KR102181090B1

KR102181090B1 - A composition comprising extract of Prasiola japonica for wound healing

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Publication number: KR102181090B1
Application number: KR1020180171542A
Authority: KR
Inventors: 조재열; 김성규; 박상희; 박경자; 장석구; 김동삼; 최영임; 김지현; 최은주; 임혜연; 이채영; 홍요한; 김한경
Original assignee: 삼척시
Priority date: 2018-12-28
Filing date: 2018-12-28
Publication date: 2020-11-20
Also published as: KR20200081727A

Abstract

본 발명은 민물김 추출물을 유효성분으로 포함하는 상처 치료용 조성물에 관한 것으로, 상기 민물김 추출물은 피부세포에 대한 상처 치료 효과가 우수하여 상처 치료용 약학 조성물로써 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to a composition for wound treatment comprising a freshwater seaweed extract as an active ingredient, and the freshwater seaweed extract has excellent wound healing effects on skin cells, and thus may be usefully used as a pharmaceutical composition for wound treatment.

Description

A composition comprising extract of Prasiola japonica for wound healing comprising freshwater laver extract as an active ingredient

본 발명은 민물김 추출물을 유효성분으로 포함하는 상처 치료용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for wound treatment comprising a freshwater laver extract as an active ingredient.

신체를 외부 침입자로부터 지키고 수분과 체온을 유지하는 피부 조직이 손상된 것이 상처(wound)이며, 상처 치료(wound healing)는 손상된 조직의 기능과 형태적 특성을 다시 정상화시키기 위한 필수적인 반응이다(Woodley, D. T. et al., J. Am. Acad. Dermatol., 12(2Pt2), 420-433, 1985; Orgill, D. et al., CRC, 2009). 상처가 났을 때 적절히 치료되지 않으면 세균 감염 등으로 체내 장기에 치명적인 손상을 일으킬 수도 있으므로, 상처 발생시 손상된 피부 부위가 가능한 한 빨리, 또 본래 피부 구조와 유사하게 복원되도록 조취를 취하는 것이 중요하다.The wound is the damaged skin tissue that protects the body from external intruders and maintains moisture and body temperature, and wound healing is an essential reaction to normalize the function and morphological characteristics of the damaged tissue again (Woodley, DT et al., J. Am. Acad. Dermatol., 12(2Pt2), 420-433, 1985; Orgill, D. et al., CRC, 2009). If the wound is not properly treated, it may cause fatal damage to the organs of the body due to bacterial infection, etc., so it is important to take steps to restore the damaged skin area as soon as possible and similar to the original skin structure when a wound occurs.

상처 치료는 지혈(hemostasis)과 염증기(inflammation)의 1단계, 증식기(proliferation)의 2단계 및 성숙기(remodeling)의 3단계로 이루어지며 각 단계는 중첩되어 연속적으로 진행된다(Bello, Y. M. et al., JAMA, 283(6), 716-718, 2000; Midwood, K. S. et al., Int. J. Biochem. Cell Biol., 36(6), 1031-1037, 2004; Stadelmann, W. K. et al., Am. J. Surg., 176(24A Suppl), 26S-38S, 1998). Wound treatment consists of one stage of hemostasis and inflammation, two stages of proliferation, and three stages of remodeling, and each stage overlaps and proceeds continuously (Bello, YM et al. , JAMA, 283(6), 716-718, 2000; Midwood, KS et al., Int. J. Biochem. Cell Biol., 36(6), 1031-1037, 2004; Stadelmann, WK et al., Am. J. Surg., 176 (24A Suppl), 26S-38S, 1998).

상처가 나면 첫 번째 단계인 지혈과 염증 반응이 일어나는데, 지혈은 수분 내에 혈소판이 상처부위로 집합하여 섬유소성 응고(fibrin clot)를 형성하는 반응으로 출혈을 막는 역할을 한다(Midwood, K. S. et al., Int. J. Biochem. Cell Biol., 36(6), 1031-1037, 2004; Sandeman, S. R. et al., Mech. Ageing Dev., 119(3), 149-157, 2000). 염증 반응은 박테리아나 조직 잔해들이 식균작용(phagocytosis)에 의해 제거되면서 마크로파지(macrophage)로부터 여러 사이토카인(cytokine)들이 방출되어 증식기에 분화(differentiation)되는 세포의 이주(migration)와 분열(mitosis)을 돕게 된다. When a wound is injured, the first step, hemostasis and inflammatory reactions, occur. Hemostasis plays a role in preventing bleeding by forming fibrin clot by collecting platelets within a few minutes (Midwood, KS et al. , Int. J. Biochem. Cell Biol., 36(6), 1031-1037, 2004; Sandeman, SR et al., Mech.Aging Dev., 119(3), 149-157, 2000). Inflammatory response is when bacteria or tissue debris are removed by phagocytosis, and various cytokines are released from macrophages, which causes the migration and mitosis of cells to differentiate during the proliferative phase. Will help.

