KR102070854B1 - Composition for preventing, improving or treating muscular damage comprising Vigna angularis extract - Google Patents

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Abstract

본 발명은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드가 손상된 근육 세포에 미치는 영향을 확인한 것으로, 상기 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드는 투여 시 손상된 근육에서 근육 위성세포의 활성화를 촉진시켰으므로 근육 손상 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 예방 또는 개선용 식품 조성물, 화장료 조성물과 손상 근육의 재생 촉진용 약학적 조성물, 식품 조성물 또는 화장료 조성물로 유용하게 활용될 수 있다.The present invention confirms the effect of red bean extract or adzuki bean-derived peptides on damaged muscle cells, and the red bean extract or red bean-derived peptides promote the activation of muscle satellite cells in the damaged muscles during administration. It may be usefully used as a composition, a food composition for preventing or improving, a cosmetic composition and a pharmaceutical composition for promoting regeneration of an injured muscle, a food composition or a cosmetic composition.

Description

팥 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 손상 예방, 개선 또는 치료용 조성물{Composition for preventing, improving or treating muscular damage comprising Vigna angularis extract}Composition for preventing, improving or treating muscular damage comprising Vigna angularis extract}

본 발명은 팥 추출물을 포함하는 근육 손상 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 상기 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 근육 손상 약학적 조성물, 예방 또는 개선용 식품 조성물, 화장료 조성물 또는 손상 근육 재생용 약학적 조성물, 식품 조성물, 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for preventing, improving or treating muscle damage, comprising a red bean extract, and more particularly, a composition for preventing or improving muscle damage pharmaceutical composition comprising the red bean extract or a red bean-derived peptide as an active ingredient. It relates to a cosmetic composition or a pharmaceutical composition for regenerating injured muscle, a food composition, and a cosmetic composition.

근육(Muscle)이란 중배엽의 줄기세포가 발달되어 생성된 조직으로써 근육세포(myoblast)들의 결합(fusion)으로 이루어진 근섬유(myofiber) 다발로 구성되어 있다. 근육은 체중의 40-50%를 차지하고 있어 뼈, 내장 기관을 지탱 및 보호하는 동시에 심장의 박동과 같은 근육 외의 다른 조직의 운동성을 갖도록 한다(J. Nutr. Sci. Vitaminol., 61: 188-194, 2015). 또한 기관의 보호 외에도 근육은 운동을 포함한 신체활동뿐만 아니라 영양소 대사(metabolism)에도 큰 영향을 주기 때문에 제 2형 당뇨, 비만, 심혈관 질환 등과 같은 대사성 질환의 발병과도 밀접하게 연관되어 있다. 이러한 중요성으로 인해 근육의 손상 및 상처에 따른 근육의 재생 및 회복은 정상적인 신체 기능의 유지를 위해 필수적 요소로 자리잡고 있다(Am. J. Cardiol., 110: 58B-68B, 2012; Br. J. Pharmacol., 170: 1153-1166, 2013).Muscle is a tissue produced by the development of mesenchymal stem cells and consists of a bundle of myofibers composed of fusion of myoblasts. Muscles make up 40-50% of the body's weight, supporting and protecting bones and organs, as well as motility of other tissues, such as the beating of the heart (J. Nutr. Sci. Vitaminol., 61: 188-194, 2015). In addition to the protection of organs, muscles are also closely linked to the development of metabolic diseases such as type 2 diabetes, obesity, and cardiovascular disease because muscles have a significant effect on metabolism as well as physical activities including exercise. Due to this importance, muscle regeneration and recovery following muscle damage and injury are essential for the maintenance of normal body function (Am. J. Cardiol., 110: 58B-68B, 2012; Br. J. Pharmacol., 170: 1153-1166, 2013).

근육에 상처나 손상이 있을 때, 근육 세포로의 전구체(precursor)인 근육 위성세포(muscle satellite cell)는 근육 재생에 있어서 중요한 역할을 한다. 정상일 경우, 근섬유의 가장자리에 위치한 근육 위성세포는 휴지(quiescent)상태로 유지되지만, 근육이 물리적 또는 화학적으로 외부로부터 손상을 입게 되면 이를 재생하기 위해 다양한 전사 인자(transcription factor)들을 분비하며 근육 재생(regeneration) 단계에 돌입하게 된다. When muscles are injured or damaged, muscle satellite cells, precursors to muscle cells, play an important role in muscle regeneration. Normally, muscle satellite cells located at the edges of muscle fibers remain quiescent, but secrete a variety of transcription factors to regenerate when muscles are physically or chemically damaged from the outside. enter the regeneration phase.

위성세포는 발현된 전사 인자들에 의해 자가 증식(self-renewal)을 하며 근육 재생에 쓰일 위성세포풀(stem cell pool)을 형성하게 되는데, 이 때, 근 재생에 필요한 위성세포 수를 일정하게 유지하기 위해 Paired Box 7 (Pax7)의 발현이 증가하게 된다. 발현이 증가된 Pax7은 coactivator-associated arginine methyltransferase 1 (CARM1) 단백질에 의해 메틸화(methylation)되어 Pax7-CARM1 복합체(complex)를 형성함으로써 myogenic factor 5 (Myf5)의 발현을 촉진시킨다. Myf5 인자의 발현량 증가로 인해 휴지기 상태였던 근육 위성세포가 활성화되어 상처 및 손상된 근육 부위로 이동(migration)한다. 그 후 근섬유 다발을 형성하여 새로운 근육을 생성한다(Stem Cells Transl. Med., 5: 282-290, 2016).Satellite cells self-renewal by expressed transcription factors and form a stem cell pool for muscle regeneration. At this time, the number of satellite cells required for muscle regeneration is kept constant. In order to increase the expression of Paired Box 7 (Pax7). Increased expression of Pax7 is methylated by coactivator-associated arginine methyltransferase 1 (CARM1) protein to form the Pax7-CARM1 complex to promote the expression of myogenic factor 5 (Myf5). Due to the increased expression of Myf5 factor, muscle satellite cells that were at rest are activated to migrate to wounds and damaged muscle areas. Muscle fibers are then formed to produce new muscle (Stem Cells Transl. Med., 5: 282-290, 2016).

대표적인 두류 중 하나인 팥(Vigna angularis)은 쌍떡잎식물 콩과(Fabaceae)의 동부속(Vigna spp.)에 속하는 한해살이풀로 콩 다음으로 중요한 두류작물이다. 팥은 비타민 B1이 풍부하기 때문에 쌀과 혼합하여 밥을 지으면 쌀밥에 부족하기 쉬운 비타민을 공급하여 준다. 따라서 각기병 예방, 개선, 치료 효과를 보일 뿐만 아니라 피로회복에도 효과가 있음이 알려져 있다. 팥에 함유된 사포닌은 섬유질과 함께 변통을 돕는 효과가 있고 독을 풀고 배변을 촉진하여 장을 깨끗이 해주며, 신장병 또는 숙취 개선에도 이용된다(Korean. J. Food. Sci. Technol., 42(6): 693-698, 2010). 또한, 팥은 항산화(J. Food Lipids, 11(4): 278-286, 2004), 항당뇨(Biosci. Biotechnol. Biochem., 68(12): 24212426, 2004), 항균(Phytother. Res., 20(2): 162164, 2006), 미백(Int. J. Mol. Sci., 12(10): 7048-7058, 2011)등의 활성을 보유하고 있음이 보고 되어있으나, 근육 손상 예방, 치료 또는 개선 효능에 관하여는 보고된 바 없다.One of the representative legumes, Vigna angularis , is a perennial herb that belongs to the Vigna spp. Of the Fabaceae family and is the second most important legume crop. Red beans are rich in vitamin B1, so if you mix rice with rice, it will give your rice a lack of vitamins. Therefore, the effects of preventing, improving and treating each disease are known to be effective in recovering fatigue. Saponin contained in red beans has the effect of helping with bowel movement along with fiber, and it is also used to relieve intestines by releasing poison and promoting bowel movements, and to improve kidney disease or hangover (Korean. J. Food. Sci. ): 693-698, 2010). In addition, the red beans are antioxidant (J. Food Lipids, 11 (4): 278-286, 2004), antidiabetic (Biosci. Biotechnol. Biochem., 68 (12): 24212426, 2004), antibacterial (Phytother. Res., 20 (2): 162164, 2006), whitening (Int. J. Mol. Sci., 12 (10): 7048-7058, 2011), but has been reported to prevent, treat or No improvement has been reported on efficacy.

이에 본 발명자들은 손상된 근육을 예방, 개선 또는 치료할 수 있는 조성물을 개발하기 위하여 다양한 천연재료를 이용한 연구를 수행한 결과, 팥을 추출한 추출물이 근육 위성세포(muscle satellite cell)의 활성화를 촉진시켜 근육 손상을 예방, 개선 또는 치료하고 재생을 촉진하는 효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다. Therefore, the present inventors conducted research using various natural materials to develop a composition capable of preventing, improving or treating injured muscles. As a result, the extract extracted from red beans promotes the activation of muscle satellite cells, resulting in muscle damage. The present invention was completed by confirming that there is an effect of preventing, improving or treating and promoting regeneration.

따라서 본 발명의 목적은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 근육 손상 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating muscle damage, comprising red bean extract or red bean-derived peptide as an active ingredient.

또한 본 발명의 다른 목적은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 근육 손상 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.In addition, another object of the present invention is to provide a food composition for preventing or improving muscle damage, including red bean extract or red bean-derived peptide as an active ingredient.

또한 본 발명의 또 다른 목적은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 근육 손상 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.In addition, another object of the present invention to provide a cosmetic composition for preventing or improving muscle damage comprising a red bean extract or a red bean-derived peptide as an active ingredient.

또한 본 발명의 다른 목적은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 손상 근육의 재생 촉진용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for promoting regeneration of injured muscle comprising red bean extract or red bean derived peptide as an active ingredient.

또한 본 발명의 다른 목적은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 손상 근육의 재생 촉진용 식품 조성물을 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide a food composition for promoting regeneration of injured muscle comprising red bean extract or red bean-derived peptide as an active ingredient.

또한 본 발명의 다른 목적은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 손상 근육의 재생 촉진용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for promoting regeneration of injured muscle comprising red bean extract or red bean derived peptide as an active ingredient.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 근육 손상 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating muscle damage, comprising red beans extract or red beans derived peptide as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 근육 손상 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.In order to achieve the another object of the present invention, it provides a food composition for preventing or improving muscle damage comprising a red bean extract or a red bean-derived peptide as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 근육 손상 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In order to achieve the another object of the present invention, it provides a cosmetic composition for preventing or improving muscle damage comprising a red bean extract or a red bean-derived peptide as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 손상 근육의 재생 촉진용 약학적 조성물을 제공한다.In order to achieve another object of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition for promoting regeneration of injured muscle comprising red bean extract or red bean-derived peptide as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 손상 근육의 재생 촉진용 식품 조성물을 제공한다.In order to achieve the another object of the present invention, it provides a food composition for promoting the regeneration of injured muscle comprising red beans extract or red beans derived peptide as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 손상 근육의 재생 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.In order to achieve the another object of the present invention, it provides a cosmetic composition for promoting the regeneration of injured muscle comprising red beans extract or red beans derived peptide as an active ingredient.

이하 본 발명을 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 근육 손상 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.The present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating muscle damage, comprising red bean extract or red bean-derived peptide as an active ingredient.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 조성물일 수도 있고, 유효성분으로서 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드로 구성되는 조성물일 수도 있으며, 또는 유효성분으로서 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드가 필수적으로 구성되는 조성물일 수도 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention may be a composition comprising an adzuki bean extract or an adzuki bean-derived peptide as an active ingredient, or may be a composition consisting of an adzuki bean extract or an adzuki bean-derived peptide as an active ingredient, or an adzuki bean extract or an adzuki bean as an active ingredient It may also be a composition in which the derived peptide consists essentially.

본 명세서에서 용어 ‘을 포함하는(comprising)’이란 ‘함유하는(including)’또는 ‘특징으로 하는(characterized by)’과 동일한 의미로 사용되며, 본 발명에 따른 조성물 또는 방법에 있어서, 구체적으로 언급되지 않은 추가적인 구성 성분 또는 방법의 단계 등을 배제하지 않는다. 또한 용어 ‘로 구성되는(consisting of)’이란 별도로 기재되지 않은 추가적인 요소, 단계 또는 성분 등을 제외하는 것을 의미한다. 용어 ‘필수적으로 구성되는(essentially consisting of)’이란, 조성물 또는 방법의 범위에 있어서, 기재된 물질 또는 단계와 더불어 이의 기본적인 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않는 물질 또는 단계 등을 포함할 수 있는 것을 의미한다.As used herein, the term 'comprising' is used in the same sense as 'including' or 'characterized by,' specifically referring to the composition or method according to the present invention. It does not exclude additional components or steps of the method that are not. In addition, the term 'consisting of' means to exclude additional elements, steps or components, etc., unless otherwise noted. The term 'essentially consisting of' means that in the scope of the composition or method, it may include the substance or step described, as well as the substance or step which does not substantially affect its basic properties. .

