KR102002997B1 - Cosmetic composition including taxifolin glucosides and extracting method of paeonia lactiflora extracts - Google Patents

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Abstract

본 발명은 탁시폴린 배당체를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 및 작약 추출물의 추출방법을 제공한다. 본 발명의 작약 추출물의 추출방법에 따르면 고함량의 탁시폴린 배당체, 구체적으로 탁시폴린-3-글루코사이드를 최적의 수율 및 대량으로 추출할 수 있고, 이를 포함하는 작약 추출물은 우수한 피부미백 효과, 주름개선 효과, 항염 효과, 항균 효과, 아토피 개선 및 자외선 보호 효과를 가지므로 기능성 화장료 조성물 및 피부 외용제로서 유용하게 사용될 수 있다.The present invention provides a cosmetic composition containing a tachypholin glycoside as an active ingredient and a method for extracting a peony root extract. According to the extract method of extract of peony root extract of the present invention, it is possible to extract a high amount of texifolin glycosides, specifically, taxon poly-3-glucoside in an optimum yield and mass, and the peony root extract containing the peony root extract has excellent skin whitening effect, Anti-inflammatory effect, antibacterial effect, atopic improvement, and ultraviolet ray protection effect, it can be usefully used as a functional cosmetic composition and external preparation for skin.

Description

탁시폴린 배당체를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 및 작약 추출물의 추출방법{COSMETIC COMPOSITION INCLUDING TAXIFOLIN GLUCOSIDES AND EXTRACTING METHOD OF PAEONIA LACTIFLORA EXTRACTS}TECHNICAL FIELD [0001] The present invention relates to a cosmetic composition containing a tachypolin glycoside as an active ingredient and a method for extracting a peony extract,

본 발명은 탁시폴린 배당체를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 및 작약 추출물의 추출방법에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition containing a tachypolin glycoside as an active ingredient and a method for extracting a peony root extract.

작약(Paeonia lactiflora)이란 한국이 원산지인, 쌍떡잎식물 작약과 작약속의 여러해살이풀로 주로 산기슭이나 골짜기에서 자란다. 가지는 옆으로 길게 2 m 이상 뻗고 털이 없으나 갈고리 같은 가시가 있으며, 줄기는 여러 개가 한 포기에서 나와 곧게 서고 높이 60cm 정도이며 잎과 줄기에 털이 없다. 뿌리는 여러 개가 나오지만 가늘고 양끝이 긴 뾰족한 원기둥 모양으로 굵다. 잎은 어긋나고 밑부분의 것은 작은 잎이 3장씩 두 번 나오는 겹잎이다. 꽃은 5-6월에 줄기 끝에 1개가 피는데 크고 아름다우며 재배한 것은 지름 10cm 정도이다. 열매는 달걀 모양으로 끝이 갈고리 모양으로 굽으며 내봉선을 따라 갈라지고 종자는 구형이다. 꽃은 주로 원예용으로 쓰며 뿌리는 진통·복통·월경통·무월경·토혈·빈혈·타박상 등의 약재로 쓰인다. 한국·몽골·동시베리아 등지에 분포한다. Paeonia lactiflora ) is a perennial plant of peonies, peonies, peonies, peonies, and peonies originating in Korea. It grows mainly in the foothills and valleys. The branch stretches more than 2m long on the side, has no hair but has hook like thorns, and several stems come out of a droppings and stand straight, about 60cm high, and have no hairs on leaves and stems. There are several roots, but they are thin and thick with a pointed cylindrical shape with both ends. Leaves are alternate and lower leaves are double leaves with three small leaves. The flowers bloom one at the end of the stem in May-June, and it is big and beautiful. The fruit is ovate, the end is bent like a hook, it is split along the inner line, and the seed is spherical. Flowers are mainly used for gardening, and roots are used as medicine for pain, abdominal pain, dysmenorrhea, amenorrhea, hematemesis, anemia, bruise. They are distributed in Korea, Mongolia, and East Siberia.

등록특허 제10-0804993호는 작약종자 추출물을 이용한 화장비누 제조법을, 공개특허 제2005-0118819호는 작약추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 보습용 세정제 조성물을 개시한 바 있으나, 종래 작약을 이용한 고함량의 탁시폴린-3-글루코사이드(taxifolin-3-glucoside)를 포함하는 작약 추출물 및 이를 함유하는 기능성 화장료에 대한 연구는 없었다.
Patent No. 10-0804993 discloses a method for producing a cosmetic soap using a peony seed extract, and Japanese Patent Application Laid-Open No. 2005-0118819 discloses an antioxidative and moisturizing detergent composition containing a peony extract as an active ingredient. However, There have been no studies on peony root extract containing taxifolin-3-glucoside and a functional cosmetic composition containing the same.