두 번째 단계인 증식기에는 신생혈관형성, 콜라겐 축적, 육아조직(granulation tissue) 형성, 상피화(epithelialization), 상처 수축 등이 일어난다(Midwood, K. S. et al., Int. J. Biochem. Cell Biol., 36(6), 1031-1037, 2004; Chang, H. Y. et al., PLOS Biol., 2(2), E7, 2004). 이 시기는 상처 유합과 교원질 섬유(collagenous fiber)의 재배열을 위한 초기 단계로서, 섬유아세포(fibroblast)들이 상처 부위에 출현하게 된다(Byl, N. N. et al., Arch. Phys. Med. Rehabil., 73(7), 656-664, 1992). In the second stage, the proliferative phase, angiogenesis, collagen accumulation, granulation tissue formation, epithelialization, wound contraction, etc. occur (Midwood, KS et al., Int. J. Biochem. Cell Biol., 36 (6), 1031-1037, 2004; Chang, HY et al., PLOS Biol., 2(2), E7, 2004). This period is an early stage for wound fusion and rearrangement of collagen fibers, and fibroblasts appear at the wound site (Byl, NN et al., Arch. Phys. Med. Rehabil., 73(7), 656-664, 1992).

최종적으로 성숙기에는 상처의 공간이 육아 조직(granulation tissue)으로 완전히 대체되고 혈관 생성이 최고조에 달하며 교원섬유의 양이 풍부해져 상피세포가 점점 정상 두께를 회복하고 상처 치료가 완료된다(Galeano, M. et al., Wound Repair Regen., 16(2), 208-217, 2008; Garg, H. G. et al., Informa Healthcare, 2000; 박은교, 중앙대학교 대학원 석사학위논문, 2011). Finally, in the maturity stage, the space of the wound is completely replaced by granulation tissue, blood vessel generation reaches its peak, and the amount of collagen fibers becomes abundant, so that the epithelial cells gradually recover their normal thickness and the wound healing is completed (Galeano, M. et al., Wound Repair Regen., 16(2), 208-217, 2008; Garg, HG et al., Informa Healthcare, 2000; Eun-gyo Park, Master's thesis, Chung-Ang University Graduate School, 2011).

표피성장인자(epidermal growth factor, EGF)는 표피성장인자수용체(epidermal growth factor receptor, EGFR)에 결합하여 다양한 세포의 증식, 분화 및 생존을 조절하는 성장인자 중 하나이다. 특히, 각질세포의 증식과 세포이동을 촉진하여 재상피화에 주요한 역할을 담당함으로써, 상처치료에 탁월한 기능을 수행하는 것으로 알려져 있다. 표피성장인자는 혈소판, 대식세포, 섬유모세포 등에서 분비되며 각질세포에는 주변분비(paracrine) 형식으로 작용한다. 표피성장인자는 케라틴 6(K6)과 케라틴 16(K16)의 발현을 증가시키며, 세포증식 신호전달과정을 활성화한다. 임상적으로 조직이식부위, 당뇨성 족부궤양과 같은 만성 창상에 외용 표피성장인자를 도포할 경우 상피화가 촉진되어 상처회복 속도가 단축되는 것으로 알려져 있다(Barrientos, S. et al., Wound Repair Regen., 16(5), 585-601, 2008).Epidermal growth factor (EGF) is one of the growth factors that regulate the proliferation, differentiation, and survival of various cells by binding to the epidermal growth factor receptor (EGFR). In particular, it is known to play a major role in re-epithelialization by promoting keratinocyte proliferation and cell migration, thereby performing an excellent function in wound healing. Epidermal growth factor is secreted from platelets, macrophages, fibroblasts, etc., and acts in the form of paracrine on keratinocytes. Epidermal growth factor increases the expression of keratin 6 (K6) and keratin 16 (K16) and activates the cell proliferation signaling process. Clinically, it is known that application of external epidermal growth factor to chronic wounds such as tissue transplant sites and diabetic foot ulcers accelerates epithelialization and shortens the wound recovery rate (Barrientos, S. et al., Wound Repair Regen. , 16(5), 585-601, 2008).

