KR102314642B1 - Biomarkers for diagnosing Fabry disease and the use thereof - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 파브리 병 진단용 바이오 마커 및 이의 용도에 대한 것으로, 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)를 유효성분으로 포함하는 파브리 병의 진단 또는 예후 예측을 위한 바이오 마커 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a biomarker for diagnosing Fabry disease and its use, and to a biomarker composition for diagnosing or predicting a prognosis of Fabry disease comprising complement component 3a (C3a) as an active ingredient.
파브리 병 (Fabry disease)은 X-염색체 연관 열성 유전 질환의 하나로 대표적인 리소좀 저장 질환 (Lysosomal Storage Disease; LSD)에 해당한다. 상기 파브리 병은 리소좀 효소인 알파-갈락토시다아제 A (α-Galactosidase A)의 결핍으로 야기되는 것으로 알려져 있다. 알파-갈락토시다아제 A는 당지질의 말단 부위에 존재하는 알파-갈락토스 (α-Galactose) 결합 부위를 가수분해시키는 작용을 하는 효소로서, 상기 효소가 결핍되는 경우 체내에 말단 알파-갈락토스 잔기를 포함하는 당지질이 축적되어 파브리 병이 발병되게 된다.Fabry disease is one of the X-chromosome-linked recessive genetic diseases and corresponds to a representative Lysosomal Storage Disease (LSD). The Fabry's disease is known to be caused by a deficiency of the lysosomal enzyme, α-galactosidase A (α-Galactosidase A). Alpha-galactosidase A is an enzyme that hydrolyzes the α-galactose binding site present at the terminal site of glycolipids. When the enzyme is deficient, it contains a terminal alpha-galactose residue in the body. The accumulation of glycolipids causes the onset of Fabry disease.
상기 효소의 결핍으로 축적되는 주요 당지질은 관용명으로 트리헥소실라미드 (Trihexosylceramide)라고 불리는 글로보트리아오실세라미드 (Globotriaosylceramide; Gb3 또는 GL3)로, 이 물질은 환자의 혈장 내에 다량 분포하고 신장, 간, 심장, 비장 등 신체 각 장기에 축적되어 이들 장기들의 기능부전을 유발하고 만성 통증, 각막 혼탁, 자율 신경 기능 이상, 피부 상해 등을 다양한 증상을 일으킬 수 있으며 급기야는 사망에까지 이르게 한다. 특히 혈장과 직접 접촉하는 혈관내피세포는 Gb3가 축적되는 가장 대표적인 세포로 혈관내피세포 기능부전은 혈관기능 부전에 의한 혈관질환과 파브리 병의 특징적인 신장 질환을 유발한다고 알려져 있다. 따라서 파브리 병을 조기에 진단하는 것과 파브리 병의 치료 과정에서 치료 효과를 평가하는 것이 매우 중요하다.The main glycolipid that accumulates due to the deficiency of the enzyme is Globotriaosylceramide (Gb3 or GL3), commonly called trihexosylceramide, which is widely distributed in the patient's plasma and is It accumulates in each organ of the body, such as the heart and spleen, and causes dysfunction of these organs, and can cause various symptoms such as chronic pain, corneal opacity, autonomic nerve dysfunction, and skin injury, and ultimately leads to death. In particular, vascular endothelial cells in direct contact with plasma are the most representative cells in which Gb3 accumulates. It is known that vascular endothelial cell dysfunction causes vascular disease caused by vascular insufficiency and kidney disease characteristic of Fabry disease. Therefore, it is very important to diagnose Fabry disease early and evaluate the therapeutic effect in the course of treatment of Fabry disease.
현재 파브리 병의 치료는 효소대체요법과 샤프론제제가 치료제로 사용되고 있다. 이 치료 요법은 환자의 생존률 증가, 삶의 질 향상, 증상의 중등도 감소의 효과가 있으나, 이들 치료에도 불구하고 환자의 질환은 뚜렷하거나 완전한 회복은 어렵고, 일부 환자는 질환이 악화되는 경과를 보인다. 따라서, 본 질환의 증상의 진행을 호전시키기 위하여 새로운 치료 표적의 발굴을 통한 새로운 치료법 개발이 필요하다.Currently, enzyme replacement therapy and chaperones are used as therapeutic agents for the treatment of Fabry disease. Although this treatment regimen has the effects of increasing the survival rate, improving the quality of life, and reducing the severity of symptoms, despite these treatments, the patient's disease is not clear or it is difficult to completely recover, and some patients show a worsening of the disease. Therefore, in order to improve the progression of the symptoms of the present disease, it is necessary to develop a new treatment method through the discovery of a new therapeutic target.
현재 파브리 병을 진단하기 위한 방법으로 상기 Gb3의 혈장 내 수준을 측정하는 것이 가장 많이 사용되고 있으나, Gb3는 실제로 혈장 내에서 측정 시기 및 환자의 상태에 따라 그 수준이 유동적으로 변할 수 있어, Gb3만을 측정하여 파브리 병 진단이나 치료 효과를 평가하는 것은 다소 부족한 측면이 있다. 따라서 파브리 병을 진단하거나 치료 효과를 평가할 수 있는 새로운 바이오 마커의 개발이 시급한 실정이다.Currently, measuring the plasma level of Gb3 is most commonly used as a method for diagnosing Fabry disease, but the level of Gb3 in plasma can change flexibly depending on the measurement time and patient's condition, so only Gb3 is measured. Therefore, it is somewhat insufficient to diagnose Fabry disease or evaluate the therapeutic effect. Therefore, there is an urgent need to develop a new biomarker capable of diagnosing Fabry disease or evaluating the therapeutic effect.
