KR102223248B1 - 당귀 추출물, 천궁 추출물 및 작약 추출물을 포함하는 근력 개선 또는 근감소증 예방, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 명세서에는 당귀 추출물, 천궁 추출물 및 작약 추출물을 포함하는 근력 개선 또는 근감소증 예방 또는 개선용 조성물이 개시된다. 본 발명의 일 측면인 조성물은, 근세포 분화 인자의 발현 촉진을 통해, 근력과, 근감소증과 같은 근육 퇴행 관련 질환을 근본적으로 개선시킬 수 있다. 또한, 상기 조성물은, 천연물인 식물의 추출물을 유효성분으로 활용하므로 인체에 전혀 무해하다.
Description
본 명세서에는 당귀 추출물, 천궁 추출물 및 작약 추출물을 포함하는 근력 개선 또는 근감소증 예방 또는 개선용 조성물이 개시된다.
골격근(skeletal muscle)은 인체를 구성하는 가장 큰 기관으로서 인체의 40-50%을 차지한다. 골격근은 30세 이후가 되면 우리 몸에서 매년 약 1%씩 감소하는 경향을 보이다가 65세 이후부터는 급격하게 감소한다. 노화가 진행됨에 따라 근육의 기능적 능력(근력, 파워)도 점진적으로 감소하는데, 이처럼 노화에 따른 근육량의 감소뿐만 아니라 근력 또는 수행력의 감소를 근감소증(sarcopenia)이라고 한다.
노화성 근감소증은 노인들의 신체적 수행력의 제한으로 인해 낙상, 골절, 쇠약, 대사질환, 사망 등의 위험성을 증가시키는 것으로 보고되고 있다. 근감소증이라는 개념은 노화에 의한 근육량의 감소라는 측면에서 1989년 Rosenberg(1989)에 의해 처음 소개되었지만, 최근에는 근육량의 감소, 근력의 감소 및 신체수행력의 감소 등도 근감소증의 정의에 포함되는 것으로 이해되고 있다.
이러한 근감소증은, 신체의 노화가 진행됨에 따라 점진적으로 증가하는 추세이지만, 아직까지 노화성 근감소증에 대한 명확한 원인이나 뚜렷한 치료 방법이 밝혀지지 않은 실정이다(노화성 근감소증과 운동, 운동학 학술지 제19권 제2호).
일 측면에서, 본 발명의 목적은 근력 개선 효과가 우수한 조성물을 제공하는 것이다.
일 측면에서, 본 발명의 목적은 근감소증 예방 또는 개선 효과가 우수한 조성물을 제공하는 것이다.
일 측면에서, 본 발명의 목적은 천연물을 이용하여, 근력 및/또는 근감소증을 개선하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 일 측면에서, 당귀 추출물, 천궁 추출물 및 작약 추출물을 포함하는 근력 개선 또는 근감소증 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 일 측면에서, 당귀; 작약; 및 천궁의 추출물 또는 그 분획물을 유효성분으로 포함하는, 근감소증 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 측면인 조성물은, 근세포 분화 인자의 발현 촉진을 통해, 근력과, 근감소증과 같은 근육 퇴행 관련 질환을 근본적으로 개선시킬 수 있다. 또한, 상기 조성물은, 천연물인 식물의 추출물을 유효성분으로 활용하므로 인체에 전혀 무해하다.
도 1은 본 발명의 조성물 처리에 따른 원통 구르기 검사의 운동거리(도 1a)와 운동시간(도 1b)을 측정한 도이다.
도 2는 본 발명의 조성물 처리에 따른 강제수영검사에서 탈진시까지의 시간을 나타내는 도이다.
도 3은 본 발명의 조성물 처리에 따른 행동실험 후 근육조직에서 MyoD mRNA(도 3a), Mrf4 mRNA(도 3b), Myogenin mRNA(도 3c) 및 Myf5 mRNA(도 3d)의 베타-액틴 발현양에 대한 상대적 발현향을 보이는 도이다.