민물김(Prasiola japonica)은 물김이라는 이름으로 구전되어 왔으며, 현대에 이르러 민물김으로 알려지고 있다. 민물김은 홍조류인 바다김과 달리 녹조류(Green algae, Phylum Chlorophyta)로서 바다가 아닌 민물에서 생육하며, 민물파래과(Prasiolacease)에 포함된다(Park, M. K. et al., J. Plant Bio., 13, 1-10, 1970). 일본에서는 민물김을 카와노리(하천김)라는 이름으로 부르고 있으며, 하천김과 같은 민물 조류를 인공배양하여 높은 상업적 이윤을 창출하고 있다. 우리나라 민물김은 1938년 일본 학자인 Okada가 함경남도 문천군 문천면에서 최초로 채취하여 Prasiola formosana var. coreana Okada로 명명하여 발표한 것이 효시이며(Okada, Y., J. Jpn. Bot., 15, 449-452, 1939), 삼척군의 집단에 대한 형태 및 생태학적 연구가 수행된 바가 있다(Park, M. K. et al., J. Plant Bio., 13, 1-10, 1970). 우리나라에서는 산업화에 따른 인위적 영향으로 40여년 전에 이미 사라진 종으로 알려졌으나 아직 강원도 삼척시의 소한천에 민물김이 분포하고 있음이 밝혀졌다. Freshwater laver ( Prasiola japonica ) has been oral tradition under the name water laver, and is known as freshwater laver in modern times. Freshwater laver, unlike sea laver, which is a red algae, is a green algae (Phylum Chlorophyta), which grows in freshwater, not in the sea, and is included in the Prasiolacease (Park, MK et al., J. Plant Bio., 13, 1-10, 1970). In Japan, freshwater laver is called kawanori (river laver), and freshwater algae such as river laver are artificially cultured to generate high commercial profits. Freshwater laver in Korea was first collected in Muncheon-myeon, Muncheon-gun, Hamgyeongnam-do by Japanese scholar Okada in 1938, and Prasiola formosana var. It was published under the name of coreana Okada (Okada, Y., J. Jpn. Bot., 15, 449-452, 1939), and morphological and ecological studies of the Samcheok-gun group have been conducted (Park, MK et al., J. Plant Bio., 13, 1-10, 1970). In Korea, it was known as a species that had already disappeared 40 years ago due to the artificial influence of industrialization, but it was revealed that freshwater laver is still distributed in Sohancheon in Samcheok-si, Gangwon-do.

민물김과 같은 녹조류 유래 추출물이 항고혈압 및 미코스포린-유사 아미노산(mycosporine-like amino acids, MAAs)에 의한 자외선 차단 등의 활성을 가지는 것으로 보고되었다(Cha, S. H. et al., J. Korean Soc. Food Sci. Nutr., 35, 307-314, 2006; Groniger, A. et al., J. Photochem. Photobiol. B., 66, 54-59, 2002). 한편 일본에서 민물유래 식용김으로 사용하고 있는 스이젠지노리(Suizenzinori, Aphanothece sacrum)에는 고 함량의 철분 및 칼슘 등 미네랄 성분이 풍부한 것으로 조사되었으며, 알러지성 피부염을 억제하는 성분인 사크란(Sacran, sulfated polysaccharide)이 함유되어 있어 약리학적 활용도가 높게 평가되고 있다(Ngatu, N. R. et al., Ann. Allergy Asthma Immunol., 108, 117-122, 2012). 그러나, 국내 자생 민물김에 대한 생리활성물질 성분분석 및 약리학적 분석에 대한 연구는 아직까지 많이 이루어지지 않고 있는 실정이다.It has been reported that extracts derived from green algae such as freshwater laver have antihypertension and UV protection by mycosporine-like amino acids (MAAs) (Cha, SH et al., J. Korean Soc. Food Sci. Nutr., 35, 307-314, 2006; Groniger, A. et al., J. Photochem. Photobiol. B., 66, 54-59, 2002). On the other hand, Suizenzinori (Aphanothece sacrum ), which is used as a freshwater-derived laver in Japan, was found to be rich in minerals such as high iron content and calcium. ), and thus its pharmacological utility is highly evaluated (Ngatu, NR et al., Ann. Allergy Asthma Immunol., 108, 117-122, 2012). However, studies on the analysis of physiologically active substances and pharmacological analysis of domestically grown freshwater laver have not been conducted much.

