Glu Ala Ala
85 90 95
Asn Ser Val Leu Leu Asp Glu Ala Phe Leu Asp Thr Leu Ala Leu Leu
100 105 110
Tyr Asn Asn Pro Asp Gln Leu Arg Ala Leu Leu Thr Leu Leu Ser Ser
115 120 125
Asp Thr Ala Pro Arg Trp Met Thr Val Met Arg Gly Tyr Ser Glu Cys
130 135 140
Gly Asp Gly Ser Pro Ala Val Tyr Thr Cys Val Asp Asp Leu Cys Arg
145 150 155 160
Gly Tyr Asp Leu Thr Arg Leu Ser Tyr Gly Arg Ser Ile Phe Thr Glu
165 170 175
His Val Leu Gly Phe Glu Leu Val Pro Pro Ser Leu Phe Asn Val Val
180 185 190
Val Ala Ile Arg Asn Glu Ala Thr Arg Thr Asn Arg Ala Val Arg Leu
195 200 205
Pro Val Ser Thr Ala Ala Ala Pro Glu Gly Ile Thr Leu Phe Tyr Gly
210 215 220
Leu Tyr Asn Ala Val Lys Glu Phe Cys Leu Arg His Gln Leu Asp Pro
225 230 235 240
Pro Leu Leu Arg His Leu Asp Lys Tyr Tyr Ala Gly Leu Pro Pro Glu
245 250 255
Leu Lys Gln Thr Arg Val Asn Leu Pro Ala His Ser Arg Tyr Gly Pro
260 265 270
Gln Ala Val Asp Ala Arg
275
<210> 35
<211> 1419
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> gO consensus nucleic acid sequence
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 35
nnnggcaaga aagaaatgat catggtcaag ggcatcccca agatcatgct gctgatcagc 60
atcacctttc tgctgctgag cctgatcaac tgcaacgtgc tggtcaacag caagggcaca 120
cggcggagct ggccctacac cgtgctgagc taccggggca aagagatcct gaagaagcag 180
aaagaggaca tcctgaagcg gctgatgagc accagcagcg acggctaccg gttcctgatg 240
taccccagcc agcagaaatt ccacgccatc gtgatcagca tggacaagtt cccccaggac 300
tacatcctgg ccggacccat ccggaacgac agcatcaccc acatgtggtt cgacttctac 360
agcacccagc tgcggaagcc cgccaaatac gtgtacagcg agtacaacca caccgcccac 420
aagatcaccc tgcggcctcc cccttgcggc accgtgccca gcatgaactg cctgagcgag 480
atgctgaacg tgtccaagcg gaacgacacc ggcgagaagg gctgcggcaa cttcaccacc 540
ttcaacccca tgttcttcaa cgtgccccgg tggaacacca agctgtacat cggcagcaac 600
aaagtgaacg tggacagcca gaccatctac tttctgggcc tgaccgccct gctgctgcgc 660
tacgcccaga gaaactgcac ccggtccttc tacctggtca acgccatgag ccggaacctg 720
ttccgggtgc ccaagtacat caacggcacc aagctgaaga acaccatgcg gaagctgaag 780
cggaagcagg ccctggtcaa agagcagccc cagaagaaga acaagaagtc ccagagcacc 840
accaccccct acctgagcta caccaccagc accgccttca acgtgaccac caacgtgacc 900
tacagcgcca cagccgccgt gaccagagtg gccacctcca ccaccggcta ccggcccgac 960
agcaacttca tgaagtccat catggccacc cagctgaggg acctggccac ctgggtgtac 1020
accaccctgc ggtacagaaa cgagcccttc tgcaagcccg accggaacag aaccgccgtg 1080
tccgagttca tgaagaatac ccacgtgctg atccgcaacg agacacccta caccatctac 1140
ggcaccctgg acatgagcag cctgtactac aacgagacaa tgagcgtcga gaacgagaca 1200
gccagcgaca acaacgaaac cacccccacc agccccagca cccggttcca gcggaccttc 1260
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ctgagcaccc tgaacagcct gtggtggtgg ctgcagtga 1419
<210> 36
<211> 472
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> gO consensus amino acid sequence
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 36
Xaa Gly Lys Lys Glu Met Ile Met Val Lys Gly Ile Pro Lys Ile Met
1 5 10 15
Leu Leu Ile Ser Ile Thr Phe Leu Leu Leu Ser Leu Ile Asn Cys Asn
20 25 30
Val Leu Val Asn Ser Lys Gly Thr Arg Arg Ser Trp Pro Tyr Thr Val
35 40 45
Leu Ser Tyr Arg Gly Lys Glu Ile Leu Lys Lys Gln Lys Glu Asp Ile
50 55 60
Leu Lys Arg Leu Met Ser Thr Ser Ser Asp Gly Tyr Arg Phe Leu Met
65 70 75 80
Tyr Pro Ser Gln Gln Lys Phe His Ala Ile Val Ile Ser Met Asp Lys
85 90 95
Phe Pro Gln Asp Tyr Ile Leu Ala Gly Pro Ile Arg Asn Asp Ser Ile
100 105 110
Thr His Met Trp Phe Asp Phe Tyr Ser Thr Gln Leu Arg Lys Pro Ala
115 120 125
Lys Tyr Val Tyr Ser Glu Tyr Asn His Thr Ala His Lys Ile Thr Leu
130 135 140
Arg Pro Pro Pro Cys Gly Thr Val Pro Ser Met Asn Cys Leu Ser Glu
145 150 155 160
Met Leu Asn Val Ser Lys Arg Asn Asp Thr Gly Glu Lys Gly Cys Gly
165 170 175
Asn Phe Thr Thr Phe Asn Pro Met Phe Phe Asn Val Pro Arg Trp Asn
180 185 190
Thr Lys Leu Tyr Ile Gly Ser Asn Lys Val Asn Val Asp Ser Gln Thr
195 200 205
Ile Tyr Phe Leu Gly Leu Thr Ala Leu Leu Leu Arg Tyr Ala Gln Arg
210 215 220
Asn Cys Thr Arg Ser Phe Tyr Leu Val Asn Ala Met Ser Arg Asn Leu
225 230 235 240
Phe Arg Val Pro Lys Tyr Ile Asn Gly Thr Lys Leu Lys Asn Thr Met
245 250 255
Arg Lys Leu Lys Arg Lys Gln Ala Leu Val Lys Glu Gln Pro Gln Lys
260 265 270
Lys Asn Lys Lys Ser Gln Ser Thr Thr Thr Pro Tyr Leu Ser Tyr Thr
275 280 285
Thr Ser Thr Ala Phe Asn Val Thr Thr Asn Val Thr Tyr Ser Ala Thr
290 295 300
Ala Ala Val Thr Arg Val Ala Thr Ser Thr Thr Gly Tyr Arg Pro Asp
305 310 315 320
Ser Asn Phe Met Lys Ser Ile Met Ala Thr Gln Leu Arg Asp Leu Ala
325 330 335
Thr Trp Val Tyr Thr Thr Leu Arg Tyr Arg Asn Glu Pro Phe Cys Lys
340 345 350
Pro Asp Arg Asn Arg Thr Ala Val Ser Glu Phe Met Lys Asn Thr His
355 360 365
Val Leu Ile Arg Asn Glu Thr Pro Tyr Thr Ile Tyr Gly Thr Leu Asp
370 375 380
Met Ser Ser Leu Tyr Tyr Asn Glu Thr Met Ser Val Glu Asn Glu Thr
385 390 395 400
Ala Ser Asp Asn Asn Glu Thr Thr Pro Thr Ser Pro Ser Thr Arg Phe
405 410 415
Gln Arg Thr Phe Ile Asp Pro Leu Trp Asp Tyr Leu Asp Ser Leu Leu
420 425 430
Phe Leu Asp Lys Ile Arg Asn Phe Ser Leu Gln Leu Pro Ala Tyr Gly
435 440 445
Asn Leu Thr Pro Pro Glu His Arg Arg Ala Ala Asn Leu Ser Thr Leu
450 455 460
Asn Ser Leu Trp Trp Trp Leu Gln
465 470
<210> 37
<211> 516
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> UL128 consensus nucleic acid sequence
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 37
nnnagcccca aggatctgac ccctttcctg accgccctgt ggctgctcct gggccacagc 60
agagtgccta gagtgcgggc cgaggaatgc tgcgagttca tcaacgtgaa ccaccccccc 120
gagcggtgct acgacttcaa gatgtgcaac cggttcaccg tggctctgag atgccccgac 180
ggcgaagtgt gctacagccc cgagaaaacc gccgagatcc ggggcatcgt gaccaccatg 240
acccacagcc tgaccagaca ggtggtgcat aacaagctga ccagttgcaa ctacaacccc 300
ctgtacctgg aagccgacgg ccggatcaga tgcggcaaag tgaacgacaa ggcccagtac 360
ctgctgggcg ctgcaggcag tgtgccctac agatggatca acctggaata cgacaagatc 420
acccggatcg tgggcctgga ccagtacctg gaaagcgtga agaagcacaa gcggctggac 480
gtgtgccggg ccaagatggg ctacatgctg cagtga 516
<210> 38
<211> 171
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> UL128 consensus amino acid sequence
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 38
Xaa Ser Pro Lys Asp Leu Thr Pro Phe Leu Thr Ala Leu Trp Leu Leu
1 5 10 15
Leu Gly His Ser Arg Val Pro Arg Val Arg Ala Glu Glu Cys Cys Glu
20 25 30
Phe Ile Asn Val Asn His Pro Pro Glu Arg Cys Tyr Asp Phe Lys Met
35 40 45
Cys Asn Arg Phe Thr Val Ala Leu Arg Cys Pro Asp Gly Glu Val Cys
50 55 60
Tyr Ser Pro Glu Lys Thr Ala Glu Ile Arg Gly Ile Val Thr Thr Met
65 70 75 80
Thr His Ser Leu Thr Arg Gln Val Val His Asn Lys Leu Thr Ser Cys
85 90 95
Asn Tyr Asn Pro Leu Tyr Leu Glu Ala Asp Gly Arg Ile Arg Cys Gly
100 105 110
Lys Val Asn Asp Lys Ala Gln Tyr Leu Leu Gly Ala Ala Gly Ser Val
115 120 125
Pro Tyr Arg Trp Ile Asn Leu Glu Tyr Asp Lys Ile Thr Arg Ile Val
130 135 140
Gly Leu Asp Gln Tyr Leu Glu Ser Val Lys Lys His Lys Arg Leu Asp
145 150 155 160
Val Cys Arg Ala Lys Met Gly Tyr Met Leu Gln
165 170
<210> 39
<211> 646
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> UL130 consensus amino acid sequence
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3)
<223> n is a, c, g, or t
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 39
nnngctgcgg ctgctgctgc ggcaccactt ccactgcctg ctgctgtgtg ccgtgtgggc 60
caccccttgt ctggccagcc cttggagcac cctgaccgcc aaccagaacc ctagcccccc 120
ctggtccaag ctgacctaca gcaagcccca cgacgccgct accttctact gcccattcct 180
gtaccccagc cctcccagaa gccccctgca gttcagcggc ttccagcggg tgtccaccgg 240
ccctgagtgc cggaacgaga cactgtacct gctgtacaac cgcgagggcc agaccctggt 300
ggaacggtct agcacctggg tcaagaaagt gatctggtat ctgagcggcc ggaaccagac 360
catcctgcag cggatgcctc ggaccgccag caagcctagc gacggcaacg tgcagatcag 420
cgtggaagat gccaaaatct tcggcgccca catggtgccc aagcagacca agctgctgag 480
attcgtggtc aacgacggca ccagatacca gatgtgcgtg atgaagctgg aaagctgggc 540
ccacgtgttc cgggactaca gcgtgtcatt ccaggtccga ctgaccttca ccgaggccaa 600
caaccagacc tacaccttct gcacccaccc caacctgatc gtctga 646
<210> 40
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> UL130 consensus amino acid sequence
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 40
Xaa Leu Arg Leu Leu Leu Arg His His Phe His Cys Leu Leu Leu Cys
1 5 10 15
Ala Val Trp Ala Thr Pro Cys Leu Ala Ser Pro Trp Ser Thr Leu Thr
20 25 30
Ala Asn Gln Asn Pro Ser Pro Pro Trp Ser Lys Leu Thr Tyr Ser Lys
35 40 45
Pro His Asp Ala Ala Thr Phe Tyr Cys Pro Phe Leu Tyr Pro Ser Pro
50 55 60
Pro Arg Ser Pro Leu Gln Phe Ser Gly Phe Gln Arg Val Ser Thr Gly
65 70 75 80
Pro Glu Cys Arg Asn Glu Thr Leu Tyr Leu Leu Tyr Asn Arg Glu Gly
85 90 95
Gln Thr Leu Val Glu Arg Ser Ser Thr Trp Val Lys Lys Val Ile Trp
100 105 110
Tyr Leu Ser Gly Arg Asn Gln Thr Ile Leu Gln Arg Met Pro Arg Thr
115 120 125
Ala Ser Lys Pro Ser Asp Gly Asn Val Gln Ile Ser Val Glu Asp Ala
130 135 140
Lys Ile Phe Gly Ala His Met Val Pro Lys Gln Thr Lys Leu Leu Arg
145 150 155 160
Phe Val Val Asn Asp Gly Thr Arg Tyr Gln Met Cys Val Met Lys Leu
165 170 175
Glu Ser Trp Ala His Val Phe Arg Asp Tyr Ser Val Ser Phe Gln Val
180 185 190
Arg Leu Thr Phe Thr Glu Ala Asn Asn Gln Thr Tyr Thr Phe Cys Thr
195 200 205
His Pro Asn Leu Ile Val
210
<210> 41
<211> 390
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> UL131a consensus nucleic acid sequence
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 41
nnnagactgt gcagagtgtg gctgagcgtg tgcctgtgcg ccgtggtgct gggccagtgc 60
cagagagaga cagccgagaa gaacgactac taccgggtgc cccactactg ggacgcctgc 120
tctagagccc tgcccgacca gacccggtac aaatacgtgg aacagctggt ggacctgacc 180
ctgaactacc actacgacgc cagccacggc ctggacaact tcgacgtgct gaagcggatc 240
aacgtgaccg aggtgtccct gctgatcagc gacttccggc ggcagaacag aagaggcggc 300
accaacaagc ggactacctt caacgccgct ggcagcctgg cccctcacgc cagatccctg 360
gaattcagcg tgcggctgtt cgccaactga 390
<210> 42
<211> 129
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> UL131a consensus amino acid sequence
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 42
Xaa Arg Leu Cys Arg Val Trp Leu Ser Val Cys Leu Cys Ala Val Val
1 5 10 15
Leu Gly Gln Cys Gln Arg Glu Thr Ala Glu Lys Asn Asp Tyr Tyr Arg
20 25 30
Val Pro His Tyr Trp Asp Ala Cys Ser Arg Ala Leu Pro Asp Gln Thr
35 40 45
Arg Tyr Lys Tyr Val Glu Gln Leu Val Asp Leu Thr Leu Asn Tyr His
50 55 60
Tyr Asp Ala Ser His Gly Leu Asp Asn Phe Asp Val Leu Lys Arg Ile
65 70 75 80
Asn Val Thr Glu Val Ser Leu Leu Ile Ser Asp Phe Arg Arg Gln Asn
85 90 95
Arg Arg Gly Gly Thr Asn Lys Arg Thr Thr Phe Asn Ala Ala Gly Ser
100 105 110
Leu Ala Pro His Ala Arg Ser Leu Glu Phe Ser Val Arg Leu Phe Ala
115 120 125
Asn
<210> 43
<211> 1687
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> UL83 consensus nucleic acid sequence
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(3)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 43
nnntgagagt cgcgggcgga gatgccctga aatgatcagc gtgctgggcc caatttccgg 60
gcatgtgctg aaggccgtct tctcccgcgg agacaccccc gtgctgcctc acgagacaag 120
actgctgcag actggcatcc atgtgagggt ctcccagcca tctctgattc tggtgtctca 180
gtacacccca gatagtacac cctgccacag aggggacaac cagctgcagg tgcagcatac 240
ctacttcacc ggatcagagg tcgaaaatgt gagcgtcaac gtgcacaatc ccacaggcag 300
gagtatctgt ccttcacagg agccaatgag catctacgtg tacgccctgc ccctgaaaat 360
gctgaacatc cctagcatta atgtgcacca ttacccctcc gccgctgaac gaaagcaccg 420
gcatctgcct gtggcagatg ccgtcatcca tgcttcaggc aaacagatgt ggcaggcacg 480
actgaccgtg agcggactgg catggacacg acagcagaac cagtggaagg agccagacgt 540
