KR102026777B1 - Method for preparing fermented soybean meal for replacing fishmeal using Anti-Nutritional Factor controlling strain Microbacterium hydrothemale KBCBS1021 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 항영양인자 제어 미생물 M. hydrothemale KBCBS1021 및 이를 이용한 어분 대체용 발효 대두박 제조 방법에 관한 것으로 본 발명에 의한 M. hydrothemale KBCBS1021 균주 또는, 균주에서 유래한 추출물 또는 분획물을 이용한 발효 대두박 및 발효 대두박을 유효성분으로 하는 발효 조성물은 발효 전에 비해 항영양인자가 저감 효과를 나타내므로 사료를 비롯한 다양한 조성물에 영양공급원으로 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to an anti-nutrient-factor controlling microorganism M. hydrothemale KBCBS1021 and a method for preparing fermented soybean meal for fish meal replacement using the same, and to fermented soybean meal and fermented soybean meal using M. hydrothemale KBCBS1021 strain or extracts or fractions derived from the strain according to the present invention. The fermentation composition as an active ingredient exhibits a reducing effect on anti-nutritional factors compared to before fermentation, and thus may be usefully used as a nutritional source for various compositions including feed.

Figure R1020170108956
Figure R1020170108956

Description

항영양인자 제어 미생물 마이크로박테리움 하이드로더멀 KBCBS1021 균주 및 이를 이용한 어분 대체용 발효 대두박 제조 방법{Method for preparing fermented soybean meal for replacing fishmeal using Anti-Nutritional Factor controlling strain Microbacterium hydrothemale KBCBS1021} Method for preparing fermented soybean meal for replacing fishmeal using Anti-Nutritional Factor controlling strain Microbacterium hydrothemale KBCBS1021}

본 발명은 항영양인자 제어 미생물 마이크로박테리움 하이드로더멀(Microbacterium hydrothemale) KBCBS1021 및 이를 이용한 어분 대체용 발효 대두박 제조 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a control microorganism hangyoung yanginja micro tumefaciens dihydro deomeol (Microbacterium hydrothemale) KBCBS1021 fermented soybean meal and fish meal Alternative production method for using the same.

사육 및 양식에 있어 사료공급은 생산비의 큰 부분을 차지하고 있으며, 생산량 증대에 중요한 영향을 미친다. 그러나, 양식에 의한 수질오염은 급여되는 사료와 관계 있기 때문에 배합사료의 개발은 양식생산성과 환경보호 측면이 가장 우선적으로 고려되어야 한다. 이에 전 세계적으로 안전하고 건강한 사료의 지속 가능한 공급을 위하여 환경 친화적 저오염, 고효율 배합사료의 개발에 많은 투자를 하고 있다.Feeding is a large part of production costs in breeding and aquaculture and has a significant impact on production growth. However, since water pollution from aquaculture is related to the feed being fed, the development of formulated feed should be considered first in terms of aquaculture productivity and environmental protection. To this end, we are investing a lot in the development of environmentally friendly, low pollution and high efficiency feed for the sustainable supply of safe and healthy feeds around the world.

현재 사료용의 가장 일반적 단백질원인 어분(fishmeal)은 동물성 단백질로 성장에 필수성분인 단백질 함량이 풍부하게 함유되어 있을 뿐만 아니라, 특히 여러 종류의 아미노산이 함유되어 있고, 항영양인자(anti-nutiritonal factor)가 많지 않아 소화력이 매우 양호하여 육상의 가축 및 양식 어류를 아우르는 가장 이상적인 사료 성분으로 이야기되고 있다. 그러나, 주요 어분 수출국인 페루와 칠레의 경우 2008년에 206만3,000톤을 생산했으나 2012년도에는 116만1,000톤, 2013년에는 85만5,000톤을 생산하는데 그쳐 어분 생산량 감소세를 나타냈으며, 2014년 엘니뇨 발생으로 인해 남미연안에 따뜻한 바닷물이 유입돼 어분 재료인 엔쵸비 어군 형성을 방해해 페루 등 주요 어분 수출국의 생산량이 급감하는 등 어분의 공급이 불안정하여 가격이 상승하면서 이를 대체할 수 있는 단백질원의 개발에 대한 관심이 높아지고 있다. Currently, fishmeal, the most common protein source for feed, is an animal protein and contains abundant protein content, which is an essential ingredient for growth. It also contains various kinds of amino acids and has an anti-nutiritonal factor. Due to its low digestibility, it is said to be the most ideal feed ingredient for both domestic and farmed fish. However, Peru and Chile, the major fishmeal exporters, produced 2.68 million tonnes in 2008, but 1.161,000 tonnes in 2012 and 855,000 tonnes in 2013, indicating a decrease in fishmeal production. Due to the occurrence of warm seawater on the coast of South America, which hindered the formation of enchovy fish group, a fishmeal material, and reduced production of major fishmeal exporters such as Peru. There is a growing interest in.

프랑스 국립농업연구소(French National Institute for Agriculture Research)는 EU의 5차 연구계획에 의거, 양식을 위한 ‘식물 단백질 사용(PEPPA, Perspectives of Plant Protein Use in Aquaculture)’이라 불리는 연구사업을 시작하였으며, 국내에서도 양식사료에서 어분 사용량을 줄이는 연구가 진행되고 있다. The French National Institute for Agriculture Research has launched a research project called Perspectives of Plant Protein Use in Aquaculture (PEPPA) under the EU's fifth research plan. Research is also underway to reduce fishmeal consumption in aquaculture feeds.

어분 대체 단백질의 예로는 대두박분(soybean meal), 분리대두단백(soy protein isolate), 카놀라분(canola meal), 옥수수 글루텐분(corn gluten meal) 및 기타 식물성 물질이 있으며, 종래의 어분을 대신해 상기 물질들을 사용하려는 경향이 높아지고 있다. 이들 물질은 2011년 기준, 어분 가격의 1/4에 불과해 충분한 공급이 가능하며, 식물성 단백질이기에 스크래피(scrapie)와 같은 동물성 단백질 매개 질환에서 자유로운 것으로 알려져 있다.Examples of fish meal replacement proteins include soybean meal, soy protein isolate, canola meal, corn gluten meal and other vegetable substances. There is a growing tendency to use materials. These substances are available in just one quarter of the fishmeal price in 2011, which is sufficient to supply them, and because they are plant proteins, they are known to be free from animal protein-borne diseases such as scrapie.

대두박은 콩기름을 짜고 남은 찌꺼기를 의미하는 것으로 건조상태를 기준으로 단백질이 55~56%, 가용성 탄수화물이 13~14%, 불용성 탄수화물이 21~22%, 지방이 1% 및 미네랄이 4~6% 가량 함유되어 있다. 대두박과 같은 식물성 물질의 장점은 상기와 같이 저렴한 가격과 단백질 함량이 높다는 점이다. 그러나, 어분 대신 이들 식물성 단백질을 사용할 때의 단점으로는 동물성 단백질에 비해 오메가-3 지방산 함량이 낮은점, 대두박분의 쓰레오닌(threonine) 및 티로신(tyrosine)과 같은 아미노산의 함량이 동물성 단백질에 비하여 좋지 못한 점과 같이, 식물성 단백질에는 가축에 필요한 필수 아미노산의 조성에 있어 일부 부족한 부분이 있고, 비타민, 미네랄 및 UGF(Unknown Growth Factor) 함량이 우수하지 못한 영양 불균형의 문제점이 있다. Soybean meal refers to the residue left from squeezing soybean oil, which is 55-56% protein, 13-14% soluble carbohydrates, 21-22% soluble carbohydrates, 1% fat and 4-6% minerals, based on dry conditions. It contains about. The advantages of plant materials such as soybean meal are the low price and high protein content. However, the disadvantages of using these vegetable proteins instead of fishmeal include lower levels of omega-3 fatty acids than animal proteins, and amino acids such as threonine and tyrosine in soybean meal. As a disadvantage, vegetable protein has some deficiencies in the composition of essential amino acids required for livestock, and there is a problem of nutritional imbalance in which vitamin, minerals and UGF (Unknown Growth Factor) contents are not excellent.

