KR102140403B1

KR102140403B1 - 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102140403B1
Application number: KR1020190118110A
Authority: KR
Inventors: 백문기; 김은영; 김다애; 이대우; 유태선
Original assignee: 주식회사 신세계인터코스코리아; 주식회사 더마랩
Priority date: 2019-09-25
Filing date: 2019-09-25
Publication date: 2020-07-31

Abstract

본 발명은 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 분홍바늘꽃의 꽃, 잎, 줄기, 전초 또는 그 혼합물, 꽃생강의 뿌리, 서양톱풀의 전초를 아임계 추출 후 가수분해하여 제조되는 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물을 유효성분으로 함유하여, 자외선 및 블루라이트로 인한 피부노화 억제, 자외선, 적외선 등에 의한 피부 열노화 억제, 블루라이트 차단 및 미백 활성이 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition containing the extracts of natural substances comprising Epilobium Angustifolium, Hedychium Coronarium, and Achillea Millefolium}

본 발명은 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 분홍바늘꽃의 꽃, 잎, 줄기, 전초 또는 그 혼합물, 꽃생강의 뿌리, 서양톱풀의 전초를 아임계 추출 후 가수분해하여 제조되는 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물을 유효성분으로 함유하여 자외선 및 블루라이트로 인한 피부노화 억제, 자외선, 적외선 등에 의한 피부 열노화 억제, 블루라이트 차단 및 미백 활성이 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.

블루라이트(blue light)는 가시광선 영역에서 푸른색 계열의 빛으로 높은 에너지를 갖는 380~500nm 파장의 빛이다. 블루라이트는 본래 태양빛에서 나오며 태양이 가장 높게 뜨는 한 낮에 제일 많이 방출되고 해가 지면 완전히 사라진다. 그러나 최근 스마트 기기의 보급이 확산되면서 블루라이트가 태양빛뿐 아니라 TV, 컴퓨터, 스마트 폰 등의 전자기기의 디스플레이와 LED 조명기기에서 많이 방출되고 있다.

블루라이트에 노출되면 각성을 유도하는 세로토닌(Serotonin)과 숙면을 유도하는 멜라토닌(Melatonin)의 분비를 조절하여 일상생활에 유익한 역할을 하지만, 블루라이트에 장기간 노출되면 안구건조증을 유발하여 눈에 손상 가져오거나, 호르몬의 불균형으로 인한 수면장애를 유발시킴으로써 인체에 악영향을 주는 문제점이 있다. 최근 급속도로 스마트폰이나 태블릿 PC가 보급되면서 스마트기기의 평균 사용시간이 길어짐에 따라 일상에서 블루라이트에 장기간 노출되고 있다. 블루라이트가 인체에 주는 악영향은 시력 저하와 수면 방해로 알려져 있으나, 최근에는 블루라이트가 피부에 미치는 유해성에 대해 조사되고 있다.

연구에 의하면 블루라이트가 피부 세포 속의 미토콘드리아 DNA를 손상시키고 활성산소를 생성하여 세포의 기능 장애, 세포노화 및 종양 발생을 야기한다는 것이 보고된 바 있다. 또한, 블루라이트는 멜라닌 생성을 유도하여 피부가 칙칙해지고 기미가 생기는 원인이 된다. 블루라이트에 의해 피부가 손상될 가능성이 있음에도 불구하고, 블루라이트로부터 피부를 보호하는 방법 및 조성물에 대한 개발은 아직 미흡한 상태이다.

최근 웰빙 트렌드가 모든 분야에서 중요시되고 있는 사회로 변화하고 있는 가운데 천연물 소재 화장품에 대한 관심도 높아지고 있다. 최근 천연추출물을 안정화시키거나, 독성을 줄이는 안정한 유도체로 전환시켜 효과를 높이고자 하는 시도가 많아지고 있다. 일예로 효소를 이용한 생물전환(Bio-conversion) 방법이 개발되고 있다. 인체 세포에 흡수가 용이한 저분자 물질로 전환되거나, 불안정하거나 불활성인 형태에서 활성 형태로 전환되어 흡수되기도 한다. 미생물이나 효소를 이용하여 천연추출물의 효능을 극대화시키거나, 안전성 문제를 해결하기 위한 시도는 다양한 식품, 화장품 약품 등의 개발에 있어서 중요한 의미를 갖는다.

화장품 업계는 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 다수의 제품을 개발하고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 점차 증가하고 있다. 최근 개발된 다수의 자외선(UV) 차단제의 주성분에 천연 식물 추출물이 포함되어 있으며, 자외선 차단뿐 아니라 피부 보습과 미백효과와 같은 다기능 화장료 제품이 개발되고 있다.

피부 노화의 원인에는 내적 원인과 외적 원인이 있다. 피부는 외부 환경에 노출되어 있어서 외적인 인자의 영향으로 노화가 진행되는 경우가 많으며, 이 들 중에는 자외선에 의한 손상, 외부 유해 환경 성분, 각종 스트레스로 인한 내부 요인이 포함된다. 외인성 노화는 주로 태양광선에 의해 영향을 받으며, 특히 자외선은 광노화(photo-aging)를 일으키는 것으로 잘 알려져 있다. 반면, 적외선은 체내에 열을 상승시켜 이로운 작용을 하는 것으로 알려져 있다. 그러나 연구 결과에 의하면 적외선은 인체에서 완전히 무해하다고 간주하기 어려우며, 자외선과 같이 photo-aging 및 photo-carcinogenesis에 관여한다고 알려져 사람의 피부에 장시간 노출하게 되면 열에 의한 피부 노화를 발생시킨다고 보고되었다.

