KR102369827B1 - 프로게리닌을 포함하는 나노현탁액 및 이의 제조방법 - Google Patents

프로게리닌을 포함하는 나노현탁액 및 이의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 난용성인 프로게리닌(Progerinin) 약물에 적합한 나노현탁액(nanosuspension) 제형 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
구체적으로, 본 발명에 따른 프로게리닌(Progerinin) 나노현탁액은 용성인 프로게리닌(Progerinin) 약물(a)의 분산 안정성을 향상시키는 위한 비히클 조성물로서, 히드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC)(b) 또는 히드록시프로필셀룰로오스(HPC)(b’), TPGS(c) 또는 디옥틸 숙신산 나트륨(DOSS)(c’) 및 칼륨소르베이트(d)를 사용하고, 이들의 혼합물을 다이노-밀(Dyno-Mill) 챔버에서 습식 볼 밀링(wet type ball milling)하여 평균입경이 100 nm 내지 300 nm인 프로게리닌(Progerinin) 약물이 포함된 백색 나노현탁액으로 제조하였다. 이러한 나노현탁액은 프로게리닌(Progerinin) 약물 입자의 고른 분산성, 저온 또는 가혹한 환경에서도 약물 입자의 크기 변화 최소화 및 우수한 약물의 생체 흡수 효율을 갖는다. 따라서, 본 발명에 따른 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액은 조로증 치료 효과를 확인하기 위한 경구용 나노현탁액 제제로 널리 이용될 수 있다.

Description

프로게리닌을 포함하는 나노현탁액 및 이의 제조방법{Nanosuspension comprising Progerinin as insoluble drug, and preparation method thereof}
본 발명은 난용성 약물인 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
많은 유용한 약물은 수성 매질에서 저 용해도를 갖는 소수성이어서, 수성 비히클에서 현탁액으로 제형화하는 것이 어렵다. 특히, 이러한 특성으로 인해, 습윤제가 수성 매질에서 소수성 약물 입자의 현탁을 촉진시키기 위하여 종종 필요하다. 표면 활성 습윤제 (즉, 계면활성제), 예컨대 소듐 라우릴 술페이트가 약물 입자와 현탁액 비히클 사이의 계면 장력을 감소시켜, 현탁액 비히클이 약물 응집물 및/또는 약물 입자 기공으로 침투하는 것을 가능하게하여 적어도 부분적으로 수성 매질에서의 소수성 약물의 현탁성을 증가시키는 것으로 알려져 있다. 그러나, 유리한 약물-현탁 효과 외에, 현탁액에서의 계면활성제의 사용은 또한 가용된 및/또는 용해된 유리 약물의 바람직하지 못한 결과를 초래한다.
가용된 및/또는 용해된 약물은 화학적 분해 및/또는 다른 성분과의 상호작용에 취약하기 때문에, 유리 약물을 함유하는 현탁액은 화학적으로 불안정할 수 있다. 저용해성 약물의 현탁을 촉진하기 위해 상대적으로 높은 계면활성제의 양을 사용하는 또 다른 바람직하지 못한 결과는, 계면활성제가 기포를 안정화시키기 때문에, 이러한 현탁액의 균질화 또는 진탕동안 동반되는 공기가 포획된 상태로 남는 경향이 있다는 것이다. 이러한 포획된 공기는 교반력, 교반기간 및 교반경과시간에 따라 변하기 때문에, 현탁액 부피가 변화되어 시간에 따른 균일한 투여량으로 투여하기 어렵게 하거나 불가능하게 한다.
만일 저수용해성의 약물이 현탁액으로 투여되면, 현탁액은 적합한 투여량 균일성을 제공하기 위하여 완만한 침강을 보이는 것이 바람직하다. 역으로, 신속한 침강이 발생하면, 비히클의 경우에서와 같이, 현탁액은 투여량 균일성을 달성하기 위하여 매 투여전에 진탕시켜야 한다. 기타의 인자(예컨대, 약물 입자 크기, 균일성 및 밀도)가 동등하면, 특정 현탁액 비히클의 점도가 증가함에 따라, 약물 입자의 침강속도가 감소한다. 따라서, 현탁액은 적당히 점성이어서 약물 입자의 침강을 억제하거나 완만화시키는 것이 바람직하다. 그러나, 이러한 증가된 점도는 물리적 안정성을 촉진시키는 반면, 이는 또한 현탁액을 붓거나 또는 투여하는 것을 어렵게 한다.
한편, 하기 화학식 1의 구조를 갖는 프로게리닌(Progerinin)은 우수한 프로게린 발현 억제 효과 및 프로게린과 라민 A의 결합 억제 효과를 나타내었으며, 조로증이 유도된 동물 모델의 생존 기간을 연장시키는 효과를 갖는 약물로서 조로증 예방 또는 치료용 약학조성물로 이용될 수 있다.
[화학식 1]
Figure 112020093923563-pat00001
상기 프로게리닌(Progerinin)의 화합물명은 (7S)-(+)-8,8-디메틸-7-(3-페닐-알릴옥시)-7,8-디하이드로-6H-피라노[3,2-g]크로멘-2-온 (7S)-(+)-8,8-Dimethyl-7-(3-phenylallyloxy)-7,8-dihydro-6H-pyrano [3,2-g]chromen-2-one(이는 ‘SLC-D011’명명됨)이다.
프로게리닌(Progerinin)은 조로증에 효과가 있음을 밝혀낸 약물로서, BCS (Biopharmaceutical Classification System)의 기준에 따른 수용성 매질(aqueous media)에서 높은 겉보기 투과성(high apparent permeability) 및 낮은 용해도를 나타내는 BCS 클래스 II 분자이다.
프로게리닌(Progerinin) 약물의 낮은 수용해성 특성으로 인해 치료적 응용은 매우 제한적이다. 이러한 한계를 극복하기 위해, 중합체 나노입자, 고체 지질 나노입자, 자가-에멀전화 약물 전달 시스템, 나노에멀젼, 리포좀, 나노현탁액 및 나노섬유 등의 사용과 같은 많은 수의 방법들이 연구되어 왔다. 이중 나노현탁액은 고분자, 계면활성제, 또는 이 둘 다가 모두 있는 조건 하에서의 안정화된 약물 입자의 콜로이드성의 분산액을 말한다. 나노현탁액은 낮은 수용해성과 지질용해성을 나타내는 약물 물질을 전달하는 데에 사용된다. 나노현탁액의 작은 입자들은 매우 큰 약물 표면적을 제공하여 불용성 약물의 용해 비율을 증가시킨다. 결과적으로, BCS 클래스 II 및 IV 화합물들은 향상된 생체 이용률, 빠른 활성 및 다른 바람직한 생물 약제학상의 효과를 나타낸다.
이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 오일 기반의 용액인 모노올레인(monoolein) 및 트리카프린(tricaprin) 혼합물을 이용하여 동물 실험의 진행이 가능하였으나, 질환의 특성상 고용량 및 장기 복용이 필요함에 따라 오일에 녹여진 제형의 사용이 불가함을 알게 되었고, 장기 복용이 가능한 새로운 제형 개발이 필요한 상태임을 인지하게 되었다. 특히, 상기 언급한 프로게리닌(Progerinin)은 물에 대한 용해도가 0에 가까울 정도로 난용성이고, 기존 섭취 가능한 용매에 대해서도 용해도가 매우 낮아 새로운 기술 도입을 통해 장기복용과 인체 흡수가 가능한 제형 개발이 필요한 상황이다.
이에 본 발명자들은 조로증 예방 또는 치료 효과를 갖는 프로게리닌(Progerinin) 약물에 적합한 나노현탁액(nanosuspension) 제형 및 이의 제조방법을 개발하고자 하였다. 구체적으로, 생체 흡수 효율이 우수한 프로게리닌(Progerinin) 약물의 입경을 최적화하고, 나노현탁액 제조를 위한 수용성 고분자, 부형제 등을 선별하여, 우수한 분산성 또는 균일성 및 향상된 생체이용률을 갖는 안정성이 향상된 프로게리닌(Progerinin) 약물을 함유하는 프로게리닌(Progerinin) 경구용 나노현탁액 제제를 개발하고자 하였다.
1. 한국등록특허 제10-1568681호(2015.11.06. 등록).
본 발명의 목적은 우수한 생체이용율을 갖는 프로게리닌(Progerinin) 약물을 함유하는 나노현탁액 제조방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은 약물의 생체이용율과 더불어 안정성이 향상된 경구복용이 용이한 제형을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 ((a) 하기 화학식 1로 표시되는 프로게리닌(Progerinin) 화합물 1 내지 10 중량%; (b) 고분자 현탁화제인 히드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC) 0.5 내지 5 중량%; (c) 용해증강제(Solubility enhancer)인 D-α-토코페롤 폴리에틸렌 글리콜 숙신산(Tocopherol polyethylene glycol succinate, TPGS) 0.5 내지 5 중량%; 및 (d) 보존제인 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate) 0.1 내지 0.5 중량%;를 포함하되, 상기 프로게리닌(Progerinin) 화합물은 습식 볼 밀링(wet type ball milling)하여 평균입경(D50)이 100 nm 내지 300 nm로 형성된 약물 입자인 것을 특징으로 하는, 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액을 제공한다.
