KR102318928B1 - 물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 전이 억제용 조성물 - Google Patents

물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 전이 억제용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 전이 억제용 조성물에 관한 것으로, 암의 전이 억제 효과가 우수하며, 장기간 섭취에 따른 부작용이 없는 물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 전이 억제용 조성물로 제공할 수 있다.
또한, 상기 조성물을 포함하는 암 전이 억제용 약학 조성물 또는 암 전이 억제용 기능성 식품 조성물로 제공할 수 있다.

Description

물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 전이 억제용 조성물{A composition for inhibiting cancer metastasis comprising alnus hirsuta (spach) fisch. ex rupr. extracts}
본 발명은 물오리나무 추출물을 유효 성분으로 포함하는 암 전이 억제용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 물오리나무 추출물을 포함하여, 암의 전이를 효율적으로 억제할 수 있는 암 전이 억제용 조성물에 관한 것이다.
현대화가 가속화됨에 따라 최근 우리나라의 식생활은 서구적으로 변해가고 있으며, 의식 수준이 높아지면서 더 나은 삶을 영위하기 위해 현대인들은 이전보다 더 많은 양의 업무를 처리하고 있으며 다양한 경로로 스트레스를 받고 있다.
이에 따라 질병 발생 양식과 사망원인 등이 예전과는 다른 양상을 나타내는 등 많은 부작용이 생겨나고 있는 실정이다.
통계청이 발표한 사망원인 통계조사에 따르면 암은 2010 우리나라 인구 10 만명 당 사망률은 1444명으로 사망원인 1위를 기록하고 있으며 이는 계속 증가하는 추세이다. 종류별로는 폐암이 가장 많았고 위암, 간암, 대장암, 췌장암 등이 뒤를 잇고 있다.
암이란 다양한 원인에 의해 세포의 분열과 사멸 간의 균형이 파괴되어 계속적인 분열과 증식에 의해 발생하는 비정상적인 세포의 집단을 의미하며, 종양 또는 신생물이라고도 한다.
일반적으로 장기, 백혈구, 뼈, 림프절 등을 포함한 100여 가지 이상의 신체 여러 부위에 발병하며, 주변조직으로 침윤하는 현상과 다른 기관으로 이동하는 전이를 통해 심각한 증상으로 발전한다(WHO, 2006).
암 발생의 원인으로는 화학물질, 바이러스, 세균, 전리 방사선 등의 환경적 또는 외적 요인과 선천성 유전자 변이 등의 내적 요인을 들 수 있다(Klaunig & Kamendulis, Annu Rev Pharmacol Toxicol 2004, 44:239-267).
이와 같은 암을 정복하기 위해 세포주기나 세포사멸(apoptosis)의 조절과 발암유전자나 암 억제 유전자들을 포함한 새로운 표적을 모색함에 있어서 눈에 띄는 발전을 거듭해 왔음에도 불구하고 암의 발생률은 계속적으로 증가하고 있다.
현재 암환자의 치료법은 외과적 수술, 방사선 치료, 강한 세포 독성을 보이는 항암물질 투여에 의한 화학요법에 의존하고 있으나, 이들 치료법은 대부분 조기 암 환자나 특정 암에만 국한되어 암으로 인한 사망은 계속 증가하고 있는 추세이다.
한편, 암이 생명에 위협이 되는 가장 큰 원인은 암세포의 전이성에 있으며, 암으로 인한 사망의 대부분은 암 전이로 설명된다. 현재 임상적으로 입증된 보편적인 암 치료 방법이 외과 수술이지만, 발병된 암이 제거되더라도 다른 조직으로 전이된 암세포에 의해 환자의 치료가 어렵게 된다.
따라서 암 정복은 실질적으로는 암 전이와의 싸움이라 볼 수 있다.
이에, 암의 전이를 억제할 수 있고, 장기간 섭취에 의해서도 부작용의 발생이 없는 조성물의 개발이 필요하다.
KR 10-1579820 B1
본 발명의 목적은 물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 전이 억제용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 암의 전이 억제 효과가 우수하며, 장기간 섭취에 따른 부작용이 없는 물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 전이 억제용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 전이 억제용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 전이 억제용 기능성 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 암 전이 억제용 조성물은 물오리나무 추출물(Alnus hirsuta (Spach) Fisch. ex Rupr.)을 유효성분으로 포함할 수 있다.
상기 물오리나무 추출물은 MMP-2 및 MMP-9의 활성을 억제하여 암 전이를 억제할 수 있다.
상기 추출물은 물, C1 내지 C6의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 추출 용매를 이용하여 추출할 수 있다.
상기 암은 갑상선암, 폐암, 위암, 간암, 대장암, 췌장암, 전립선암, 자궁암, 유방암, 피부암으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 기능성 식품 조성물은 상기 물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 전이 억제용 조성물을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 약학 조성물은 상기 물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 전이 억제용 조성물을 포함할 수 있다.
이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 실시예에 따른 암 전이 억제용 조성물은 물오리나무 추출물(Alnus hirsuta (Spach) Fisch. ex Rupr.)을 유효성분으로 포함할 수 있다.
암의 전이는 암이 처음으로 일차 종양으로 발생한 곳에서 신체의 먼 위치로 퍼지는 과정이다.
전이 과정은 여러 단계를 포함하는데, 인접한 조직의 침윤, 혈관 내 침범, 순환계를 통한 암 세포의 운반, 이차 부위에서의 체포, 혈관 외 및 이차 장기의 성장 등이 포함될 수 있다.
상피 세포 내의 간극 연접(gap junction), 폐쇄 연접(tight junction, TJ), 부착 이음부(adherens junction, AJ) 및 데스모솜(desmosome)과 같은 특화되고, 별개의 세포 간 구조는 이웃하는 세포 사이의 접촉이 가능하도록 한다.
이 중에서 폐쇄 연접(TJ)은 편광 상피 세포의 꼭대기 및 측면 영역들 사이의 멤브레인의 위치에서 선택적 파라셀룰러(paracellular) 경로를 통해 분자 및 이온의 흐름을 조정하며, 세포막 분자의 측면 움직임을 제한한다.
상피 및 암성 상피의 전암성 병변에서, 폐쇄 연접 가닥은 모두 비구조화되거나 상실되고, 폐쇄 연접은 전류에 대한 저항 감소 및 파라셀룰러 투과성이 증가된 마커에 의해 확인이 가능하다.