도 4는 본 발명의 조성물 처리에 따른, 치료형 모델에서의 MyoD mRNA(도 4a), Mrf4 mRNA(도 4b), Myogenin mRNA(도 4c) 및 Myf5 mRNA(도 4d)의 베타-액틴 발현양에 대한 상대적 발현향을 보이는 도이다.
도 5는 본 발명의 조성물 처리에 따른, 예방형 모델에서의 MyoD mRNA(도 5a), Mrf4 mRNA(도 5b), Myogenin mRNA(도 5c) 및 Myf5 mRNA(도 5d)의 베타-액틴 발현양에 대한 상대적 발현향을 보이는 도이다.
도 1 내지 5에서 125mg/kg, 250mg/kg 및 500mg/kg은, 실시예 3의 투여 용량을 의미한다.
도 2는 본 발명의 조성물 처리에 따른 강제수영검사에서 탈진시까지의 시간을 나타내는 도이다.
도 3은 본 발명의 조성물 처리에 따른 행동실험 후 근육조직에서 MyoD mRNA(도 3a), Mrf4 mRNA(도 3b), Myogenin mRNA(도 3c) 및 Myf5 mRNA(도 3d)의 베타-액틴 발현양에 대한 상대적 발현향을 보이는 도이다.
도 4는 본 발명의 조성물 처리에 따른, 치료형 모델에서의 MyoD mRNA(도 4a), Mrf4 mRNA(도 4b), Myogenin mRNA(도 4c) 및 Myf5 mRNA(도 4d)의 베타-액틴 발현양에 대한 상대적 발현향을 보이는 도이다.
도 5는 본 발명의 조성물 처리에 따른, 예방형 모델에서의 MyoD mRNA(도 5a), Mrf4 mRNA(도 5b), Myogenin mRNA(도 5c) 및 Myf5 mRNA(도 5d)의 베타-액틴 발현양에 대한 상대적 발현향을 보이는 도이다.
도 1 내지 5에서 125mg/kg, 250mg/kg 및 500mg/kg은, 실시예 3의 투여 용량을 의미한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 일 측면에서, 본 발명은, 당귀; 작약; 및 천궁의 추출물 또는 그 분획물을 유효성분으로 포함하는, 근력 개선용 조성물이다.
본 명세서에서 근력 개선은, 근육 양(muscle mass)의 감소, 근질의 저하 등에 의한 근력 저하 현상을 개선하는 것을 의미할 수 있다.
또한, 일 측면에서, 본 발명은, 당귀; 작약; 및 천궁의 추출물 또는 그 분획물을 유효성분으로 포함하는, 근감소증(sarcopenia) 예방, 개선 또는 치료용 조성물이다.
당귀는, 미나리과에 속하는 다년생 방향성 풀로, 한국과 중국, 일본 등에 분포한다.참당귀(Angelica gigas Nakai), 중국당귀(Angelica sinensis (Oliv.) Diels), 왜당귀(Angelica acutiloba) 등이 알려져 있고, 참당귀는 보혈작용과 활혈작용 등이 우수하여 혈압제, 빈혈 치료제 등으로 널리 사용되고 있다.
천궁(Cnidium officinale)은 미나리과의 여러해살이 풀로, 한국·일본 등지에 분포한다. 예로부터, 천궁의 뿌리는 진정·진통 및 강장제로 사용되고 있다.
본 명세서에서, 상기 작약은, 작약속 식물을 의미할 수 있으며, 작약속 식물은, 작약(Paeonia lactiflora), 백작약(Paeonia Japonica Miyabe & Takeda), 적작약(Paeonia lactiflora Pall.), 호작약(Paeonia lactiflora Pall. var. hirta Regel), 및 참작약 (Paeonia lactiflora Pall. var. trichocarpa (Bunge) Stern)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 작약속 식물은 쌍떡잎식물 작약과의 여러해살이풀로서, 진통·복통·월경통·무월경·토혈·빈혈·타박상 등의 치료제로 사용되고 있다.
일 측면에서, 상기 당귀, 작약 및 천궁의 추출물은, 각각의 열매 추출물, 줄기 추출물, 잎 추출물, 또는 지하부 추출물을 포함할 수 있고, 전초 추출물을 포함할 수 있으나, 바람직하게는 각각의 뿌리 추출물일 수 있다.