상기 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 하기 화학식 1로 표시되는 프로게리닌(Progerinin) 화합물 1 내지 10 중량%; (b’) 고분자 현탁화제인 히드록시프로필셀룰로오스(HPC) 0.5 내지 5 중량%; (c’) 계면활성제인 디옥틸 숙신산 나트륨(DOSS) 0.1 내지 0.5 중량%; 및 (d) 보존제인 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate) 0.1 내지 0.5 중량%;를 포함하되, 상기 프로게리닌(Progerinin) 화합물은 습식 볼 밀링(wet type ball milling)하여 평균입경(D50)이 100 nm 내지 300 nm로 형성된 약물 입자인 것을 특징으로 하는, 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액을 제공한다.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (ⅰ) 정제수에 히드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC)(b) 및 D-α-토코페롤 폴리에틸렌 글리콜 숙신산(Tocopherol polyethylene glycol succinate, TPGS)(c)을 혼합하여 비히클 용액을 제조한 후 하기 화학식 1로 표시되는 프로게리닌(Progerinin)(a)을 넣고 혼합하여 현탁액을 제조하는 단계; (ⅱ) 상기 현탁액을 습식 볼 밀링(wet type ball milling)하여 나노현탁액을 제조하는 단계; 및 (ⅲ) 상기 나노현탁액에 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate)(d)를 혼합하여 최종적으로 안정성이 향상된 나노현탁액을 제조하는 단계;를 포함하되, 상기 (ⅲ) 단계의 나노현탁액 내 프로게리닌(Progerinin) 화합물은 평균입경(D50)이 100 nm 내지 300 nm인 약물 입자의 형태인 것을 특징으로 하는, 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액의 제조방법을 제공한다.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (ⅰ) 정제수에 히드록시프로필셀룰로오스(HPC)(b’); 및 디옥틸 숙신산 나트륨(DOSS)(c’);를 혼합하여 비히클 용액을 제조한 후 하기 화학식 1로 표시되는 프로게리닌(Progerinin)(a)을 넣고 혼합하여 현탁액을 제조하는 단계; (ⅱ) 상기 현탁액을 습식 볼 밀링(wet type ball milling)하여 나노현탁액을 제조하는 단계; 및 (ⅲ) 상기 나노현탁액에 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate)(d)를 혼합하여 최종적으로 안정성이 향상된 나노현탁액을 제조하는 단계;를 포함하되, 상기 (ⅲ) 단계의 나노현탁액 내 프로게리닌(Progerinin) 화합물은 평균입경(D50)이 100 nm 내지 300 nm인 약물 입자의 형태인 것을 특징으로 하는, 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액의 제조방법을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112020093923563-pat00002
본 발명은 난용성인 프로게리닌(Progerinin) 약물에 적합한 나노현탁액(nanosuspension) 제형 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 나노현탁액은 미립화된 프로게리닌(Progerinin) 약물에 수용성 고분자인 히드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC) 또는 히드록시프로필셀룰로오스(HPC); 용해증가제인 D-α-토코페롤 폴리에틸렌 글리콜 숙신산(TPGS) 또는 계면활성제인 디옥틸 숙신산 나트륨(DOSS); 및 보존제인 칼륨소르베이트;를 혼합하고 이를 다이노-밀(Dyno-Mill) 챔버에서 소정의 시간 동안 볼 밀링하여 얻은 평균입경이 200 nm 이하의 약물입자를 포함한 나노현탁액의 경우 우수한 생체이용율을 나타내었다(실시예 1-1 및 도 1).
이처럼 본 발명에 따른 프로게리닌(Progerinin)을 유효성분으로 포함하는 나노현탁액은 균일한 분산성 및 안정성을 갖는데, 실험 결과 4℃에서 20일 이상(최장 70일 정도) 200 nm 이하의 입자 균질성을 유지하여 분산 안정성 및 우수한 생체 흡수 효율을 갖는 것을 확인하였다.
도 1은 프로게리닌(Progerinin) 현탁액의 약동학(pharmacokinetic) 분석결과이다.
도 2는 열 용융 압출법(HMT)을 이용하여 제조한 고체분산체의 용해도 측정 결과이다.
도 3은 고분자를 다양한 비율(1:1)로 사용하여 열 용융 압출(Hot Melt Extusion) 공정을 이용하여 제조한 고체분산체의 용해도 측정 결과이다.
도 4는 열 용융 압출(Hot Melt Extusion) 공정을 이용하여 제조한 고체분산체에 대한 약동학(pharmacokinetic) 분석 결과이다.
도 5는 분무건조(Spray drying) 공정을 이용한 무정형 고체분산체에 대한 용해도 측청 결과이다(A: pH 1.2, B: pH 6.8)
도 6은 분무건조(Spray drying) 공정을 이용하여 제조한 고체분산체에 대한 약동학(pharmacokinetic) 분석 결과이다.
도 7은 비드를 이용한 습식 볼 밀링(wet type ball milling)을 이용하여 제조한 나노현탁액의 모습(상단)과 프로게리닌(Progerinin) 약물의 평균 입경을 측정한 결과(하단)이다.
도 8은 본 발명에 따른 나노현탁액 제조과정을 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명자들은 미립화된 프로게리닌(Progerinin) 약물을 히드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC), D-α-토코페롤 폴리에틸렌 글리콜 숙신산(TPGS) 및 칼륨소르베이트를 포함하는 비히클 용액에 혼합하고, 이를 다이노-밀(Dyno-Mill) 챔버에서 소정의 시간동안 습식 볼 밀링(wet type ball milling)하여 얻은 나노현탁액의 경우 평균입경(D50)이 200 nm 이하의 입자를 포함하고 있어 입자의 고른 분산성을 갖으며, 4℃에서 20일 이상 분산성이 유지되어 안정성을 갖는 생체이용율이 향상된 프로게리닌(Progerinin) 나노현탁액의 제조방법을 완성하였다.
따라서, 본 발명은 생체이용율이 향상된 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액을 제공한다.
구체적으로, 하나의 예로서 본 발명에 따른 나노현탁액은 (a) 하기 화학식 1로 표시되는 프로게리닌(Progerinin) 화합물 1 내지 10 중량%; (b) 고분자 현탁화제인 히드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC) 0.5 내지 5 중량%; (c) 용해증강제(Solubility enhancer)인 D-α-토코페롤 폴리에틸렌 글리콜 숙신산(Tocopherol polyethylene glycol succinate, TPGS) 0.5 내지 5 중량%; 및 (d) 보존제인 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate) 0.1 내지 0.5 중량%;를 포함한다.
다른 실시 예로서, 본 발명에 따른 나노현탁액은 (a) 하기 화학식 1로 표시되는 프로게리닌(Progerinin) 화합물 1 내지 10 중량%; (b’) 고분자 현탁화제인 히드록시프로필셀룰로오스(HPC) 0.5 내지 5 중량%; (c’) 계면활성제인 디옥틸 숙신산 나트륨(DOSS) 0.1 내지 0.5 중량%; 및 (d) 보존제인 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate) 0.1 내지 0.5 중량%;를 포함한다.
[화학식 1]
Figure 112020093923563-pat00003
상기 프로게리닌(Progerinin)(a)은 데커신 유도체로서 (7S)-(+)-8,8-디메틸-7-(3-페닐-알릴옥시)-7,8-디하이드로-6H-피라노[3,2-g]크로멘-2-온( (7S)-(+)-8,8-Dimethyl-7-(3-phenylallyloxy)-7,8-dihydro-6H-pyrano [3,2-g]chromen-2-one)이다. 본 발명에서는 프로게리닌(Progerinin)을 ‘SLC-D011’ 라고도 명명할 수 있다.
프로게리닌(Progerinin) 약물은 우수한 프로게린 발현 억제 효과 및 프로게린 및 라민 A의 결합 억제 효과를 나타내었으며, 조로증이 유도된 동물 모델의 생존 기간을 연장시키는 효과를 갖는 약물로서 노화 관련 질환인 조로증 예방 또는 치료용 약학조성물로 이용될 수 있다. 프로게리닌(Progerinin)은 물에 대한 용해도가 0에 가까울 정도로 난용성인데, 본 발명에서는 용해도를 향상시키고 장기복용과 인체 흡수가 가능한 제형을 제공한다.
구체적으로, 본 발명에서 고분자 현탁화제인 수용성 고분자에 해당하는 히드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC)(b) 또는 히드록시프로필셀룰로오스(HPC)(b’)는 용액 내의 프로게리닌(Progerinin) 약물 및 기타 성분의 분산을 도와주는 성분이다. 상기 고분자 현탁화제는 나노현탁액 전체에 대해서 0.5 내지 5 중량%를 포함하는 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는 1 내지 3 중량%이다.
상기 범위 미만으로 고분자 현탁화제를 포함하는 경우 현탁액의 침강률이 불량해지고, 상기 범위 초과의 고분자 현탁화제를 포함하는 경우 교반이 어려워 제조가 어려워진다. 특히, 고분자 현탁화제가 상기 범위 초과로 포함되는 경우 교반이 균일하게 이루어지지 못해 현탁액의 분산성이 낮아지고 이에 따라 제품의 생산 시 함량이 미달되는 불량 제품의 양이 증가하는 문제가 있다.