폐쇄연접의 골격을 형성하는 주요 일체형 막 단백질인 클라우딘(Claudins)은 동종 이량체 또는 이종 이량체를 형성하여 인접 세포 사이에 짝을 이루는 가닥을 생성하고, 물의 세포 외 유동, 용액 및 다른 세포의 이동에 대한 장벽으로서 다른 상피 조직의 투과 특성을 결정하는 작용을 한다.
최근의 클라우딘이 다양한 암에서 비정상적으로 발현되고 암의 발달 및 진행과 관련이 있다는 증거를 제공하였으며, 이는 이들이 폐쇄연접 복합체에서의 역할과 구별되는 주요 세포 기능을 가지고 있음을 시사한다.
아연 의존성 펩타이드내부분해효소(zinc-dependent endopeptidases)의 계열인 세포외기질 금속 함유 단백분해효소(matrix metalloproteinases, MMP)는 염증성 조직 파괴, 혈관 신생 및 암 세포 전이에 중요한 역할을 한다.
암 세포에서 상기 효소는 세포외기질에 대한 변형을 선호하는 세포 침습에 기여하여 종양 세포 침습을 초래한다.
침윤성 암 세포는 전이 동안 세포 외 매트릭스(ECM) 및 기저막을 분해하기 위해 MMP를 이용한다.
상기 MMP 중, 다양한 악성 종양에서 풍부하게 발현되는 엔자임 젤라티나제 A (enzymes gelatinases A, MMP-2) 및 B(MMP-9)가 암 침습 및 전이에 기여하는 것을 알려지고 있다.
일반적으로, MMP-2(72 kDa)는 섬유 모세포 및 다양한 상피 세포로부터 우선적으로 분비되는 반면, MMP-9(92 kDa)는 염증성 세포에 의해 우선적으로 발현되며, 둘 다 종양 세포의 침습성 전이능과 관련된다.
MMP의 천연 억제제인 금속 함유 단백분해효소(TIMPs)의 소위 조직 억제제는 MMP의 복합 조절에 중요한 역할을 한다.
이들은 활성화된 MMPs에 결합하고 ECM의 파괴를 제어함으로써 MMPs의 촉매 활성을 억제한다.
따라서, MMPs와 TIMPs 사이의 균형은 건강한 조직의 완전성을 유지하는 데 중요한 역할을 하며, 이러한 특성을 이용하여, MMP 억제제 및 TIMP 활성화제는 악성 종양의 치료에 유용한 화학 요법제로 활용이 가능할 것으로 예상된다.
물오리나무(Alnus hirsuta (Spach) Fisch. ex Rupr.)는 한국, 일본, 중국 북동부 및 러시아에 지리적으로 분포되어 있으며 이 식물의 껍질은 해열제, 거담제, 천식 방지제 및 알코올 중독을 위한 건강 차로 사용되었지만 효능과 메커니즘 암 치료에 대한 내용은 공개된 적이 없다.
본 발명은 전립선 암종 세포주 및 전이 억제에 관여하는 기본 세포 내 신호 전달 경로를 사용하여 물오리나무 추출물의 항 전이에 우수한 효과를 나타냄을 확인하였다.
보다 구체적으로 폐쇄연접 관련 인자 수준 및 MMP 활성의 조절을 통해 암 전이성, 세포 운동성 및 침습성을 억제할 수 있다.
상기 물오리나무 추출물의 주요 성분으로 디아릴헵타노이드(diarylheptanoids), 타닌(tannins), 플라보노이드(flavonoids) 및 트리터페노이드(triterpenoids)를 포함하며, 상기 성분 이외에 다른 다수의 성분을 유효 성분으로 포함하고 있다.
본 발명의 물오리나무 추출물은 암의 전이를 억제하기 위한 조성물로 이용될 수 있다.
이때, 천연 추출물인 물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함함에 따라 장기간 복용에 의해서도 특별한 부작용이 발생하지 않고, 우수한 암의 전이 억제 효과를 나타낼 수 있다.
상기 암은 갑상선암, 폐암, 위암, 간암, 대장암, 췌장암, 전립선암, 자궁암, 유방암, 피부암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 포함한다.
갑상선암은 갑상선에 생긴 암을 총칭하여 갑상선암이라고 하며, 조직학적 모양, 암의 기원세포 및 분화 정도에 따라 갑상선유두암, 갑상선여포암, 갑상선수질암, 갑상선미분화함, 역형성암 그리고 전이성 갑상선암 등으로 나뉜다. 갑상선은 갑상연골의 아래쪽, 숨을 쉴 때 공기의 통로가 되는 기도 앞쪽에 위치한 나비모양의 기관으로, 갑상선 호르몬을 생산 및 저장했다가 필요한 기관에 내보내는 기능을 한다.
폐암은 폐에 생긴 악성 종양을 말하며, 폐 자체에서 발생하거나(원발성 폐암) 다른 장기에서 생긴 암이 폐로 전이되어 발생하기도 한다. 원발성 폐암의 종류는 암세포의 크기와 형태를 기준으로 비소세포 폐암과 소세포폐암으로 구분하며, 폐암 가운데 80~85%는 비소세포 폐암인데, 이것은 다시 선암(샘암), 편평상피세포암, 대세포암 등으로 나뉜다. 그 나머지인 소세포폐암은 전반적으로 악성도가 높아서, 발견 당시에 이미 림프관 또는 혈관을 통하여 다른 장기나 반대편 폐, 종격동(양쪽 폐 사이의 공간으로 심장, 기관, 식도, 대동맥 등이 위치함)으로 전이되어 있는 수가 대부분이다.
위암은 위에 생기는 암을 두루 이르는 말로 위암의 대부분을 차지하는 위선암은 위점막 선세포(샘세포)에서 발생한 것이며, 현미경에서 관찰되는 모양에 따라 다시 여러 종류로 나눌 수 있다. 그 외에 림프조직에서 발생하는 림프종, 위의 신경 및 근육 조직에서 발생하는 간질성 종양, 육종(비상피성 조직에서 유래하는 악성 종양), 그리고 호르몬을 분비하는 신경내분비암 등이 모두 위암에 포함된다.