민물김 추출물을 포함하는 상처 치료용 조성물과 관련된 종래선행문헌으로서, 선행문헌 [Seo, D. W. et al., J. Biomed. Res., 14(2), 83-90, 2013] 및 [Sa, J. H. et al., Rep. Inst. Health & Environ., 25, 52-62, 2014]에는 민물김 추출물의 생리활성(항암 효과, 항염증 효과, 항산화 효과, 항당뇨 효과, 자외선 차단효과)이 개시되었으며, 한국등록특허 제10-1591401호에는 민물김 추출물의 항암용 약학 조성물이 개시되었고, 한국등록특허 제10-1725758호에는 해조류 추출물을 포함하는 상처 치료 및 피부 재생용 조성물이 개시된 바 있다. 그러나, 민물김 추출물의 상처 치료 효과를 언급한 이전 보고는 아직 없다. As a prior literature related to a composition for treating wounds containing freshwater laver extract, prior literature [Seo, D. W. et al., J. Biomed. Res., 14(2), 83-90, 2013] and [Sa, J. H. et al., Rep. Inst. Health & Environ., 25, 52-62, 2014] discloses the physiological activities of freshwater laver extract (anti-cancer effect, anti-inflammatory effect, antioxidant effect, anti-diabetic effect, UV blocking effect), and Korean Patent No. 10-1591401 No. 1 discloses a pharmaceutical composition for anticancer of a freshwater laver extract, and Korean Patent No. 10-1725758 discloses a composition for wound treatment and skin regeneration including seaweed extract. However, there are no previous reports mentioning the wound healing effect of freshwater laver extract.

한국등록특허 제10-1591401호, 암 치료용 약학 조성물, 2016년 01월 28일, 등록.Korean Patent Registration No. 10-1591401, pharmaceutical composition for cancer treatment, January 28, 2016, registered. 한국등록특허 제10-1725758호, 해조류 추출물을 포함하는 상처 치료 및 피부 재생용 조성물, 2017년 04월 05일, 등록.Korean Patent Registration No. 10-1725758, Composition for wound treatment and skin regeneration including seaweed extract, registered on April 05, 2017.

박은교, Genistein 섭취가 상처치유 과정 중 초기 단계에 미치는 영향, 중앙대학교 대학원 석사학위논문, 2011.Eun-Kyo Park, The Effect of Genistein Intake on the Early Stage of Wound Healing Process, Chung-Ang University Master's Thesis, 2011 Barrientos, S. et al., Growth factors and cytokines in wound healing, Wound Repair Regen., 16(5), 585-601, 2008.Barrientos, S. et al., Growth factors and cytokines in wound healing, Wound Repair Regen., 16(5), 585-601, 2008. Bello, Y. M. et al., Recent advances in wound healing, JAMA, 283(6), 716-718, 2000.Bello, Y. M. et al., Recent advances in wound healing, JAMA, 283(6), 716-718, 2000. Byl, N. N. et al., Low-dose ultrasound effects on wound healing: a controlled study with Yucatan pigs, Arch. Phys. Med. Rehabil., 73(7), 656-664, 1992.Byl, N. N. et al., Low-dose ultrasound effects on wound healing: a controlled study with Yucatan pigs, Arch. Phys. Med. Rehabil., 73(7), 656-664, 1992. Cha, S. 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본 발명의 목적은 민물김 추출물을 유효성분으로 포함하는 상처 치료용 조성물을 제공하는데 있다. An object of the present invention is to provide a composition for treating wounds comprising a freshwater laver extract as an active ingredient.

본 발명은 민물김(Prasiola japonica) 추출물을 유효성분으로 포함하는 상처 치료용 약학 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a pharmaceutical composition for wound treatment comprising a freshwater kim ( Prasiola japonica ) extract as an active ingredient.