종래에는 피부 노화를 억제하기 위한 방법으로 피부의 보습력을 증가시키기 위하여 화장품에 콜라겐을 배합한 제품들이 출시되어 있으나, 이들 화장품은 콜라겐을 피부 표면에 도포하는 것으로서 고분자인 콜라겐의 경피흡수가 어려워 보습작용을 기대할 수 없으므로 본질적인 피부 기능 개선이라고 말할 수 없었다.

산화스트레스는 단백질 분해효소의 활성화, 탄력섬유인 콜라겐과 엘라스틴 절단, 히아루론산 절단 등의 생체 구성 성분들의 손상을 야기하며, 피부 염증 유발 및 피부 면역기능을 억제시켜 세균 감염증 또는 발암율의 증가를 가져온다. 따라서 활성산소 생성을 억제하고 활성산소로 인한 염증 반응 억제 및 피부 보습력을 증가시켜 피부세포를 보호하여야 한다. 페놀계 합성 항산화제로 널리 사용되고 있는 BHA(butylated hydroxy anisol)와 BHT(butylated hydroxytolunene)는 그 효과와 경제성 때문에 많이 사용해 왔지만 안전성에 의심을 받고 있다. 따라서 인체에 안전한 천연 항산화제에 대한 개발이 요구되고 있다.

한편, 자외선에 의한 피부노화 현상을 억제하는 천연소재는 기존에 많이 연구가 되어 있으나 블루라이트에 의한 피부노화 억제 소재는 비교적 최근에서야 연구가 진행되고 있다. 올리브, 레스베라트롤 등이 블루라이트에 의한 피부세포 손상을 억제한다는 연구논문이 최근 발표되었다(Avola R. et al., 2019; Mamalis A. et al., 2016). 블루라이트와 피부 관련 특허는 지금까지 수십 편이 검색되나 주로 LED 미용기기와 관련된 특허가 대부분이며, 블루라이트를 피부로부터 차단, 방어할 수 있는 소재는 소수가 검색되었다. 관련특허로는 블루라이트 방어용 화장품 조성물 (공개번호 제10-2019-0006910호, KR), 스피루리나 추출물을 유효성분으로 함유하는 블루라이트 차단용 화장료 조성물 (등록번호 제10-1851623호, KR) 등이 있다. 그 밖에 유해 가시광선 차단용 화장료 조성물 (공개번호 제10-2017-0101799호, KR), 옥 분말을 함유하는 블루라이트 차단용 화장료 조성물 (공개번호 제10-2017-0003391호, KR), 자외선과 블루라이트에 대한 흡수력이 우수한 티타니나 입자 및 그 제조방법 (대한민국 등록특허 제 10-1905418호) 등이 공개되었다.

본 발명자들은 자외선 및 블루라이트로 인한 피부노화를 억제하는 천연물을 탐색하는 과정에서, 분홍바늘꽃, 꽃생강, 서양톱풀을 선정하고 다양한 방법으로 혼합추출물을 제조하여 피부개선활성을 확인하였으며, 이들 혼합물을 아임계추출 후 가수분해하여 제조되는 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물은 자외선 및 블루라이트로 인한 피부노화 억제 뿐 아니라 블루라이트 차단, 열노화 억제, 피부미백활성도 우수하다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한 본 발명은 자외선 및 블루라이트로 인한 피부노화 억제활성, 블루라이트 차단 활성, 피부 열노화 억제활성 및 피부 미백활성이 우수한 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물의 제조방법을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면 아임계추출 후 가수분해 효소처리하여 제조되는 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물을 유효성분으로서 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.

더욱 바람직하게는 상기 혼합추출물은 분홍바늘꽃의 꽃, 잎, 줄기 및 전초로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나, 꽃생강의 뿌리 및 서양톱풀의 전초 혼합물을 아임계 조건인 120~200℃, 압력 0.1~15 MPa에서 추출하고 가수분해효소인 β-글루코시다아제 처리하여 제조되는 것이다.

바람직하게는 상기 혼합추출물은 분홍바늘꽃의 꽃, 잎, 줄기 및 전초로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나, 꽃생강의 뿌리 및 서양톱풀 전초가 각각 1~2:1~3:1~3의 중량비율로 혼합되어 제조되는 것이며, 더욱 바람직하게는 1:3:2의 중량비율로 혼합되어 제조되는 것이다.

상기 화장료 조성물은 자외선 및 블루라이트로 인한 피부노화억제용 또는 블루라이트 차단용인 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 화장료 조성물은 피부 열노화 억제용 또는 피부 미백용인 것을 특징으로 한다.

상기 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, (A)건조된 분홍바늘꽃의 꽃, 잎, 줄기 및 전초로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나, 꽃생강의 뿌리 및 서양톱풀의 전초를 각각 1~2:1~3:1~3의 중량비율로 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; (B)상기 혼합물에 추출용매를 가한 후 아임계 조건인 120~200℃, 압력 0.1~15MPa에서 10~30분간 추출하는 단계; (C)β-글루코시다아제 효소를 가하여 반응시키는 단계; 및 (D)여과 후 농축하는 단계를 포함하는 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물의 제조방법이 제공된다.