상기와 같은 영양 함량의 불균형과 함께 문제가 되는 것으로 식물체에 있는 항영양성분의 존재를 들 수 있다. 예를들어, 대두에 함유된 항영양인자(anti-nutritional factor, ANF)인 트립신 저해제(trypsin inhibitor)는 트립신(trypsin)과 키모트립신(chymotrypsin)의 적절한 효소기능을 방해하여 대두 내에 존재하는 전체 단백질의 이용성을 저하시킨다. 이외에도, 항영양인자로는 혈구 응집소인 헤마글루티닌(hemagglutinin), 단백질 및 미네랄 등과 상호작용하는 파이테이트(phytate), 가축의 설사와 복통을 유발하는 라피노스(raffinose) 및 스타키오스(stachyose) 등과 같은 올리고당, 및 영양성분의 흡수를 저해하는 다당류 등이 알려져 있다. 특히 이러한 항영양인자는 어린 가축에 더욱 영향을 주기 때문에, 어린 가축용 사료에는 대두박의 첨가량을 제한하고 있다. 양식어류에서도 항영양인자로 인해 성체로 성숙시키는데 많은 시간이 걸리는 문제가 나타나기도 한다. 이러한 문제들로 인해 일반적으로 동물사료에서는 대두박분과 같은 식물성 단백질이 단백질 공급원으로 많이 활용되지 못하고 있으며, 특히 어류사료에서는 대두박 성분을 많이 사용할 수 없는 것으로 알려져 있다.One problem with such an imbalance of nutrient content is the presence of anti-nutrients in plants. For example, trypsin inhibitor, an anti-nutritional factor (ANF) contained in soybeans, interferes with the proper enzymatic function of trypsin and chymotrypsin, leading to Lowers usability. In addition, anti-nutrient factors include hemagglutinin, a hemagglutinin, phytate interacting with proteins and minerals, and raffinose and stachyose, which cause diarrhea and abdominal pain in livestock. Oligosaccharides and polysaccharides that inhibit absorption of nutrients are known. In particular, since these anti-nutritive factors affect young livestock more, they limit the amount of soybean meal added to young livestock feed. In farmed fish, anti-nutritional factors may cause problems that take a long time to mature into adults. Due to these problems, in general, animal protein such as soybean meal is not widely used as a protein source, and in particular, it is known that soybean meal components cannot be used in fish feed.

따라서, 어분의 대체제로서 식물성 단백질을 이용하기 위해서는, 상기 식물성 단백질원에 존재하는 항영양인자를 줄이는 것이 해결과제로 남아 있다. 현재, 열을 가해 트립신 저해제의 양을 가열 전 39 mg/g에서 4 mg/g 이하 수준으로 낮추는 방법도 사용되고 있으나, 다른 영양성분의 파괴 및, 사육 동물의 새끼와 같이 크기가 작은 개체에서는 잔존 항영양인자에 의한 영향이 계속 미치는 문제 등이 있으며, α-갈락토시다아제(α-galactoside) 및 갈락토만난(galactomannan)등 일부 항영양인자는 열처리 가공에 저항성이 높아 한계가 있다.Therefore, in order to use vegetable protein as a substitute for fish meal, reducing the anti-nutritive factors present in the vegetable protein source remains a challenge. Currently, a method of reducing the amount of trypsin inhibitor by heating to 39 mg / g or less before heating is also used. However, the destruction of other nutrients and the remaining antimicrobial activity in small individuals such as the offspring of breeding animals There are problems such as the effects of the two factors, and some anti-nutritional factors, such as α-galactoside and α-galactoside and galactomannan, have a high resistance to heat treatment and are limited.

대한민국 공개특허 제10-2011-0027535호에서는 바실러스균을 대두박에 첨가하여 발효시켜 항영양인자를 저감시키는 방법을 개시하고 있으며, 대한민국 등록특허 제10-0645284호에서도 바실러스 서브틸리스 GR-101과 아스퍼질러스오리재 GB-107를 이용해 효소생성능을 강화하는 고체발효 대두단백질 가공 방법을 개시하는 등 미생물 첨가를 통해 항영양인자를 저감시키는 방법들이 개발되고 있다. Korean Patent Publication No. 10-2011-0027535 discloses a method for reducing anti-nutritional factors by adding Bacillus bacteria to soybean meal and fermenting. Korean Patent No. 10-0645284 also discloses Bacillus subtilis GR-101 and Aspergillus. Methods for reducing anti-nutritional factors through the addition of microorganisms have been developed, including the introduction of a solid fermented soy protein processing method that enhances the enzyme production performance using Suri materials GB-107.

이에 본 발명자들은 항영양인자를 억제하는 신규한 미생물을 선별하였으며, 이를 이용하여 제조한 발효 대두박에서 항영양인자가 감소되는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.The present inventors screened a novel microorganism that suppresses anti-nutritive factors, and completed the present invention by confirming that anti-nutritive factors were reduced in fermented soybean meal prepared using the same.

대한민국 공개특허 제10-2011-0027535호Republic of Korea Patent Publication No. 10-2011-0027535 대한민국 등록특허 제10-0645284호Republic of Korea Patent No. 10-0645284

본 발명의 목적은 항영양인자 제어 미생물 마이크로박테리움 하이드로더멀 (Microbacterium hydrothemale) KBCBS1021 균주 및 이를 이용한 어분 대체용 발효 대두박 제조 방법을 제공하는 것이다.An object of the present invention to provide a control microorganism hangyoung yanginja micro tumefaciens dihydro deomeol (Microbacterium hydrothemale) KBCBS1021 strains fermented soybean meal and fish meal Alternative production method for using the same.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 수탁번호 KCTC18516P로 기탁된 항영양인자 제어 미생물 마이크로박테리움 하이드로더멀(Microbacterium hydrothemale) KBCBS1021 균주를 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a microorganism hangyoung yanginja control micro tumefaciens dihydro deomeol (Microbacterium hydrothemale) KBCBS1021 strain deposited as accession No. KCTC18516P.

또한 본 발명은 수탁번호 KCTC18516P로 기탁된 M. hydrothemale KBCBS1021 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 대두박 내 항영양인자(anti-nutritional factor, ANF) 활성 억제용 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition for inhibiting anti-nutritional factor (ANF) activity in soybean meal containing M. hydrothemale KBCBS1021 strain deposited with Accession No. KCTC18516P or a culture thereof as an active ingredient.