gtactatact agcgccttcg tgttccccac caaagacgtg gccctgcgac acgtggtctg 600
cgcacatgag ctggtgtgct ctatggaaaa tactcgggcc accaagatgc aggtcattgg 660
cgatcagtac gtcaaagtgt atctggagtc cttttgtgaa gacgtgccct ctgggaagct 720
gttcatgcac gtgaccctgg gaagcgatgt cgaggaagac ctgactatga cccggaaccc 780
acagcccttt atgagacctc acgagaggaa cggcttcact gtgctgtgcc caaagaatat 840
gatcattaag cccgggaaaa tctctcatat tatgctggat gtggccttta caagtcacga 900
gcatttcgga ctgctgtgcc ccaaaagcat ccctgggctg tcaattagcg gaaacctgct 960
gatgaatggc cagcagatct ttctggaagt gcaggccatt cgagagaccg tcgaactgcg 1020
acagtacgac ccagtggcag ccctgttctt tttcgatatc gacctgctgc tgcagagagg 1080
ccctcagtat agtgagcacc caacattcac ttcacagtac aggattcagg ggaagctgga 1140
gtatcggcac acttgggata gacatgacga aggagctgca cagggcgacg atgacgtgtg 1200
gacctccggc tctgatagtg acgaggaact ggtgaccaca gagcgaaaaa ctccccgggt 1260
gaccggagga ggagctatgg caggagcatc aaccagcgcc ggacgaaaga gaaaaagcgc 1320
cagcagcgcc acagcatgca ctgcaggcgt gatgacaagg gggcgcctga aggcagaatc 1380
cacagtcgcc cctgaggaag atactgacga ggattctgac aacgaaatcc acaatccagc 1440
cgtgttcacc tggccacctt ggcaggcagg aattctggct cgcaatctgg tccctatggt 1500
ggccactgtc cagggacaga acctgaagta ccaggagttt ttctgggatg ctaatgacat 1560
ctatcggatt ttcgcagagc tggaaggcgt gtggcagcca gcagctcagc caaaaaggcg 1620
ccgacacaga caggacgcac tgcctggacc atgtatcgcc tccaccccaa agaaacatag 1680
gggctga 1687
<210> 44
<211> 561
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> UL83 consensus amino acid sequence
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 44
Xaa Glu Ser Arg Gly Arg Arg Cys Pro Glu Met Ile Ser Val Leu Gly
1 5 10 15
Pro Ile Ser Gly His Val Leu Lys Ala Val Phe Ser Arg Gly Asp Thr
20 25 30
Pro Val Leu Pro His Glu Thr Arg Leu Leu Gln Thr Gly Ile His Val
35 40 45
Arg Val Ser Gln Pro Ser Leu Ile Leu Val Ser Gln Tyr Thr Pro Asp
50 55 60
Ser Thr Pro Cys His Arg Gly Asp Asn Gln Leu Gln Val Gln His Thr
65 70 75 80
Tyr Phe Thr Gly Ser Glu Val Glu Asn Val Ser Val Asn Val His Asn
85 90 95
Pro Thr Gly Arg Ser Ile Cys Pro Ser Gln Glu Pro Met Ser Ile Tyr
100 105 110
Val Tyr Ala Leu Pro Leu Lys Met Leu Asn Ile Pro Ser Ile Asn Val
115 120 125
His His Tyr Pro Ser Ala Ala Glu Arg Lys His Arg His Leu Pro Val
130 135 140
Ala Asp Ala Val Ile His Ala Ser Gly Lys Gln Met Trp Gln Ala Arg
145 150 155 160
Leu Thr Val Ser Gly Leu Ala Trp Thr Arg Gln Gln Asn Gln Trp Lys
165 170 175
Glu Pro Asp Val Tyr Tyr Thr Ser Ala Phe Val Phe Pro Thr Lys Asp
180 185 190
Val Ala Leu Arg His Val Val Cys Ala His Glu Leu Val Cys Ser Met
195 200 205
Glu Asn Thr Arg Ala Thr Lys Met Gln Val Ile Gly Asp Gln Tyr Val
210 215 220
Lys Val Tyr Leu Glu Ser Phe Cys Glu Asp Val Pro Ser Gly Lys Leu
225 230 235 240
Phe Met His Val Thr Leu Gly Ser Asp Val Glu Glu Asp Leu Thr Met
245 250 255
Thr Arg Asn Pro Gln Pro Phe Met Arg Pro His Glu Arg Asn Gly Phe
260 265 270
Thr Val Leu Cys Pro Lys Asn Met Ile Ile Lys Pro Gly Lys Ile Ser
275 280 285
His Ile Met Leu Asp Val Ala Phe Thr Ser His Glu His Phe Gly Leu
290 295 300
Leu Cys Pro Lys Ser Ile Pro Gly Leu Ser Ile Ser Gly Asn Leu Leu
305 310 315 320
Met Asn Gly Gln Gln Ile Phe Leu Glu Val Gln Ala Ile Arg Glu Thr
325 330 335
Val Glu Leu Arg Gln Tyr Asp Pro Val Ala Ala Leu Phe Phe Phe Asp
340 345 350
Ile Asp Leu Leu Leu Gln Arg Gly Pro Gln Tyr Ser Glu His Pro Thr
355 360 365
Phe Thr Ser Gln Tyr Arg Ile Gln Gly Lys Leu Glu Tyr Arg His Thr
370 375 380
Trp Asp Arg His Asp Glu Gly Ala Ala Gln Gly Asp Asp Asp Val Trp
385 390 395 400
Thr Ser Gly Ser Asp Ser Asp Glu Glu Leu Val Thr Thr Glu Arg Lys
405 410 415
Thr Pro Arg Val Thr Gly Gly Gly Ala Met Ala Gly Ala Ser Thr Ser
420 425 430
Ala Gly Arg Lys Arg Lys Ser Ala Ser Ser Ala Thr Ala Cys Thr Ala
435 440 445
Gly Val Met Thr Arg Gly Arg Leu Lys Ala Glu Ser Thr Val Ala Pro
450 455 460
Glu Glu Asp Thr Asp Glu Asp Ser Asp Asn Glu Ile His Asn Pro Ala
465 470 475 480
Val Phe Thr Trp Pro Pro Trp Gln Ala Gly Ile Leu Ala Arg Asn Leu
485 490 495
Val Pro Met Val Ala Thr Val Gln Gly Gln Asn Leu Lys Tyr Gln Glu
500 505 510
Phe Phe Trp Asp Ala Asn Asp Ile Tyr Arg Ile Phe Ala Glu Leu Glu
515 520 525
Gly Val Trp Gln Pro Ala Ala Gln Pro Lys Arg Arg Arg His Arg Gln
530 535 540
Asp Ala Leu Pro Gly Pro Cys Ile Ala Ser Thr Pro Lys Lys His Arg
545 550 555 560
Gly
<210> 45
<211> 3447
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus hTERT nucleic acid sequence operably linked
to IgE (pgx1434)
<400> 45
atggattgga catggattct gttcctggtc gcagccgcca cacgagtgca tagccctaga 60
gccccacggt gtagagcagt ccgcagcctg ctgcgcagcc gataccggga agtgctgcct 120
ctggccacct ttgtccggag actgggacca cagggcaggc gcctggtgca gcgcggcgac 180
cccgcagctt tccgagcact ggtggcacag tgcctggtgt gcgtgccatg ggatgcacgg 240
ccccctccag cagcccctag ctttagacag gtgtcctgcc tgaaagaact ggtcgcaagg 300
gtggtccagc ggctgtgcga gagaggcgcc aggaacgtgc tggcattcgg ctttgcactg 360
ctggacggag ctaggggcgg gccccctgag gcattcacca caagcgtgcg ctcctacctg 420
ccaaatacag tcactgatac cctgcgaggc tccggagcat ggggactgct gctgcgacgg 480
gtgggggacg atgtgctggt ccacctgctg gctagatgcg cactgtatgt gctggtcgct 540
ccctcttgcg cataccaggt gtgcggacca cccctgtatg acctgggcgc tgcaacccag 600
gcaagacctc caccccacgc ctctggcact agaaggggac tgggcaccga acaggcatgg 660
aaccatagtg tcagggaggc aggagtgcca ctgggactgc cagcacctgg ggctcgccga 720
cggagaggga gtgccggacg gtcactgcca ctggctaaga gaccaaggcg cggagccgct 780
ccagaaccag agaggacacc tgtgggacag ggaagctggg cacaccctgg aagaactagg 840
gggccaagtg ataggggctt ctgcgtggtc tcaccagcac gaccagcaga ggaagctact 900
tctctggagg gagctctgag tggcacccgg cactctcatc ctagtgtggg aagacagcac 960
catgcaggcc ctccaagcac cagccggcct ccccggccat gggacactcc ttgtccaccc 1020
gtgtacgctg aaaccaaaca ctttctgtat agctccggag ataaggagca gctgcggccc 1080
tctttcctgc tgtctagtct gagacctagt ctgaccggag cacgacggct ggtggaaaca 1140
atctttctgg ggtcccgccc ttggatgcca ggaaccccca gaaggacacc tcgactgcca 1200
cagcggtact ggcagatgcg gccactgttc ctggagctgc tgggcaatca cgctcagtgc 1260
ccctatgggg cactgctgcg aacacattgt cctctgcggg cagccgtgac tccagctgca 1320
ggagtctgcg ccagggaaaa gccacagggc agcgtggcag ctcctgagga agaggacacc 1380
gatccacgcc gactggtgca gctgctgaga cagcactcaa gcccctggca ggtgtacgga 1440
tttctgaggg cctgtctgcg gagactggtg cctccaggac tgtgggggtc caggcacaac 1500
gaaaggcgct ttctgcgcaa tactaagaaa ttcatcagcc tgggcaagca tgctaaactg 1560
tccctgcagg agctgacctg gaaaatgagt gtgcgcgact gcgcatggct gcgacggtca 1620
ccaggagtcg ggtgcgtgcc tgcagccgag caccgcctgc gagaagagat tctggccaag 1680
tttctgcatt ggctgatgtc agtgtacgtg gtcgaactgc tgcggagctt cttttatgtg 1740
acagagacta ccttccagaa aaactacctg ttcttttatc gcaagtcagt gtggagcaaa 1800
ctgcagtcaa tcggcattcg gcagcacctg aagagagtgc agctgaggga actgagtgaa 1860
gccgaggtcc ggcagcatag agaggcaagg cctgccctgc tgacctcccg gctgagattc 1920
ctgcctaagc cagacgggct gagaccaatc gtgaacatgg attacgtggt cggagcacgg 1980
accttccgga gggaaaaacg cgctgagcga ctgacatccc gcgtgaagac tctgttctct 2040
gtcctgaatt atgagcgagc tcgccgaccc ggactgctgg gagcatctgt gctgggactg 2100
gacgatattc accgggcttg gagagcattt gtcctgaggg tgcgcgcaca ggaccctccc 2160
ccagaactgt acttcgtgaa agtcgccgtg accggggctt atgacacaat ccctcaggat 2220
cggctgactg aagtgatcgc ctccatcatt aagccacaga atacctactg cgtgcggaga 2280
tatgctgtgg tcaggcgcgc tgcacacggc catgtgagga agagcttcaa gcgccacgtc 2340
agcacactga ctgatctgca gccctacatg agacagttcg tggctcatct gcaggagacc 2400
agccctctga gggacgcagt ggtcatcgaa cagtcctcta gtctgaacga ggcatcaagc 2460
gggctgttcg atgtctttct gcggttcgtg tgccaccatg ccgtcagaat tggaggcaaa 2520
tcttacgtgc agtgtcaggg catcccccag ggcagcattc tgtctaccct gctgtgcagc 2580
ctgtgctatg gcgacatgga aaataagctg tttgccggaa tccgacggga tggcctgctg 2640
ctgagactgg tggccgcttt tctgctggtc actccacacc tgacccatgc caaagctttc 2700
ctgcgcacac tggtccgagg ggtgccagag tacggatgcg tggtcaacct gaggaagacc 2760
gtggtcaatt tcccagtgga agacgaggcc ctgggcggca cagcatttgt ccagctgcca 2820
gcacacggac tgttcccatg gtgtggactg ctgctggaca cccgcacact ggaggtgcag 2880
tccgattact cctcttatgc ccggacaagc atcagagctt ccctgacttt taacagaggc 2940
ttcaaggccg ggaggaatat gagaaggaaa ctgtttggcg tgctgcgcct gaagtgccat 3000
tccctgttcc tgtatctgca ggtgaactct ctgcagactg tctgtaccaa cgtgtacaaa 3060
atttttctgc tgcaggccta tcggttccac gcttgcgtgc tgcagctgcc attccatcag 3120
caggtcagga agaaccccac cttctttctg cgcgtgatct ctgatacagc tagtctgtgc 3180
tactcaattc tgaaggccaa aaatgctggc atgagcctgg gagcaaaagg agcagcagga 3240
ccatttcctt ccgaggctgc acagtggctg tgccaccagg cattcctgct gaagctggcc 3300
cgacatcggg tgacatatag gtgcctgctg ggcgcactgc gaacagcaca gactcagctg 3360
tgcagaaagc tgcccggggc cactctggct gccctggaag ccgctgccga ccctgccctg 3420
acctccgatt tcaagactat tctggac 3447
<210> 46
<211> 1149
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic consensus hTERT amino acid sequence operably linked to
IgE (pgx 1434)
<400> 46
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Pro Arg Ala Pro Arg Cys Arg Ala Val Arg Ser Leu Leu Arg
20 25 30
Ser Arg Tyr Arg Glu Val Leu Pro Leu Ala Thr Phe Val Arg Arg Leu
35 40 45
Gly Pro Gln Gly Arg Arg Leu Val Gln Arg Gly Asp Pro Ala Ala Phe
50 55 60
Arg Ala Leu Val Ala Gln Cys Leu Val Cys Val Pro Trp Asp Ala Arg
65 70 75 80
Pro Pro Pro Ala Ala Pro Ser Phe Arg Gln Val Ser Cys Leu Lys Glu
85 90 95
Leu Val Ala Arg Val Val Gln Arg Leu Cys Glu Arg Gly Ala Arg Asn
100 105 110
Val Leu Ala Phe Gly Phe Ala Leu Leu Asp Gly Ala Arg Gly Gly Pro
115 120 125
Pro Glu Ala Phe Thr Thr Ser Val Arg Ser Tyr Leu Pro Asn Thr Val
130 135 140
Thr Asp Thr Leu Arg Gly Ser Gly Ala Trp Gly Leu Leu Leu Arg Arg
145 150 155 160
Val Gly Asp Asp Val Leu Val His Leu Leu Ala Arg Cys Ala Leu Tyr
165 170 175
Val Leu Val Ala Pro Ser Cys Ala Tyr Gln Val Cys Gly Pro Pro Leu
180 185 190
Tyr Asp Leu Gly Ala Ala Thr Gln Ala Arg Pro Pro Pro His Ala Ser
195 200 205
Gly Thr Arg Arg Gly Leu Gly Thr Glu Gln Ala Trp Asn His Ser Val
210 215 220
Arg Glu Ala Gly Val Pro Leu Gly Leu Pro Ala Pro Gly Ala Arg Arg
225 230 235 240
Arg Arg Gly Ser Ala Gly Arg Ser Leu Pro Leu Ala Lys Arg Pro Arg
245 250 255
Arg Gly Ala Ala Pro Glu Pro Glu Arg Thr Pro Val Gly Gln Gly Ser
260 265 270
Trp Ala His Pro Gly Arg Thr Arg Gly Pro Ser Asp Arg Gly Phe Cys
275 280 285
Val Val Ser Pro Ala Arg Pro Ala Glu Glu Ala Thr Ser Leu Glu Gly
290 295 300
Ala Leu Ser Gly Thr Arg His Ser His Pro Ser Val Gly Arg Gln His
305 310 315 320
His Ala Gly Pro Pro Ser Thr Ser Arg Pro Pro Arg Pro Trp Asp Thr
325 330 335
Pro Cys Pro Pro Val Tyr Ala Glu Thr Lys His Phe Leu Tyr Ser Ser
340 345 350
Gly Asp Lys Glu Gln Leu Arg Pro Ser Phe Leu Leu Ser Ser Leu Arg
355 360 365
Pro Ser Leu Thr Gly Ala Arg Arg Leu Val Glu Thr Ile Phe Leu Gly
370 375 380
Ser Arg Pro Trp Met Pro Gly Thr Pro Arg Arg Thr Pro Arg Leu Pro
385 390 395 400
Gln Arg Tyr Trp Gln Met Arg Pro Leu Phe Leu Glu Leu Leu Gly Asn
405 410 415
His Ala Gln Cys Pro Tyr Gly Ala Leu Leu Arg Thr His Cys Pro Leu
420 425 430
Arg Ala Ala Val Thr Pro Ala Ala Gly Val Cys Ala Arg Glu Lys Pro
435 440 445
Gln Gly Ser Val Ala Ala Pro Glu Glu Glu Asp Thr Asp Pro Arg Arg
450 455 460
Leu Val Gln Leu Leu Arg Gln His Ser Ser Pro Trp Gln Val Tyr Gly
465 470 475 480
Phe Leu Arg Ala Cys Leu Arg Arg Leu Val Pro Pro Gly Leu Trp Gly
485 490 495
Ser Arg His Asn Glu Arg Arg Phe Leu Arg Asn Thr Lys Lys Phe Ile
500 505 510
Ser Leu Gly Lys His Ala Lys Leu Ser Leu Gln Glu Leu Thr Trp Lys
515 520 525
Met Ser Val Arg Asp Cys Ala Trp Leu Arg Arg Ser Pro Gly Val Gly
530 535 540
Cys Val Pro Ala Ala Glu His Arg Leu Arg Glu Glu Ile Leu Ala Lys
545 550 555 560
Phe Leu His Trp Leu Met Ser Val Tyr Val Val Glu Leu Leu Arg Ser