대한민국 등록특허 제10-0804993호Korean Patent No. 10-0804993 대한민국 공개특허 제2005-0118819호Korea Patent Publication No. 2005-0118819

상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 본 발명은 천연 식물인 작약으로부터 고함량의 탁시폴린 배당체를 추출하는 방법으로서 용매추출, 농축, 분획 및 재결정화를 거치는 작약 추출물의 추출방법을 제공하고, 작약 추출물이 가지는 피부미백효과, 주름개선효과, 항염효과, 항균효과, 아토피 개선 및 자외선 보호 효과를 이용한 화장료 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.In order to solve the above problems, the present invention provides a method for extracting a high amount of taxifolin glycoside from a natural plant, such as a peony root, by extracting the peony root extract, concentrating, fractionating and recrystallizing the peony root extract. It is an object of the present invention to provide a cosmetic composition using skin whitening effect, wrinkle improving effect, anti-inflammatory effect, antibacterial effect, atopic improvement and ultraviolet ray protection effect.

상기와 같은 목적을 해결하기 위하여 본 발명은 탁시폴린 배당체를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다. In order to solve the above-mentioned problems, the present invention provides a cosmetic composition comprising a tachypholin glycoside as an active ingredient.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 탁시폴린 배당체는 작약에서 추출한 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the taxifolin glycoside may be extracted from peony root.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 탁시폴린 배당체는 탁시폴린-3-글루코사이드인 것일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the taxifolin glycoside may be taxifolin-3-glucoside.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 탁시폴린 배당체는 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 10중량% 함유되는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the texifolin glycoside may be contained in an amount of 0.0001 to 10% by weight based on the total weight of the composition.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 피부미백, 주름개선, 항염, 항균, 아토피 개선 및 자외선 보호로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 기능을 가지는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the composition may be one having at least one function selected from the group consisting of skin whitening, wrinkle improvement, anti-inflammation, antibacterial, atopic improvement, and ultraviolet ray protection.

또한, 본 발명은 작약을 용매에 넣고 탁시폴린 배당체를 용출하는 단계;In addition, the present invention provides a method for preparing a pharmaceutical composition comprising the steps of: dissolving a taxane compound in a solvent and eluting the taxane compound;

용출된 추출물을 농축하는 단계; Concentrating the eluted extract;

농축된 추출물을 둘 이상의 용매에 넣고 분획시키는 단계;Placing the concentrated extract in two or more solvents and fractionating;

분획된 층에서 얻어진 추출물을 컬럼에 통과시키는 단계; 및Passing the extract obtained in the fractioned layer through a column; And

컬럼 통과액을 침전시켜 재결정화하는 단계;를 포함하는 작약 추출물의 추출방법을 제공한다.And recrystallizing the solution by precipitating the column passing liquid.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 탁시폴린 배당체는 탁시폴린-3-글루코사이드인 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the taxifolin glycoside may be taxifolin-3-glucoside.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 분획 단계는 분획시킨 후 분획된 층의 용매를 제거하여 농축하는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the fractionation step may be to fractionate and then remove the solvent of the fractioned layer and concentrate.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 추출방법은 재결정화 이후에 재결정화된 추출물을 건조하여 수득하는 단계;를 더 포함하는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the extraction method may further include drying and obtaining the recrystallized extract after recrystallization.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 용매추출시의 용매는 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에틸아세테이트, 에틸에테르, 클로로포름, 헥산으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the solvent for extracting the solvent may be at least one selected from the group consisting of water, ethanol, methanol, butanol, ethyl acetate, ethyl ether, chloroform and hexane.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 분획시의 용매는 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에틸아세테이트, 에틸에테르, 클로로포름, 헥산으로 이루어진 군으로부터 선택된 둘 이상인 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the solvent at the time of fractionation may be at least two selected from the group consisting of water, ethanol, methanol, butanol, ethyl acetate, ethyl ether, chloroform and hexane.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 컬럼의 레진은 엠버라이트 XAD 레진, 다우엑스 레진, 수페라이트 DAX 레진 및 다이아이온 HP-10, 20, 30, 40, 50 레진으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레진인 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the resin of the column is selected from the group consisting of Amberlite XAD resin, Dow X resin, Suferite DAX resin and Diaion HP-10, 20, 30, 40, Lt; / RTI >

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 재결정은 -300 내지 25℃ 및 0.5 내지 800MPa에서 수행되는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the recrystallization may be performed at -300 to 25 ° C and 0.5 to 800 MPa.

