KR102010192B1 - A useful as live-food copepod, Apocyclops royi of aquaculture species and mass culturing method - Google Patents

A useful as live-food copepod, Apocyclops royi of aquaculture species and mass culturing method Download PDF

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박흠기
박진철
이충일
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강릉원주대학교산학협력단
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Abstract

The present invention relates to a method for culturing Apocyclops royi, a novel food organism applicable to early stages of useful marine aquaculture varieties. Through the cultivation method according to the present invention, it is possible to solve instability of artemia supply in an aquaculture industry by replacing an existing food organism, artemia, which totally depends on imports, and to secure the quality of Apocyclops royi. Therefore, it is possible to greatly contribute to the enhancement of the growth and survival rate of early life cycles of aquaculture varieties.

Description

해산 양식 품종의 먹이생물로 유용한 요각류(아포사이클롭스 로이) 및 이의 대량 배양 방법{A useful as live-food copepod, Apocyclops royi of aquaculture species and mass culturing method}A useful as live-food copepod, Apocyclops royi of aquaculture species and mass culturing method}

본 발명은 해산 양식 품종의 먹이생물로 유용한 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)의 대량 배양 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a mass culture method of Apocyclops royi useful as a food organism of aquaculture culture varieties.

해산 양식생물의 인공종묘생산과정에서 먹이생물을 안정적으로 공급하는 것은 초기 단계에서 그들의 성장 및 생존을 결정짓는 중요한 일이다. 일반적으로 종묘생산과정에서 동물먹이생물의 공급 계열은 초기 자치어 및 갑각류 유생단계에서는 rotifer를 공급하며, 후기 시기에는 Artemia의 난(cyst)을 부화 시킨 유생(nauplius)를 공급하고 있다. 윤충류인 rotifer(Brachionus plicatilis, 130-340㎛ 및 B. rotundiformis, 100-210㎛)는 고밀도 대량 배양기술이 개발되어 있어 종묘생산 시 먹이공급에 큰 문제가 없으며, Artemia는 cyst 형태로 가공제품이 출시되는데 장기간 보관이 가능하고 필요시에 cyst를 쉽게 부화시켜 먹이로 공급할 수 있기 때문에 세계적으로 광범위하게 사용되고 있다.The stable supply of food organisms in the production of artificial seedlings of aquaculture is an important determinant of their growth and survival in the early stages. In general, in the production of seedlings, the feed family of animal feed supplies rotifers in the early stages of larvae and crustacean larvae, and the larvae that hatch the cysts of Artemia in later stages. Rotifer ( Brachionus plicatilis , 130-340㎛ and B. rotundiformis , 100-210㎛) have developed high density mass culture technology, so there is no big problem in feeding during seedling production, and Artemia can be stored in cyst form for long-term storage. It is widely used all over the world because it can be easily hatched and supplied as food when needed.

하지만 Artemia의 cyst는 자연상태에서 채집이 되어 상품화가 되고 있기 때문에 환경적인 문제가 발생할 경우에는 그 생산량을 예측할 수가 없어 수급의 불균형 및 가격 파동과 같은 현상이 유발될 수 있다. 전 세계적으로 2만개 이상의 종묘생산 시장에서 사용되고 있는 Artemia는 연간 약 2천여톤이 소비되며, 이 중 대부분이 미국의 ‘Great Salt Lake’에서 생산되는 것으로 알려져 있다. 그러나 최근 무분별한 개발로 인한 Artemia 서식지의 환경파괴와 그에 따른 환경단체의 반대, 엘리뇨 현상 및 이상 기후에 의해 그 생산량의 변동을 예측할 수 없어 수급의 문제가 대두되고 있다. 실제로 1990년 후반부터 2000년대 초반까지는 Artemia cyst의 생산량이 과거 10% 수준에 머물게 됨으로써 그 공급 단가가 평균 5~6배 상승하여 국내 양식산업에 경영 압박요인으로 작용한 사례가 있다. 아울러, 최근 일부 동남아시아에서 생산된 Artemia cyst도 점차적으로 자국의 종묘생산용을 제외하고는 수출용 제품은 제한하려는 예정이어서 그 문제성은 매우 심각하다고 할 수 있다.However, artemia cysts are collected in the natural state and commercialized. If environmental problems occur, their production cannot be predicted, which can lead to phenomena such as supply and demand imbalances and price fluctuations. Artemia, which is used in more than 20,000 seedling production markets worldwide, consumes about 2,000 tons per year, most of which is known to be produced in the Great Salt Lake in the United States. Recently, however, supply and demand problems have arisen because the production of the Artemia habitat has not been predicted due to indiscriminate development and opposition from environmental groups, El Niño and abnormal weather. In fact, from the late 1990s to the early 2000s, the production of artemia cyst remained at the 10% level in the past, resulting in an increase in supply prices by an average of 5 to 6 times, putting pressure on the domestic aquaculture industry. In addition, the Artemia cyst recently produced in some Southeast Asia will gradually limit the export products, except for domestic seed production, the problem is very serious.

이와 같은 상황 속에서 우리나라의 경우, Artemia를 100% 전량 수입하여 사용하고 있기 때문에 국제적인 환경변화로 인한 Artemia의 수급에 많은 어려움이 예상되며, 실제로 통계청 자료에 의하면 최근 Artemia cyst 수입량이 점차 감소하고 있는 실정이다.In this situation, 100% of the artemia is imported and used in Korea, so it is expected that there will be a lot of difficulties in supplying and receiving artemia due to the international environmental change. to be.

이러한 문제점을 해결하기 위하여 최근 Artemia를 대체할 새로운 먹이생물의 연구가 활발히 진행 중에 있다. 주로 단각류(Amphipoda), 지각류(Cladocera) 및 요각류(Copepoda)가 후보 먹이생물로 연구되고 있다. 하지만 단각류는 일부 유망종(Gammarus pulex, Byblis japonicusEriopisa chilkensis)이 실험실 규모로 배양되었지만 변태를 통한 성체까지의 발달단계가 너무 길기 때문에 대량 배양이 불가능하며, 또한 수중 내 유기물을 주로 섭취하는 등 배양 조건이 매우 까다로운 것으로 알려져 있어 널리 이용되고 있지는 않다. 또한 지각류는 단각류나 요각류에 비해 무성생식을 하기 때문에 세대교번이 빠르고, 성장률이 높아 다른 후보 종들에 비해 대량 배양의 가능성이 높으나 담수종이기 때문에 해산 양식 대상종에게 공급할 시 갑작스러운 염분 변화에 의한 활력 저하로 폐사하기 때문에 적합한 먹이생물이라 할 수 없다.In order to solve this problem, researches on new food organisms to replace artemia have been actively conducted. Amphipods, cladocera and copepoda are mainly studied as candidate foods. But unipods have some promising species ( Gammarus pulex , Byblis japonicus and Eriopisa chilkensis ) was cultured on a laboratory scale, but the developmental stage to adulthood through metamorphosis is so long that mass cultivation is impossible, and it is not widely used because it is known to be very demanding in cultivation conditions such as mainly consuming organic substances in water. In addition, since crustaceans reproduce asexually compared to monopods and copepods, generational alternation is faster and growth rate is higher than that of other candidate species. It is not a suitable food organism because it dies due to reduced vitality.