본 명세서 내 “근”은 심줄, 근육, 건을 포괄적으로 지칭하는 것으로서, 단순 골격근(skeletal muuscle)에 국한되지 않고, 심근(cardiac muscle), 평활근(smooth muscle)을 포함한다. As used herein, “muscle” is a generic term for tendons, muscles, and tendons, and is not limited to skeletal muuscles, but includes cardiac muscles and smooth muscles.

본 명세서 내 “근육 재생”은 근육이 물리적으로 또는 화학적으로 손상을 입었을 때 빠르게 회복시키는 것을 의미하여, 손상된 근육이 정상인 기능을 할 수 있을 때까지의 과정과 기간을 포괄적으로 지칭한다.As used herein, “muscle regeneration” refers to the rapid recovery of muscles when they are physically or chemically damaged, and refers generically to the process and duration of time until the damaged muscles can function normally.

본 명세서에서 '팥(Vigna angularis)'은 쌍떡잎식물 콩과(Fabaceae)의 동부속(Vigna spp.)에 속하는 팥(V.angularis W.F.Wight), 검은팥(V. angularis var. angularis) 또는 그 이외의 식물들의 씨앗을 건조한 것이며, 이들을 단독으로 사용하여도 좋고, 혼합하여 사용하여도 좋다.As used herein, 'red bean ( Vigna angularis )' is a red bean ( V.angularis WFWight), black bean (V. angularis var. Angularis) or other belonging to the genus Vigna spp. The seeds of plants are dried and may be used alone or in combination.

본 명세서에서 ‘팥 추출물’은 팥을 추출하여 수득한 추출물을 의미한다. 팥 추출물의 제조방법은 물, C1 내지 C6의 유기용매, 아임계 유체 및 초임계 유체로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용매로 팥을 추출하여 수득할 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 용매는 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 및 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군 중에서 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. As used herein, the term “red bean extract” refers to an extract obtained by extracting red beans. The preparation method of the red bean extract may be obtained by extracting the red bean with one or more solvents selected from the group consisting of water, an organic solvent of C1 to C6, a subcritical fluid and a supercritical fluid. More specifically, the solvent is water, alcohol having 1 to 6 carbon atoms (alcohol), acetone (acetone), ether (ether), benzene (benzene), chloroform (chloroform), ethyl acetate (ethyl acetate), methylene chloride (methylene chloride), hexane, cyclohexane, and petroleum ether, but may be one or more selected from the group consisting of, but is not limited thereto.

또한, 본 발명의 팥 추출물은 팥을 식품가공에 적합한 정제수, 에탄올 및 아임계수 또는 초임계 이산화탄소를 이용하여 추출, 정제하여 얻을 수 있거나, 또는 팥을 직접 압착하여 얻은 오일로부터 분리 정제하여 얻을 수 있다. 본 발명에 따른 팥 추출물은 팥을 100 내지 1000 MPa의 압력에서 40 내지 90 ℃의 온도로 1 내지 24 시간 동안 초고압 처리 및 추출하여 수득한 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In addition, the red bean extract of the present invention can be obtained by extracting and refining the red bean using purified water, ethanol and subcritical water or supercritical carbon dioxide suitable for food processing, or by separating and refining from the oil obtained by directly compressing the red bean. . Red beans extract according to the present invention may be obtained by ultra-high pressure treatment and extraction for 1 to 24 hours at a temperature of 40 to 90 ℃ red beans at a pressure of 100 to 1000 MPa, but is not limited thereto.

또한, 상기 팥 추출물은 알카라아제(Alcalase), 플라보르자임(Flavourzyme), 뉴트라아제(Neutrase), 프로타멕스(Protamex) 및 단백질 가수분해효소-NP (Protease-NP)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 단백질가수분해효소를 처리하여 제조할 수 있으며, 2 내지 8의 pH 조건 및 30 내지 60℃의 온도 조건에서 효소를 활성화시킬 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In addition, the red bean extract is selected from the group consisting of Alcalase, Flavorzyme, Neutrase, Protamex and Protease-NP It can be prepared by treating any one or more proteolytic enzymes, it is possible to activate the enzyme at a pH condition of 2 to 8 and temperature conditions of 30 to 60 ℃, but is not limited thereto.

본 발명의 추출물은 여과 및/또는 농축하여 액상으로 사용할 수 있고, 분무건조 또는 동결건조 등 통상의 건조 공정을 통하여 고형화하여 사용할 수 있다. 상기 건조 공정에서는 분무건조 또는 동결건조 전 덱스트린 등을 혼합하여 건조할 수 있다.The extract of the present invention may be used as a liquid by filtration and / or concentration, and may be used by solidifying through a conventional drying process such as spray drying or lyophilization. In the drying process may be mixed by spray drying or dextrin prior to freeze drying.

본 발명의 일구현예에 따른 조성물은 근육 위성세포의 활성화를 촉진시킬 수 있다. 구체적으로, 근육이 손상될 경우, Pax7을 통해 근육 위성세포가 활성화되고 근육의 손상부위로 이동하여 손상부위의 회복을 유도한다. 상기 근육 위성세포 활성화 촉진여부를 확인하기 위하여, 팥의 근육 재생 활성을 평가한 결과, 팥에서 분리한 펩타이드가 Pax7의 mRNA를 증가시켰을 뿐만 아니라, 팥 추출물이 근육을 빠르게 회복시켰기 때문에 정상처럼 근육 위성세포의 핵이 근섬유의 가장자리에 위치하게 되었다. 따라서 팥 추출물이 손상된 근육에서 근육을 빠르게 회복시킴을 확인하였다. 이는, 본 발명에 따른 팥 추출물이 근육의 재생 또는 회복 강화에 이점이 있음을 의미한다.The composition according to one embodiment of the present invention may promote the activation of muscle satellite cells. Specifically, when muscles are damaged, muscle satellite cells are activated through Pax7 and moved to the damaged areas of the muscles to induce recovery of the damaged areas. As a result of evaluating the muscle regeneration activity of the red beans in order to confirm the activation of the muscle satellite cells, the peptide isolated from the red beans not only increased the mRNA of Pax7, but also the red bean extract quickly recovered the muscles, thus making the muscle satellite as normal. The nucleus of the cell was placed at the edge of the muscle fiber. Therefore, it was confirmed that the red bean extract quickly recovered muscles from damaged muscles. This means that the red bean extract according to the present invention has an advantage in strengthening muscle regeneration or recovery.

본 명세서에서 ‘팥 유래 펩타이드’는 팥으로부터 분리한 팥 단백질에 단백질 가수분해효소를 처리하여 수득한 것을 의미한다. As used herein, the term “red bean-derived peptide” means one obtained by treating proteolytic enzymes on red bean protein isolated from red beans.

본 명세서에서 상기 ‘가수분해효소’는 알카라아제(Alcalase), 플라보르자임(Flavourzyme), 뉴트라아제(Neutrase), 프로타멕스(Protamex) 및 단백질가수분해효소-NP (Protease-NP)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 단백질 가수분해효소일 수 있으며, 바람직하게는 프로타멕스일 수 있다.In the present specification, the 'hydrolase' is composed of Alcalase, Flavorzyme, Flavorzyme, Neutrase, Protamex, and Protease-NP. It may be any one or more proteolytic enzyme selected from the group, preferably protamex.

본 명세서에서 ‘팥 유래 펩타이드’는 구체적으로 하기 단계로 이루어진 방법으로 수득될 수 있다:In the present specification, 'red bean-derived peptide' may be specifically obtained by the method consisting of the following steps:

i) 건조된 팥을 분쇄하고 헥산을 용매로 하여 추출하는 단계;i) milling the dried red beans and extracting with hexane as a solvent;

ii) 상기 단계 i)에서 추출한 헥산 추출물을 제거하고, 박에 물을 가하여 pH 7.0 내지 10.0 조건에서 방치하는 단계;ii) removing the hexane extract extracted in step i) and adding water to the foil and leaving it at pH 7.0 to 10.0;

iii) 상기 단계 ii)에서 방치한 용액을 원심분리하여 상등액을 수득하는 단계;iii) centrifuging the solution left in step ii) to obtain a supernatant;

iv) 상기 단계 iii)에서 수득한 상층액을 다시 pH 2.0 내지 6.0 조건에서 방치하는 단계;iv) leaving the supernatant obtained in step iii) again at pH 2.0 to 6.0;

v) 상기 단계 iv)에서 방치한 용액을 다시 원심분리하여 침전한 침전체를 팥 유래 단백질로 수득하는 단계;v) centrifuging the solution left in step iv) to obtain precipitated precipitate as red beans derived protein;

vi) 상기 단계 v)에서 수득한 팥 유래 단백질에 가수분해효소를 가하고 효소 반응한 후, 여과하여 침전물을 제거하는 단계; 및vi) adding a hydrolase to the red bean-derived protein obtained in step v) and performing an enzymatic reaction, followed by filtration to remove the precipitate; And

vii) 상기 단계 vi)에서 침전물이 제거된 여과액을 동결건조하여 펩타이드를 수득하는 단계.vii) lyophilizing the filtrate from which the precipitate is removed in step vi) to obtain a peptide.

본 명세서에서 ‘근육 손상’은 운동-유발성 근육손상(exercise-induced muscle damage)일 수 있다. 근육 손상은 일반적으로 특정한 상해를 일으키는 활동 후 근육 구조의 물리적인 파괴에 의한 근기능의 손실로 정의될 수 있는데, 근육 손상을 일으키는 원인으로는 외상, 과도한 온도, 근독소에 의한 상해, 국소빈혈, 근육관련질병, 염증, 운동 등 다양하게 들 수 있다. 이 중 운동-유발성 근육 손상은 근육 내의 형태적 또는 구조적 변화를 일으키는 1차성 근육 손상(primary muscle damage) 과 염증성 반응, 칼슘 항상성의 손실 등을 일으키는 2차성 근육 손상(secondary muscle damage)으로 분류될 수 있다. 1차성 근육 손상은 근절(sarcomere)과 세포골격요소(cytoskeletal elements)의 구조적인 파괴 등이 나타나며 근육 손상 직후 근력의 발생을 약화시킨다. 2차성 근육 손상은 1차성 손상을 복구하는 과정에서 나타나는데 염증성 반응에 의해 지연성 근육통(delayed onset muscle soreness; DOMS)을 일으키고 혈장 내로 근단백질을 유출시킬 뿐만 아니라 지속적인 근력 감소 등을 나타내어 일시적인 근육 기능의 손실을 일으키게 된다.In the present specification, "muscle damage" may be exercise-induced muscle damage. Muscle damage can generally be defined as loss of muscle function due to physical destruction of muscle structure after activity that causes certain injuries, which can cause trauma, excessive temperature, injury from mytoxins, ischemia, muscle Related diseases, inflammation, exercise, etc. can be various. Among these, exercise-induced muscle injury can be classified as primary muscle damage causing morphological or structural changes in the muscle, and secondary muscle damage causing inflammatory reactions and loss of calcium homeostasis. Can be. Primary muscle injuries include sarcomere and structural destruction of cytoskeletal elements, weakening the development of muscle immediately after muscle injury. Secondary muscle damage occurs in the process of repairing primary damage, which causes delayed onset muscle soreness (DOMS) by the inflammatory response and not only releases muscle protein into the plasma, but also results in persistent muscle loss, resulting in temporary muscle function. It will cause a loss.

또한, 상기 근육 손상은 근육 좌상(muscle strain), 근육 파열(muscle rupture), 근육 열상(muscle tearing), 타박상(contusion), 염좌(distortion), 회전근개 증후근(roator cuff syndrome) 및 근육염(myositis)으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In addition, the muscle injury may include muscle strain, muscle rupture, muscle tearing, contusion, distortion, roator cuff syndrome, and myositis. It may be selected from the group consisting of, but is not limited thereto.

본 발명의 근육 손상 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition for preventing or treating muscle injury of the present invention may further include a pharmaceutically acceptable carrier.