본 발명에서 용해증강제(Solubility enhancer)인 D-α-토코페롤 폴리에틸렌 글리콜 숙신산(Tocopherol polyethylene glycol succinate, TPGS)(c)은 난용성 약물의 용해도를 향상시키는 성분이다. 상기 TPGS는 나노현탁액 전체에 대해서 0.5 내지 5 중량%를 함하는 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는 1 중량% 이다. 상기 범위 미만으로 용해증강제를 포함하는 경우 용해도가 낮아지고_상기 범위 초과의 용해증강제를 포함하는 경우 독성허용한계를 초과할 수 있어 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.
또한, 본 발명에서 용해증강제(Solubility enhancer) 대신 계면활성제인 디옥틸 숙신산 나트륨(DOSS)(c’)을 사용할 수 있다. 이때 계면활성제는 0.1 내지 0.5 중량%를 사용하는 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는 0.25 중량%이다. 상기 범위 미만으로 계면활성제를 포함하는 경우 용해도가 낮아지고 상기 범위 초과의 계면활성제를 포함하는 경우 독성허용한계를 초과할 수 있어 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.
상기 현탁액 내 난용성 약물인 프로게리닌(Progerinin) 약물은 평균입경(D50)이 100 nm 내지 300 nm 인 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는 평균입경이 150 nm 내지 250 nm, 더욱 더 바람직하게는 평균입경이 200 nm 이하이다. 상기 범위 내의 평균입경을 갖는 경우 가장 가용성이 우수하며, 나노입자는 더 큰 표면적을 가져 더 쉽게 용해되므로 생체 이용률 또는 생체 흡수 효율을 극대화할 수 있다. 이는 우술한 실실시예 <1-1>을 통해 확인하였다. 아울러, 상기 평균입경을 갖는 나노현탁액의 제조를 위해서는 다이노-밀을 이용하여 습식 볼 밀링(wet type ball milling)을 통해 제조할 수 있다.
본 발명에서“안정성(stablity)”이란 약물입자의 균질성, 분산성, 침전안정성, 저장안정성을 모두 포함할 수 있다. 특히 본 발명에 따른 나노현탁액은 4℃에서 20일 이상 균일한 분산성을 갖으며, 현탁액의 제조 용이성 및 보관 안정성을 높였다는 점에서 진보한 효과를 갖는다.
한편“침강률(sinking rate)"은 유체 속에서 입자가 가라앉는 속도와 정도를 의미하는 것으로, 현탁액의 경우 의약품으로 판매되는 허가를 받기 위해서는 일정한 수준 이상의 침강도를 만족(1이 최대인 경우, 0.9 이상일 것이 요구됨)해야 한다. 본 발명에 따른 나노현탁액은 프로게리닌(Progerinin) 약물에 적합한 히드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC), TPGS 또는 디옥틸 숙신산 나트륨(DOSS), 및 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate)를 포함하는 비히클 용액을 사용함으로써 침강률이 매우 우수하다는 장점을 갖는다.
또한, 본 발명의 현탁액의 pH는 5.5 내지 8.5 일 수 있으며, 바람직하게는 6.0 내지 7.0 일 수 있다.
또한, 상기 나노현탁액은 점도가 2 내지 8.5 mPa
Figure 112020093923563-pat00004
s 일 수 있으며, 바람직하게는 7 내지 8.5 mPa
Figure 112020093923563-pat00005
s 일 수 있다.
본 발명의 나노현탁액은 감미제, 보존제, 향미제, pH 조절제 및 착색제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 성분을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 용어 "감미제"는 단맛을 나타내지만(재현하지만), 일반적으로 더 적은 식품 열량을 갖는 식품 첨가제를 지칭하는 것으로, 천연 또는 합성된 것을 모두 포함한다. 상기 감미제는 식품 및 의약 분야에서 통상적으로 사용될 수 있는 것이라면, 본 발명에 제한 없이 적용될 수 있다.
본 발명에 사용되는 용어 "보존제"는 미생물 증식 또는 원치 않는 화학적 변화에 의한 분해를 막는 약제학적으로 허용 가능한 물질을 의미한다. 상기 보존제는 살균성 및/또는 살진균성 또는 항산화제 특성을 가지며, 본 발명에서는 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate)(d) 0.1 내지 0.5 중량%를 사용하는 것이 바람직하고 더욱 바람직하게는 0.2 중량% 이다. 상기 범위 내에서 약물의 유효성을 저해하지 않으면서 보존 기간을 향상시킬 수 있다. 밀링(milling) 전에 첨가할 경우 함량이 감소함으로 밀링 후 후첨가를 하여 나노현탁액을 완성하는 것이 바람직하다.
본 발명에 사용되는 용어 "향미제(flavor, flavor), 플레이버" 또는 "아로마(aroma)"는 자연적 또는 합성적 유래인지를 불문하고, 식품 산업에서 일반적으로 사용되는 향미제 성분 또는 조성물을 포함한다. 이것은 단일 화합물 또는 혼합물을 포함한다.
본 발명에 사용되는 용어 "pH 조절제"는 원하는 값으로 현탁액의 pH를 조정하기 위해 사용되는 부형제이며, 예를 들어 구연산, 구연산 나트륨 또는 아스코르브산일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 본 발명의 기술분야에서 통상적으로 사용되는 것은 제한 없이 본 발명에 이용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "착색제"는 현탁액의 색을 다르게 하기 위해서 포함되는 것으로, 제형에 포함하여 목적하는 색을 띠는 현탁액을 제조하기 위해 사용할 수 있다. 본 발명의 기술분야에서 통상적으로 사용되는 것이라면 제한 없이 본 발명에 포함될 수 있다.
또한, 본 발명은 생체이용율과 안정성이 향상된 난용성 데커신 유도체 약물을 포함하는 나노현탁액의 제조방법을 제공한다.
구체적으로, 하나의 실시 예로서 본 발명에 따른 나노현탁액의 제조방법은 (ⅰ) 정제수에 히드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC)(b) 및 D-α-토코페롤 폴리에틸렌 글리콜 숙신산(Tocopherol polyethylene glycol succinate, TPGS)(c)을 혼합하여 비히클 용액을 제조한 후 하기 화학식 1로 표시되는 프로게리닌(Progerinin)(a)을 넣고 혼합하여 현탁액을 제조하는 단계; (ⅱ) 상기 현탁액을 습식 볼 밀링(wet type ball milling)하여 나노현탁액을 제조하는 단계; 및 (ⅲ) 상기 나노현탁액에 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate)(d)를 혼합하여 최종적으로 안정성이 향상된 나노현탁액을 제조하는 단계;를 포함한다.
다른 실시 예로서, 본 발명에 따른 나노현탁액의 제조방법은 (ⅰ) 정제수에 히드록시프로필셀룰로오스(HPC)(b’); 및 디옥틸 숙신산 나트륨(DOSS)(c’);를 혼합하여 비히클 용액을 제조한 후 하기 화학식 1로 표시되는 프로게리닌(Progerinin)(a)을 넣고 혼합하여 현탁액을 제조하는 단계; (ⅱ) 상기 현탁액을 습식 볼 밀링(wet type ball milling)하여 나노현탁액을 제조하는 단계; 및 (ⅲ) 상기 나노현탁액에 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate)(d)를 혼합하여 최종적으로 안정성이 향상된 나노현탁액을 제조하는 단계;를 포함한다.
[화학식 1]
Figure 112020093923563-pat00006
각 성분의 역할과 이의 사용량은 앞에서 언급한 바와 동일한바 중복된 내용으로 추가적인 설명은 생략한다. 도 8은 본 발명에 따른 생체이용율과 안정성이 향상된 난용성 데커신 유도체 약물을 포함하는 나노현탁액의 제조방법을 나타낸 흐름도이다.
먼저, 본 발명에서 상기 (ⅰ) 단계는 미립화된 프로게리닌(Progerinin) 약물을 비히클 용액에 혼합하는 과정으로, 구체적으로 정제수에 고분자 현탁화제인 히드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC) 또는 히드록시프로필셀룰로오스(HPC)(b’); 및 D-α-토코페롤 폴리에틸렌 글리콜 숙신산(TPGS)(c) 또는 디옥틸 숙신산 나트륨(DOSS)(c’);을 혼합하는 단계이다. 이때 정제수는 50 내지 70℃ 온도를 갖는 것을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 60℃ 온도를 갖는다. 이렇게 혼합한 현탁액(coarse suspension)은 상온에서 식힌 다음 나노현탁액(nanosuspension) 제조를 위해 다음 단계를 수행하게 된다.
다음으로, 상기 (ⅱ) 단계는 (ⅰ)의 현탁액을 습식 볼 밀링(wet type ball milling)하여 나노현탁액을 제조하는 단계이다. 여기서, 습식 볼 밀링(wet type ball milling)은 다이노-밀(Dyno-mill)을 이용할 수 있다. 볼 밀링 조건은 약물입자의 평균입경이 100 nm 내지 300 nm이 될 때까지 진행하는 것이 바람직하다. 더욱 바람직하게는 평균입경이 150 nm 내지 250 nm, 더욱 더 바람직하게는 평균입경이 200 nm이다. 상기 범위 내의 평균입경을 갖는 경우 가장 가용성이 우수하고, 약물의 생체 이용률 또는 생체 흡수 효율을 극대화할 수 있다.