이에 반해 요각류는 전 생활사(유생 nauplius→중간단계 copepodite→성체 Adult)에 의해 그 크기가 다양하여 양식 품종에 맞게 공급할 수 있으며, 광염성 및 광온성 등의 내성력이 강하여 인위적인 배양이 쉽고, 다양한 영양성분(단백질, 칼슘, 색소, 비타민, 미량원소, 지방산 등)이 어떠한 먹이생물들보다 우수한 것으로 알려져 있다. 특히, 해산 양식종에게 있어 필수 지방산인 n-3 HUFA(EPA, DHA 등)는 매우 중요한 영양소인데 현재 양식 현장에서 이용되고 있는 Artemia나 대체 먹이생물의 후보 종인 지각류는 그 함량 자체가 매우 낮아 지질영양강화를 통해 공급되고 있지만 요각류는 영양강화를 행하지 않아도 오히려 영양강화된 Artemia 보다도 필수지방산의 함량이 높은 특징을 가지고 있다. 실제 연구 사례를 보면, 다양한 어류 및 갑각류의 성장, 생존률 향상은 물론 변태율, 체색 색소형성 비율 증가에 대해 우수한 효과가 있는 것으로 보고되고 있다.On the other hand, copepods can be supplied according to aquaculture varieties due to their various life spans (larvae nauplius → middle stage copepodite → adult adult). Ingredients (proteins, calcium, pigments, vitamins, trace elements, fatty acids, etc.) are known to be superior to any food organism. In particular, n-3 HUFA (EPA, DHA, etc.), which is an essential fatty acid for marine aquaculture species, is a very important nutrient. Although it is supplied through nutritional enhancement, copepods have a higher content of essential fatty acids than nutrient-enhanced artemia even without nutritional enhancement. In fact, it is reported that there is an excellent effect on the growth and survival rate of various fish and crustaceans as well as the increase in metamorphosis and color pigmentation rate.

이처럼 다양한 장점을 지닌 요각류가 Artemia를 대체하여 해산 양식현장에서 널리 이용되지 못했던 이유는 몇 가지가 있다. 주로 자연에서 그물망을 통해 요각류를 채집하여 공급하는 실정이기 때문에 계절 및 날씨에 영향으로 채집하는 양도 매우 불안정 하였으며, 채집 시 같이 혼획된 유해한 기생생물(해적생물)에 대한 위험성이 있기 때문에 계획적으로 이루어져야 하는 인공종묘 생산장에서 요각류의 사용이 극히 제한적이었던 것이다. There are several reasons why copepods with such various advantages have not been widely used in marine farming in place of Artemia. Since the nature of the collection of copepods is mainly collected through the net in nature, the amount of collection is also very unstable due to the influence of seasons and weather, and there is a danger of harmful parasitic organisms (pirates) that are caught during the collection. The use of copepods in artificial seedling production sites was extremely limited.

만일 특정 요각류의 단일 종을 확보하여 그에 따른 대량 배양기술력을 확립한다면 다양한 장점을 지닌 요각류로 말미암아 해산 인공종묘생산에 있어 매우 긍정적인 효과가 나타날 수 있게 된다.If a single species of copepod is secured and the mass cultivation technology is established accordingly, copepods with various advantages can have a very positive effect on the production of artificial artificial seedlings.

이러한 관점에서 기존 먹이생물로 널리 이용되고 있는 Artemia를 대체하기 위한 방안으로 단일 요각류를 활용한 신규 먹이생물의 개발이 필연적으로 요구되고 있다. From this point of view, the development of new feed organisms using single copepods is inevitably required as a way to replace Artemia, which is widely used as a prey.

신규 동물성 먹이생물을 개발하기 위해서는 염분, 수온 등과 같은 다양한 환경 조건들을 규명해야만 대량 배양이 가능하여 양식현장에서 이용될 수 있다. 특히, 먹이에 대한 부분이 중요한데, 인위적인 대량 배양 과정에서 먹이 공급비가 총 생산경비의 약 87%를 차지한다는 보고가 있는 만큼 경제성이 있는 먹이원을 공급해야만 한다. 하지만, 요각류의 경우 rotifer, Artemia의 배양에 사용되는 값이 싸면서 시중에서 쉽게 구할 수 있는 농축 Chlorella로는 배양이 되지 않으며, 자가영양방식으로 배양되는 Tetraselmis sp.와 같은 종으로만 배양이 되는 것으로 알려져 있어, 경제적이면서 효율적인 대체 먹이원을 공급해야할 필요가 있다. In order to develop new animal feed organisms, it is necessary to identify various environmental conditions such as salinity, water temperature, etc., so that they can be used in aquaculture farms. In particular, the part of food is important, and it is necessary to provide an economical source of food as it is reported that the food supply costs account for about 87% of the total production cost in the artificial mass culture process. However, in the case of copepods, it is known that it is not cultivated by the commercially available concentrated chlorella , which is cheaply used for the culture of rotifer and artemia , but only by the same species as Tetraselmis sp. There is a need to provide an alternative source of economic and efficient food.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하고자 안출된 것으로, 해산 양식품종의 초기 생활사 단계에서 공급되는 Artemia를 대체할 수 있는 신규 먹이생물을 개발하여 해산 인공 종묘생산 현장에서 산업적으로 사용하는 것을 목적으로 한다. The present invention has been made to solve the above problems, and aims to develop a new food organism that can replace Artemia supplied in the early life history stages of the marine culture breed, and to use it industrially in the production of artificial seedlings. .

또한, 본 발명은 Artemia의 대체 먹이생물로서 주목 받고 있는 기수산 요각류인 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)의 먹이원을 새롭게 개발하여 대량생산 시 발생되는 먹이원의 생산비용을 줄이고, 상기 먹이원 내 원료를 통해 지질 영양강화를 행하지 않아도 그에 따른 효과를 볼 수 있는 배양 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다. 아울러, 개발된 먹이원을 통해 20리터 이상의 규모에서의 대량 배양 가능성을 제시할 수 있다.In addition, the present invention to reduce the production cost of the food source generated during mass production by newly developing a food source of Apocyclops royi , a radish copepod attracting attention as an alternative food organism of Artemia, It is an object of the present invention to provide a culture method that can see the effect even without performing lipid nutrition enhancement. In addition, the developed food source can offer the possibility of mass cultivation on a scale of 20 liters or more.

본 발명에서는 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)를 배양하는 단계를 포함하며,In the present invention includes the step of culturing Apocyclops royi ,

먹이로 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica) 및 광합성 세균의 혼합물을 사용하는 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)의 배양 방법을 제공한다. Tetraselmis as food suecica ) And Apocyclops royi using a mixture of photosynthetic bacteria Provide a culture method.

또한, 본 발명에서는 전술한 배양 방법에 의해 배양된 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)를 해양 양식품종의 먹이로 공급하는 양식 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a culture method for supplying Apocyclops royi cultured by the above-mentioned culture method as a food for marine aquaculture varieties.

또한, 본 발명에서는 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)를 배양하는 단계를 포함하며,In addition, the present invention includes the step of culturing Apocyclops royi ,

먹이로 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica) 및 광합성 세균의 혼합물을 사용하고, Tetraselmis as food suecica ) And using a mixture of photosynthetic bacteria,

상기 배양은 10 리터 이상의 배양조에서 수행되는 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)의 대량 배양 방법을 제공한다. The culture is carried out by Apocyclops royi performed in a culture vessel of 10 liters or more. Provided is a mass culture method.

본 발명에서는 해산 유용 양식품종의 양식 초기 단계에 적용 가능한 신규 먹이생물인 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)를 분리하고 최적의 배양조건을 구명하여 대량 배양 기술을 제시하였다.In the present invention, Apocyclops royi , a new food organism applicable to the early stages of aquaculture useful aquaculture varieties, was isolated and the optimal culture conditions were determined to suggest a mass culture technique.

특히, 본 발명에서는 배양 과정 중 양적으로 대량으로 증식시킬 수 있는 경제성 있는 먹이를 구명하였으며, 이를 통해 생산원가를 절감할 수 있다. Particularly, in the present invention, the economical food which can be grown in a large amount in a cultivation process has been sought, thereby reducing the production cost.

본 발명에 따른 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi) 및 이의 대량 배양 기법을 적용하는 경우, 전량 수입에 의존하는 기존 먹이생물인 알테미아(Artemia)를 대체하여 양식산업에서 알테미아 수급의 불안정성을 해결할 수 있으며, 질적으로 우수한 신규 먹이생물의 확보를 통해 해산 양식품종의 초기 생활사 단계에서 성장 및 생존률 향상에 크게 기여할 수 있는 등의 유용한 효과를 제공할 수 있다. Apocyclops Roy according to the present invention royi ) and its mass cultivation techniques can replace the existing food organism, Artemia, which relies on imports, to solve the instability of the supply of althemia in the aquaculture industry, and to secure new foods with high quality. It can provide useful effects, such as a significant contribution to growth and survival rates in the early stages of life cycle of aquaculture.

