KR102093623B1 - 암 치료를 위한 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 병용 - Google Patents

암 치료를 위한 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 병용 Download PDF

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Abstract

본 발명은 암 치료를 필요로 하는 환자들의 암을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것으로, 암은 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 조합된 치료적 사용으로 치료될 수 있다.

Description

암 치료를 위한 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 병용{Combined use of Squirrelpox virus and myxomapox virus for cancer treatment}
본 발명은 암 치료를 위한 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 치료적 사용에 관한 것이다.
본 출원은 2018년 08월 17일에 출원된 미국특허출원 제62/719,342호에 기초한 우선권을 주장하며, 해당 출원의 명세서 및 도면에 개시된 모든 내용은 본 출원에 원용된다.
암은 일반적으로 세포가 과도한 속도로 분열하고 기능이 비정상화 되는 질환, 악성 종양 및 신생물(neoplasm)로 정의된다. 표준 치료법은 영향을 받은 암 조직을 제거하는 수술, 화학요법 및 방사선요법을 포함한다. 특정 암들은 그러한 화학요법, 방사선요법, 및 기타 치료에 반응하지 않거나 또는 내성을 갖게 된다. 비록 일부 인간 종양이 종래의 화학/방사선 요법에 대해 민감성을 보이지만, 다양한 고체 종양(예컨대 뇌종양, 유방종양, 난소종양 및 기타 종양) 및 혈액 종양은 종래의 치료 처방에 대해 난치성이 되는 것으로 알려져 있다. 백혈병은 혈액 세포, 보통 백색 혈액 세포(백혈구)의 비정상적 증식(증식에 의한 생산)을 특징으로 하는 혈액 또는 골수의 예시적인 암이다. 만성 골수성 백혈병(CML)은 골수에서의 현저한 골수 세포의 증가 및 조절되지 않은 성장 그리고 이 세포들의 혈액에서의 축적을 특징으로 하는 백혈병의 한 형태이다. 이에 더불어, 다발성 골수종(MM)은 최종 분화된 B 세포(즉, 형질 세포)에 영향을 미치는 고도로 난치성인 암이자 클론성 B-세포 신생물이다. 다발성 골수종에서, 과도한 암성 형질 세포의 클러스터들은 골수종으로 불리는, 골수에서의 종양을 형성할 수 있다. 따라서 많은 종양의 존재를 다발성 골수종이라고 한다. 다발성 골수종 환자들의 평균 생존율은 약 3년이다. 유전자 연구는 다발성 골수종 종양형성이 발암유전자 과활성화 및 다양한 종양 억제자 유전자의 비활성화를 포함하는 단계식 악성 형질전환을 통해 발생함을 밝혀냈다. 다양한 약물 치료에도 불구하고, 암 환자들(CML 또는 MM)은 종종 빠르게 약물 내성을 획득하고 장기간 약물 치료에 의해 유발된 심각한 부작용에 시달린다.
자연적으로 발생하는 바이러스들은 인간 암세포를 특이적으로 감염시키는 한편 정상적인 대응물은 피하는 살아있는 복제에 능한 바이러스이다. 1920년대에 자연적으로 항종양성인 바이러스들을 발견한 이래로, 다양한 복제 바이러스는 인간 또는 동물의 항암 치료법들에 대한 전임상 또는 임상 적용에서 다양한 정도의 안전성 및 효능을 나타냈다. Ras 및 c-Myc와 같은 세포 종양유전자는 종양파괴(oncolytic) 바이러스 효과(tropism) 결정에 대해 중요한 숙주 유전자인 것으로 알려져 있다. 중요하게도, 세포 종양 억제자 유전자는 또한 종양파괴 바이러스 효과의 결정에 중요한 것으로 발견되었다(Kim M et al., Oncogene. 29:3990-3996, 2010). 발암(carcinogenesis)은 암유전자의 비정상적 축적뿐만 아니라 종양 억제자 유전자의 비정상적 축적을 포함하는 다단계 과정이다. 그러므로, 종양파괴 바이러스가, 그것들의 종양파괴 특이성 및 효능의 결정에 대해, 종종 부인과 악성종양에서 조절되지 않는, 비정상적인 암유전자 및 세포 종양 억제자 신호전달을 이용하는 것으로 알려진 것은 흥미롭다. 암유전자와 달리, p53, ATM, 및 RB와 같은 많은 종양 억제자 유전자들은 게놈 충실도/유지에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다(Kim M et al., Oncogene. 29:3990-3996, 2010). 그러므로 종양 억제자 유전자 비정상은 숙주 게놈 통합성에 영향을 미칠 수 있고, 유사하게 자연적인 바이러스 항종양성을 초래하는 유전자 결함의 축적으로 인해 온전한 항바이러스 네트워크를 파괴할 수 있을 것이다.
1970년대에 천연두가 근절된 이래로, 복제 백시니아 바이러스 및 기타 폭스바이러스의 종양파괴 성질이 확인되었다. 지난 20년의 분자 연구 동안, 폭스바이러스 종양 파괴 효과를 결정하는 데 있어 세포 암유전자 및 종양 억제자 유전자의 개발은 현재 상당히 잘 정립되어 있다. 현재, 북아메리카, 유럽, 및 소수의 아시아 국가에서 백시니아 바이러스 스트레인들의 변형 버전을 사용하여 임상 실험이 수행되고 있다. 비록 백시니아 바이러스 합병증이 면역손상된 개체에서 발생한 것을 포함하여, 큰 집단 규모로 발생할 수 있었을지라도, 희귀 백시니아 바이러스들의 약독화된 버전의 안전성 측면은 이미 수행되었던 많은 실험을 통해 이제 상당히 확립되었다(Jacobs, B.L. et al, Antiviral Res. 84, 1-13, 2009; Nalca, A., Zumbrun, E.E., Drug Des Devel Ther. 4:71-79, 2010).
본 발명자들은 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 병용이 암 치료에 현저한 시너지 효과를 발휘함을 확인하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 치료학적으로 유효한 양의 (a) 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 조합물; 또는 (b) (a)로 처리된 생물학적 샘플을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명이 해결하고자 하는 또 다른 과제는 치료학적으로 유효한 양의 (a) 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 조합물; 또는 (b) (a)로 처리된 생물학적 샘플을 환자에게 투여하는 것을 포함하여 이를 필요로 하는 환자의 암을 치료하는 방법을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명이 해결하고자 하는 또 다른 과제는 치료학적으로 유효한 양의 (a) 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 조합물; 또는 (b) (a)로 처리된 생물학적 샘플을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료 용도를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명이 해결하고자 하는 또 다른 과제는 상기 약학적 조성물 및 조성물에 대한 지시 라벨을 포함하는 키트를 제공하는 것이다.