간암은 간에서 일차적으로 발생한, 즉 원발성의 악성 종양을 의미하며, 일반인들은 다른 기관에서 간으로 전이된 암도 흔히 간암이라고 부르지만, 엄밀하게는 원발성의 암만을 가리킨다. 병리학적(조직적)으로 원발성 간암에는 간세포암종과 담관상피암종, 간모세포종, 혈관육종 등 다양한 종류가 있으며, 이중 간세포암종과 담관상피암종이 대부분을 차지한다.
대장은 충수, 맹장, 결장, 직장, 그리고 항문관으로 나뉘며, 결장은 다시 상행결장, 횡행결장, 하행결장, 에스상 결장으로 나뉘는데, 이 가운데 맹장, 결장과 직장에 생기는 악성 종양을 대장암이라 한다. 대장암의 대부분은 선암(샘암), 즉 점막의 샘세포에 생기는 암이며, 그 밖에 림프종, 악성 유암종, 평활근육종 같은 것이 원발성으로 생길 수 있다.
췌장암이란 췌장에 생긴 암세포로 이루어진 종괴(덩이)로 췌장암의 90% 이상은 췌관의 샘세포에 암이 생긴 선암이다. 췌장의 종양에는 여러 종류가 있으며, 가장 흔한 것은 양성인 낭성종양(낭종)으로 장액성과 점액성 낭성종양, 췌관내 유두상 점액종양, 고형 가 유두상 종양, 림프 상피성 낭종 및 낭종성 기형종 같은 간엽성 종양이 이에 속한다. 악성 종양으로는 외분비 종양인 췌관 선암종과 선방세포 암종 외에 신경내분비 종양도 있다. 낭성 종양 가운데도 악성이 있으며, 당초엔 양성이던 것이 악성으로 바뀌기도 한다.
전립선암은 전립선에서 발생하는 암으로 대부분은 전립선 세포에서 발생하는 선암이다. 전립선암 세포는 정상적인 통제에서 벗어나 계속 증식하면서 주변의 다른 조직으로 침윤하기도 하고, 혈관이나 림프관을 통해 멀리 떨어진 조직으로 전이하기도 한다. 종양 조직의 분화 정도와 세포의 특성 등에 따라 유형을 구분한다. 전립선에서 발생하는 양성 종양이 전립선 비대증이며, 악성 종양을 전립선 암이라 한다.
자궁암은 자궁에 발생하는 악성종양을 통칭하며, 발생 부위에 따라 자궁경부암, 자궁체부암으로 나뉜다. 자궁경부암과 자궁체부암은 해부학상 발생 부위가 다를 뿐만 아니라 병의 원인, 증상 및 증후, 진행 양상, 병리조직학적 특성, 치료 방법 등에서 판이하게 다른 암종이다. 한국 여성에서는 자궁경부암이 흔하고 서구 여성에서는 자궁체부암이 흔하지만, 한국 여성에서도 자궁체부암의 발생률이 증가하고 있는 추세이다.
유방암은 악성 종양이 유방 밖으로 퍼져서 생명까지 위협할 수 있는 것으로 발생 부위에 따라 유관과 소엽 같은 실질 조직에 생기는 암과 그외의 간질 조직에 생기는 암으로 나뉜다. 유관과 소엽의 암은 암세포가 주위 조직으로 퍼진 정도에 따라 다시 침윤성 유방암과 비침윤성 유방암으로 나뉜다. 남성의 유방암은 여성 유방암의 1% 이하로, 침윤성 유관암이 가장 많이 발견된다.
피부암은 인체의 가장 바깥 층인 피부에서 발생한 암으로 처음부터 피부에서 발생한 경우 이를 원발 피부암이라하고 다른 장기에서 발생하여 피부로 전이된 피부암은 전이 피부암이라 한다. 일반적으로 피부암은 처음부터 피부에서 발생한 원발 피부암만을 의미하며, 좁은 의미로는 가장 흔하게 발생하는 편평상피세포암, 기저세포암, 악성흑색종의 세 가지만을 의미합니다. 피부암은 크게 악성흑색종과 비흑색종피부암으로 나눌 수 있다.
본 발명은 MMP-2 및 MMP-9의 활성을 억제하여 암 전이를 억제하는 것으로, 바람직하게는 전립선암의 전이 억제 효과가 우수하지만, 예시에 국한되지 않는다.
보다 구체적으로, 물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함하여 암의 전이를 억제할 수 있는 조성물을 제공할 수 있다.
바람직하게 상기 암 전이 억제용 조성물은 일년봉 추출물, 캐롭 추출물 및 별꽃 추출물을 추가로 포함할 수 있다.
상기 일년봉(Erigeron annuus (L.) Pers)은 북아메리카 원상으로, 우리나라 각처의 밭, 들, 길가에 나는 월년초로 국화 속 식물이며 소화불량, 학질, 장염, 간염, 이뇨작용이나 혈당 강하 작용 등 여러 가지 생리 활성이 알려져 있다.
상기 캐롭{Ceratonia siliqua (L.) Taub.}은 높이가 10m 정도 자라는 상록 활엽 관목(灌木)으로, 가뭄에 잘 견딘다. 잎에 수지를 함유하고 있다. 가을에 작고 우중충한 녹갈색의 꽃이 피며, 녹색의 긴 꼬투리가 달린다. 이 꼬투리는 익으면 초콜릿색으로 변하고, 속에는 작고 광택이 나는 딱딱한 콩이 들어 있다. 피부를 부드럽게 하는 캐롭 검(Carob gum)은 피부 팩으로 인기가 있으며, 설사 치료에 쓰이기도 한다.
상기 별꽃(Stellaria media)은 석죽과의 2년생 초본으로 길가나 밭둑에 주로 자라며 키는 10~20cm 정도로서, 단백질, 칼슘, 철과 같은 미네랄이 풍부하게 들어 있다. 이러한 별꽃은 위장을 튼튼하게 하고 혈액을 깨끗하게 하며 젖을 잘 나오게 한다. 또 잇몸병이나 충치, 맹장염, 장염, 장궤양 등의 염증을 치료하기도 한다.
그러나 이들을 이용한 암 전이 억제에 대한 연구는 보고되지 않았다.