도 1은 요각류(Apocyclops royi)의 형태학적 특성을 나타내는 현미경 사진이다.
도 2는 요각류(Apocyclops royi)의 염분 조건에 따른 성장곡선 그래프이다.
도 3은 요각류(Apocyclops royi)의 수온 조건에 따른 성장곡선 그래프이다.
도 4는 요각류(Apocyclops royi)의 먹이종류에 따른 성장곡선 그래프이다.
도 5는 요각류(Apocyclops royi)의 대량 배양 시 (a) 요각류 유생수의 개체밀도 변화 그래프이다.
도 6은 요각류(Apocyclops royi)의 대량 배양 시 (b) 요각류의 총 개체수의 변화 그래프이다.
1 shows copepods ( Apocyclops) royi ) is a micrograph showing the morphological characteristics.
2 shows copepods ( Apocyclops) royi ) is a graph of growth curve according to salinity conditions.
Figure 3 Apocyclops royi ) is a graph of growth curve according to water temperature conditions.
4 shows copepods ( Apocyclops) royi ) is a graph of growth curve according to food type.
Figure 5 Apocyclops royi ) (a) Population density change graph of copepod larvae during large-scale cultivation.
6 shows copepods ( Apocyclops) royi ) is a graph of the change in total population of copepods (b).

본 발명은 요각류 중 단일 종인 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi) 종을 확보하고, Artemia를 대체하기 위한 전제조건으로 통상의 인공종묘 생산장에서 대량 배양할 수 있는 기법을 제시하였으며, 대량 배양 최적조건을 규명하고, 상기 규명된 최적조건으로 20리터 규모에서 대량 배양 실험을 통해 검증하였다.The present invention is a single species of copepods ( Apocyclops Roy) royi ) species, and a technique for mass cultivation in a conventional artificial seedling production plant as a prerequisite for replacing artemia , and the optimum conditions for mass cultivation were identified, and the optimum conditions for Verified by mass culture experiment.

이하, 본 발명의 구성을 구체적으로 설명한다.EMBODIMENT OF THE INVENTION Hereinafter, the structure of this invention is demonstrated concretely.

본 발명은 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi , A. royi)를 배양하는 단계를 포함하는 아포사이클롭스 로이(A. royi)의 배양 방법에 관한 것이다. The present invention is Apocyclops Roy royi , A. royi ) of the Apocyclops Roy ( A. royi ) comprising the step of culturing It relates to a culture method.

본 발명에서 아포사이클롭스 로이(A. royi)는 해산 유용 양식 품종인 어류 자어, 치어 및 갑각류 유생 초기 단계에서 먹이로 이용 가능하다.In the present invention, Apocyclops Roy ( A. royi ) is available as a food in the early stages of fish larvae, fry and crustacean larvae useful marine products.

이러한 아포사이클롭스 로이(A. royi)는 절지동물문(Arthropoda), 요각아강 또는 요각류(Copepoda), 검물벼룩목(Cyclopoida) 및 아포사이클롭스 속(Apocyclops)에 속하며, 그 크기는 최소 110㎛ 및 최대 1130㎛이다. 상기 A. royi는 DHA 등의 함량이 Artemia와 비교하여 매우 우수하여 해양 양식시장에서 먹이로 매우 유용하다. A. royi belongs to Arthropoda, copepod or Copepoda, Cyclopoida and Apocyclops, and its size is at least 110 μm and at most 1130 μm. to be. The A. royi is very useful as a food in the marine aquaculture market because the content of DHA, etc. is very excellent compared to Artemia.

상기 아포사이클롭스 로이(A. royi)는 요각아강에 속하는 종이기 때문에 도 1에 나타난 바와 같이, 몸 전체는 피갑을 가지고 있으며, 피갑의 탈피를 통해 유생 단계에서 성체까지 성장을 행한다. 유생(왼쪽 사진)은 비교적 원형에 가까운 몸 형태를 가졌으며 머리, 가슴 등의 경계선이 불분명한 특징을 보이나, 성체(오른쪽 사진)는 체절이 나눠져 있어 경계선으로 말미암아 몸이 나눠진 것을 확인할 수 있다. As the Apocyclops Roy ( A. royi ) is a species belonging to the subangular subclass, as shown in Figure 1, the entire body has a crust, and the growth from the larval stage to the adult through the peeling of the crust. The larvae (pictured on the left) had a relatively circular body shape, and the borders of the head and chest were unclear, but the adults (pictured on the right) had a segmented body, indicating that the body was divided by the boundary.

도 1의 성체(오른쪽 사진)는 암컷으로 몸 하단부분에 양쪽으로 둥글한 형태의 알을 많이 달고 다니며 보통 알은 하나처럼 붙어 있어서 포낭주머니(egg sac, 알주머니)라고 부르는데 이것이 없는 개체는 보통 수컷일 확률이 높다. 또한 몸의 중상단 부위에 1개의 붉은 안점(눈)을 가지고 있으며 몸 전체에 나뭇가지처럼 나와 있는 부속지로 인해 먹이 채집, 유영 기능을 수행한다.The adult of Figure 1 (pictured right) is a female with a lot of round eggs on both sides of the lower part of the body is usually attached as one egg called a sac (egg sac, egg sacs) without this object is usually a male The probability is high. In addition, it has one red eye (eye) in the upper middle part of the body and performs food gathering and swimming functions due to appendages that appear like branches throughout the body.

이러한 아포사이클롭스 로이(A. royi)의 형태학적 특성을 살펴보면, 상기 A. royi의 수중 내에서 유영하는 습성은 원운동이나 직선운동을 규칙적으로 행하지 않고 물벼룩처럼 자유롭게 튀어서 다닌다. 빛을 주게 되면 자극에 의해 움직임이 둔해지며, 배양액의 표층보다는 다소 낮은 중, 저층에 몰려있는 특성을 보인다. 요각류의 번식 방법은 유성 생식으로 수컷이 암컷과 교미하여 암컷에서 수정되면 꼬리(미절) 부분에 양쪽으로 포낭주머니를 달게 된다. 포낭주머니에는 다수의 알이 서로 붙어있으며 알이 충분히 성숙되었을 때 암컷은 포낭주머니를 바닥에 떨어뜨려서 알을 부화시킨다. 갓 부화된 유생일지라도 유영 기능이 약하지 않아 바닥에 가라앉지 않으며, 보통 1 내지 2주 사이마다 각 발달단계(유생→중간단계→성체)로 탈피를 통해 성장해 나간다.Looking at the morphological characteristics of the A. royi ( A. royi ), the habit of swimming in the water of the A. royi is freely bouncing like water flea without regular or circular motion. When light is given, the movement is slowed down by the stimulus, and it appears to be concentrated in the lower and middle layers rather than the surface layer of the culture medium. The copepod breeding method is sexual reproduction, and when males mate with females and fertilize in females, cyst sacs are attached to both sides of tails. A large number of eggs are attached to each other, and when the eggs are mature enough, the female hatches the eggs by dropping them. Even freshly hatched larvae do not sink to the bottom because of their poor swimming function, and usually grow through molting at each stage of development (larvae → intermediate → adult) every 1 to 2 weeks.

본 발명에서는 이러한 아포사이클롭스 로이(A. royi)를 배양하는 방법을 제공할 수 있다. 상기 배양은 A. royi를 배양액에 접종한 후 인큐베이터에서 배양할 수 있다. 본 발명에 따른 A. royi는 대량 배양에 적합하며, 이때 대량 배양은 10 L 규모 이상, 또는 20 L 이상의 규모를 의미할 수 있다. The present invention can provide a method for culturing such Apocyclops Roy ( A. royi ). The culture may be incubated in the incubator after inoculating A. royi in the culture. A. royi according to the present invention is suitable for mass culture, where the mass culture may mean a scale of 10 L or more, or 20 L or more.