본 발명의 작약 추출물의 추출방법에 따르면 고함량의 탁시폴린 배당체, 구체적으로 탁시폴린-3-글루코사이드를 최적의 수율 및 대량으로 추출할 수 있고, 이를 포함하는 작약 추출물은 우수한 피부미백 효과, 주름개선 효과, 항염 효과, 항균 효과, 아토피 개선 및 자외선 보호 효과를 가지므로 기능성 화장료 조성물 및 피부 외용제로서 유용하게 사용될 수 있다.According to the extract method of extract of peony root extract of the present invention, it is possible to extract a high amount of texifolin glycosides, specifically, taxon poly-3-glucoside in an optimum yield and mass, and the peony root extract containing the peony root extract has excellent skin whitening effect, Anti-inflammatory effect, antibacterial effect, atopic improvement, and ultraviolet ray protection effect, it can be usefully used as a functional cosmetic composition and external preparation for skin.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 작약 추출물의 추출방법에 대한 플로우차트이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 작약 추출물 중 탁시폴린-3-글루코사이드의 HPLC 크로마토그램이다.
1 is a flowchart illustrating a method for extracting a peony root extract according to an embodiment of the present invention.
FIG. 2 is an HPLC chromatogram of Taxin pollin-3-glucoside among peony root extracts according to one embodiment of the present invention.

이하에서는, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 본 발명을 용이하게 실시할 수 있도록 하기 위하여, 본 발명의 바람직한 실시예들에 관하여 상세히 설명하기로 한다.
Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in detail in order to facilitate the present invention by those skilled in the art.

본 발명은 탁시폴린 배당체를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
The present invention provides a cosmetic composition comprising a tachypolin glycoside as an active ingredient.

상기 작약 추출물은 탁시폴린(taxifolin) 배당체를 함유한다. 구체적으로, 본 발명에서 탁시폴린 배당체는 탁시폴린-3-글루코사이드(taxifolin-3-glucoside)일 수 있다.
The peony extract contains a taxifolin glycoside. Specifically, in the present invention, the taxifolin glycoside may be taxifolin-3-glucoside.

상기 탁시폴린 배당체는 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 10중량% 함유되는 것일 수 있다. 0.0001중량%보다 적으면 효능이 충분히 발휘되지 않고, 10중량%보다 많으면 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않고, 안전성에 문제가 있을 수 있기 대문이다.The tachesopholine glycoside may be contained in an amount of 0.0001 to 10% by weight based on the total weight of the composition. If the amount is less than 0.0001% by weight, the efficacy is not sufficiently exhibited. If the amount is more than 10% by weight, the increase in the content does not lead to a marked increase in the effect.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 피부미백, 주름개선, 항염, 항균, 아토피 개선 및 자외선 보호로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 기능을 가지는 것일 수 있다. 이는 후술할 시험예에서 확인할 수 있다.
In one embodiment of the present invention, the composition may be one having at least one function selected from the group consisting of skin whitening, wrinkle improvement, anti-inflammation, antibacterial, atopic improvement, and ultraviolet ray protection. This can be confirmed in a test example to be described later.

상기 화장료 조성물은 제형이 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The formulation of the cosmetic composition is not particularly limited and may be appropriately selected according to the purpose. For example, skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milky lotion, moisturizing lotion, nutrition lotion, massage cream, nutritional cream, moisturizing cream, hand cream, foundation, essence, nutrition essence, pack, soap, cleansing But the present invention is not limited thereto, and may be manufactured by any one or more formulations selected from the group consisting of a foam, a cleansing lotion, a cleansing cream, a body lotion and a body cleanser.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal fiber, plant fiber, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as the carrier component .

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In the case of a spray, in particular, / Propane or dimethyl ether.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.In the case of the solution or emulsion of the present invention, a solvent, a solvent or an emulsifier is used as a carrier component, and examples thereof include water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, , 3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan fatty acid esters.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a suspension, a carrier such as water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, Cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracant, etc. may be used.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is an interfacial active agent-containing cleansing, the carrier component may include aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amide Ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, linolenic derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters.