상기 천연 추출물을 복합으로 사용하는 경우, 각 구성 성분 간의 혼합 작용으로 인해 암 전이의 억제 효과가 상승하게 된다.
또한 상기 캐롭 추출물 및 별꽃 추출물을 추가로 포함함에 따라, 물오리나무 추출물 특유의 맛과 향을 중화시켜, 기호성이 우수한 조성물로의 제공을 가능하게 한다.
바람직하게 본 발명의 조성물은 물오리나무 추출물 100 중량부에 대해, 캐롭 추출물 20 내지 40 중량부 및 별꽃 추출물 20 내지 40 중량부로 포함할 수 있다. 상기 범위 내에서 복합 추출물로 사용 시, 우수한 암 전이의 억제 효과를 나타내는 동시에, 기호도가 우수한 조성물로의 제공을 가능하게 한다.
상기 물오리나무 추출물은 MMP-2 및 MMP-9의 활성을 억제하여 암 전이를 억제할 수 있다.
MMP(matrix metalloproteinase)는 세포 외 기질 분해효소로 생체 내에서 재생, 배아 발생, 신생혈관생성인자로 작용하거나 종양 세포 자살 억제, 성장 인자의 활성화 단백질로서 이용되며 세포 외 기질의 분해 및 세포의 이동에 관여하는 중요한 효소이다.
이러한 MMP류 중에서 특히 MMP-2와 MMP-9는 타입 IV 콜라겐에 특이적으로 작용하여 암의 침윤과 전이에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다.
암의 전이와 침윤은 악성암세포의 기본적인 특성이다. 암은 초기에 전이뿐만 아니라 혈관으로 침윤을 일으킨다. 암세포는 침윤과 전이 과정에서 몇 가지 중요한 단계를 거친다. 이들 과정 중에서 암조직을 둘러싸는 세포 외 기질과 기저막은 암의 침윤에 있어서 벽으로 간주되므로 기저막(basement membrane)을 구성하는 세포 외기 질의 분해가 본질적인 초기 단계이다. 여러 가지 단백질분해효소가 이 과정에 관여하여 외부환경 장벽인 세포 외 기질과 기저막의 분해를 통하여 최종단계에 이른다.
그러나 세포에서 분비되는 것은 비활성형의 프로 MMP-9로써 이것은 우로키나제-타입 프라즈미노겐 활성자(urokinase-type plasminogen activator, uPA)에 의한 프라즈미노겐(plasminogen)의 활성형의 생성(plasmin)을 포함한 일련의 효소 활성화를 통해서 활성화된다. 활성화된 MMP-9는 암세포의 침윤 능을 증진시킨다.
이에, 본 발명은 물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물로, MMP-2와 MMP-9의 효소 활성의 억제 효과를 통해 암 세포의 침윤과 전이 속도를 지연시킬 수 있다.
보다 바람직하게, 상기 물오리나무 추출물은 물오리나무의 꽃을 이용하여 추출물로 제조한 것을 이용할 수 있다.
상기 추출물은 물, C1 내지 C6의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 추출 용매를 이용하여 추출하는 것을 포함한다.
구체적으로, 대마 추출물을 제조하기 위해서는 천연물을 분쇄하는 단계; 유기 용매를 사용하여 상기 분쇄물을 침출시키는 단계; 시료를 침출 후 건조시키는 단계; 건조된 시료를 유기 용매를 사용하여 재 침출 시키는 단계; 시료를 침출 후 건조시키는 단계; 물을 이용하여 침출시키는 단계; 및 침출하는 단계를 포함하여, 천연 추출물을 획득할 수 있다.
상기 유기 용매를 사용하여 추출한 천연 추출물은 유기 용매를 사용하여 분획을 실시하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 추출 용매는 시료의 중량 기준으로 2 내지 50배를 사용할 수 있으며, 보다 구체적으로는 2 내지 20배이다. 추출을 위해 시료는 추출 용매에서 침출을 위해 1 내지 72 시간 동안 방치될 수 있으며, 보다 구체적으로 24 내지 48시간 동안 방치될 수 있다.
상기 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있으며, 용매 추출법, 초음파 추출법, 환류 추출법, 침출법, 발효법 및 포제법으로 이루어진 군으로부터 선택된 추출법으로 수득하는 것을 포함한다.
초음파 추출법은 30 내지 50℃, 0.5 내지 2.5시간 동안 반응을 진행하며, 추출용매는 물 또는 50 내지 100%의 탄소수 1 내지 6의 알코올에 의한 것이다. 구체적으로는 40 내지 50℃, 1 내지 2.5시간 동안 추출하며, 추출용매로 물 또는 70 내지 80%의 탄소수 1 내지 6의 알코올에 의한 것이다.
환류 추출법은 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 100mL기준으로, 천연물의 분쇄물 10 내지 30g, 환류 시간 1 내지 3시간 및 50 내지 100%의 탄소수 1 내지 6의 알코올 또는 물에 의한다. 보다 구체적으로, 탄소수 1 내지 6의 알코올 100Ml 또는 물 100mL 기준으로, 천연물의 분쇄물 10 내지 20g, 환류 시간 1 내지 2시간 및 70 내지 90%의 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 물에 의한 것이다.
침출법은 15 내지 30℃, 24 내지 72시간 동안 진행하며, 추출 용매로 물 또는 50 내지 100%의 탄소수 1 내지 6의 알코올을 이용한다. 보다 구체적으로는 20 내지 25℃, 30 내지 54시간 동안 진행하며, 추출 용매는 물 또는 70 내지 80%의 탄소수 1 내지 6의 알코올에 의한 것이다.
추출 후, 추출물은 새로운 분획 용매를 순차적으로 적용하여 분획할 수 있다. 분획시 사용하는 분획 용매는 상기 용매는 물, 헥산, 부탄올, 에틸아세트산, 에틸 아세테이트, 메틸렌클로라이드 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상이며, 바람직하게는 에틸아세테이트 또는 메틸렌클로라이드이다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 기능성 식품은 대마 추출물을 유효성분으로 포함하는 항암, 항암 부작용 저하 및 암 전이 억제용 조성물을 이용하여 제조한 것이다.