본 명세서에서 "추출물" 은, 천연물로부터 그 안의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질이라면, 뽑아내는 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함한다. 예컨대, 물이나 유기 용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출해 낸 것을 의미할 수 있다.
상기 추출물 또는 그 추출물의 분획물은 그대로 사용할 수도 있으나, 여과 후 농축하여 엑기스 형태로 사용할 수 있으며, 농축 후 동결 건조하여 동결건조물의 형태로서 사용할 수 있다.
일 측면에서, 상기 당귀, 작약, 및 천궁 각각은 1~100:1~100:1~100의 중량비로 포함될 수 있다. 바람직하게는, 상기 당귀, 작약 및 천궁은 순서대로, 1~30:1~30:1~30, 더욱 바람직하게는 1~10:1~10:1~10, 더욱 바람직하게는 1~5:1~5:1~5, 더욱 바람직하게는, 0.8~1.2:0.8~1.2:0.8~1.2의 중량비로 포함될 수 있고, 가장 바람직하게는 1:1:1 중량비로 포함될 수 있다.
상기 조성물은, 상기 추출물을 병용함으로써, 한가지의 추출물만을 포함할 경우와 비교하여 현저히 우수한 근력 개선 및/또는 근감소증 개선, 예방 또는 치료 효과를 나타낼 수 있다.
일 측면에서, 상기 당귀, 작약 및 천궁의 추출물 또는 그 분획물은, 조성물 총 중량을 기준으로, 0.0001~90중량%로 포함될 수 있다. 상기 각각의 추출물 또는 그 분획물은, 조성물 총 중량을 기준으로, 바람직하게는 30~80중량%, 더욱 바람직하게는 35~70중량%, 가장 바람직하게는 40~65중량%로 포함될 수 있다.
상기와 같은 측면에서, 상기 추출물의 추출용매는 물, 유기용매 또는 유기용매의 수용액을 포함할 수 있다.
상기 추출물의 용매가 물인 경우, 냉수 추출물 또는 열수 추출물을 포함할 수 있다.
상기 유기 용매는, 특별히 제한되는 것은 아니며, 메탄올, 에탄올, 이소프로필알코올, n-프로필 알코올, n-부탄올 및 이소부탄올 등의 C1~5의 저급 알코올, 글리세롤, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 등의 다가 알코올, 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 벤젠, n-헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 클로로포름 등의 탄화수소계 용매, 그리고 석유에테르, 메틸아세테이트, 벤젠, 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 디메틸에테르, 에틸아세테이트 등의 비극성 유기용매 등 일 수 있다.
상기 유기용매 수용액의 농도는, 1~90%(v/v)일 수 있다.
일 측면에서, 상기 분획물은 다당체 분획물을 포함할 수 있다.
일 측면에서, 상기 조성물은, 상기 당귀, 작약 및 천궁의 추출물과, 그 분획물의 혼합물을 포함할 수 있다.
상기 조성물이, 상기 추출물과 분획물을 동시에 포함할 때, 더욱 우수한 근력 개선 및/또는 근감소증 개선 또는 예방 효과를 나타낼 수 있다.
상기 분획물은, 추출물과 분획물의 총량을 기준으로, 10~60 중량%로 함유될 수 있고, 바람직하게는 20~50중량%, 더욱 바람직하게는 25~45중량%, 가장 바람직하게는 30~40중량%로 포함될 수 있다.
일 구현예에서. 상기 조성물이, 상기 추출물과 그 분획물의 혼합물일 경우, 상기 추출물과, 분획물은 약 40~80: 20~60의 중량비로 포함될 수 있고, 바람직하게 45~75:25~55의 중량비로 포함될 수 있고, 더욱 바람직하게 50~70:30~50의 중량비로 포함될 수 있고, 가장 바람직하게 60~70:30~40의 중량비로 포함될 수 있다.
일 측면에서, 상기 조성물은 근육세포의 분화를 촉진할 수 있다.