또한 본 발명은 하기 단계를 포함하는 발효 대두박의 제조방법을 제공한다:The present invention also provides a method of preparing a fermented soybean meal comprising the following steps:

1) 수탁번호 KCTC18516P로 기탁된 M. hydrothemale KBCBS1021 균주를 배양하여 배양물을 제조하는 단계;1) preparing a culture by culturing the M. hydrothemale KBCBS1021 strain deposited with accession number KCTC18516P;

2) 상기 단계 1)의 배양물을 탈피 대두박과 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및2) mixing the culture of step 1) with stripped soybean meal to prepare a mixture; And

3) 상기 단계 2)의 혼합물을 발효하는 단계.3) fermenting the mixture of step 2).

아울러 본 발명은 상기 방법으로 제조된 발효 대두박을 유효성분으로 함유하는 사료용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a feed composition containing the fermented soybean meal prepared by the above method as an active ingredient.

본 발명에 의한 마이크로박테리움 하이드로더멀(Microbacterium hydrothemale) KBCBS1021 균주 또는, 이의 배양물을 이용한 발효 대두박은 발효 전에 비해 항영양인자가 저감되는 효과를 나타내므로 사료를 비롯한 다양한 조성물에 영양공급원으로 유용하게 사용될 수 있다. Microbacterium hydrothemale KBCBS1021 strain or fermented soybean meal using the culture thereof according to the present invention exhibits an effect of reducing anti-nutritive factors compared to before fermentation, and thus can be usefully used as a nutritional source for various compositions including feed. have.

도 1은 마이크로박테리움 하이드로더멀(Microbacterium hydrothemale) KBCBS1021 균주의 API ZYM kit 분석 결과를 나타낸다.
도 2는 영양한천배지 상에서 순수배양된 M. hydrothemale KBCBS1021 균주이다.
도 3은 M. hydrothemale KBCBS1021 균주의 16S rRNA 염기서열의 분자계통학적 유연관계를 나타낸 모식도이다.
1 is a microbacterium hydrodermal ( Microbacterium) hydrothemale ) API ZYM kit analysis of KBCBS1021 strain.
2 is a strain of M. hydrothemale KBCBS1021 purely cultured on nutrient agar medium.
Figure 3 is a schematic diagram showing the molecular relationship of the 16S rRNA sequence of M. hydrothemale KBCBS1021 strain.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 수탁번호 KCTC18516P로 기탁된 마이크로박테리움 하이드로더멀(Microbacterium hydrothemale) KBCBS1021 균주를 제공한다.The present invention provides a micro tumefaciens dihydro deomeol (Microbacterium hydrothemale) KBCBS1021 strain deposited as accession No. KCTC18516P.

상기 균주는 서열번호 1로 기재되는 16S rRNA 염기서열을 포함한다.The strain comprises the 16S rRNA nucleotide sequence set forth in SEQ ID NO: 1.

본 발명의 구체적인 실시예에서 항영양인자 저감 효과를 갖는 균주의 선별 및 어류 양식 환경에도 적용할 수 있는 호염성 미생물을 분리하기 위하여 주요 해변들에서 해당 지역의 모래, 해수, 해초에 서식하는 균주를 분리하였다. 선발한 균주를 대상으로 항영양인자를 제어하는데 관여하는 것으로 알려진 갈락토시다아제(Galactosidase) 생성이 우수한 균주를 선발했다(도 1 및 도 2, 표 1). 16S rRNA 염기서열 분석으로 상기 선발된 균주가 신규한 균주임을 확인한 후(도 3), 'Microbacterium hydrothemale KBCBS1021'로 명명하여 한국생명공학연구원 내 생물자원센터에 기탁하였다.In a specific embodiment of the present invention, the strains inhabiting the sand, seawater and seaweeds of the region are separated from the main beaches in order to isolate the basophilic microorganisms that can be applied to the screening and fish farming environment having an anti-nutrient factor reduction effect. It was. In the selected strains, strains excellent in producing galactosidase, which are known to be involved in controlling anti-nutritional factors, were selected (FIGS. 1 and 2 and Table 1). After confirming that the selected strain is a novel strain by 16S rRNA sequencing (FIG. 3), it was named ' Microbacterium hydrothemale KBCBS1021' and deposited in a biological resource center in the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology.

또한 본 발명은 수탁번호 KCTC18516P로 기탁된 M . hydrothemale KBCBS1021 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 대두박 내 항영양인자(anti-nutritional factor, ANF) 활성 억제용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention is deposited with M. Accession No. KCTC18516P . It provides a composition for inhibiting the anti-nutritional factor (ANF) activity in soybean meal containing the hydrothemale KBCBS1021 strain or a culture thereof as an active ingredient.

상기 항영양인자는 트립신 저해제(trypsin inhibitor; TI), 라피노스, 스타키오스, 렉틴, 요소 분해효소, 리폭시제나제(lipoxygenase), 시안화글루코사이드 및 항비타민 인자로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, 조성물일 수 있으며, 구체적으로는 트립신 저해제, 라피노스 또는 스타키오스일 수 있다.
상기 렉틴은 피토헤마글루틴일 수 있다.
The anti-nutritive factor is any one or more selected from the group consisting of trypsin inhibitor (TI), raffinose, stachiose, lectin, urease, lipoxygenase, glucocyanide and anti-vitamin factor, And may specifically be a trypsin inhibitor, raffinose or stachiose.
The lectin may be phytohemagglutin.

상기 균주 또는 배양액은 균주의 직접 배양 또는, 균주에서 유래한 추출물 또는 분획물을 이용하는 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The strain or culture may be to direct culture of the strain, or to use an extract or fraction derived from the strain, but is not limited thereto.

상기 직접 배양물은 균주를 배양한 배양액 또는 이를 물리적 방법으로 여과한 것일 수 있다.The direct culture may be a culture medium in which the strain is cultured or filtered by a physical method.

상기 조성물은 동물의 사료에 직접 혼합하거나 사료와 별도로 단독으로 경구 제형, 주사 또는경피로 다른 성분과 조합하여 쉽게 투여될 수 있다. 투여량은 동물의 체중, 건강상태, 식이, 투여방법 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 당 업계에서 잘 알려진 바와 같이 일일 투여량은 약 0.1~10㎎/g, 구체적으로 0.05~1㎎/g이며, 하루 일회 내지 수회 에 나누어 투여하는 것이 더욱 바람직하다.The composition can be easily administered directly in animal feed or in combination with other ingredients by oral formulation, injection or transdermal, alone or separately from the feed. Dosage varies in range depending on the animal's weight, health condition, diet, method of administration and severity of disease. As is well known in the art, the daily dosage is about 0.1-10 mg / g, specifically 0.05-1 mg / g, and more preferably, once or several times a day.

본 발명의 구체적인 실시예에서 항영양인자 저감 효과를 갖는 신규 균주인 M. hydrothemale KBCBS1021의 배양액을 대두박과 혼합한 다음 발효시킨 후, 수확된 발효 대두박은 발효하기 전과 비교하였을 때 항영양인자 함량이 현저하게 낮아지는 것으로 확인되었다(표 5). 이를 통해 본 발명에 의한 대두박 내 항영양인자(anti-nutritional factor, ANF) 활성 억제용 조성물은 항영양인자의 감소에 유용하게 사용될 수 있는 것으로 나타났다.In a specific embodiment of the present invention, after the fermentation of a culture medium of M. hydrothemale KBCBS1021, a novel strain having an anti-nutritive effect reduction effect, with soybean meal, the harvested fermented soybean meal has a significantly lower anti-nutritive content compared to before fermentation. It was confirmed to lose (Table 5). Through this, the composition for inhibiting the anti-nutritional factor (ANF) activity in soybean meal according to the present invention was found to be useful for reducing the anti-nutritional factor.