그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본원에서는 (a) 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 조합물; 또는 (b) (a)로 처리된 생물학적 샘플의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하여, 이를 필요로 하는 환자의 암을 치료하는 방법을 개시한다.
또한, 본원의 개시는 치료학적으로 유효한 양의 (a) 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 조합물; 또는 (b) (a)로 처리된 생물학적 샘플을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료 용도를 제공한다.
본원에서의 개시는 또한 (a) 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 조합물, 또는 (b) (a)로 처리된 생물학적 샘플; 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 상기 약학적 조성물에는 약학적으로 허용되는 부형제를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 주사가능한 투여 형태이다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 경구 투여 형태이다. 또한, 본원에는 본원에 개시된 약학적 조성물을 포함하는 키트 및 조성물에 대한 지시 라벨이 개시된다.
일부 구체예에서, 다람쥐폭스 바이러스는 야생형 다람쥐폭스 바이러스를 포함한다. 일부 구체예에서, 다람쥐폭스 바이러스는 암 표적화를 위한 치료 유전자-발현 다람쥐폭스 바이러스를 포함한다. 일부 구체예에서, 믹소마폭스 바이러스는 야생형 믹소마폭스 바이러스를 포함한다. 일부 구체예에서, 믹소마폭스 바이러스는 암 표적화를 위한 치료 유전자-발현 믹소마폭스 바이러스를 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 다람쥐폭스 바이러스는 3x105 내지 10x105 TCID50 포함될 수 있다. 일부 구체예에서, 믹소마폭스 바이러스는 0.1x105 내지 10x105 TCID50 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스 조합물에서의 다람쥐폭스 바이러스와 믹소마폭스 바이러스 역가비는 1:1 내지 100:1 (다람쥐폭스 바이러스 : 믹소마폭스 바이러스)일 수 있다.
일부 구체예에서, 암은 종양 억제인자가 결함된 암일 수 있다. 일부 구체예에서, 암은 조혈 악성종양, 폐암, 간암, 유방암, 대장암, 췌장암, 뇌암, 부인과암, 또는 위암으로부터 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, 암은 림프종, 골수종, 골수이형성 증후군(MDS), 진성적혈구 증가증과 같은 골수증식성 질환, 및 백혈병으로 구성되는 군으로부터 선택된 혈액 악성종양일 수 있다. 암세포는 악성 세포 또는 양성 세포일 수 있다. 일부 구체예에서, 암은 종양파괴 바이러스 내성 암을 포함한 난치성 암일 수 있다.
일부 구체예에서, 생물학적 샘플은 엑스 비보(ex vivo) 생물학적 샘플에 대해 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스 조합물의 유효량을 적용하여 다수의 암세포를 사멸시키고자 제조된 것이다.
본 발명에 따른 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 병용은 암 치료에 현저한 시너지 효과를 발휘한다.
도 1은 부인과 암종에서의 다람쥐 폭스바이러스 종양파괴 효과를 도시한다. EM 배율: 30,000x.
도 2는 간세포 암종에서의 다람쥐 폭스바이러스 종양파괴 효과를 도시한다. EM 배율: 60,000x.
도 3은 위암에서의 다람쥐 폭스바이러스 종양파괴 효과를 도시한다. EM 배율: 30,000x.
도 4는 Hep3B 간세포 암에서의 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 상승적 종양파괴 효과를 도시한다. SQPV: 다람쥐폭스 바이러스; MYXVgfp: gfp 발현 믹소마폭스 바이러스.
도 5는 A549 폐암에서의 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 상승적 종양파괴 효과를 도시한다. SQPV: 다람쥐폭스 바이러스; MYXVgfp: gfp 발현 믹소마폭스 바이러스.
도 6은 MCF7 유방암 세포에서의 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 상승적 종양파괴 효과를 도시한다. SQPV: 다람쥐폭스 바이러스; MYXVgfp: gfp 발현 믹소마폭스 바이러스.
도 7은 다람쥐폭스 바이러스 내성 암에서의 다람쥐폭스 바이러스 또는 믹소마폭스 바이러스 상승적 종양파괴 효과를 도시한다. SQPV: 야생형 다람쥐폭스 바이러스; MYXVgfp: gfp 발현 믹소마폭스 바이러스.
도 8a 및 도 8b는 생체내 이종이식 마우스 모델에서의 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 상승적 종양파괴 효과를 도시한다. vehicle: 음성 대조군; SQPV: 다람쥐폭스 바이러스; MYXVgfp: gfp 발현 믹소마폭스 바이러스.
놀랍게도 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 조합 사용이 종양파괴 바이러스 내성 종양을 포함한, 인간 암에 대한 종양파괴 잠재력을 두드러지게 향상시킨다는 것이 발견되었고, 이것은 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 조합이 다양한 인간 또는 동물 암에 대한 현저하게 향상된 종양파괴 잠재력을 발휘할 수 있음을 나타낸다. 더욱이, 비-백시니아 폭스바이러스, 예컨대 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스는 인간에 대해 비병원성이고 다양한 암에 대한 종양파괴 잠재력을 나타내므로, 효과적일 것으로 기대된다.
본원에서는 (a) 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 조합물; 또는 (b) (a)로 처리된 생물학적 샘플의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하여, 이를 필요로 하는 환자의 암을 치료하는 방법을 개시한다.
또한, 본원의 개시는 치료학적으로 유효한 양의 (a) 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 조합물; 또는 (b) (a)로 처리된 생물학적 샘플을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료 용도를 제공한다.
본원에서의 개시는 또한 (a) 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 조합물, 또는 (b) (a)로 처리된 생물학적 샘플; 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 상기 약학적 조성물에는 약학적으로 허용되는 부형제를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 주사가능한 투여 형태이다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 경구 투여 형태이다. 또한, 본원에는 본원에 개시된 약학적 조성물을 포함하는 키트 및 조성물에 대한 지시 라벨이 개시된다.
암은 종양 억제자 결핍 기능을 보유한 암일 수 있다. 암은 조혈 악성종양, 폐암, 간암, 유방암, 대장암, 췌장암, 뇌암, 부인과암, 또는 위암으로부터 선택될 수 있다. 암은 림프종, 골수종, 골수이형성 증후군(MDS), 진성적혈구 증가증과 같은 골수증식성 질환, 및 백혈병으로 구성되는 군으로부터 선택된 혈액 악성종양일 수 있다. 암세포는 악성 세포 또는 양성 세포일 수 있다. 암은 종양파괴 바이러스 내성 암을 포함한 난치성 암일 수 있다.