본 발명에서 볼 밀링은 나노 현탁액 제조를 위한 습식 볼 밀링(wet type ball milling)으로서, 프로게리닌(Progerinin) 나노현탁액 제조에서 중요한 단계이다. 챔버 내에서 적합한 비드 크기, 분쇄 매체 및 API 비율의 선택, 분쇄기 챔버의 온도 제어 등이 중요하다고 여겨진다.
구체적으로, 나노현탁액 제조 시 습식 볼 밀링(wet type ball milling)은 (ⅰ) 단계의 현탁액과 평균입경이 0.1 내지 1 mm 인 지르코니아 비드를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 0.02 내지 0.04 mm인 것을 사용할 수 있다. 아울러, (ⅰ) 단계의 현탁액과 지르코니아 비드는 1:1 내지 1:5 부피비로 사용할 수 있으나, 약물의 평균입경(D50)을 200 nm 이하로 제조가 가능하다면 조건에 맞게 적절하게 변경가능하다.
다음으로, 상기 (ⅲ) 단계는 (ⅱ) 단계에서 제조한 나노현탁액에 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate)를 혼합하여 최종적으로 안정성이 향상된 나노현탁액을 제조하는 단계이다. 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate)의 첨가는 약물입자를 완전히 분산시켜 나노현탁액의 안정성을 더욱 향상시킨다.
한편, 상기 모든 과정에서, 난용성 약물과 용매, 수용성 고분자 또는 계면활성제를 혼합하여 섞는 과정이 포함되며, 이때 500 rpm 내지 1,000 rpm의 혼합 속도로 나노현탁액을 제조할 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이며 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐이므로 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 지질 기반의 프로게리닌(Progerinin) 용액의 제조 및 한계
본 발명자들은 프로게리닌(Progerinin) 약물의 열악한 생체 이용률을 극복하기 위해, 전임상 연구에서 지질 기반 제제(monoolein : tricaprylin = 2 : 1)를 사용하여 프로게리닌(Progerinin) 용액을 제조하였다. 그러나 지질-기반 제제는 부적절한 약물 로딩 및 제안된 임상 용량으로 예상되는 다량의 지질 섭취로 인해 임상 환경에서 사용하기에 부적합한 것으로 판단되었다. 비정질 고체 분산액(ASD)을 생산하려는 제한된 시도는 수성 매질에 분산될 때 비정질 고체 분산액(ASD)이 신속한 결정화로 인해 어려움을 겪고 있음을 보여 주었다. 또한, 이러한 지질 기반 제제는 부적절한 약물 로딩 및 제안 된 임상 용량으로 예상되는 다량의 지질 섭취로 인해 임상 환경에서 사용하기에 부적합한 것으로 간주된다.
이에 본 발명자들은 난용성 약물인 프로게리닌(Progerinin)을 나노현탁액으로 제조하고, 약물의 안정성을 향상시킬 수 있는 비히클 조성물을 선택하여 임상용으로 최적화된 나노현탁액을 구현하고자 한다.
나노현탁액의 제조공정은 열역학적으로 불안정하다. 그러므로 고분자나 계면활성제와 같은 안정화제가 물리적으로 안정한 상태를 유지하는 데에 필수적이다. 고분자 중 HPMC 또는 HPC는 약물 입자의 표면에 고정되어 흡착 장소를 차지하고 용액 내에서 약물 분자가 결정 격자로 결합되는 것을 막을 수 있어, 결정화의 기계적 장벽을 제공할 수 있다. 그러나, 고분자 농도가 충분하지 않으면, 결정은 급격하게 자라 응집된다. 고분자의 농도가 계속해서 증가하면 입자의 크기가 입자 표면의 두꺼운 층 때문에 함께 증가하며, 용매 및 반용매 사이의 확산이 응집 과정 동안 억제된다. 게다가, 고분자의 농도가 증가함에 따라, 삼투압이 증가하여 콜로이드 입자들 사이의 인력을 증가시키는 결과를 야기한다. 이는 입자의 성장으로 이어진다. 한편, 계면활성제는 고체-액체의 계면에서 흡착되어 계면의 표면 장력을 감소시키고, 핵생성 속도를 증가시키는데, 이러한 결과가 입자 크기의 초기 감소로 이어진다. 더욱이, 계면활성제의 흡착은 소수성 상호작용과 응고를 감소시켜, 레스베라트롤 입자들이 소수성을 덜 띠게 하며 입자 성장이 감소하도록 한다. 특히, 이온성 계면활성제인 SLS가 입자 표면에 흡착될 때, 입자 표면은 음전하를 띠게 된다. 이는 입자들 사이의 척력을 증가시켜 에너지 장벽을 증가시키고, 그럼으로써 입자 성장과 응집을 막는다. 결과적으로, 적절한 농도의 안정화제(stabilizing agent)의 첨가는 제조되는 나노입자들의 과다하게 높은 표면 에너지를 낮춰줄 수 있다. 아울러, 나노현탁액 내 약물입자의 크기는 생체 흡수 효율을 결정함에 있어서 중요한 요소이다.
따라서, 본 발명자들은 난용성 약물 나노현탁액 제조에 있어서 고분자, 계면활성화제와 같은 안정화제의 선택, 현탁액 내의 입자크기가 중요한 요소라고 판단하였다. 먼저 약물 내 약물입자의 크기는 생체 흡수 효율을 결정함에 있어서 중요한 요소인 바, 생체 흡수 효율이 우수한 프로게리닌(Progerinin, SLC-D011) 약물의 평균입경 크기를 선정하고, 나노현탁액 제조를 위한 고분자, 계면활성제, 보존제 등을 최적화 하였다.
<1-1> 프로게리닌(Progerinin) 약물의 평균 입경(D50) 결정
상기 언급한 바와 같이, 약물 내 약물입자의 크기는 생체 흡수 효율을 결정함에 있어서 중요한 요소이다. 이에 본 발명자들은 프로게리닌(Progerinin) 약물의 생체 흡수가 잘되는 직경 크기를 설계하고자 마우스를 이용하여 화합물 약동학(pharmacokinetic; PK) 분석하였다. 구체적으로, 마이크로 사이즈의 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 마이크로 현탁액(D 50 = 1.5 mm), 나노 사이즈의 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액 1(Nano suspenstion 1 = 200nm(D=50)), 및 나노현탁액 2(Nano suspenstion 2 = 350 nm(D=50))를 제조하였다. 이때 마이크로현탁액은 Vivapur power를 이용하여 제조하였고, 2개의 나노현탁액은 지르코니아 비드(zirconia bead)를 이용하여 제조하였다. 이렇게 제조한 현탁액을 마우스에게 10 mg/kg, 30 mg/kg, 100 mg/kg을 경구 투여하고 상체 내 현탁액의 약동학(pharmacokinetic; PK) 분석하여 결과를 확인하였다(도 1).
도 1의 결과, 평균 입자 크기가 200 nm 이하인 경우 약물의 생체 흡수가 잘되는 것으로 판단할 수 있었다. 이에 본 발명자들은 200 nm 이하의 평균입경을 갖는 약물 나노입자를 포함하는 현탁액 제형으로 개발하기로 하였다.
이러한 제형을 충족시킬 수 있는 제조방법을 고안하고자, 본 발명자들은 열 용융 압출(Hot Melt Extusion) 공정, 분무건조(Spray drying) 공정, 초고압 균질화기(Ultra-high pressure homogenizer) 이용한 공정, 비드를 이용한 습식 볼 밀링(wet type ball milling)을 이용한 공정을 수행하였고, 이들 중 가장 적합한 프로게리닌(Progerinin) 나노현탁액 제조방법을 선택하고자 하였다.
<1-2> 열 용융 압출(Hot Melt Extusion, HME) 공정을 이용한 무정형 고체분산체 제조
먼저 열 용융 압출법을 이용하여 다양한 고분자(HPMCAS, HPC, HPMC, PVP VA64, Eudragit EPO, AEA)에 대한 고체분산체를 제조하였다. 이때 약물과 고분자의 비율을 1:3으로 하여 혼합물을 제조하였다. pH 1.2 완충액 300 mL (Eudragit EPO, AEA) 또는 pH 6.8 완충액 300 mL (HPMCAS, HPC, HPMC, PVP VA64)을 용출액으로 하여 프로게리닌(Progerinin)로서 100 mg에 해당하는 고체분산체에 대한 용해도 시험을 실시하였다(도 2 내지 도 4). 용출 조건은 다음과 같다: 패들법, 온도: 37℃, 회전 속도: 150 rpm
도 2의 결과, 고분자로 HPMCAS를 사용하였을 때 용해도가 가장 높게 향상되는 것을 확인하였다.