상기 민물김은 녹조류로 홍조류인 바다김과는 달리 바다가 아닌 민물에서 생육하며, 민물파래과(Prasiolacease)에 속한다. The freshwater laver is a green algae and, unlike sea laver, which is a red algae, grows in freshwater, not in the sea, and belongs to the Prasiolacease family.

상기 민물김 추출물은 민물김을 물, C1 내지 C4의 저급 알코올, 아세톤, 헥산, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 용매로 추출하여 얻을 수 있으며, 상기 C1 내지 C4의 저급 알코올로는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 및 이소부탄올로 이루어진 군에서 선택될 수 있고, 바람직하게는 에탄올을 사용한다. The freshwater laver extract may be obtained by extracting freshwater laver with one or more solvents selected from the group consisting of water, C1 to C4 lower alcohol, acetone, hexane, dichloromethane and ethyl acetate, and the C1 to C4 lower alcohol The furnace may be selected from the group consisting of methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol and isobutanol, and ethanol is preferably used.

또한, 상기 추출물의 추출시간은 특별히 제한되는 것은 아니나, 10분 내지 1일 이내에 추출하는 것이 바람직하며, 추출용 기기로는 통상의 추출기기, 초음파분쇄추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다. In addition, the extraction time of the extract is not particularly limited, but it is preferable to extract within 10 minutes to 1 day, and a conventional extraction device, an ultrasonic grinding extractor, or a fractionator may be used as an extraction device.

상기 상처는 피부 조직이 손상된 것으로써 창상, 화상, 궤양 등이 포함되며, 구체적으로는 창상, 욕창, 화상, 찰과상, 천자 궤양성 창상, 자상, 활성산소에 의한 만성 피부창상, 인후 또는 구강 점막의 창상, 타박상, 절상, 열상, 좌상 및 피부궤양으로 이루어진 군에서 선택된다.The wound is a damaged skin tissue and includes wounds, bedsores, burns, abrasions, puncture ulcerative wounds, cuts, chronic skin wounds caused by free radicals, throat or oral mucosa. It is selected from the group consisting of wounds, bruises, cuts, lacerations, contusions and skin ulcers.

본 발명 민물김 추출물은 약학 조성물 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.001중량% 내지 50중량%, 더 바람직하게는 0.001중량% 내지 40중량%, 가장 바람직하게는 0.001중량% 내지 30중량%로 첨가될 수 있다. The freshwater laver extract of the present invention may be added in an amount of preferably 0.001% to 50% by weight, more preferably 0.001% to 40% by weight, and most preferably 0.001% to 30% by weight based on the total weight of the pharmaceutical composition. have.

본 발명에 따른 약학 조성물은 일반적으로 사용되는 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 적합한 형태로 제형화될 수 있다. "약학적으로 허용 가능"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증 등과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 또한, 상기 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 경구용 투여제, 스프레이제, 겔제, 연고제, 크림제 또는 외용제로 제형화하여 사용될 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention may be formulated in a suitable form together with a generally used pharmaceutically acceptable carrier. "Pharmaceutically acceptable" refers to a composition that is physiologically acceptable and, when administered to a human, does not usually cause an allergic reaction or similar reaction such as gastrointestinal disorders, dizziness, and the like. In addition, the compositions may be formulated and used in the form of oral dosage forms such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions, respectively, according to a conventional method, Preferably, it may be formulated and used as an oral dosage, spray, gel, ointment, cream or external preparation.

상기 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로즈, 수크로스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아라비아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산프로필, 탈크, 스테아르산마그네슘 및 광물유를 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 안정화제, 결합제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 미결정셀룰로오스, 수크로스 또는 락토오스, 저치환도히드록시프로필셀룰로오스, 히프로멜로오스 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아르산마그네슘, 탈크 같은 활택제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 유동파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다. Carriers, excipients, and diluents that can be included in the composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum arabic, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl Cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oil may be included, but are not limited thereto. In the case of formulation, it is prepared using diluents or excipients such as commonly used fillers, stabilizers, binders, disintegrants, and surfactants. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations include at least one excipient, for example, starch, microcrystalline cellulose, sucrose or lactose, in the extract of the present invention, It is prepared by mixing low-substituted hydroxypropyl cellulose and hypromellose. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Liquid preparations for oral use include suspensions, liquid solutions, emulsions, syrups, etc. In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweetening agents, fragrances, and preservatives may be included. . Preparations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories. Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate may be used as the non-aqueous solvent and the suspension. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerol, gelatin, and the like may be used.