상기 추출용매로는 물, 탄소수 1 내지 4의 무수알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 프로판다이올, 부틸렌글리콜, 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드, 디메치콘, 미네랄오일, 사이클로메치콘, 옥틸도데칸올, 세틸에칠헥사노에이트, 트리레칠헥사노인, 이소프로필미리스테이트 및 식물성 오일로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 것이 사용된다.

본 발명에 따른 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 천연 추출물을 함유하여 안전하며, 자외선 및 블루라이트로 인한 피부노화 억제, 블루라이트 차단, 피부 열노화 억제 및 피부 미백활성이 우수하다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물의 블루라이트 차단활성을 나타내는 사진도이다.

이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.

분홍바늘꽃(Epilobium angustifolium Linne)은 바늘꽃과의 여러해살이풀로 류란(柳蘭), 두메바늘꽃이라 불리기도 하며, 우리나라 중부지방 이북의 대관령, 금강산, 낭림산, 백두산 등의 고산지대 고원지에 집단적으로 모여서 자라는 식물이다. 분홍바늘꽃은 높이는 1.5m정도이고, 땅속 줄기가 옆으로 길게 뻗으면서 끝에서 싹이 돋아나오며 군락을 형성한다. 잎은 피침형으로 길이 8~15cm, 너비 1~3cm로 끝이 뾰족하고 가장자리에 잔 톱니가 있으며 뒷면은 분백색(粉白色)이다. 6~8월에 원줄기 끝에 총상화서(總狀花序)가 달리고 홍자색 꽃이 피며, 포(苞)는 선형이고 길이 0.8~3cm의 꽃자루를 가진다. 꽃받침잎과 꽃잎은 각각 4개이고 수술은 8개, 암술은 1개 이고 자방(子房)에 짧고 굽은 털이 빽빽하게 난다. 열매는 길이가 8~10cm정도로 10월에 익으며 종자(種子)에 관모(冠毛)가 있다. 전초를 홍쾌자라고 하고, 뿌리를 나우라고 하며, 잎에 ursolic acid, oleanolic acid, nonacosane, hexacosnol 등을 함유한다.

꽃생강(Hedychium coronarium)은 생강목 생강과의 여러해살이풀이다. 높이 약 1~2m로 자란다. 잎은 어긋나기로 나며, 선 모양의 피침형으로 길이는 약 20~60cm, 너비는 약 5~10cm이다. 양끝이 좁고 밑부분이 긴 엽초로 된다. 꽃은 9~10월에 흰색으로 피며, 줄기 끝에 이삭꽃차례로 달린다. 꽃잎은 반달 모양으로 길이 약 5cm, 너비 약 4cm이며, 화관통은 길이가 약 5~8cm이다. 인도, 말레이시아, 대만, 중국, 히말라야, 아프리카(마다카스카르)의 열대지방과 더운 지방에 분포하며, 관상용으로 활용된다.

서양톱풀(Achillea Millefolium)은 다년생초본으로 유라시아가 원산지이며 북미에서 이식되어 순화되었다. 지금은 전세계적으로 대부분의 온대 지역에서 찾아볼 수 있다. 유럽에서는 학명 아칠리밀레폴리움(Achillea Millefolium)으로 알려져있으며 학명은 일리아드의 영웅 '아킬레스'가 트로이전쟁 때 부상한 병사들을 이 풀로 치료한데서 기인되었다. 지혈작용, 소독작용, 강장효과 등이 알려져 있다.

본 발명은 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 상기 유효성분으로서의 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물은 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합물을 아임계추출 후 가수분해 효소처리하여 제조된다.

본 발명의 바람직한 일 구체예에 따르면, 상기 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물은 (A)건조된 분홍바늘꽃의 꽃, 잎, 줄기 및 전초로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나, 꽃생강의 뿌리 및 서양톱풀의 전초를 각각 1~2:1~3:1~3의 중량비율로 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; (B)상기 혼합물에 추출용매를 가한 후 아임계 조건인 120~200℃, 압력 0.1~15MPa에서 10~30분간 추출하는 단계; (C)β-글루코시다아제 효소를 가하여 반응시켜 가수분해하는 단계; 및 (D)여과 후 농축하는 단계를 포함하는 제조방법에 의하여 제조된다.

먼저, 건조된 분홍바늘꽃의 꽃, 잎, 줄기, 전초 또는 그 혼합물, 꽃생강의 뿌리 및 서양톱풀의 전초를 혼합하여 혼합물을 제조한다. 상기 혼합물을 추출용매로 아임계추출 조건인 120~200℃, 압력 0.1~15 MPa에서 15~30분간 추출한다.

상기 추출용매로는 물, 탄소수 1 내지 4의 무수알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드, 디메치콘, 미네랄오일, 사이클로메치콘, 옥틸도데칸올, 세틸에칠헥사노에이트, 트리레칠헥사노인, 이소프로필미리스테이트 및 식물성 오일로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 것이 사용된다. 상기 식물성 오일이란 식물의 씨나 과육 등을 압착 등의 방법으로 추출한 오일을 의미하는 것으로, 올리브오일, 해바라기씨오일, 야자오일, 아보카도오일 등이 사용될 수 있다.

이때, 상기 혼합물은 분홍바늘꽃의 꽃, 잎, 줄기, 전초 또는 그 혼합물, 꽃생강의 뿌리 및 서양톱풀 전초를 각각 1~2:1~3:1~3의 중량비율로 혼합하여, 가장 바람직하게는 1:3:2의 중량비율로 혼합하여 이루어진다.