이에, 본 발명자들은 파브리 병과 상관관계를 가지는 신규한 바이오 마커를 개발하기 위해 예의 노력한 결과, 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)가 파브리 병의 진단 및 예후 예측을 위한 바이오 마커로 활용될 수 있음을 확인하고, 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준을 통해 파브리 병의 치료 효과를 검증할 수 있는 마커로 사용 될 수 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors have made diligent efforts to develop novel biomarkers correlated with Fabry disease, and as a result, complement component 3a (C3a) can be utilized as a biomarker for diagnosis and prognosis of Fabry disease. By confirming that it can be used as a marker that can verify the therapeutic effect of Fabry disease through the level of complement component 3a (complement component 3a, C3a), the present invention was completed.
본 발명은 파브리 병 진단용 바이오 마커 및 이의 용도에 대한 것으로, 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)가 파브리 병 환자 남녀 모두에게 높은 수준으로 나타나며, 효소 대체 요법으로 치료되지 않는 파브리 병 환자에서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)가 높은 수준으로 유지되는 것을 확인함으로써, 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)를 파브리 병의 진단 또는 예후 예측을 위한 바이오 마커로 제공하는 것이다.The present invention relates to a biomarker for diagnosis of Fabry disease and its use, wherein complement component 3a (C3a) is expressed at high levels in both men and women of Fabry disease patients, and in Fabry disease patients not treated with enzyme replacement therapy By confirming that 3a (complement component 3a, C3a) is maintained at a high level, complement component 3a (complement component 3a, C3a) is provided as a biomarker for diagnosis or prognosis of Fabry disease.
본 발명은 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)를 유효성분으로 포함하는 파브리 병의 진단 또는 예후 예측을 위한 바이오 마커 조성물을 제공한다.The present invention provides a biomarker composition for diagnosing or predicting the prognosis of Fabry disease, comprising complement component 3a (C3a) as an active ingredient.
또한, 본 발명은 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준을 검출할 수 있는 제제를 유효성분으로 포함하는 파브리 병의 진단 또는 예후 예측을 위한 키트를 제공한다.In addition, the present invention provides a kit for diagnosing or predicting the prognosis of Fabry disease, comprising an agent capable of detecting the level of complement component 3a (C3a) as an active ingredient.
또한, 본 발명은 대상체로부터 분리된 생물학적 시료에서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준 측정하는 단계를 포함하는 파브리 병의 진단 또는 예후 예측을 위한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method of providing information for diagnosis or prognosis of Fabry disease, comprising measuring the level of complement component 3a (C3a) in a biological sample isolated from a subject.
또한, 본 발명은 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 발현 억제제를 유효성분으로 포함하는 파브리 병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating Fabry's disease comprising an expression inhibitor of complement component 3a (complement component 3a, C3a) as an active ingredient.
또한, 본 발명은 대상체로부터 분리된 생물학적 시료에서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준을 측정하는 제1단계; 및 시험물질을 처리한 후 상기 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준이 시험물질을 처리하지 않은 생물학적 시료에 비해 감소하면 파브리 병의 예방 또는 치료용 약제로 판단하는 제2단계;를 포함하는 파브리 병의 예방 또는 치료용 약제의 스크리닝 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a first step of measuring the level of complement component 3a (C3a) in a biological sample isolated from a subject; and a second step of judging the drug for the prevention or treatment of Fabry disease when the level of complement component 3a (C3a) decreases compared to a biological sample not treated with the test substance after treatment with the test substance; To provide a screening method for a drug for the prevention or treatment of Fabry disease.
본 발명에 따르면, 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)가 파브리 병 환자 남녀 모두에게 높은 수준으로 나타나며, 효소 대체 요법으로 치료되지 않는 파브리 병 환자에서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)가 높은 수준으로 유지되는 것을 확인함으로써, 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)를 파브리 병의 진단 또는 예후 예측을 위한 바이오 마커로 제공될 수 있다.According to the present invention, complement component 3a (complement component 3a, C3a) appears at high levels in both men and women of Fabry disease patients, and complement component 3a (C3a) is high in Fabry disease patients not treated with enzyme replacement therapy. By confirming that the level is maintained, complement component 3a (complement component 3a, C3a) may be provided as a biomarker for diagnosis or prognosis of Fabry disease.
도 1은 파브리 병 환자 및 정상 지원자에서 혈장 보체계인 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a), 보체 요소 4b(complement component 4b, C4b), 보체 요소 5a(complement component 5a, C5a)의 수준을 측정한 통계 자료이다.
도 2는 파브리 병 환자 및 정상 지원자에서 혈장 보체계인 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a), 보체 요소 4b(complement component 4b, C4b), 보체 요소 5a(complement component 5a, C5a)의 수준을 측정한 그래프이다.
도 3은 효소 대체 요법으로 치료되지 않는 파브리 병 환자에서 효소 대체 요법으로 치료한 기간에 따른 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준 변화를 측정한 그래프이다.
도 4는 파브리 병 환자 및 정상 지원자의 신조직에서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a), 보체 요소 4b(complement component 4b, C4b), 보체 요소 5a(complement component 5a, C5a)의 수준을 형광 염색으로 확인한 사진이다.
도 5는 파브리 병 환자 및 정상 지원자의 신조직에서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준을 형광 염색으로 확인한 사진이다.
도 6은 파브리 병 환자 및 정상 지원자의 신조직에서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준을 형광 염색의 수치화로 측정한 그래프이다.
도 7은 파브리 병 환자 및 정상 지원자에서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)와 혈장 글로보트리아오실세라미드(Globotriaosylceramide, Gb3)의 상관 관계를 확인한 그래프이다.1 is a diagram illustrating the measurement of the plasma complement system levels of complement component 3a (complement component 3a, C3a), complement component 4b (complement component 4b, C4b), and complement component 5a (complement component 5a, C5a) in Fabry disease patients and normal volunteers. It is statistical data.