약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 또한 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코스 및 글리콜 등을 포함할 수 있다. 또한, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 또한 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코스 및 글리콜 등을 포함할 수 있다. 또한, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).Pharmaceutically acceptable carriers may further include, for example, carriers for oral administration or carriers for parenteral administration. Carriers for oral administration may include lactose, starch, cellulose derivatives, magnesium stearate, stearic acid and the like. Carriers for parenteral administration may also include water, suitable oils, saline, aqueous glucose, glycols, and the like. In addition, stabilizers and preservatives may be further included. Suitable stabilizers include pharmaceutically acceptable carriers such as, for example, sodium bisulfite, sodium sulfite or ascorbic acid, and may further include, for example, carriers for oral administration or carriers for parenteral administration. Carriers for oral administration may include lactose, starch, cellulose derivatives, magnesium stearate, stearic acid and the like. Carriers for parenteral administration may also include water, suitable oils, saline, aqueous glucose, glycols, and the like. In addition, stabilizers and preservatives may be further included. Suitable stabilizers include antioxidants such as sodium hydrogen sulfite, sodium sulfite or ascorbic acid. Suitable preservatives include benzalkonium chloride, methyl- or propyl-parabens and chlorobutanol. Other pharmaceutically acceptable carriers may be referred to those described in the following literature (Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).

본 발명의 약학적 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 예를 들어, 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구적인 투여방법으로는 이에 제한되는 것은 아니나, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다.The pharmaceutical compositions of the present invention can be administered to any mammal, including humans. For example, it can be administered orally or parenterally, parenteral administration methods include, but are not limited to, intravenous, intramuscular, intraarterial, intramedullary, intradural, intracardiac, transdermal, subcutaneous, intraperitoneal , Intranasal, intestinal, topical, sublingual or rectal administration.

본 발명의 약학적 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화 할 수 있다. 제형화할 경우에는 하나 이상의 완충제(예를 들어, 식염수 또는 PBS), 항산화제, 정균제, 킬레이트화제(예를 들어, EDTA 또는 글루타치온), 충진제, 증량제, 결합제, 아쥬반트(예를 들어, 알루미늄 하이드록사이드), 현탁제, 농후제 습윤제, 붕해제 또는 계면활성제, 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may be formulated into a preparation for oral or parenteral administration according to the route of administration as described above. When formulated, one or more buffers (e.g. saline or PBS), antioxidants, bacteriostatic agents, chelating agents (e.g. EDTA or glutathione), fillers, extenders, binders, adjuvants (e.g. aluminum hydroxide) Side), suspending agents, thickening humectants, disintegrants or surfactants, diluents or excipients.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 또는 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분(옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분 등 포함), 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose), 덱스트로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 말티톨, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 예컨대, 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다. Solid form preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, solutions, gels, syrups, slurries, suspensions, or capsules, and the like may include at least one excipient in the pharmaceutical composition of the present invention. For example, starch (including corn starch, wheat starch, rice starch, potato starch, etc.), calcium carbonate, sucrose, lactose, dextrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol maltitol, It can be prepared by mixing cellulose, methyl cellulose, sodium carboxymethyl cellulose and hydroxypropylmethyl-cellulose or gelatin. For example, tablets or dragees can be obtained by combining the active ingredients with solid excipients and then grinding them, adding suitable auxiliaries and processing them into a granule mixture.

단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물 또는 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 또는 보존제 등이 포함될 수 있다.In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium styrate talc are also used. Oral liquid preparations include suspensions, solutions, emulsions, or syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, or preservatives, in addition to commonly used simple diluents, water or liquid paraffin. .

또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있으며, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.In addition, in some cases, crosslinked polyvinylpyrrolidone, agar, alginic acid or sodium alginate may be added as a disintegrant, and may further include anti-coagulants, lubricants, wetting agents, fragrances, emulsifiers, and preservatives. .

비경구적으로 투여하는 경우 본 발명의 약학적 조성물은 적합한 비경구용 담체와 함께 주사제, 경피 투여제 및 비강 흡입제의 형태로 당 업계에 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있다. 상기 주사제의 경우에는 반드시 멸균되어야 하며 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염으로부터 보호되어야 한다. 주사제의 경우 적합한 담체의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 이들의 혼합물 및/또는 식물유를 포함하는 용매 또는 분산매질일 수 있다. 보다 바람직하게는, 적합한 담체로는 행크스 용액, 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS (phosphate buffered saline) 또는 주사용 멸균수, 10% 에탄올, 40% 프로필렌 글리콜 및 5% 덱스트로즈와 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 상기 주사제를 미생물 오염으로부터 보호하기 위해서는 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르빈산, 티메로살 등과 같은 다양한 항균제 및 항진균제를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 주사제는 대부분의 경우 당 또는 나트륨 클로라이드와 같은 등장화제를 추가로 포함할 수 있다.When administered parenterally, the pharmaceutical compositions of the present invention may be formulated according to methods known in the art in the form of injections, transdermal and nasal inhalants with suitable parenteral carriers. Such injections must be sterile and protected from contamination of microorganisms such as bacteria and fungi. Examples of suitable carriers for injections include, but are not limited to, solvents or dispersion media comprising water, ethanol, polyols (e.g., glycerol, propylene glycol and liquid polyethylene glycols, etc.), mixtures thereof and / or vegetable oils Can be. More preferably, suitable carriers include Hanks solution, Ringer's solution, phosphate buffered saline (PBS) containing triethanol amine or sterile water for injection, 10% ethanol, 40% propylene glycol and 5% dextrose Etc. can be used. In order to protect the injection from microbial contamination, it may further include various antibacterial and antifungal agents such as parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, thimerosal, and the like. In addition, the injection may in most cases further comprise an isotonic agent, such as sugar or sodium chloride.

경피 투여제의 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태가 포함된다. 상기에서 ‘경피 투여’는 약학적 조성물을 국소적으로 피부에 도포하여 약학적 조성물에 함유된 유효한 양의 활성성분이 피부 내로 전달되는 것을 의미한다. In the case of transdermal administrations, ointments, creams, lotions, gels, external preparations, pasta preparations, linen preparations, air rolls and the like are included. As used herein, "transdermal administration" means that the pharmaceutical composition is applied to the skin topically so that an effective amount of the active ingredient contained in the pharmaceutical composition is delivered into the skin.

흡입 투여제의 경우, 본 발명의 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 적합한 추진제, 예를 들면, 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체를 사용하여, 가압 팩 또는 연무기로부터 에어로졸 스프레이 형태로 편리하게 전달할 수 있다. 가압 에어로졸의 경우, 투약 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브를 제공하여 결정할 수 있다. 예를 들면, 흡입기 또는 취입기에 사용되는 젤라틴 캡슐 및 카트리지는 화합물, 및 락토즈 또는 전분과 같은 적합한 분말 기제의 분말 혼합물을 함유하도록 제형화할 수 있다. 비경구 투여용 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour)에 기재되어 있다.For inhaled dosages, the red bean extract or red bean derived peptide of the invention is pressurized using a suitable propellant such as dichlorofluoromethane, trichlorofluoromethane, dichlorotetrafluoroethane, carbon dioxide or other suitable gas. It can be conveniently delivered in aerosol spray form from a pack or nebulizer. In the case of a pressurized aerosol, the dosage unit can be determined by providing a valve to deliver a metered amount. For example, gelatin capsules and cartridges used for inhalers or blowers can be formulated to contain a mixture of the compound and a suitable powder base such as lactose or starch. Formulations for parenteral administration are described in Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour, a prescription generally known in all pharmaceutical chemistries.

본 발명의 근육 손상 예방 및 치료용 약학적 조성물은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효량으로 포함할 때 바람직한 근육 손상 예방 및 치료 효과를 제공할 수 있다. 본 명세서에서, '유효량'이라 함은 음성 대조군에 비해 그 이상의 반응을 나타내는 양을 말하며 바람직하게는 손상된 근육을 회복 및 재생시키기에 충분한 양을 말한다. 본 발명의 약학적 조성물에 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드가 0.001 내지 99.99% 포함될 수 있으며, 잔량은 약학적으로 허용 가능한 담체가 차지할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드의 유효량은 조성물이 제품화되는 형태 등에 따라 달라질 것이다.The pharmaceutical composition for preventing and treating muscle damage of the present invention may provide a desirable muscle damage preventing and treating effect when an effective amount of red bean extract or red bean-derived peptide is included. As used herein, the term 'effective amount' refers to an amount that exhibits a higher response than a negative control, and preferably an amount sufficient to recover and regenerate damaged muscle. The pharmaceutical composition of the present invention may contain 0.001 to 99.99% of red beans extract or red beans derived peptides, and the remaining amount may be occupied by a pharmaceutically acceptable carrier. The effective amount of the red bean extract or red bean derived peptide contained in the pharmaceutical composition of the present invention will vary depending on the form of the composition and the like.

보다 바람직하게는 본 발명에 따른 조성물 내 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드의 용량은 0.001 % 내지 50 %의 농도로 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. More preferably, the dose of the red bean extract or the red bean-derived peptide in the composition according to the present invention may be included at a concentration of 0.001% to 50%, but is not limited thereto.

이때, 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드가 상기 농도 범위 미만인 경우, 근육 손상 예방 또는 치료 효과를 발휘하기 어려운 문제점이 있고, 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드가 상기 농도 범위를 초과하는 경우, 세포독성을 포함한 독성의 우려사항이 있을 수 있다.In this case, when the red bean extract or the red bean-derived peptide is less than the concentration range, there is a problem that it is difficult to exert the effect of preventing or treating muscle damage, and when the red bean extract or the red bean-derived peptide exceeds the concentration range, the toxicity including cytotoxicity There may be concerns.

본 발명에 따른 근육 손상 예방 또는 치료용 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서는 1일 0.0001 내지 2,000 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 2,000 mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수회 나누어서 투여할 수도 있다. 다만, 상기 투여량에 의해서 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여 방법에 특별히 제한되지 아니한다.Preferred dosages of the pharmaceutical composition for preventing or treating muscle injury according to the present invention vary depending on the condition, body weight, degree of disease, drug form, route of administration and duration of the patient, and may be appropriately selected by those skilled in the art. However, for the desired effect, it may be administered at 0.0001 to 2,000 mg / kg, preferably at 0.001 to 2,000 mg / kg. Administration may be administered once a day or may be divided several times. However, the scope of the present invention is not limited by the above dosage. The pharmaceutical composition according to the present invention is not particularly limited to its formulation, route of administration and method of administration as long as the effect of the present invention is shown.

본 발명에 따른 근육 손상 예방 또는 치료용 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유 동물에 다양한 경로로 투여할 수 있다. 투여의 모든 방식은 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해서 투여할 수 있다.The pharmaceutical composition for preventing or treating muscle damage according to the present invention can be administered to mammals such as mice, mice, livestock, humans, etc. by various routes. All modes of administration can be administered, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dural or intracerebroventricular injection.

본 발명의 약학적 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 또는 생물학적 반응조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy or biological response modifiers.

본 명세서에서 '치료'란 치료되는 개체 또는 세포의 자연적 과정을 변경시키려는 임상적 시술을 의미하며, 임상적 병리의 예방을 위해서도 수행될 수 있다. 치료의 바람직한 효과는 질병의 발생 또는 재발 억제, 증상의 완화, 질병의 임의의 직접 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 질병 진행 속도의 감소, 질병 상태의 개선, 호전, 완화 또는 개선된 예후 등을 포함한다. 또한 용어 '예방'은 질병의 발병을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.As used herein, "treatment" refers to a clinical procedure to alter the natural process of the individual or cell being treated, and may also be performed for the prevention of clinical pathology. Desirable effects of treatment include: inhibiting the occurrence or recurrence of the disease, alleviating symptoms, reducing any direct or indirect pathological consequences of the disease, decreasing the rate of disease progression, improving the disease state, improving, alleviating or improving the prognosis, and the like. Include. The term 'prevention' also means any action that inhibits the onset or delays the progression of a disease.

본 발명의 약학적 조성물은 또한 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 외용제의 제형으로 제공할 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may also be provided in a formulation of an external preparation comprising red beans extract or red beans derived peptide as an active ingredient.

본 발명의 약학적 조성물을 피부외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 유화제, 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 활성제, 친유성 활성제 또는 지질 소낭 등 피부 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.When the pharmaceutical composition of the present invention is used as an external preparation for skin, it is additionally used for fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickening and gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, fragrances, interfaces. Skin such as active agents, water, ionic emulsifiers, nonionic emulsifiers, fillers, metal ion sequestrants, chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic active agents, lipophilic active agents or lipid vesicles It may contain adjuvants commonly used in the field of dermatology, such as any other ingredients commonly used in external preparations. The ingredients may also be introduced in amounts generally used in the field of dermatology.