상기 유효 성분의 함량은 특별히 제한되지 않으나, 조성물 총 중량을 기준으로 0.0001 내지 10 중량%로 포함될 수 있다. 상기 유효 성분이 상기 함량을 만족하는 경우 부작용 없이 우수한 효능을 나타낼 수 있다.The content of the active ingredient is not particularly limited, but may be in the range of 0.0001 to 10% by weight based on the total weight of the composition. When the active ingredient satisfies the above content, it can exhibit excellent efficacy without side effects.

상기 화장료 조성물에는 상기 제조된 작약 추출물 이외에 기능성 첨가물 및 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분이 추가로 포함될 수 있다. 상기 기능성 첨가물로는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다.In addition to the peony extracts, the cosmetic composition may further contain ingredients included in functional additives and general cosmetic compositions. The functional additives may include water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, polymer peptides, polymeric polysaccharides, sphingolipids and seaweed extracts.

본 발명의 화장료 조성물에는 또한, 상기 기능성 첨가물과 더불어 필요에 따라 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분을 배합해도 된다. 이외에 포함되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.
The cosmetic composition of the present invention may further contain, in addition to the above-described functional additive, components contained in a general cosmetic composition as required. Examples of the other ingredients that can be included in the composition include humectants, emollients, surfactants, organic and inorganic pigments, organic powders, ultraviolet absorbents, preservatives, bactericides, antioxidants, plant extracts, pH adjusters, alcohols, Accelerators, coolants, antiperspirants, purified water, and the like.

더욱이, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 피부 외용제에 관한 것으로, 상기 피부 외용제는 피부 외부에서 도포되는 어떠한 것이라도 포함될 수 있는 총칭이며, 다양한 제형의 화장품, 의약품이 여기에 포함될 수 있다. 상기 피부 외용제는 또한, 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어 피부 노화 방지용 또는 피부 주름 개선용 피부 외용제일 수 있다.
Further, the present invention relates to an external preparation for skin comprising the above composition, wherein the external preparation for skin is a generic term that can be applied to any external skin, and cosmetics and medicines of various formulations may be included. The external preparation for skin is not particularly limited, but may be, for example, a skin external preparation for preventing skin aging or improving skin wrinkles.

또한, 본 발명은 작약으로부터 탁시폴린 배당체를 용출하는 단계를 포함하는 작약 추출물의 추출방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for extracting a peony root extract comprising the step of eluting a taxon purine glycoside from a peony.

본 발명의 작약 추출물의 추출방법은, 작약을 용매에 넣고 탁시폴린 배당체를 용출하는 단계; 용출된 추출물을 농축하는 단계; 농축된 추출물을 둘 이상의 용매에 넣고 분획시키는 단계; 분획된 층에서 얻어진 추출물을 컬럼에 통과시키는 단계; 및 컬럼 통과액을 침전시켜 재결정화하는 단계;를 포함한다.
The method for extracting a peony root extract of the present invention comprises the steps of: dissolving a peony bud; Concentrating the eluted extract; Placing the concentrated extract in two or more solvents and fractionating; Passing the extract obtained in the fractioned layer through a column; And recrystallizing by precipitating the column passing liquid.

먼저, 작약으로부터 탁시폴린 배당체, 바람직하게 탁시폴린-3-글루코사이드(taxifolin-3-glucoside)를 용출시키게 된다. 바람직하게 이 용매추출 공정은 용매를 기준으로 0.5 내지 20.0중량%의 작약을 용매에 가하여 0.5 내지 5시간을 추출한다.First, the taxane polyphosphate glycoside, preferably taxifolin-3-glucoside, is eluted from the peony. Preferably, the solvent extraction process is carried out by adding 0.5-20.0 wt.% Peony based on the solvent to the solvent for 0.5-5 hours.

이 때 용매는 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에틸아세테이트, 에틸에테르, 클로로포름, 헥산으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 것일 수 있다.
The solvent may be at least one selected from the group consisting of water, ethanol, methanol, butanol, ethyl acetate, ethyl ether, chloroform, and hexane.