이어서, 아임계 추출을 통하여 얻어진 상기 추출물에 가수분해효소, 바람직하게는 β-글루코시다아제를 가하여 반응시켜 가수분해한다. 얻어진 상기 가수분해물을 여과 후 농축하여 본 발명의 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물을 제조한다.

아임계 추출 후 가수분해하여 제조되는 상기 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물은 분홍바늘꽃, 꽃생강 또는 서양톱풀 각각의 추출물, 통상의 추출방법에 의해 제조된 혼합추출물 및 아임계 추출 없이 가수분해처리만 하여 얻어진 혼합추출물에 비하여 우수한 피부세포 보호 및 항노화 효능을 나타내었다.

본 발명의 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물은 자외선 및 블루라이트를 조사하지 않은 상태뿐만 아니라, 조사한 상태에서도 피부유래 세포주의 생존률에 영향을 미치지 않으면서(시험예 1 및 2), 자외선 및 블루라이트 조사 조건에서 피부노화 유발 인자인 ROS의 생성(시험예 3)을 효과적으로 억제하였다. 또한, 자외선 및 블루라이트 조사 조건에서 procollagen type 1의 생성을 크게 증가시켰다(시험예 4). 또한, 본 발명의 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물은 블루라이트의 투과를 크게 감소시키는 효과를 나타내었다(시험예 5). 또한, 피부 미백활성(시험예 6, 7) 및 그리고 피부 열 감소로 인한 피부 열노화 억제활성(시험예 8)이 우수하였다.

그러므로 상기 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물은 자외선 및 블루라이트로 인한 피부노화를 억제하는 항노화용 화장료, 블루라이트 차단용 화장료, 피부 열노화 억제용 화장료 및 피부미백용 화장료로 유용하게 사용될 수 있다.

상기 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물은 유효성분으로서 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.01~10 중량% 함유될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조 될 수 있으며, 그 예로는 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 젤, 화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스 등을 들 수 있다.

[실시예]

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.

제조예 1~3: 분홍바늘꽃, 꽃생강 또는 서양톱풀 추출물의 제조

건조된 분홍바늘꽃의 꽃, 잎 및 줄기 혼합물(동일 중량비), 꽃생강 뿌리, 서양톱풀의 전초를 각각 100g에 추출용매로서 70% 함수 에탄올을 5배 중량을 가하고 냉각 콘덴서가 달린 추출기(Cosmos-660, 경서기계)에서 80℃~100℃로 가열하여 2 시간씩 총 3회 추출하였다.

위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기(Coolace CCA-1100, EYELA)를 이용하여 40℃~50℃의 온도에서 농축한 후 스프레이 드라이어(B-290, BUCHI사)를 이용하여 인렛(Inlet) 온도 180℃, 흡입기(Aspirator) 효율 100%(35㎤/시간), 펌프(Pump) 효율 25%(7.5㎖/분), 노즐클리너 4(Nozzle Cleaner 4) 및 유량계(Rotameter):30㎜(357리터/시간)의 조건으로 건조시켜 표제의 추출분말을 얻었다.

제조예 4~6: 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물의 제조

건조된 분홍바늘꽃의 꽃, 잎 및 줄기 혼합물(동일 중량비), 꽃생강 뿌리, 서양톱풀의 전초를 하기 표 1의 중량비로 혼합(총중량 100g)하여 추출용매로서 70% 함수 에탄올을 5배 중량을 가하고 냉각 콘덴서가 달린 추출기(Cosmos-660, 경서기계)에서 80℃~100℃로 가열하여 2 시간씩 총 3회 추출하였다.

제조예 7~9: 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물의 제조

건조된 분홍바늘꽃의 꽃, 잎 및 줄기 혼합물(동일 중량비), 꽃생강 뿌리, 서양톱풀 전초를 하기 표 1의 중량비로 혼합(총중량 100g)하여 추출용매로서 70% 함수 에탄올을 5배 중량을 가하고 냉각 콘덴서가 달린 추출기(Cosmos-660, 경서기계)에서 80℃~100℃로 가열하여 2 시간씩 총 3회 추출하였다.

위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기(Coolace CCA-1100, EYELA)를 이용하여 40℃~50℃의 온도에서 농축한 후 스프레이 드라이어(B-290, BUCHI사)를 이용하여 인렛(Inlet) 온도 180℃, 흡입기(Aspirator) 효율 100%(35㎤/시간), 펌프(Pump) 효율 25%(7.5㎖/분), 노즐클리너 4(Nozzle Cleaner 4) 및 유량계(Rotameter):30㎜(357리터/시간)의 조건으로 건조시켜 표제의 추출분말을 얻었다. 추출분말 10g을 아세테이트 버퍼(acetate buffer, pH 4.0) 500ml와, β-글루코시다아제 효소 25ml을 넣어 55℃에서 100rpm으로 4시간 동안 반응시켰다. 다음으로 95℃로 5분간 가온하여 효소 반응을 완료한 후 반응물을 진공 농축하였다. 농축물은 60℃에서 30시간 건조하였다. 위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기(Coolace CCA-1100, EYELA)를 이용하여 40℃~50℃의 온도에서 농축한 후 스프레이 드라이어(B-290, BUCHI사)를 이용하여 인렛(Inlet) 온도 180℃, 흡입기(Aspirator) 효율 100%(35㎤/시간), 펌프(Pump) 효율 25%(7.5㎖/분), 노즐클리너 4(Nozzle Cleaner 4) 및 유량계Rotameter): 30㎜(357리터/시간)의 조건으로 건조시켜 가수분해된 혼합추출물을 얻었다.