일 구체예에서, 상기 배양시 먹이로 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica) 및 광합성 세균의 혼합물을 사용할 수 있다. 상기 광합성 세균(photosynthetic bacteria)은 고등식물처럼 빛에너지를 이용하여 탄산동화하는 세균으로, 시중에서 쉽게 구할 수 있어 경제성을 확보할 수 있으며, 배양시 A. royi의 개체수를 보다 증대시킬 수 있다. 특히, 상기 혼합물을 먹이로 사용하여 A. royi 내의 지질 영양 성분(DHA, n-3 HUFA 등)을 보다 향상시킬 수 있다. 기존 먹이생물인 Artemia(rotier 포함)에서는 지질 영양강화를 반드시 행하였던 것에 비해 본 발명의 A. royi에서는 이러한 과정이 생략되므로, 개체 수준에서의 양적 및 질적 우수함은 물론이며 양식현장에서는 경제성과 효율성을 동시에 충족시킬 수 있다.In one embodiment, Tetraselmis suecica as food for the culture And mixtures of photosynthetic bacteria can be used. The photosynthetic bacteria are carbonate assimilated bacteria using light energy, such as higher plants, and can be easily obtained on the market, thereby securing economic feasibility and increasing the population of A. royi in culture. In particular, the mixture can be used as a food to further enhance the lipid nutrients (DHA, n-3 HUFA, etc.) in A. royi . In the case of Artemia (including rotier), which is an existing food organism, this process is omitted in the A. royi of the present invention, as well as the quantitative and qualitative excellence at the individual level. Can be met at the same time.

상기 광합성 세균은 스키조키트리움 속(Schizochytrium sp.)및 크립터코디니움 속(Crypthecodinium sp.)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다. The photosynthetic bacteria may be at least one selected from the group consisting of the genus Schizochytrium sp. And the genus Crypthecodinium sp.

또한, 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica) 및 광합성 세균의 혼합 비율은 건조중량을 기준으로 1:0.1 내지 1:2, 1:0.5 내지 1:1.5 또는 1:1 내지 1:1.5일 수 있다. 상기 범위에서 배양 효율이 우수하여 개체수를 최대화할 수 있고, 영양이 우수한 A. royi를 제조할 수 있으며, 추후 해양 양식품종의 양식시 성장과 생존율을 개선시킬 수 있다. Also, Tetraselmis suecica ) And the mixing ratio of photosynthetic bacteria may be 1: 0.1 to 1: 2, 1: 0.5 to 1: 1.5 or 1: 1 to 1: 1.5 based on dry weight. In this range, it is possible to maximize the number of populations by cultivating efficiency, to produce a nutritious A. royi , and to improve the growth and survival rate of marine aquaculture species in the future.

상기 A. royi의 배양시 먹이, 즉 혼합물의 투입량은 A. royi 1000 개체 당 먹이 건조중량으로 1 내지 5 mg/1일, 1 내지 3 mg/1일 또는 2 mg/1일일 수 있다. 상기 범위에서 배양 효율이 우수하여 개체수를 최대화할 수 있고, 경제성을 확보할 수 있다. In the culture of A. royi the feed, that is, the dosage of the mixture may be 1 to 5 mg / day, 1 to 3 mg / day or 2 mg / day by dry weight of the food per 1000 individual A. royi . Excellent culture efficiency in the above range can be maximized the population, it is possible to secure the economics.

또한, 본 발명에서는 먹이로 전술한 혼합물 외에 아이소클라이시스 갈바나(Isochrysis galbana), 난노클로롭시스 오쿨라타(Nannochloropsis oculata), 캐토세로스 칼시트랜스(Chaetoceros calcitrans) 및 파블로바 루테리(Pavlova lutheri)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상을 추가로 사용할 수 있다. In addition, in the present invention, in addition to the above-described mixture as a food, isochrysis galbana ( Isochrysis galbana ), Nannochloropsis Okulata ( Nannochloropsis oculata ), Chaetoceros calcitrans ) and Pavlova lutheri may further be used.

일 구체예에서, 배양시 배양액의 염분은 5 내지 33‰일 수 있으며, 바람직하게는 15 내지 20‰일 수 있다. 상기 15 내지 20‰의 조건에서 배양 효율이 우수하여 개체수를 최대화할 수 있으며, 대량 배양에 매우 유리하다.In one embodiment, the salinity of the culture in the culture may be 5 to 33 ‰, preferably 15 to 20 ‰. The culture efficiency is excellent in the conditions of the 15 to 20 ‰ can maximize the population, it is very advantageous for mass culture.

일 구체예에서, 배양시 온도는 15 내지 35℃일 수 있으며, 바람직하게는 25 내지 35℃, 보다 바람직하게는 25 내지 30℃일 수 있다. 상기 25 내지 35℃의 조건에서 배양 효율이 우수하여 개체수를 최대화할 수 있으며, 대량 배양에 매우 유리하다.In one embodiment, the temperature in the culture may be 15 to 35 ℃, preferably 25 to 35 ℃, more preferably 25 to 30 ℃. The culture efficiency is excellent in the conditions of 25 to 35 ℃ can maximize the population, it is very advantageous for mass culture.

또한, 일 구체예에서, 배양 기간은 15일 이상일 수 있다. 배양기에서 배양액의 환수가 불가능할 경우 20일 이하 또는 19일 이하로 배양할 수 있으며, 환수가 가능할 경우 30일 이상 배양을 진행할 수 있다. In addition, in one embodiment, the incubation period may be at least 15 days. If it is impossible to recover the culture solution in the incubator, it may be cultured for less than 20 days or less than 19 days, and if possible, the culture may be performed for 30 days or more.

상기 염분 및 온도 조건에서 대량 배양을 최적화 할 수 있다. It is possible to optimize the mass culture at the salinity and temperature conditions.

일 구체예에서, 본 발명은 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)를 15 내지 20‰ 염분을 가지는 배양액에 접종한 후, 25 내지 30℃에서 배양하는 단계를 포함하는 포함하며, 먹이로 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica) 및 광합성 세균의 혼합물을 사용하는 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)의 배양 방법을 제공할 수 있다. In one embodiment, the present invention comprises a step of inoculating Apocyclops royi in a culture solution having a salt of 15 to 20 ‰, followed by culturing at 25 to 30 ℃, the feed to tetracell Tetraselmis suecica ) And Apocyclops royi using a mixture of photosynthetic bacteria A culture method can be provided.

또한, 본 발명은 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)를 배양하는 단계를 포함하며,In addition, the present invention includes the step of culturing Apocyclops royi ,

먹이로 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica) 및 광합성 세균의 혼합물을 사용하고, Tetraselmis as food suecica ) And using a mixture of photosynthetic bacteria,

상기 배양은 10 리터(L) 이상의 배양조에서 수행되는 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)의 대량 배양 방법을 제공한다. The culture is carried out in Apocyclops royi performed in a culture vessel of 10 liters (L) or more. Provided is a mass culture method.

상기 대량 배양 방법에서는 전술한 배양 방법으로 배양을 수행할 수 있다. In the mass culture method, the culture may be performed by the above-described culture method.

또한, 본 발명은 전술한 배양 방법에 의해 배양된 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)를 해양 양식품종의 먹이로 공급하는 해양 양식 방법을 제공한다. In addition, the present invention provides an aquaculture method for feeding Apocyclops royi cultured by the above-described culture method as a food for marine aquaculture varieties.

본 발명에서, 해양 양식품종은 어류 자어, 치어(자치어) 또는 무척추동물 유생일 수 있다. In the present invention, the marine aquaculture species may be fish larvae, larvae or invertebrate larvae.

본 발명은 해양 양식은 해양 양식품종의 초기 생활사 단계에 적용될 수 있으며, 상기 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)를 먹이로 사용함으로써 양식품종의 성장 및 생존률 향상에 기여할 수 있다. The present invention can be applied to the marine culture of the early life history stage of marine aquaculture varieties, by using the Apocyclops royi as a food can contribute to the growth and survival rate of aquaculture breeds.

이하 본 발명을 구체적인 실시예를 통해 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이는 본 발명의 설명을 위한 것이며, 본 발명의 권리범위를 제한하는데 사용되어서는 안 된다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to specific examples. However, this is for the purpose of illustrating the invention and should not be used to limit the scope of the invention.