용어 "다람쥐폭스 바이러스"는 인간 또는 비-다람쥐 동물 종에 대해 병원성이 아닌 다람쥐폭스 바이러스 스트레인을 의미한다. 특정 동물 폭스바이러스는 오직 특정 동물 종에만 영향을 미친다(Kim M., 2015). 다르게 표현하면, 바이러스는 자연에서는 인간 또는 비향성(non-tropismic) 동물에서는 질환을 유발하지 않는다. 일부 구체예에서, 다람쥐폭스 바이러스는 야생형 다람쥐폭스 바이러스 스트레인 또는 암 표적화를 위한 치료 유전자, 예컨대 면역 자극 유전자, 인터페론 관련 유전자, 세포자멸사 관련 유전자를 보유한 조작된 다람쥐폭스 바이러스 스트레인 중 적어도 하나를 포함한다.
용어 "믹소마폭스 바이러스"는 인간 또는 비-토끼 동물 종에 대해 병원성이 아닌 믹소마폭스바이러스 스트레인을 의미한다. 특정 동물 폭스바이러스는 오직 특정 동물 종에만 영향을 미친다(Kim M., 2015). 다르게 표현하면, 바이러스는 자연에서는 인간 또는 비향성 동물에서는 질환을 유발하지 않는다. 일부 구체예에서, 믹소마폭스 바이러스는 야생형 믹소마폭스 바이러스 스트레인 또는 암 표적화를 위한 치료 유전자, 예컨대 면역 자극 유전자, 인터페론 관련 유전자, 세포자멸사 관련 유전자를 보유한 조작된 다람쥐 폭스바이러스 스트레인 중 적어도 하나를 포함한다.
다람쥐폭스 바이러스 및/또는 믹소마폭스 바이러스는 당업계에 알려져 있는 표준 기법들을 사용하여 제조될 수 있다(Kim M., 2015). 다람쥐폭스 바이러스 및/또는 믹소마폭스 바이러스는 높은 생물 안전도(BSL)를 요구하지 않는 과정을 통해 제조될 수 있고, 각 바이러스는 바이러스 게놈 복제가 민감한 세포의 세포질 영역에서 전체적으로 발생하는 것을 보여주는 특유한 자손 생산 사이클을 가짐으로써, 조합된 바이러스 요법에 의한 암 파괴 중에 숙주 인간 게놈으로부터의 새로운 하이브리드 바이러스 생성이 방지된다. 그 결과로서, 제조 및 약물 개발이 실현 가능하다.
일부 구체예에서, 상기 다람쥐폭스 바이러스는 3x105 내지 10x105 TCID50 포함될 수 있다. 일부 구체예에서, 믹소마폭스 바이러스는 0.1x105 내지 10x105 TCID50 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스 조합물에서의 다람쥐폭스 바이러스와 믹소마폭스 바이러스 역가비는 1:1 내지 100:1 (다람쥐폭스 바이러스 : 믹소마폭스 바이러스)일 수 있다. 더욱 바람직하게, 1:1 내지 10:1 (다람쥐폭스 바이러스 : 믹소마폭스 바이러스)일 수 있다. 더 더욱 바람직하게, 5:1 내지 10:1 (다람쥐폭스 바이러스 : 믹소마폭스 바이러스)일 수 있다.
여기서 "TCID50 (Tissue culture infective dose50)"는 endpoint dilution assay라고도 하는 바이러스 정량법이다. 통상적으로, plaque를 형성하지 않는 바이러스나, 특정 바이러스의 egg 및 동물에 대한 virulence를 측정하기 위하여 사용되고 있다. 대개는 10배수로 희석시킨 바이러스 부유액을 각 배수별로 5개 이상(대개 8-10 test units)의 세포단층, egg, 동물 등에 접종시켜 50%를 감염시키는 바이러스 희석배수를 역가(titer)로 나타낸 것이다. 각 배수별로 바이러스를 접종시킨 세포단층을 관찰하여 CPE 유무를 판정하여 감염된 well의 %를 계산한다 50% endpoint는 Reed-Muench법이나 Spearman-Karber법을 사용하여 계산한다.
"생물학적 샘플"은 임의의 생물학적 샘플, 예컨대 개체로부터 얻어진 성인 줄기세포(지방세포-유래 줄기세포, 골수 줄기세포) 또는 제대혈 줄기세포, 세포주, 조직 배양, 또는 기타 세포 공급원을 의도한다. 포유류로부터 조직 생검 및 체액을 얻는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 지방세포-유래 줄기세포는 종양파괴 바이러스로 전처리될 수 있고 그것들은 암 환자에게 투여될 수 있다.
일부 구체예에서, 생물학적 샘플은 엑스 비보(ex vivo) 생물학적 샘플에 대해 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스 조합물의 유효량을 적용하여 복수개의 암세포를 사멸시키고자 제조된 것일 수 있다. 일부 구체예에서, 생물학적 샘플은 골수 샘플 또는 혈액 샘플이다.
본원에서 사용되는 용어 "종양파괴 잠재력"은 세포를 성장하거나 분열할 수 없게 만드는 것에 더불어, 용해 또는 세포자멸사 또는 기타 세포 사멸 메커니즘에 의한 세포 사멸을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "대상체" 또는 "환자"는 인간을 포함한, 동물계의 임의의 개별적인 구성원을 의미한다. 포유류의 예로는, 이에 한정하는 것은 아니지만, 포유강의 임의의 구성원: 인간, 비인간 영장류, 예컨대 침팬지, 및 다른 유인원 및 원숭이 종; 경작용 동물, 예컨대 소, 말, 양, 염소, 돼지; 가축, 예컨대 토끼, 개, 및 고양이를 들 수 있다. 본원에 제공된 방법 및 조성물의 일부 구체예에서, 포유류는 인간 또는 비인간이다.