565 570 575
Phe Phe Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys Asn Tyr Leu Phe Phe
580 585 590
Tyr Arg Lys Ser Val Trp Ser Lys Leu Gln Ser Ile Gly Ile Arg Gln
595 600 605
His Leu Lys Arg Val Gln Leu Arg Glu Leu Ser Glu Ala Glu Val Arg
610 615 620
Gln His Arg Glu Ala Arg Pro Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe
625 630 635 640
Leu Pro Lys Pro Asp Gly Leu Arg Pro Ile Val Asn Met Asp Tyr Val
645 650 655
Val Gly Ala Arg Thr Phe Arg Arg Glu Lys Arg Ala Glu Arg Leu Thr
660 665 670
Ser Arg Val Lys Thr Leu Phe Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg
675 680 685
Arg Pro Gly Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile His
690 695 700
Arg Ala Trp Arg Ala Phe Val Leu Arg Val Arg Ala Gln Asp Pro Pro
705 710 715 720
Pro Glu Leu Tyr Phe Val Lys Val Ala Val Thr Gly Ala Tyr Asp Thr
725 730 735
Ile Pro Gln Asp Arg Leu Thr Glu Val Ile Ala Ser Ile Ile Lys Pro
740 745 750
Gln Asn Thr Tyr Cys Val Arg Arg Tyr Ala Val Val Arg Arg Ala Ala
755 760 765
His Gly His Val Arg Lys Ser Phe Lys Arg His Val Ser Thr Leu Thr
770 775 780
Asp Leu Gln Pro Tyr Met Arg Gln Phe Val Ala His Leu Gln Glu Thr
785 790 795 800
Ser Pro Leu Arg Asp Ala Val Val Ile Glu Gln Ser Ser Ser Leu Asn
805 810 815
Glu Ala Ser Ser Gly Leu Phe Asp Val Phe Leu Arg Phe Val Cys His
820 825 830
His Ala Val Arg Ile Gly Gly Lys Ser Tyr Val Gln Cys Gln Gly Ile
835 840 845
Pro Gln Gly Ser Ile Leu Ser Thr Leu Leu Cys Ser Leu Cys Tyr Gly
850 855 860
Asp Met Glu Asn Lys Leu Phe Ala Gly Ile Arg Arg Asp Gly Leu Leu
865 870 875 880
Leu Arg Leu Val Ala Ala Phe Leu Leu Val Thr Pro His Leu Thr His
885 890 895
Ala Lys Ala Phe Leu Arg Thr Leu Val Arg Gly Val Pro Glu Tyr Gly
900 905 910
Cys Val Val Asn Leu Arg Lys Thr Val Val Asn Phe Pro Val Glu Asp
915 920 925
Glu Ala Leu Gly Gly Thr Ala Phe Val Gln Leu Pro Ala His Gly Leu
930 935 940
Phe Pro Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp Thr Arg Thr Leu Glu Val Gln
945 950 955 960
Ser Asp Tyr Ser Ser Tyr Ala Arg Thr Ser Ile Arg Ala Ser Leu Thr
965 970 975
Phe Asn Arg Gly Phe Lys Ala Gly Arg Asn Met Arg Arg Lys Leu Phe
980 985 990
Gly Val Leu Arg Leu Lys Cys His Ser Leu Phe Leu Tyr Leu Gln Val
995 1000 1005
Asn Ser Leu Gln Thr Val Cys Thr Asn Val Tyr Lys Ile Phe Leu
1010 1015 1020
Leu Gln Ala Tyr Arg Phe His Ala Cys Val Leu Gln Leu Pro Phe
1025 1030 1035
His Gln Gln Val Arg Lys Asn Pro Thr Phe Phe Leu Arg Val Ile
1040 1045 1050
Ser Asp Thr Ala Ser Leu Cys Tyr Ser Ile Leu Lys Ala Lys Asn
1055 1060 1065
Ala Gly Met Ser Leu Gly Ala Lys Gly Ala Ala Gly Pro Phe Pro
1070 1075 1080
Ser Glu Ala Ala Gln Trp Leu Cys His Gln Ala Phe Leu Leu Lys
1085 1090 1095
Leu Ala Arg His Arg Val Thr Tyr Arg Cys Leu Leu Gly Ala Leu
1100 1105 1110
Arg Thr Ala Gln Thr Gln Leu Cys Arg Lys Leu Pro Gly Ala Thr
1115 1120 1125
Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ala Ala Asp Pro Ala Leu Thr Ser Asp
1130 1135 1140
Phe Lys Thr Ile Leu Asp
1145
<210> 47
<211> 3393
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus hTERT nucleic acid sequence (pgx1434)
<400> 47
cctagagccc cacggtgtag agcagtccgc agcctgctgc gcagccgata ccgggaagtg 60
ctgcctctgg ccacctttgt ccggagactg ggaccacagg gcaggcgcct ggtgcagcgc 120
ggcgaccccg cagctttccg agcactggtg gcacagtgcc tggtgtgcgt gccatgggat 180
gcacggcccc ctccagcagc ccctagcttt agacaggtgt cctgcctgaa agaactggtc 240
gcaagggtgg tccagcggct gtgcgagaga ggcgccagga acgtgctggc attcggcttt 300
gcactgctgg acggagctag gggcgggccc cctgaggcat tcaccacaag cgtgcgctcc 360
tacctgccaa atacagtcac tgataccctg cgaggctccg gagcatgggg actgctgctg 420
cgacgggtgg gggacgatgt gctggtccac ctgctggcta gatgcgcact gtatgtgctg 480
gtcgctccct cttgcgcata ccaggtgtgc ggaccacccc tgtatgacct gggcgctgca 540
acccaggcaa gacctccacc ccacgcctct ggcactagaa ggggactggg caccgaacag 600
gcatggaacc atagtgtcag ggaggcagga gtgccactgg gactgccagc acctggggct 660
cgccgacgga gagggagtgc cggacggtca ctgccactgg ctaagagacc aaggcgcgga 720
gccgctccag aaccagagag gacacctgtg ggacagggaa gctgggcaca ccctggaaga 780
actagggggc caagtgatag gggcttctgc gtggtctcac cagcacgacc agcagaggaa 840
gctacttctc tggagggagc tctgagtggc acccggcact ctcatcctag tgtgggaaga 900
cagcaccatg caggccctcc aagcaccagc cggcctcccc ggccatggga cactccttgt 960
ccacccgtgt acgctgaaac caaacacttt ctgtatagct ccggagataa ggagcagctg 1020
cggccctctt tcctgctgtc tagtctgaga cctagtctga ccggagcacg acggctggtg 1080
gaaacaatct ttctggggtc ccgcccttgg atgccaggaa cccccagaag gacacctcga 1140
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cacaacgaaa ggcgctttct gcgcaatact aagaaattca tcagcctggg caagcatgct 1500
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agattcctgc ctaagccaga cgggctgaga ccaatcgtga acatggatta cgtggtcgga 1920
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ttctctgtcc tgaattatga gcgagctcgc cgacccggac tgctgggagc atctgtgctg 2040
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ctgctgctga gactggtggc cgcttttctg ctggtcactc cacacctgac ccatgccaaa 2640
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ctgccagcac acggactgtt cccatggtgt ggactgctgc tggacacccg cacactggag 2820
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tacaaaattt ttctgctgca ggcctatcgg ttccacgctt gcgtgctgca gctgccattc 3060
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<211> 1131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus hTERT amino acid sequence (pgx1434)
<400> 48
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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to IgE (pgx1418)
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gtccctgagt acgggtgcat gatcaacctg cagaaaactg tggtcaattt tccagtggaa 2760
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ttctttctcg gaatcatttc aaatcaggct agctgctgtt atgcaatcct gaaggtgaaa 3180
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atcctgaaga ccgctgcaga ccccgctctc tccactgatt tccagaccat tctcgac 3417
<210> 50
<211> 1139
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus mTERT amino acid sequence operably linked to
IgE (pgx1418)
<400> 50
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
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His Ser Pro Arg Ala Pro Arg Cys Pro Ala Val Arg Ser Leu Leu Arg
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Ser Arg Tyr Arg Glu Val Trp Pro Leu Ala Thr Phe Val Arg Arg Leu
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Leu Val Ala Arg Val Val Gln Arg Leu Cys Glu Arg Gly Glu Arg Asn
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Val Leu Ala Phe Gly Phe Ala Leu Leu Asn Gly Ala Arg Gly Gly Pro
115 120 125
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130 135 140
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Val Gly Asp Asp Leu Leu Val Tyr Leu Leu Ala His Cys Ala Leu Tyr
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355 360 365
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385 390 395 400
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435 440 445
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450 455 460
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Pro Ala Gly Leu Trp Gly Thr Arg His Asn Glu Arg Arg Phe Phe Lys
485 490 495
Asn Val Lys Lys Phe Ile Ser Leu Gly Lys Tyr Gly Lys Leu Ser Leu
500 505 510
Gln Glu Leu Met Trp Lys Met Lys Val Glu Asp Cys His Trp Leu Arg
515 520 525
Ser Ser Pro Gly Lys Asp Arg Val Pro Ala Ala Glu His Arg Leu Arg
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565 570 575
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Gly Met Asn Asp Ile Tyr Arg Thr Trp Arg Ala Phe Val Leu Arg Val
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725 730 735
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740 745 750
Ala Val Val Gln Arg Asp Ser Gln Gly Gln Val His Lys Ser Phe Arg
755 760 765
Arg Gln Val Ser Thr Leu Ser Asp Leu Gln Pro Tyr Met Gly Gln Phe
770 775 780
Leu Lys His Leu Gln Asp Ser Asp Ala Ser Ala Leu Arg Asn Ser Val
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Val Ile Glu Gln Ser Ile Ser Met Asn Glu Ser Ser Ser Ser Leu Phe
805 810 815
Asp Phe Phe Leu His Phe Val Arg His Ser Val Val Lys Ile Gly Gly
820 825 830
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1055 1060 1065
Lys Gly Ser Phe Pro Pro Glu Ala Ala Arg Trp Leu Cys Tyr Gln
1070 1075 1080
Ala Phe Leu Leu Lys Leu Ala Ala His Ser Val Thr Tyr Lys Cys
1085 1090 1095
Leu Leu Gly Pro Leu Arg Thr Ala Gln Lys Gln Leu Cys Arg Lys
1100 1105 1110
Leu Pro Glu Ala Thr Met Thr Ile Leu Lys Thr Ala Ala Asp Pro
1115 1120 1125
Ala Leu Ser Thr Asp Phe Gln Thr Ile Leu Asp
1130 1135
<210> 51
<211> 3363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus mTERT nucleic acid sequence (pgx1418)
<400> 51
ccaagagccc ccaggtgccc tgctgtgagg tcactgctcc gaagcaggta cagagaagtg 60
tggcccctgg ccacattcgt caggagactg ggacctgaag ggcggcgcct ggtgcagcca 120
ggtgacccca aggtgtttag aactctggtc gctcagtgcc tggtgtgcgt gccatggggg 180
tctcagcccc ctccagcaga tctgagtttc caccaggtga gctccctgaa ggagctcgtc 240
gcccgagtgg tccagaggct gtgcgagaga ggcgaacgga acgtgctggc tttcggtttt 300
gcactgctca atggagcccg cggcggaccc cctatggctt tcaccacatc tgtgaggagt 360
tacctgccca actctgtgac cgagagtctg agagtctcag gagcttggat gctgctcctg 420
agccgggtgg gggacgatct cctggtctac ctcctggctc attgcgcact gtatctcctg 480
gtgccaccct catgcgccta ccaggtctgt ggaagcccac tgtatcagat ctgtgccact 540
accgacacct ggccaagcgt gagcgccagc taccgaccta cccgaccagt cggacggaac 600
ttcacaaatc tggggtccct ccaccagatt aagaattcta gtcatcagga ggcccctaaa 660
ccactcgctc tgccctccag agggacaaag cggcacctct ctctgacctc cacatctgtg 720
cctagtgcca agaaagctcg atgctatccc gcccctaggg tcgaaaaggg tcctcatcgc 780
caggtggtcc caacaccctc tggcaaaact tgggtgccta gcccagcaag gtccccagag 840
gtccctactg ccgaaaagga cctgtcaagc aagggtaaag ctagcgatct cagtctgtca 900
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ggccaggaac gactgaatcc ttcctttctc ctgaacaatc tgcagccatc tctcaccggc 1080
gctcgaaggc tggtggagat cattttcctc ggttcccggc cacgcacatc tggacctctg 1140
tgcagaacta gacggctctc ccgccgatac tggcagatgc ggccactgtt ccagcagctc 1200
ctggtgaacc acgccgaatg ccagtatgtc aggctcctga gatctcattg taggttcagg 1260
actgcaaacc agcaggtgac cgacgccctg aatacaagcc ctccccacct gatggatctc 1320
ctgcgcctcc atagttcacc atggcaggtg tacggattcc tgcgagcttg cctgcgaaag 1380
ctcgtcccag caggtctgtg gggcacaagg cacaacgaga ggagattctt taaaaacgtg 1440
aagaagttca tctcactggg aaagtatggg aaactcagcc tgcaggagct gatgtggaag 1500
atgaaagtgg aagactgtca ctggctgagg agctccccag gcaaggatag agtgcccgcc 1560
gctgagcata gactgcggga acgcatcctc gccatgttcc tgttttggct catggacaca 1620
tacgtggtcc agctcctgcg cagcttcttt tatattactg agacaacttt ccagaagaac 1680
aggctgttct tttacagaaa gtccgtgtgg tctaaactgc agtctatcgg ggtgagacag 1740
cacctggagc gagtcaggct gagagaactc agtcaggagg aagtgcggca ccatcaggat 1800
acatggctgg ccatgcctat ctgccggctg cgcttcattc ccaagcctaa cggcctgagg 1860
ccaattgtga atatgtccta ttctatggga actcgggctt ttgggaagcg caaacaggca 1920
cagcacttca ctcagcgcct gaagaccctc tttagcgtgc tgaactacga gaggactaaa 1980
catcccaatc tgatgggtgc ttccgtgctc ggcatgaacg acatctatcg aacctggcga 2040
gccttcgtgc tgcgagtcag ggctctcgac cagaccccta gaatgtactt tgtgaaggcc 2100
gatgtcacag gagcatatga cgccattcca caggataaac tggtggaggt ggtcgctaat 2160
atgatccggc acagtgaatc aacctactgt attcggcagt atgcagtggt ccagcgagac 2220
agccagggac aggtgcataa gtccttccgg cgccaggtca gtacactgtc agatctccag 2280
ccctacatgg gacagtttct gaaacacctc caggacagcg atgcctccgc tctgagaaac 2340