상기 근육세포의 분화는, 줄기세포의 근육 모세포로의 분화, 근육 모세포의 근관세포로의 분화를 포함할 수 있다.
또한, 상기 조성물은 체세포의 근육세포로의 유도를 촉진할 수 있다.
또한, 상기 조성물은 MyoD, myf4, myf5, MRF4, MRF5, 및 MRF6의 발현을 증가시키는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 측면에서, 상기 조성물은, 약학적 조성물 또는 식품 조성물을 포함할 수 있다.
본 발명의 일측면에서, 상기 약학 조성물은 일 측면에서 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 일 측면에서 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등이 있다.
또한, 상기 약학적 조성물은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 제제화할 경우에는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제 등을 통상 사용한다. 이러한 고형 제제에는 상기 유효성분 외에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴을 포함할 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 포함될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 있으며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액상 파라핀 이외에 여러가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
본 명세서에 개시된 추출물의 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다를 수 있으며, 당해 기술분야에서 통상적으로 사용되는 범위에서 선택될 수 있다. 일측면에서 유효성분의 1일 투여량은 건조 중량 기준으로 0.0001~1g/kg일 수 있다.
상기 식품 조성물은, 건강기능 식품 조성물을 포함할 수 있으며, 상기 건강기능 식품 조성물은, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.
일 실시예에서 상기 조성물은 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유할 수 있다. 예를 들어, 물성 개선을 위하여 향료, 색소, 살균제, 산화 방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류, 유화제 및 합성 고분자 물질 등의 첨가제를 더 포함할 수 있다.
그 외에도, 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 해초 엑기스 등의 보조 성분을 더 포함할 수도 있다. 상기 성분들은 제형 또는 사용 목적에 따라서 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 그 첨가량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 성분들의 첨가량은, 조성물 전체 중량을 기준으로, 0.01~5 중량%, 보다 구체적으로는 0.01~3 중량% 범위일 수 있다.
이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 실시예 및 시험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 예에 의해 제한되는 것은 아니다.
[제조예] 조성물 제조
[제조예1-1] 추출물 제조
당귀의 뿌리, 천궁의 근경, 작약의 뿌리 각각을 음건하고 세절하여 각각의 생약재 총 무게의 10배의 증류수(생약재 100g당 증류수 1000ml)를 가한 뒤 4 시간 동안 열탕추출 하였다. 추출물에서 고형분을 제거하고, 감압 농축하여 추출물을 얻었다(실시예 1).
[제조예1-2]다당체 분획물 제조
제조예 1에서의 추출물에 추출물 부피 대비 4배의 100% 에탄올을 첨가하여 25℃ 이하에서 16시간 동안 정치한 후, 원심분리하여 침전된 조다당 분획을 수거하였다(실시예 2).
[제조예 1-3] 혼합 조성물 제조
제조예 1-1에서 제조한 추출물과, 제조예 1-2에서 제조한 다당체 분획물을 65~70: 30~35의 중량비로 혼합하여 조성물을 제조하였다.
[실험예 1] 원통 구르기 테스트(Rotarod test) 및 강제수영운동(Forced Swimming Test; FST)
실험용 마우스를 이용하여, 원통 구르기 테스트(Rotarod test)와, 강제수영운동(Forced Swimming Test; FST)를 실시하였다.
실험 마우스는 6주령 ICR 마우스(male)를 사용하였고, 무균사육장치 내에서 1주일 동안 적응시킨 후 실험에 사용하였다.
부검 일에, 시료 투여 30분 후 Rotarod test 실험을 모두 진행하고 바로 강제수영운동을 진행하였다.
아무것도 투여하지 않은 동물을 음성대조군으로, 크레아틴 300mg/kg을 투여한 군을 양성 대조군으로 하였다.
[실험예 1-1] 원통 구르기 테스트
원통 구르기 검사(Rotarod test)는, 순화기간 동안 pre-training을 두 번 진행한 후, 순화기간 후 1일째 되는 날부터 3주간 시료(실시예 1 내지 3, 및 양성대조군인 creatine)를 투여하여 진행하였다. pre-training은 4-40 rpm까지 속도를 올리며 진행하였다. 실시예 1은, 350mg/kg으로, 실시예 2는 150mg/kg으로 투여하였고, 실시예 3은 125mg/kg, 250mg/kg 및 500mg/kg으로 투여하여 실험을 진행하였다.