본원에서 사용되는 용어 "치료하다" 또는 "치료하는"은 임상 결과를 포함한, 유익한 또는 바람직한 결과를 얻기 위한 접근법을 의미한다. 유익한 또는 바람직한 임상 결과로는, 이에 한정하는 것은 아니지만, 측정 가능하거나 가능하지 않거나간에, 하나 이상의 증상 또는 상태의 경감 또는 개선, 질환 정도의 감소, 질환 상태의 안정화, 질환 발달의 방지, 질환 확산의 방지, 질환 진행의 지연 또는 둔화, 질환 개시의 지연 또는 둔화, 질환 상태의 개선 또는 완화, 및 차도(부분적이거나 전체적임)를 들 수 있다. "치료하는"은 치료가 없을 때에 예상했던 보다 환자의 생존을 연장시키는 것을 의미할 수도 있다. 또한, "치료하는"은 질환의 진행을 억제하고, 질환의 진행을 일시적으로 감속시키는 것을 의미할 수 있지만, 이것은 질환의 진행을 영구적으로 중지시키는 것을 수반할 수도 있다. 통상의 기술자에 의해 이해될 수 있는 바와 같이, 특정 질환 상태를 개선하는 동안 치료가 치료에 의해 영향을 미친 임의의 이익보다 더 큰 역효과를 치료된 환자에게 초래한다면 결과는 유익하지 않거나 바람직하지 않을 수 있다. 본 개시는 암 치료를 필요로 하는 환자에게 치료학적 유효량의 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스("2개 바이러스의 조합")를 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료 방법을 제공한다. 2개 바이러스의 조합은 표준 투여 방법을 사용하여 환자에게 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 2개 바이러스의 조합은 질환 부위에 투여된다. 대안적으로, 2개 바이러스의 조합은 전신적으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 2개 바이러스의 조합은 종양내로 또는 바이러스-담체 세포의 사용에 의해, 예컨대 자가조직 종양 또는 사이토카인-활성화된 자가조직 정상 조혈 세포에 의해 투여된다. 다양한 구체예에서, 2개 바이러스의 조합은 경구로 또는 비경구로, 또는 당업계에 알려져 있는 임의의 표준 방법에 의해 투여될 수 있다. 비경구 투여는 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 상피통과의, 코로의, 폐내, 척수강내, 직장 및 국소 모드의 투여를 포함한다. 비경구 투여는 선택된 기간에 걸친 연속적인 주입에 의한 것일 수 있다.
환자에게 투여될 때, 단일 바이러스 또는 바이러스들의 조합의 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 그 투여량에서 및 충분한 시간 동안, 임의의 의학적 치료 또는 예방에 적용할 수 있는 타당한 유익/위험 비율로 암을 경감, 개선, 완화, 개선, 안정화, 확산의 방지, 진행의 둔화 또는 지연 또는 치유하기 위해 필요한 양이다. 효과적인 투여량 수준은 질환의 중증도, 활성제의 활성, 환자의 연령, 체중, 건강 및 성별, 활성제에 대한 민감성, 투여 시간, 투여 경로, 및 본 개시의 조성물의 배설률, 치료 기간, 본 개시의 조성물과 동시에 또는 조합하여 사용된 약물, 바이러스의 조합의 약역학적 특성, 2개 바이러스의 조합의 병독성 및 역가, 및 의학 분야에 공지되어 있는 기타 인자들에 따라 측정될 수 있다. 본 개시의 약학적 조성물은 단독으로 또는 다른 공개적으로 알려져 있는 항암 약물 또는 항암 활성을 가진 것으로 알려져 있는 것과 같은 알려진 성분들과 조합되어 투여될 수 있다. 조성물을, 상기 인자들을 모두 고려하여, 부작용을 유발하지 않으면서 최대 효과를 나타낼 수 있는 최소량으로 투여하는 것이 중요하다.
이에 더불어, 통상의 기술자는 상기 인자들을 기반으로 투여하기 위하여 2개 바이러스(다람쥐폭스 바이러스 및/또는 믹소마폭스 바이러스)의 조합의 적절한 양을 결정할 수 있을 것이다. 2개 바이러스의 조합은 환자의 임상 반응에 따라, 필요에 따라 조정될 수 있는 적합한 양으로 초기에 투여될 수 있다. 2개 바이러스의 조합의 유효량은 실험적으로 및 안전하게 투여될 수 있는 2개 바이러스의 조합의 최대량, 및 원하는 결과를 생성하는 2개 바이러스의 조합의 최소량에 따라 결정될 수 있다.
전신적으로 2개 바이러스의 조합을 투여할 때 2개 바이러스의 조합의 질환 부위에서의 주입을 통해 이루어지는 것과 동일한 임상 효과를 생성하기 위하여, 2개 바이러스의 조합의 유의하게 더 높은 양의 투여가 필요할 수 있다. 그러나, 적절한 용량 수준은 원하는 결과를 이룰 수 있을 최소량이어야 한다. 투여될 2개 바이러스의 조합의 농도는 투여될 2개 바이러스의 조합의 특정 스트레인(들)의 병독성에 따라 및 표적화되는 세포의 성질의 따라 다를 것이다. 일부 구체예에서, 약 109 플라크 형성 단위("pfu") 미만의 용량이 인간 환자에게 투여된다. 다양한 구체예에서, 약 102 내지 약 1012 pfu, 약 102 내지 약 109 pfu, 약 103 내지 약 108 pfu, 또는 약 104 내지 약 107 pfu가 단일 용량으로 투여될 수 있다.
바이러스들의 조합의 치료적 유효량은 초기 치료 양생법의 효과에 따라 반복적으로 제공될 수 있다. 투여는 전형적으로 주기적으로 제공되는 한편, 임의의 반응이 모니터링된다. 통상의 기술자에 의해 상기 표시된 투여량보다 낮거나 높은 투여량이 투여 스케줄 및 선택된 경로에 따라 제공될 수 있다는 것이 인지될 것이다.
2개 바이러스의 조합은 단독으로 또는 화학요법, 방사선 요법, 면역 요법 또는 기타 항바이러스 요법을 포함한, 다른 치료법과 조합되어 투여될 수 있다. 예를 들어, 2개 바이러스의 조합은 일차 종양의 수술로 인한 제거 전 또는 후에 또는 방사선요법 또는 종래의 화학요법 약물의 투여와 같은 치료 전에, 동시에 또는 후에 투여될 수 있다.
투여를 보조하기 위하여, 2개 바이러스의 조합은 약학적 조성물의 성분으로서 제형화될 수 있다. 조성물은 염, 완충제, 보존제 및 다양한 부합성 부형제의 약학적으로 허용되는 농도를 일상적으로 함유할 수 있는 것으로 인지된다. 모든 전달 형태에 대해, 2개 바이러스의 조합은 생리적 염 용액에 제형화될 수 있다. 약학적 조성물은 추가적으로 다른 치료제, 예컨대 항암제를 함유할 수 있다. 일부 구체예에서, 조성물은 화학요법제를 포함한다.
화학요법제는, 예를 들어, 실질적으로 환자의 암세포 또는 신생 세포에 대해 종양파괴 효과를 나타내고 바이러스의 조합의 살해 효과를 억제하거나 감소시키지 않는 임의의 작용제일 수 있다. 예를 들어, 화학요법제는, 제한 없이, 안트라사이클린, 알킬화제, 알킬 설포네이트, 아지리딘, 에틸렌이민, 메티넬아민, 질소 머스타드, 니트로소우레아, 항생물질, 항대사산물, 엽산 유사체, 푸린 유사체, 피리미딘 유사체, 효소, 포도필로톡신, 백금-함유 작용제 또는 사이토카인일 수 있다. 화학요법제는 암성이거나 신생인 특정 세포 유형에 대해 효과적인 것으로 알려져 있는 것일 수 있다. 일부 구체예에서, 화학요법제, 예컨대 티오테파, 시스플라틴-기반 화합물, 및 사이클로포스파미드는 조혈 악성종양의 치료에 효과적이다.