다음으로, 용해도가 가장 향상되었던 HPMCAS를 재선정하여 다양한 비율(1:2, 1:2.5, 1:3, 1:4)로 고체분산체를 제조하였다. pH 6.8 완충액 300 mL를 용출액으로 하여 프로게리닌(Progerinin)로서 100 mg에 해당하는 고체분산체에 대한 용해도 시험을 실시하였다(도 3). 용출 조건은 다음과 같다: 패들법, 온도: 37℃, 회전 속도: 150 rpm
도 3의 결과, 약물과 HPMCAS의 비율이 1:3일 때 용해도가 가장 높게 나타남을 확인하였다. 그러나, 실제로 HME 방법을 통해 밝은 색의 노란 가루(light yellow power)형태를 얻을 수 있었으며 고체형태로 무정형을 유지하는 것을 확인 할 수 있었다. 또한, 도 4의 결과, HME 방식으로 얻어진 파우더의 경우 물과 만나 곧바로 침전으로 가라앉았으며, 마우스를 이용한 생체 흡수를 확인하였을 때 경구 투여 시 생체 내로 흡수가 거의 일어나지 않았다.
따라서 현재 약물의 주요성분인 프로게리닌(Progerinin)은 열 용융 압출(Hot Melt Extusion) 공정으로 제형 개발이 불가능한 것으로 판단할 수 있었다.
<1-3> 분무건조(Spray drying) 공정을 이용한 무정형 고체분산체 제조
상기 실시예 <1-2>의 고분자를 이용하되, 분무건조(Spray drying) 공정을 이용한 무정형 고체분산체 제조하였다. 분모건조 공정을 이용하여 다양한 고분자(HPMCAS, HPC, HPMC, PVP VA64, Eudragit EPO, AEA)에 대한 고체분산체를 제조하였다. 이때 약물과 고분자의 비율을 1:3 로 하여 혼합물을 제조하였다. pH 1.2 완충액 300 mL(Eudragit EPO, AEA) 및 pH 6.8 완충액 300 mL(HPMCAS, HPC, HPMC, PVP VA64)를 각각 용출액으로 하여 프로게리닌(Progerinin) 100 mg에 해당하는 고체분산체에 대한 용해도 시험을 실시하였다(도 5). 용출 조건은 다음과 같다: 패들법, 온도: 37℃, 회전 속도: 150 rpm
도 5의 결과, 열 용융 압출 공정으로 제조한 고체분산체와 동일하게 고분자로 HPMCAS를 사용하였을 때 pH 1.2 및 6.8에서 고분자의 용해도가 가장 높게 향상되는 것을 확인하였다.
그러나, 마우스를 이용한 생체 흡수(PK분석)를 확인하였을 때 HME과 유사하게 경구 투여 시 생체내로 흡수가 거의 일어나지 않았다(도 6). 또한, 이외의 다른 고분자에 고온 및 다습한 환경 하에서 2 주간의 안정성을 확인해 본 결과 프로게리닌(Progerinin) 입자의 재결정화가 관찰되어 만족스럽지 못한 결과를 얻었다(표 1).
SD formulation Initial purity (%) Storage condition After 1 week After 2 weeks
Appearance Tg by mDSC (ºC) XRPD HPLC results XRPD Tg by mDSC (ºC) HPLC results
Drug load (%) Purity (%) Drug load (%) Purity (%)
Crystalline API 99.85 25℃ /60%RH, open White powder N/A Unchanged N/A 99.85 Unchanged N/A N/A 99.85
40℃ /75%RH, open White powder N/A Unchanged N/A 99.85 Unchanged N/A N/A 99.85
PVP VA64 96.36 25℃ /60%RH, open White powder 79.19 Amorphous 19.9 96.56 Amorphous 83.14 25.6 96.27
40℃ /75%RH, open White powder N/A Crystalline 21.3 96.36 Crystalline N/A 22.5 96.39
HPMC ASLF 92.63 25℃ /60%RH, open White powder
67.25		 Amorphous
20.8
92.36
Amorphous
67.82
22.5
92.04
40℃ /75%RH, open White powder N/A Crystalline 21.7 91.53 Crystalline N/A 23.4 91.62
HPMC E3 80.72 25℃ /60%RH, open White powder 98.75 Amorphous 18.0 79.41 Amorphous 96.50 17.1 79.65
40℃/75%RH, open White powder N/A Crystalline 18.2 78.60 Crystalline N/A 16.2 77.45
따라서 현재 약물의 주요성분인 프로게리닌(Progerinin)은 분무건조 방식으로 제형 개발이 불가능한 것으로 판단할 수 있었다.
<1-4> 초고압 균질화기(Ultra-high pressure homogenizer)를 이용한 나노현탁액 제조
본 발명자들은 나노현탁액을 제조할 수 있는 다른 방법으로서 초고압 균질화기(Ultra-high pressure homogenizer)를 이용하여 나노현탁액 제조하였다. 구체적으로, 증류수가 들어있는 100 mL 비커에 고분자(HPMC 3cp), 계면활성제(TPGS)를 녹인 다음 약물(SLC-D011)을 칭량하여 넣은 후 2 시간 동안 교반하여 현탁액을 제조하였다. 초고압 균질화기(Ultra-high pressure homogenizer)에 현탁액를 투입하여 나노 현탁액을 제조하였다(압력: 40000 psi, 1 시간).
Initial 3 Day
Z-average (nm) 338.6 354.6
PI 0.076 0.278
D (90%) (nm) 517.1 893.9
상기 표 2는 약물 입경을 측정한 것으로, 3일 후에 입자의 크기가 증가한 것을 확인할 수 있었다. 따라서 초고압 균질화기(Ultra-high pressure homogenizer)를 이용한 나노현탁액 제조는 시간이 경과함에 따라 입자가 커지는 한계가 있었다. 이 역시 프로게리닌(Progerinin) 나노현탁액 제조에 적합한 방법이라고 보기 어렵다.
<1-5> 비드를 이용한 습식 볼 밀링(wet type ball milling)을 이용한 나노현탁액 제조
다른 방법으로서, 본 발명자들은 비드를 이용한 습식 볼 밀링(wet type ball milling)을 이용한 나노현탁액 제조하였다. 구체적으로, 증류수가 들어있는 100 mL 비커에 고분자(HPMC 3cp), 계면활성제(TPGS)를 녹인 다음 프로게리닌(Progerinin)을 칭량하여 넣은 후 2시간 동안 교반하여 현탁액을 제조하였다. 비드(Bead)와 현탁액을 넣은 튜브를 DeltaVita®, Netzsch (Zentrimix 380R) 장치에 장착하여 나노현탁액을 제조하였다(속도: 1200 rpm, 온도: -10℃, 6 시간). 도 7은 상기 제조방법으로 제조된 나노현탁액의 모습(상단)과 평균 입경을 측정한 결과(하단)이다.
도 7의 결과, 평균 입경이 170 nm인 약물 나노입자가 포함된 나노현탁액을 제조할 수 있었다. 나노현탁액의 안정성에서 약물입자의 평균입경이 200 nm 이하인 경우 가장 가용성이 우수하며, 나노입자는 더 큰 표면적을 가져 더 쉽게 용해되므로 생체 이용률을 극대화할 수 있음을 확인할 수 있었다.
이에 본 발명자들은 비드를 이용한 습식 볼 밀링(wet type ball milling)을 이용한 나노현탁액 제조하되, 약물의 평균입경이 200 nm 이하인 나노현탁액 제조에 적합한 비히클 조성물을 선별할 필요성이 있다고 판단하고, 최적화된 고분자, 계면활성화제와 같은 표면 안정화제, 및 보존제를 선별하고자 하였다.
<실시예 2> 최적화된 비히클 용액의 선별
<2-1> 프로게리닌(Progerinin) 나노현탁액의 제조
a) 현탁액 제조(Suspension Preparation)((ⅰ) 단계)
TPGS 용액은 TGPS를 60℃ 따뜻한 물에 용해시키고 실온으로 냉각시켜 제조한다. HPMC E3 용액은 HPMC E3을 60℃ 따뜻한 물에 녹이고 실온으로 냉각시켜 준비한다. 그런 다음 두 용액을 교반하여 완전히 혼합한다. 현탁액을 준비하기 위해, 계속 교반하면서 API(Active Pharmaceutical Ingredient)로서 프로게리닌(Progerinin)을 천천히 혼합된 용액에 충전시킨다.
b) 나노 밀링(Nano Milling)((ⅱ) 단계)
믹싱과 습식 분쇄 장비인 Agitator Bead Mill의 파라미터는 습식 볼 밀링(wet type ball milling)을 시작하기 위해 적절하게 설정되며 정압 펌프는 현탁액이 순환되도록 조절한다. Agitator Bead Mill을 빠져 나가는 현탁액은 미리 설정된 값 35℃ 이하로 유지하면서 현탁액 용기로 다시 재순환된다. 약물 입자가 PSD(D50≤200 nm)가 달성될 때까지 다이노-밀(Dyno-mill)로 습식 볼 밀링(wet type ball milling)을 계속 진행한다. 목표 PSD(D50≤200nm)가 달성되면 펌프가 꺼지고 밀링 서스펜션 라인이 서스펜션 용기에서 분리된다.
c) 안정성이 향상된 나노현탁액의 제조((ⅲ) 단계)
나노 밀링하여 얻은 현탁액에 보존제로서 칼륨 소르베이트를 첨가하여 완전히 혼합한다. 이를 멸균된 유리병에 넣어 충전한다. 병 충전 작업은 100% 육안 점검 및 충전 중량 점검으로 수행되며, 충전 후에 병은 고무 마감 및 알루미늄 플립-오프 씰(aluminum flip-off seal)로 밀봉된다.