agcgtggtca tcgagcagag catttccatg aatgaatcta gttcaagcct gttcgacttc 2400
tttctccact ttgtgcgcca ttccgtggtc aagatcggag ggcgatgcta tgtccagtgt 2460
cagggtattc ctcagggctc ctctctgagt accctcctgt gctcactgtg cttcggagac 2520
atggagaaca agctgtttgc tgaagtgcag caggatgggc tcctgctccg gttcgtggca 2580
gcctttctgc tcgtcactcc ccacctggat caggcaaagg ccttcctgtc caccctcgtg 2640
catggagtcc ctgagtacgg gtgcatgatc aacctgcaga aaactgtggt caattttcca 2700
gtggaaccag gcaccctggg tggcgctgca cctcaccagc tgccagccca ttgcctcttc 2760
ccttggtgtg gtctgctcct ggacacacag actctggagg tgttttgtga ttactccggc 2820
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acaatgcgat acaagctcct gtcagtgctc aggctgaaat gccacgggct cttcctggac 2940
ctccaggtga actctctgca gaccgtctgt atcaatatct acaagatctt cctcctgcag 3000
gcatatagat ttcacgcctg cgtgattcag ctgcctttcg atcagcatgt ccggaaaaac 3060
ctggccttct ttctcggaat catttcaaat caggctagct gctgttatgc aatcctgaag 3120
gtgaaaaacc caggaatgac actgaaggca aaagggtcct tcccacccga ggccgctaga 3180
tggctgtgct accaggcctt tctcctgaag ctggcagccc actctgtgac atataaatgc 3240
ctcctgggcc ctctgagaac tgcacagaag cagctgtgcc ggaaactccc agaagccacc 3300
atgacaatcc tgaagaccgc tgcagacccc gctctctcca ctgatttcca gaccattctc 3360
gac 3363
<210> 52
<211> 1121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus mTERT amino acid sequence (pgx1418)
<400> 52
Pro Arg Ala Pro Arg Cys Pro Ala Val Arg Ser Leu Leu Arg Ser Arg
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Tyr Arg Glu Val Trp Pro Leu Ala Thr Phe Val Arg Arg Leu Gly Pro
20 25 30
Glu Gly Arg Arg Leu Val Gln Pro Gly Asp Pro Lys Val Phe Arg Thr
35 40 45
Leu Val Ala Gln Cys Leu Val Cys Val Pro Trp Gly Ser Gln Pro Pro
50 55 60
Pro Ala Asp Leu Ser Phe His Gln Val Ser Ser Leu Lys Glu Leu Val
65 70 75 80
Ala Arg Val Val Gln Arg Leu Cys Glu Arg Gly Glu Arg Asn Val Leu
85 90 95
Ala Phe Gly Phe Ala Leu Leu Asn Gly Ala Arg Gly Gly Pro Pro Met
100 105 110
Ala Phe Thr Thr Ser Val Arg Ser Tyr Leu Pro Asn Ser Val Thr Glu
115 120 125
Ser Leu Arg Val Ser Gly Ala Trp Met Leu Leu Leu Ser Arg Val Gly
130 135 140
Asp Asp Leu Leu Val Tyr Leu Leu Ala His Cys Ala Leu Tyr Leu Leu
145 150 155 160
Val Pro Pro Ser Cys Ala Tyr Gln Val Cys Gly Ser Pro Leu Tyr Gln
165 170 175
Ile Cys Ala Thr Thr Asp Thr Trp Pro Ser Val Ser Ala Ser Tyr Arg
180 185 190
Pro Thr Arg Pro Val Gly Arg Asn Phe Thr Asn Leu Gly Ser Leu His
195 200 205
Gln Ile Lys Asn Ser Ser His Gln Glu Ala Pro Lys Pro Leu Ala Leu
210 215 220
Pro Ser Arg Gly Thr Lys Arg His Leu Ser Leu Thr Ser Thr Ser Val
225 230 235 240
Pro Ser Ala Lys Lys Ala Arg Cys Tyr Pro Ala Pro Arg Val Glu Lys
245 250 255
Gly Pro His Arg Gln Val Val Pro Thr Pro Ser Gly Lys Thr Trp Val
260 265 270
Pro Ser Pro Ala Arg Ser Pro Glu Val Pro Thr Ala Glu Lys Asp Leu
275 280 285
Ser Ser Lys Gly Lys Ala Ser Asp Leu Ser Leu Ser Gly Ser Val Cys
290 295 300
Cys Lys His Lys Pro Ser Ser Thr Ser Leu Leu Ser Pro Pro Arg Gln
305 310 315 320
Asn Ala Phe Gln Leu Arg Pro Phe Thr Glu Thr Arg His Phe Leu Tyr
325 330 335
Ser Arg Gly Gly Gly Gln Glu Arg Leu Asn Pro Ser Phe Leu Leu Asn
340 345 350
Asn Leu Gln Pro Ser Leu Thr Gly Ala Arg Arg Leu Val Glu Ile Ile
355 360 365
Phe Leu Gly Ser Arg Pro Arg Thr Ser Gly Pro Leu Cys Arg Thr Arg
370 375 380
Arg Leu Ser Arg Arg Tyr Trp Gln Met Arg Pro Leu Phe Gln Gln Leu
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Leu Val Asn His Ala Glu Cys Gln Tyr Val Arg Leu Leu Arg Ser His
405 410 415
Cys Arg Phe Arg Thr Ala Asn Gln Gln Val Thr Asp Ala Leu Asn Thr
420 425 430
Ser Pro Pro His Leu Met Asp Leu Leu Arg Leu His Ser Ser Pro Trp
435 440 445
Gln Val Tyr Gly Phe Leu Arg Ala Cys Leu Arg Lys Leu Val Pro Ala
450 455 460
Gly Leu Trp Gly Thr Arg His Asn Glu Arg Arg Phe Phe Lys Asn Val
465 470 475 480
Lys Lys Phe Ile Ser Leu Gly Lys Tyr Gly Lys Leu Ser Leu Gln Glu
485 490 495
Leu Met Trp Lys Met Lys Val Glu Asp Cys His Trp Leu Arg Ser Ser
500 505 510
Pro Gly Lys Asp Arg Val Pro Ala Ala Glu His Arg Leu Arg Glu Arg
515 520 525
Ile Leu Ala Met Phe Leu Phe Trp Leu Met Asp Thr Tyr Val Val Gln
530 535 540
Leu Leu Arg Ser Phe Phe Tyr Ile Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys Asn
545 550 555 560
Arg Leu Phe Phe Tyr Arg Lys Ser Val Trp Ser Lys Leu Gln Ser Ile
565 570 575
Gly Val Arg Gln His Leu Glu Arg Val Arg Leu Arg Glu Leu Ser Gln
580 585 590
Glu Glu Val Arg His His Gln Asp Thr Trp Leu Ala Met Pro Ile Cys
595 600 605
Arg Leu Arg Phe Ile Pro Lys Pro Asn Gly Leu Arg Pro Ile Val Asn
610 615 620
Met Ser Tyr Ser Met Gly Thr Arg Ala Phe Gly Lys Arg Lys Gln Ala
625 630 635 640
Gln His Phe Thr Gln Arg Leu Lys Thr Leu Phe Ser Val Leu Asn Tyr
645 650 655
Glu Arg Thr Lys His Pro Asn Leu Met Gly Ala Ser Val Leu Gly Met
660 665 670
Asn Asp Ile Tyr Arg Thr Trp Arg Ala Phe Val Leu Arg Val Arg Ala
675 680 685
Leu Asp Gln Thr Pro Arg Met Tyr Phe Val Lys Ala Asp Val Thr Gly
690 695 700
Ala Tyr Asp Ala Ile Pro Gln Asp Lys Leu Val Glu Val Val Ala Asn
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Met Ile Arg His Ser Glu Ser Thr Tyr Cys Ile Arg Gln Tyr Ala Val
725 730 735
Val Gln Arg Asp Ser Gln Gly Gln Val His Lys Ser Phe Arg Arg Gln
740 745 750
Val Ser Thr Leu Ser Asp Leu Gln Pro Tyr Met Gly Gln Phe Leu Lys
755 760 765
His Leu Gln Asp Ser Asp Ala Ser Ala Leu Arg Asn Ser Val Val Ile
770 775 780
Glu Gln Ser Ile Ser Met Asn Glu Ser Ser Ser Ser Leu Phe Asp Phe
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Phe Leu His Phe Val Arg His Ser Val Val Lys Ile Gly Gly Arg Cys
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Tyr Val Gln Cys Gln Gly Ile Pro Gln Gly Ser Ser Leu Ser Thr Leu
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Leu Cys Ser Leu Cys Phe Gly Asp Met Glu Asn Lys Leu Phe Ala Glu
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Val Gln Gln Asp Gly Leu Leu Leu Arg Phe Val Ala Ala Phe Leu Leu
850 855 860
Val Thr Pro His Leu Asp Gln Ala Lys Ala Phe Leu Ser Thr Leu Val
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885 890 895
Val Asn Phe Pro Val Glu Pro Gly Thr Leu Gly Gly Ala Ala Pro His
900 905 910
Gln Leu Pro Ala His Cys Leu Phe Pro Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp
915 920 925
Thr Gln Thr Leu Glu Val Phe Cys Asp Tyr Ser Gly Tyr Ala Arg Thr
930 935 940
Ser Ile Lys Thr Ser Leu Thr Phe Gln Ser Val Phe Lys Ala Gly Lys
945 950 955 960
Thr Met Arg Tyr Lys Leu Leu Ser Val Leu Arg Leu Lys Cys His Gly
965 970 975
Leu Phe Leu Asp Leu Gln Val Asn Ser Leu Gln Thr Val Cys Ile Asn
980 985 990
Ile Tyr Lys Ile Phe Leu Leu Gln Ala Tyr Arg Phe His Ala Cys Val
995 1000 1005
Ile Gln Leu Pro Phe Asp Gln His Val Arg Lys Asn Leu Ala Phe
1010 1015 1020
Phe Leu Gly Ile Ile Ser Asn Gln Ala Ser Cys Cys Tyr Ala Ile
1025 1030 1035
Leu Lys Val Lys Asn Pro Gly Met Thr Leu Lys Ala Lys Gly Ser
1040 1045 1050
Phe Pro Pro Glu Ala Ala Arg Trp Leu Cys Tyr Gln Ala Phe Leu
1055 1060 1065
Leu Lys Leu Ala Ala His Ser Val Thr Tyr Lys Cys Leu Leu Gly
1070 1075 1080
Pro Leu Arg Thr Ala Gln Lys Gln Leu Cys Arg Lys Leu Pro Glu
1085 1090 1095
Ala Thr Met Thr Ile Leu Lys Thr Ala Ala Asp Pro Ala Leu Ser
1100 1105 1110
Thr Asp Phe Gln Thr Ile Leu Asp
1115 1120
<210> 53
<211> 3447
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus rhTERT nucleic acid sequence operably linked
to IgE (pGX1473)
<400> 53
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cccgcagcct tccgcgccct ggtggcccag tgcctggtgt gcgtgccatg ggacgccagg 240
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ctggacggag ccaggggcgg gccccctgag gccttcacca cctccgtgag aagctacctg 420
cctaacaccg tgaccgacac cctgaggggc tccggagcat ggggcctgct gctgaggaga 480
gtgggggacg acgtgctggt gcacctgctg gcaaggtgcg ccctgtacgt gctggtggca 540
ccaagctgcg cataccaggt gtgcggccca cccctgtacg agctgtgcgc agcaacccag 600
gccagaccag cccctcacgc atccggaacc aggaggggac tgggctgcga gagggcctgg 660
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cggcgcgggt ctgccggacg gtcccctcca ctggcaaagc gccctaggag aggagccgca 780
ccagagcctg agaggacccc agtggggcag ggaagctggg cacaccctgg aaggaccagg 840
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ccatccgatt tcaaaaccat tctggac 3447
<210> 54
<211> 1149
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus rhTERT amino acid sequence operably linked to
IgE (pGX1473)
<400> 54
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Pro Arg Ala Pro Arg Cys Arg Ala Val Arg Ala Leu Leu Arg
20 25 30
Ser Arg Tyr Arg Glu Val Leu Pro Leu Ala Thr Phe Val Arg Arg Leu
35 40 45
Gly Pro Glu Gly Arg Arg Leu Val Gln Arg Gly Asp Pro Ala Ala Phe
50 55 60
Arg Ala Leu Val Ala Gln Cys Leu Val Cys Val Pro Trp Asp Ala Arg
65 70 75 80
Pro Pro Pro Ala Ala Pro Ser Phe Arg Gln Val Ser Cys Leu Lys Glu
85 90 95
Leu Val Ala Arg Val Val Gln Arg Leu Cys Glu Arg Gly Ala Arg Asn
100 105 110
Val Leu Ala Phe Gly Phe Ala Leu Leu Asp Gly Ala Arg Gly Gly Pro
115 120 125
Pro Glu Ala Phe Thr Thr Ser Val Arg Ser Tyr Leu Pro Asn Thr Val
130 135 140
Thr Asp Thr Leu Arg Gly Ser Gly Ala Trp Gly Leu Leu Leu Arg Arg
145 150 155 160
Val Gly Asp Asp Val Leu Val His Leu Leu Ala Arg Cys Ala Leu Tyr
165 170 175
Val Leu Val Ala Pro Ser Cys Ala Tyr Gln Val Cys Gly Pro Pro Leu
180 185 190
Tyr Glu Leu Cys Ala Ala Thr Gln Ala Arg Pro Ala Pro His Ala Ser
195 200 205
Gly Thr Arg Arg Gly Leu Gly Cys Glu Arg Ala Trp Asn Gly Ser Val
210 215 220
Arg Glu Ala Gly Val Pro Leu Gly Leu Pro Ala Pro Gly Ala Arg Arg
225 230 235 240
Arg Arg Gly Ser Ala Gly Arg Ser Pro Pro Leu Ala Lys Arg Pro Arg
245 250 255
Arg Gly Ala Ala Pro Glu Pro Glu Arg Thr Pro Val Gly Gln Gly Ser
260 265 270
Trp Ala His Pro Gly Arg Thr Arg Gly Pro Ser Asp Arg Gly Phe Cys
275 280 285
Val Val Ser Pro Ala Arg Pro Ala Glu Glu Ala Thr Ser Leu Glu Gly
290 295 300
Ala Leu Ser Gly Thr Arg His Ser His Pro Ser Val Gly Arg Gln His
305 310 315 320
His Ala Gly Pro Pro Ser Thr Ser Arg Pro Pro Ser Pro Trp Asp Thr
325 330 335
Pro Cys Pro Leu Val Tyr Ala Glu Thr Lys His Phe Leu Tyr Cys Ser
340 345 350
Gly Asp Lys Glu Arg Leu Arg Pro Ser Phe Leu Leu Ser Ser Leu Arg
355 360 365
Pro Ser Leu Thr Gly Ala Arg Arg Leu Val Glu Thr Ile Phe Leu Gly
370 375 380
Ser Arg Pro Trp Met Pro Gly Thr Pro Arg Arg Pro Pro Arg Leu Pro
385 390 395 400
Gln Arg Tyr Trp Gln Met Arg Pro Leu Phe Leu Glu Leu Leu Gly Asn
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435 440 445
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450 455 460
Leu Val Gln Leu Leu Arg Gln His Ser Ser Pro Trp Gln Val Tyr Gly
465 470 475 480
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485 490 495
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500 505 510
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515 520 525
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660 665 670
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675 680 685
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705 710 715 720
Pro Glu Leu Tyr Phe Val Lys Val Ala Val Thr Gly Ala Tyr Asp Thr
725 730 735
Ile Pro Gln Asp Arg Leu Thr Glu Val Ile Ala Ser Ile Ile Lys Pro
740 745 750
Gln Asn Thr Tyr Cys Val Arg Arg Tyr Ala Val Val Gln Lys Ala Ala
755 760 765
His Gly His Val Arg Lys Thr Phe Lys Lys His Val Ser Thr Leu Thr
770 775 780
Asp Leu Gln Pro Tyr Met Arg Gln Phe Val Ala His Leu Gln Glu Thr
785 790 795 800
Ser Ser Leu Arg Asp Ala Val Val Ile Glu Gln Ser Ser Ser Leu Asn
805 810 815
Glu Ala Ser Ser Gly Leu Phe Asp Val Phe Leu Arg Phe Val Cys Asn
820 825 830
His Val Val Arg Ile Gly Gly Lys Ser Tyr Val Gln Cys Gln Gly Ile