그 다음, 상기 추출공정을 통해 탁시폴린-3-글루코사이드가 용출된 작약 추출물은 용매 제거를 위해 1차 농축 공정을 거친다. 용출된 추출물의 농축은 종래 농축 방법으로 알려진 것이면 제한되는 것은 아니나, 가열건조, 감압건조, 분무건조 및 동결건조로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상으로 수행되는 것일 수 있다.
Then, the crude extract of Taxus polyphenine-3-glucoside, which has been eluted through the above-mentioned extraction step, is subjected to a first concentration step for solvent removal. Concentration of the eluted extract may be carried out by any one or more selected from the group consisting of heat drying, vacuum drying, spray drying and freeze drying, as long as they are known in the conventional concentration method.

그 후, 상기 농축을 통해 농축된 추출물을 둘 이상의 용매에 넣고 분획시킨다. 이때 둘 이상의 용매는 서로 극성에 차이가 있는 용매이며, 바람직하게는 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에틸아세테이트, 에틸에테르, 클로로포름, 헥산으로 이루어진 군으로부터 선택된 둘 이상인 것일 수 있다. 극성이 다른 용매에 용해된 추출물 내에 존재하는 여러 화합물들은 극성에 따라 분리된다. Thereafter, the concentrated extract is concentrated in two or more solvents. At this time, the two or more solvents are polar solvents having different polarities, and preferably two or more solvents selected from the group consisting of water, ethanol, methanol, butanol, ethyl acetate, ethyl ether, chloroform and hexane. Several compounds present in extracts dissolved in solvents of different polarity are polarized.

상기 분획 이후 분획된 층의 유기 용매를 제거하는 2차 농축 단계를 수행할 수 있다. 이 단계에서의 농축은 종래 농축 방법으로 알려진 것이면 제한되는 것은 아니나, 가열건조, 감압건조, 분무건조 및 동결건조로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상으로 수행되는 것일 수 있다.
A second concentration step of removing the organic solvent of the fractionated layer after the fractionation can be performed. Concentration at this stage may be carried out by any one or more selected from the group consisting of heat drying, vacuum drying, spray drying and freeze drying, as long as they are known as conventional concentration methods.

그 후, 분획된 층에서 얻어진 추출물을 컬럼에 통과시킨다. 이때 컬럼은 제한되는 것은 아니나, 흡착수지를 이용한 레진 컬럼인 것이 바람직하다. 상기 레진은 엠버라이트 XAD 레진, 다우엑스 레진, 수페라이트 DAX 레진 및 다이아이온 HP-10, 20, 30, 40, 50 레진으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레진인 것일 수 있다.The extract obtained in the fractioned layer is then passed through a column. At this time, the column is not limited, but it is preferably a resin column using an adsorption resin. The resin may be one or more resins selected from the group consisting of Amberlite XAD resin, Dow X resin, Suferite DAX resin, and Diaion HP-10, 20, 30, 40, and 50 resins.

상기 컬럼 통과에 의하여, 분획 농축물(분획 농축 파우더)에서 색소 및 클로로필이 제거된다.
By passing through the column, the pigment and chlorophyll are removed from the fraction concentrate (fraction concentrated powder).

마지막으로, 컬럼 통과액을 침전시켜 재결정화한다. 이는 컬럼공정을 거친 컬럼 통과액에 압력 및 온도를 조절하여 침전시킴으로서 이루어진다. 이때 재결정은 -300 내지 25℃ 및 0.5 내지 800MPa에서 수행되는 것일 수 있다. 즉, 재결정은 초저온 및 초고압을 포함하는 조건하에서 이루어질 수 있는 것이다.
Finally, the column passed solution is precipitated to be recrystallized. This is accomplished by adjusting the pressure and temperature of the column passed through the column to precipitate. The recrystallization may be performed at -300 to 25 ° C and 0.5 to 800 MPa. That is, the recrystallization can be performed under the conditions including the ultra-low temperature and the ultra-high pressure.

상기 추출방법은 재결정화 이후에 재결정화된 추출물을 건조하여 수득하는 단계;를 더 포함하는 것일 수 있다. 상기 수득 공정은 재결정화된 침전펠렛을 분무건조 또는 동결건조하여 파우더 형태의 고함량의 탁시폴린-3-글루코사이드를 얻는 것으로, 원심분리, 필터 및 진공농축법 등의 방법으로 농축하여 분말상의 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물을 얻을 수 있다.
The extraction method may further comprise drying and obtaining the recrystallized extract after recrystallization. In the obtaining step, the recrystallized precipitated pellet is spray-dried or lyophilized to obtain a high-content powder of taciffiospin-3-glucoside, which is then concentrated by centrifugation, filtration and vacuum concentration, -3-glucoside can be obtained.