(중량비)		분홍바늘꽃	꽃생강	서양톱풀
제조예 4	제조예 7	1	1	1
제조예 5	제조예 8	2	1	3
제조예 6	제조예 9	1	3	2

실시예 1~3: 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물의 제조

건조된 분홍바늘꽃의 꽃, 잎 및 줄기 혼합물(동일 중량비), 꽃생강 뿌리, 서양톱풀 전초를 하기 표 2의 중량비로 혼합(총 100g)한 후, 추출용매로서 정제수를 10배 중량을 넣고 아임계수 조건인 200℃, 압력 15 MPa에서 15분간 추출하였다.

위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기(Coolace CCA-1100, EYELA)를 이용하여 40℃~50℃의 온도에서 농축한 후 스프레이 드라이어(B-290, BUCHI사)를 이용하여 인렛(Inlet) 온도 180℃, 흡입기(Aspirator) 효율 100%(35㎤/시간), 펌프(Pump) 효율 25%(7.5㎖/분), 노즐클리너 4(Nozzle Cleaner 4) 및 유량계(Rotameter):30㎜(357리터/시간)의 조건으로 건조시켜 표제의 추출분말을 얻었다. 추출분말 10g을 아세테이트 버퍼(acetate buffer, pH 4.0) 500ml와, β-글루코시다아제 효소 25ml을 넣어 55℃에서 100rpm으로 4시간 동안 반응시켰다. 다음으로 95℃로 5분간 가온하여 효소 반응을 완료한 후 반응물을 진공 농축하였다. 농축물은 60℃에서 30시간 건조하였다. 위의 방법으로 추출한 뒤 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 300메쉬 여과지로 여과하고, 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기(Coolace CCA-1100, EYELA)를 이용하여 40℃~50℃의 온도에서 농축한 후 스프레이 드라이어(B-290, BUCHI사)를 이용하여 인렛(Inlet) 온도 180℃, 흡입기(Aspirator) 효율 100%(35㎤/시간), 펌프(Pump) 효율 25%(7.5㎖/분), 노즐클리너 4(Nozzle Cleaner 4) 및 유량계Rotameter): 30㎜(357리터/시간)의 조건으로 건조시켜 혼합추출물을 얻었다.

(중량비)	분홍바늘꽃	꽃생강	서양톱풀
실시예 1	1	1	1
실시예 2	2	1	3
실시예 3	1	3	2

시험예 1: 세포 독성 여부 확인

MTT assay법은 MTT[3-(4,5-dimethythiasol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide] 시약이 세포 내로 흡수된 후 미토콘드리아의 숙신산 탈수소효소(succinate dehydrogenase)에 의해 포마잔(formazan)을 형성하는데 이 물질의 세포 내 축적은 미토콘드리아의 활성, 넓게는 세포의 활성을 의미하는 것으로써 세포의 생존율을 측정하는 대표적인 방법이다.

각각의 유전자 발현을 확인하기 위해 세포를 1×10⁵cell/well의 밀도로 96 well에 200㎕ 배지와 함께 분주한 뒤 5% CO₂,37℃ incubator에서 24시간 배양한 후 배지를 버리고 PBS로 씻어준 다음 같은 양의 배지와 PBS에 녹인 시료를 0.1%에서 5.0%까지 다양한 농도에 따라 각 well에 처리하여 24시간 배양하였다. 배양이 끝나기 4시간 전에 PBS에 녹인 5㎎/㎖ MTT를 20㎕씩 각 well에 첨가하고 알루미늄 호일로 차광시킨 후 3간 동안 5% CO₂및 37℃ 조건의 incubator에서 배양하였다. 배양액을 제거하고 DMSO용액 200㎕를 첨가하여 37℃ incubator에서 1시간 반응 시킨 후 ELISA reader를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하여 비교하였다. 세포 생존율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다.

세포생존율(%)=시료첨가군의 흡광도/대조군의흡광도×100

구분	세포 생존율(%)
구분	0.1%	0.5 %	1 %
제조예 1	100	101	100
제조예 2	100	101	100
제조예 3	100	100	100
제조예 4	101	100	100
제조예 5	100	100	101
제조예 6	100	101	100
제조예 7	101	100	100
제조예 8	100	100	101
제조예 9	100	100	101
실시예 1	100	101	100
실시예 2	100	101	100
실시예 3	100	101	100

상기 표 3의 결과에서 보는 바와 같이, 상기 제조예 및 실시예의 추출물들을 적용한 시료 모두 높은 세포생존율이 확인됨에 따라 세포 독성에는 영향을 미치지 않는 것으로 확인되었고, 이에 안전에는 문제가 없는 것을 확인하였다.

시험예 2: 자외선 및 블루라이트 조사 조건에서의 세포독성 여부 확인

자외선 및 블루라이트 조사 조건에서의 세포 독성 여부를 확인하기 위해 HaCaT 및 NHDF 세포를 24 well plate에 각각 6×10⁶ 및 4×10⁵의 세포 농도로 접종하여 37℃ 5% CO₂배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 PBS(phosphate buffered saline)으로 1회 세척한 후 PBS를 각 well에 1 ml 씩 넣었다. 자외선에 의한 세포 독성 여부를 확인하기 위해 UV 조사기 안에 plate를 넣고 UV lamp를 이용하여 290~400nm 파장(75 mJ/cm²)을 조사하였다. 블루라이트에 의한 세포 독성은 400~500nm의 파장(40 J/cm²)을 조사하여 확인하였다. 각각의 광선을 조사한 후 plate 안에 들어있는 PBS를 제거하고, 상기 제조예 및 실시예에서 제조한 추출물을 시료농도가 1.0%가 되도록 처리하였다. 24시간 배양 후 상기 시험예 1에서 명시한 방법과 동일하게 MTT 실험을 진행하여 추출물 시료가 세포 독성에 미치는 영향을 확인하였다. 세포생존율은 자외선 및 블루라이트 조사군의 흡광도를 대조군으로 하여 계산하였으며, 그 결과는 하기의 표 4에 나타내었다.