835 840 845
Pro Gln Gly Ser Ile Leu Ser Thr Leu Leu Cys Ser Leu Cys Tyr Gly
850 855 860
Asp Met Glu Asn Lys Leu Phe Ala Gly Ile Arg Arg Asp Gly Leu Leu
865 870 875 880
Leu Arg Leu Val Ala Ala Phe Leu Leu Val Thr Pro His Leu Thr His
885 890 895
Ala Lys Ala Phe Leu Arg Thr Leu Val Arg Gly Val Pro Glu Tyr Gly
900 905 910
Cys Val Val Asn Leu Arg Lys Thr Val Val Asn Phe Pro Val Glu Asp
915 920 925
Glu Ala Leu Gly Gly Ala Ala Phe Val Gln Leu Pro Ala His Gly Leu
930 935 940
Phe Pro Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp Thr Arg Thr Leu Glu Val Gln
945 950 955 960
Ser Asp Tyr Ser Ser Tyr Ala Arg Thr Ser Ile Arg Ala Ser Leu Thr
965 970 975
Phe Asn Arg Gly Phe Lys Ala Gly Arg Asn Met Arg Arg Lys Leu Phe
980 985 990
Gly Val Leu Arg Leu Lys Cys His Ser Leu Phe Leu Tyr Leu Gln Val
995 1000 1005
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1010 1015 1020
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1025 1030 1035
Asn Gln Gln Val Trp Lys Asn Pro Ala Phe Phe Leu Arg Val Ile
1040 1045 1050
Ser Asp Thr Ala Ser Leu Cys Tyr Ser Ile Leu Lys Ala Lys Asn
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1070 1075 1080
Ser Glu Ala Val Gln Trp Leu Cys His Gln Ala Phe Leu Leu Lys
1085 1090 1095
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1100 1105 1110
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Leu Ala Ala Leu Glu Ala Ala Ala Asn Pro Ala Leu Pro Ser Asp
1130 1135 1140
Phe Lys Thr Ile Leu Asp
1145
<210> 55
<211> 3393
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus rhTERT nucleic acid sequence (pGX1473)
<400> 55
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ctgccactgg ccaccttcgt gaggagactg ggacctgagg gccggcgcct ggtgcagagg 120
ggcgaccccg cagccttccg cgccctggtg gcccagtgcc tggtgtgcgt gccatgggac 180
gccaggcccc ctccagcagc accatccttc agacaggtga gctgcctgaa ggagctggtg 240
gccagggtgg tgcagagact gtgcgagagg ggcgccagga acgtgctggc cttcggcttc 300
gcactgctgg acggagccag gggcgggccc cctgaggcct tcaccacctc cgtgagaagc 360
tacctgccta acaccgtgac cgacaccctg aggggctccg gagcatgggg cctgctgctg 420
aggagagtgg gggacgacgt gctggtgcac ctgctggcaa ggtgcgccct gtacgtgctg 480
gtggcaccaa gctgcgcata ccaggtgtgc ggcccacccc tgtacgagct gtgcgcagca 540
acccaggcca gaccagcccc tcacgcatcc ggaaccagga ggggactggg ctgcgagagg 600
gcctggaacg gaagcgtgag agaggcagga gtgccactgg gactgcctgc accaggggcc 660
aggagacggc gcgggtctgc cggacggtcc cctccactgg caaagcgccc taggagagga 720
gccgcaccag agcctgagag gaccccagtg gggcagggaa gctgggcaca ccctggaagg 780
accagggggc catccgacag gggattctgc gtggtgagcc cagccaggcc cgcagaggag 840
gccacctctc tggagggagc cctgtccgga accaggcact ctcacccatc cgtgggaaga 900
cagcaccacg caggccctcc cagcacctct aggccaccct ccccatggga caccccatgc 960
ccactggtgt acgcagagac aaagcacttc ctgtactgca gcggagacaa ggagagactg 1020
cggccatctt tcctgctgtc cagcctgcgc ccctccctga ccggagcacg gcgcctggtg 1080
gagacaatct tcctgggaag caggccttgg atgccaggaa cccccaggag gcctcccagg 1140
ctgccacaga ggtactggca gatgcgccct ctgttcctgg agctgctggg aaaccacgca 1200
aggtgcccat acggagccct gctgcggacc cactgccctc tgagggcagc agcaacccca 1260
gcagcaggcg tgtgcgccag ggagaagccc caggggagcg tggccgcccc tgaggaggag 1320
gacaccgacc cacggcgcct ggtgcagctg ctgagacagc actcttcccc ctggcaggtg 1380
tacggattcc tgagggcatg cctgaggaga ctggtgcccc ctggcctgtg gggctccagg 1440
cacaacgagc ggcgcttcct gcgcaacacc aagaagttca tctctctggg caagcacgcc 1500
aagctgtccc tgcaggagct gacctggaag atgtctgtga gggactgcgc ctggctgagg 1560
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tacgtgaccg agacaacctt ccagaagaac tacctgttct tctaccgcaa gagcgtgtgg 1740
tctaagctgc agtctatcgg aatcaggcag cacctgaaga gggtgcagct gagagagctg 1800
tccgaggccg aggtgagaca gcacagggag gcccgccccg ccctgctgac ctccagactg 1860
cggttcctgc ctaagccaga cggcctgagg cccatcgtga acatggacta cgtggtggga 1920
gcacggacct tccggaggga gaagagggcc gagagactga ccagccgcgt gaagaccctg 1980
ttctctgtgc tgaactacga gagggcaagg aggcccggac tgctgggagc cagcgtgctg 2040
ggcctggacg acatccacag ggcatggagg gccttcgtgc tgcgcgtgag ggcacaggac 2100
ccaccccctg agctgtactt cgtgaaggtg gcagtgaccg gagcatacga caccatccca 2160
caggacaggc tgaccgaggt catcgcctct atcatcaagc ctcagaacac ctactgcgtg 2220
cggcgctacg cagtggtgca gaaggcagca cacggacacg tgaggaagac cttcaagaag 2280
cacgtgtcca ccctgaccga cctgcagccc tacatgagac agttcgtggc ccacctgcag 2340
gagacatcct ccctgaggga cgcagtggtc atcgagcagt ccagctctct gaacgaggcc 2400
tccagcggcc tgttcgacgt gttcctgagg ttcgtgtgca accacgtggt gagaatcgga 2460
ggcaagagct acgtgcagtg ccagggcatc ccccagggct ccatcctgag caccctgctg 2520
tgctctctgt gctacgggga catggagaac aagctgttcg ccggaatcag gagagacggc 2580
ctgctgctga gactggtggc agccttcctg ctggtgaccc ctcacctgac ccacgcaaag 2640
gccttcctgc ggaccctggt gcgcggggtg ccagagtacg gatgcgtggt gaacctgcgg 2700
aagaccgtgg tgaacttccc agtggaggac gaggccctgg gcggcgccgc cttcgtgcag 2760
ctgccagcac acgggctgtt cccatggtgc ggactgctgc tggacaccag aaccctggag 2820
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aggggcttca aggccgggag aaacatgcgg cgcaagctgt tcggggtgct gaggctgaag 2940
tgccacagcc tgttcctgta cctgcaggtg aactctctgc agaccgtgtg cactaacgtg 3000
tacaagatct tcctgctgca ggcctacaga ttccacgcct gcgtgctgca gctgcctttc 3060
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<210> 56
<211> 1131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus rhTERT amino acid sequence (pGX1473)
<400> 56
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Leu Val Ala Gln Cys Leu Val Cys Val Pro Trp Asp Ala Arg Pro Pro
50 55 60
Pro Ala Ala Pro Ser Phe Arg Gln Val Ser Cys Leu Lys Glu Leu Val
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Ala Arg Val Val Gln Arg Leu Cys Glu Arg Gly Ala Arg Asn Val Leu
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100 105 110
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115 120 125
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Asp Asp Val Leu Val His Leu Leu Ala Arg Cys Ala Leu Tyr Val Leu
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180 185 190
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195 200 205
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Ser Pro Ala Arg Pro Ala Glu Glu Ala Thr Ser Leu Glu Gly Ala Leu
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Pro Leu Val Tyr Ala Glu Thr Lys His Phe Leu Tyr Cys Ser Gly Asp
325 330 335
Lys Glu Arg Leu Arg Pro Ser Phe Leu Leu Ser Ser Leu Arg Pro Ser
340 345 350
Leu Thr Gly Ala Arg Arg Leu Val Glu Thr Ile Phe Leu Gly Ser Arg
355 360 365
Pro Trp Met Pro Gly Thr Pro Arg Arg Pro Pro Arg Leu Pro Gln Arg
370 375 380
Tyr Trp Gln Met Arg Pro Leu Phe Leu Glu Leu Leu Gly Asn His Ala
385 390 395 400
Arg Cys Pro Tyr Gly Ala Leu Leu Arg Thr His Cys Pro Leu Arg Ala
405 410 415
Ala Ala Thr Pro Ala Ala Gly Val Cys Ala Arg Glu Lys Pro Gln Gly
420 425 430
Ser Val Ala Ala Pro Glu Glu Glu Asp Thr Asp Pro Arg Arg Leu Val
435 440 445
Gln Leu Leu Arg Gln His Ser Ser Pro Trp Gln Val Tyr Gly Phe Leu
450 455 460
Arg Ala Cys Leu Arg Arg Leu Val Pro Pro Gly Leu Trp Gly Ser Arg
465 470 475 480
His Asn Glu Arg Arg Phe Leu Arg Asn Thr Lys Lys Phe Ile Ser Leu
485 490 495
Gly Lys His Ala Lys Leu Ser Leu Gln Glu Leu Thr Trp Lys Met Ser
500 505 510
Val Arg Asp Cys Ala Trp Leu Arg Arg Ser Pro Gly Val Gly Cys Val
515 520 525
Pro Ala Ala Glu His Arg Leu Arg Glu Glu Ile Leu Ala Lys Phe Leu
530 535 540
His Trp Leu Met Gly Val Tyr Val Val Glu Leu Leu Arg Ser Phe Phe
545 550 555 560
Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys Asn Tyr Leu Phe Phe Tyr Arg
565 570 575
Lys Ser Val Trp Ser Lys Leu Gln Ser Ile Gly Ile Arg Gln His Leu
580 585 590
Lys Arg Val Gln Leu Arg Glu Leu Ser Glu Ala Glu Val Arg Gln His
595 600 605
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625 630 635 640
Ala Arg Thr Phe Arg Arg Glu Lys Arg Ala Glu Arg Leu Thr Ser Arg
645 650 655
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690 695 700
Leu Tyr Phe Val Lys Val Ala Val Thr Gly Ala Tyr Asp Thr Ile Pro
705 710 715 720
Gln Asp Arg Leu Thr Glu Val Ile Ala Ser Ile Ile Lys Pro Gln Asn
725 730 735
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740 745 750
His Val Arg Lys Thr Phe Lys Lys His Val Ser Thr Leu Thr Asp Leu
755 760 765
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770 775 780
Leu Arg Asp Ala Val Val Ile Glu Gln Ser Ser Ser Leu Asn Glu Ala
785 790 795 800
Ser Ser Gly Leu Phe Asp Val Phe Leu Arg Phe Val Cys Asn His Val
805 810 815
Val Arg Ile Gly Gly Lys Ser Tyr Val Gln Cys Gln Gly Ile Pro Gln
820 825 830
Gly Ser Ile Leu Ser Thr Leu Leu Cys Ser Leu Cys Tyr Gly Asp Met
835 840 845
Glu Asn Lys Leu Phe Ala Gly Ile Arg Arg Asp Gly Leu Leu Leu Arg
850 855 860
Leu Val Ala Ala Phe Leu Leu Val Thr Pro His Leu Thr His Ala Lys
865 870 875 880
Ala Phe Leu Arg Thr Leu Val Arg Gly Val Pro Glu Tyr Gly Cys Val
885 890 895
Val Asn Leu Arg Lys Thr Val Val Asn Phe Pro Val Glu Asp Glu Ala
900 905 910
Leu Gly Gly Ala Ala Phe Val Gln Leu Pro Ala His Gly Leu Phe Pro
915 920 925
Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp Thr Arg Thr Leu Glu Val Gln Ser Asp
930 935 940
Tyr Ser Ser Tyr Ala Arg Thr Ser Ile Arg Ala Ser Leu Thr Phe Asn
945 950 955 960
Arg Gly Phe Lys Ala Gly Arg Asn Met Arg Arg Lys Leu Phe Gly Val
965 970 975
Leu Arg Leu Lys Cys His Ser Leu Phe Leu Tyr Leu Gln Val Asn Ser
980 985 990
Leu Gln Thr Val Cys Thr Asn Val Tyr Lys Ile Phe Leu Leu Gln Ala
995 1000 1005
Tyr Arg Phe His Ala Cys Val Leu Gln Leu Pro Phe Asn Gln Gln
1010 1015 1020
Val Trp Lys Asn Pro Ala Phe Phe Leu Arg Val Ile Ser Asp Thr
1025 1030 1035
Ala Ser Leu Cys Tyr Ser Ile Leu Lys Ala Lys Asn Ala Gly Met
1040 1045 1050
Ser Leu Gly Ala Lys Gly Ala Ala Gly Pro Leu Pro Ser Glu Ala
1055 1060 1065
Val Gln Trp Leu Cys His Gln Ala Phe Leu Leu Lys Leu Thr Arg
1070 1075 1080
His Arg Val Thr Tyr Val Pro Leu Leu Gly Ser Leu Arg Thr Ala
1085 1090 1095
Gln Thr Gln Leu Ser Arg Lys Leu Pro Gly Thr Thr Leu Ala Ala
1100 1105 1110
Leu Glu Ala Ala Ala Asn Pro Ala Leu Pro Ser Asp Phe Lys Thr
1115 1120 1125
Ile Leu Asp
1130
<210> 57
<211> 3393
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mut rhTERT nucelic acid sequence (pGX1447)
<400> 57
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tatctgccca ataccgtgac agatgccctg agaggcagcg gagcatgggg cctgctgctg 420
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gccacctccc tggagggcgc cctgtctggc acaagacaca gccacccatc cgtgggcagg 900
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ctgccacaga ggtactggca gatgcgccct ctgttcctgg agctgctggg caatcacgcc 1200
cagtgcccat atggcgccct gctgaagaca cactgtccac tgagggcagc agtgacccca 1260
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aagctgtctc tgagggagct gacctggaag atgagcgtgc gcgactgcgc ctggctgcgg 1560
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gccaagtttc tgcactggct gatgagcgtg tacgtggtgg agctgctgcg gtccttcttt 1680
tatgtgaccg agacaacctt ccagaagaac tacctgttct tttataggaa gagcgtgtgg 1740
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tccgaggcag aggcaaggca gcacagggag gcccggccaa cactgctggc cagcaggctg 1860
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cacgtgtcta ccctgacaga cctgcagcca tacatgaggc agttcgtggc acacctgcag 2340
gagacaagcc ccctgaggga cgcagtggtc atcgagcagt cctctagcct gaacgagaca 2400
agcagcggcc tgttcgacgt gttcctgaga ttcgtgtgcc accacgccgt gaggatcggc 2460
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ctgccagcac acggcctgtt cccttggtgt ggcctgctgc tggacacccg gacactggag 2820
gtgcagtccg attacagctc ctatgcacgc accagcatca gggcatccct gaccttcaac 2880