본 발명의 약학적 조성물이 피부 외용제로 제공될 경우, 이에 제한되는 것은 아니나, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제 등의 제형일 수 있다.When the pharmaceutical composition of the present invention is provided as an external preparation for skin, it may be a formulation such as, but not limited to, ointment, patch, gel, cream or spray.

또한, 본 발명은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 근육 손상 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a food composition for preventing or improving muscle damage comprising a red bean extract or a red bean-derived peptide as an active ingredient.

상기 식품용 조성물을 제조하기 위한 팥 추출물에 대하여서는 전술한 바와 같다. 본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food), 식품 첨가제(food additives) 및 사료 등의 모든 형태를 포함하며, 인간 또는 가축을 비롯한 동물을 취식대상으로 한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당 업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.The red bean extract for preparing the food composition is as described above. The food composition of the present invention includes all forms such as functional food, nutritional supplement, health food, food additives and feed, and includes animals including humans or livestock. It is for eating. Food compositions of this type can be prepared in various forms according to conventional methods known in the art.

상기 유형의 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다. 일반 식품으로는 이에 한정되지 않지만 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지 콘비이프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게이트, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치이즈 등), 식용식물 유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 상기 팥 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 영양보조제로는 이에 한정되지 않지만 캡슐, 타블렛, 환 등에 팥 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 건강기능식품으로는 이에 한정되지 않지만 예를 들면, 상기 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드 자체를 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용(건강음료)할 수 있도록 액상화, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 상기 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다. 또한, 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 손상 근육에 대하여 회복 효과가 있다고 알려진 공지의 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.Food compositions of this type can be prepared in various forms according to conventional methods known in the art. General foods include, but are not limited to, beverages (including alcoholic beverages), fruits and processed foods (e.g. canned fruit, canned foods, jams, marmalade, etc.), fish, meat and processed foods (e.g. hams, sausages) Cornbeans, etc.), breads and noodles (e.g. udon, soba noodles, ramen, spagate, macaroni, etc.), fruit juices, various drinks, cookies, malts, dairy products (e.g. butter, cheese), edible vegetable oils, margarine It may be prepared by adding the red bean extract to vegetable protein, retort food, frozen food, various seasonings (eg, miso, soy sauce, sauce, etc.). In addition, as a nutritional supplement is not limited to this can be prepared by adding the red bean extract to capsules, tablets, pills. In addition, as a health functional food, for example, the red bean extract or the red bean-derived peptide itself is prepared in the form of tea, juice and drink to be liquefied, granulated, encapsulated and powdered for drinking (health drink). It can be consumed by becoming angry. In addition, in order to use the red bean extract or the red bean-derived peptide in the form of a food additive, it may be prepared and used in powder or concentrate form. In addition, the red bean extract or the red bean-derived peptide may be mixed with a known active ingredient known to have a restorative effect on the injured muscle, and thus prepared in the form of a composition.

일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 상기 팥 추출물은 원료 100 중량부에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가할 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 또한 본 발명은 천연물로부터의 분획물을 이용하는 점에서 안전성 면에서 문제가 없으므로 상기 범위 이상의 양으로도 사용할 수 있다.In general, the red bean extract may be added in an amount of 15 parts by weight or less, preferably 10 parts by weight or less based on 100 parts by weight of the raw material in the manufacture of food or beverage. However, in the case of long-term intake for health and hygiene or for health control, the amount may be below the above range, and the present invention has no problem in terms of safety in terms of using fractions from natural products. The above amount can also be used.

본 발명에 따른 식품 중 음료는 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명에 따른 음료 100 mL당 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g일 수 있다.The beverage in the food according to the present invention may contain various flavors or natural carbohydrates, etc. as additional ingredients, as in general drinks. The natural carbohydrates described above may be glucose, monosaccharides such as fructose, maltose, disaccharides such as sucrose and polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin, sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, erythritol. As the sweetener, natural sweeteners such as tautin and stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame, and the like can be used. The ratio of the natural carbohydrate may be about 0.01 to 0.04 g, preferably about 0.02 to 0.03 g per 100 mL of the beverage according to the present invention.

상기 외에 본 발명에 따른 근육 손상 예방 또는 개선용 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산, 펙트산의 염, 알긴산, 알긴산의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 또는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강식품은 천연 과일주스, 과일주스 음료 또는 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In addition to the above, the food for preventing or improving muscle damage according to the present invention includes various nutrients, vitamins, electrolytes, flavoring agents, coloring agents, pectic acid, salts of pectic acid, alginic acid, salts of alginic acid, organic acids, protective colloid thickeners, and pH adjusting agents. , Stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols or carbonating agents and the like. In addition, the health food of the present invention may contain a flesh for preparing natural fruit juice, fruit juice beverage or vegetable beverage. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not critical but is usually selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.

또한, 본 발명은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 근육 손상 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a cosmetic composition for preventing or improving muscle damage comprising a red bean extract or a red bean-derived peptide as an active ingredient.

상기 화장료 조성물을 제조하기 위한 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드에 대하여서는 전술한 바와 같다. 본 발명의 화장료 조성물은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 함유하며 피부학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 기초 화장품 조성물(화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 보디오일), 색조 화장품 조성물(화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 제품 조성물(샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤) 및 비누 등의 형태로 제조될 수 있다.The red bean extract or red bean derived peptide for preparing the cosmetic composition is as described above. The cosmetic composition of the present invention contains an adzuki bean extract or an adzuki bean-derived peptide as an active ingredient, and with a dermatologically acceptable excipient, a basic cosmetic composition (washing agent such as cosmetic water, cream, essence, cleansing foam and cleansing water, pack, body oil) , Color cosmetic compositions (foundation, lipstick, mascara, makeup base), hair product compositions (shampoos, rinses, hair conditioners, hair gels), soaps and the like.

상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화장료 조성물로 세안제 및 비누를 제조하는 경우에는 통상의 세안제 및 비누 베이스에 상기 팥 추출물을 첨가하여 용이하게 제조할 수 있다. 크림을 제조하는 경우에는 일반적인 수중유적형(O/W)의 크림베이스에 팥 추출물 또는 이의 염을 첨가하여 제조할 수 있다. 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등과 물성개선을 목적으로 한 단백질, 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연소재를 추가로 첨가할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 팥 추출물의 함량은 이에 한정되지 않지만 전체 조성물 총중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%인 것이 바람직하고, 0.01 내지 5 중량%인 것이 더욱 바람직하다. 상기 함량이 0.001 중량% 미만에서는 목적하는 손상 근육 치료/개선 효과를 기대할 수 없고, 10 중량% 초과에서는 안전성 또는 제형상의 제조에 어려움이 있을 수 있다.The excipients include, but are not limited to, emollients, skin penetration enhancers, colorants, fragrances, emulsifiers, thickeners and solvents. In addition, fragrances, pigments, fungicides, antioxidants, preservatives and humectants may be further included, and may include thickeners, inorganic salts, synthetic polymer materials and the like for the purpose of improving the properties. For example, in the case of preparing the face wash and the soap with the cosmetic composition of the present invention, it can be easily prepared by adding the red bean extract to a conventional face wash and soap base. When the cream is prepared, it can be prepared by adding a red bean extract or a salt thereof to a cream base of a general oil-in-water type (O / W). To this, synthetic or natural materials such as proteins, minerals, vitamins, etc., for the purpose of improving physical properties, such as flavors, chelating agents, pigments, antioxidants, and preservatives, may be added. The content of the red bean extract contained in the cosmetic composition of the present invention is not limited thereto, but is preferably 0.001 to 10% by weight, and more preferably 0.01 to 5% by weight based on the total weight of the composition. If the content is less than 0.001% by weight, the desired damage muscle treatment / improvement effect cannot be expected, and if it is more than 10% by weight, there may be difficulty in preparing safety or formulation.

또한, 본 발명은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 손상 근육의 재생 촉진용 약학적 조성물을 제공한다.The present invention also provides a pharmaceutical composition for promoting regeneration of injured muscle comprising red bean extract or red bean derived peptide as an active ingredient.

상기 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드의 제조 방법 및 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드에 대하여서는 전술한 바와 같으며, 본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 약학적 조성물의 제형화, 투여 경로와 투여량 등의 투여 방법 등에 대하여서도 전술한 바와 같다. The method for preparing the red bean extract or the red bean-derived peptide and the red bean extract or the red bean-derived peptide are as described above, and may be included in the pharmaceutical composition according to the present invention. The method of administration such as the amount is as described above.

본 발명에 따른 상기 약학적 조성물은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 조성물일 수도 있고, 유효성분으로서 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드로 구성되는 조성물일 수도 있으며, 또는 유효성분으로서 팥 추출물이 필수적으로 구성되는 조성물일 수도 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention may be a composition comprising an adzuki bean extract or an adzuki bean-derived peptide as an active ingredient, or may be a composition consisting of an adzuki bean extract or an adzuki bean-derived peptide as an active ingredient, or an adzuki bean extract as an active ingredient The composition may consist essentially of.

또한, 본 발명은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 손상 근육의 재생 촉진용 식품 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a food composition for promoting regeneration of damaged muscle comprising red bean extract or red bean derived peptide as an active ingredient.

상기 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드의 제조 방법 및 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드에 대하여서는 전술한 바와 같으며, 상기 식품용 조성물의 예시 및 함유량에 대하여서도 전술한 바와 같다.The method of preparing the red bean extract or the red bean-derived peptide and the red bean extract or the red bean-derived peptide are the same as described above, and the same as the above-described examples and contents of the food composition.

또한, 본 발명은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 손상 근육의 재생 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a cosmetic composition for promoting regeneration of damaged muscle comprising red bean extract or red bean derived peptide as an active ingredient.

상기 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드의 제조 방법 및 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드에 대하여서는 전술한 바와 같으며, 상기 화장료 조성물의 예시 및 함유량에 대하여서도 전술한 바와 같다.The method for preparing the red bean extract or the red bean-derived peptide and the red bean extract or the red bean-derived peptide are the same as described above, and the same as the above-described examples and contents of the cosmetic composition.

따라서, 본 발명은 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드가 손상된 근육 세포에 미치는 영향을 확인한 것으로, 상기 팥 추출물 또는 팥 유래 펩타이드는 투여시 손상된 근육에서 근육 위성세포의 활성화를 촉진시켜 근육의 회복을 촉진시키는 효과를 보였으므로 근육 손상 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 예방 또는 개선용 식품 조성물, 화장료 조성물과 손상 근육의 재생 촉진용 약학적 조성물, 식품 조성물 또는 화장료 조성물로 유용하게 활용될 수 있다.Accordingly, the present invention has been confirmed that the effect of red beans extract or red beans derived peptides on the damaged muscle cells, the red beans extract or red beans derived peptides promote the recovery of muscles by promoting the activation of muscle satellite cells in the damaged muscles during administration It can be usefully used as a pharmaceutical composition for preventing or treating muscle damage, a food composition for preventing or improving, a cosmetic composition and a pharmaceutical composition for promoting regeneration of damaged muscle, a food composition or a cosmetic composition.

도 1은 마우스의 뒷다리에서 분리한 근육 위성세포에서 팥 펩타이드가 Pax7 mRNA 발현에 미치는 영향을 확인한 결과이다.
도 2는 팥 50% 에탄올 추출물(300 mg/kg 또는 600 mg/kg의 농도) 처리에 따른 근육 손상을 야기한 장딴지 근육 조직의 변화를 확인한 결과이다.
도 3은 프로타멕스가 처리된 팥 추출물(300 mg/kg 또는 600 mg/kg의 농도) 처리에 따른 근육 손상을 야기한 장딴지 근육 조직의 변화를 확인한 결과이다.
1 is a result confirming the effect of red beans peptides on Pax7 mRNA expression in muscle satellite cells isolated from the hind legs of the mouse.
Figure 2 is a result confirming the change in the calf muscle tissue causing muscle damage according to the treatment of red bean 50% ethanol extract (300 mg / kg or 600 mg / kg concentration).
Figure 3 is a result of confirming the change in the calf muscle tissue causing muscle damage according to the treatment of red bean extract (300 mg / kg or 600 mg / kg concentration) treated with protamex.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited to the following examples.

실시예 1 : 팥 추출물의 제조Example 1 Preparation of Red Bean Extract

<1-1> 메탄올 추출물<1-1> methanol extract

건조된 팥을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 팥 100 g을 100% 메탄올 1 L에 넣고 3시간 상온에서 추출하였다. 추출된 시료는 와트만(Whatman) 2번 여과지로 감압여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거한 후 팥 메탄올 추출물을 얻었다.The dried red beans were ground with a mixer, and then 100 g of the ground red beans were placed in 1 L of 100% methanol and extracted at room temperature for 3 hours. The extracted sample was filtered under reduced pressure with Whatman No. 2 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component to obtain a red bean methanol extract.