Figure 2 shows the plasma complement system, complement component 3a (complement component 3a, C3a), complement component 4b (complement component 4b, C4b), complement component 5a (complement component 5a, C5a) levels measured in normal volunteers and patients with Fabry disease. It is a graph.
3 is a graph measuring the change in the level of complement component 3a (complement component 3a, C3a) according to the period of treatment with enzyme replacement therapy in Fabry disease patients not treated with enzyme replacement therapy.
Figure 4 shows the fluorescent staining of the levels of complement component 3a (complement component 3a, C3a), complement component 4b (complement component 4b, C4b), and complement component 5a (complement component 5a, C5a) in renal tissues of patients with Fabry disease and normal volunteers. This is a photo confirmed by
Figure 5 is a photograph confirming the level of complement component 3a (complement component 3a, C3a) in the renal tissue of Fabry disease patients and normal volunteers by fluorescence staining.
FIG. 6 is a graph measuring the level of complement component 3a (C3a) in renal tissues of patients with Fabry disease and normal volunteers by quantification of fluorescent staining.
7 is a graph confirming the correlation between complement component 3a (complement component 3a, C3a) and plasma globotriaosylceramide (Gb3) in Fabry disease patients and normal volunteers.
본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.The terms used in this specification have been selected as currently widely used general terms as possible while considering the functions in the present invention, which may vary depending on the intention or precedent of a person skilled in the art, the emergence of new technology, and the like. In addition, in a specific case, there is a term arbitrarily selected by the applicant, and in this case, the meaning will be described in detail in the description of the corresponding invention. Therefore, the term used in the present invention should be defined based on the meaning of the term and the overall content of the present invention, rather than the name of a simple term.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.Unless defined otherwise, all terms used herein, including technical or scientific terms, have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. Terms such as those defined in a commonly used dictionary should be interpreted as having a meaning consistent with the meaning in the context of the related art, and should not be interpreted in an ideal or excessively formal meaning unless explicitly defined in the present application. does not
수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.Numerical ranges are inclusive of the values defined in that range. Every maximum numerical limitation given throughout this specification includes all lower numerical limitations as if the lower numerical limitation were expressly written. Every minimum numerical limitation given throughout this specification includes all higher numerical limitations as if the higher numerical limitation were expressly written. All numerical limitations given throughout this specification will include all numerical ranges that are better within the broader numerical limits, as if the narrower numerical limitations were expressly written.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
본 발명은 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)를 유효성분으로 포함하는 파브리 병의 진단 또는 예후 예측을 위한 바이오 마커 조성물을 제공한다.The present invention provides a biomarker composition for diagnosing or predicting the prognosis of Fabry disease, comprising complement component 3a (C3a) as an active ingredient.
상기 “보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)”는 보체 요소 3(complement component 3, C3)의 절단에 의해 형성되는 단백질 중 하나로, 보체 요소 3(complement component 3, C3)의 절단으로 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)와 보체 요소 3b(complement component 3b, C3b)가 형성된다. 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)는 클래스 A G 단백질-커플 수용체(G protein-coupled receptor)에 결합하는 77 잔기를 가진 아나필락톡신(anaphylatoxin)이다.The “complement component 3a (C3a)” is one of the proteins formed by cleavage of complement component 3 (C3). (complement component 3a, C3a) and complement component 3b (complement component 3b, C3b) are formed. Complement component 3a (C3a) is an anaphylatoxin with 77 residues that binds to a class A G protein-coupled receptor.
상기 “바이오 마커”는 일반적으로 생물학적 시료에서 검출 가능한 분자들 또는 화합물로서, 생체의 변화를 알아낼 수 있는 지표를 말한다. 상기 바이오 마커는 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a) 또는 이의 대사산물을 포함할 수 있으며, 이들의 수준을 측정함으로써 파브리 병을 진단하거나, 파브리 병을 가진 환자의 예후를 예측할 수 있다.The “biomarker” is generally a detectable molecule or compound in a biological sample, and refers to an indicator capable of detecting a change in a living body. The biomarker may include complement component 3a (C3a) or metabolites thereof, and by measuring their levels, it is possible to diagnose Fabry disease or predict the prognosis of a patient having Fabry disease.
상기 바이오 마커 조성물은 효소 대체 요법으로 치료받은 파브리 병 환자의 진단 또는 예후 예측을 위한 것일 수 있다.The biomarker composition may be for diagnosing or predicting a prognosis of a Fabry disease patient treated with enzyme replacement therapy.
상기 “효소 대체 요법”은 α-갈락토시다아제 A를 이용한 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며 파브리 병을 치료 또는 완화시킬 수 있는 공지된 효소 치료 방법을 모두 포함한다.The “enzyme replacement therapy” may be one using α-galactosidase A, but is not limited thereto, and includes all known enzyme treatment methods capable of treating or alleviating Fabry disease.
상기 “진단”은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 진단은 대상 개체가 파브리 병을 앓고 있는지 여부 또는 파브리 병의 정도를 확인하는 것이다.The “diagnosis” refers to identifying the presence or characteristics of a pathological condition. For the purposes of the present invention, diagnosis is to determine whether or not the subject has Fabry's disease or the extent of Fabry's disease.
상기 “예후 예측”은 파브리 병의 증세가 더욱 심화 또는 악화되는지 평가하는 것으로, 구체적으로 의사의 임상적 판단이 아닌 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a) 또는 이의 대사산물을 마커로 사용하여 환자의 증세가 개선되는지 악화되는지를 객관적으로 평가할 수 있는 정보를 제공하는 것이다.The “prediction of prognosis” is to evaluate whether the symptoms of Fabry disease worsen or worsen, specifically, by using complement component 3a (C3a) or its metabolites as a marker, not the clinical judgment of the doctor It is to provide information that can objectively evaluate whether symptoms improve or worsen.