본원에서 정의되는 "기능성 식품"은 기능성 식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 피부 외용제는 대마 추출물을 유효성분으로 포함하는 항암, 항암 부작용 저하 및 암 전이 억제용 조성물을 이용하여 제조한 것이다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 의약품은 대마 추출물을 유효성분으로 포함하는 항암, 항암 부작용 저하 및 암 전이 억제용 조성물을 이용하여 제조한 것이다.
본 발명의 의약품에 대한 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 해당 업계에 공지된 방법을 택하여 제형화할 수 있다. 구체적인 제형의 예로는 과립제, 산제, 시럽제, 액제, 현탁제, 전제, 침제, 정제, 좌제, 주사제, 주정제, 캅셀제, 환제, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 등일 수 있다.
본 발명의 의약품에 대한 바람직한 투여량은 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물의 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르지만, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적인 지식을 가진 자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
본 발명의 물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 전이 억제용 조성물에 의하면, 암의 전이 억제 효과가 우수하며, 장기간 섭취에 따른 부작용이 없는 물오리나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 전이 억제용 조성물을 제공할 수 있다.
또한, 상기 조성물을 포함하는 암 전이 억제용 약학 조성물 또는 암 전이 억제용 기능성 식품 조성물을 제공할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 물오리나무 추출물의 처리에 따른 LNCaP 세포의 성장 억제 실험 결과이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 물오리나무 추출물의 세포 이동 억제에 대한 실험 결과이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 물오리나무 추출물의 세포 침습 억제에 대한 실험 결과이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 물오리나무 추출물의 처리에 의한 MMP 활성화 및 발현 억제에 대한 평가 결과이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 물오리나무 추출물의 처리에 의한 LNCaP 세포에서의 TER 값 측정 결과 및 RT-PCT 및 웨스턴 블롯 분석을 통한 클라우딘의 수준 평가 결과이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 물오리나무 추출물의 처리에 따른 PI3K/Akt 신호 경로의 억제에 의한 항-침습성(anti-invasiveness) 평가 결과이다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
물오리나무 추출물(AS)의 제조
물오리나무의 꽃 부분을 실온에서 건조하고 기계식 분쇄기를 사용하여 가루로 제조하였다. 상기 물오리나무 꽃 5g의 분말을 300ml 70% 에탄올에 첨가하고 실온에서 24시간 동안 100 rpm으로 연속적으로 교반 하였다.
이후, 생성된 추출물을 여과하고 용매는 회전식 진공 증발(N-1200S; EYELA, Tokyo, Japan)로 제거하였다.
상기 추출물은 다이메틸설폭사이드(DMSO; 미국 미주리 주 세인트 루이스 소재의 시그마-알드리치 케미칼 컴퍼니 (Sigma-Aldrich Chemical Co.))에 용해시켜 25 mg/ml 저장 용액으로 제조한 후, 4℃에서 저장하였다. 상기 제조된 용액은 사용 전 생리 식염수를 사용하여 원하는 농도로 희석하여 사용하였다.
기타 천연 추출물의 제조
캐롭 추출물 및 별꽃 추출물은 상기 물오리나무 추출물과 동일한 방식으로 제조하여, 사용하였다.
세포주, 세포 배양 및 MTT 분석
LNCaP 인간 전립선 암종 세포(LNCaP human prostate carcinoma cells)는 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(Rockville, MD, USA)에서 입수하고, 10% 소 태아 혈청 (FBS)(Gibco BRL, Gaithersburg, MD, USA) 및 1 % 페니실린-스트렙토마이신으로 채워진 RPMI-1640에서 배양하였다. 배양 조건은 습도 95% 공기, 5% CO-2 및 37℃이다.
표준 MTT 분석을 수행하여 세포 생존을 평가하였다. LNCaP 세포를 6-웰(well) 배양 플레이트 내에 2x105 세포/웰의 밀도로 플레이팅 하였다. 24 시간이 경과하고, 24시간 동안 세포는 다양한 농도의 물오리나무 추출물로 처리하였다.
이어서, 상기 세포는 포스페이트 완충 식염수(PBS)로 2회 세척하고 0.5mg/ml MTT 용액과 함께 3시간 동안 배양하였다. 세포는 PBS로 세척하고 DMSO에 가용화시키고, 각 웰의 광학 밀도를 540 nm의 파장에서 효소 결합 면역 흡착 분석 (ELISA) 플레이트 판독기(Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)를 사용하여 측정하였다.
세포 성장에 대한 물오리나무 추출물의 효과는 세포 생존율로서 평가되었고, 여기서 비히클-처리된 세포는 100 % 생존 가능한 것으로 간주되었다.
상처 치유 이동 분석(Wound healing migration assay)
LNCaP 세포는 20μg/ml의 랫트 꼬리 콜라겐(BD Biosciences, Bedford, MA, USA)으로 코팅된 6-웰 플레이트 내에서 합류 세포로 성장하였다.
합류 세포는 200μl의 피펫 팁으로 긁어 상처내고, 이후 세포를 PBS로 2회 세척하고, 다양한 농도의 물오리나무 추출물이 처리된 1% FBS 함유 배지에서 24 시간 동안 배양하였다.
이후, 상처 부위를 약 40배 확대된 역현미경(Carl Zeiss, 독일 Deisenhofen) 하에서 관찰하고 촬영하였다.
인 비트로(In vitro) 침습성 분석
인 비트로 침습 분석은 트랜스 웰 챔버 시스템(폴리 카보네이트 막을 사용한 직경 10 mm, 8μm 기공 크기, 코닝 코스타 코포레이션(Coorning Costar Corp., MA, USA))을 사용하여 수행하였다.
LNCaP 세포는 무 혈청 RPMI-1640 배지에서 24 시간 동안 유지한 후, 수집하였다. 상기 세포는 트랜스 웰 삽입물의 상부 챔버(5x104 cell/well)에 놓고, 물오리나무 추출물을 최종 농도로 0, 2, 4 및 6μg/ml로 희석한 후, 웰에 첨가하고, 10% FBS를 포함하는 RPMI-1640 하부 챔버에 첨가하였다.
플레이트는 95% 습도 공기, 5% CO2 및 37℃ 조건 하에서, 24시간 동안 인큐베이션하였다. 상부 챔버 내 비침습 세포를 제거하고, 바닥의 침습 세포를 PBS 중 4% 포름알데히드로 고정하고, 헤마토실린(hematoxylin) 및 에오신(eosin) Y(H & E, Sigma)로 염색하였다.