agaggcttca aggccggcag gaatatgaga aggaagctgt ttggcgtgct gagactgaag 2940
tgccactctc tgttcctgta cctgcaggtg aacagcctgc agaccgtgtg cacaaacgtg 3000
tacaagatcc tgctgctgca ggcctatcgg tttcacgcct gcgtgctgca gctgcctttc 3060
caccagcaag tgtggaagaa cccagccttc tttctgagag tgatctctga taccgccagc 3120
ctgtgctact ccatcctgaa ggccaagaat gccggcatgt ctctgggagc aaagggagca 3180
gcaggaccac tgccaagcga ggcagtgcag tggctgtgcc accaggcctt cctgctgaag 3240
ctgacccagc acagagtgac atatgtgcca ctgctgggct ccctgaggac cgcacagaca 3300
cagctgtctc ggaagctgcc tggcaccaca ctggccgctc tggaggctgc tgctaatccc 3360
gccctgccat ccgacttcaa aacaatcctg gac 3393
<210> 58
<211> 1131
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> mut rhTERT amino acid sequence (pGX1447)
<400> 58
Pro Arg Ala Pro Arg Cys Arg Ala Val Arg Ser Leu Leu Arg Ser Arg
1 5 10 15
Tyr Arg Glu Val Leu Pro Leu Ala Thr Phe Val Gln Arg Leu Gly Pro
20 25 30
Glu Gly Trp Arg Leu Val Gln Arg Gly Asp Pro Ala Ala Phe Arg Ala
35 40 45
Leu Val Ala Gln Cys Leu Val Cys Val Pro Trp Asp Ala Arg Pro Pro
50 55 60
Pro Ala Ala Pro Ser Phe Arg Gln Val Ser Cys Leu Lys Glu Leu Val
65 70 75 80
Ala Arg Val Leu Gln Arg Leu Cys Glu Arg Gly Ala Arg Asn Val Leu
85 90 95
Ala Phe Gly Phe Ala Leu Leu Asp Gly Ala Arg Gly Gly Pro Pro Glu
100 105 110
Ala Phe Thr Thr Ser Val Arg Ser Tyr Leu Pro Asn Thr Val Thr Asp
115 120 125
Ala Leu Arg Gly Ser Gly Ala Trp Gly Leu Leu Leu Arg Arg Val Gly
130 135 140
Asp Asp Val Leu Val His Leu Leu Ala Arg Cys Ala Leu Phe Val Leu
145 150 155 160
Val Ala Pro Ser Cys Ala Tyr Gln Val Cys Gly Pro Pro Leu Tyr Glu
165 170 175
Leu Gly Ala Ala Thr Gln Gly Arg Pro Ala Ala His Ala Ser Gly Thr
180 185 190
Arg Arg Gly Leu Gly Cys Glu Leu Ala Trp Asn Arg Ser Val Arg Glu
195 200 205
Ala Gly Val Pro Met Gly Leu Pro Ala Pro Gly Ala Arg Arg Arg Arg
210 215 220
Gly Ser Ala Asn Arg Ser Leu Pro Leu Pro Lys Arg Pro Arg Arg Gly
225 230 235 240
Ala Ala Pro Glu Pro Glu Arg Thr Pro Val Gly Gln Gly Ser Trp Ala
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Pro Leu Val Tyr Ala Glu Thr Lys His Phe Leu Tyr Ser Ser Gly Asp
325 330 335
Lys Glu Gln Leu Arg Pro Ser Phe Leu Leu Asn Ser Leu Arg Pro Ser
340 345 350
Leu Thr Gly Ala Arg Arg Leu Val Glu Thr Ile Phe Leu Gly Ser Arg
355 360 365
Pro Trp Met Pro Gly Thr Pro Arg Arg Pro Pro Arg Leu Pro Gln Arg
370 375 380
Tyr Trp Gln Met Arg Pro Leu Phe Leu Glu Leu Leu Gly Asn His Ala
385 390 395 400
Gln Cys Pro Tyr Gly Ala Leu Leu Lys Thr His Cys Pro Leu Arg Ala
405 410 415
Ala Val Thr Pro Ala Ala Gly Val Cys Ala Arg Glu Lys Pro Gln Gly
420 425 430
Ser Val Ala Ala Pro Glu Glu Glu Asp Thr Asp Arg Arg Arg Leu Val
435 440 445
Gln Leu Leu Arg Gln His Ser Ser Pro Trp Gln Val Tyr Gly Phe Val
450 455 460
Arg Ala Cys Leu Arg Arg Leu Val Pro Pro Gly Leu Trp Gly Ser Arg
465 470 475 480
His Asn Gln Arg Arg Phe Leu Arg Asn Thr Lys Lys Phe Ile Ser Leu
485 490 495
Gly Lys His Ala Lys Leu Ser Leu Arg Glu Leu Thr Trp Lys Met Ser
500 505 510
Val Arg Asp Cys Ala Trp Leu Arg Lys Ser Pro Gly Val Gly Cys Val
515 520 525
Pro Ala Ala Glu His Arg Leu Arg Glu Glu Ile Leu Ala Lys Phe Leu
530 535 540
His Trp Leu Met Ser Val Tyr Val Val Glu Leu Leu Arg Ser Phe Phe
545 550 555 560
Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys Asn Tyr Leu Phe Phe Tyr Arg
565 570 575
Lys Ser Val Trp Ser Lys Leu Gln Ser Ile Gly Ile Arg Gln His Leu
580 585 590
Lys Arg Val Gln Leu Arg Glu Leu Ser Glu Ala Glu Ala Arg Gln His
595 600 605
Arg Glu Ala Arg Pro Thr Leu Leu Ala Ser Arg Leu Arg Phe Leu Pro
610 615 620
Lys Pro Asp Gly Leu Arg Pro Ile Val Asn Met Asp Tyr Val Val Gly
625 630 635 640
Ala Arg Thr Phe Arg Arg Glu Lys Arg Ala Glu Arg Leu Ala Ser Arg
645 650 655
Val Lys Ala Leu Phe Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg Pro
660 665 670
Gly Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile His Arg Ala
675 680 685
Trp Arg Asn Phe Val Leu Arg Val Arg Ala Gln Asp Pro Pro Pro Lys
690 695 700
Leu Tyr Phe Val Lys Val Asp Val Met Gly Ala Tyr Asp Thr Ile Pro
705 710 715 720
Gln Asp Arg Leu Thr Glu Val Ile Ala Ser Ile Ile Lys Pro Gln Asn
725 730 735
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740 745 750
His Val Arg Lys Thr Phe Lys Ser His Val Ser Thr Leu Thr Asp Leu
755 760 765
Gln Pro Tyr Met Arg Gln Phe Val Ala His Leu Gln Glu Thr Ser Pro
770 775 780
Leu Arg Asp Ala Val Val Ile Glu Gln Ser Ser Ser Leu Asn Glu Thr
785 790 795 800
Ser Ser Gly Leu Phe Asp Val Phe Leu Arg Phe Val Cys His His Ala
805 810 815
Val Arg Ile Gly Gly Lys Ser Tyr Val Gln Cys Gln Gly Ile Pro Gln
820 825 830
Gly Ser Ile Leu Ser Thr Leu Leu Cys Ser Leu Cys Tyr Gly Asp Met
835 840 845
Glu Asn Lys Leu Phe Ala Gly Met Arg Arg Asp Gly Leu Leu Leu Arg
850 855 860
Leu Val Asp Asp Phe Leu Leu Val Thr Pro His Leu Thr His Ala Lys
865 870 875 880
Ala Phe Leu Arg Thr Leu Val Arg Gly Val Pro Glu Tyr Gly Cys Val
885 890 895
Val Asn Leu Arg Lys Thr Val Val Asn Phe Pro Val Glu Asp Glu Ala
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Leu Gly Gly Ala Ala Phe Val Gln Leu Pro Ala His Gly Leu Phe Pro
915 920 925
Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp Thr Arg Thr Leu Glu Val Gln Ser Asp
930 935 940
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945 950 955 960
Arg Gly Phe Lys Ala Gly Arg Asn Met Arg Arg Lys Leu Phe Gly Val
965 970 975
Leu Arg Leu Lys Cys His Ser Leu Phe Leu Tyr Leu Gln Val Asn Ser
980 985 990
Leu Gln Thr Val Cys Thr Asn Val Tyr Lys Ile Leu Leu Leu Gln Ala
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Tyr Arg Phe His Ala Cys Val Leu Gln Leu Pro Phe His Gln Gln
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Val Trp Lys Asn Pro Ala Phe Phe Leu Arg Val Ile Ser Asp Thr
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Leu Glu Ala Ala Ala Asn Pro Ala Leu Pro Ser Asp Phe Lys Thr
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Ile Leu Asp
1130
<210> 59
<211> 2202
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus FAP nucleic acid sequence
<400> 59
ctgaggcctt ctagagtgca caactccgag ggcccaacca gagccctgac actgaaggac 60
atcctgaatg gcaccttttc ttacaagaca ttctttccca actggatctc tggccaggag 120
tatctgcacc agagcgccga taacaacatc atcctgtaca acatcgagac aggcgagagc 180
tacacaatcc tgtccaactc taccatgaag agcgtgaacg cctccaatta cggcctgagc 240
cctgacaggc agttcgccta cctggagtct gattatagca agctgtggag atactcctat 300
accgccacat accacatcta tgatctgatc aatggcgagt ttgtgcggga gaacgagctg 360
ccccgcccta tccagtacct gtgctggagc cccgtgggca gcaagctggc atacgtgtat 420
cagaacaata tctatctgaa gcagaggccc agggaccctc ccttccagat cacatccaac 480
ggcaaggaga ataagatctt taacggcatc cccgattggg tgtacgagga ggagatgctg 540
gccaccaagt atgccctgtg gtggagccct aatggcaagt tcctggccta cgccgagttt 600
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accatcaata tcccatatcc caaggcagga gcaaagaacc caacagtgcg cgtgttcatc 720
atcgatacca catacccaga gcacgtggga ccaaaggagg tgcctgtgcc agccatgatc 780
gccagctccg actactactt cagctggctg acctgggtga cagatgagag gatctgtctg 840
cagtggctga agagaatcca gaacgtgagc gtgctgtcta tctgcgactt cagggaggat 900
tggaacacct gggactgtcc taagacacag gagcacatcg aggagagcag aaccggatgg 960
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atcttttccg acaaggatgg ctacaagcac atccactata tcaaggatac cgtggagaat 1080
gccatccaga tcacatctgg caagtgggag gccatcaaca tcttcagggt gacccaggac 1140
agcctgttct actcctctaa tgagtttgag ggctacccag gcaggagaaa catctataga 1200
atcagcatcg gctcctaccc acccagcaag aagtgcgtga cctgtcacct gcggaaggag 1260
aggtgccagt actatacagc cagcttttcc gattacgcca agtactatgc cctgatctgt 1320
tatggccccg gcatccctat ctccaccctg cacgacggcc ggacagatca ggagatcaag 1380
atcctggagg agaataagga gctggagaat gccctgaaga acatccagct gcctaaggag 1440
gagatcaaga agctggaggt ggacggcatc accctgtggt acaagatgat cctgcctcca 1500
cagttcgatc ggtctaagaa gtatcccctg ctgatccagg tgtacggcgg accttgctct 1560
cagagcgtgc gcagcgtgtt ttccatctct tggatctcct acctggcctc taaggagggc 1620
atcgtggtgg ccctggtgga cggaagggga accgccttcc agggcgataa gctgctgtac 1680
gccgtgtatc gcaagctggg cgtgtacgag gtggaggacc agatcacagc cgtgcggaag 1740
ttcatcgaga tgggctttat cgatgagaag aggatcgcaa tctggggatg ggcatacggc 1800
ggatatgtga gctccctggc cctggcatct ggaaccggcc tgttcaagtg tggcatcgcc 1860
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cacatgacac acttcctgaa gcagtgcttt agcctgtccg ac 2202
<210> 60
<211> 734
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus FAP amino acid sequence
<400> 60
Leu Arg Pro Ser Arg Val His Asn Ser Glu Gly Pro Thr Arg Ala Leu
1 5 10 15
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35 40 45
Asn Ile Ile Leu Tyr Asn Ile Glu Thr Gly Glu Ser Tyr Thr Ile Leu
50 55 60
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65 70 75 80
Pro Asp Arg Gln Phe Ala Tyr Leu Glu Ser Asp Tyr Ser Lys Leu Trp
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100 105 110
Glu Phe Val Arg Glu Asn Glu Leu Pro Arg Pro Ile Gln Tyr Leu Cys
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Gly Lys Glu Asn Lys Ile Phe Asn Gly Ile Pro Asp Trp Val Tyr Glu
165 170 175
Glu Glu Met Leu Ala Thr Lys Tyr Ala Leu Trp Trp Ser Pro Asn Gly
180 185 190
Lys Phe Leu Ala Tyr Ala Glu Phe Asn Asp Thr Asp Ile Pro Val Ile
195 200 205
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210 215 220
Pro Tyr Pro Lys Ala Gly Ala Lys Asn Pro Thr Val Arg Val Phe Ile
225 230 235 240
Ile Asp Thr Thr Tyr Pro Glu His Val Gly Pro Lys Glu Val Pro Val
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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305 310 315 320
Ala Gly Gly Phe Phe Val Ser Thr Pro Val Phe Ser Ser Asp Ala Ile
325 330 335
Ser Tyr Tyr Lys Ile Phe Ser Asp Lys Asp Gly Tyr Lys His Ile His
340 345 350
Tyr Ile Lys Asp Thr Val Glu Asn Ala Ile Gln Ile Thr Ser Gly Lys
355 360 365
Trp Glu Ala Ile Asn Ile Phe Arg Val Thr Gln Asp Ser Leu Phe Tyr
370 375 380
Ser Ser Asn Glu Phe Glu Gly Tyr Pro Gly Arg Arg Asn Ile Tyr Arg
385 390 395 400
Ile Ser Ile Gly Ser Tyr Pro Pro Ser Lys Lys Cys Val Thr Cys His
405 410 415
Leu Arg Lys Glu Arg Cys Gln Tyr Tyr Thr Ala Ser Phe Ser Asp Tyr
420 425 430
Ala Lys Tyr Tyr Ala Leu Ile Cys Tyr Gly Pro Gly Ile Pro Ile Ser
435 440 445
Thr Leu His Asp Gly Arg Thr Asp Gln Glu Ile Lys Ile Leu Glu Glu
450 455 460
Asn Lys Glu Leu Glu Asn Ala Leu Lys Asn Ile Gln Leu Pro Lys Glu
465 470 475 480
Glu Ile Lys Lys Leu Glu Val Asp Gly Ile Thr Leu Trp Tyr Lys Met
485 490 495
Ile Leu Pro Pro Gln Phe Asp Arg Ser Lys Lys Tyr Pro Leu Leu Ile
500 505 510
Gln Val Tyr Gly Gly Pro Cys Ser Gln Ser Val Arg Ser Val Phe Ser
515 520 525
Ile Ser Trp Ile Ser Tyr Leu Ala Ser Lys Glu Gly Ile Val Val Ala
530 535 540
Leu Val Asp Gly Arg Gly Thr Ala Phe Gln Gly Asp Lys Leu Leu Tyr
545 550 555 560
Ala Val Tyr Arg Lys Leu Gly Val Tyr Glu Val Glu Asp Gln Ile Thr
565 570 575
Ala Val Arg Lys Phe Ile Glu Met Gly Phe Ile Asp Glu Lys Arg Ile
580 585 590
Ala Ile Trp Gly Trp Ala Tyr Gly Gly Tyr Val Ser Ser Leu Ala Leu
595 600 605
Ala Ser Gly Thr Gly Leu Phe Lys Cys Gly Ile Ala Val Ala Pro Val
610 615 620
Ser Ser Trp Glu Tyr Tyr Ala Ser Ile Tyr Thr Glu Arg Phe Met Gly
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Leu Pro Thr Lys Ser Asp Asn Leu Glu His Tyr Lys Asn Ser Thr Val
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Met Ala Arg Ala Glu Tyr Phe Arg Asn Val Asp Tyr Leu Leu Ile His
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675 680 685
Lys Ala Leu Val Asn Ala Gln Val Asp Phe Gln Ala Met Trp Tyr Ser