본 발명 약학 조성물의 투여량은 치료받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여 경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.01㎎/㎏/일 내지 대략 2000㎎/㎏/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 1㎎/㎏/일 내지 500㎎/㎏/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. The dosage of the pharmaceutical composition of the present invention will vary depending on the age, sex, and weight of the subject to be treated, the specific disease or pathology to be treated, the severity of the disease or pathology, the route of administration, and the judgment of the prescriber. Dosage determination based on these factors is within the level of one of ordinary skill in the art, and dosages generally range from 0.01 mg/kg/day to approximately 2000 mg/kg/day. A more preferred dosage is from 1 mg/kg/day to 500 mg/kg/day. Administration may be administered once a day, or may be divided several times. The above dosage does not in any way limit the scope of the present invention.

본 발명 약학 조성물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사 및 피부 도포에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 추출물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다. The pharmaceutical composition of the present invention can be administered to mammals such as mice, livestock, and humans by various routes. All modes of administration can be expected and can be administered, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dural or cerebrovascular injection and skin application. Since the extract of the present invention has almost no toxicity and side effects, it is a drug that can be safely used even when taken for a long time for prophylactic purposes.

도 1은 상처를 유발한 HaCaT 세포에서의 민물김 추출물(Pj-EE) 처리에 따른 상처 치료 이동 어세이 확인 결과이다.
도 2는 상처를 유발한 HaCaT 세포에서의 민물김 추출물(Pj-EE) 처리에 따른 케라틴 6(K6), 케라틴 16(K16), 케라틴 17(K17)의 mRNA 발현량 변화를 확인한 결과이다.
도 3은 상처를 유발한 HaCaT 세포에서의 민물김 추출물(Pj-EE) 처리에 따른 각질세포 증식인자(KGF, keratinocyte growth factor)의 mRNA 발현량 변화를 확인한 결과이다.
도 4는 상처를 유발한 HaCaT 세포에서의 민물김 추출물(Pj-EE) 처리에 따른 PI3K 및 AKT의 단백질 발현량 변화를 확인한 결과이다. 1 is a result of confirming a wound treatment migration assay according to treatment with freshwater laver extract (Pj-EE) in HaCaT cells causing a wound.
Figure 2 is a result of confirming the change in the mRNA expression level of keratin 6 (K6), keratin 16 (K16), keratin 17 (K17) according to the treatment of freshwater laver extract (Pj-EE) in HaCaT cells causing a wound.
3 is a result of confirming the change in the mRNA expression level of keratinocyte growth factor (KGF) according to treatment with freshwater laver extract (Pj-EE) in HaCaT cells causing a wound.
4 is a result of confirming the change in protein expression levels of PI3K and AKT according to treatment with freshwater laver extract (Pj-EE) in HaCaT cells causing a wound.

이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지고, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.Hereinafter, a preferred embodiment of the present invention will be described in detail. However, the present invention is not limited to the embodiments described herein and may be embodied in other forms. Rather, the content introduced herein becomes thorough and complete, and is provided to sufficiently convey the spirit of the present invention to those skilled in the art.

<실시예 1. 민물김 추출물 제조><Example 1. Preparation of freshwater laver extract>

본 발명의 민물김(Prasiola japonica)은 삼척시에서 채취한 민물김을 사용하였다. Freshwater laver ( Prasiola japonica ) of the present invention was used freshwater laver collected in Samcheok City.

삼척시에서 채취한 민물김은 불순물들을 제거하기 위해 수돗물로 세척하였고, 70%[v/v] 에탄올을 이용하여 살균 처리 후, 증류수로 세척하여 동결 건조하였다. 동결 건조한 민물김을 곱게 파쇄하고, 파쇄된 민물김 100g에 80%[v/v] 에탄올 1ℓ을 넣고 실온에서 24시간 동안 침지시켰다. 이러한 과정을 3회 반복하여 얻은 추출액을 와트만 여과지(filter paper)로 여과시킨 후, 증발기(evaporator)를 이용하여 용매를 증발시켜 민물김 추출물을 확보하였다. Freshwater laver collected from Samcheok-si was washed with tap water to remove impurities, sterilized using 70% [v/v] ethanol, washed with distilled water, and freeze-dried. Freeze-dried freshwater laver was finely crushed, and 80% [v/v] ethanol 1L was added to 100g of the crushed freshwater laver and immersed at room temperature for 24 hours. The extract obtained by repeating this process 3 times was filtered with Whatman filter paper, and then the solvent was evaporated using an evaporator to obtain a freshwater laver extract.