<1-2> 에탄올 추출물<1-2> ethanol extract

용매로 100% 에탄올, 70% 에탄올, 50% 에탄올, 30% 에탄올, 10% 에탄올을 사용하였으며, 80℃에서 추출하였다는 점을 제외하고는 상기 실시예 1-1)과 동일한 방법으로 수행하여 팥 에탄올 추출물을 얻었다. 100% ethanol, 70% ethanol, 50% ethanol, 30% ethanol, 10% ethanol was used as the solvent, except that the extract was carried out at 80 ° C in the same manner as in Example 1-1) Ethanol extract was obtained.

<1-3> 에틸아세테이트 추출물<1-3> ethyl acetate extract

용매로 100% 에틸아세테이트를 사용하였다는 점을 제외하고는 상기 실시예 1-1)과 동일한 방법으로 수행하여 팥 에틸아세테이트 추출물을 얻었다.Red bean ethyl acetate extract was obtained in the same manner as in Example 1-1, except that 100% ethyl acetate was used as the solvent.

<1-4> 헥산 추출물<1-4> Hexane Extract

용매로 100% 헥산을 사용하였다는 점을 제외하고는 상기 실시예 1-1)과 동일한 방법으로 수행하여 팥 헥산 추출물을 얻었다. Except for using 100% hexane as a solvent was carried out in the same manner as in Example 1-1) to obtain a red bean hexane extract.

<1-5> 열수 추출물<1-5> hydrothermal extract

용매로 물을 사용하였다는 점을 제외하고는 상기 실시예 1-2)와 동일한 방법으로 수행하여 팥 열수 추출물을 얻었다. Except for using water as a solvent was carried out in the same manner as in Example 1-2) to obtain a red bean hot water extract.

<1-6> 초고압 추출물<1-6> ultra high pressure extract

건조된 팥을 믹서로 분쇄한 다음, 18% 에탄올 76 mL을 폴리에틸렌(polyethylene) 팩에 넣고 밀봉한 후 초고압 추출장치(Frescal MFP-7000; Mitsubishi Heavy Industries, Tokyo, Japan)를 이용하여 추출하였다. 초고압 추출 조건은 추출압력이 320 MPa, 추출시간을 5 분으로 설정하였다. 추출된 시료는 와트만 2번 여과지로 여과하고, 여과된 추출액을 진공 회전 농축기로 농축하여 용매성분을 제거함으로써 팥 초고압 추출물을 수득하였다.The dried red beans were ground with a mixer, and then, 76 mL of 18% ethanol was put in a polyethylene pack, sealed, and extracted using an ultrahigh pressure extractor (Frescal MFP-7000; Mitsubishi Heavy Industries, Tokyo, Japan). Ultra-high pressure extraction conditions were set to 320 MPa extraction time, 5 minutes extraction time. The extracted sample was filtered using Whatman No. 2 filter paper, and the filtered extract was concentrated with a vacuum rotary concentrator to remove the solvent component, thereby obtaining a red bean ultra high pressure extract.

<1-7> 초임계 추출물<1-7> supercritical extract

건조된 팥을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 팥 시료 1 g을 시료 카트리지에 충전하고 초임계 장치(SFX 3560, Isco Inc., Lincoln, NE, USA)를 이용하여 추출하였다. 초임계 유체 추출 조건은 추출 압력이 40 MPa, 추출 온도는 50℃, 초임계 이산화탄소의 유속은 60 mL/분, 추출 시간은 60 분으로 설정하고 추출을 진행하였다. 초임계 추출이 완료되면, 추출 장치의 압력을 낮춰 초임계 유체 상태를 해제하여 팥 초임계 추출물을 수득하였다.The dried red beans were ground with a mixer, and then 1 g of the ground red beans samples were filled into a sample cartridge and extracted using a supercritical device (SFX 3560, Isco Inc., Lincoln, NE, USA). Supercritical fluid extraction conditions were set to 40 MPa extraction pressure, 50 ℃ extraction temperature, 60 mL / min of the flow rate of supercritical carbon dioxide, extraction time was set to 60 minutes. When the supercritical extraction was completed, the pressure of the extraction device was lowered to release the supercritical fluid state to obtain a red bean supercritical extract.

<1-8> 아임계 추출물<1-8> subcritical extract

분쇄한 팥 50 g을 1 L 물과 함께 아임계 추출장치(Biovan, Gyeonggi, Korea)의 아임계수 반응기에 넣고 밀폐하였다. 밀폐 후, 반응기의 온도를 200℃로 압력은 20 MPa로 상승시켰으며, 반응기의 온도가 200℃에 도달하면 상기 온도를 20분간 유지하여 추출하였다. 20분 후 추출물의 냉각수가 공급되는 저장탱크로 이송하여 30℃까지 급속 냉각시킨 후, 부유 잔사를 분리하기 위해 3,600 rpm으로 30분 동안 원심분리하여 상등액만 취하였다. 동결건조기(ilShin Lab Co. Ltd., Seoul, Korea)를 이용하여 물을 전부 제거함으로써 팥 아임계 추출물을 제조하였다.50 g of crushed red beans were placed in a subcritical water reactor of a subcritical extraction device (Biovan, Gyeonggi, Korea) together with 1 L of water. After sealing, the temperature of the reactor was increased to 200 ° C., and the pressure was increased to 20 MPa. When the temperature of the reactor reached 200 ° C., the temperature was maintained for 20 minutes and extracted. After 20 minutes, the extract was transferred to a storage tank supplied with cooling water and rapidly cooled to 30 ° C., and the supernatant was taken by centrifugation at 3,600 rpm for 30 minutes to separate the floating residue. Red beans subcritical extract was prepared by removing all water using a lyophilizer (ilShin Lab Co. Ltd., Seoul, Korea).

<1-9> 단백질 가수분해 효소가 처리된 추출물<1-9> Extract Treated with Proteinase

건조된 팥을 믹서로 분쇄한 다음, 분쇄한 팥 100 g을 1 L 물에 넣고 80℃에서 4시간 추출하였다. 여과하기 전, 0.1% 알카라아제(Alcalase), 0.1% 플라보르자임(Flavourzyme), 0.1% 뉴트라아제(Neutrase), 0.1% 프로타멕스(Protamex; Novozymes, Bagsvaerd, Denmark) 및 0.1% 단백질 가수분해효소-NP (Protease-NP; Bioland, Asan, Korea) 각각을 pH 6.5, 40℃의 조건하에 팥 열수 추출물과 6시간 반응시켰다. 6시간 후, 90℃에서 15분간 효소를 비활성화시켰으며, 여과 후 회전 농축기(CEP-20S; Okawara Co., Tokyo, Japan)로 농축하였다. 그런 후 70% 에탄올을 넣고 45℃에서 12시간 추출하였다. 추출한 후, 여과하여 회전 농축기(CEP-20S; Okawara Co.)로 농축하였으며, 단백질 가수분해 효소가 처리된 열수 추출물과 혼합하였다. 혼합물을 분무 건조기(MSD-60-N; Niro Korea, Chungcheongnam-do, Korea)로 완전히 용매를 제거하여, 단백질 가수분해 효소가 처리된 팥 추출물을 제작하였다.The dried red beans were ground with a mixer, and then 100 g of the ground red beans were placed in 1 L of water and extracted at 80 ° C. for 4 hours. Prior to filtration, 0.1% Alcalase, 0.1% Flavorzyme, 0.1% Neutrase, 0.1% Protamex (Novozymes, Bagsvaerd, Denmark) and 0.1% proteolysis Each of enzyme-NP (Protease-NP; Bioland, Asan, Korea) was reacted with red bean hot water extract for 6 hours under conditions of pH 6.5 and 40 ° C. After 6 hours, the enzyme was inactivated at 90 ° C. for 15 minutes, and after filtration, concentrated with a rotary concentrator (CEP-20S; Okawara Co., Tokyo, Japan). Then 70% ethanol was added and extracted for 12 hours at 45 ℃. After extraction, the resultant was filtered and concentrated by a rotary concentrator (CEP-20S; Okawara Co.), and mixed with hydrothermal extract treated with proteolytic enzyme. The mixture was completely removed with a spray dryer (MSD-60-N; Niro Korea, Chungcheongnam-do, Korea) to prepare a red bean extract treated with proteolytic enzymes.

실시예 2 : 팥 유래 단백질 및 펩타이드의 분리Example 2 Isolation of Red Bean-Derived Proteins and Peptides

<2-1> 팥 유래 단백질의 분리<2-1> Isolation of Red Bean-Derived Protein

건조된 팥을 분쇄한 다음, 분쇄한 팥 시료 1 kg을 1 L 헥산에 넣고 상온에서 4시간 교반하면서 추출하였다. 헥산 추출물을 제거한 뒤, 남은 박에 물을 넣고 pH 9, 25℃에서 30분간 방치하였다. 6,000 rpm에서 30 분간 원심분리하여 상등액 취하고, 상등액을 pH 4.5, 25℃의 조건에서 30 분간 다시 방치하였다. 6,000 rpm에서 30분간 원심분리하여 침전된 단백질을 수득하였으며, 침전된 단백질을 물에 녹이고 중성화과정을 거쳐 동결건조기(ilShin Lab Co. Ltd., Seoul, Korea)를 이용하여 물을 전부 제거함으로써 분리한 팥 단백질을 수득하였다.After the dried red beans were ground, 1 kg of the ground red beans sample was placed in 1 L hexane and extracted with stirring at room temperature for 4 hours. After removing the hexane extract, water was added to the remaining gourd and left for 30 minutes at pH 9, 25 ℃. The supernatant was collected by centrifugation at 6,000 rpm for 30 minutes, and the supernatant was left to stand again for 30 minutes at a pH of 4.5 and 25 ° C. The precipitated protein was obtained by centrifugation at 6,000 rpm for 30 minutes, and the precipitated protein was dissolved in water and neutralized to remove all water by lyophilizer (ilShin Lab Co. Ltd., Seoul, Korea). Red bean protein was obtained.

<2-2> 알카라아제(Alcalase) 처리에 따른 팥 펩타이드 제조<2-2> Preparation of Red Bean Peptides by Alcalase Treatment

실시예 <2-1>에서 수득한 팥 단백질에 단백질 분해효소인 1% 알카라아제(Novozymes)를 가하고 50℃에서 6시간 동안 효소반응을 시켰다. 6 시간 후에, 90℃에서 20 분간 효소를 불활성화시키고 와트만 2번 여과지로 여과하여 침전물을 제거하였다. 여과된 액체를 동결건조기(ilShin Lab Co. Ltd., Seoul, Korea)를 이용하여 물을 전부 제거함으로써 알카라아제 처리에 의한 팥 펩타이드를 수득하였다.Proteolytic enzyme 1% alkalase (Novozymes) was added to the red bean protein obtained in Example <2-1> and subjected to enzymatic reaction at 50 ° C for 6 hours. After 6 hours, the enzyme was inactivated at 90 ° C. for 20 minutes and filtered through Whatman 2 filter paper to remove precipitate. The filtered liquid was removed by using a lyophilizer (ilShin Lab Co. Ltd., Seoul, Korea) to remove all of the water to obtain adzuki beans peptides by alkalase treatment.

<2-3> 플라보르자임(Flavourzyme) 처리에 따른 팥 펩타이드 제조<2-3> Preparation of Red Bean Peptides by Flavorzyme Treatment

상기 실시예 <2-2>에서와 동일한 방법으로 알카라아제 대신 플라보르자임 (Novozymes)을 처리하여 플라보르지임 처리에 의한 팥 펩타이드를 수득하였다.Flavorzyme-treated red bean peptide was obtained by treating flavozyme instead of alkalase in the same manner as in Example <2-2>.

<2-4> 뉴트라제(Neutrase) 처리에 따른 팥 펩타이드 제조<2-4> Preparation of Red Bean Peptides by Neutrase Treatment

상기 실시예 <2-2>에서와 동일한 방법으로 알카라아제 대신 뉴트라제 (Novozymes)을 처리하여 뉴트라제 처리에 의한 팥 펩타이드를 수득하였다.In the same manner as in Example <2-2>, by treating neutrases (Novozymes) instead of alkalase to obtain a red bean peptide by neutrases treatment.

<2-5> 프로타멕스(Protamex) 처리에 따른 팥 펩타이드 제조<2-5> Preparation of Red Bean Peptides by Protamex Treatment

상기 실시예 <2-2>에서와 동일한 방법으로 알카라아제 대신 프로타멕스 (Novozymes)를 처리하여 프로타멕스 처리에 의한 팥 펩타이드를 수득하였다.In the same manner as in Example <2-2>, instead of the alkalase was treated with Procamex (Novozymes) to obtain a red bean peptide by the protamex treatment.