이후 세포를 계수하고 역 현미경으로 사진을 찍었다. 마지막으로, ELISA 판독기에 의해 560 nm 파장에서 침습 속도를 측정하였다.
젤라틴 자이모그래피 ( zymography ) 분석
MMP-2 및 -9의 활성은 젤라틴 자이모그래피에 의해 결정하였다. 24 시간 동안 물오리나무 추출물로 처리한 후, 배지를 수집하고 4℃에서 5분 동안 원심 분리하여 세포 및 잔해물을 제거하였다.
무 세포 상청액은 2X 비 환원 샘플 완충액 (미국 캘리포니아 주 칼스 배드 소재의 Invitrogen Co.)과 혼합하였고, 프리캐스트 겔(단백질 기질로서 10 % 폴리 아크릴 아미드 및 0.1 % 젤라틴)을 사용하여 전기 영동을 수행하였다(Invitrogen Co).
전기 영동 후, 겔은 2.5% 트리톤 X-100에서 1시간 동안 2회 세척하여 소듐 도데실 설페이트(SDS)를 제거한 후, 50mM 트리스-HCl, 150mM NaCl, 5mM CaCl2 및 1μM ZnCl2를 함유하는 완충액으로 세척하였다. pH 7.5에서 0.02% NaN3를 첨가하고, 37 ℃에서 24시간 동안 인큐베이션 하였다.
그 후, 겔은 0.5%(w/v) 쿠마시 브릴리언트 블루 G-250(Bio-Rad Laboratories, 미국 캘리포니아 주 허큘리스 소재)로 1 시간 동안 염색 한 후 메탄올:아세트산:물(3:1:6)로 오물을 제거하였다.
젤라틴 용해 활성 영역은 청색 배경 하에서 수평의 흰색 띠로 나타났다.
상피 전기 저항 측정
폐쇄연접 형성의 척도인 경상피 전기 저항(TER)은 한 쌍의 STX-2 젓가락 전극이 장착된 상피 조직 전압 측정기(EVOM; 세계 정밀 기기, 미국 플로리다 주 사라 소타 소재)로 측정하였다.
LNCaP 세포는 Transwell174; (Corning Costar Corp.)의 8.0 μm 기공 크기 삽입물 (상부 챔버)에 시딩하고 합류하면, 새로운 배지를 추가 실험을 위해 대체하였다.
세포가 없는 삽입물, 배지에 세포가 있는 삽입물, 및 물오리나무 추출물이 처리된 세포가 있는 삽입물을 24 시간 동안 물오리나무 추출물로 처리하였다. 상부 및 하부 챔버에 전극을 배치하고, EVOM으로 저항을 측정하였다.
RNA 추출 및 역전사 -중합 효소 연쇄 반응(RT- PCR )
RNeasy 키트(Qiagen, La Jolla, CA, USA)를 사용하여 세포로부터 총 RNA를 단리하고 랜덤 6량체로 프라이밍하여 AMV 역전사 효소(Amersham Corp.)를 사용하여 상보적 DNA를 합성하였다.
PCR을 프라이머(표 1)를 사용하여 마스터 사이 클러(독일 함부르크 에펜 도르프)에서 수행하였다. PCR 반응의 조건은 1Ⅹ (94 ℃에서 3 분), 35Ⅹ (94 초에서 45 초; 58 ℃에서 45 초; 및 72 ℃에서 1 분) 및 1Ⅹ (72 ℃에서 10 분)이다.
PCR에 의해 수득된 증폭 산물은 1% 아가로스 겔상에서 전기 영동 분리하고, 에티디움 브로마이드(미국 미주리 주 세인트 루이스 소재의 시그마-알드리치) 염색으로 가시화 하였다.
Gene name Sequence
MMP-2 Sense 5'-CTT-CTT-CAA-GGA-CCG-GTT-CAT-3'
Antisense 5'-GCT-GGC-TGA-GTA-GAT-CCA-GTA-3'
MMP-9 Sense 5'-TGG-GCT-ACG-TGA-CCT-ATG-ACC-AT-3'
Antisense 5'-GCC-CAG-CCC-ACC-TCC-ACT-CCT-C-3'
TIMP-1 Sense 5'-TGG-GGA-CAC-CAG-AAG-TCA-AC-3'
Antisense 5'-TTT-TCA-GAG-CCT-TGG-AGG-AG-3'
TIMP-2 Sense 5'-GTC-AGT-GAG-AAG-GAA-GTG-GAC-TCT-3'
Antisense 5'-ATG-TTC-TTC-TCT-GTG-ACC-CAG-TC-3'
Claudin-1 Sense 5'-TCA-GCA-CTG-CCC-TGC-CCC-AGT-3'
Antisense 5'-TGG-TGT-TGG-GTA-AGA-GGT-TGT-3'
Claudin-2 Sense 5'-ACA-CAC-AGC-ACA-GGC-ATC-AC-3'
Antisense 5'-TCT-CCA-ATC-TCA-AAT-TTC-ATG-C-3'
Claudin-3 Sense 5'-AAG-GCC-AAG-ATC-ACC-ATC-GTG-3'
Antisense 5'-AGA-CGT-AGT-CCT-TGC-GGT-CGT-3'
Claudin-4 Sense 5'-TGG-ATG-AAC-TGC-GTG-GTG-CAG-3'
Antisense 5'-GAG-GCG-GCC-CAG-CCG-ACG-TA-3'
GAPDH Sense 5'-CGG-AGT-CAA-CGG-ATT-TGG-TCG-TAT-3'
Antisense 5'-AGC-CTT-CTC-CAT-GGT-GGT-GAA-GAC-3'
단백질 추출 및 웨스턴 블롯 분석.
다양한 농도의 물오리나무 추출물로 처리한 후, 세포는 ice-cold PBS로 세척하고, 4℃에서 30 분 동안 용균 완충액((20mM 수크로스, 1mM 에틸렌 디아민 테트라 아세트산, 20μM 트리스-Cl, pH 7.2, 1 mM 디티오트레이톨, 10mM KCl, 1.5 mM MgCl2, 5μg/ml 펩스타틴 A, 10μg/ml 류펩틴 및 2μg/ml 아프로티닌)으로, 수확하여 용해시켰다
상청액을 수집하고 Bio-Rad 단백질 분석 키트 (Bio-Rad Laboratories)를 사용하여 단백질 농도를 결정하였다.