<2-2> 최적화된 비히클 용액의 선별
상기 실시예 <2-1>의 방법으로 경구용 프로게리닌(Progerinin) 나노현탁액의 제조하였다. 구체적으로, 프로토타입 1은 10.0 중량% 프로게리닌(Progerinin), 3.0 중량% HPMC E3, 1.0 중량% 계면활성제 TPGS 및 0.2 중량% 칼륨 소르베이트로 구성된 것으로, TPGS 및 HPMC 용액을 혼합하고 프로게리닌(Progerinin)을 넣어 현탁액을 제조하였다. 이렇게 제조한 혼합물을 0.3 mm VHD ZrO 비드과 1 : 1 내지 5 부피비로 혼합하여 볼 밀링을 수행하였다. 용기의 온도는 제조 과정에서 면밀히 모니터링 하였다. 아울러, 밀링 동안, 목표 평균 입자 크기가 D50 ≤ 200 nm에 도달할 때까지 입자 크기 분포를 모니터링 하였다. 프로토타입 2 내지 5도 동일한 방법으로 제조하였다. 이렇게 제조한 나노현탁액을 하기 방법으로 입자직경, 제타 포텐셜, 약물의 함량, 분산성(Flowability)), 점도(Viscosity)를 측정하였다.
(1) 입자직경(D50) 측정: 약 2μL의 나노 현탁액을 1 mL의 물에 분산시킨 뒤샘플 튜브에 넣어 수성 현탁액에 사용되는 Zeta Potential & Particle Sizer(ZPPS) (Nicomp 380/ZLS, Nicomp)를 이용하여 측정하였다.
(2) 제타 포텐셜 측정: 입자표면의 전기적 전하를 측정한 것으로, 콜로이드 시스템의 물리학적 안정성을 나타낸다. 제타 포텐셜은 레이저-도플러(Laser-Doppler) 방법을 사용하여 측정하였다.
(3) 약물의 함량 측정: 나노현탁액 전체 중량에 대한 프로게리닌(Progerinin)의 함량을 측정하였다.
(4) 분산성 측정: 분산성은 현탁액의 침전 여부에 따라 육안으로 관찰하여 평가하였다.
(5) 점도 측정: BROOKFIELD 점도계(TC-550MX-230)를 이용하여 비틀림 모멘트(Torsional moment) 32.9%, 25℃ 온도, 200 rpm 프로브 회전 속도, 13.03 dyne/cm2 전단력, 264.0 S-1 전단속도에서 1분 동안 측정하였다.
구분 Prototype 1 Prototype 2 Prototype 3 Prototype 4 Prototype 5
조성(중량%) HPMC E3 3%/ TPGS 1%/
Potassium sorbate 0.2%		 HPMC E3 1%/TPGS 0.25%/ Potassium Sorbate 0.2% HPC (SL) 1%/ DOSS 0.25%/ Potassium Sorbate 0.2% HPC (SL) 1%/ Polysorbate 80 0.25%/ Potassium Sorbate 0.2% PVP K30 1%/ Poloxamer 188 0.25%/Benzoic acid 0.2%
D50(단위:nm) 165.8 235.2 146.3 191.4 N/A
D90(단위:nm) 281.8 414.4 260.8 342.5 N/A
PDI 0.171 0.195 0.203 0.206 N/A
Zete potential
(단위:mV)		 -2.07 N/A -17.76 -5.84 N/A
API concentration of suspension
(단위:mg/mL)		 100.9 N/A 107.6 N/A N/A
Purity of suspension
(단위:%)		 99.9 N/A 99.9 N/A N/A
Impurity of suspension
(단위:%)		 - N/A - N/A N/A
API concentration of supernatant
(단위:mg/mL)		 1.5 N/A 2.4 N/A N/A
Purity of supernatant
(단위:%)		 95.4 N/A 99.9 N/A N/A
Impurity of supernatant, (단위:%) 4.538 (RRT 0.963) N/A - N/A N/A
Flowability good good good good Very poor
Viscosity (단위:mPa·s) 7.72 N/A 2.25 4.28 N/A
상기 표 3을 통해, 프로토타입 1과 프로토타입 3의 약물 입자의 평균입경(D50)이 각각 165.8 nm, 146.3 nm로서 모두 평균입경이 200 nm 이하를 만족하였으며 불순물의 검출 없이 약물 함량은 95% 보다 높은 값을 나타냄을 확인할 수 있었다.
따라서, 프로토타입 1과 프로토타입 3이 분산성, 안정성, 및 약물의 유효성 측면에서 가장 적합한 비히클 조성물임을 확인할 수 있었다. 한편, 프로토타입 4의 경우 약물의 유효성 면에서 한계가 있어서 적합한 비히클 조성물로 선택하지 못하였다. 프로토타입 2의 경우 시간이 경과함에 따라 입자가 증가하는 경향이 있어 후보군으로 부적절하였다. 프로토타입 5의 경우 나노현탁액 형성 자체가 불가능하였다.
<실시예 3> 롤러 믹서(Roller mixer) 및 다이노 밀(Dyno-Mill)을 이용한 현탁액의 제조 및 물성 비교
<3-1> 롤러 믹서를 이용한 현탁액의 제조
롤러 믹서(Roller mixer)를 사용하여 목표 농도가 100 mg/g인 프로토타입 1의 나노현탁액을 제조하고자 하였다. 구체적으로, 프로토타입 1의 나노현탁액을 제조하고, 제조한 나노현탁액을 하기 표 2에 나타낸 지르코니아 비드와 1 : 1 중량비로 혼합하였다. 아울러, 표 4에 나타낸 바와 같이, 크기 감소 추세를 관찰하기 위해 PSD를 매일 모니터링 하였다.
Grinding media Milling time (day) D50(nm) D90(nm) PDI
0.8 mm beads 1 786.9 1360.1 0.182
2 513.8 990.2 0.262
3 451.5 806.8 0.205
4 394.4 671.4 0.172
5 355.8 672.8 0.247
0.5 mm beads 6 345.3 570.7 0.154
7 335.1 533.0 0.131
0.2 mm beads 8 308.0 505.7 0.150
표 4의 결과, 8 일 동안 밀링한 후에는 입자 크기는 D90 = 500 nm에서 정체되어 추가로 감소하지 않는 것으로 보인다. 따라서, 롤러 믹서의 경우 200 nm 이하의 약물 입자를 포함하는 나노현탁액을 제조하는 것은 어려울 것으로 판단하였다.
<3-2> 다이노 밀(Dyno-Mill)을 이용한 현탁액의 제조 및 이의 물성 평가
상기 <3-2>의 결과를 바탕으로, 본 발명자들은 다이노-밀(Dyno-Mill)을 사용하여(5 g API scale), 목표 농도가 100 mg/g인 프로토타입 1의 나노현탁액을 제조하고자 하였다. 구체적으로, 다이노-밀 밀링 챔버에 45 mL의 0.5 mm 지르코니아 비드가 로딩되었다. 준비한 프로토타입 1의 나노현탁액(5 g, 10% w/w HPMC E3, 3%/TPGS 1%)을 밀링 챔버에 위에서 부터 채웠다. 기기를 -19℃ 순환 냉각 액체로 2,200 rpm에서 5 시간 동안 작동시켰다. 최종 나노현탁액으로서 백색 나노현탁액(FR00497-3-190911-100)을 수집하였다.
또한, 위와 동일하게 6 mg/g 프로토타입 1의 나노현탁액(FR00497-3-190910-6), 20 mg/g 프로토타입 1의 나노현탁액(FR00497-3-190910-20)을 제조하고자 동일한 방법으로 수집하였다. 이렇게 수집한 3 개의 나노현탁액은 외관, PSD, HPLC 및 실린지 통과능력(syringeability)을 확인하고, 그 결과를 하기 표 5에 나타냈다.
Batch No. FR00497-3-190911-100 FR00497-3-190910-20 FR00497-3-190910-6
Target conc. (mg/g) 100 20 6
Measured conc. (mg/g) 98.9 19.3 5.8
Volume (mL) 7
Appearance White suspension
PDI. 0.226 0.204 0.207
Particle size (D50, nm) 211.0 222.9 209.6
Particle size (D90, nm) 387.9 397.9 375.5
Syringeability Easily pass
표 5의 결과, 프로토타입 1의 나노현탁액은 입자 크기 및 실린지 통과능력(syringeability) 등의 물성 특성을 모두 만족하였음을 확인할 수 있었다.
추가적으로, 상기 3개의 나노현탁액의 4℃에서의 저온 안정성을 2 주 동안 관찰하였다. 구체적으로, 입자 크기를 측정(particle size measurement)하여 평균입경(D50)이 200 nm 이하인지 확인함으로써 안정성을 평가하고, 실린지 통과능력(syringeability)은 나노현탁액이 20 GA 실린지 통과가 수월한지 확인하여 평가하여, 그 결과를 하기 표 6에 나타냈다.