<2-6> 프로테아제-NP(Protease-NP) 처리에 따른 팥 펩타이드 제조<2-6> Preparation of Red Bean Peptides by Protease-NP Treatment

상기 실시예 <2-2>에서와 동일한 방법으로 알카라아제 대신 프로테아제-NP (Bioland, Asan, Korea)를 처리하여 프로테아제-NP 처리에 의한 팥 펩타이드를 수득하였다.Protease-NP (Bioland, Asan, Korea) instead of alkalase was treated in the same manner as in Example <2-2> to obtain adzuki beans peptides by protease-NP treatment.

실시예 3 : 팥 펩타이드의 근육 위성세포 Pax7의 활성 평가Example 3 Evaluation of Activity of Muscle Satellite Cell Pax7 of Red Bean Peptides

생후 7주령의 수컷쥐(C57BL/6N; Daehan Biolink, Chungcheongbukdo, Korea)를 사용하여 뒷다리로부터 근육 위성세포를 분리하였다. 실험동물을 325 mg/kg tribromoethanol (Sigma-aldrich, St Louis, MO, USA)을 복강 주사하여 마취 후 심채혈을 통해 희생을 하였다. 뒷다리에서 근육 조직을 적출한 뒤, 면도칼과 해부 가위를 이용하여 잘게 잘랐으며, 2.5 U/mL dispase II (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany), 2.5 U/mL collagenase B (Roche Diagnostics), 2.5 U/mL collagenase A (Roche Diagnostics) 효소를 조직에 넣고, 37℃ 조건에서 1시간 동안 작동시켜 근육 위성세포가 근육 조직에서 분리되게 하였다. 1시간 뒤, 현탁액을 70 μm cell strainer (Falcon, Corning, NY, USA)와 40 μm cell strainer (Falcon)을 이용하여 필터하였다. 모인 필터액을 33 g 조건에서 5분간 원심분리한 뒤, 상층액을 제거하였다. 세포를 20% fetal bovine serum (FBS; Gibco, Waltham, MA, USA), 2.5 ng/mL fibro growth factor (FGF; R&D systems, Minneapolis, MN, USA)로 이루어진 Ham’F-10 배지(Gibco)로 37℃, 5% CO2 조건에서 24시간 배양한 뒤, 배양액을 회수하여 collagen (Corning, Corning, NY, USA)이 코팅된 culture dish에서 다시 24시간 배양하였다.Muscle satellite cells were isolated from the hind limbs using 7 week old male rats (C57BL / 6N; Daehan Biolink, Chungcheongbukdo, Korea). Animals were sacrificed via cardiac blood after anesthesia by intraperitoneal injection of 325 mg / kg tribromoethanol (Sigma-aldrich, St Louis, MO, USA). Muscle tissue was removed from the hind limbs and chopped using a razor and dissection scissors, 2.5 U / mL dispase II (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany), 2.5 U / mL collagenase B (Roche Diagnostics), 2.5 U / mL Collagenase A (Roche Diagnostics) enzyme was added to the tissue and operated for 1 hour at 37 ° C. to allow the muscle satellite cells to be separated from the muscle tissue. After 1 hour, the suspension was filtered using a 70 μm cell strainer (Falcon, Corning, NY, USA) and a 40 μm cell strainer (Falcon). The collected filter liquid was centrifuged at 33 g for 5 minutes, and then the supernatant was removed. Cells were treated with Ham'F-10 medium (Gibco) consisting of 20% fetal bovine serum (FBS; Gibco, Waltham, Mass., USA), 2.5 ng / mL fibro growth factor (FGF; R & D systems, Minneapolis, MN, USA). After 24 hours of incubation at 37 ° C. and 5% CO 2 , the cultures were recovered and cultured again for 24 hours in a culture dish coated with collagen (Corning, Corning, NY, USA).

뒷다리에서 분리한 근육 위성세포를 6 well plate에 분주한 뒤, 37℃, 5% CO2조건에서 배지로 24시간 배양하였다. 실시예 2-5)에서 제조한 팥 펩타이드가 50 ug/mL 또는 100 ug/mL이 함유되어 있는 5% horse serum (HS; Gibco)로 이루어진 Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM; Gibco)배지로 교체하였다. 3일 뒤, TRIzol시약(Takara Bio. Inc., Otsu, Japan)을 사용하여 총 RNA를 분리하였다. 분리한 총 RNA는 나노드랍(NanoDrop 1000; Thermo Fisher Scientific Inc., MA, USA)을 이용하여 정량하였다. 정량된 16 μL의 RNA를 Reverse Transcriptase Premix (ELPIS-Biotech, Daejeon, Korea)와 PCR 기계(Gene Amp PCR System 2700; Applied Biosystems, Foster city, CA, USA)를 이용하여 42℃ 55분, 70℃ 15분의 조건에서 cDNA로 합성하였다. 16 μL의 생성된 cDNA 중 4 μL의 cDNA, 하기의 특정 프라이머(Bioneer, Daejeon, Korea) 그리고 PCR premix (ELPIS-Biotech)로 95℃에서 30초, 60℃에서 1분, 72℃에서 1분을 30번 반복하여 PCR을 수행하였으며, 사용된 프라이머는 하기 표 1에 나타냈다. Muscle satellite cells isolated from the hind limbs were dispensed into 6 well plates, and then cultured in medium at 37 ° C. and 5% CO 2 for 24 hours. The red bean peptide prepared in Example 2-5) was replaced with Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM; Gibco) medium consisting of 5% horse serum (HS; Gibco) containing 50 ug / mL or 100 ug / mL. After 3 days, total RNA was isolated using TRIzol reagent (Takara Bio. Inc., Otsu, Japan). Total RNA isolated was quantified using Nanodrop (NanoDrop 1000; Thermo Fisher Scientific Inc., MA, USA). Quantified 16 μL of RNA was subjected to Reverse Transcriptase Premix (ELPIS-Biotech, Daejeon, Korea) and PCR machine (Gene Amp PCR System 2700; Applied Biosystems, Foster city, CA, USA) It was synthesized by cDNA under the condition of minutes. Of 16 μL of cDNA generated, 4 μL of cDNA, the following specific primers (Bioneer, Daejeon, Korea) and PCR premix (ELPIS-Biotech) were used for 30 seconds at 95 ° C, 1 minute at 60 ° C, and 1 minute at 72 ° C. PCR was repeated 30 times, and the primers used are shown in Table 1 below.

유전자gene 서열번호SEQ ID NO: 염기서열Sequence Pax7Pax7 1One Forward primerForward primer 5'-ACTAGAATGGCTTGTATCTGTGGTT-3'5'-ACTAGAATGGCTTGTATCTGTGGTT-3 ' 22 Reverse primerReverse primer 5'-TTGAAGTTCCTGCTCCTAAAGTGTA-3'5'-TTGAAGTTCCTGCTCCTAAAGTGTA-3 ' β-Actinβ-Actin 33 Forward primerForward primer 5'-ACTGTTACTGAGCTGCGTTTTACAC-3'5'-ACTGTTACTGAGCTGCGTTTTACAC-3 ' 44 Reverse primerReverse primer 5'-GAGGGACTTCCTGTAACCACTTATT-3'5'-GAGGGACTTCCTGTAACCACTTATT-3 '

PCR 결과 증폭된 cDNA를 1.5% agarose gel로 전기영동하여 분리하였으며, G;BOX EF imaging system (Syngene, Cambridge, UK)을 이용하여 cDNA band를 확인하였으며, 그 결과를 도 1에 나타내었다.The amplified cDNA was isolated by electrophoresis with 1.5% agarose gel, and the cDNA band was identified using G; BOX EF imaging system (Syngene, Cambridge, UK). The results are shown in FIG. 1.

그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이 팥 펩타이드를 처리함에 따라 근육 위성세포에서 Pax7의 mRNA 발현이 증가함을 알 수 있었다. 이는 본 발명의 팥 펩타이드가 손상된 근육세포 내에서 근육전구세포 마커인 Pax7 mRNA 발현 증가를 통해 근육 위성세포의 활성을 촉진하는 능력이 우수하다는 것을 의미한다.As a result, as shown in Figure 1 it can be seen that the mRNA expression of Pax7 in the muscle satellite cells increases as the red bean peptide is treated. This means that the red bean peptide of the present invention has an excellent ability to promote muscle satellite cell activity through increased expression of Pax7 mRNA, a muscle precursor cell marker, in damaged muscle cells.

실시예 4 : 팥 에탄올 추출물의 손상된 근육 재생 활성 평가Example 4 Evaluation of Impaired Muscle Regeneration Activity of Red Bean Ethanol Extract

실험동물로 생후 7주된 수컷쥐(C57BL/6N; Young Bio, Chungcheongbuk-do, Korea)를 구입하여 실험을 진행하였다. 모든 동물의 사육은 연세실험동물연구센터(Yonsei Laboratory Animal Reaserch Center; YLARC, Seoul, Korea)에서 진행되었으며, 사육실 환경은 온도 23 ±2℃, 상대습도 55 ±10%로 유지시켰다. 실험 시작 전, 총 20마리의 쥐를 무작위로 1군당 5마리가 되도록 정상군, 근육 손상군, 팥 50% 에탄올 추출물 300 mg/kg 농도 투여군, 팥 50% 에탄올 추출물 600 mg/kg 농도 투여군으로 나누었다. 1 주일간 적응시킨 후, 325 mg/kg tribromoethanol (Sigma-aldrich)을 복강 주사하여 마취를 유도하였다. 마취 후, 근육 손상군과 팥 50% 에탄올 추출물 투여군에 속한 쥐의 오른쪽 뒷다리(hindlimb) 장딴지근육(gastrocnemius muscle)과 오른쪽 발바닥을 스킨 스테플러(skin stapler; Unidus, Chungcheongbuk-do, Korea)를 사용하여 스테이플러 심으로 근육을 손상시키고 오른쪽 뒷다리를 고정시켜 이 상태를 일주일 간 유지시켰다. 일주일 후, 장딴지근과 발바닥에 고정되어 있던 스테이플러 심을 제거하고 다시 일주일간 실시예 1-2)에서 제조한 팥 50% 에탄올 추출물을 300 mg/kg 또는 600 mg/kg의 농도로 매일 경구투여하여 근육 재생을 유도하였다. 이 때, 정상군과 근육 손상군은 팥 추출물 대신에 식염수를 경구투여하였다. 경구투여 기간이 끝난 후, 실험동물에 325 mg/kg tribromoethanol (Sigma-aldrich)을 복강 주사하여 마취 후 심채혈을 통해 안락사하였다. 심장이 멈춘 것을 확인한 후, 오른쪽 장딴지근육의 조직을 적출하였다. 적출한 오른쪽 장딴지근육의 조직 일부를 떼어 10% 포르말린(formalin)으로 고정시켜 파라핀 블록을 만들었다. 고정시킨 후, 조직학적인 측면에서 근육의 회복을 측정하기 위해 헤마톡실린&에오신(hematoxylin & eosin) 염색을 실시하였으며, 염색된 조직은 eXcope T500 카메라(DIXI Science, Daejeon, Korea)가 장착된 광화학현미경(CK40; Olymupus, Tokyo, Japan)으로 관찰하였다. As a test animal, a 7-week-old male rat (C57BL / 6N; Young Bio, Chungcheongbuk-do, Korea) was purchased and tested. All animals were raised at Yonsei Laboratory Animal Reaserch Center (YLARC, Seoul, Korea) and the environment was maintained at 23 ± 2 ℃ and 55 ± 10% relative humidity. Before starting the experiment, a total of 20 rats were randomly divided into the normal group, the muscle injury group, the red bean 50% ethanol extract 300 mg / kg concentration group, and the red bean 50% ethanol extract 600 mg / kg concentration group so as to have 5 rats per group. . After adaptation for 1 week, anesthesia was induced by intraperitoneal injection of 325 mg / kg tribromoethanol (Sigma-aldrich). After anesthesia, the right hindlimb gastrocnemius muscle and the right foot of the rat in the muscle injury group and the red bean 50% ethanol extract group were stapled using a skin stapler (Unidos, Chungcheongbuk-do, Korea). This condition was maintained for a week by damaging the muscles with the shim and fixing the right hind legs. A week later, the stapler core fixed in the calf muscle and the sole of the foot was removed, and the red bean 50% ethanol extract prepared in Example 1-2) was again orally administered daily at a concentration of 300 mg / kg or 600 mg / kg for one week. Regeneration was induced. At this time, the normal group and muscle injury group was orally administered saline instead of red beans extract. After the oral administration period, 325 mg / kg tribromoethanol (Sigma-aldrich) was intraperitoneally injected into the experimental animals and euthanized through cardiac blood after anesthesia. After confirming that the heart had stopped, the tissue of the right calf muscle was removed. A part of the tissue of the extracted right calf muscle was removed and fixed with 10% formalin to make a paraffin block. After fixation, hematoxylin & eosin staining was performed to measure muscle recovery in the histological aspect, and the stained tissues were photochemical microscopes equipped with an eXcope T500 camera (DIXI Science, Daejeon, Korea). (CK40; Olymupus, Tokyo, Japan).