<실시예 2. HaCaT 세포의 배양><Example 2. Culture of HaCaT cells>

HaCaT(human keratinocyte cell) 세포는 10% FBS(fetal bovine serum)와 1% 페니실린(penicillin) 및 100U/㎖의 스트렙토마이신(streptomycin)을 첨가한 DMEM(Dulbecco's Modified Medium) 배지를 사용하여, 37℃, 5% CO₂조건에서 계대 배양하여 실험에 사용하였다. HaCaT (human keratinocyte cell) cells use DMEM (Dulbecco's Modified Medium) medium to which 10% FBS (fetal bovine serum), 1% penicillin, and 100 U/ml of streptomycin are added, at 37°C, It was used in the experiment by subculture in 5% CO₂ condition.

<실시예 3. 민물김 추출물의 상처 치료 효과 확인><Example 3. Confirmation of wound healing effect of freshwater laver extract>

실시예 3-1. 상처 치료 이동 어세이(wound healing migration assay)Example 3-1. Wound healing migration assay

본 발명의 민물김 추출물의 처리에 따른 상처 치료 효과를 확인하기 위해 상처 치료 이동 어세이를 수행하였다.In order to confirm the wound healing effect according to the treatment of the freshwater laver extract of the present invention, a wound treatment migration assay was performed.

상기 실시예 2에서 배양한 HaCaT 세포를 6웰 플레이트에 웰당 1×10⁶개의 세포가 되도록 분주하여 24시간 동안 배양하였다. 이후, 200㎖ 피펫 팁(pipette tip)으로 작은 상처를 만든 다음, 민물김 추출물을 200㎍/㎖ 농도로 처리하고 8시간 간격으로 상처의 넓이를 측정하여 상처 치료 효과를 확인하였다. 상처 치료 이동 어세이 결과는 도 1A 및 1B에 나타내었다.HaCaT cells cultured in Example 2 were aliquoted into a 6-well plate so as to be 1×10 ⁶ cells per well, and cultured for 24 hours. Thereafter, a small wound was made with a 200 ml pipette tip, and then the freshwater laver extract was treated at a concentration of 200 μg/ml, and the wound area was measured every 8 hours to confirm the wound healing effect. The wound healing migration assay results are shown in Figures 1A and 1B.

도 1A 및 1B를 참고하면, 본 발명 민물김 추출물을 상처가 유발된 HaCaT 세포에 처리하는 경우, 상처를 낸 부위로 세포 이동에 따른 면적 감소가 나타나 상처 치료 효과가 우수함을 알 수 있었다. Referring to FIGS. 1A and 1B, when the freshwater laver extract of the present invention was treated on the wound-induced HaCaT cells, the area was reduced due to cell migration to the wounded area, indicating that the wound healing effect was excellent.

실시예 3-2. 상처 치료에 따른 조직 재생 관련 mRNA 및 단백질의 변화 확인Example 3-2. Confirmation of changes in mRNA and protein related to tissue regeneration following wound healing

상기 실시예 2에서 배양한 HaCaT 세포를 6웰 플레이트에 웰 당 8×10⁵개의 세포가 되도록 분주하고 24시간 동안 배양하였다. 이후, 200㎖ 피펫 팁으로 작은 상처를 만든 다음, 민물김 추출물을 농도별(50, 100, 200㎍/㎖)로 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 이후, 세포로부터 케라틴 6, 케라틴 16, 케라틴 17 및 KGF의 mRNA 발현과 PI3K 및 AKT의 단백질 발현을 확인하여 도 2 내지 4에 나타내었다. The HaCaT cells cultured in Example 2 were aliquoted into a 6-well plate so as to be 8×10 ⁵ cells per well, and cultured for 24 hours. Thereafter, a small wound was made with a 200 ml pipette tip, and then the freshwater seaweed extract was treated at different concentrations (50, 100, 200 μg/ml) and cultured for 24 hours. Then, mRNA expression of keratin 6, keratin 16, keratin 17 and KGF and protein expression of PI3K and AKT were confirmed from the cells, and are shown in FIGS. 2 to 4.