또한 본 발명은 하기 단계를 포함하는 발효 대두박의 제조 방법을 제공한다:The present invention also provides a method of preparing a fermented soybean meal comprising the following steps:

1) 수탁번호 KCTC18516P로 기탁된 M . hydrothemale KBCBS1021 균주를 배양하여 배양물을 제조하는 단계;1) M deposited with accession number KCTC18516P . preparing a culture by culturing the hydrothemale KBCBS1021 strain;

2) 상기 단계 1)의 배양물을 탈피 대두박과 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및2) mixing the culture of step 1) with stripped soybean meal to prepare a mixture; And

3) 상기 단계 2)의 혼합물을 발효하는 단계. 3) fermenting the mixture of step 2).

상기 단계 1)의 배양은 하기 성분을 포함하는 배지를 이용한 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다: a) 아라비노스(Arabinose), 과당(Fructose), 수크로오스(Sucrose) 및 포도당(Dextrose)으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 탄소원을 0.1 내지 50 중량부, 구체적으로는 0.5 내지 20 중량부, 더욱 구체적으로는 1 내지 10 중량부; b) 아르기닌(Arginine), 트립톤(Tryptone), 우육추출물(Beef extract), 대두추출물(Soy bean meal), 효모추출물(Yeast extract)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 질소원을 0.01 내지 50 중량부, 구체적으로는 0.05 내지 20 중량부, 더욱 구체적으로는 0.1 내지 5 중량부; 및 c) FeCl2·7H2O, AgNO3, MgSO4·7H2O, K2HPO4, CaCl2·2H2O, FeSO4·7H2O 또는 MnSO4·4-5H2O로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 무기염류를 0.001 내지 5 중량부, 구체적으로는 0.005 내지 1 중량부, 더욱 구체적으로는 0.01 내지 0.5 중량부.The culturing of step 1) may be performed using a medium containing the following components, but is not limited thereto: a) from the group consisting of arabinose, fructose, fructose, sucrose and glucose. 0.1 to 50 parts by weight, specifically 0.5 to 20 parts by weight, more specifically 1 to 10 parts by weight of any one or more carbon sources selected; b) 0.01 to 50 parts by weight of at least one nitrogen source selected from the group consisting of arginine, tryptone, beef extract, soy bean meal, yeast extract Specifically, 0.05 to 20 parts by weight, more specifically 0.1 to 5 parts by weight; And c) FeCl 2 · 7H 2 O, AgNO 3 , MgSO 4 · 7H 2 O, K 2 HPO 4 , CaCl 2 · 2H 2 O, FeSO 4 · 7H 2 O or MnSO 4 · 4-5H 2 O At least one inorganic salt selected from 0.001 to 5 parts by weight, specifically 0.005 to 1 part by weight, more specifically 0.01 to 0.5 part by weight.

상기 단계 2)의 혼합은 혼합물 전체 100 중량부에 대하여 배양물을 1 내지 80 중량부, 구체적으로는 3 내지 50 중량부, 더욱 구체적으로는 5 내지 30 중량부, 탈피 대두박을 20 내지 99 중량부, 구체적으로는 50 내지 97 중량부, 더욱 구체적으로는 70 내지 95 중량부로 혼합하는 것일 수 있다.Mixing of the step 2) is 1 to 80 parts by weight of the culture, specifically 3 to 50 parts by weight, more specifically 5 to 30 parts by weight, 20 to 99 parts by weight of peeled soybean meal with respect to 100 parts by weight of the mixture Specifically, the mixture may be 50 to 97 parts by weight, more specifically 70 to 95 parts by weight.

상기 단계 3)의 발효는 3시간 내지 15일, 구체적으로는 1 내지 7일, 더욱 구체적으로는 2 내지 5일간 수행하는 것일 수 있다.Fermentation of step 3) may be performed for 3 hours to 15 days, specifically 1 to 7 days, more specifically 2 to 5 days.

상기 단계 3) 이후 건조시키는 단계를 추가할 수 있으며, 4) 발효 후 3시간 내지 15일, 구체적으로는 1 내지 7일, 더욱 구체적으로는 2 내지 5일간 건조시키는 것 일 수 있다.Step 3) may be added after the drying step, 4) may be 3 to 15 days after fermentation, specifically 1 to 7 days, more specifically 2 to 5 days to dry.

본 발명의 구체적인 실시예에서 a) 아라비노스(Arabinose), 과당(Fructose), 수크로오스(Sucrose) 및 포도당(Dextrose)으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 탄소원을 1 내지 10 중량부; b) 아르기닌(Arginine), 트립톤(Tryptone), 우육추출물(Beef extract), 대두추출물(Soy bean meal), 효모추출물(Yeast extract)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 질소원을 0.1 내지 5 중량부; 및 c) FeCl2·7H2O, AgNO3, MgSO4·7H2O, K2HPO4, CaCl2·2H2O, FeSO4·7H2O, MnSO4·4-5H2O로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 무기염류를 0.01 내지 0.5 중량부 포함하는 배지에 M. hydrothemale KBCBS1021 균주를 접종하여 배양한 결과 일반적인 LB 배지에 비해 높은 밀도로 세균이 배양되는 것을 확인했다(표 4). 상기 M. hydrothemale KBCBS1021의 배양액을 대두박과 혼합한 다음 발효시킨 후, 수확된 발효 대두박은 발효하기 전과 비교하였을 때 항영양인자 함량이 현저하게 낮아지는 것으로 나타났다(표 5).In a specific embodiment of the present invention a) 1 to 10 parts by weight of any one or more carbon sources selected from the group consisting of arabinose, fructose, fructose, sucrose and glucose; b) 0.1 to 5 parts by weight of at least one nitrogen source selected from the group consisting of arginine, tryptone, beef extract, soy bean meal, yeast extract ; And c) FeCl 2 · 7H 2 O, AgNO 3 , MgSO 4 · 7H 2 O, K 2 HPO 4 , CaCl 2 · 2H 2 O, FeSO 4 · 7H 2 O, MnSO 4 · 4-5H 2 O As a result of inoculating M. hydrothemale KBCBS1021 strain in a medium containing 0.01 to 0.5 parts by weight of any one or more inorganic salts selected from the above, it was confirmed that bacteria were cultured at a higher density than general LB medium (Table 4). After fermenting the culture medium of M. hydrothemale KBCBS1021 with soybean meal, the fermented soybean meal was found to have a significantly lower anti-nutritive content compared to before fermentation (Table 5).

아울러 본 발명은 1) 수탁번호 KCTC18516P로 기탁된 M . hydrothemale KBCBS1021 균주를 배양하여 배양물을 제조하는 단계; 2) 상기 단계 1)의 배양물을 탈피 대두박과 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및 3) 상기 단계 2)의 혼합물을 발효하는 단계를 포함하는 방법으로 제조된 발효 대두박을 유효성분으로 함유하는 사료용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention 1) M deposited with accession number KCTC18516P . preparing a culture by culturing the hydrothemale KBCBS1021 strain; 2) mixing the culture of step 1) with stripped soybean meal to prepare a mixture; And 3) provides a feed composition containing a fermented soybean meal prepared by the method comprising the step of fermenting the mixture of step 2) as an active ingredient.