본 발명에 따른 작약 추출물의 제조방법은 다단계의 연속 공정으로서, 상술한 바와 같이 추출, 농축, 분획, 컬럼 및 재결정화를 거치는 경우 가장 높은 수율로 탁시폴린 배당체를 얻을 수 있다.The method for preparing peony root extract according to the present invention is a multistage continuous process, and when the peptides are subjected to extraction, concentration, fractionation, column and recrystallization as described above, a taxonlin glycoside can be obtained with the highest yield.

이렇게 추출된 탁시폴린 배당체를 포함하는 작약 추출물은 뛰어난 미백효과, 주름개선효과, 항염, 항균, 자외선보호효과 그리고 아토피 개선효과를 나타낸다.
The peony root extract containing the extracted taxoproline glycoside has excellent whitening effect, wrinkle improving effect, anti-inflammation, antibacterial, ultraviolet ray protecting effect and atopy improvement effect.

이하의 실시를 통하여 본 발명이 더욱 상세하게 설명된다. 단, 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로서 이들만으로 본 발명의 범위가 한정되는 것은 아니다.
The present invention will be described in more detail through the following examples. However, the examples are for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited thereto.

<비교예 1>&Lt; Comparative Example 1 &

작약을 70% 에탄올 수용액에 10중량%로 가하여 냉각콘덴서가 달린 환류추출기에서 온도 80℃ 조건하에 2시간 동안 추출하였다. 그 후 80 메쉬(mesh) 필터와 1.2 ㎛ 필터를 이용, 여과하여 추출 여액을 얻었고, 수득된 추출여액을 진공농축기(Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan)를 이용하여 65℃, 20 hPa 조건하에 1시간 동안 농축을 실시, 농축파우더를 얻었다. 이와 같이 수득된 것을 "시료 1"이라 하고, 하기 시험예에서 사용하였다.
The peony was added to a 70% aqueous ethanol solution in an amount of 10% by weight and extracted with a reflux condenser equipped with a condenser at a temperature of 80 캜 for 2 hours. Thereafter, the filtrate was filtered through an 80 mesh filter and a 1.2 쨉 m filter, and the obtained filtrate was concentrated under a condition of 65 h and 20 hPa using a vacuum concentrator (Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan) Concentration was carried out for 1 hour to obtain a concentrated powder. The sample thus obtained was called "sample 1" and used in the following test examples.

<비교예 2>&Lt; Comparative Example 2 &

작약을 70% 에탄올 수용액에 10중량%로 가하여 냉각콘덴서가 달린 환류추출기에서 온도 80℃ 조건하에 2시간 동안 추출하였다. 그 후 80 메쉬(mesh) 필터와 1.2 ㎛ 필터를 이용, 여과하여 추출 여액을 얻었고, 수득된 추출여액을 진공농축기(Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan)를 이용하여 65℃, 20 hPa 조건하에 1시간 동안 농축을 실시, 농축파우더를 얻었다. 수득된 농축파우더에 10 배 중량의 증류수를 투입하여 고르게 분산한 뒤 분획여두를 사용하여 증류수와 같은 부피의 헥산을 투입, 분획하였고 차례로 에틸아세테이트, n-부탄올을 차례로 분획하여 최종적으로 에틸아세테이트층을 얻었다. 수득된 에틸아세테이트 분획여액을 진공농축기(Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan)를 이용하여 65℃, 20 hPa 조건하에 1시간 동안 농축을 실시, 농축파우더를 얻었으며, 이와 같이 수득된 것을 "시료 2"라 하고, 하기 시험예에서 사용하였다.
The peony was added to a 70% aqueous ethanol solution in an amount of 10% by weight and extracted with a reflux condenser equipped with a condenser at a temperature of 80 캜 for 2 hours. Thereafter, the filtrate was filtered through an 80 mesh filter and a 1.2 쨉 m filter, and the obtained filtrate was concentrated under a condition of 65 h and 20 hPa using a vacuum concentrator (Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan) Concentration was carried out for 1 hour to obtain a concentrated powder. 10 times as much weight of distilled water was added to the obtained concentrated powder to uniformly disperse it. Then, hexane of the same volume as that of distilled water was added and fractionated using a fractional distillation column. Ethyl acetate and n-butanol were sequentially fractionated and finally ethyl acetate layer . The obtained ethyl acetate fraction filtrate was concentrated for 1 hour at 65 ° C and 20 hPa using a vacuum concentrator (Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan) to obtain a concentrated powder. 2 &quot;, which was used in the following test example.