실시예Example

실시예Example 1.  One. 아포사이클롭스Apocyclops 로이(Roy ( Apocyclops royiApocyclops royi )의)of 채집 및 분리 Gathering and Separation

아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)(이하, 요각류)는 다음과 같은 방법으로 채집하고 분리되었다. Apocyclops royi (hereafter copepods) were collected and separated in the following manner.

요각류(Apocyclops royi)는 전라남도 해남군에 한 종묘시험장 및 근처에서 채집되었다. 채집은 망목 50㎛, 망구 30㎝, 길이 1m의 플랑크톤 네트를 이용하여 채집하였고, 채집된 시료는 500㎖ 채수병에 넣은 뒤 아이스박스에 넣어 실험실로 운반하였다. 실험실로 운반된 시료는 즉시 해부현미경 하에서 종을 동정한 후 케플러리 피펫으로 뽑아내어 500㎖ 유리 비이커에 수용하여 단일 배양하였다. 초기 배양수 염분은 채집 장소와 동일하게 25‰로 유지하였으며 24℃로 설정된 인큐베이터에 넣어주었다. 먹이는 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica)와 아이소클라이시스 갈바나(Isochrysis galbana)의 혼합액을 30,000 세포/㎖가 되도록 희석한 후 1일 1회 초과 공급하였다. 비이커에서 개체수가 늘어나면 새로운 비이커에 수용하여 종 보존과 동시에 대량 배양 실험에 필요한 시료를 확보하였다. Apocyclops royi ) was collected near and at a nursery test site in Haenam-gun, Jeollanam-do. Gathering was collected using 50 μm of mesh, 30 cm of netting, and 1 m of plankton net, and the collected samples were placed in a 500 ml water bottle and placed in an ice box. Samples transported to the laboratory were immediately identified by species under a dissecting microscope, extracted with a Kepler pipette, housed in a 500 ml glass beaker and incubated in a single culture. The initial culture saline was maintained at 25 ‰ as the collection site and placed in an incubator set at 24 ° C. The food was fed with a mixture of Tetraselmis suecica and Isochrysis galbana to 30,000 cells / ml, and then fed more than once a day. As the population increased in the beaker, it was housed in a new beaker to secure species and obtain samples for mass culture experiments.

실험예Experimental Example 1.  One. 아포사이클롭스Apocyclops 로이(Roy ( Apocyclops royiApocyclops royi )의)of 형태학적 특성 Morphological characteristics

(1) 방법(1) method

배양하고 있는 비이커에서 캐플러리 피펫을 사용하여 요각류(Apocyclops royi)를 1마리씩 뽑아내어 슬라이드 글라스에 올려놓고 해부현미경 하에서 형태학적 특성을 관찰하였다. Apocyclops royi were extracted from the beaker in culture by using capillary pipette and placed on a slide glass, and morphological characteristics were observed under a dissecting microscope.

크기 측정을 위해 갓 부화한 요각류의 유생(nauplius)와 성체(adult)를 임의대로 30마리씩 분리하였다. 이후 슬라이드 글라스에 5% 중성 포르말린을 소량 떨어뜨려 시료를 고정한 후 해부현미경 접안렌즈에 장착된 눈금자로 측정하여 평균 값을 ㎛ 단위로 측정하였다.For the size measurement, 30 freshly hatched larvae (nauplius) and adults were isolated. Thereafter, a small amount of 5% neutral formalin was dropped on the slide glass, and the sample was fixed. Then, the average value was measured by a ruler mounted on an anatomical microscope eyepiece.

(2) 결과(2) results

본 발명에서 도 1은 요각류(Apocyclops royi)의 형태학적 특성을 나타내는 현미경 사진이다.Figure 1 is a copepod ( Apocyclops) in the present invention royi ) is a micrograph showing the morphological characteristics.

상기 도 1에 나타난 바와 같이, 요각류(Apocyclops royi)는 유생 단계에서의 크기는 평균 110㎛로 작으며, 성체는 평균 1130㎛로 각 발달 단계 별로 크기가 다양한 장점을 가진다.As shown in FIG. 1, copepods ( Apocyclops) royi ) has a small size of 110㎛ in the larval stage, the average adult size of 1130㎛ has a variety of advantages for each developmental stage.

실험예Experimental Example 2.  2. 아포사이클롭스Apocyclops 로이(Roy ( Apocyclops royiApocyclops royi )의)of 배양 조건 최적화  Optimization of culture conditions

(1) 염분 조건 최적화(1) Saline condition optimization

① 방법① Method

최적 염분을 규명하기 위하여, 여과한 자연해수(33‰)와 담수(0‰)을 혼합하여 염분 조건을 5, 10, 15, 20, 25 및 33‰로 선정하여 실험을 수행하였다. In order to determine the optimal salinity, experiments were performed by selecting the salt conditions of 5, 10, 15, 20, 25, and 33 ‰ by mixing filtered natural seawater (33 ‰) and fresh water (0 ‰).

구체적으로, 250㎖ 비이커(배양액 150㎖)에 요각류 밀도가 총 10 개체가 되도록 각 실험구의 비이커마다 접종하였으며, 접종이 완료된 비이커는 25℃가 유지되는 인큐베이터에서 16일간 배양하였다. 실험 시 먹이는 식물성 먹이생물인 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica)와 아이소클라이시스 갈바나(Isochrysis galbana)를 혼합하여 배양액을 기준으로 2×105 세포농도/㎖가 되도록 1일 1회로 공급하였다. 환수는 실험 종료시까지 행하지 않았으며 폭기는 시켜주지 않은 상태로 3반복구를 두어 실험을 수행하였다.Specifically, each beaker was inoculated in a 250 ml beaker (150 ml of culture solution) so that the total density of copepods was 10 individuals, and the inoculated beaker was incubated for 16 days in an incubator maintained at 25 ° C. In the experiment, the plant feed organisms, Tetraselmis suecica and Isochrysis galbana , were mixed and fed once a day to have a concentration of 2 × 10 5 cell / ml based on the culture medium. . Retrieval was not performed until the end of the experiment and the experiment was performed with three repetitions without aeration.

실험 시작 후 매일 해부현미경 하에서 마이크로피펫으로 각각의 실험구의 배양액을 뽑아내어 1㎖ 기준으로 개체수를 계수하였으며, 실험 결과 값에는 총 개체수로 환산하여 최종적으로 도출해 내었다.After the start of the experiment, the culture medium of each experimental section was extracted with a micropipette under a dissection microscope every day, and the number of individuals was counted based on 1 ml. The experimental results were finally derived by converting the total number of individuals.

② 결과② result

상기 실험 결과를 도 2에 나타내었다. The experimental results are shown in FIG. 2.

도 2는 요각류(Apocyclops royi)의 염분 조건에 따른 성장곡선 그래프이다.2 shows copepods ( Apocyclops) royi ) is a graph of growth curve according to salinity conditions.

상기 도 2에 나타난 바와 같이, 모든 염분 실험구간에서 실험 종료일 때까지 초기 접종밀도보다 개체수는 증가하는 경향을 보이는 것을 확인할 수 있다. 이를 통해, 본 발명 종은 염분 내성력이 좋은 광염성 종이라는 사실을 확인할 수 있다. 다만, 최고밀도는 배양 10 내지 11일째 15‰과 20‰에서 각각 120 개체로 가장 높은 것으로 나타났다. 따라서, 대량 배양을 위한 적정 염분 조건은 15 내지 20‰인 것으로 판단되었다. As shown in Figure 2, it can be seen that the population tends to increase than the initial inoculation density until the end of the experiment in all salinity test intervals. Through this, it can be confirmed that the species of the present invention is a salt salt resistance photo-inflammatory species. However, the highest density was found to be the highest at 120 ‰ in 15 ‰ and 20 ‰ at 10 to 11 days of culture. Therefore, the proper salinity condition for mass culture was determined to be 15-20 ‰.