구분	세포생존율(%)
	자외선		블루라이트
	HaCaT	NHDF	HaCaT	NHDF
광선 조사 X	142	134	128	117
대조군	100
제조예 1	99	102	99	98
제조예 2	100	101	98	100
제조예 3	98	99	100	102
제조예 4	101	98	102	103
제조예 5	100	99	98	99
제조예 6	101	101	101	100
제조예 7	102	102	102	101
제조예 8	103	100	103	102
제조예 9	98	99	99	103
실시예 1	99	98	98	102
실시예 2	99	98	99	100
실시예 3	100	100	100	101

상기 표 4의 결과에서 보는 바와 같이, 분홍바늘꽃, 꽃생강 또는 서양톱풀 추출물 및 이들의 혼합추출물을 적용한 시료 모두에서 대조군 대비 97% 이상의 세포생존율을 나타냄에 따라 인간 피부유래 세포의 세포 독성에는 영향을 미치지 않는 것으로 확인되었다.

시험예 3: 자외선 및 블루라이트 조사 조건에서의 ROS 생성억제효능 확인

자외선 및 블루라이트 조사 조건에서의 세포 독성 여부를 확인하기 위해 HaCaT 및 NHDF 세포를 24 well plate에 각각 접종하여 37℃ 5% CO₂배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 PBS(phosphate buffered saline)으로 1회 세척한 후 PBS를 각 well에 1 ml 씩 넣은 후 상기 시험예 2에서 명시한 방법과 동일하게 자외선과 블루라이트를 조사하였다. 이후 상기 제조예 및 실시예에서 제조한 추출물을 시료농도가 1.0% 가 되도록 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 배양액을 제거하고 페놀레드를 함유하지 않는 DMEM 배양액에 녹인 40 μM의 DCF-DA(2'-7'-dichlorofluoresceine diacetate)를 첨가하고 30 분 후에 각 well의 상층액을 따서 ELISA reader가 부착된 fluorometer를 이용하여 excitation 485 nm, emission 530 nm에서 형광도를 측정하였다. ROS 생성률은 자외선 또는 블루라이트 조사군의 형광도를 대조군으로 하여 계산하였으며 그 결과는 하기의 표 5에 나타내었다.

구분	ROS 생성률(%)
	자외선		블루라이트
	HaCaT	NHDF	HaCaT	NHDF
광선 조사 X	18	21	24	29
대조군	100
제조예 1	70	75	80	83
제조예 2	68	76	85	86
제조예 3	65	77	75	89
제조예 4	72	84	78	88
제조예 5	73	86	79	85
제조예 6	69	76	82	87
제조예 7	76	77	83	78
제조예 8	69	79	82	79
제조예 9	74	80	81	75
실시예 1	67	71	80	76
실시예 2	59	65	74	71
실시예 3	45	62	58	65

상기 표 5의 결과에서 확인되는 바와 같이, 아임계 추출 후 가수분해하여 제조되는 상기 실시예의 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물은 제조예의 각각의 추출물, 혼합추출물과 비교해 볼 때, 피부유래 세포주에서 자외선과 블루라이트에 의한 ROS의 생성 억제능이 우수한 것으로 나타나 자외선과 블루라이트로 인한 피부노화를 억제하는 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다.

시험예 4: 자외선 및 블루라이트 조사 조건에서의 procollagen type 1 생성 증가 효능 확인

자외선 및 블루라이트 조사 조건에서의 procollagen type 1의 생성 억제 효능를 확인하기 위해 NHDF 세포를 24 well plate에 접종하여 37℃ 5% CO₂배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 배지를 제거하고 PBS(phosphate buffered saline)으로 1회 세척한 후 PBS를 각 well에 1 ml 씩 넣은 후 상기 시험예 2에서 명시한 방법과 동일하게 자외선과 블루라이트를 조사하였다. 이후 상기 제조예 및 실시예에서 제조한 추출물을 시료농도가 0.1 또는 1.0% 가 되도록 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 이후에 배양된 세포의 배지를 수거하여 Procollagen type I c-peptide EIA kit(TAKARA, MK101)를 사용하여 procollagen type 1의 양을 측정하였다. 한편, 바닥에 부착되어 있는 세포는 PBS로 세척한 후 1N NaOH로 용해시켜 총 단백질 양을 측정하여, 일정 단백질 당 전구콜라겐 생성량을 계산하였다.

그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.