Batch No. FR00497-3-190911-100 FR00497-3-190910-20 FR00497-3-190910-6
Time Initial 4℃
(for 2 weeks)		 Initial 4℃
(for 2 weeks)		 Initial 4℃
(for 2 weeks)
Appearance White homogeneous suspension
PDI. 0.226 0.251 0.204 0.166 0.207 0.239
PSD (D50, nm) 211.0 195.0 222.9 248.8 209.6 200.9
PSD (D90, nm) 387.9 370.5 397.9 419.2 375.5 375.9
Syringeability Easily pass
도 6의 결과, 3 개의 나노현탁액 모두 4℃의 저온에서 입경의 큰 변화 없이 안정성을 갖았으며, 실린지 통과 능력도 우수함을 확인할 수 있었다. 본 발명에서 평균입경(D50) 200 nm 이하의 조건은 입자의 분산 안정성 측면과 프로게리닌(Progerinin) 약물의 생체 이용 효율 측면에서 가장 이상적으로 요구되는 조건이다.
<3-3> 스케일 업(Scale up)을 통한 나노현탁액의 제조
본 발명자들은 스케일 업(Scale up) 하여 제조하고자, 30 g API scale를 위해 다이노-밀(Dyno-Mill)을 이용하여 100 mg/g의 목표 농도를 갖는 나노현탁액을 제조하고자 하였다. 구체적으로 다이노-밀(Dyno-Mill) 챔버에는 45 mL의 0.3 mm 지르코니아 비드가 로딩되었다. 준비한 30 g 프로게리닌(Progerinin)을 먼저 비히클 용액 현탁시켜 현탁액을 제조하고 (30 g, 10% w/w in the vehicle HPMC E3 3%/TPGS 1% in water), 그런 다음 현탁액은 위에서부터 밀링 챔버로 채워진다. -19℃ 저온에서 순환 냉각 액체가 구비된 기기를 2,200 내지 2,500 rpm에서 20 시간 동안 작동시켰다. PSD는 표 7에 나타낸 바와 같이 시간에 따라 모니터링 되었다고, 최종적으로 백색 나노현탁액을 수집하였다. 아울러, 수득한 백색 나노현탁액을 냉장 조건에서 20일 내지 70일 동안 입자의 크기 변화 등을 관찰하여 안정성을 살펴보았다(표 8).
Milling time/h D50(nm) D90(nm) PDI
3 264.4 513.0 0.267
6 201.2 362.4 0.211
8 187.5 328.6 0.192
11 174.3 307.0 0.195
13 170.8 309.2 0.214
16 162.7 297.1 0.221
18 166.3 294.1 0.198
20 177.3 337.4 0.252
상기 표 7의 결과, 다이노-밀(Dyno-Mill)을 이용하여 스케일-업 하여 나노현탁액을 제조하여도 평균입경(D50) 200 nm 이하인 프로게리닌(Progerinin) 약물 입자를 성공적으로 제조할 수 있음을 확인할 수 있었다.
Time Initial 4℃
(20 days)		 4℃
(70 days)
Target conc. (mg/g) 100

Measured conc. (mg/g)		 99.7 95.2 97.7
Supernatant conc. (mg/g) - 0.46 -
Purity (%) 98.3 99.8 99.0
PDI 0.215 0.223 0.247
Particle size
(D50, nm)		 182.2 192.4 178.0
Particle size
(D90, nm)		 330.1 352.2 336.6
Volume (mL) 125
Appearance White homogeneous suspensio
Syringeability Easily pass
표 8의 결과, 본 발명에 따른 나노현탁액은 냉장 조건에서 20일 이상, 구체적으로 20일 내지 70일 동안 안정성이 계속 유지됨을 확인할 수 있었다.
<실시예 4> 최적화 부형제의 선택
부형제와의 상용성을 평가하기 위해, 프로게리닌(Progerinin)을 HPMC E3, TPGS 및 칼륨 소르베이트와 1: 10의 비율로 혼합하고, 2 주에 걸쳐 40℃/75% RH 조건에서 약물(API) 성분이 유요한지 측정하여 표 9 및 표 10에 나타냈다.
[표 9]
Figure 112020093923563-pat00007
[표 10]
Figure 112020093923563-pat00008
표 9 및 표 10의 결과, 프로게리닌(Progerinin) 약물에 HPMC E3, TPGS, 칼륨 소르베이트를 추가하여도 약물에 영향이 없음을 확인할 수 있었다. 특히 보존제의 경우 밀링(milling) 전에 첨가할 경우 함량이 감소함으로 밀링 후 후첨가를 하여 완성하는 것이 바람직하다. 이러한 예비 부형제 상용성 연구는 약물이 부형제와 상용성이 있음을 시사한다.
<실시예 5> 안정성 확인
비히클 용액 선택 과정에서 우수한 입자 안정성을 보인 프로토타입 1 및 3에 대해서 프로게리닌(Progerinin) 나노현탁액의 안정화 연구를 추가로 수행하였다. 구체적으로 2 내지 8℃ 조건, 40℃/RH 75% 조건, 또는 1.2 M 럭스 노출 하에서 3 주에 걸쳐 평가하였다. 프로게리닌(Progerinin) 나노현탁액의 안정화 연구는 3 주 시간 동안 상온(25 ± 5°C, 60% RH)에서 수행되었다. 프로게리닌(Progerinin) 나노현탁액의 입자 크기와 약물 함량과 관련하여 특징화하였다. 그 결과를 표 11 및 표 12에 나타내었다.
구분 Prototype 1 HPMC E3 3%/ TPGS 1%/ Potassium sorbate 0.2%
Condition Initial 2-8℃
(1-week)		 2-8℃
(2-week)		 2-8℃
(3-week)		 40℃
/RH75%
(1-week)		 40℃
/RH75%
(2-week)		 40℃
/RH75%
(3-week)		 25℃.2MLux
D50(단위:nm) 165.8 208.3 208.0 200.0 194.0 194.2 195.9 186.3
D90(단위:nm) 281.8 346.4 347.7 336.2 339.6 333.6 329.1 352.2
PDI 0.171 0.158 0.161 0.164 0.191 0.178 0.164 0.247
Zete potential(단위:mV) -2.07 N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
API concentration of nanosuspension (단위:mg/mL) 100.9 108.3 103.5 99.8 103.1 99.7 97.6 103.9
Purity of suspension
(단위:%)		 99.9 99.9 99.9 99.5 99.9 99.9 99.4 99.5
Impurity of suspension
(단위:%)		 - - - - - - - 0.468 (RRT 1.015)
API concentration of supernatant
(단위:mg/mL)		 1.5 1.4 1.4 2.0 0.834 0.62 1.4 0.821
Purity of supernatant
(단위: %**)		 99.9 99.9 99.9 99.5 99.9 99.9 95.9 99.9
Impurity of supernatant
(단위:%)		 - - - RRT0.66 0.45% - - RRT0.40 0.765; RRT0.43 1.6%; RRT0.52 1.7% -
Flowability good good good good good good good good
Viscosity
(단위: mPa·s)		 7.72 N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
- N/A : 데이터를 측정할 수 없어 데이터가 없음
구분 Prototype 3 HPMC (SL) 1%/ DOSS 0.25%/ Potassium Sorbate 0.2%
Condition Initial 2-8 oC
1-week		 2-8 oC
2-week		 2-8 oC
3-week		 40 oC/
RH75%
1-week		 40 oC/
RH75%
2-week		 40 oC/
RH75%
3-week		 25 oC
1.2MLux
D50(단위: nm) 146.3 174.8 177.8 189.5 162.4 162.2 169.2 153.7
D90(단위: nm) 260.8 321.3 330.6 345.3 287.5 288.7 302.0 270.4
PDI 0.203 0.226 0.234 0.219 0.199 0.202 0.204 0.194
Zete potential(단위:mV) -17.76 N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
API concentration of nanosuspension
(단위:mg/mL)		 107.6 107.5 108.8 101.0 103.5 101.2 98.1 102.4
Purity of suspension
(단위:%)		 99.9 99.9 99.9 99.9 99.9 99.9 99.9 99.4
Impurity of suspension
(단위:%)		 - - - - - - - 0.597 (RRT 1.015)
API concentration of supernatant
(단위:mg/mL)		 2.4 1.3 1.4 2.0 0.31 1.3 N/A 0.29
Purity of supernatant
(단위:%)		 99.9 99.9 99.9 99.9 99.9 99.9 99.9 99.9
Impurity of supernatant, (단위:%) - - - - - - - -
Flowability good good good good good good good good
Viscosity, (단위:mPa·s) 2.25 N/A N/A N/A N/A N/A N/A N/A
- N/A : 데이터를 측정할 수 없어 데이터가 없음
표 11 및 표 12의 결과, 저온 또는 가혹 조건에서도 평균 입자크기가 200 nm 이하로서 3 주 이상의 나노약물 입자의 안정성을 갖음을 확인할 수 있었다.
<실시예 6> 최적화된 프로게리닌(Progerinin) 나노현탁액의 모의장액(SIF) 및 모의위액(SGF) 내의 안정성 확인
실시예 <2-1>과 동일한 방법으로 제조하되, 하기 표 13의 성분 및 함량으로 프로토타입 1의 나노현탁액을 제조하였다. 이렇게 제조한 나노현탁액에 대하여 모의장액(simulated intestinal fluids, SIF) 및 모의위액(simulated gastic fluids, SGF) 내의 분산안정성 확인하였다. 구체적인 실험 방법은 아래와 같다.