본 실험을 종합해 보면, 본 발명의 종은 광염성(euryhaline, 廣鹽性)으로 인위적인 배양이 쉬운 특징을 가지고 있으며 배양 시 염분 범위는 5 내지 33‰까지 가능하나 최적 배양 염분은 15 내지 20‰가 바람직하며, 그 외 염분 조건에서는 대량 배양이 아닌 종 유지 및 보존이 가능한 염분 범위이다.In summary, the species of the present invention is characterized by easy artificial cultivation as photo-inflammatory (euryhaline, 廣 鹽 性) and salinity range from 5 to 33 ‰, but the optimum culture salinity is 15 to 20 ‰ In other salinity conditions, it is a salt range which can maintain and preserve a species rather than mass culture.

(2) 수온 조건 최적화(2) Optimization of water temperature conditions

① 방법① Method

수온에 따른 배양 실험은 15, 20, 25 및 30℃로 조절된 다채널배양기에 250㎖ 비이커(배양액 150㎖)에 염분이 15‰인 배양수를 준비하여 요각류 밀도가 총 10 개체가 되도록 접종하였다. 먹이는 테트라셀미스 수에시카 및 아이소클라이시스를 혼합하여 1일 1회 2×105 세포농도/㎖가 되도록 공급하였으며, 환수는 실험 종료 시까지 시켜주지 않았다. 실험은 3반복으로 16일간 이루어졌으며, 요각류의 부속지 손상을 우려하여 폭기는 시켜주지 않았다. 실험 결과는 염분 실험 때와 마찬가지로 개체수를 매일 해부현미경하에서 계수한 후 총 개체수로 환산하여 결과 값으로 나타내었다.In the culture experiment according to the water temperature, 15 mL of salt was prepared in a 250 mL beaker (150 mL of culture solution) in a multichannel incubator adjusted to 15, 20, 25 and 30 ° C, and inoculated so that the copepod density totaled 10 individuals. . The food was fed to Tesselmismis suecica and isolysis mixed to 2 × 10 5 cell concentration / ㎖ once a day, the return was not allowed until the end of the experiment. The experiment was repeated three times for 16 days, and was not aerated due to fear of damage to the appendages of copepods. As in the salinity experiment, the experimental results were counted daily under a dissecting microscope and converted into total populations.

② 결과② result

상기 실험 결과를 도 3에 나타내었다. The experimental results are shown in FIG. 3.

도 3은 요각류(Apocyclops royi)의 수온 조건에 따른 성장곡선 그래프이다.Figure 3 Apocyclops royi ) is a graph of growth curve according to water temperature conditions.

상기 도 3에 나타난 바와 같이, 배양 5일째까지는 모든 실험구간에서 큰 차이를 보이지 않았으나 배양 8일째부터 성장이 잘 되는 2개 실험구간(25, 30℃)과 그렇지 않은 2개 실험구간(15, 20℃)으로 뚜렷한 차이를 보였다. As shown in FIG. 3, two experimental sections (25, 30 ° C.) and two experimental sections (15, 20) which did not show a big difference in all the experimental sections until the fifth day of culture but grew well from the eighth day of culture. ℃)) showed a distinct difference.

최고밀도는 배양 12일째 30℃에서 125 개체로 가장 높게 나타났으며, 그 뒤로 25℃에서 95 개체로 높게 나타났다. 반면 15 및 20℃는 각각 40, 60 개체로 낮은 개체밀도를 나타내어 수온에 따른 성장 차이를 보였다.The highest density was highest at 125 ° C. at 30 ° C. on day 12, followed by 95 at 25 ° C .. On the other hand, 15 and 20 ℃ were 40, 60 individuals, respectively, showing low population density, showing a difference in growth according to water temperature.

따라서, 본 발명 종을 대량 배양 하기 위한 수온 조건은 25 내지 30℃이나 그 중에서 30℃가 보다 바람직할 것으로 판단된다. 하지만 염분 실험과 마찬가지로 비교적 저온인 15℃와 고온인 30℃에서 초기 개체밀도보다 높게 나타나는 것으로 보아 광온성(eurythermal, 廣溫性)의 특징을 가지는 것으로 확인되었으며, 이는 인위적인 배양을 행할 시 보다 용이함을 뜻한다.Therefore, the water temperature conditions for mass culturing the species of the present invention is 25 to 30 ℃, it is judged that 30 ℃ is more preferable. However, as in the salinity experiment, it was found to be higher than the initial individual density at a relatively low temperature of 15 ℃ and a high temperature of 30 ℃, it was confirmed that it has the characteristics of photothermal (eurythermal, 廣 溫 性), which is easier than when artificial culture It means.

(3) 먹이 조건 최적화(3) optimization of feeding conditions

① 방법① Method

먹이종류에 따른 성장을 알아보고자 식물성 먹이생물 5 종인 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica, TET), 아이소클라이시스 갈바나(Isochrysis galbana, ISO), 난노클로롭시스 오쿨라타(Nannochloropsis oculata, NAN), 캐토세로스 칼시트랜스(Chaetoceros calcitrans, CHA), 파블로바 루테리(Pavlova lutheri, PAV)를 사전에 미리 준비하여 실험에 이용하였다. 여기에 보다 경제적인 먹이원을 확보하기 위해 식물성 먹이생물인 테트라셀미스 수에시카에 시중에서 쉽게 구입할 수 있는 광합성세균(Schizochytrium sp.)을 혼합한 먹이 실험구(MIX)를 함께 실험에 이용하였다.To examine the growth according to food type, Tetraselmis suecica (TET), Isochrysis galbana (ISO), and Nannochloropsis Oculata oculata , NAN), Chaetoceros calcitrans , CHA) and Pavlova lutheri (PAV) were prepared in advance and used for the experiment. In order to secure a more economical source of food, Schizochytrium , a plant food organism, is easily available on the market, Tetraselmis sueseica. sp.) mixed feed experiment (MIX) was used together in the experiment.

실험은 250㎖ 비이커(배양액 150㎖)에 염분이 15‰의 배양수를 준비하여 총 600 개체로 접종하고, 30℃에 맞춰진 인큐베이터 안에서 실험을 수행하였다. 먹이 공급량은 요각류 1,000 개체 당 먹이 건조중량 2 mg을 기준으로 1일 1회 공급하였다. 실험은 25일간 이루어졌으며 모든 실험은 3회 반복하였다. 수온 및 염분 실험 때와 동일한 방법으로 개체수를 계수하였으며, 이를 총 개체수 값으로 환산하여 결과 값으로 도출하였다.The experiment was prepared by inoculating a total of 600 individuals with a salt of 15 ‰ in a 250 ml beaker (150 ml of culture solution), and inoculated into 600 individuals, and the experiment was performed in an incubator at 30 ° C. The food supply amount was supplied once a day based on the dry weight of 2 mg of food per 1,000 copepods. The experiment lasted 25 days and all experiments were repeated three times. The population was counted in the same way as the water temperature and salinity experiments, and the result was calculated by converting the total population value.

한편, 먹이종류에 따른 요각류의 지방산(영양)을 분석하기 위해 먹이종류별 실험이 종료된 이후에 각 실험구의 비이커에 있던 요각류를 40㎛ 뮬러가즈로 걸러내어 샘플링을 행한 후 -80℃에 보관하였다. 이후 냉동보관된 시료를 동결건조하여 분말화 하였으며, 이를 전자저울을 통해 정량화 시킨 후 유기용매로 지질을 추출하였다. 다음으로 전처리를 하여 최종적으로 기체크로마토그래피 기기로 지방산을 분석하여 결과값으로 나타내었다. Meanwhile, in order to analyze fatty acids (nutrition) of copepods according to food type, copepods in the beaker of each experimental section were filtered with 40 μm Mullergaz after sampling was completed, and stored at -80 ° C. Thereafter, the frozen samples were lyophilized to be powdered and quantified by electronic balance, and then lipid was extracted with an organic solvent. Next, the pretreatment was performed and finally the fatty acid was analyzed by gas chromatography apparatus.