그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 정상군과 비교하여 근육 손상군에서 위성세포의 핵이 근섬유의 가장자리가 아닌 근섬유의 가운데에 위치함을 확인하였다. 반대로, 팥 추출물을 투여했을 때 핵이 근섬유의 가장자리에 위치하고 있었다. 이는 본 발명의 팥 50% 에탄올 추출물이 근육을 빠르게 재생시키는 효과가 있음을 의미한다.As a result, as shown in Figure 2, compared to the normal group in the muscle damage group was confirmed that the nucleus of the satellite cells is located in the center of the muscle fibers, not the edge of the muscle fibers. In contrast, when the red bean extract was administered, the nucleus was located at the edge of the muscle fiber. This means that the red bean 50% ethanol extract of the present invention has an effect of rapidly regenerating muscles.

실시예 5 : 단백질 분해효소가 처리된 팥 추출물의 손상된 근육 재생 활성 평가Example 5 Evaluation of Damaged Muscle Regeneration Activity of Red Bean Extract Treated with Protease

상기 실시예 1-9)에서 제조한 프로타멕스가 처리된 팥 추출물을 300 mg/kg과 600 mg/kg 경구투여 하였다는 점을 제외하고는 상기 실시예 4와 동일한 방법으로 근육 재생 활성을 평가하였다. Evaluation of muscle regeneration activity in the same manner as in Example 4, except that 300 mg / kg and 600 mg / kg oral administration of the protamex-treated red bean extract prepared in Example 1-9) It was.

그 결과 도 3에 나타난 바와 같이, 정상군과 비교하여 근육 손상군에서 위성세포의 핵이 근섬유의 가장자리가 아닌 근섬유의 가운데에 위치함을 확인하였다. 반면에 단백질 분해 효소가 처리된 팥 추출물을 투여했을 때 핵이 근섬유의 가장자리에 위치하고 있었다. 이는 본 발명의 단백질 분해 효소가 처리된 팥 추출물이 근육을 빠르게 회복시키는 효과가 있음을 의미한다.As a result, as shown in Figure 3, compared to the normal group, muscle nuclei in the muscle damage group was confirmed that the center of the muscle fibers, not the edge of the muscle fibers. On the other hand, when the red bean extract treated with proteolytic enzymes was administered, the nucleus was located at the edge of the muscle fiber. This means that the red bean extract treated with the proteolytic enzyme of the present invention has an effect of rapidly recovering muscles.

하기에 본 발명의 실시예 1에서 제조한 팥 추출물을 함유하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Hereinafter, an example of the preparation of the composition containing the red bean extract prepared in Example 1 of the present invention, but the present invention is not intended to limit it, it is intended to explain in detail only.

제제예 1: 산제의 제조Formulation Example 1 Preparation of Powder

팥 추출물 20 ㎎Red Bean Extract 20 mg

유당수화물 100 ㎎Lactose 100 mg

탈크 10 ㎎Talc 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.The above ingredients were mixed and filled in airtight cloth to prepare a powder.

제제예 2: 정제의 제조Formulation Example 2: Preparation of Tablet

팥 추출물 10 ㎎Red Bean Extract 10 mg

옥수수전분 100 ㎎Corn starch 100 mg

유당수화물 100 ㎎Lactose 100 mg

스테아르산마그네슘 2 ㎎Magnesium stearate 2mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.After mixing the above components, tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.

제제예 3: 캅셀제의 제조Formulation Example 3: Preparation of Capsule

팥 추출물 10 ㎎Red Bean Extract 10 mg

미결정셀룰로오스 3 ㎎ 3 mg of microcrystalline cellulose

유당수화물 14.8 ㎎Lactose carb 14.8 mg

스테아르산마그네슘 0.2 ㎎Magnesium Stearate 0.2mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캅셀제의 제조방법에 다라서 젤라틴캡슐에 충전하여 캅셀제를 제조하였다.After mixing the above components, it was filled in gelatin capsules according to the conventional method for producing capsules to prepare a capsule.

제제예 4: 주사제의 제조Formulation Example 4 Preparation of Injection

팥 추출물 10 ㎎Red Bean Extract 10 mg

만니톨 180 ㎎Mannitol 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 ㎎Sterile distilled water for injection 2974 mg

인산일수소나트퓸 26 ㎎Monohydrogen phosphate 26 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 주사제의 제조방법에 따라 1앰플당(2mL) 상기의 성분 함량으로 제조하였다.After mixing the above components, it was prepared in the above ingredient content per ampoules (2 mL) according to the conventional method for preparing injections.

제제예 5: 액제의 제조Formulation Example 5 Preparation of Liquid

팥 추출물 10 ㎎Red Bean Extract 10 mg

이성화당 10 ㎎Isomerized sugar 10 mg

만니톨 5 ㎎Mannitol 5 mg

정제수 적량Purified water

레몬향 적량Lemon flavor

상기의 성분을 통상의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 정제수를 가하여 전체 100mL로 조절한 후 멸균시켜 갈색병에 충진하여 액제를 제조한다. The above components are dissolved in purified water according to a conventional manufacturing method, dissolved in purified water, lemon juice is added in an appropriate amount, adjusted to 100 mL by adding purified water, and sterilized to fill a brown bottle to prepare a liquid formulation.

제제예 6: 건강기능식품의 제조Formulation Example 6 Preparation of Health Functional Food

팥 추출물 10 ㎎Red Bean Extract 10 mg

비타민 혼합물 적량Vitamin Mixture

비타민 A 아세테이드 70 ㎍70 μg of Vitamin A Acetate

비타민 E 1.0 ㎎Vitamin E 1.0 mg

비타민 B1 0.13㎎Vitamin B 1 0.13 mg

비타민 B2 0.15㎎Vitamin B 2 0.15mg

비타민 B6 0.5㎎Vitamin B 6 0.5 mg

비타민 B12 0.2㎍0.2 μg of vitamin B 12

비타민 C 10 ㎎Vitamin C 10 mg

비오틴 10 ㎍10 μg biotin

니코틴산아미드 1.7 ㎎Nicotinamide 1.7 mg

엽산 50 ㎍50 μg folic acid

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎Calcium Pantothenate 0.5mg

무기질 혼합물 적량Mineral mixture

황산제1철 1.75 ㎎Ferrous Sulfate 1.75 mg

산화아연 0.82 ㎎Zinc Oxide 0.82 mg

탄산마그네슘 25.3 ㎎Magnesium carbonate 25.3 mg

제1인산칼륨 15 ㎎Potassium phosphate monobasic 15 mg

제2인산칼슘 55 ㎎Dicalcium Phosphate 55 mg

구연산칼륨 30 ㎎Potassium Citrate 30 mg

탄산칼슘 100 ㎎Calcium Carbonate 100 mg

염화마그네슘 24.8 ㎎Magnesium chloride 24.8 mg

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.Although the composition ratio of the above-mentioned vitamin and mineral mixtures is mixed with a composition suitable for a health food in a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients are mixed according to a conventional health food manufacturing method. The granules may be prepared and used for preparing a health food composition according to a conventional method.

제제예 7: 건강음료의 제조Formulation Example 7 Preparation of Health Beverage

팥 추출물 10 mgRed Bean Extract 10 mg

비타민 C 15 g15 g of vitamin C

비타민 E(분말) 100 g100 g of vitamin E (powder)

젖산철 19.75 gIron lactate 19.75 g

산화아연 3.5 g3.5 g of zinc oxide

니코틴산아미드 3.5 g3.5 g of nicotinic acid amide

비타민 A 0.2 g0.2 g of vitamin A

비타민 B1 0.25gVitamin B 1 0.25 g

비타민 B2 0.3g0.3 g of vitamin B 2

정제수 정량Purified Water Quantification

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.After mixing the above components according to a conventional healthy beverage manufacturing method, and stirred and heated at 85 ℃ for about 1 hour, the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 2 L container, sealed sterilization and refrigerated Used to prepare the healthy beverage composition of the invention.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.Although the composition ratio is mixed with a component suitable for a favorite beverage in a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand hierarchy, demand country, and usage.

하기에 본 발명의 팥 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 제조예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Hereinafter, the preparation example of the cosmetic composition containing the red bean extract of the present invention will be described, but the present invention is not intended to be limited thereto, but is intended to be described in detail.

제조예 1: 영양화장수(밀크로션)Preparation Example 1: Nutrients (Milk Lotion)

본 발명의 팥 추출물 2.0 중량%Red beans extract 2.0% by weight of the present invention

스쿠알란 5.0 중량%Squalane 5.0 wt%

밀납 4.0 중량%Beeswax 4.0 wt%

폴리솔베이트60 1.5 중량%Polysorbate60 1.5 wt%

솔비탄세스퀴올레이트 1.5 중량%Sorbanthesquioleate 1.5 wt%

유동파라핀 0.5 중량%0.5% by weight of liquid paraffin

카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0 중량%Caprylic / Capric Triglycerides 5.0 wt%

글리세린 3.0 중량%Glycerin 3.0 wt%

부틸렌글리콜 3.0 중량%Butylene Glycol 3.0 wt%

프로필렌글리콜 3.0 중량%Propylene Glycol 3.0 wt%

카르복시비닐폴리머 0.1 중량%Carboxy vinyl polymer 0.1 wt%

트리에탄올아민 0.2 중량%0.2% by weight of triethanolamine

방부제, 색소, 향료 적량Preservatives, colorings, flavors

정제수 to 100 중량%Purified water to 100% by weight

상기의 배합비는 비교적 영양화장수에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다. Although the blending ratio is a composition that is relatively suitable for nutritional longevity in a preferred embodiment, the blending ratio may be arbitrarily modified, it can be prepared according to the manufacturing method in the general cosmetic field.

제조예 2: 유연화장수(스킨로션)Preparation Example 2 Softener (Skin Lotion)

발명의 팥 추출물 2.0 중량 %Red beans extract 2.0% by weight of the invention

글리세린 3.0 중량 %Glycerin 3.0 wt%

부틸렌글리콜 2.0 중량 %Butylene glycol 2.0% by weight

프로필렌글리콜 2.0 중량 %Propylene Glycol 2.0 wt%

카르복시비닐폴리머 0.1 중량 %Carboxy vinyl polymer 0.1 wt%

PEG 12 노닐페닐에테르 0.2 중량 %PEG 12 nonylphenylether 0.2% by weight

폴리솔베이트80 0.4 중량 %Polysorbate 80 0.4% by weight

에탄올 10.0 중량 %Ethanol 10.0 wt%

트리에탄올아민 0.1 중량 %Triethanolamine 0.1% by weight

방부제, 색소, 향료 적량Preservatives, colorings, flavors

정제수 to 100 중량 %Purified water to 100% by weight

상기의 배합비는 비교적 유연화장수에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다. Although the above-mentioned compounding ratio is mixed and formulated in a preferred embodiment with a component suitable for a relatively softening longevity, the compounding ratio may be arbitrarily modified, and can be prepared according to the manufacturing method in the general cosmetic field.

제조예 3: 영양크림Preparation Example 3 Nutrition Cream

본 발명의 팥 추출물 2.0 중량 % Red beans extract 2.0% by weight of the present invention

폴리솔베이트60 1.5 중량 %Polysorbate60 1.5 wt%

솔비탄세스퀴올레이트 0.5 중량 %Solbitan Sesquioleate 0.5% by weight

PEG60 경화피마자유 2.0 중량 %PEG60 Cured Castor Oil 2.0% by weight

유동파라핀 10 중량 %10% by weight of liquid paraffin

스쿠알란 5.0 중량 %Squalane 5.0 wt%

카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0 중량 %Caprylic / Capric Triglyceride 5.0 wt%

글리세린 5.0 중량 %Glycerin 5.0 wt%

부틸렌글리콜 3.0 중량 %Butylene glycol 3.0% by weight

프로필렌글리콜 3.0 중량 %Propylene Glycol 3.0 Weight%

트리에탄올아민 0.2 중량 %Triethanolamine 0.2% by weight

방부제 적량Preservative

색소 적량Pigment amount

향료 적량Spices

정제수 to 100 중량 %Purified water to 100% by weight

상기의 배합비는 비교적 영양크림에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다. Although the above-mentioned compounding ratio is mixed with a component suitable for nourishing cream in a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified, and can be prepared according to a conventional manufacturing method in the cosmetic field.