상기 조성물에는 사료로 첨가 가능한 물질, 예를 들면 곡물류, 조강류, 기타 식물성 유박류, 동물성 사료 원료, 기타 사료 원료, 정제품 등을 추가로 포함할 수 있다.The composition may further include materials that can be added to the feed, such as cereals, algae, other vegetable oils, animal feed raw materials, other feed raw materials, tablets, and the like.

상기 곡물류로는, 예를 들면 마이로, 밀, 보리, 귀리, 호밀, 현미, 메밀, 조, 수수, 피, 옥수수, 대두 등을 포함할 수 있다.The grains may include, for example, mairo, wheat, barley, oats, rye, brown rice, buckwheat, crude, sorghum, blood, corn, soybean, and the like.

상기 조강류로는, 예를 들면 쌀겨, 탈지 쌀겨, 밀기울, 말분, 밀, 배아, 보리겨, 스크리닝, 펠렛, 옥수수 겨, 옥수수 배아 등을 포함할 수 있다.The algae may include, for example, rice bran, skim rice bran, bran, powder, wheat, embryo, barley bran, screening, pellets, corn bran, corn germ, and the like.

상기 기타 식물성 유박류로는 대두박 외의 유박류, 예를 들면 콩가루, 아마박, 면실박, 땅콩박, 홍화박, 야자박, 팜박, 호마박, 해바라기박, 유채박, 케이폭박(Kapok meal), 겨자박 등을 포함할 수 있다.The other vegetable oils include oils other than soybean meal, such as soybean meal, flax seed, cottonseed meal, peanut gourd, safflower gourd, palm gourd, palm gourd, houma gourd, sunflower gourd, rapeseed gourd, Kapok meal, Mustard and the like.

상기 동물성 사료 원료로는, 예들 들면 추가적인 어분, 육분, 어골분, 혈분, 골분, 가축 처리 부산물, 페더 밀(feather meal), 누에, 탈지 분유, 카제인, 건조 유장 등을 포함할 수 있다.The animal feed material may include, for example, additional fish meal, meat meal, fish bone meal, blood meal, bone meal, animal by-products, feather meal, silkworm, skim milk powder, casein, dry whey, and the like.

상기 기타 사료 원료로서는 식물 경엽류(알팔파, 헤이큐브, 알팔파잎 분말, 유사 아카시아 분말 등), 옥수수 가공공업부산물(콘 글루텐, 밀, 콘 글루텐 피드, 콘스테이프리카 등), 전분 가공품, 설탕, 발효 공업 산물(효모, 맥주박, 맥아근,알코올박, 장유박 등), 농산 제조 부산물(감귤 가공박, 두부박, 커피박, 코코아박 등), 그 외(카사바, 잠두콩, 구아밀, 해조, 크릴, 스피룰리나, 클로렐라, 광물 등) 등을 들 수 있다.The other feed ingredients include plant foliage (alfalfa, haycube, alfalfa leaf powder, pseudo acacia powder, etc.), corn processing industrial by-products (corn gluten, wheat, corn gluten feed, corn staple, etc.), starch processed products, sugar, fermentation. Industrial products (yeast, beer foil, malt sprouts, alcohol foil, walnuts, etc.), agricultural production by-products (citrus fruits, tofu, coffee, cocoa, etc.), others (cassava, bean, guam, seaweed, Krill, spirulina, chlorella, minerals, etc.) etc. are mentioned.

상기 정제품으로서는 단백질(카제인, 알부민 등), 아미노산, 당질(전분, 셀룰로오스, 슈크로우스, 글루코오스 등), 미네랄, 비타민, 기타 영양 보충제, 성장 촉진제, 소화 흡수 촉진제, 질병 예방제 등을 들 수 있다.Examples of the purified products include proteins (casein, albumin, etc.), amino acids, sugars (starch, cellulose, sucrose, glucose, etc.), minerals, vitamins, other nutritional supplements, growth promoters, digestive absorption accelerators, disease prevention agents, and the like.

상기 사료내의 발효 대두박의 함량은 적용 가축 종류, 연령, 적용 형태, 목적하는 효과 등에 따라서 적절하게 조절 가능하며, 예컨대, 1 내지 99 중량부, 10 내지 90 중량부, 또는 20 내지 80 중량부 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The content of fermented soybean meal in the feed can be appropriately adjusted according to the type of animal, age, application form, desired effect, etc., for example, 1 to 99 parts by weight, 10 to 90 parts by weight, or 20 to 80 parts by weight. However, it is not limited thereto.

상기 조성물은 포유류, 조류, 파충류, 양서류, 어류 등의 동물용 사료에 이용될 수 있으나 이에 한정되지 않으나, 바람직하게는 양식어용 사료에 사용될 수 있다. The composition may be used in animal feed for mammals, birds, reptiles, amphibians, fish and the like, but is not limited thereto. Preferably, the composition may be used for farmed fish feed.

상기 사료를 적용 가능한 가축 종류는 특별한 제한이 없으며, 예를 들면, 본 발명의 사료는 개, 고양이, 쥐 등의 애완 동물용 사료, 소, 돼지 등의 가축용 사료, 닭, 칠면조 등의 가금용 사료, 도미, 방어, 메기, 붕어, 잉어, 넙치, 뱀장어 등의 어류용 사료로 사용될 수 있다.The type of livestock to which the feed is applicable is not particularly limited. For example, the feed of the present invention is for pet food such as dogs, cats and mice, for livestock feed such as cattle and pigs, and for poultry such as chicken and turkey. It can be used as a feed for fish such as feed, sea bream, defense, catfish, crucian carp, flounder, eel and the like.

본 발명의 구체적인 실시예에서 a) 아라비노스(Arabinose), 과당(Fructose), 수크로오스(Sucrose) 및 포도당(Dextrose)으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 탄소원을 1 내지 10 중량부; b) 아르기닌(Arginine), 트립톤(Tryptone), 우육추출물(Beef extract), 대두추출물(Soy bean meal), 효모추출물(Yeast extract)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 질소원을 0.1 내지 5 중량부; 및 c) FeCl2·7H2O, AgNO3, MgSO4·7H2O, K2HPO4, CaCl2·2H2O, FeSO4·7H2O, MnSO4·4-5H2O로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 무기염류를 0.01 내지 0.5 중량부 포함하는 배지에 M. hydrothemale KBCBS1021 균주를 접종하여 배양한 결과 일반적인 LB 배지에 비해 높은 밀도로 세균이 배양되는 것을 확인했다(표 4). 상기 M. hydrothemale KBCBS1021의 배양액을 대두박과 혼합한 다음 발효시킨 후, 수확된 발효 대두박은 발효하기 전과 비교하였을 때 항영양인자인 트립신 저해제(trypsin inhibitor; TI), 라피노스 및 스타키오스 함량이 현저하게 낮아지는 것으로 확인되어(표 5), 사료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인했다.In a specific embodiment of the present invention a) 1 to 10 parts by weight of any one or more carbon sources selected from the group consisting of arabinose, fructose, fructose, sucrose and glucose; b) 0.1 to 5 parts by weight of at least one nitrogen source selected from the group consisting of arginine, tryptone, beef extract, soy bean meal, yeast extract ; And c) FeCl 2 · 7H 2 O, AgNO 3 , MgSO 4 · 7H 2 O, K 2 HPO 4 , CaCl 2 · 2H 2 O, FeSO 4 · 7H 2 O, MnSO 4 · 4-5H 2 O As a result of inoculating M. hydrothemale KBCBS1021 strain in a medium containing 0.01 to 0.5 parts by weight of any one or more inorganic salts selected from the above, it was confirmed that bacteria were cultured at a higher density than general LB medium (Table 4). After fermenting the culture medium of M. hydrothemale KBCBS1021 with soybean meal, the harvested fermented soybean meal has a significantly lower content of trypsin inhibitor (TI), raffinose and starchiose, which are anti-nutritive factors, as compared to before fermentation. It was confirmed that (Table 5), it can be usefully used for feed.