웨스턴 블롯팅의 경우, 동일한 양의 단백질 추출물은 샘플 완충액(0.5 M Tris-HCl, pH 6.8, 4% SDS, 20% 글리세롤, 0.1% 브로모 페놀블루 및 10% β-머캅토 에탄올)에서 95℃에서 5분 동안 가열하여 변성시켰다. 샘플은 -80℃에서 저장하거나 즉시 면역 블롯팅에 사용하였다.
동일한 세포 단백질은 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기 영동으로 변성시켜 분리하고 니트로셀룰로오스 막(Amersham Corp.)으로 옮겼다.
이후, 막을 5% 탈지유로 차단하고 1차 항체와 함께 4℃에서 밤새 인큐베이션하고, 실온에서 1 시간 동안 효소-연결된 2차 항체로 프로브하고, 강화된 화학 발광(ECL) 검출 시스템을 사용하여 검출하였다.
LNCaP 세포에서 세포 성장 억제 평가
LNCaP 세포의 세포 성장에 대한 물오리나무 추출물의 효과를 확인하기 위해, 상기 세포는 물오리나무 추출물의 특정 농도(0, 2, 4, 6, 8 및 10μg/ml)로 처리하였다. 24 시간 인큐베이션 후, MTT 분석을 사용하여 세포 생존력을 측정하였다.
도 1에 도시 된 바와 같이, 물오리나무 추출물의 처리는 세포의 생존력을 유의하게 억제하였고 이러한 효과는 농도 의존적이다.
처리되지 않은 대조군과 비교할 때, 8μg/ml 물오리나무 추출물로 처리하면 세포 성장이 대략 82% 억제하였다.
반면, 세포 생존율은 8μg/ml 미만의 농도에서 물오리나무 추출물에 의해 크게 변화되지 않았다.
LNCaP 세포의 세포 이동 억제 평가
LNCaP 세포의 이동에 대한 물오리나무 추출물의 억제 효과는 합류 단층에 스크래치 상처를 내고, 세포를 찌그러진 영역으로 이동시킨 후, 물오리나무 처리하고 상처 봉합 면적의 수준을 평가하였다.
도 2에 도시 된 바와 같이, 물오리나무 추출물의 처리가 농도 의존적 방식으로 대조군 세포와 비교하여 LNCaP 세포가 제거된 영역으로의 이동을 현저히 감소시켰다. 이는 바이칼레인(baicalein)이 LNCaP 세포의 운동성을 억제함을 의미한다 할 것이다.
LNCaP 세포의 세포 침습 억제 평가
세포 이동에 대한 물오리나무 추출물의 억제 효과는 Matrigel 침입 분석을 사용하여 LNCaP 세포 침입의 감소에 연결되어 있는지 여부를 확인하였다.
도 3과 같이, 물오리나무 추출물의 처리는 LNCaP 세포의 침윤을 유의하게 억제하였으며, 이 결과는 상처 치유 분석의 결과와 일치하였으며, 또한 농도 의존적으로 그 효과가 나타났다.
LNCaP 세포에서의 MMP의 활성화 및 발현 억제 평가
MMP-2 및 -9의 활성화는 종양 침습 및 전이에 필요한 ECM 분해에 중요하기 때문에, 젤라틴 자이모그래피, RT-PCR 및 웨스턴 블롯 분석을 수행하여 물오리나무 추출물의 처리가 LNCaP 세포에서의 MMP-2 및 -9의 활성화 및 발현을 조절하는지 여부를 평가하였다.
도 4A에 나타낸 바와 같이, 물오리나무 추출물의 처리는 MMP-2 및 -9의 활성을 억제하였고, 효과는 용량-의존적 방식으로 발생하였다.
대조적으로, 도 4B 및 4C의 경우, 물오리나무 추출물의 처리는 대조군에 비해 TIMP-1 및 -2 mRNA 및 단백질의 수준을 농도 의존적으로 증가시켰다.
상기 결과는 AS의 항침습 효과가 TIMP 수준의 증가뿐 아니라 LNCaP 세포에서 효소 활성 및 MMP-2 및 -9의 발현의 억제와 관련이 있음을 의미한다 할 것이다.
LNCaP 세포에서의 TER 값 측정
바뀐 폐쇄연접은 전류에 대한 저항(TER로 측정)의 감소 및 파라셀룰라 투과성의 증가로 이어지기 때문에, TER 값은 폐쇄연접의 조임 및 항침습 활성 사이의 상호 작용을 결정하기 위해 측정하였다.
도 5a에 나타낸 바와 같이, 물오리나무 추출물의 처리 농도가 증가함에 따라 TER 값이 실질적으로 증가하였으며, 이는 물오리나무 추출물의 처리가 LNCaP 세포에서의 폐쇄연접의 강화를 증가함을 의미한다 할 것이다.
물오리나무 추출물의 처리가 폐쇄연접 활성을 향상시키고 침습성을 감소시키는 메커니즘을 설명하기 위해, RT-PCR 및 웨스턴 블롯 분석을 사용하여 폐쇄연접 조절제인 클라우딘의 수준을 결정하였다.
도 5b 및 5c와 같이, 클라우딘(클라딘-1, -2, -3, 및 -4)의 수준은 물오리나무 추출물이 처리된 세포에서 용량-의존적으로 하향 조절되었으며, 이는 이러한 조절이 폐쇄연접 강화에 기여함을 의미한다고 할 것이다.
PI3K/Akt 신호 경로의 억제에 의한 항-침습성(anti-invasiveness) 평가
본 발명의 물오리나무 추출물의 처리 후 Akt의 인산화의 변화를 평가하였다.
도 6A에 의하면, 전체의 Akt 단백질의 수준은 변화가 없었다.
본 발명의 물오리나무 추출물의 처리가 PI3K/Akt 신호 전달 경로의 LPS-유도 활성화를 조절하는지 여부를 평가하였다. 도 6b에 나타낸 바와 같이, LPS에 의한 자극은 Akt 인산화를 유의적으로 유도하였다. 반면, 물오리나무 추출물의 전처리는 Akt의 인산화를 억제하였다.