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Asp Gln Asn His Gly Ile Ser Gly Leu Ser Thr Lys His Leu Tyr Thr
705 710 715 720
His Met Thr His Phe Leu Lys Gln Cys Phe Ser Leu Ser Asp
725 730
<210> 61
<211> 2034
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus FSHR nucleic acid sequence
<400> 61
tgtcatcata ggatttgtca ttgctctaat agggtgttcc tgtgccagga gtccaaggtc 60
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ctgagagtga tccctaaagg cgcattcagt ggctttgggg acctggagaa aatcgaaatt 180
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cacacagtgg agagaaacag cttcatgggg ctgtcctttg aatctgtcat cctgtggctg 480
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ctggagaatc tgaagaaact gagagccagg tcaacttata acctgaagaa actgccaagc 720
ctggagaagt tcgtggccct gatggaagct tcactgacct accccagcca ctgctgtgct 780
tttgcaaatt ggcggagaca gatctccgag ctgcatccaa tctgtaacaa atctattctg 840
cggcaggaag tggacgatat gacccaggca cgcgggcagc gagtctccct ggccgaggac 900
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<210> 62
<211> 678
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus FSHR amino acid sequence
<400> 62
Cys His His Arg Ile Cys His Cys Ser Asn Arg Val Phe Leu Cys Gln
1 5 10 15
Glu Ser Lys Val Thr Glu Ile Pro Ser Asp Leu Pro Arg Asn Ala Val
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Glu Leu Arg Phe Val Leu Thr Lys Leu Arg Val Ile Pro Lys Gly Ala
35 40 45
Phe Ser Gly Phe Gly Asp Leu Glu Lys Ile Glu Ile Ser Gln Asn Asp
50 55 60
Val Leu Glu Val Ile Glu Ala Asn Val Phe Ser Asn Leu Pro Lys Leu
65 70 75 80
His Glu Ile Arg Ile Glu Lys Ala Asn Asn Leu Leu Tyr Ile Asp Pro
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Glu Ala Phe Gln Asn Leu Pro Asn Leu Arg Tyr Leu Leu Ile Ser Asn
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Thr Gly Ile Lys His Leu Pro Ala Val His Lys Ile Gln Ser Leu Gln
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Lys Val Leu Leu Asp Ile Gln Asp Asn Ile Asn Ile His Thr Val Glu
130 135 140
Arg Asn Ser Phe Met Gly Leu Ser Phe Glu Ser Val Ile Leu Trp Leu
145 150 155 160
Asn Lys Asn Gly Ile Gln Glu Ile His Asn Cys Ala Phe Asn Gly Thr
165 170 175
Gln Leu Asp Glu Leu Asn Leu Ser Asp Asn Asn Asn Leu Glu Glu Leu
180 185 190
Pro Asn Asp Val Phe Gln Gly Ala Ser Gly Pro Val Ile Leu Asp Ile
195 200 205
Ser Arg Thr Arg Ile His Ser Leu Pro Ser Tyr Gly Leu Glu Asn Leu
210 215 220
Lys Lys Leu Arg Ala Arg Ser Thr Tyr Asn Leu Lys Lys Leu Pro Ser
225 230 235 240
Leu Glu Lys Phe Val Ala Leu Met Glu Ala Ser Leu Thr Tyr Pro Ser
245 250 255
His Cys Cys Ala Phe Ala Asn Trp Arg Arg Gln Ile Ser Glu Leu His
260 265 270
Pro Ile Cys Asn Lys Ser Ile Leu Arg Gln Glu Val Asp Asp Met Thr
275 280 285
Gln Ala Arg Gly Gln Arg Val Ser Leu Ala Glu Asp Asp Glu Ser Ser
290 295 300
Tyr Ser Arg Gly Phe Asp Met Met Tyr Ser Glu Phe Asp Phe Asp Leu
305 310 315 320
Cys Asn Glu Val Val Asp Val Thr Cys Ser Pro Lys Pro Asp Ala Phe
325 330 335
Asn Pro Cys Glu Asp Ile Met Gly Tyr Asn Ile Leu Arg Val Leu Ile
340 345 350
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355 360 365
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Ile Asp Trp Gln Thr Gly Ala Gly Cys Asp Ala Ala Gly Phe Phe Thr
420 425 430
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435 440 445
Ala Arg Ala His Thr Ile Thr His Ala Met Gln Leu Asp Cys Lys Val
450 455 460
Gln Leu Arg His Ala Ala Ser Val Met Leu Val Gly Trp Ile Phe Ala
465 470 475 480
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Val Ser Ile Cys Leu Pro Met Asp Ile Asp Ser Pro Leu Ser Gln Leu
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Tyr Val Met Ser Leu Leu Val Leu Asn Val Leu Ala Phe Val Val Ile
515 520 525
Cys Gly Cys Tyr Thr His Ile Tyr Leu Thr Val Arg Asn Pro Asn Ile
530 535 540
Val Ser Ser Ser Ser Asp Thr Lys Ile Ala Lys Arg Met Ala Met Leu
545 550 555 560
Ile Phe Thr Asp Phe Leu Cys Met Ala Pro Ile Ser Phe Phe Ala Ile
565 570 575
Ser Ala Ser Leu Lys Val Pro Leu Ile Thr Val Ser Lys Ser Lys Ile
580 585 590
Leu Leu Val Leu Phe Tyr Pro Ile Asn Ser Cys Ala Asn Pro Phe Leu
595 600 605
Tyr Ala Ile Phe Thr Lys Asn Phe Arg Arg Asp Phe Phe Ile Leu Leu
610 615 620
Ser Lys Phe Gly Cys Tyr Glu Met Gln Ala Gln Ile Tyr Arg Thr Glu
625 630 635 640
Thr Ser Ser Thr Ala His Asn Ser His Pro Arg Asn Gly His Cys Ser
645 650 655
Ser Ala Pro Arg Val Thr Asn Gly Ser Asn Tyr Thr Leu Val Pro Leu
660 665 670
Ser His Leu Ala Gln Asn
675
<210> 63
<211> 780
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus PSA nucleic acid sequence
<400> 63
tgggtcctgg tggtgttcct gactctgagc gtcacatgga tcggcgccgc tccactgatt 60
ctgagccgcc tggtgggcgg gtgggagtgc gaaaagcact cccagccatg gcaggtgctg 120
gtcgcttcta ggggccgagc agtgtgcgga ggcgtgctgg tccaccctca gtgggtcctg 180
accgcagccc attgtatccg acagaagagc gtgattctgc tggggcgaca ccagccattc 240
taccccgagg acacaggaca ggtgttccag gtctctcaca gttttcccca tcctctgtac 300
aacatgagcc tgctgaaaaa cagatatctg ggacctggcg acgatagctc ccatgatctg 360
atgctgctga ggctgtccga gccagccgaa ctgactgacg ctgtgcaggt cctggatctg 420
cccacccagg agcctgccct gggaaccaca tgttatgctt caggctgggg gagcatcgaa 480
ccagaggaac atctgactcc caagaaactg cagtgcgtgg acctgcacct gattagtaac 540
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gtcctgcagg gcatcacctc ttggggcagt cagccttgtg ccctgcctcg gagaccaagt 720
ctgtacacta aggtggtccg gtataggaaa tggattcagg acactattgc cgctaacccc 780
<210> 64
<211> 260
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus PSA amino acid sequence
<400> 64
Trp Val Leu Val Val Phe Leu Thr Leu Ser Val Thr Trp Ile Gly Ala
1 5 10 15
Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Leu Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu Lys
20 25 30
His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg Gly Arg Ala Val
35 40 45
Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His
50 55 60
Cys Ile Arg Gln Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg His Gln Pro Phe
65 70 75 80
Tyr Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser His Ser Phe Pro
85 90 95
His Pro Leu Tyr Asn Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg Tyr Leu Gly Pro
100 105 110
Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu Pro
115 120 125
Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val Gln Val Leu Asp Leu Pro Thr Gln Glu
130 135 140
Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile Glu
145 150 155 160
Pro Glu Glu His Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys Val Asp Leu His
165 170 175
Leu Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val His Ser Gln Lys Val Thr
180 185 190
Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Ser Trp Met Gly Gly Lys Ser Thr Cys
195 200 205
Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Asp Gly Val Leu Gln Gly
210 215 220
Ile Thr Ser Trp Gly Ser Gln Pro Cys Ala Leu Pro Arg Arg Pro Ser
225 230 235 240
Leu Tyr Thr Lys Val Val Arg Tyr Arg Lys Trp Ile Gln Asp Thr Ile
245 250 255
Ala Ala Asn Pro
260
<210> 65
<211> 2274
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus PSMA nucleic acid sequence
<400> 65
tggaacgcac tgcatgagac tgattctgct gtcgcactgg gacggagacc ccggtggctg 60
tgcgctggag cactggtgct ggccggcggg ggattcctgc tgggattcct gtttggctgg 120
tttatcaaaa gctccagcga ggctaccaat attaccccta agcacaataa gaaagcattc 180
ctggatgaac tgaaagccga gaacatcaag aaattcctgt acaacttcac aagaattcca 240
catctggctg gcactgagca gaacttccag ctggcaaaac agatccagag tcagtggaag 300
gaatttgggc tggactcagt ggagctgacc cactacgatg tcctgctgtc ctatccaaat 360
aagactcatc ccaactacat ctctatcatt aacgaagacg gaaatgagat tttcaacacc 420
tctctgtttg aaccccctcc acccggctat gagaatgtca gtgacgtggt ccctccattc 480
tcagccttca gcccccaggg gatgcctgag ggagatctgg tgtacgtcaa ttatgctaga 540
acagaagact tctttaagct ggagagggat atgaaaatca actgttccgg caagatcgtg 600
attgcccggt acgggaaggt gttcagagga aataaggtca aaaacgctca gctggccgga 660
gctaccggcg tgatcctgta cagcgacccc gctgattatt ttgcacctgg cgtgaagtcc 720
tatccagacg gatggaatct gcccggcggg ggagtgcaga ggggaaacat cctgaacctg 780
aatggagccg gcgatcctct gactccagga taccccgcca acgaatacgc ttatcgccgg 840
ggaattgcag aggccgtggg cctgcctagc atcccagtcc atcccattgg ctattacgat 900
gcccagaagc tgctggagaa aatgggcggg agcgctcccc ctgactctag ttggaagggc 960
tccctgaaag tgccttacaa tgtcgggcca ggattcactg ggaacttttc tacccagaag 1020
gtgaaaatgc acatccatag taccagcgag gtgacacgaa tctacaacgt cattggcacc 1080
ctgagaggcg ccgtggagcc tgatcgctat gtcattctgg gaggccacag agactcatgg 1140
gtgttcgggg gaatcgatcc acagagcgga gcagctgtgg tccatgaaat tgtgcgcagc 1200
tttgggaccc tgaagaaaga gggatggcga cccaggcgca caatcctgtt cgcatcctgg 1260
gacgccgagg aatttgggct gctgggcagc acagaatggg ccgaggaaaa ttctcgcctg 1320
ctgcaggagc gaggggtggc ttacatcaat gcagactcaa gcattgaagg aaactatacc 1380
ctgcgggtgg attgcacacc cctgatgtac agtctggtct ataacctgac aaaggagctg 1440
aaatcacctg acgagggctt cgaagggaaa agcctgtacg aatcctggac tgagaagagc 1500
ccatcccccg aattcagcgg catgcctagg atctctaagc tgggcagtgg gaacgatttt 1560
gaggtgttct ttcagcgcct gggaattgcc tctggccgag ctcggtacac aaaaaattgg 1620
gagactaaca agttctcctc ttacccactg tatcacagcg tgtacgagac ttatgaactg 1680
gtcgagaaat tctacgaccc cacttttaag tatcatctga ccgtggcaca ggtcaggggc 1740
gggatggtgt tcgaactggc caatagcatc gtcctgccat ttgactgtcg agattacgct 1800
gtggtcctgc ggaagtacgc agacaagatc tataacatct ccatgaagca cccccaggag 1860
atgaaggcct attctgtgag tttcgattcc ctgttttctg ccgtcaaaaa tttcaccgaa 1920
atcgctagta agttttcaga gcgcctgcag gacctggata agtccaatcc catcctgctg 1980
cggattatga acgatcagct gatgttcctg gaaagagcct ttatcgaccc tctgggcctg 2040
cctgatagac cattctacag gcacgtgatc tacgcaccta gttcacataa caagtacgcc 2100
ggcgagtctt tcccagggat ctatgacgct ctgtttgata ttgaatcaaa ggtggacccc 2160
agcaaagcat ggggcgaggt caagagacag atcagcattg cagcctttac agtgcaggcc 2220
gccgccgaaa ccctgtccga agtcgcttac ccatacgatg tccccgatta cgca 2274
<210> 66
<211> 749
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus PSMA amino acid sequence
<400> 66
Trp Asn Ala Leu His Glu Thr Asp Ser Ala Val Ala Leu Gly Arg Arg
1 5 10 15
Pro Arg Trp Leu Cys Ala Gly Ala Leu Val Leu Ala Gly Gly Gly Phe
20 25 30
Leu Leu Gly Phe Leu Phe Gly Trp Phe Ile Lys Ser Ser Ser Glu Ala
35 40 45
Thr Asn Ile Thr Pro Lys His Asn Lys Lys Ala Phe Leu Asp Glu Leu
50 55 60
Lys Ala Glu Asn Ile Lys Lys Phe Leu Tyr Asn Phe Thr Arg Ile Pro
65 70 75 80
His Leu Ala Gly Thr Glu Gln Asn Phe Gln Leu Ala Lys Gln Ile Gln
85 90 95
Ser Gln Trp Lys Glu Phe Gly Leu Asp Ser Val Glu Leu Thr His Tyr
100 105 110
Asp Val Leu Leu Ser Tyr Pro Asn Lys Thr His Pro Asn Tyr Ile Ser
115 120 125
Ile Ile Asn Glu Asp Gly Asn Glu Ile Phe Asn Thr Ser Leu Phe Glu
130 135 140
Pro Pro Pro Pro Gly Tyr Glu Asn Val Ser Asp Val Val Pro Pro Phe
145 150 155 160
Ser Ala Phe Ser Pro Gln Gly Met Pro Glu Gly Asp Leu Val Tyr Val
165 170 175
Asn Tyr Ala Arg Thr Glu Asp Phe Phe Lys Leu Glu Arg Asp Met Lys
180 185 190
Ile Asn Cys Ser Gly Lys Ile Val Ile Ala Arg Tyr Gly Lys Val Phe
195 200 205
Arg Gly Asn Lys Val Lys Asn Ala Gln Leu Ala Gly Ala Thr Gly Val
210 215 220
Ile Leu Tyr Ser Asp Pro Ala Asp Tyr Phe Ala Pro Gly Val Lys Ser
225 230 235 240
Tyr Pro Asp Gly Trp Asn Leu Pro Gly Gly Gly Val Gln Arg Gly Asn
245 250 255
Ile Leu Asn Leu Asn Gly Ala Gly Asp Pro Leu Thr Pro Gly Tyr Pro
260 265 270
Ala Asn Glu Tyr Ala Tyr Arg Arg Gly Ile Ala Glu Ala Val Gly Leu
275 280 285
Pro Ser Ile Pro Val His Pro Ile Gly Tyr Tyr Asp Ala Gln Lys Leu
290 295 300
Leu Glu Lys Met Gly Gly Ser Ala Pro Pro Asp Ser Ser Trp Lys Gly