이하, 본 발명을 실시예에 의해서 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples.

단 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예 및 실험예에 의해서 한정되는 것은 아니다.However, the following Examples and Experimental Examples are only for illustrating the present invention, the present invention is not limited by the following Examples and Experimental Examples.

실시예Example 1. 주요  1. Main 항영양인자Anti-nutritional factors 제어 미생물의 선발 Selection of Controlled Microorganisms

어류 양식 환경에 적용할 수 있는 호염성 미생물을 분리하기 위하여 경남지역의 주요 해변(사천, 남해, 통영 등)으로부터 해당 지역의 모래, 해수, 해초 등을 샘플링하였다. 각각의 샘플링된 시료는 준비된 멸균수에 10배로 희석하여 30분간 교반 후 멸균수에 단계 희석한 후 5% NaCl LB agar(NaCl 5%, LB broth 2.5%, Bacto agar 2%) 배지에 평판도말하였다. 평판도말 된 배지는 30℃ 인큐베이터에 24시간동안 배양하였고, 배지에 생장한 균주 중 1.0×103 cfu/g(㎖) 이상의 밀도를 나타내는 111종의 호염성 균주를 선발하였다. Sand, seawater, and seaweeds were sampled from major beaches in Gyeongnam (Sacheon, Namhae, Tongyeong, etc.) to isolate basophils that could be applied to fish farming environments. Each sampled sample was diluted 10-fold in the prepared sterile water, stirred for 30 minutes, and then diluted in sterile water, and plated in 5% NaCl LB agar (NaCl 5%, LB broth 2.5%, Bacto agar 2%) medium. . The plated medium was incubated for 24 hours in a 30 ° C incubator, and 111 kinds of basophilic strains having a density of 1.0 × 10 3 cfu / g (ml) or more among the strains grown in the medium were selected.

선발한 111종의 호염성 균주를 대상으로 라피노스(Raffinose)와 스타키오스(Stachyose)를 제어하는데 관여하는 것으로 알려진 갈락토시다아제(Galactosidase) 생성 균주를 선발하고자, 미생물의 효소 활성을 조사하는데 이용되는 API ZYM kit(Biomerieux, USA)를 활용하였다. 선발한 균주를 순수분리 후 LB broth에 접종하여 30℃, 120rpm으로 48시간 동안 진탕배양한 후, 냉장형 고속원심분리기(한일과학, Korea)을 이용하여 6,000rpm으로 15분간 원심분리하였고, 농축된 배양액을 300㎕씩 샘플링하여 2㎖의 현탁용 매개물(suspension medium)에 넣어 McFarland standard 4 내지 5의 탁도가 되도록 맞추었다. 동시에 준비된 트레이에 스트립을 놓고 준비된 배양액 현탁물을 각 100㎕씩 접종하였다. 35℃의 인큐베이터에 4시간 배양한 후 ZYM A와 ZYM B 시약을 차례로 투입하여 5분간 반응시킨 후 발현된 색깔의 정도에 따라 발현 지수를 0 ~ 5로 구분하여 측정하였다. In order to screen the galactosidase-producing strains known to be involved in the control of Raffinose and Stachyose in 111 selected basophils, API ZYM kit (Biomerieux, USA) was used. Selected strains were inoculated in LB broth after pure separation, shaken for 48 hours at 30 ° C, 120rpm, and then centrifuged at 6,000rpm for 15 minutes using a refrigerated high-speed centrifuge (Hanil Science, Korea). 300 μl of the culture was sampled and placed in 2 ml of suspension medium to adjust the turbidity of McFarland standards 4 to 5. At the same time, the strips were placed in the prepared trays, and the prepared culture suspension was inoculated with 100 µl each. After incubating for 4 hours in an incubator at 35 ° C, ZYM A and ZYM B reagents were added sequentially and reacted for 5 minutes.

그 결과, 도 1 및 표 1에서와 같이 알파-갈락토시다아제(Alpha-galactosidase)와 베타-갈락토시다아제(Beta-galactosidase)의 발현지수가 3 이상인 KBCBS1021 균주를 최종 선발하였다.As a result, as shown in Figure 1 and Table 1, the final selection of KBCBS1021 strain having an expression index of alpha-galactosidase and beta-galactosidase 3 or more.

균주Strain 9. Trypsin9. Trypsin 10. Alpha- chymotrypsin10.Alpha-chymotrypsin 13. Alpha- galactosidase13.alpha-galactosidase 14. Beta- galactosidase14.beta-galactosidase KBCBS1021KBCBS1021 1One 00 33 44

실시예Example 2. 유전학적 특성을 통한 균주의 동정 2. Identification of Strains Based on Genetic Characteristics

상기 실시예 1에서 선발한 KBCBS1021 균주를 도 2와 같이 영양 한천 배지(Nutrient agar, Difco, USA)에 접종하고 28℃에서 3일간 배양한 후 단일 균주임을 확인하였다. 상기 균주를 영양 배지(Nutrient broth)에 접종한 후 28℃에서 2일간 진탕 배양한 후 벤질 클로라이드법(Benzyl chloride method)을 변형하여 상기 균주의 게놈 DNA를 추출하였다. 추출된 게놈 DNA에서 상기 균주의 16S rRNA 유전자를 하기 표 2와 같은 방법으로 PCR(Polymerase Chain Reaction)을 시행하였으며, 사용된 프라이머는 표 3과 같다. KBCBS1021 strain selected in Example 1 was inoculated in nutrient agar medium (Nutrient agar, Difco, USA) as shown in Figure 2 and incubated for 3 days at 28 ℃ was confirmed to be a single strain. After inoculating the strain into nutrient broth, the culture was shaken at 28 ° C. for 2 days, and the genomic DNA of the strain was extracted by modifying the benzyl chloride method. 16S rRNA gene of the strain in the extracted genomic DNA was subjected to PCR (Polymerase Chain Reaction) in the same manner as Table 2, and the primers used are shown in Table 3.

온도Temperature 시간time cycle 수number of cycles 95℃ 95 2 min2 min 1 cycle1 cycle 94℃94 ℃ 30 sec30 sec 30 cycles30 cycles 58℃ 58 ℃ 30 sec30 sec 72℃72 ℃ 45 sec45 sec 72℃72 ℃ 5 min5 min 1 cycle1 cycle

서열번호SEQ ID NO: 프라이머primer 서열order 22 프라이머 27FPrimer 27F 5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 ' 33 프라이머 1492RPrimer 1492R 5'-GGTTACCTTGTTACGACT T-3'5'-GGTTACCTTGTTACGACT T-3 '

얻어진 16S rRNA PCR 산물은 4℃에 보관하였으며, PCR 증폭산물은 PCR Product Purification Kit(Qiagen)를 이용하여 정제하였고, 정제된 산물은 Genetic analyzer 3730xl(Applied biosystems)를 사용하여 염기서열을 분석하여 서열번호 1로 표시되는 16S rRNA 유전자 전염기서열(1,349bp)을 결정하였다. The obtained 16S rRNA PCR product was stored at 4 ° C, and the PCR amplification product was purified using PCR Product Purification Kit (Qiagen), and the purified product was analyzed by nucleotide sequence using Genetic analyzer 3730xl (Applied biosystems). The 16S rRNA gene infectious sequence (1,349bp) represented by 1 was determined.