구분	Procollagen type 1 생성량/총 단백질량
	자외선		블루라이트
	0.1%	1.0%	0.1%	1.0%
광선 조사 X	5.3
대조군	2.8		3.2
제조예 1	2.8	2.9	3.2	3.3
제조예 2	2.9	2.9	3.2	3.2
제조예 3	2.9	3.0	3.3	3.4
제조예 4	3.1	3.2	3.5	3.6
제조예 5	3.2	3.3	3.4	3.6
제조예 6	3.2	3.3	3.5	3.7
제조예 7	3.8	3.9	3.7	4.0
제조예 8	3.7	3.9	3.8	3.9
제조예 9	3.8	4.0	3.7	4.0
실시예 1	3.9	4.0	4.2	4.1
실시예 2	3.8	3.7	3.9	4.2
실시예 3	4.8	4.9	5.0	5.2

상기 표 6의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명 실시예의 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물은 제조예의 추출물들과 비교해 볼 때, 인간 섬유아세포에서 자외선과 블루라이트에 의한 procollagen type 1 생성 감소를 효과적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 특히 실시예 3에서 가장 우수한 활성을 나타내었다.

시험예 5: 블루라이트 투과 확인

상기 실시예의 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물의 블루라이트 차단활성을 다음과 같이 평가하였다.

정제수와 정제수와 혼합한 상기 실시예 3의 혼합추출물을 각각 투명 유리병에 넣고 블루라이트가 발생하는 기구를 이용하여 블루라이트를 조사한 후 사진촬영하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타나는 바와 같이, 정제수와 비교해 볼 때 아임계 추출후 가수분해하여 제조된 본 발명 실시예 3의 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물은 블루라이트 투과를 크게 감소시켜 블루라이트 차단활성을 가지는 것을 확인할 수 있었다.

시험예 6: 티로시네이즈 발현 감소 확인

세포를 24-well plates에 1×10⁵ cells/mL로 분주한 뒤 24 시간 동안 배양하였다. 24 시간 후 FBS와 항생제가 첨가 되지 않은 배지에 시료를 농도별로 제조하여 세포에 처리 하였고, 24 시간 동안 더 배양하였다. 시료 처리 배지를 제거한 뒤 pH 6.8의 phosphate-buffersaline(PBS)으로 세척 하였고, 1% Triton X-100가 함유 된 PBS를 wells에 첨가한 뒤 cell scraper로 wells에 붙어 있는 세포를 떼어내어 1.5 mL 튜브에 모아 -70℃에 급속 냉동시킨 후 해동시켰으며 이와 같은 방법을 3번 반복하여 세포막을 파괴하였다. 원심 분리 한 후 상층액을 tyrosinase 활성 측정을 위한 효소원과 단백질 측정을 위한 시료로 사용하였다. Bio-Rad protein kit로 단백질 정량을 하였으며, tyrosinase 활성측정은 10 mM L-dopa 200㎕와 0.1 M PBS(pH 6.8) 500㎕, tyrosinase 효소원(세포로부터 얻은 상층액) 300 ㎕를 첨가한 후 35℃에서 1시간 incubation 후 475nm에서 흡광 측정하였다. 그 결과는 하기 표 7에 나타내었다.

구분	티로시네이즈 발현 억제율(%)
구분	0.1%	0.5%	1.0%
대조군 Arbutin	43.6	50.8	65.8
제조예 1	22.5	29.6	35.6
제조예 2	25.6	30.6	38.9
제조예 3	24.8	33.5	34.5
제조예 4	26.8	32.5	36.8
제조예 5	22.7	38.5	39.5
제조예 6	29.2	34.5	40.3
제조예 7	30.2	36.5	37.6
제조예 8	26.7	32.4	35.6
제조예 9	33.2	33.5	39.8
실시예 1	38.5	37.5	42.5
실시예 2	39.5	36.8	50.6
실시예 3	40.2	49.8	64.9

상기 표 7에서 확인되는 바와 같이, 상기 실시예의 추출물에서 제조예에 비하여 우수한 티로시네이즈 발현 억제 효과가 나타나, 본 발명에 따른 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물은 우수한 미백 활성을 나타냄을 알 수 있다.

시험예 7: 멜라닌 합성 감소 확인

B16F1 멜라노싸이트에 대한 멜라닌 생성 억제 정도에 근거하여 이들의 미백 효과를 판단하였다. 본 실험 예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포주이며 멜라닌이라는 흑색 색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공 배양중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색 색소가 감소하는 정도를 비교 평가 하였다. 본 실험 예에서 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호 6323)로부터 분양받아 사용하였다.

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생합성 억제 효과 측정은 다음과 같이 행하였다. B16F1 멜라노싸이트를 6 well plate에 각 well당 2×10⁶ cells/mL 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 0.1%(wt/v) 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 37℃에서 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기에서 배양하였다. 여기서, 시료의 농도를 맞추기 위해 사용된 용매는 PBS를 이용하였다. 72시간 배양 후 세포를 간 배양 수 세포를 trypsin-EDTA 500㎕를 처리하여 떼어 낸 수 세포 수를 측정 한 다음 원심 분리하여 세포를 회수하였다. 세포내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan :Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액 (50mM 소듐 포스페이티드, pH 6.8, 1% Tripton X-100, 2 mM PMSF) 1ml를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파괴하였다. 원심부리 (3,000rpm, 10분) 하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH (10% DMSO)를 120㎕를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 리더로 405nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 저해율(%)은 아래 식에 의하여 계산하였으며 그 결과는 표 8에 나타내었다

저해율(%) = [(A-B)/A]X100

A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양

B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양

구분	멜라닌 생성 억제율(%)
구분	0.1%	0.5%	1.0%
대조군 Arbutin	43.6	50.8	65.8
제조예 1	22.5	29.6	35.6
제조예 2	25.6	30.6	38.9
제조예 3	24.8	33.5	34.5
제조예 4	26.8	32.5	36.8
제조예 5	22.7	38.5	39.5
제조예 6	29.2	34.5	40.3
제조예 7	30.2	36.5	37.6
제조예 8	26.7	32.4	35.6
제조예 9	33.2	33.5	39.8
실시예 1	38.5	37.5	42.5
실시예 2	39.5	36.8	50.6
실시예 3	40.2	49.8	64.9

상기 표 8에서 확인되는 바와 같이 B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 억제 효과를 시험한 결과 상기 실시예의 추출물에서 제조예에 비하여 더 우수한 멜라닌 생성 억제 효과를 나타냄을 확인하였다.