도 2 내지 4를 살펴보면, 상처난 피부세포에 민물김 추출물을 처리하는 경우 케라틴 6, 케라틴 16, 케라틴 17의 mRNA 발현이 농도 의존적으로 증가하여 세포 증식이 촉진됨을 알 수 있었고, 각질세포 증식인자(KGF, keratinocyte growth factor)의 mRNA 발현이 농도 의존적으로 증가하여 상피 또는 표피세포의 증식이 촉진됨을 알 수 있었으며, 또한, 인산화된 p-PI3K와 p-AKT의 단백질이 농도 의존적으로 증가함에 따라 표피성장인자수용체 신호전달 경로를 활성화시킴을 알 수 있었다.Referring to Figures 2 to 4, it can be seen that when the freshwater laver extract was treated on wounded skin cells, the mRNA expression of keratin 6, keratin 16, and keratin 17 increased in a concentration-dependent manner, thereby promoting cell proliferation, and keratinocyte proliferation factor ( It was found that the expression of mRNA of KGF (keratinocyte growth factor) was increased in a concentration-dependent manner, and the proliferation of epithelial or epidermal cells was promoted. Also, epidermal growth as the phosphorylated p-PI3K and p-AKT proteins increased in a concentration-dependent manner. It was found that it activates the factor receptor signaling pathway.

이로부터 본 발명 민물김 추출물은 표피를 성장시키고 상처를 치료하는 효과가 우수한 조성물임을 알 수 있었다.From this, it was found that the freshwater seaweed extract of the present invention has an excellent effect of growing the epidermis and healing wounds.

<제제예 1. 약학적 제제><Formulation Example 1. Pharmaceutical formulation>

제제예 1-1. 친수성 연고제의 제조Formulation Example 1-1. Preparation of hydrophilic ointment

본 발명 실시예 1의 민물김 추출물을 이용하여, 하기 표 1에 기재된 조성에 따라 통상의 방법으로 친수성 연고제를 제조하였다. Using the freshwater laver extract of Example 1 of the present invention, a hydrophilic ointment was prepared by a conventional method according to the composition shown in Table 1 below.

원료명Raw material name 함량(중량%)Content (% by weight) 실시예 1Example 1 8.08.0 백색 바세린White vaseline 35.035.0 스테아릴 알콜Stearyl alcohol 30.030.0 에칠(또는 메칠)p-옥시벤조에이트Ethyl (or methyl) p-oxybenzoate 미량a very small amount 프로필렌글리콜Propylene glycol 20.020.0 라우릴 황산 나트륨Sodium lauryl sulfate 3.43.4 프로필 p-옥시벤조에이트Propyl p-oxybenzoate 미량a very small amount

제제예 1-2. 정제의 제조Formulation Example 1-2. Manufacture of tablets

본 발명 실시예 1의 민물김 추출물을 이용하여, 하기 표 2에 기재된 성분을 혼합한 후, 통상의 정제 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.Using the freshwater laver extract of Example 1 of the present invention, the ingredients shown in Table 2 were mixed, and then tableted according to a conventional tablet manufacturing method to prepare tablets.

원료명Raw material name 중량(㎎)Weight(mg) 실시예 1Example 1 100㎎100mg 옥수수전분Corn starch 100㎎100mg 유당Lactose 100㎎100mg 스테아린산 마그네슘Magnesium stearate 2㎎2mg

Claims

Freshwater laver ( Prasiola japonica ) A pharmaceutical composition for wound treatment comprising an extract as an active ingredient.

The method of claim 1,
The freshwater seaweed extract is a pharmaceutical composition for wound treatment, characterized in that obtained by extracting and concentrating freshwater seaweed with water, C1 to C4 lower alcohol, or a mixed solvent thereof.

The method of claim 1,
The wound is selected from the group consisting of wounds, bedsores, burns, abrasions, puncture ulcerative wounds, cuts, chronic skin wounds caused by free radicals, wounds of the throat or oral mucosa, bruises, cuts, lacerations, contusions and skin ulcers. A pharmaceutical composition for treating wounds, characterized in that.

The method of claim 1,
The freshwater seaweed extract is a pharmaceutical composition for wound treatment, characterized in that added in 0.001% to 50% by weight based on the total weight of the composition.

The method of claim 1,
The composition is a pharmaceutical composition for the treatment of wounds, characterized in that formulated as an oral dosage, spray, gel, ointment, cream or external preparation.