약학적으로 허용되는 희석제의 비율 및 정체성은 선택된 투여 경로, 바이러스들의 조합과의 부합성 및 표준 약학적 실제에 의해 결정된다. 일반적으로, 약학적 조성물은 2개 바이러스의 조합의 생물학적 특성을 유의하게 손상시키지 않을 성분들로 제형화될 것이다.
약학적 조성물은, 활성 물질(다람쥐폭스 바이러스 및/또는 믹소마폭스 바이러스)의 유효량이 약학적으로 허용되는 비히클과의 혼합물로 조합되도록, 환자에게 투여하기에 적합한 약학적으로 허용되는 조성물의 제조를 위한 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 적합한 비히클은, 예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences (Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., USA 1985)에 기술되어 있다. 이것을 기반으로, 조성물은, 비록 전적으로 그렇지는 않지만, 하나 이상의 약학적으로 허용되는 비히클 또는 희석제와 공동으로, 및 적합한 pH를 가지며 생리적 유체와 삼투압이 서로 같은 완충 용액에 함유된 2개 바이러스의 조합의 용액을 포함한다.
약학적 조성물은 통상의 기술자들에 의해 인지되는 것과 같이, 선택된 투여 경로에 따라 다양한 형태로 환자에게 투여될 수 있다. 발명의 약학적 조성물은 경구로 또는 비경구로 투여될 수 있다. 약학적 조성물은, 예를 들어, 비활성 희석제와 함께 또는 동화성 담체와 함께 경구로 투여될 수 있거나, 또는 경성 또는 연성 껍질 젤라틴 캡슐에 동봉될 수 있거나, 또는 정제로 압축될 수 있다. 경구 치료 투여를 위해, 바이러스들의 조합은 부형제와 통합될 수 있고 섭취 가능한 정제, 박칼정(buccal tablets), 트로키정, 캡슐, 엘릭시르제, 현탁액, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 사용될 수 있다.
2개 바이러스의 조합의 용액은 생리적으로 적합한 완충액에 제조될 수 있다. 보관 및 사용의 통상적인 조건 하에서, 이런 제제들은 미생물의 성장을 방지하지만, 바이러스들의 조합을 비활성화하지는 않을 보존제를 함유한다. 통상의 기술자는 적합한 제형을 제조하는 방법을 알 것이다. 적합한 제형의 선택 및 제조를 위한 종래의 과정 및 성분들은, 예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences and in The United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 24 NF19) (1999)에 기술되어 있다.
일부 구체예에서, 약학적 조성물은 주사에 의해(피하로, 정맥내로, 근육내로, 등) 질환 부위, 예컨대 종양 부위에 직접 투여되거나, 또는 경구 투여에 의해, 대안적으로 경피 투여에 의해 투여된다.
주사 가능한 사용에 적합한 약학적 조성물의 형태는 멸균된 수용액 또는 분산액 및 멸균된 주사용 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균된 분말을 포함하고, 여기서 용어 멸균된은 투여될 바이러스들의 조합 자체로 확대되지는 않는다. 모든 경우에 형태는 멸균되어야 하고 용이한 주사능이 존재할 수 있을 정도로 유동성이어야 한다.
사용될 약학적 조성물의 용량은 치료되는 특정 질병, 질병의 중증도, 연령, 신체 상태, 크기 및 체중을 포함한 개별적인 환자 매개변수, 치료 기간, 병행 치료(있는 경우)의 성질, 구체적인 투여 경로 및 건강 요원의 지식 및 전문 기술의 범위 내에 있는 기타 유사한 인자들에 따라 좌우된다. 이런 인자들은 통상의 기술자들에게 알려져 있고 최소한의 기본적인 실험으로 해결될 수 있다. 일부 구체예에서, 약학적 조성물은 활성제(들)의 치료적 유효량 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
본 발명의 2개 바이러스의 조합은 종양파괴 바이러스 내성 암을 포함한 암으로부터의 세포에 대해 효과적이다. 본원에서 사용되는 용어 "암" 또는 "암세포"는 세포 증식의 제어의 유의한 손실 또는 불멸화된 세포를 특징으로 하는, 비정상 성장을 나타내는 세포를 나타낸다. 용어 "암"은 전이성 암, 뿐만 아니라 비전이성 암을 포함할 수 있다.
본 발명에 의해 치료 가능한 예시의 암 및/또는 암세포로는, 한정하는 것은 아니지만, 림프종, 골수종, 및 백혈병과 같은 조혈 악성종양, 폐암, 소세포 폐암, 유방암, 대장암, 췌장암, 뇌암, 난소암 및 위암을 가진 환자들로부터 유래된 세포들을 들 수 있다. 일부 구체예에서, 본원에 기술된 바이러스들의 조합에 의해 치료된 암세포는 혈액 악성종양을 가진 환자들로부터 유래된다. 혈액 악성종양은 백혈병, 림프종, 또는 골수종일 수 있다. 일부 구체예에서, 암세포는 CML 및 MM 중 하나를 가진 환자로부터 유래된다. 일부 구체예에서, 암은 난치성 암이고 및/또는 암세포는 "난치성 암"으로부터 유래된다. 본원에서 사용되는, "난치성 암"은 치료에 반응하지 않거나 치료에 내성이 된 암을 나타내는 것을 의미한다.
조혈 줄기세포 및 암세포를 포함하는 생물학적 샘플은, 한정하는 것은 아니지만 생검 및 흡인을 포함한, 당업계에 알려져 있는 임의의 표준 과정을 통해 환자로부터 얻어질 수 있다. 일단 본 발명의 바이러스들의 조합으로 치료된 후에, 치료된 조혈 줄기세포는 당업계에 알려져 있는 임의의 공지 기법을 사용하여 환자에게 복귀 또는 투여될 수 있다.
이전의 연구들은 종양파괴 믹소마폭스 바이러스가 종양 억제자 기능부전 세포를 우선적으로 감염시키고 사멸시키는 것을 보였다(Kim M. et al., 2010). 이론에 의해 구속되지 않기를 바라면서, 바이러스들의 조합은, 바이러스들의 조합이 기능부전 세포의 p53, ATM 및 Rb 종양 억제자 유전자를 포함하고 결함 인터페론 반응을 포함한 암성 세포를 사멸시키는 것으로 여겨지기 때문에, 정상적인 인간 또는 동물 조직 세포를 손상시키지 않으면서 암세포를 선택적으로 사멸시킬 수 있다.