305 310 315 320
Ser Leu Lys Val Pro Tyr Asn Val Gly Pro Gly Phe Thr Gly Asn Phe
325 330 335
Ser Thr Gln Lys Val Lys Met His Ile His Ser Thr Ser Glu Val Thr
340 345 350
Arg Ile Tyr Asn Val Ile Gly Thr Leu Arg Gly Ala Val Glu Pro Asp
355 360 365
Arg Tyr Val Ile Leu Gly Gly His Arg Asp Ser Trp Val Phe Gly Gly
370 375 380
Ile Asp Pro Gln Ser Gly Ala Ala Val Val His Glu Ile Val Arg Ser
385 390 395 400
Phe Gly Thr Leu Lys Lys Glu Gly Trp Arg Pro Arg Arg Thr Ile Leu
405 410 415
Phe Ala Ser Trp Asp Ala Glu Glu Phe Gly Leu Leu Gly Ser Thr Glu
420 425 430
Trp Ala Glu Glu Asn Ser Arg Leu Leu Gln Glu Arg Gly Val Ala Tyr
435 440 445
Ile Asn Ala Asp Ser Ser Ile Glu Gly Asn Tyr Thr Leu Arg Val Asp
450 455 460
Cys Thr Pro Leu Met Tyr Ser Leu Val Tyr Asn Leu Thr Lys Glu Leu
465 470 475 480
Lys Ser Pro Asp Glu Gly Phe Glu Gly Lys Ser Leu Tyr Glu Ser Trp
485 490 495
Thr Glu Lys Ser Pro Ser Pro Glu Phe Ser Gly Met Pro Arg Ile Ser
500 505 510
Lys Leu Gly Ser Gly Asn Asp Phe Glu Val Phe Phe Gln Arg Leu Gly
515 520 525
Ile Ala Ser Gly Arg Ala Arg Tyr Thr Lys Asn Trp Glu Thr Asn Lys
530 535 540
Phe Ser Ser Tyr Pro Leu Tyr His Ser Val Tyr Glu Thr Tyr Glu Leu
545 550 555 560
Val Glu Lys Phe Tyr Asp Pro Thr Phe Lys Tyr His Leu Thr Val Ala
565 570 575
Gln Val Arg Gly Gly Met Val Phe Glu Leu Ala Asn Ser Ile Val Leu
580 585 590
Pro Phe Asp Cys Arg Asp Tyr Ala Val Val Leu Arg Lys Tyr Ala Asp
595 600 605
Lys Ile Tyr Asn Ile Ser Met Lys His Pro Gln Glu Met Lys Ala Tyr
610 615 620
Ser Val Ser Phe Asp Ser Leu Phe Ser Ala Val Lys Asn Phe Thr Glu
625 630 635 640
Ile Ala Ser Lys Phe Ser Glu Arg Leu Gln Asp Leu Asp Lys Ser Asn
645 650 655
Pro Ile Leu Leu Arg Ile Met Asn Asp Gln Leu Met Phe Leu Glu Arg
660 665 670
Ala Phe Ile Asp Pro Leu Gly Leu Pro Asp Arg Pro Phe Tyr Arg His
675 680 685
Val Ile Tyr Ala Pro Ser Ser His Asn Lys Tyr Ala Gly Glu Ser Phe
690 695 700
Pro Gly Ile Tyr Asp Ala Leu Phe Asp Ile Glu Ser Lys Val Asp Pro
705 710 715 720
Ser Lys Ala Trp Gly Glu Val Lys Arg Gln Ile Ser Ile Ala Ala Phe
725 730 735
Thr Val Gln Ala Ala Ala Glu Thr Leu Ser Glu Val Ala
740 745
<210> 67
<211> 1014
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus STEAP nucleic acid sequence
<400> 67
gagagccgca aggacatcac aaatcaggaa gagctgtgga agatgaaacc acggagaaac 60
ctggaggaag acgattacct gcacaaggac accggcgaaa caagtatgct gaaaagacca 120
gtgctgctgc acctgcatca gactgctcat gcagacgagt ttgattgccc ctctgaactg 180
cagcacaccc aggagctgtt cccacagtgg catctgccca tcaagattgc cgctatcatt 240
gcttcactga catttctgta tactctgctg agagaagtga tccaccctct ggccaccagc 300
catcagcagt acttctataa gatccctatt ctggtcatca acaaggtcct gccaatggtg 360
agcatcacac tgctggccct ggtctacctg cctggcgtga tcgcagccat tgtccagctg 420
cacaacggaa caaagtacaa gaagttccca cattggctgg ataagtggat gctgactagg 480
aaacagttcg ggctgctgtc cttctttttc gccgtgctgc acgctatcta cagcctgtcc 540
tatcccatga ggcgctctta ccgatataag ctgctgaact gggcttacca gcaggtgcag 600
cagaacaagg aggacgcatg gattgaacac gatgtgtggc ggatggaaat ctatgtgtct 660
ctgggcattg tcgggctggc catcctggct ctgctggcag tgaccagtat cccttctgtc 720
agtgactcac tgacatggcg cgagtttcac tacattcaga gcaagctggg aatcgtgtcc 780
ctgctgctgg gcaccatcca tgcactgatt tttgcctgga ataagtggat cgatatcaag 840
cagttcgtgt ggtatactcc ccctaccttt atgattgccg tcttcctgcc catcgtggtc 900
ctgattttta agtccatcct gttcctgcct tgtctgcgaa agaaaatcct gaaaatccga 960
catgggtggg aagacgtgac aaaaatcaat aagaccgaaa tctcaagcca gctg 1014
<210> 68
<211> 338
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus STEAP amino acid sequence
<400> 68
Glu Ser Arg Lys Asp Ile Thr Asn Gln Glu Glu Leu Trp Lys Met Lys
1 5 10 15
Pro Arg Arg Asn Leu Glu Glu Asp Asp Tyr Leu His Lys Asp Thr Gly
20 25 30
Glu Thr Ser Met Leu Lys Arg Pro Val Leu Leu His Leu His Gln Thr
35 40 45
Ala His Ala Asp Glu Phe Asp Cys Pro Ser Glu Leu Gln His Thr Gln
50 55 60
Glu Leu Phe Pro Gln Trp His Leu Pro Ile Lys Ile Ala Ala Ile Ile
65 70 75 80
Ala Ser Leu Thr Phe Leu Tyr Thr Leu Leu Arg Glu Val Ile His Pro
85 90 95
Leu Ala Thr Ser His Gln Gln Tyr Phe Tyr Lys Ile Pro Ile Leu Val
100 105 110
Ile Asn Lys Val Leu Pro Met Val Ser Ile Thr Leu Leu Ala Leu Val
115 120 125
Tyr Leu Pro Gly Val Ile Ala Ala Ile Val Gln Leu His Asn Gly Thr
130 135 140
Lys Tyr Lys Lys Phe Pro His Trp Leu Asp Lys Trp Met Leu Thr Arg
145 150 155 160
Lys Gln Phe Gly Leu Leu Ser Phe Phe Phe Ala Val Leu His Ala Ile
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Tyr Pro Met Arg Arg Ser Tyr Arg Tyr Lys Leu Leu
180 185 190
Asn Trp Ala Tyr Gln Gln Val Gln Gln Asn Lys Glu Asp Ala Trp Ile
195 200 205
Glu His Asp Val Trp Arg Met Glu Ile Tyr Val Ser Leu Gly Ile Val
210 215 220
Gly Leu Ala Ile Leu Ala Leu Leu Ala Val Thr Ser Ile Pro Ser Val
225 230 235 240
Ser Asp Ser Leu Thr Trp Arg Glu Phe His Tyr Ile Gln Ser Lys Leu
245 250 255
Gly Ile Val Ser Leu Leu Leu Gly Thr Ile His Ala Leu Ile Phe Ala
260 265 270
Trp Asn Lys Trp Ile Asp Ile Lys Gln Phe Val Trp Tyr Thr Pro Pro
275 280 285
Thr Phe Met Ile Ala Val Phe Leu Pro Ile Val Val Leu Ile Phe Lys
290 295 300
Ser Ile Leu Phe Leu Pro Cys Leu Arg Lys Lys Ile Leu Lys Ile Arg
305 310 315 320
His Gly Trp Glu Asp Val Thr Lys Ile Asn Lys Thr Glu Ile Ser Ser
325 330 335
Gln Leu
<210> 69
<211> 390
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus PSCA nucleic acid sequence
<400> 69
gactggacat ggattctgtt tctggtcgcc gccgcaaccc gcgtgcattc tgctggcctg 60
gcactgcagc ctggaaccgc cctgctgtgc tactcttgta aggcccaggt gagtaacgag 120
gactgcctgc aggtcgaaaa ttgtactcag ctgggagagc agtgctggac cgcacggatc 180
agagcagtgg gactgctgac agtcattagc aaagggtgct ccctgaactg tgtggacgat 240
agccaggatt actatgtcgg aaagaaaaac atcacctgct gtgacacaga tctgtgtaat 300
gcttctggcg cccacgctct gcagcccgca gccgctattc tggctctgct gcccgctctg 360
ggactgctgc tgtggggacc cggacagctg 390
<210> 70
<211> 130
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic Consensus PSCA amino acid sequence
<400> 70
Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val His
1 5 10 15
Ser Ala Gly Leu Ala Leu Gln Pro Gly Thr Ala Leu Leu Cys Tyr Ser
20 25 30
Cys Lys Ala Gln Val Ser Asn Glu Asp Cys Leu Gln Val Glu Asn Cys
35 40 45
Thr Gln Leu Gly Glu Gln Cys Trp Thr Ala Arg Ile Arg Ala Val Gly
50 55 60
Leu Leu Thr Val Ile Ser Lys Gly Cys Ser Leu Asn Cys Val Asp Asp
65 70 75 80
Ser Gln Asp Tyr Tyr Val Gly Lys Lys Asn Ile Thr Cys Cys Asp Thr
85 90 95
Asp Leu Cys Asn Ala Ser Gly Ala His Ala Leu Gln Pro Ala Ala Ala
100 105 110
Ile Leu Ala Leu Leu Pro Ala Leu Gly Leu Leu Leu Trp Gly Pro Gly
115 120 125
Gln Leu
130
Claims (25)
- 공통(consensus) TERT 항원을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 면역원성 조성물(immunogenic composition)로서, 상기 공통 TERT 항원은,
서열번호 46, 및 서열번호 48로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 면역원성 조성물. - 제1항에 있어서, 상기 면역원성 조성물은,
a) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 58, 서열번호 60, 서열번호 62, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 서열번호 70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열;
b) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 58, 서열번호 60, 서열번호 62, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 서열번호 70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산에 대해서 95% 이상 동일한 아미노산 서열, 및
c) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 58, 서열번호 60, 서열번호 62, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 서열번호 70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 암호화하는 하나 이상의 서열을 더 포함하되, 상기 단편은 전장 아미노산 서열의 적어도 95%를 포함하는, 면역원성 조성물. - 제1항에 있어서, MAGE A1, gp100, 바이러스 항원, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 항원을 암호화하는 핵산을 더 포함하는, 면역원성 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 바이러스 항원은 B형 간염 바이러스(HBV), C형 간염 바이러스(HCV) 또는 인유두종 바이러스(HPV)로부터 유래된 항원인, 면역원성 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 HBV로부터 유래된 항원은 HBV 코어 항원 또는 HBV 표면 항원, 또는 이들의 조합인, 면역원성 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 HCV로부터 유래된 항원은 HCV NS34A 항원, HCV NS5A 항원, HCV NS5B 항원, HCV NS4B 항원, 또는 이들의 조합인, 면역원성 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 HPV로부터 유래된 항원은 HPV 유형 6 E6 항원, HPV 유형 6 E7 항원, HPV 유형 11 E6 항원, HPV 유형 11 E7 항원, HPV 유형 16 E6 항원, HPV 유형 16 E7 항원, HPV 유형 18 E6 항원, HPV 유형 18 E7 항원, 또는 이들의 조합인, 면역원성 조성물.
- 제1항에 있어서, 면역관문 저해제를 더 포함하는, 면역원성 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 핵산 분자는,
서열번호 45, 및 서열번호 47로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 면역원성 조성물. - 제2항에 있어서, 상기 면역원성 조성물은,
a) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67 및 서열번호 69로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67 및 서열번호 69로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열에 대해서 95% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열, 및
c) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67 및 서열번호 69로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함하되, 상기 단편은 전장 뉴클레오타이드 서열의 적어도 95%를 포함하는, 면역원성 조성물. - 제1항에 있어서, 상기 핵산은 플라스미드인, 면역원성 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 하나 이상의 플라스미드를 포함하는, 면역원성 조성물.
- 제1항에 있어서, 애주번트(adjuvant)를 더 포함하는, 면역원성 조성물.
- 제13항에 있어서, 상기 애주번트는 IL-12, IL-15, IL-28 또는 RANTES인, 면역원성 조성물.
- 공통 TERT 항원을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 암의 치료 또는 예방용 약학적 조성물로서, 상기 공통 TERT 항원은,
서열번호 46, 및 서열번호 48로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 암의 치료 또는 예방용 약학적 조성물. - 제15항에 있어서, 상기 조성물은 전기천공으로 투여되는, 암의 치료 또는 예방용 약학적 조성물.
- 제15항에 있어서, 상기 조성물은 면역관문 저해제를 더 포함하는, 암의 치료 또는 예방용 약학적 조성물.
- 제17항에 있어서, 상기 조성물 및 면역관문 저해제는 단일 제형으로 투여되는, 암의 치료 또는 예방용 약학적 조성물.
- 제17항에 있어서, 상기 조성물 및 면역관문 저해제는 개별적으로 투여되는, 암의 치료 또는 예방용 약학적 조성물.
- 제15항에 있어서, 상기 암은 흑색종, 두경부암, 전립선암, 간암, 자궁경부암, 재발성 호흡기 유두종증(RRP), 항문암, 혈액암, 난소암 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 암의 치료 또는 예방용 약학적 조성물.
- 핵산 분자로서,
서열번호 45, 및 서열번호 47로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 핵산 분자. - 제21항에 있어서,
a) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67 및 서열번호 69로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열;
b) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67 및 서열번호 69로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열에 대해서 95% 이상 동일한 뉴클레오타이드 서열, 및
c) 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5, 서열번호 7, 서열번호 9, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15, 서열번호 17, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23, 서열번호 57, 서열번호 59, 서열번호 61, 서열번호 63, 서열번호 65, 서열번호 67 및 서열번호 69로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열의 단편
으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 더 포함하되, 상기 단편은 전장 뉴클레오타이드 서열의 적어도 95%를 포함하는, 핵산 분자. - 제21항에 있어서, 상기 핵산 분자는 플라스미드인, 핵산 분자.
- 아미노산 분자로서,
서열번호 46, 및 서열번호 48로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 아미노산 분자. - 제24항에 있어서,
a) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 58, 서열번호 60, 서열번호 62, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 서열번호 70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열;
b) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 58, 서열번호 60, 서열번호 62, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 서열번호 70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해서 95% 이상 동일한 아미노산 서열, 및
c) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 58, 서열번호 60, 서열번호 62, 서열번호 64, 서열번호 66, 서열번호 68, 서열번호 70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열의 단편
으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 더 포함하되, 상기 단편은 전장 아미노산 서열의 적어도 95%를 포함하는, 아미노산 분자.
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