상기 균주의 16S rRNA 염기서열에 대해 DDBJ/NCBI/Genebank의 데이터 베이스에서 상동성 검색을 수행하였다. 16S rRNA 유전자 염기서열에 기초한 분자 계통학적 분석결과, 마이크로박테리움 속(Microbacterium sp.)에 속하는 종으로 판명되었다. 특히, 상기 선발된 균주는 마이크로박테리움 하이드로더멀(Microbacterium hydrothemale) 0704C9-2T(HM222660)과 99%의 유연관계를 나타내는 것으로 확인되어 상기 선발된 균주를 ‘Microbacterium hydrothemale KBCBS1021’로 명명하고, 2016년 11월 22일자로 한국생명공학연구원 내 생물자원센터에 기탁하였다(수탁번호: KCTC18516P).Homology search was performed in the database of DDBJ / NCBI / Genebank for 16S rRNA sequences of the strain. Molecular phylogenetic analysis based on the 16S rRNA gene sequence revealed a species belonging to the genus Microbacterium sp. In particular, the selected strain was found to exhibit a 99% flexible relationship with Microbacterium hydrothemale 0704C9-2 T (HM222660), and the selected strain was referred to as' Microbacterium hydrothemale It was named KBCBS1021 ', and it was deposited on 22 November 2016 at the Biological Resource Center of Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology (Accession Number: KCTC18516P).

실시예Example 3. 대량 배양액의 제조 및 균주의 대량배양 3. Preparation of Mass Culture and Mass Culture of Strains

본 발명자들은 상기 실시예 2에서 선발한 균주의 대량 배양을 위하여 대량 배양기에 물 1 ton을 넣고 탄소원으로 포도당 2%, 질소원으로 효모추출물(Yeast extract) 0.5%, 무기염류로 MgSO4·7H2O 0.02% 및 K2HPO4 0.1%를 포함하고 있는 배지를 제조한 후 121℃에 15분간 고압멸균 후 M. hydrothemale KBCBS1021 균을 접종하였고 30℃에서 100rpm으로 48시간동안 배양한 후, 영양 한천 배지를 이용하여 단계 희석 도말법으로 배양액 내 밀도를 측정하였다.The present inventors put 1 ton of water into the mass incubator for mass cultivation of the strain selected in Example 2, 2% glucose as carbon source, 0.5% yeast extract as nitrogen source, MgSO 4 · 7H 2 O as inorganic salt. After preparing a medium containing 0.02% and K 2 HPO 4 0.1%, autoclaved at 121 ℃ for 15 minutes, inoculated M. hydrothemale KBCBS1021 bacteria and incubated for 48 hours at 100 rpm at 30 ℃, and then nutrient agar medium The density in the culture was measured by the step dilution smear method.

상기와 같이 대량 배양 배지를 제조한 후 M. hydrothemale KBCBS1021 균주를 접종하여 48시간 동안 배양하여 일반적인 LB broth 배지에서 배양한 결과와 비교하여 표 4에 나타내었다.After preparing the mass culture medium as described above, inoculated with M. hydrothemale KBCBS1021 strain and incubated for 48 hours, it is shown in Table 4 compared with the result of culturing in the general LB broth medium.

균주명Strain name LB(LB ( LuriaLuria -- bertanibertani ) broth) broth 대량배지Mass media (( TMTM )) M. hydrothemale KBCBS1021 M. hydrothemale KBCBS1021 5.3×106 cfu/㎖5.3 × 10 6 cfu / ml 1.6×109 cfu/㎖1.6 × 10 9 cfu / ml

표 4와 같이 상기 대량배양용 배지는 LB broth에서 배양한 밀도에 비하여 높은 밀도를 나타내었다. As shown in Table 4, the mass culture medium showed a higher density than the density cultured in LB broth.

실시예Example 4.  4. 항영양인자가Anti-nutritional factors 제어된 발효 대두박 Controlled Fermented Soybean Meal of 제조 Produce

본 발명자들은 상기 실시예 3 에서 제조한 대량 배양액을 이용하여 탈피대두박 내에 함유되어 있는 항영양인자 제어를 위해 탈피대두박 800Kg, 탄소원으로 포도당 2%, 질소원으로 효모추출물(Yeast extract) 0.5%, 무기염류로 MgSO4·7H2O 0.02% 및 K2HPO4 0.1%를 첨가하고, 상기 실시예 3에 의한 마이크로박테리움 하이드로더멀 1021(M. hydrothemale KBCBS1021) 대량 배양액 150ℓ를 1 ton짜리 발효기에 넣고 혼합한 다음, 매 시간마다 10분간 혼합하면서 3일간 발효시켰다. 발효 종료 후, 매시간 마다 45분간 혼합하여 3일간 건조시킨 후 항영양인자가 제어된 발효 대두박을 수집하였다. 항영양인자의 제어 능력을 검증하기 위해 배양액 혼합 전 탈피대두박(무처리)을 대조군으로 하고, 대두박 발효 종료 후 시료를 샘플링하여 각 시료별 항영양인자(항트립신, 라피노스, 스타키오스) 분석을 실시해 하기 표 5에 나타내었다. The inventors of the present invention, using the large-volume broth prepared in Example 3 to control the anti-nutritional factors contained in the soybean soybean meal 800Kg of molten soybean meal, 2% glucose as a carbon source, 0.5% yeast extract (Yeast extract) as a nitrogen source, inorganic salts 0.02% MgSO 4 7H 2 O and 0.1% K 2 HPO 4 were added, and 150 l of the microbacterium hydrodermal 1021 ( M. hydrothemale KBCBS1021) bulk culture medium according to Example 3 was added to a 1 ton fermenter and mixed. It was fermented for 3 days with mixing for 10 minutes every hour. After fermentation, the mixture was mixed for 45 minutes every hour, dried for 3 days, and the fermented soybean meal with controlled anti-nutritional factors was collected. In order to verify the control ability of the anti-nutritional factors, the treated soybean meal (non-treated) was used as a control before mixing the culture medium, and the samples were sampled after the fermentation of soybean meal. 5 is shown.

구분division 탈피대두박Stripped Soybean Meal M. hydrothemale
KBCBS1021 발효 대두박
M. hydrothemale
KBCBS1021 Fermented Soybean Meal
항트립신인자(㎎/g)Antitrypsin factor (mg / g) 3.273.27 0.340.34 라피노스(%)Raffinose (%) 0.270.27 0.020.02 스타키오스(%)Starchios (%) 0.500.50 0.100.10

표 5와 같이, M. hydrothemale KBCBS1021 균주를 이용하여 발효한 대두박의 항영양인자 함량은 발효하기 전과 비교하였을 때 현저하게 낮아져, 본 발명에 의한 대두박 발효는 항영양인자 저감 효과를 갖는 것으로 확인되었다. As shown in Table 5, the anti-nutritional factor content of soybean meal fermented using M. hydrothemale KBCBS1021 strain is significantly lower than before fermentation, according to the present invention. Soybean meal fermentation was found to have an anti-nutritive effect.