본원에서 사용되는 "약학적으로 허용되는"은 활성제의 생물학적 활성 또는 특성을 없애지 않고, 상대적으로 무독성인, 즉, 물질이 바람직하지 않은 생물학적 효과를 유발하거나 그것이 함유된 조성물의 성분들 중 임의의 것과 유해한 방식으로 상호작용하지 않으면서 개체에게 투여될 수 있는 부형제, 예컨대 담체 또는 희석제를 나타낸다.
본원에서 사용되는 약학적 조성물은 약학적으로 허용되는 다른 화학적 성분들, 즉 부형제, 예컨대 한정하는 것은 아니지만, 담체, 안정화제, 희석제, 붕해제, 현탁제, 증점제, 결합제, 항미생물제, 항미생물 보존제, 항산화제, 및/또는 완충제를 포함한 활성제(들)로서의 바이러스들의 조합을 나타낸다.
본원에서 사용되는 용어 "담체"는 활성제(들)의 세포 또는 조직으로의 혼입을 용이하게 하는 상대적으로 무독성인 화학적 화합물 또는 작용제를 나타낸다. 용어 "희석제"는 전달 전에 관심의 활성제(들)을 희석하기 위해 사용되는 화학적 화합물을 나타낸다. 희석제는 또한 그것들이 보다 안정적인 환경을 제공할 수 있기 때문에 활성제(들)을 안정화시키기 위해서도 사용될 수 있다.
완충제는 일단 확립된 후, 외부 작용제들의 영향 및 조성물의 성분들의 평형 이동으로부터 약학적 조성물의 원하는 pH를 유지하기 위해 사용될 수 있다.
일부 구체예에서, 발명의 약학적 조성물은 주사 가능한 투여 형태이다. 비경구 주사를 위해, 적절한 제형으로는, 예를 들어, 생리적으로 부합하는 담체를 포함한 멸균된 수성 또는 비수성 용액을 들 수 있다.
일부 구체예에서, 발명의 약학적 조성물은 경구 투여 형태이다. 경구 투여를 위해, 본원에 기술된 활성제(들)은 활성제(들)을 당업계에 잘 알려져 있는 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 조합시킴으로써 쉽게 제형화될 수 있다. 그러한 담체는 본원에 기술된 활성제가 치료되는 환자에 의한 경구 섭취를 위해 정제, 분말, 환, 당의정, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 엘릭시르제, 슬러리, 현탁액 등으로서 제형화되는 것을 가능하게 한다.
용어 "단위 투여 형태"는 각 단위가 적합한 약학적 부형제와 결합된 예정된 양의 활성 성분을 함유하고, 하나 또는 그 이상이, 예컨대 암을 치료하는, 원하는 치료 효과를 생성하기 위한 투여량 요법 전체를 통해 사용되는, 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 별개의 단위를 나타낸다.
본원에 기술된 약학적 조성물은 정확한 투여량의 단일 투여에 적합한 단위 투여 형태로 있을 수 있다. 단위 투여 형태에서, 제형은 하나 이상의 활성제의 적절한 양을 함유한 단위 용량들로 나누어진다. 단위 투여량은 제형의 별개의 양들을 함유한 포장의 형태로 있을 수 있다. 비제한적인 실례는 바이알 또는 앰플에 포장된 정제 또는 캡슐, 및 분말이다. 수성 현탁액 조성물은 단일-용량 비-재밀폐용 용기에 포장될 수 있다. 대안적으로, 다중-용량 재밀폐용 용기가 사용될 수 있는데, 이 경우에는 조성물에 보존제를 포함하는 것이 전형적이다. 단지 실례로서, 비경구 주사용 제형은, 한정하는 것은 아니지만, 앰플을 포함하는 단위 투여 형태로, 또는 다중-용량 용기에 제공될 수 있다.
전술한 범위들은, 개체 치료 요법과 관련하여 변수들의 수가 크고, 이런 권장값들로부터 상당한 벗어남이 흔한 것이기 때문에, 단순히 제시적인 것이다. 그러한 투여량은 많은 변수, 한정하는 것은 아니지만, 사용된 활성제(들)의 활성, 치료되는 질환 또는 질병, 투여 모드, 개별적인 환자의 요구조건, 치료되는 질환 또는 질병의 중증도, 및 의사의 판단에 따라 변경될 수 있다.
발명은 또한 본원에 개시된 약학적 조성물을 포함하는 멸균된 유리 또는 폴리올레핀 용기에도 관련된다. 일부 구체예에서, 용기는 비-DEHP(비스(2-에틸헥실)프탈레이트(다이-2-에틸헥실 프탈레이트, 다이에틸헥실 프탈레이트, DEHP; 다이옥틸 프탈레이트, DOP) 또는 비-PVP(폴리비닐피롤리돈)이다.
키트는 적합한 용기, 예컨대 박스, 개별 보틀, 백 또는 앰플을 포함한다. 현탁액 조성물은 단일-용량 비-재밀폐가능 용기 또는 다중-용량 재밀폐가능 용기에 포장될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "동시 투여" 등은 단일 환자에게 두 바이러스(활성제)의 투여를 포함하는 것을 의미하며, 작용제들이 동일한 또는 상이한 투여 경로에 의해 또는 동시에 또는 상이한 시간에 투여되는 치료 양생법을 포함하는 것으로 의도된다.
본원에 기술된 활성제(들)을 함유하는 조성물은 예방적 및/또는 치료적 치료를 위해 투여될 수 있다. 치료적 적용에서, 조성물은 이미 질환 또는 질병에 걸린 환자에게, 질환 또는 질병의 증상을 치료 또는 적어도 부분적으로 정지시키기에 충분한 양으로 투여된다. 이런 사용에 효과적인 양은 질환 또는 질병의 중증도 및 과정, 이전의 치료법, 환자의 건강 상태, 체중, 및 활성제에 대한 반응, 및 치료하는 의사의 판단에 따라 좌우될 것이다. 기본적인 실험(한정하는 것은 아니지만, 용량 증가 임상 실험을 포함하여)에 의해 그러한 치료적 유효량을 결정하는 것은 통상의 기술자의 당업계에서의 숙련도 내에 있는 것으로 여겨진다.