<비교예 3>&Lt; Comparative Example 3 &

작약을 70% 에탄올 수용액에 10중량%로 가하여 냉각콘덴서가 달린 환류추출기에서 온도 80℃ 조건하에 2시간동안 추출하였다. 그 후 80 메쉬(mesh) 필터와 1.2 ㎛ 필터를 이용, 여과하여 추출 여액을 얻었고, 수득된 추출여액을 진공농축기(Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan)를 이용하여 65℃, 20 hPa 조건하에 1시간 동안 농축을 실시, 농축파우더를 얻었다. 수득된 농축파우더에 10 배 중량의 증류수를 투입하여 고르게 분산한 뒤 분획여두를 사용하여 증류수와 같은 부피의 헥산을 투입, 분획하였고 차례로 에틸아세테이트, n-부탄올을 차례로 분획하여 최종적으로 에틸아세테이트층을 얻었다. 수득된 에틸아세테이트 분획여액을 진공농축기(Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan)를 이용하여 65℃, 20 hPa 조건하에 1시간 동안 농축을 실시, 농축파우더를 얻었으며, 농축파우더를 10 배 중량의 증류수에 다시 분산하여 다이아이온(Diaion) HP-20 컬럼에 투입, 증류수와 99.5% 에탄올을 사용한 기울기 용법으로 크로마토그래피를 수행하였고, 유속 20 ml/min 조건하에 최종적으로 70%-99.5% 에탄올 컬럼액을 받아 진공농축기(Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan)를 이용하여 65℃, 20 hPa 조건하에 1시간 동안 농축을 실시, 농축파우더를 얻었고, 이와 같이 수득된 것을 "시료 3"이라 하고, 하기 시험예에서 사용하였다.
The peony was added to a 70% aqueous ethanol solution in an amount of 10% by weight and extracted with a reflux condenser equipped with a condenser at a temperature of 80 캜 for 2 hours. Thereafter, the filtrate was filtered through an 80 mesh filter and a 1.2 쨉 m filter, and the obtained filtrate was concentrated under a condition of 65 h and 20 hPa using a vacuum concentrator (Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan) Concentration was carried out for 1 hour to obtain a concentrated powder. 10 times as much weight of distilled water was added to the obtained concentrated powder to uniformly disperse it. Then, hexane of the same volume as that of distilled water was added and fractionated using a fractional distillation column. Ethyl acetate and n-butanol were sequentially fractionated and finally ethyl acetate layer . The obtained ethyl acetate fraction filtrate was concentrated for 1 hour at 65 DEG C and 20 hPa using a vacuum concentrator (Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan) to obtain a concentrated powder, The mixture was re-dispersed in distilled water and added to a Diaion HP-20 column. Chromatography was performed by using a gradient method using distilled water and 99.5% ethanol. Finally, 70% -99.5% ethanol column solution And concentrated under a condition of 65 ° C and 20 hPa for 1 hour using a vacuum evaporator (Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan) to obtain a concentrated powder. The sample thus obtained was referred to as "sample 3" It was used in the test example.