상기 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)는 효소 대체 요법으로 치료되지 않는 파브리 병 환자에서 높은 수준으로 유지된다. 따라서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)는 효소 대체 요법으로 치료되지 않는 파브리 병 환자를 구분하는 바이오 마커로 사용될 수 있다.The complement component 3a (C3a) is maintained at high levels in Fabry disease patients not treated with enzyme replacement therapy. Therefore, complement component 3a (C3a) can be used as a biomarker to distinguish Fabry disease patients who are not treated with enzyme replacement therapy.
또한, 본 발명은 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준을 검출할 수 있는 제제를 유효성분으로 포함하는 파브리 병의 진단 또는 예후 예측을 위한 키트를 제공한다.In addition, the present invention provides a kit for diagnosing or predicting the prognosis of Fabry disease, comprising an agent capable of detecting the level of complement component 3a (C3a) as an active ingredient.
상기 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준을 검출할 수 있는 제제는 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)에 특이적으로 결합하는 항체, 펩타이드, 앱타머 또는 화합물일 수 있으며, 단백질의 발현 수준을 측정할 수 있는 제제일 수 있다. 상기 ‘단백질의 발현 수준’은 상기 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 펩타이드 또는 뉴클레오티드를 이용하여 측정할 수 있다.The agent capable of detecting the level of complement component 3a (complement component 3a, C3a) may be an antibody, peptide, aptamer or compound that specifically binds to complement component 3a (complement component 3a, C3a), and the protein It may be an agent capable of measuring the expression level. The 'expression level of the protein' may be measured using an antibody, peptide or nucleotide that specifically binds to the protein.
상기 항체는 다클론 항체, 단클론 항체, 재조합 항체 및 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 완전한 형태뿐만 아니라 및 항체 분자의 기능적인 단편, 예를 들어, Fab, F(ab'), F(ab')2및 Fv를 모두 포함한다. 항체 생산은 본 발명이 속하는 분야에 널리 공지된 기술을 이용하여 용이하게 제조할 수 있고, 제조되어 상업적으로 판매되는 항체를 이용할 수 있다.The antibodies are polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, recombinant antibodies and complete forms having two full-length light chains and two full-length heavy chains, as well as functional fragments of antibody molecules, e.g., Fab, F(ab'). ), F(ab')2 and Fv. Antibody production can be easily prepared using techniques well known in the art to which the present invention pertains, and commercially available antibodies can be used.
또한, 단백질의 수준은 면역분석법 또는 면역염색법에 의해 측정될 수 있다. 상기 방법은 시료에서 상기 바이오 마커 단백질 또는 이의 단편을 검출할 수 있는 마이크로칩 또는 자동화된 마이크로어레이 시스템의 형태로 실시될 수 있다.In addition, the level of the protein can be measured by an immunoassay or immunostaining method. The method may be implemented in the form of a microchip or an automated microarray system capable of detecting the biomarker protein or a fragment thereof in a sample.
상기 면역분석법 또는 면역염색법은 방사능면역분석, 방사능면역침전, 면역침전, ELISA, 캡처-ELISA, 억제 또는 경쟁 분석, 샌드위치 분석, 유세포 분석, 면역형광염색 및 면역친화성 정제를 포함할 수 있다.The immunoassay or immunostaining method may include radioimmunoassay, radioimmunoprecipitation, immunoprecipitation, ELISA, capture-ELISA, inhibition or competition assay, sandwich assay, flow cytometry, immunofluorescence staining and immunoaffinity purification.
상기 단백질 수준은 다중 반응 모니터링(multiple reaction monitoring: MRM), 병행 반응 모니터링(parallel reaction monitoring: PRM), sequential windowed data independent acquisition of the total high-resolution(SWATH), 선택 반응 모니터링(selected reaction monitoring: SRM) 또는 면역 다중 반응 모니터링(immuno multiple reaction monitoring: iMRM)을 이용하여 측정될 수도 있다. MRM은 물질의 정확한 단편을 결정하여 이를 질량분석기에서 깬 후, 한 번 깨진 이온 중 특정 이온을 한 번 더 선택하여 연속적으로 연결된 검출기를 이용하여 그 수를 얻는 방법이다.The protein level was measured by multiple reaction monitoring (MRM), parallel reaction monitoring (PRM), sequential windowed data independent acquisition of the total high-resolution (SWATH), selected reaction monitoring (SRM) ) or using immune multiple reaction monitoring (iMRM). MRM is a method to determine the exact fragment of a substance, break it in a mass spectrometer, select a specific ion from among the broken ions once more, and obtain the number using a continuously connected detector.
또한, 본 발명은 대상체로부터 분리된 생물학적 시료에서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준을 측정하는 단계를 포함하는 파브리 병의 진단 또는 예후 예측을 위한 정보를 제공하는 방법을 제공한다. 상기 대상체는 효소 대체 요법으로 치료받은 파브리 병 환자일 수 있다.In addition, the present invention provides a method of providing information for diagnosis or prognosis of Fabry disease, comprising measuring the level of complement component 3a (C3a) in a biological sample isolated from a subject. The subject may be a Fabry disease patient treated with enzyme replacement therapy.
또한, 본 발명은 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 발현 억제제를 유효성분으로 포함하는 파브리 병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating Fabry's disease comprising an expression inhibitor of complement component 3a (complement component 3a, C3a) as an active ingredient.
상기 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 발현 억제제는 보체 요소 3(complement component 3, C3)에 특이적으로 결합하는 펩타이드, 화합물, 항체 또는 결합 단편일 수 있고, 구체적으로 상기 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 발현 억제제는 페그세타코플란(pegcetacoplan, APL-2) 또는 콤스타틴 유사체(Derivative of compstatin, AMY101)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The expression inhibitor of complement component 3a (C3a) may be a peptide, compound, antibody or binding fragment that specifically binds to complement component 3 (C3), specifically, the complement component 3a ( The expression inhibitor of complement component 3a, C3a) may be pegcetacoplan (APL-2) or a compstatin analog (Derivative of compstatin, AMY101), but is not limited thereto.