본 발명 종은 기존의 먹이생물인 알테미아(Artemia)를 대체하기 위한 신규 먹이생물이기에 지질영양강화제로 3시간 동안 영양강화한 알테미아와 영양강화를 행하지 않은 알테미아의 대조구(2개)를 함께 두어 먹이종류별 실험구인 6개와 같이 분석하였다.The species of the present invention is a novel feed organism to replace the existing food organism, Artemia, so that a control diet of two kinds of altemia nutrient-enhanced for 3 hours and lipid-enriched Altemia as a lipid nutrient enhancer was put together. Analyzes were made with 6 jobs.

② 결과② result

먼저, 먹이종류에 따른 요각류의 성장(개체밀도 변화) 실험 결과를 도 4에 나타내었다. First, the growth (object density change) experiment results of copepods according to food type are shown in FIG. 4.

도 4는 요각류(Apocyclops royi)의 먹이종류에 따른 성장곡선 그래프이다. 4 shows copepods ( Apocyclops) royi ) is a graph of growth curve according to food type.

상기 도 4에 나타난 바와 같이, 배양 초기때부터 각각의 실험구간에서 개체밀도 변화의 큰 차이를 보여 본 발명 종은 먹이종류에 따라 큰 영향을 받는 것으로 나타났다. 최고밀도는 배양 19일째 TET(테트라셀미스 수에시카 단독구)와 MIX(테트라셀미시스 수에시카+광합성세균 혼합구)에서 각각 1245, 1270 개체로 가장 높게 나타났다. 다음으로 CHA가 13일째까지 비교적 높은 개체밀도를 보인 반면 그 외 다른 실험구는 밀도가 낮아지는 경향을 보였다. 하지만 먹이로 공급한 즉시 개체밀도가 전량 폐사한 것이 아니라 3주 이상 비록 개체밀도가 낮았지만 유지는 되는 것으로 보아 보조먹이로 사용은 가능할 것으로 판단되었다.As shown in FIG. 4, the species of the present invention was shown to be greatly affected by the type of food, showing a large difference in individual density change in each experimental section from the beginning of the culture. The highest density was highest at 1245 and 1270 in TET (tetraselmis suesica monosphere) and MIX (tetraselmis suesica + photosynthetic bacterial mix) at 19 days of culture. Next, CHA showed a relatively high individual density until the 13th day, while the other experiments tended to have a lower density. However, it was judged that it could be used as a supplementary food because the density of individuals was not lost immediately after feeding, but maintained even though the density of individuals was low for more than three weeks.

또한, 먹이종류에 따른 요각류의 지방산 분석 결과를 하기 표 1에 나타내었다.In addition, the fatty acid analysis results of copepods according to food type are shown in Table 1 below.

Figure 112018106736792-pat00001
Figure 112018106736792-pat00001

1UEN, 영양강화 하기 전 알테미아 유생(Artemia nauplius); 1 UEN, Artemia nauplius before nutrition;

2ENA, 3시간 영양강화된 알테미아 유생; 2 ENA, 3-hour enriched Altemia larvae;

3TET, 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica) 공급구; 3TET, tetraselmis suezica (Tetraselmis suecica) Supply port;

4MIX, TET(50%)+광합성 세균(Schizochytrium sp., 50%) 공급구; 4 MIX, TET (50%) + photosynthetic bacteria ( Schizochytrium sp., 50%) feed port;

5CHA, 캐토세로스 칼시트랜스(Chaetoceros calcitrans) 공급구; 5 CHA, Chaetoceros calcitrans ) feed port ;

6ISO, 아이소클라이시스 갈바나(Isochrysis galbana) 공급구; 6 ISO, Isochrysis galbana ) feed port ;

7NAN, 난노클로롭시스(Nannochloropsis oculata) 공급구; 7 NAN, Nannochloropsis oculata ) feed port ;

8PAV, 파블로바 루테리(Pavlova lutheri) 공급구. 8 PAV, Pavlova lutheri ) supply port .

9Saturated fatty acid(포화지방산 합계); 6:0, 8:0, 10:0, 11:0, 12:0, 13:0, 14:0, 15:0, 16:0, 17:0, 18:0, 20:0, 21:0. 9 Saturated fatty acid; 6: 0, 8: 0, 10: 0, 11: 0, 12: 0, 13: 0, 14: 0, 15: 0, 16: 0, 17: 0, 18: 0, 20: 0, 21: 0.

10Mono unsaturated fatty acid(단일 불포화지방산 합계); 15:1, 16:1, 17:1, 18:1n9, 20:1, 22:1n-9, 24:1 10 Mono unsaturated fatty acid (sum of monounsaturated fatty acids); 15: 1, 16: 1, 17: 1, 18: 1 n9, 20: 1, 22: 1 n-9, 24: 1

11Highly unsaturated fatty acid(고도불포화지방산 합계); 18:2n-6, 18:3n-3, 20:2, 18:3n-6, 20:3n-6, 20:4n-6, 20:5n-3, 22:2, 22:6n-6 11 highly unsaturated fatty acid; 18: 2n-6, 18: 3n-3, 20: 2, 18: 3n-6, 20: 3n-6, 20: 4n-6, 20: 5n-3, 22: 2, 22: 6n-6

12Eicosapentaenoic acid(에이코사펜타노익산, 이피에이); 12 Eicosapentaenoic acid (Eicosapentaenoic acid, IPA);

13Docosahexaenoic acid(도코사헥사노익산, 디에치에이). 13 Docosahexaenoic acid.

상기 표 1에 나타난 바와 같이, 해산어류 자치어(자어 및 치어) 및 갑각류 유생에게 절대적으로 필요한 DHA 함량은 기존 먹이생물인 Artemia에서 영양강화 하기 전에(UEN) 검출이 전혀 되지 않았으며 영양강화된 이후에는 15.5%의 함량을 보이는 것으로 나타났다. 반면 본 발명의 요각류에 먹이종류를 MIX로 공급한 실험구에서는 영양강화를 행하지 않았음에도 불구하고 37.3%로 가장 높은 함량을 보이는 것으로 나타났다. 이에 기인하여 n-3 HUFA(오메가 3의 고도불포화지방산의 총 합계)의 함량도 50.0%로 가장 높은 것으로 조사되어 질적으로 매우 우수한 결과가 도출되었다. 이러한 결과값은 다른 먹이를 공급한 요각류의 실험구간보다도 높은 값으로 나타났는데 이는 MIX 먹이를 섭취하였을 때 먹이에 기인하여 보다 많은 DHA 함량을 체내에 축적한 것으로 판단된다.As shown in Table 1, the DHA content absolutely required for marine fish larvae (larvae and larvae) and crustacean larvae was not detected before nutrition (UEN) in the existing food organism Artemia, and after nutrition fortification It was found to have a content of 15.5%. On the other hand, the experimental group fed the type of food to the copepods of the present invention MIX was found to show the highest content of 37.3% even though the nutrition was not strengthened. Due to this, the content of n-3 HUFA (the total sum of polyunsaturated fatty acids of omega 3) was also the highest at 50.0%, resulting in very high quality results. These results showed higher values than the experimental section of copepods fed other foods. It is believed that more DHA content was accumulated in the body due to the food when ingested MIX food.

한편, 그 외 다른 먹이를 공급한 요각류의 실험구간에도 기존 먹이생물인 알테미아(Artemia)에 영양강화를 한 ENA 대조구보다도 DHA 함량에 있어서는 따로 영양강화를 하지 않았음에도 더욱 높은 것으로 나타났는데 이는 본 발명 종이 자체적으로 가지고 있는 DHA 함량이 높다는 것을 확인할 수 있는 것이다.On the other hand, in the experimental section of copepods fed other foods, the DHA content was higher than the ENA control, which was nutritionally fortified with the existing food organism, Artemia, even though it was not nutritionally fortified. It can be confirmed that it has a high content of DHA.