시료 투여 시작 후, 시료 투여 30분 후에 Rotarod test를 일주일에 한 번씩 진행하며 Latency time과 이동거리를 측정하였다. 본 test에서는 10분 이내에 4-40rpm으로 rotarod cylinder를 가속화하여 fall latency, 이동거리를 측정하고 3번 반복한 평균 값을 구하였다.
그 결과, 근력개선에 의해, 실시예를 투여한 군에서 대조군(control)에 비하여 증가한 운동 이동거리와, 운동시간이 증가했음을 확인할 수 있었다(도 1). 특히, 실시예 중에서도 추출물과 분획물의 혼합물인 실시예 3에서 더욱 우수한 효과를 확인할 수 있었다.
*Latency time: rotarod 장치에서 실험동물이 낙하하기까지의 머무른 시간을 의미함.
[실험예 1-2] 강제수영운동(FST)
순화기간 후 일주일에 한 번씩 강제수영 훈련(*탈진 시까지의 시간 측정)을 하고, 부검 일에도 강제수영운동을 진행하였다. 수영이 진행되는 물의 온도는 25±5℃이었으며, 체중의 5~10%의 추를 달아 진행하였으며 3번 반복한 평균 값을 구하였다.
FST를 한 후 탈진시까지의 시간과, 근육 생성과 관련된 인자들의 유전자 발현 변화를 측정하였다. 구체적으로, 부검 일에, 원통구르기 검사를 진행한 후 FST 실험을 진행하고 바로 부검을 진행하였으며, 혈액, 간, 뒷다리 종아리에 있는 비복근(gastrocnemius)을 채취하였고, RT-PCR을 이용하여 근육생성 조절인자(myogenic regulator factors; MRFs)의 유전자 발현을 분석하였다.
* 마우스의 코가 수면 아래로 5초 이상 가라앉는 시점을 탈진 시점으로 함.
그 결과, 실시예를 투여한 군의 경우, 근력 개선으로 인해 탈진까지의 시간이 증가하였음을 알 수 있었고(도 2) , 특히 실시예 중에서도 추출물과 분획물의 혼합물인 실시예 3에서 더욱 우수한 효과를 확인할 수 있었다. 또한, 실시예를 투여한 그룹은 근육 분석 결과, MRFs의 발현이 유의적으로 증가하는 경향을 확인할 수 있었다(도 3).
[실험예 2] In vitro 근육생성 조절인자 저하모델 적용 시험
치료형 모델은 근육세포인 L6 myoblast (ATCC)를 10% FBS (Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)과 함께 12-웰 플레이트에 4 X 105cell/ml이 되도록 넣고, 세포밀도가 약 80~85%가 되었을 때, 웰에 있는 배지를 제거하고 LPS(Lipopolysaccharide, 2μg/mL)가 함유된 DMEM (Hyclone)을 처리하여 근육생성 조절인자를 저하시켰다.
3일 배양 후 실시예 1~3을 125 μg/mL, 250 μg/mL, 500 μg/mL 의 농도로 세포에 처리하여 myotube 분화를 유도하였다.
예방형 모델은 근육세포인 L6 myoblast (ATCC)를 10% FBS (Hyclone)가 함유된 DMEM (Hyclone)과 함께 12-웰 플레이트에 4 X 105cell/ml이 되도록 넣고, 세포밀도가 약 80~85%가 되었을 때, 웰에 있는 배지를 제거하고 실시예 1~3 각각이 125 μg/mL, 250 μg/mL, 500 μg/mL 의 농도로 함유된 DMEM (Hyclone)을 처리하여 배양 진행하였다. 3일 배양 후 LPS(Lipopolysaccharide, 2μg/mL)를 녹인 후, 세포에 처리하여 myotube 분화를 유도하였다.