상기 페그세타코플란(pegcetacoplan, APL-2)은 보체 요소 3(complement component 3, C3)에 특이적으로 결합하는 억제제로, 화학식으로는 C170H248N50O47S4(C2H4O)n (n ~ 800-1100)로 나타내며, 하기 화학식 1로 표시된다.The pegcetacoplan (APL-2) is an inhibitor that specifically binds to complement component 3 (C3), and has the chemical formula C 170 H 248 N 50 O 47 S 4 (C 2 H 4 O ) n (n ~ 800-1100), and is represented by the following formula (1).
[화학식 1][Formula 1]
상기 콤스타틴 유사체(Derivative of compstatin, AMY101)는 보체 요소 3(complement component 3, C3)에 특이적으로 결합하는 억제제로, 화학식으로는 C83H117N23O18S2로 나타내며, IUPAC 명으로는 2-[(4R,7S,10S,13S,19S,22S,25S,28S,31S,34R)-34-[(2S,3S)-2-[(2R)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanamido]-3-methylpentanamido]-7-(3-carbamimidamidopropyl)-4-{[(1S,2S)-1-carbamoyl-2-methylbutyl](methyl)carbamoyl}-25-(2-carbamoylethyl)-10-[(1H-imidazol-5-yl)methyl]-19-[(1H-indol-3-yl)methyl]-13,17-dimethyl-28-[(1-methyl-1H-indol-3-yl)methyl]-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-decaoxo-31-(propan-2-yl)-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-decaazacyclopentatriacontan-22-yl]acetic acid로 명명되며, 하기 화학식 2로 표시된다.The compstatin analog (Derivative of compstatin, AMY101) is an inhibitor that specifically binds to complement component 3 (C3), and is represented by the chemical formula C 83 H 117 N 23 O 18 S 2 , under the name of IUPAC. is 2-[(4R,7S,10S,13S,19S,22S,25S,28S,31S,34R)-34-[(2S,3S)-2-[(2R)-2-amino-3-(4 -hydroxyphenyl)propanamido]-3-methylpentanamido]-7-(3-carbamimidamidopropyl)-4-{[(1S,2S)-1-carbamoyl-2-methylbutyl](methyl)carbamoyl}-25-(2-carbamoylethyl) -10-[(1H-imidazol-5-yl)methyl]-19-[(1H-indol-3-yl)methyl]-13,17-dimethyl-28-[(1-methyl-1H-indol-3 -yl)methyl]-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33-decaoxo-31-(propan-2-yl)-1,2-dithia-5,8,11, Named as 14,17,20,23,26,29,32-decaazacyclopentatriacontan-22-yl]acetic acid, it is represented by the following formula (2).
[화학식 2][Formula 2]
상기 약학적 조성물은 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 및 카타플라스마제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 외용제 형태로 제형화될 수 있다.The pharmaceutical composition may be formulated in the form of one or more external preparations selected from the group consisting of creams, gels, patches, sprays, ointments, warning agents, lotions, liniments, pastas, and cataplasmas.
본 발명의 약학적 조성물은 제형화를 위해 추가로 있는 약학적으로 허용가능한 담체 및 희석제를 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용가능한 담체 및 희석제는 전분, 당, 및 만니톨과 같은 부형제, 칼슘 포스페이트 등과 같은 충전제 및 증량제, 카르복시메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스 등과 같은 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 알긴산염, 및 폴리비닐 피롤리돈 등과 같은 결합제, 활석, 스테아린산 칼슘, 수소화 피마자유 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 윤활제, 포비돈, 크로스포비돈과 같은 붕해제, 폴리소르베이트, 세틸알코올, 및 글리세롤 등과 같은 계면활성제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 약학적으로 허용가능한 담체 및 희석제는 대상체에게 생물학적 및 생리학적으로 친화적인 것일 수 있다. 희석제의 예로는 염수, 수용성 완충액, 용매 및/또는 분산제(dispersion media)를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The pharmaceutical composition of the present invention may further include a pharmaceutically acceptable carrier and diluent for formulation. The pharmaceutically acceptable carriers and diluents include starch, sugar, and excipients such as mannitol, fillers and extenders such as calcium phosphate, cellulose derivatives such as carboxymethylcellulose, hydroxypropylcellulose, gelatin, alginate, and polyvinyl blood binders such as rolidone; lubricants such as talc, calcium stearate, hydrogenated castor oil and polyethylene glycol; disintegrants such as povidone, crospovidone; surfactants such as polysorbates, cetyl alcohol, and glycerol; does not The pharmaceutically acceptable carrier and diluent may be biologically and physiologically compatible with the subject. Examples of diluents include, but are not limited to, saline, aqueous buffers, solvents, and/or dispersion media.
본 발명의 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여된다. 또한 본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 대상체의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하나, 이에 제한되는 것은 아니다.The pharmaceutical composition of the present invention may be administered orally or parenterally (eg, intravenously, subcutaneously, intraperitoneally or topically) according to a desired method, and is preferably administered orally. In addition, the dosage of the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the subject's body weight, age, sex, health status, diet, administration time, administration method, excretion rate, severity of disease, etc., but is not limited thereto.
본 발명에서 용어 “예방”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여로 질환의 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 말한다. 본 발명에서 용어 “치료”는 본 발명에 따른 조성물의 투여로 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 말한다.In the present invention, the term “prevention” refers to any act of inhibiting or delaying a disease by administering the composition according to the present invention. In the present invention, the term “treatment” refers to any action that improves or beneficially changes the symptoms of a disease by administration of the composition according to the present invention.