Component Function Unit Quantity
(per bottle)
(단위: g) 		Batch Quantity
(per batch)
(단위: g) 		중량%
SLC-D011 (Progerinin) Active 1.5 2,000.0 10
HPMC E3 Suspending agent 0.45 600.0 3
TPGS Surfactant 0.15 200.0 1
Potassium Sorbate Preservative 0.03 40.0 0.2
Purified water Solvent 12.87 17,160.0 85.8
Total 15.0 20,000.0 100
a) 모의장액(simulated intestinal fluids, SIF)
1000㎖ 볼륨 플라스크에 monobasic potassium phosphate (6.8 gm) 및 sodium hydroxide (0.616gm)을 250㎖ 증류수와 함께 첨가한 후 상기 성분들이 용해될 때까지 회전시킨 후, 700㎖의 증류수를 더 첨가하여 pH를 측정하였다. 0.2N sodium hydroxide 또는 0.2N hydrochloric acid를 첨가하여 pH를 pH 6.8 +/- 0.1로 조절하였다.
b) 모의위액(simulated gastic fluids, SGF)
1000㎖ 볼륨 플라스크에 sodium chloride (2 gm), 750 ㎖ 증류수, 및 7.0 ㎖ concentrated hydrochloric acid를 첨가한 후, 1000㎖ 증류수를 첨가하고 성분들이 회전시켜 혼합하였다. 이 용액의 pH가 1.2가 되도록 하였다.
c) 분산액 제조
HDPE 뚜껑을 가진 반투명 HDPE 바이알(25㎖)에 적절한 양으로 프로토타입 1의 나노현탁액를 첨가하였다. 이 때, 모의위액 또는 모의장액 15㎖에 희석시켜서 최종 프로게닌 농도가 0.5㎎/㎖가 되도록 하였다. 그 다음 분산제(dispersant)를 첨가한 후, 상기 제조된 제형이 완전히 분산될 때까지 흔들었다. 이 바이알을 37℃의 오일베쓰(oil bath)에 응결(flocculation)이 나타날 때까지 놓아두었다. 상기 침전된 입자의 사이즈를 Horiba-LA-910 입자 분석기를 이용하여 측정하였다. 대체적으로 상기 물질들을 공복의 사람 위액에서 대략 3시간 동안 배양하였다.
d) 평균 입경 측정(particle size measurement)
불용해성의 입자를 포함하는 비드코어(bead 코어)로 코팅된 비드를 측정하는 경우, SIF 또는 SGF 실험에서 비드코어의 무게를 계산하고, SIF 또는 SGF와 같은 부피로 비드코어를 분산시켰다. Horiba LA-910 챔버에 증류수 120gm를 부은 후 기기가 공백이 되도록 배수하였다. 그 후 증류수 120gm 를 붓고 배양된 제형(15㎖ SGF 또는 SIF에서)의 전체 양을 Horiba LA-910 챔버에 부은 후 평균 입경을 측정하였다.
Test Before dilution Diluted in SGF
(1V:9V)		 Diluted in SIF
(1V:9V)
Appearance White homogeneous suspension
PDI. 0.251 0.186 0.224
PSD(D50, nm) 195.0 218.5 212.5
PSD(D90, nm) 370.5 379.6 389.6
표 14의 결과, 평균입경(D50) 200 nm 이하의 프로게닌(Progerinin) 약물(프로토타입 1)은 모의장액 또는 모의위액 내에서도 약물의 평균입경(D50)이 190 내지 220 nm로 유지되었는바 분산의 안정성 및 약물의 생체 이용 효율이 유지되었음을 확인할 수 있었다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 즉, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다.

Claims (10)

  1. (a) 하기 화학식 1로 표시되는 프로게리닌(Progerinin) 화합물 1 내지 10 중량%;
    (b) 고분자 현탁화제인 히드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC) 3 중량%;
    (c) 용해증강제(Solubility enhancer)인 D-α-토코페롤 폴리에틸렌 글리콜 숙신산(Tocopherol polyethylene glycol succinate, TPGS) 1 중량%;
    (d) 보존제인 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate) 0.1 내지 0.5 중량%; 및
    (e) 잔량의 정제수를 포함하되,
    상기 프로게리닌(Progerinin) 화합물은 다이노 밀(Dyno-Mill)을 사용하여 2,200~2,500 rpm에서 8-20 시간 동안 습식 볼 밀링(wet type ball milling)하여 평균입경(D50)이 100 nm 내지 200 nm로 형성된 약물 입자인 것을 특징으로 하는, 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액.
    [화학식 1]
    Figure 112022002896520-pat00009

  2. (a) 하기 화학식 1로 표시되는 프로게리닌(Progerinin) 화합물 1 내지 10 중량%;
    (b’) 고분자 현탁화제인 히드록시프로필셀룰로오스(HPC) 1 중량%;
    (c’) 계면활성제인 디옥틸 숙신산 나트륨(DOSS) 0.25 중량%;
    (d) 보존제인 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate) 0.1 내지 0.5 중량%; 및
    (e) 잔량의 물을 포함하되,
    상기 프로게리닌(Progerinin) 화합물은 다이노 밀(Dyno-Mill)을 사용하여 2,200~2,500 rpm에서 8-20 시간 동안 습식 볼 밀링(wet type ball milling)하여 평균입경(D50)이 100 nm 내지 200 nm로 형성된 약물 입자인 것을 특징으로 하는, 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액.
    [화학식 1]
    Figure 112022002896520-pat00010

  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 프로게리닌(Progerinin) 약물은 평균입경(D50)이 100 nm 내지 200 nm 인 것을 특징으로 하는, 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액.
  4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 나노현탁액은 점도가 2 내지 8.5 mPa
    Figure 112020093923563-pat00011
    s 인 것을 특징으로 하는, 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액.
  5. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 나노현탁액은 4℃ 온도 조건에서 20일 이상 약물 입자의 고른 분산성에 따른 안정성을 갖는 것을 특징으로 하는, 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액.
  6. (ⅰ) 정제수에 히드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC)(b) 및 D-α-토코페롤 폴리에틸렌 글리콜 숙신산(Tocopherol polyethylene glycol succinate, TPGS)(c)을 혼합하여 비히클 용액을 제조한 후 하기 화학식 1로 표시되는 프로게리닌(Progerinin)(a)을 넣고 혼합하여 현탁액을 제조하는 단계;
    (ⅱ) 상기 현탁액을 다이노 밀(Dyno-Mill)을 사용하여 2,200~2,500 rpm에서 8-20 시간 동안 습식 볼 밀링(wet type ball milling)하여 나노현탁액을 제조하는 단계; 및
    (ⅲ) 상기 나노현탁액에 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate)(d)를 혼합하여 최종적으로 안정성이 향상된 나노현탁액을 제조하는 단계;를 포함하되,
    상기 (ⅲ) 단계의 나노현탁액 내 프로게리닌(Progerinin) 화합물은 평균입경(D50)이 100 nm 내지 200 nm인 약물 입자의 형태인 것을 특징으로 하는, 청구항 1에 따른 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액의 제조방법.
    [화학식 1]
    Figure 112022002896520-pat00012

  7. (ⅰ) 정제수에 히드록시프로필셀룰로오스(HPC)(b’); 및 디옥틸 숙신산 나트륨(DOSS)(c’);를 혼합하여 비히클 용액을 제조한 후 하기 화학식 1로 표시되는 프로게리닌(Progerinin)(a)을 넣고 혼합하여 현탁액을 제조하는 단계;
    (ⅱ) 상기 현탁액을 다이노 밀(Dyno-Mill)을 사용하여 2,200~2,500 rpm에서 8-20 시간 동안 습식 볼 밀링(wet type ball milling)하여 나노현탁액을 제조하는 단계; 및
    (ⅲ) 상기 나노현탁액에 칼륨 소르베이트(Potassium sorbate)(d)를 혼합하여 최종적으로 안정성이 향상된 나노현탁액을 제조하는 단계;를 포함하되,
    상기 (ⅲ) 단계의 나노현탁액 내 프로게리닌(Progerinin) 화합물은 평균입경(D50)이 100 nm 내지 200 nm인 약물 입자의 형태인 것을 특징으로 하는, 청구항 2에 따른 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액의 제조방법.
    [화학식 1]
    Figure 112022002896520-pat00013

  8. 제 6 항 또는 제 7 항에 있어서,
    상기 (ⅰ) 단계의 정제수 50 내지 70℃ 온도인 것을 특징으로 하는, 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액의 제조방법.
  9. 제 6 항 또는 제 7 항에 있어서,
    상기 (ⅱ) 단계에서 습식 볼 밀링(wet type ball milling) 시, (ⅰ) 단계의 현탁액과 지르코니아 비드를 1:1 내지 1:5 부피비로 혼합하여 밀링하여 나노현탁액을 제조하는 것을 특징으로 하는, 프로게리닌(Progerinin)을 포함하는 나노현탁액의 제조방법.
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