이 때, 시료 대신 0.01% DMSO를 처리한 군을 대조군으로 하였고, 3일간 진행하여 분화시킨 후, 유전자(mRNA)를 추출하였다.
유전자(mRNA)를 추출 하기 위하여 유전자 추출키트(QIAGEN RNeasy Mini kit)를 사용하였으며, 업체에서 제공한 방법에 추출 수율을 높이기 위하여 변형/최적화 한 후 사용하였다. 분리한 총 RNA는 나노드랍 (NanoDrop 1000; Thermo Fisher Scientific Inc., MA, USA)을 이용하여 정량하였다. 정량 된 20 μL의 RNA는 역전사 키트(High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kits)와 PCR 기기(Allsheng. China)를 이용하여 25℃에서 10분, 37℃에서 120분, 85℃에서 5분의 조건에서 cDNA로 합성하였다.
20 μL의 생성된 cDNA중 2 μL의 cDNA, 하기의 특정 프라이머(Bioneer, Daejeon, Korea)와PCR premix (Bioneer, Daejeon, Korea)로 95℃에서 5분간 초기변성을 진행하고, 95℃에서 15초, 60℃에서 30초, 72℃에서 1분을 30번 반복하여 증폭을 행 하였으며, 72℃에서 5분동안 최종신장을 통하여 PCR을 수행하였다.
gene | 정방향 | 역방향 |
MyoD | 5′-GCAGGCTCTGCTGCGCGACC-3′ | 5′-TGCAGTCGATCTCTCAAAGCACC-3′ |
Myf5 | 5′-TGTATCCCCTCACCAGAGGAT-3′ | 5′-GGCTGTAATAGTTCTCCACCTGTT-3′ |
MRF4 | 5′-CTACATTGAGCGTCTACAGGACC-3′ | 5′-CTGAAGACTGCTGGAGGCTG-3′ |
myogenin | 5′-TGGAGCTGTATGAGACATCCC-3′ | 5′-TGGACAATGCTCAGGGGTCCC-3′ |
그 결과, 치료형 및 예방형 모두에서, 실시예를 처리한 군에서 상기 근육 생성 조절 인자의 발현이 증가하여, 근육 분화를 촉진하는 효과가 있음을 확인할 수 있었다(도 4 및 도 5).
Claims (11)
- 당귀; 작약; 및 천궁의 혼합 추출물 및 그 에탄올 분획물을 유효성분으로 포함하는, 근력 개선용 식품 조성물.
- 당귀; 작약; 및 천궁의 혼합 추출물 또는 그 에탄올 분획물을 유효성분으로 포함하는, 근감소증 예방 또는 개선용 식품 조성물로서,
상기 조성물은 근육세포의 분화, 또는 체세포의 근육세포로의 유도를 촉진하는 것인, 식품 조성물. - 제2항에 있어서,
상기 당귀, 작약 및 천궁의 혼합 추출물 또는 그 에탄올 분획물은, 순서대로,
1~100:1~100:1~100의 중량비로 포함되는, 식품 조성물. - 제2항에 있어서,
상기 당귀, 작약 및 천궁의 혼합 추출물 또는 그 에탄올 분획물은,
조성물 총 중량을 기준으로, 0.0001~90 중량%로 포함되는, 식품 조성물. - 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 혼합 추출물의 추출 용매는,
물, 유기용매 또는 유기용매 수용액을 포함하는, 식품 조성물. - 제5항에 있어서,
상기 유기용매 수용액의 농도는 1~90%(v/v)인, 식품 조성물. - 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 에탄올 분획물은,
에탄올 다당체 분획물을 포함하는, 식품 조성물. - 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 조성물은, 당귀, 작약 및 천궁의 혼합 추출물;및
상기 혼합 추출물의 에탄올 분획물을 포함하고,
상기 혼합 추출물과 그 에탄올 분획물은 60~70:30~40의 중량비로 포함되는, 식품 조성물. - 삭제
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 조성물은,
MyoD, myf4, myf5, MRF4, MRF5, 및 MRF6의 발현을 증가시키는, 식품 조성물.
- 삭제
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