따라서, 식물성 먹이생물인 TET를 단독 배양하여 본 발명의 요각류에게 공급하는 것보다 비교적 저렴한 광합성세균(Schizochytrium sp.)을 혼합하여 공급할 때 본 종을 배양함에 있어 경제성을 확보할 수 있다. 또한 혼합 먹이를 공급할 시 영양강화를 행하지 않아도 기존 먹이생물(Artemia)보다 질적으로 우수하여 경제성 및 효율성을 동시에 충족시키는 결과를 나타내며, 이러한 결과로 말미암아 해산 양식품종의 초기 단계에서 성장과 생존율을 개선시킬 수 있는 가치가 있는 결과를 도출할 수 있다.Therefore, photosynthetic bacteria ( schizochytrium) is relatively cheaper than cultivating TET, a plant food organism, and supplying to copepods of the present invention. sp.) can be economically cultivated in this species when mixed and fed. In addition, it is possible to satisfy the economics and efficiency at the same time as the qualitative quality of existing food organisms (Artemia) without the nutrition enhancement when feeding the mixed food, thereby improving the growth and survival rate in the early stages of marine aquaculture species. Produce results that are worthwhile.

실험예Experimental Example 3.  3. 아포사이클롭스Apocyclops 로이(Apocyclops royi)의Of Apocyclops royi 대량 배양(20ℓ 규모) Bulk culture (20ℓ scale)

(1) 방법 (1) method

전술한 실험예 2에서 규명된 배양 조건, 즉, 염분 15‰ 및 수온 30℃ 조건을 적용하여 비이커 수준이 아닌 20ℓ 규모에서 대량 배양을 수행하였다. 이때, 먹이로 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica)에 광합성세균(photosynthetic bacteria)을 혼합하여 먹이원으로 공급하였다.The cultivation conditions identified in Experimental Example 2 described above, that is, the bulk culture was carried out at 20 L scale, not the beaker level, by applying the salt 15 ‰ and water temperature 30 ℃ conditions. At this time, photosynthetic bacteria were mixed with tetraselmis suecica and fed as a food source.

매일 전체 배양액을 잘 혼합하여 균일하게 마이크로피펫으로 배양액을 뽑아내어 해부현미경 하에서 유생수(nauplius)와 유생을 포함한 전체 개체수를 계수하였다. 이후 유생수와 총 개체수로 각각 나누어 결과 값으로 도출하였다.The whole culture solution was mixed well every day, and the culture solution was uniformly extracted with a micropipette, and the total population including nauplius and larvae was counted under a dissecting microscope. The resultant was then divided into larvae and total populations.

(2) 결과(2) results

상기 결과를 도 5 및 도 6에 타나내었다. The results are shown in FIGS. 5 and 6.

도 5는 요각류(Apocyclops royi)의 대량 배양 시 (a) 요각류 유생수의 개체밀도 변화 그래프이며, 도 6은 요각류(Apocyclops royi)의 대량 배양 시 (b) 요각류의 총 개체수의 변화 그래프이다.Figure 5 Apocyclops royi ) (a) population density change of copepod larvae during mass cultivation, Figure 6 is apocyclops royi ) is a graph of the change in total population of copepods (b).

상기 도 5 및 도 6에 나타난 바와 같이, 실험 초기부터 실험 종료일까지 매일 요각류의 유생수가 꾸준히 증가하는 경향을 보였으며, 이에 기인하여 총 개체수도 높아지는 결과로 나타났다. 특히, 실험 중반부터는 유생수가 ㎖당 10개체 이상씩 꾸준히 높게 유지되어 대량 배양이 원활하게 진행되었다. 이에 실험 초기 때 총 개체수는 100,000 개체수였는데 비해 종료일에는 473,330 개체수로 증가해 3주만에 4.7배 가량 높아지는 것을 확인할 수 있었다. As shown in FIG. 5 and FIG. 6, the larvae of copepods showed a tendency to increase steadily every day from the beginning of the experiment to the end of the experiment, thereby increasing the total population. In particular, from the middle of the experiment, the larval water was steadily high by 10 or more per ml, and the mass culture proceeded smoothly. At the beginning of the experiment, the total population was 100,000, whereas at the end of the experiment, the total population increased to 473,330, increasing 4.7 times in three weeks.

이러한 결과를 통해 본 발명의 요각류는 비이커 수준이 아닌 그 이상의 규모에서도 대량 배양이 가능하다는 사실을 확인할 수 있다.These results confirm that the copepod of the present invention is capable of mass cultivation at a scale larger than the beaker level.

Claims (10)

아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)를 배양하는 단계를 포함하며,
먹이로 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica) 및 광합성 세균의 혼합물을 사용하고,
상기 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica) 및 광합성 세균의 혼합 비율은 건조중량을 기준으로 1:0.1 내지 1:2인 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)의 배양 방법.
Culturing Apocyclops royi ,
Tetraselmis suecica as food And using a mixture of photosynthetic bacteria,
Tetraselmis suecica And the mixing ratio of photosynthetic bacteria is 1: 0.1 to 1: 2 based on dry weight of Apocyclops royi . Cultivation method.
제 1 항에 있어서,
광합성 세균은 스키조키트리움 속(Schizochytrium sp.)및 크립터코디니움 속(Crypthecodinium sp.)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상을 포함하는 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)의 배양 방법.
The method of claim 1,
Photosynthetic bacteria of the Apocyclops royi comprising at least one selected from the group consisting of Schizochytrium sp. And Crypthecodinium sp. Cultivation method.
제 1 항에 있어서,
먹이를 1000 개체 당 1.0 내지 5.0 mg/1일 공급하는 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)의 배양 방법.
The method of claim 1,
A method for culturing Apocyclops royi , which feeds 1.0 to 5.0 mg / day per 1000 individuals.
제 1 항에 있어서,
먹이는 아이소클라이시스 갈바나(Isochrysis galbana), 난노클로롭시스 오쿨라타(Nannochloropsis oculata), 캐토세로스 칼시트랜스(Chaetoceros calcitrans) 및 파블로바 루테리(Pavlova lutheri)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상을 추가로 포함하는 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)의 배양 방법.
The method of claim 1,
Feeding isocrysis galvana galbana ), Nannochloropsis oculata , and Chaetoceros calcitrans ) and Pavlova lutheri . The method of culturing Apocyclops royi further comprising at least one selected from the group consisting of:
제 1 항에 있어서,
배양시 배양액의 염분은 15 내지 20‰인 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)의 배양 방법.
The method of claim 1,
The method of culturing Apocyclops royi salinity of the culture solution in culture is 15 to 20 ‰.
제 1 항에 있어서,
배양시 온도는 25 내지 35℃인 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)의 배양 방법.
The method of claim 1,
Method of culturing Apocyclops royi is a temperature of 25 to 35 ℃.
제 1 항에 있어서,
배양 기간은 15일 이상인 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)의 배양 방법.
The method of claim 1,
Cultivation period of 15 days or more Apocyclops royi ( Apocyclops royi ) culturing method.
제 1 항에 따른 배양 방법에 의해 배양된 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)를 해양 양식품종의 먹이로 공급하는 양식 방법.
An aquaculture method for feeding Apocyclops royi cultured by the culture method according to claim 1 as a food for marine aquaculture varieties.
제 8 항에 있어서,
해양 양식품종은 어류의 자어, 치어 또는 무척추동물 유생인 양식 방법.
The method of claim 8,
Marine aquaculture is a method of farming in which larvae, fry or invertebrates of fish are larvae.
아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)를 배양하는 단계를 포함하며,
먹이로 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica) 및 광합성 세균의 혼합물을 사용하고,
상기 테트라셀미스 수에시카(Tetraselmis suecica) 및 광합성 세균의 혼합 비율은 건조중량을 기준으로 1:0.1 내지 1:2이며,
상기 배양은 10 리터(L) 이상의 배양조에서 수행되는 아포사이클롭스 로이(Apocyclops royi)의 대량 배양 방법.
Culturing Apocyclops royi ,
Tetraselmis suecica as food And using a mixture of photosynthetic bacteria,
Tetraselmis suecica And the mixing ratio of photosynthetic bacteria is 1: 0.1 to 1: 2 based on dry weight,
The culture is carried out in Apocyclops royi performed in a culture vessel of 10 liters (L) or more. Mass culture method.
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