도 6C 및 6D는 물오리나무 추출물의 처리 시점에 대한 병렬 실험의 결과로, 물오리나무 추출물의 전처리 및 배양이 LNCaP 세포의 LPS-유도 침습을 억제하였다.
MMP의 전사 활성을 조절함으로써, 수많은 세포 신호 경로가 암 세포 이동 및 침습의 조절에 중요한 역할을 한다.
예를 들어, PI3K/Akt 신호 전달 경로의 활성화는 암성 조직에서의 MMP-2 및 -9의 발현과 관련되며, 이로 인해 암 세포는 침윤 및 전이를 위한 신혈관 형성을 촉진한다.
본 발명의 물오리나무 추출물의 처리로 인한 항침습 효과가 PI3K/Akt 신호 전달 경로의 불활성화와 관련이 있는지를 조사하였고, 도 6A에 나타낸 바와 같이 물오리나무 추출물의 처리 자체가 Akt의 인산화를 상당히 감소시켰다.
또한, LPS에 의한 자극은 Akt 인산화를 유의하게 유도하였으나, 도 6B에 나타낸 바와 같이 물오리나무 추출물의 전처리는 Akt의 인산화를 하향 조절하였다.
결과적으로, 본 발명의 물오리나무 추출물은 MMP-2 및 -9 발현 및 활성을 억제함으로써 LNCaP 세포에서의 이동 및 침입을 유의하게 억제할 수 있다. 이러한 실험을 통해, 물오리나무 추출물의 처리에 의한 PI3K/Akt 신호 전달 경로의 불 활성화, 클라우딘 발현의 하향 조절 및 폐쇄연접 강화를 증가시킨다는 것을 의미한다.
복합 추출물의 제조
상기 물오리나무 추출물(AS), 캐롭 추출물(IE) 및 별꽃 추출물(SE)을 하기 표 2의 중량부 범위로 혼합하여 복합 추출물을 제조하였다.
MX1 MX2 MX3 MX4 MX5 MX6
AS 100 100 100 100 100 100
IE - 10 20 30 40 50
SE - 10 20 30 40 50
복합추출물의 세포 성장 억제 평가
물오리나무 추출물의 LNCaP 세포의 세포 성장 억제에 대한 결과는 도 1과 같다.
동일한 실험을 복합 추출물에 의해 진행하여, 그 결과를 비교하였다.
동일한 농도(8μg/ml)로 처리한 후, LNCaP 세포의 세포 성장 억제에 대한 평가를 진행하였다.
MX2의 경우, 세포 성장이 대략 83%로 물오리나무 추출물만 단독으로 사용한 경우(MX1)와 큰 차이가 나타나지 않았으며, MX6의 경우에도 마찬가지였다.
반면, MX3 및 MX5는 각, 78%, 77% 및 75%로 우수한 세포성장 억제 효과가 나타남을 확인하였다.
LNCaP 세포의 세포 이동 억제 평가
세포 이동 억제 평가는 AS만 단독으로 처리한 경우를 지수 5로 놓고, 다른 복합 추출물의 처리에 의한 억제 정도를 지수로 상대적으로 평가하였다.
그 결과는 하기 표 3과 같다.
MX1 MX2 MX3 MX4 MX5 MX6
세포 이동 억제 5 4 7 8 7 5
상기 실험 결과에 따르면, AS만 단독으로 처리한 경우에 비해, MX2 및 MX6은 동등 또는 유사한 수준으로 세포 이동을 억제하였으나, MX3 내지 MX5는 매우 높은 세포이동 억제 효과를 나타냄을 확인하였다.
LNCaP 세포에서의 MMP의 활성화 및 발현 억제 평가
물오리나무 추출물(AS)과 비교한 암 전이 억제 효과를 위해 AS를 지수 5로 놓고, MX2 내지 MX6의 MMP-2 및 MMP-9의 효소활성 억제 효과를 지수 1 내지 10으로 평가하였다. 지수가 클수록 암 전이 억제 효과가 우수함을 의미한다고 할 것이다.
MX1 MX2 MX3 MX4 MX5 MX6
MMP-2의 활성 5 6 7 8 7 6
MMP-9의 활성 5 5 7 7 6 5
(단위: 지수)
상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 물오리 추출물을 단독 처리한 경우와 비교하여, 복합 추출물 MX2 내지 MX6에서 동등 이상의 MMP-2 및 MMP-9의 효소활성을 억제시키는 것을 확인하였다.
관능성 평가 시험
MX1 내지 MX6을 이용하여 차 음료로 제조하였다. 상기 차음료는 10인의 시음자가 시음하여 맛과 향을 1내지 10의 지수로 표현하였고, 그 평균값(0.5 반올림 적용)을 하기 표 5에 나타내었다. 상기 지수는 그 숫자가 높을수록 기호도가 높은 것이다.
MX1 MX2 MX3 MX4 MX5 MX6
맛 6.0 6.0 6.5 7.0 7.0 6.0
향 6.0 6.5 6.5 7.0 7.5 7.0
종합기호도(평균) 6.0 6.0 7.0 7.0 7.0 6.5
(단위: 지수)
상기 표 5를 참조하면, MX1의 경우 특유의 맛과 향이 기호도를 저하시켰고, MX2 내지 MX6의 혼합에 의하는 경우 물오리나무 추출물 특유의 맛과 향이 다른 천연 추출물에 의해 중화되면서 기호도가 상승하는 것을 알 수 있다. 특히, MX3 내지 MX5에 의하는 경우 향이 높게 평가되면서 기호도가 크게 상승함을 확인하였다.
이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.

Claims (6)

  1. 물오리나무 추출물(Alnus hirsuta (Spach) Fisch. ex Rupr.) 100 중량부에 대하여 캐롭 추출물 20 내지 40 중량부 및 별꽃 추출물 20 내지 40 중량부를 포함하는
    전립선암 전이 억제용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 MMP-2 및 MMP-9의 활성을 억제하여 암 전이를 억제하는
    전립선암 전이 억제용 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 추출물은 물, C1 내지 C6의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 추출 용매를 이용하여 추출하는
    전립선암 전이 억제용 조성물.
  4. 삭제
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는
    전립선암 전이 억제용 기능성 식품 조성물.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는
    전립선암 전이 억제용 약학 조성물.
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