또한, 본 발명은 대상체로부터 분리된 생물학적 시료에서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준을 측정하는 제1단계; 및 시험물질을 처리한 후 상기 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준이 시험물질을 처리하지 않은 생물학적 시료에 비해 감소하면 파브리 병의 예방 또는 치료용 약제로 판단하는 제2단계;를 포함하는 파브리 병의 예방 또는 치료용 약제의 스크리닝 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a first step of measuring the level of complement component 3a (C3a) in a biological sample isolated from a subject; and a second step of judging the drug for the prevention or treatment of Fabry disease when the level of complement component 3a (C3a) decreases compared to a biological sample not treated with the test substance after treatment with the test substance; To provide a screening method for a drug for the prevention or treatment of Fabry disease.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실험예 및 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실험예 및 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실험예 및 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실험예 및 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.Hereinafter, experimental examples and examples will be described in detail to help the understanding of the present invention. However, the following experimental examples and examples are only to illustrate the content of the present invention, the scope of the present invention is not limited to the following experimental examples and examples. Experimental examples and examples of the present invention are provided to more completely explain the present invention to those of ordinary skill in the art.
<실험예> 실험 재료 및 방법<Experimental example> Experimental material and method
하기의 실험예들은 본 발명에 따른 각각의 실시예에 공통적으로 적용되는 실험예를 제공하기 위한 것이다.The following experimental examples are intended to provide experimental examples commonly applied to each embodiment according to the present invention.
1. 환자 및 조직 샘플1. Patient and Tissue Samples
본 실험에 사용된 샘플들은 서울아산병원에서 2016년 10월 내지 2020년 01월 동안 모집된 지원자들로부터 수집되었으며, 구체적으로 파브리 병 남자 환자는 12-62 세의 총 19명이 모집되었으며, 평균 나이는 34.6±16.0 세이고 평균 치료 기간은 5.0±4.9 년이고, 여자 파브리 병 환자는 39-68 세의 총 11명이 모집되었으며, 평균 나이는 54.0±8.4 세이고, 평균 치료 기간은 3.6±4.4 년이다. 정상 남자는 1-79 세의 총 31명이 모집되었으며, 평균 나이는 31.4±20.0 세이고, 정상 여자는 2-46 세의 28명이 모집되었으며, 평균 나이는 29.0±12.0 세이다.The samples used in this experiment were collected from volunteers recruited from October 2016 to January 2020 at Asan Medical Center in Seoul. A total of 11 female Fabry disease patients were recruited, aged 34.6±16.0 years, with a mean treatment period of 5.0±4.9 years. The mean age was 54.0±8.4 years, and the mean treatment period was 3.6±4.4 years. A total of 31 normal males aged 1-79 years were recruited, with an average age of 31.4±20.0 years, and 28 normal females aged 2-46 years, with an average age of 29.0±12.0 years.
2. ELISA 방법2. ELISA method
지원자로부터 수집된 샘플에서 혈장 보체 수준을 측정하기 위해 ELISA 방법을 이용하였다. 구체적으로 EDTA 혈액 검체 용기에 수집된 샘플은 채혈 후 30분 이내에 2℃ 내지 8℃의 원심분리기에서 1,000xg에서 15분 원심분리 후 위에 분리된 혈장만 분리하여 -20℃ 또는 -80℃에 보관 후 사용하였다.An ELISA method was used to measure plasma complement levels in samples collected from volunteers. Specifically, the sample collected in the EDTA blood sample container is centrifuged for 15 minutes at 1,000xg in a centrifuge at 2°C to 8°C within 30 minutes after blood collection, and only the plasma separated above is separated and stored at -20°C or -80°C. was used.
지원자로부터 수집된 샘플에서 혈장 보체 (C3a, iC3b, C4b, C5a) 수준을 정량적으로 측정하기 위하여, 효소결합 면역 흡착 분석법 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay; ELISA) 중 Sandwich ELISA 방법을 이용한 코팅형 ELISA 키트를 사용하였다. 사용한 키트는 C3a (SEA387Hu, Cloud-Clone Corp.), iC3b (E-EL-H2368, Elabscience), C4b (SEB305Hu, Cloud-Clone Corp.), C5a (SEA388Hu Cloud-Clone Corp.)로 각각의 보체 항원에 대한 특이적인 항체가 코팅되어 있는 micro ELISA plate 에 각각 standard, 혈장을 결합시키고, 결합하지 않은 항원을 씻어낸다. 효소 부착된 검출 항체를 위에 뿌려 항원에 붙게 하고, TMB 기질용액을 첨가하여 효소발색반응을 유도한다. 흡광분석기를 이용하여 450nm에서 OD값을 측정하여, 포획 항체에 붙은 항원을 정량화 한다.To quantitatively measure plasma complement (C3a, iC3b, C4b, C5a) levels in samples collected from volunteers, a coated ELISA kit using the Sandwich ELISA method in Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA) was used. was used. The kits used were C3a (SEA387Hu, Cloud-Clone Corp.), iC3b (E-EL-H2368, Elabscience), C4b (SEB305Hu, Cloud-Clone Corp.), C5a (SEA388Hu Cloud-Clone Corp.) with the respective complement antigens. Each standard and plasma are bound to a micro ELISA plate coated with an antibody specific for , and the unbound antigen is washed away. Sprinkle an enzyme-attached detection antibody on the top to attach to the antigen, and add TMB substrate solution to induce an enzymatic color reaction. By measuring the OD value at 450 nm using a spectrophotometer, the antigen attached to the capture antibody is quantified.
3. 오팔 수동 멀티 플렉스 IHC 분석(Opal manual multiplex IHC assay)3. Opal manual multiplex IHC assay
보체계의 활성도와 파브리 병의 상관 관계를 분석하기 위해 지원자들로부터 수집된 신장 조직을 오팔 수동 멀티 플렉스 IHC 분석을 실시하였다.To analyze the correlation between complement system activity and Fabry disease, opal passive multiplex IHC analysis was performed on kidney tissue collected from volunteers.