한국생명공학연구원Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology KCTC18516PKCTC18516P 2016112220161122

<110> Korea Bio Chemical Co, Ltd. <120> Method for preparing fermented soybean meal for replacing fishmeal using Anti-Nutritional Factor controlling strain Microbacterium hydrothemale KBCBS1021 <130> 2017P-08-033 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1349 <212> RNA <213> Unknown <220> <223> Microbacterium hydrothemale KBCB1021 <400> 1 gcttgcttgg tggatcagtg gcgaacgggt gagtaacacg tgagcaacct gccctggact 60 ctgggataag cgctggaaac ggcgtctaat actggatatg agctctcatc gcatggtggg 120 ggttggaaag attttttggt ctgggatggg ctcgcggcct atcagcttgt tggtgaggta 180 atggctcacc aaggcgtcga cgggtagccg gcctgagagg gtgaccggcc acactgggac 240 tgagacacgg cccagactcc tacgggaggc agcagtgggg aatattgcac aatgggcgaa 300 agcctgatgc agcaacgccg cgtgagggat gacggccttc gggttgtaaa cctcttttag 360 cagggaagaa gcgaaagtga cggtacctgc agaaaaagcg ccggctaact acgtgccagc 420 agccgcggta atacgtaggg cgcaagcgtt atccggaatt attgggcgta aagagctcgt 480 aggcggtttg tcgcgtctgc tgtgaaatcc cgaggctcaa cctcgggcct gcagtgggta 540 cgggcagact agagtgcggt aggggagatt ggaattcctg gtgtagcggt ggaatgcgca 600 gatatcagga ggaacaccga tggcgaaggc agatctctgg gccgtaactg acgctgagga 660 gcgaaagggt ggggagcaaa caggcttaga taccctggta gtccaccccg taaacgttgg 720 gaactagttg tggggaccat tccacggttt ccgtgacgca gctaacgcat taagttcccc 780 gcctggggag tacggccgca aggctaaaac tcaaaggaat tgacggggac ccgcacaagc 840 ggcggagcat gcggattaat tcgatgcaac gcgaagaacc ttaccaaggc ttgacataca 900 ccagaacggg ccagaaatgg tcaactcttt ggacactggt gaacaggtgg tgcatggttg 960 tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa ccctcgttct 1020 atgttgccag cacgtaatgg tgggaactca tgggatactg ccggggtcaa ctcggaggaa 1080 ggtggggatg acgtcaaatc atcatgcccc ttatgtcttg ggcttcacgc atgctacaat 1140 ggccggtaca aagggctgca ataccgtgag gtggagcgaa tcccaaaaag ccggtcccag 1200 ttcggattga ggtctgcaac tcgacctcat gaagtcggag tcgctagtaa tcgcagatca 1260 gcaacgctgc ggtgaatacg ttcccgggtc ttgtacacac cgcccgtcaa gtcatgaaag 1320 tcggtaacac ctgaagccgg tggcccaac 1349 <110> Korea Bio Chemical Co, Ltd. <120> Method for preparing fermented soybean meal for replacing          fishmeal using Anti-Nutritional Factor controlling strain          Microbacterium hydrothemale KBCBS1021 <130> 2017P-08-033 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1349 <212> RNA <213> Unknown <220> <223> Microbacterium hydrothemale KBCB1021 <400> 1 gcttgcttgg tggatcagtg gcgaacgggt gagtaacacg tgagcaacct gccctggact 60 ctgggataag cgctggaaac ggcgtctaat actggatatg agctctcatc gcatggtggg 120 ggttggaaag attttttggt ctgggatggg ctcgcggcct atcagcttgt tggtgaggta 180 atggctcacc aaggcgtcga cgggtagccg gcctgagagg gtgaccggcc acactgggac 240 tgagacacgg cccagactcc tacgggaggc agcagtgggg aatattgcac aatgggcgaa 300 agcctgatgc agcaacgccg cgtgagggat gacggccttc gggttgtaaa cctcttttag 360 cagggaagaa gcgaaagtga cggtacctgc agaaaaagcg ccggctaact acgtgccagc 420 agccgcggta atacgtaggg cgcaagcgtt atccggaatt attgggcgta aagagctcgt 480 aggcggtttg tcgcgtctgc tgtgaaatcc cgaggctcaa cctcgggcct gcagtgggta 540 cgggcagact agagtgcggt aggggagatt ggaattcctg gtgtagcggt ggaatgcgca 600 gatatcagga ggaacaccga tggcgaaggc agatctctgg gccgtaactg acgctgagga 660 gcgaaagggt ggggagcaaa caggcttaga taccctggta gtccaccccg taaacgttgg 720 gaactagttg tggggaccat tccacggttt ccgtgacgca gctaacgcat taagttcccc 780 gcctggggag tacggccgca aggctaaaac tcaaaggaat tgacggggac ccgcacaagc 840 ggcggagcat gcggattaat tcgatgcaac gcgaagaacc ttaccaaggc ttgacataca 900 ccagaacggg ccagaaatgg tcaactcttt ggacactggt gaacaggtgg tgcatggttg 960 tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa ccctcgttct 1020 atgttgccag cacgtaatgg tgggaactca tgggatactg ccggggtcaa ctcggaggaa 1080 ggtggggatg acgtcaaatc atcatgcccc ttatgtcttg ggcttcacgc atgctacaat 1140 ggccggtaca aagggctgca ataccgtgag gtggagcgaa tcccaaaaag ccggtcccag 1200 ttcggattga ggtctgcaac tcgacctcat gaagtcggag tcgctagtaa tcgcagatca 1260 gcaacgctgc ggtgaatacg ttcccgggtc ttgtacacac cgcccgtcaa gtcatgaaag 1320 tcggtaacac ctgaagccgg tggcccaac 1349

Claims (5)

수탁번호 KCTC18516P로 기탁된 마이크로박테리움 하이드로더멀(Microbacterium hydrothemale) KBCBS1021 균주.
Microbacterium hydrothemale KBCBS1021 strain deposited with accession number KCTC18516P.
제 1항의 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 대두박 내 항영양인자(anti-nutritional factor, ANF) 활성 억제용 조성물.
A composition for inhibiting the anti-nutritional factor (ANF) activity in soybean meal containing the strain of claim 1 or a culture thereof as an active ingredient.
제 2항에 있어서, 상기 항영양인자는 트립신 저해제(trypsin inhibitor; TI), 라피노스, 스타키오스, 렉틴, 요소 분해효소, 리폭시제나제(lipoxygenase), 시안화글루코사이드 및 항비타민 인자로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, 조성물.
The method of claim 2, wherein the anti-nutritive factor is selected from the group consisting of trypsin inhibitor (TI), raffinose, stachiose, lectin, urease, lipoxygenase, glucocyanide cyanide and anti-vitamin factor Any one or more.
하기 단계를 포함하는 발효 대두박의 제조 방법:
1) 제1항의 균주를 배양하여 배양물을 제조하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 배양물을 탈피 대두박과 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)의 혼합물을 발효하는 단계.
Method for producing a fermented soybean meal comprising the following steps:
1) culturing the strain of claim 1 to prepare a culture;
2) mixing the culture of step 1) with stripped soybean meal to prepare a mixture; And
3) fermenting the mixture of step 2).
제 4항의 방법으로 제조된 발효 대두박을 유효성분으로 함유하는 사료용 조성물.
Feed composition containing a fermented soybean meal prepared by the method of claim 4 as an active ingredient.
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