예방적 적용에서, 본원에 기술된 활성제를 함유한 조성물은 암에 걸리기 쉬운 또는 그렇지 않으면 암의 위험이 있는 환자에게 투여된다. 그러한 양은 "예방적으로 유효량 또는 용량"인 것으로 정의된다. 이런 사용에서, 정확한 양은 또한 환자의 건강 상태, 체중, 등에 따라 좌우된다. 그러한 예방적으로 유효량을 기본적인 실험(예컨대 용량 증가 임상 실험)에 의해 결정하는 것은 통상의 기술자의 당업계에서의 숙련도 내에 있는 것으로 여겨진다. 환자에서 사용될 때, 이런 사용에 대한 유효량은 질환, 장애 또는 질병의 중증도 및 과정, 이전의 치료법, 환자의 건강 상태 및 활성제에 대한 반응, 및 치료하는 의사의 판단에 따라 좌우될 것이다.
환자의 상태가 개선되지 않는 경우에, 의사의 재량에 따라, 본원에 기술된 활성제의 투여가 만성적으로, 즉, 환자의 질환 또는 질병의 증상을 개선하기 위해 또는 그렇지 않으면 제어하거나 제한하기 위해 환자의 생애 기간 전체를 포함하여, 연장된 기간 동안 투여될 수 있다.
그러한 양에 상응할 주어진 작용제의 양은 특정 활성제, 질환 상태 및 그것의 중증도, 치료를 필요로 하는 대상체 또는 숙주의 정체성(예컨대 연령, 체중, 성별, 등)과 같은 인자들에 따라 달라지겠지만, 그럼에도 불구하고 예컨대 투여되는 특정 활성제, 투여 경로, 치료되는 질병, 및 치료되는 대상체 또는 숙주를 포함한, 사례를 둘러싼 특정 상황에 따라 당업계에 알려져 있는 방식으로 기본적으로 결정될 수 있다.
실시예
실시예 1 : 부인과 암종에서 다람쥐 폭스바이러스 종양파괴 효과.
도 1에서 도시된 것과 같이, 야생형 다람쥐폭스 바이러스를 감염(10 MOI) 후 2 내지 4일째에 다람쥐폭스 바이러스 도전시 C33A 인간 자궁경부암 세포의 세포질 영역에서 검출하였다. 성숙/미성숙 다람쥐폭스 바이러스 입자는 고전력 전자 현미경(EM)에서 나타난다. EM 배율: 30,000x.
실시예 2 : 간세포 암종에서 다람쥐 폭스바이러스 종양파괴 효과.
도 2에서 도시된 것과 같이, 야생형 다람쥐폭스 바이러스를 감염(10 MOI) 후 2 내지 4일째에 다람쥐폭스 바이러스 도전시 Hep3B 인간 자궁경부암 세포의 세포질 영역에서 검출한다. 성숙/미성숙 다람쥐폭스바이러스 입자는 고전력 전자 현미경(EM)에서 나타난다. EM 배율: 60,000x.
실시예 3 : 위암에서 다람쥐 폭스바이러스 종양파괴 효과.
도 3에서 도시된 것과 같이, 야생형 다람쥐폭스 바이러스를 감염(10 MOI) 후 2 내지 4일째에 다람쥐폭스 바이러스 도전시 AGS3 인간 위암 세포의 세포질 영역에서 검출하였다. 성숙/미성숙 다람쥐폭스바이러스 입자는 고전력 전자 현미경(EM)에서 나타난다. EM 배율: 30,000x.
실시예 4: 간세포암에서 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 상승적 종양파괴 효과.
Hep3B 세포를 야생형 다람쥐폭스 바이러스(8x105 TCID50) 또는 믹소마폭스 바이러스(1x105 TCID50)로 감염시켰다. 바이러스 감염 후 6일째에, 세포 콜로니를 고정하고 결정 바이올렛 용액으로 염색하였다. 도 4에서 도시된 것과 같이, 콜로니들을 고전력 스캐너를 사용하여 사진을 찍었다. Hep3B 간세포를 SQPV 바이러스 감염 및 MYXV-gfp 바이러스 감염으로 사멸시켰다. 사진에서 점(dot)의 개수가 줄어들수록 암세포가 많이 사멸되었음을 나타낸다. SQPV 바이러스 및 MYXV-gfp 바이러스 병용 감염에 의해 점(dot)의 개수가 현저히 줄어들었음을 확인할 수 있었다. SQPV: 다람쥐폭스 바이러스; MYXVgfp: gfp 발현 믹소마폭스 바이러스.
실시예 5 : 폐암에서 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 상승적 종양파괴 효과.
A549 세포를 야생형 다람쥐폭스 바이러스(8x105 TCID50) 또는 믹소마폭스 바이러스(1x105 TCID50)로 감염시켰다. 바이러스 감염 후 6일째에, 세포 콜로니를 고정하고 결정 바이올렛 용액으로 염색하였다. 도 5에서 도시된 것과 같이, 콜로니들을 고전력 스캐너를 사용하여 사진을 찍었다. A549 폐세포를 SQPV 바이러스 감염 및 MYXV-gfp 바이러스 감염으로 사멸시켰다. 사진에서 점(dot)의 개수가 줄어들수록 암세포가 많이 사멸되었음을 나타낸다. SQPV 바이러스 및 MYXV-gfp 바이러스 병용 감염에 의해 점(dot)의 개수가 현저히 줄어들었음을 확인할 수 있었다. SQPV: 다람쥐폭스 바이러스; MYXVgfp: gfp 발현 믹소마폭스 바이러스.
실시예 6: 유방암 세포에서 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 상승적 종양파괴 효과.
MCF7 세포를 야생형 다람쥐폭스 바이러스(8x105 TCID50) 또는 믹소마폭스 바이러스(1x105 TCID50)의 어느 하나 또는 두 바이러스의 조합(SQPV: 4x105 TCID50, MYXVgfp: 0.5x105 TCID50)으로 감염시켰다. 바이러스 감염 후 6일째에, 세포 생존율을, 도 6에 도시된 것과 같이, 제조사의 설명에 따라 WST-1 검정 방법을 사용하여 평가하였다. MCF7 유방암 세포를 SQPV 바이러스 감염 및 MYXV-gfp 바이러스 감염으로 사멸시켰다. 그 결과, 단일 바이러스를 처리한 경우에 비해, 2개 바이러스를 조합 처리한 결과 상승적 종양파괴 효과가 있음을 확인할 수 있었다. SQPV: 다람쥐폭스 바이러스, MYXVgfp: gfp 발현 믹소마폭스 바이러스.
Figure 112019078792568-pct00001
실시예 7 : 다람쥐폭스 바이러스 내성 암에서 다람쥐폭스 바이러스 또는 믹소마폭스 바이러스 상승적 종양파괴 효과.