실시예 4: 세럼의 제조

상기 실시예 3의 혼합추출물을 함유한 세럼을 하기의 표 9의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.

원료	함량(중량%)
혼합추출물(실시예 3)	1.0
밀납	1.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄 세스퀴올레이트	0.5
미네랄 오일	10.0
소르비탄 스테아레이트	0.5
친유형 모노스테아린산 글리세린	1.0
스테아린산	1.5
글리세릴스테아레이트/피이지-400 스테아레이트	1.0
프로필렌글리콜	3.0
카르복시폴리머	0.1
트리에탄올아민	0.1
페녹시에탄올	적량
정제수	To 100

실시예 5: 크림의 제조

상기 실시예 3의 혼합추출물을 함유한 크림을 하기의 표 10의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.

원료	함량(중량%)
혼합추출물(실시예 3)	1.0
시어버터	2.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄 세스퀴올레이트	0.8
미네랄 오일	10.0
디메치콘	3.0
소르비탄 스테아레이트	0.5
친유형 모노스테아린산 글리세린	1.0
세테아릴알코올	2.0
글리세릴스테아레이트/피이지??400 스테아레이트	1.0
프로필렌글리콜	3.0
카르복시폴리머	0.25
트리에탄올아민	0.25
페녹시에탄올	적량
정제수	To 100

시험예 8: 피부 열 감소 효과 평가

상기 실시예 4, 5로 제조한 제형에 대하여 피부 열 감소 효과를 측정하였다. 20~30대 피험자 10명을 대상으로 다음과 같은 실험을 실시하였다. 피험자는 적외선에 노출되기 전 실내온도 25~25℃, RH 40~45%로 유지시킨 항온항습 조건에서 30분간 대기하였다. 그 다음 20분간 피험자의 실험 부위(상박부)를 직사광선에 노출시킨 후, 시험 시료와 대조 시료를 전완부의 선정된 시험부위 (2.5cm X 2.5cm)에 Micro Pipette을 사용하여 각각 10 uL의 양으로 도포하였다. 시료 도포 전, 도포 직후, 도포 3분 후 및 도포 5분 간격 으로 30분 간 피부의 온도 변화를 Thermo-graphic Camera (FLIR, SWEDEN)로 측정하였다.

피부 열 감소 효과는 하기 계산식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 11에 나타내었다.

피부열감소율(%)=(1-시료적용부위의 온도/시료비적용부위의 온도)×100

피부 열 감소율(%)
	실시예 4	실시예 5	무처리군
도포 전	-	-	6.6
사용 직후	15.6	17.6	5.2
3분 후	13.2	16.8	2.3
5분 후	12.8	13.5	1.2
10분 후	8.6	10.8	0.8
15분 후	5.6	8.6	0.75
20분 후	4.2	5.2	0.65
25분 후	3.5	4.2	0.4
30분 후	1.2	2.2	0.1

상기 표 11에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 실시예의 추출물을 함유하는 제형에서 우수한 피부 열 감소율을 나타내어, 본 발명에 따른 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물은 우수한 피부 열노화 억제활성을 나타냄을 알 수 있다.

시험예 9: 제형안정도 확인

상기 실시예 4, 5로 제조한 제형에 대하여 실온(25℃), 냉장(4℃) 및 항온(50℃)으로 일정하게 유지되는 실내, 냉장고 및 인큐베이터에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관 및 관찰(변색, 변취 및 분리)하며, 안정성을 확인 하였다. 또한 온도 순환조건 (-5 ~ 45℃)에서도 안정성을 확인하였다. 결과는 표 9에 나타내었다.

온도조건	안정성 확인(변색, 변취 및 분리)
온도조건	실시예 4	실시예 5
실온(25℃)	0	0
냉장(4℃)	0	0
항온(50℃)	0	0
순환 (-5 ~ 45 ℃)	0	0

< 제형 안정 등급 >

0: 변화 없음 1: 미세한 변화 2: 변화 3: 극심한 변화

상기 표 12에서 나타낸 바와 같이 실시예 4, 5 제형 모두 25℃, 4℃ 및 0℃ 온도 조건하에서 변색 변취 및 분리 현상이 나타나지 않고 안정함이 확인되었다.

Claims

분홍바늘꽃의 꽃, 잎, 줄기 및 전초로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나, 꽃생강의 뿌리 및 서양톱풀 전초를 각각 1~2:1~3:1~3의 중량비율로 혼합한 혼합물을 아임계 조건인 120~200℃, 압력 0.1~15 MPa에서 추출하고 가수분해효소인 β-글루코시다아제 처리하여 제조되는 분홍바늘꽃, 꽃생강 및 서양톱풀 혼합추출물을 유효성분으로서 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유하는 화장료 조성물.
삭제
삭제
제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 자외선 및 블루라이트로 인한 피부주름 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 블루라이트 차단용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
삭제
제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 미백용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
삭제
삭제