구체적으로 FFPE 슬라이드의 파라핀을 제거하기 위해 60℃ 오븐에 1시간 동안 넣어준 뒤, xylene에 10분간 3번씩 담가준다. 그 후, 100%, 95%, 70% ethanol을 각각 10분씩, 그리고 10% buffered formalin을 10분 처리하고 증류수로 세척한다. 그 다음, 슬라이드를 pH6.0의 citrate 용액에 담가 전자레인지 고출력(100%)에서 45초, 저출력(20%)에서 15분 돌려준 뒤, 15분 상온 보관한다. 슬라이드에 antibody blocking solution을 10분 처리한 후, C3a(1:100) 항체를 1시간 동안 처리하고 2X TBST로 3분간 3번씩 세척한다. 2차 항체를 1시간 동안 처리하고, 1X TBST로 3분간 3번씩 세척한다. 형광 반응을 위해 opal520(1:50) fluorophore를 10분간 처리하고 1X TBST로 5분간 2번씩 세척한다. 이 단계가 끝난 후 다음 항체를 붙이기 위해서 전자레인지 처리 단계부터 다시 시작한다. C5a(1:200)의 경우 opal570(1:50) fluorophore로, C4b(1:50)의 경우 opal650(1:50) fluorophore로 반응시킨다. 마지막 항체에서 fluorophore 붙이는 단계까지 끝났다면 DAPI를 5분간 처리해준다. 1X TBST 3분, DW 2분간 세척 후 mounting solution을 뿌리고 cover slip을 덮어준다. 매니큐어로 mounting solution이 세어 나오지 않도록 sealing 해 준 후, 현미경에서 관찰한다. 녹색은 C3a, 오렌지는 C5a, 적색은 C4b를 나타낸다.Specifically, to remove paraffin from the FFPE slide, it is put in an oven at 60°C for 1 hour, and then immersed in
4. 통계분석4. Statistical analysis
모든 통계적 처리는 평균±표준편차(standard deviation; S.D.)로 표기하였고, 모수적 방법 student T test, 비모수적 통계 방법 Mann-Whitney test에서 유의한 차이가 나타나는지 평가하였다.All statistical treatments were expressed as mean ± standard deviation (S.D.), and significant differences were evaluated in the parametric method student T test and the non-parametric statistical method Mann-Whitney test.
실시예 1. 통계적으로 파브리 병 환자에서 혈장 보체 인자의 수준Example 1. Statistical levels of plasma complement factor in Fabry disease patients
파브리 병 진단을 받은 환자 남녀 및 정상 지원자에서 혈장 보체 인자의 수준을 측정하여 파브리 병의 진단을 위한 바이오 마커 후보를 선별하였다.Biomarker candidates for the diagnosis of Fabry disease were selected by measuring the levels of plasma complement factors in male and female patients diagnosed with Fabry disease and in normal volunteers.
파브리 병 환자 및 정상 지원자로부터 혈액을 수집한 후 ELISA를 이용하여 보체 인자인 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a), 보체 요소 i3Cb (inactive complement component 3b, iC3b), 보체 요소 4b(complement component 4b, C4b), 및 보체 요소 5a(complement component 5a, C5a)의 수준을 측정하였다.After blood was collected from patients with Fabry disease and normal volunteers, ELISA was used to collect the complement factors, complement component 3a (C3a), inactive complement component 3b (iC3b), complement component 4b (complement component 4b, C4b), and complement component 5a (complement component 5a, C5a) levels were measured.
도 1 및 2에 나타난 바와 같이, 정상인 보다 파브리 병 환자에서 남녀 공통적으로 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)만 2배 이상 유의하게 증가하는 것으로 나타났다. 이는 이전 연구에서 iC3b는 파브리병 환자에서 남자는 치료 후 5.0±4.9년에서 정상인보다 오히려 값이 감소되어 있었고, 여자 파브리병 환자는 치료 3.6±4.4년 후에 정상인과 차이가 없는 것과 대비되는 결과이다. 즉, 본원발명의 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)는 iC3b와는 다르게 남녀 모두에서 파브리 병을 진단할 수 있는 바이오 마커로 적용할 수 있다는 것을 입증한다.As shown in FIGS. 1 and 2 , it was found that only complement component 3a (complement component 3a, C3a) was significantly increased more than 2 times in both men and women in Fabry disease patients than in normal subjects. In the previous study, iC3b values were decreased in Fabry disease patients at 5.0±4.9 years after treatment for men, rather than in normal subjects, and in female patients with Fabry disease there was no difference from normal subjects after 3.6±4.4 years after treatment. That is, it is demonstrated that the complement component 3a (complement component 3a, C3a) of the present invention can be applied as a biomarker capable of diagnosing Fabry disease in both men and women, unlike iC3b.
상기 결과는 혈장의 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a) 수준은 파브리 병을 진단할 수 있는 바이오 마커로 사용될 수 있음을 입증한다. 또한, 남자 환자는 5.0±4.9년 치료 후, 여자 파브리병 환자는 치료 3.6±4.4년 후에도 정상인에 비해서 유의하게 증가되어 있어서, 파브리병에서 새로운 치료 표적임을 제시하며, 파브리 병의 치료제를 개발하기 위해서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준이 파브리 병의 치료를 위한 제제의 효능을 검증하는 마커로도 사용될 수 있음을 입증한다.The above results demonstrate that the level of complement component 3a (C3a) in plasma can be used as a biomarker for diagnosing Fabry disease. In addition, male patients increased significantly after 5.0±4.9 years of treatment and female Fabry disease patients after 3.6±4.4 years of treatment, compared to normal subjects, suggesting a new therapeutic target for Fabry disease, and to develop a therapeutic agent for Fabry disease We demonstrate that the level of complement component 3a (C3a) can also be used as a marker to verify the efficacy of an agent for the treatment of Fabry disease.