제조예 4: 마사지크림Preparation Example 4 Massage Cream

본 발명의 팥 추출물 1.0 중량 %Red beans extract 1.0% by weight of the present invention

밀납 10.0 중량 %Beeswax 10.0 weight%

폴리솔베이트60 1.5 중량 %Polysorbate60 1.5 wt%

PEG 60 경화피마자유 2.0 중량 %PEG 60 Cured Castor Oil 2.0% by weight

솔비탄세스퀴올레이트 0.8 중량 %Sorbanthesquioleate 0.8 wt%

유동파라핀 40.0 중량 %40.0% by weight of liquid paraffin

스쿠알란 5.0 중량 %Squalane 5.0 wt%

카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 4.0 중량 %Caprylic / Capric Triglyceride 4.0 wt%

글리세린 5.0 중량 %Glycerin 5.0 wt%

부틸렌글리콜 3.0 중량 %Butylene glycol 3.0% by weight

프로필렌글리콜 3.0 중량 %Propylene Glycol 3.0 Weight%

트리에탄올아민 0.2 중량 %Triethanolamine 0.2% by weight

방부제, 색소, 향료 적량Preservatives, colorings, flavors

정제수 to 100 중량 %Purified water to 100% by weight

상기의 배합비는 비교적 마사지크림에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다. Although the above-mentioned compounding ratio is mixed with a component suitable for a massage cream in a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified, and can be prepared according to a conventional manufacturing method in the cosmetic field.

제조예 5: 팩Preparation Example 5 Pack

발명의 팥 추출물 1.0 중량 %Red beans extract 1.0% by weight of the invention

폴리비닐알콜 13.0 중량 %Polyvinyl alcohol 13.0 wt%

소듐카르복시메틸셀룰로오스 0.2 중량 %Sodium Carboxymethylcellulose 0.2% by weight

글리세린 5.0 중량 %Glycerin 5.0 wt%

알란토인 0.1 중량 %Allantoin 0.1 wt%

에탄올 6.0 중량 %Ethanol 6.0 wt%

PEG 12 노닐페닐에테르 0.3 중량 %PEG 12 nonylphenylether 0.3 wt%

폴리솔베이트60 0.3 중량 %Polysorbate60 0.3 wt%

방부제, 색소, 향료 적량Preservatives, colorings, flavors

정제수 to 100 중량 %Purified water to 100% by weight

상기의 배합비는 비교적 팩에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다. Although the above-mentioned compounding ratio is mixed with a component suitable for a pack in a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified, and can be prepared according to a manufacturing method in the general cosmetic field.

제조예 6: 젤Preparation Example 6 Gel

본 발명의 팥 추출물 0.5 중량 %0.5% by weight red bean extract of the present invention

에틸렌디아민초산나트륨 0.05 중량 %Ethylenediamine sodium acetate 0.05% by weight

글리세린 5.0 중량 %Glycerin 5.0 wt%

카르복시비닐폴리머 0.3 중량 %Carboxy vinyl polymer 0.3 wt%

에탄올 5.0 중량 %Ethanol 5.0 wt%

PEG 60 경화피마자유 0.5 중량 %PEG 60 Cured Castor Oil 0.5% by weight

트리에탄올아민 0.3 중량 %0.3% by weight of triethanolamine

방부제, 색소, 향료 적량Preservatives, colorings, flavors

정제수 to 100 중량 %Purified water to 100% by weight

상기의 배합비는 비교적 젤에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상적인 화장품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다. Although the above-mentioned compounding ratio is mixed with a component suitable for a gel in a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified, and can be prepared according to a manufacturing method in the general cosmetic field.

상기 배합비는 비교적 화장료 조성물에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그외의 색채 화장품을 포함하는 다양한 용도의 화장품에 적용될 수 있는 것이고, 그 효능에 따라 인체에 얇게 도포하여 바를 수 있는 약제 즉, 연고로 제조에 이용될 수 있으며 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.Although the compounding ratio is a relatively suitable composition for the cosmetic composition is mixed in a preferred embodiment, it can be applied to a variety of cosmetics, including other color cosmetics, according to the efficacy that can be applied to a thin coating on the human body, that is, It can be used for manufacturing as ointment, and the compounding ratio may be arbitrarily modified according to regional and national preferences such as demand hierarchy, demand country, and usage.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.The above description of the present invention is intended for illustration, and it will be understood by those skilled in the art that the present invention may be easily modified in other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present invention. will be. Therefore, it should be understood that the embodiments described above are exemplary in all respects and not restrictive.

이상 살펴본 바와 같이, 팥에서 분리한 펩타이드가 Pax7의 mRNA를 증가시켰을 뿐만 아니라, 팥 추출물이 근육을 빠르게 회복시켰기 때문에 정상처럼 근육 위성세포의 핵이 근섬유의 가장자리에 위치하게 되었다. 따라서, 본 발명의 팥 추출물은 위성세포를 활성화시켜, 근육 손상으로 인한 근육 기능 감소를 완화시킬 수 있으며, 근육 손상으로부터 회복을 촉진시킬 수 있는 바, 근육 손상 예방 또는 개선, 치료 또는 손상 근육의 재생 촉진에 유용하게 이용될 수 있다.As described above, peptides isolated from red beans not only increased the mRNA of Pax7, but also the red beans extract quickly recovered muscles, so that the nucleus of muscle satellite cells was located at the edge of muscle fibers as normal. Therefore, the red bean extract of the present invention may activate the satellite cells, alleviate the decrease in muscle function due to muscle damage, and may promote recovery from muscle damage, preventing or improving muscle damage, treating or regenerating damaged muscle. It can be usefully used for promotion.

<110> NewTree Co., Ltd. Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University <120> Composition for preventing, improving or treating muscular damage comprising Vigna angularis extract <130> NP17-0119P <150> 10-2017-0168646 <151> 2017-12-08 <160> 4 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pax7 primer forward <400> 1 actagaatgg cttgtatctg tggtt 25 <210> 2 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pax7 primer reverse <400> 2 ttgaagttcc tgctcctaaa gtgta 25 <210> 3 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-Actin primer forward <400> 3 actgttactg agctgcgttt tacac 25 <210> 4 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-Actin primer reverse <400> 4 gagggacttc ctgtaaccac ttatt 25 <110> NewTree Co., Ltd.          Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University <120> Composition for preventing, improving or treating muscular damage          comprising Vigna angularis extract <130> NP17-0119P <150> 10-2017-0168646 <151> 2017-12-08 <160> 4 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pax7 primer forward <400> 1 actagaatgg cttgtatctg tggtt 25 <210> 2 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pax7 primer reverse <400> 2 ttgaagttcc tgctcctaaa gtgta 25 <210> 3 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-Actin primer forward <400> 3 actgttactg agctgcgttt tacac 25 <210> 4 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-Actin primer reverse <400> 4 gagggacttc ctgtaaccac ttatt 25

Claims (11)

단백질 가수분해효소가 처리된 팥 추출물을 유효성분으로 포함하는, 근육 좌상(muscle strain), 근육 파열(muscle rupture), 근육 열상(muscle tearing), 타박상(contusion), 염좌(distortion) 및 회전근개 증후근(roator cuff syndrome) 으로 이루어진 군에서 선택된 운동-유발성 근육 손상 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
Muscle strain, muscle rupture, muscle tearing, contusion, sprain and rotator cuff syndrome, including red bean extract treated with proteolytic enzyme as an active ingredient Pharmaceutical composition for preventing or treating motor-induced muscle injury selected from the group consisting of (roator cuff syndrome).
제1항에 있어서, 상기 팥 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6개의 유기용매, 아임계 유체, 초임계 유체 및 이의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매에 의한 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.
The composition of claim 1, wherein the red bean extract is an extract by at least one solvent selected from the group consisting of water, an organic solvent having 1 to 6 carbon atoms, a subcritical fluid, a supercritical fluid, and mixtures thereof.
제1항에 있어서, 상기 팥 추출물은 팥을 100 내지 1000 MPa의 압력에서 40 내지 90 ℃의 온도로 1 내지 24 시간 동안 초고압 처리 및 추출하여 수득한 것을 특징으로 하는 조성물.
The composition of claim 1, wherein the red bean extract is obtained by treating and extracting red beans at an ultrahigh pressure for 1 to 24 hours at a temperature of 40 to 90 ° C. at a pressure of 100 to 1000 MPa.
제1항에 있어서, 상기 단백질 가수분해효소는 알카라아제(Alcalase), 플라보르자임(Flavourzyme), 뉴트라아제(Neutrase), 프로타멕스(Protamex) 및 단백질 가수분해효소-NP(Protease-NP)로 이루어진 군으로부터 하나 이상 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
The method according to claim 1, wherein the proteolytic enzyme is Alcalase, Flavorzyme, Neutrase, Protamex and Protease-NP At least one composition selected from the group consisting of.
삭제delete 삭제delete 단백질 가수분해효소가 처리된 팥 추출물을 유효성분으로 포함하는, 근육 좌상(muscle strain), 근육 파열(muscle rupture), 근육 열상(muscle tearing), 타박상(contusion), 염좌(distortion) 및 회전근개 증후근(roator cuff syndrome)으로 이루어진 군에서 선택된 근육 손상 예방 또는 개선용 식품 조성물.
Muscle strain, muscle rupture, muscle tearing, contusion, sprain and rotator cuff syndrome, including red bean extract treated with proteolytic enzyme as an active ingredient (roator cuff syndrome) food composition for preventing or improving muscle damage selected from the group consisting of.
단백질 가수분해효소가 처리된 팥 추출물을 유효성분으로 포함하는, 근육 좌상(muscle strain), 근육 파열(muscle rupture), 근육 열상(muscle tearing), 타박상(contusion), 염좌(distortion) 및 회전근개 증후근(roator cuff syndrome)으로 이루어진 군에서 선택된 근육 손상 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
Muscle strain, muscle rupture, muscle tearing, contusion, sprain and rotator cuff syndrome, including red bean extract treated with proteolytic enzyme as an active ingredient (roator cuff syndrome) cosmetic composition for preventing or improving muscle damage selected from the group consisting of.
단백질 가수분해효소가 처리된 팥 추출물을 유효성분으로 포함하는, 근육 좌상(muscle strain), 근육 파열(muscle rupture), 근육 열상(muscle tearing), 타박상(contusion), 염좌(distortion) 및 회전근개 증후근(roator cuff syndrome)으로 이루어진 군에서 선택된 운동-유발성 근육 손상에 의한 손상 근육의 재생 촉진용 약학적 조성물.
Muscle strain, muscle rupture, muscle tearing, contusion, sprain and rotator cuff syndrome, including red bean extract treated with proteolytic enzyme as an active ingredient Pharmaceutical composition for promoting regeneration of damaged muscles by exercise-induced muscle injury selected from the group consisting of (roator cuff syndrome).
단백질 가수분해효소가 처리된 팥 추출물을 유효성분으로 포함하는, 근육 좌상(muscle strain), 근육 파열(muscle rupture), 근육 열상(muscle tearing), 타박상(contusion), 염좌(distortion) 및 회전근개 증후근(roator cuff syndrome)으로 이루어진 군에서 선택된 운동-유발성 근육 손상에 의한 손상 근육의 재생 촉진용 식품 조성물.
Muscle strain, muscle rupture, muscle tearing, contusion, sprain and rotator cuff syndrome, including red bean extract treated with proteolytic enzyme as an active ingredient (Roator cuff syndrome) A food composition for promoting regeneration of damaged muscles by exercise-induced muscle damage selected from the group consisting of.
단백질 가수분해효소가 처리된 팥 추출물을 유효성분으로 포함하는, 근육 좌상(muscle strain), 근육 파열(muscle rupture), 근육 열상(muscle tearing), 타박상(contusion), 염좌(distortion) 및 회전근개 증후근(roator cuff syndrome)으로 이루어진 군에서 선택된 운동-유발성 근육 손상에 의한 손상 근육의 재생 촉진용 화장료 조성물.Muscle strain, muscle rupture, muscle tearing, contusion, sprain and rotator cuff syndrome, including red bean extract treated with proteolytic enzyme as an active ingredient Cosmetic composition for promoting regeneration of damaged muscles by exercise-induced muscle damage selected from the group consisting of (roator cuff syndrome).
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