다람쥐폭스 바이러스 내성 HTR1 세포(Kim et al., 2007)를 야생형 다람쥐폭스 바이러스(8x105 TCID50) 또는 믹소마폭스 바이러스(1x105 TCID50) 중 어느 하나 또는 두 바이러스의 조합(SQPV: 4x105 TCID50, MYXV 또는 MYXVgfp: 0.5x105 TCID50)으로 감염시켰다. 바이러스 감염 후 6일째에, 세포 콜로니를 고정하고 결정 바이올렛 용액으로 염색하였다. 도 7에서 도시된 것과 같이, 콜로니들을 고전력 스캐너를 사용하여 사진을 찍었다. 사진에서 점(dot)의 개수가 줄어들수록 암세포가 많이 사멸되었음을 나타낸다. SQPV 및 MYXV-gfp 바이러스 감염의 조합은 HTR1 암세포의 사멸을 상승적으로 증가시켰다. SQPV: 야생형 다람쥐폭스 바이러스, MYXVgfp: gfp 발현 믹소마폭스 바이러스.
실시예 8 : 생체내 B16F10 상승 모델에서 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 상승적 종양파괴 효과.
연령-일치시킨(생후 5주) 암컷 C57BL/6 마우스를 B16F10 쥐과 흑색종 세포(마우스당 1 x 105개 세포)로 우측 옆구리에 피하로 접종하였다. 종양 부피의 평균이 대략 100 내지 120 mm3에 도달했을 때 마우스를 무작위로 치료 집단에 배정하였다. 바이러스(다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스) 또는 PBS 비히클을 1, 2, 8, 9일째에 종양내로 투여하였다. 종양 부피(도 8a) 및 마우스 체중(도 8b)을, 종양이 대략 2,000 mm3에 도달할 때까지 규칙적인 간격으로 측정하였다. 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 조합 치료는 B16F10 흑색종 종양에서, 다람쥐폭스 바이러스 단일 감염(채워진 삼각형, 상부로부터 세 번째 라인) 및 믹소마폭스 바이러스 단일 감염(채워진 직사각형, 상부로부터 두 번째 라인)과 비교하여 종양 성장 억제를 상승적으로 유도하였다(최저 라인). 전신적 독성의 임의의 신호 및 증상은 도 8b에서 도시된 것과 같이 비히클-처리된 마우스에서의 그것들과 비교하여, 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스가 조합된 두 바이러스로 처리된 마우스에서 관찰되지 않았고, 단일 치료 또는 조합 치료 중 어느 것이든지 바이러스로 감염된 마우스에 대해 독성이 없음을 확인할 수 있었다. SQPV: 다람쥐폭스 바이러스, MYXV gfp: gfp 발현 믹소마폭스 바이러스.
명세서 전체에서 인용된 참고문헌들의 교시는 그것들이 본원의 교시와 모순되지 않는 것이 아닌 정도로 이런 언급에 의해 그 전문이 본원에 포함된다. 본원에 기술된 실시예 및 구체예들은 단지 예시적인 목적에 대한 것이고 그것의 관점에서 다양한 변형 또는 변화가 통상의 기술자들에게 제시될 것이며 본 출원의 사상 및 범위 내에 포함될 것임이 인지되어야 한다.
특정 구체예들의 전술한 설명은, 당업계의 숙련도 내의 지식을 적용함으로써, 다른 사람들이 불필요한 실험 없이, 본 발명의 일반적인 개념으로부터 벗어나지 않으면서, 그러한 특정 구체예들을 쉽게 변형하거나 및/또는 다양한 적용에 대해 조정할 수 있는 발명의 일반적인 성질을 전체적으로 드러낼 것이다. 그러므로, 그러한 조정 및 변형은 본원에 제공된 교시 및 안내를 기반으로, 개시된 구체예들의 동등물의 의미 및 범위 내에 있는 것으로 의도된다. 본원의 어법 또는 전문용어는 설명할 목적이며 제한하는 것이 아니어서, 본원의 전문 용어 또는 어법이 교시 및 안내의 관점에서 통상의 기술자들에 의해 해석될 수 있다는 것이 인지되어야 한다.
본원의 폭 및 범주는 상기 기술된 예시적인 구체예들 중 임의의 것에 의해 제한되지 않아야 하지만, 다음의 청구범위 및 그것들의 동등물에 따라서만 정의되어야 한다.
본원에 개시된 모든 다양한 측면, 구체예, 및 옵션들은 임의의 및 모든 변화로 조합될 수 있다.
본원에서 언급된 모든 공보, 특허, 및 특허 출원은 각각의 개별적인 공보, 특허, 또는 특허 출원이 구체적으로 및 개별적으로 참조로 포함되는 것으로 표시된 것과 동일한 정도로 참조로 본원에 포함된다.

Claims (19)

  1. 치료학적으로 유효한 양의 (a) 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 조합물; 또는 (b) (a)로 처리된 생물학적 샘플을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서,
    상기 생물학적 샘플은 골수 샘플, 지방 유래 줄기세포 샘플 또는 혈액 샘플이고,
    상기 암은 간암, 폐암, 유방암 및 흑색종으로 이루어진 군에서 선택된 1이상인 것을 특징으로 하는, 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 다람쥐폭스 바이러스는 야생형 다람쥐폭스 바이러스인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 다람쥐폭스 바이러스는 암 표적화를 위한 치료 유전자-발현 다람쥐폭스 바이러스인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 믹소마폭스 바이러스는 야생형 믹소마폭스 바이러스인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서,
    상기 믹소마폭스 바이러스는 암 표적화를 위한 치료 유전자-발현 믹소마폭스 바이러스인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 다람쥐폭스 바이러스는 3x105 내지 10x105 TCID50 포함되는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  7. 제 1 항에 있어서,
    상기 믹소마폭스 바이러스는 0.1x105 내지 10x105 TCID50 포함되는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스 조합물에서의 다람쥐폭스 바이러스와 믹소마폭스 바이러스 역가비는 1:1 내지 100:1 (다람쥐폭스 바이러스 : 믹소마폭스 바이러스)인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 생물학적 샘플은 엑스 비보(ex vivo) 생물학적 샘플에 대해 다람쥐폭스 바이러스 및 믹소마폭스 바이러스의 조합물의 유효량을 적용하여 복수개의 암세포를 사멸시키고자 제조된 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  10. 삭제
  11. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암은 종양 억제자 결핍 기능을 보유한 암인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암은 악성 세포, 양성 세포 또는 이들의 혼합물을 포함하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  15. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암은 종양파괴 바이러스 내성 암을 포함한 난치성 암인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  16. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 주사 가능한 투여 형태인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  17. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 경구 투여 형태인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  18. 삭제
  19. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 따른 약학적 조성물 및 약학적 조성물에 대한 지시 라벨을 포함하는 키트.
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