실시예 2. 파브리 병 환자의 효소 치료에 따른Example 2. According to enzyme treatment of patients with Fabry disease 보체 인자 수준 변화Changes in complement factor levels
효소 대체 요법으로 치료받는 파브리 병 환자를 대상으로 치료 기간에 따라 혈장 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준이 변화하는지를 측정하였다.In patients with Fabry disease treated with enzyme replacement therapy, we measured whether the level of plasma complement component 3a (C3a) changes according to the treatment period.
도 3에 나타난 바와 같이, 파브리 병 환자의 치료 기간에 따라 혈장 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준에서 변화가 나타나지 않았으며, 효소 대체 요법으로도 파브리 병이 치료되지 않는 환자에서는 혈장 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준이 높게 유지되는 것으로 나타났다.As shown in Figure 3, there was no change in plasma complement component 3a (complement component 3a, C3a) levels according to the treatment period of Fabry disease patients, and in patients whose Fabry disease was not treated even with enzyme replacement therapy, plasma complement It was found that the level of component 3a (complement component 3a, C3a) remained high.
상기 결과는 어떤 환자에게 혈장 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준이 높게 나타나는 경우 파브리 병이 효소 대체 요법으로 치료되지 않을 수 있다는 것을 예측할 수 있으며, 이는 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)가 효소 대체 요법으로 치료되지 않는 파브리 병 환자를 진단하는 바이오 마커로 사용될 수 있음을 입증한다.These results may predict that Fabry disease may not be treated with enzyme replacement therapy if a patient has elevated levels of plasma complement component 3a (complement component 3a, C3a). ) can be used as a biomarker to diagnose Fabry disease patients who are not treated with enzyme replacement therapy.
또한, 파브리 병의 치료제를 개발하기 위해서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준이 효소 대체 요법으로 치료되지 않는 파브리 병의 치료를 위한 제제의 효능을 검증하는 마커로도 사용될 수 있음을 입증한다.In addition, in order to develop a therapeutic agent for Fabry disease, it was demonstrated that the level of complement component 3a (C3a) can be used as a marker to verify the efficacy of an agent for the treatment of Fabry disease that is not treated with enzyme replacement therapy. do.
실시예 3. 파브리 병 환자의 신장 조직에서 보체 인자의 수준 Example 3. Levels of complement factor in renal tissue of patients with Fabry disease
파브리 병 진단을 받은 환자 남녀 및 정상 지원자의 신장 조직에서 보체 인자의 수준을 측정하였다.Levels of complement factors were measured in renal tissues of male and female patients diagnosed with Fabry disease and normal volunteers.
도 4 내지 6에 나타난 바와 같이, 적색 형광인 보체 요소 4b(complement component 4b, C4b)와 오렌지색 형광인 보체 요소 5a(complement component 5a, C5a)의 수준은 정상 지원자와 파브리 병 환자와 비슷한 수준으로 나타났으나, 녹색 형광인 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준은 파브리 병 환자에서 높게 나타났다.As shown in FIGS. 4 to 6 , the levels of red fluorescent complement component 4b (complement component 4b, C4b) and orange fluorescent complement component 5a (complement component 5a, C5a) levels were similar to those of normal volunteers and patients with Fabry disease. However, the level of complement component 3a (C3a), which is green fluorescence, was high in Fabry disease patients.
상기 결과는 신장 조직에서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a) 수준은 파브리 병을 진단할 수 있는 바이오 마커로 사용될 수 있음을 입증한다. 또한, 파브리 병의 치료제를 개발하기 위해서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)의 수준이 파브리 병의 치료를 위한 제제의 효능을 검증하는 마커로도 사용될 수 있음을 입증한다.The above results demonstrate that the level of complement component 3a (C3a) in kidney tissue can be used as a biomarker for diagnosing Fabry disease. In addition, it is demonstrated that the level of complement component 3a (C3a) can be used as a marker to verify the efficacy of an agent for the treatment of Fabry disease in order to develop a therapeutic agent for Fabry disease.
실시예 4. 파브리 병의 임상 지표와 보체 인자와의 상관 관계 분석Example 4. Correlation analysis between clinical indicators of Fabry disease and complement factors
파브리 병의 진단 또는 예후 예측을 위한 바이오 마커로서 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)가 파브리 병의 임상 증상 지표인 혈장 리소좀 내의 글로보트리아오실세라미드(Globotriaosylceramide, lyso-Gb3)와의 관련성이 있는 지 상관관계를 분석하였다.As a biomarker for diagnosis or prognosis of Fabry disease, whether complement component 3a (C3a) is related to globotriaosylceramide (lyso-Gb3) in plasma lysosomes, a clinical symptom indicator of Fabry disease Correlation was analyzed.
도 7에 나타난 바와 같이, 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)는 혈장 리소좀 내의 글로보트리아오실세라미드(Globotriaosylceramide, lyso-Gb3)와 유의한 상관 관계가 있는 것으로 나타났으며, 상기 결과는 보체 요소 3a(complement component 3a, C3a)가 파브리 병의 진단을 위한 바이오 마커로서 가치가 있다는 것을 입증한다.As shown in Figure 7, complement component 3a (complement component 3a, C3a) was found to have a significant correlation with globotriaosylceramide (lyso-Gb3) in plasma lysosomes, and the results showed that the complement component We demonstrate that 3a (complement component 3a, C3a) is valuable as a biomarker for the diagnosis of Fabry disease.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 즉, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다.As described above in detail a specific part of the content of the present invention, for those of ordinary skill in the art, it is clear that this specific description is only a preferred embodiment, and the scope of the present invention is not limited thereby. do. That is, the substantial scope of the present invention is defined by the appended claims and their equivalents.
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