<실시예 1>&Lt; Example 1 >

작약을 70% 에탄올 수용액에 10중량%로 가하여 냉각콘덴서가 달린 환류추출기에서 온도 80℃ 조건하에 2시간 동안 추출하였다. 그 후 80 메쉬(mesh) 필터와 1.2 ㎛ 필터를 이용, 여과하여 추출 여액을 얻었고, 수득된 추출여액을 진공농축기(Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan)를 이용하여 65℃, 20 hPa 조건하에 1시간 동안 농축을 실시, 농축파우더를 얻었다. 수득된 농축파우더에 10 배 중량의 증류수를 투입하여 고르게 분산한 뒤 분획여두를 사용하여 증류수와 같은 부피의 헥산을 투입, 분획하였고 차례로 에틸아세테이트, n-부탄올을 차례로 분획하여 최종적으로 에틸아세테이트층을 얻었다. 수득된 에틸아세테이트 분획여액을 진공농축기(Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan)를 이용하여 65℃, 20 hPa 조건하에 1시간 동안 농축을 실시, 농축파우더를 얻었으며, 농축파우더를 10 배 중량의 증류수에 다시 분산하여 Diaion HP-20 컬럼에 투입, 증류수와 99.5% 에탄올을 사용한 기울기 용법으로 크로마토그래피를 수행하였고, 유속 20 ml/min 조건하에 최종적으로 70%-99.5% 에탄올 컬럼액을 받아 초고압장치(TFS-2L, TOYO KOATSU CO., LTD., Japan)를 이용하여 100 MPa, 25 ℃, 1시간 동안 초고압 재결정화 처리 하였다. 이를 원심분리기(Supra 22K, Hanil, Korea)를 이용하여 8,000 rpm, 15℃ 조건으로 15분간 원심분리 하고, 1.2 ㎛ 필터로 여과를 수행, 최종적으로 Dryoven 60℃ 조건하에 1시간 동안 건조하여 파우더를 수득하였고, 이와 같이 수득된 것을 "시료 4"라 하고, 하기 시험예에서 사용하였다.
The peony was added to a 70% aqueous ethanol solution in an amount of 10% by weight and extracted with a reflux condenser equipped with a condenser at a temperature of 80 캜 for 2 hours. Thereafter, the filtrate was filtered through an 80 mesh filter and a 1.2 쨉 m filter, and the obtained filtrate was concentrated under a condition of 65 h and 20 hPa using a vacuum concentrator (Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan) Concentration was carried out for 1 hour to obtain a concentrated powder. 10 times as much weight of distilled water was added to the obtained concentrated powder to uniformly disperse it. Then, hexane as a volume as that of distilled water was added and fractionated using a fractional nozzle. Ethyl acetate and n-butanol were sequentially fractionated, . The obtained ethyl acetate fraction filtrate was concentrated for 1 hour at 65 DEG C and 20 hPa using a vacuum concentrator (Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan) to obtain a concentrated powder, The mixture was re-dispersed in distilled water and added to a Diaion HP-20 column. Chromatography was carried out using gradient water and distilled water and 99.5% ethanol. Ultrafiltration was performed using a 70% -99.5% ethanol column at a flow rate of 20 ml / (TFS-2L, TOYO KOATSU CO., LTD., Japan) at 100 MPa and 25 ° C for 1 hour. The mixture was centrifuged at 8,000 rpm and 15 ° C for 15 minutes using a centrifuge (Supra 22K, Hanil, Korea), filtered through a 1.2 μm filter, and finally dried at 60 ° C. for 1 hour to obtain a powder , And the thus obtained sample was called "sample 4" and used in the following test examples.

<실시예 2>&Lt; Example 2 >

작약을 70% 에탄올 수용액에 10중량%로 가하여 냉각콘덴서가 달린 환류추출기에서 온도 80℃ 조건하에 2시간동안 추출하였다. 그 후 80 메쉬(mesh) 필터와 1.2 ㎛ 필터를 이용, 여과하여 추출 여액을 얻었고, 수득된 추출여액을 진공농축기(Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan)를 이용하여 65℃, 20 hPa 조건하에 1시간 동안 농축을 실시, 농축파우더를 얻었다. 수득된 농축파우더에 10 배 중량의 증류수를 투입하여 고르게 분산한 뒤 분획여두를 사용하여 증류수와 같은 부피의 헥산을 투입, 분획하였고 차례로 에틸아세테이트, n-부탄올을 차례로 분획하여 최종적으로 에틸아세테이트층을 얻었다. 수득된 에틸아세테이트 분획여액을 진공농축기(Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan)를 이용하여 65℃, 20 hPa 조건하에 1시간 동안 농축을 실시, 농축파우더를 얻었으며, 농축파우더를 10 배 중량의 증류수에 다시 분산하여 Diaion HP-20 컬럼에 투입, 증류수와 99.5% 에탄올을 사용한 기울기 용법으로 크로마토그래피를 수행하였고, 유속 20 ml/min 조건하에 최종적으로 70%-99.5% 에탄올 컬럼액을 받아 초저온장치(DF-9010, Ilshin, Korea)를 이용하여 -90℃, 2시간 동안 초저온 재결정화 처리 하였다. 이를 원심분리기(Supra 22K, Hanil, Korea)를 이용하여 8,000 rpm, 15℃ 조건으로 15분간 원심분리 하고, 1.2 ㎛ 필터로 여과를 수행, 최종적으로 Dryoven 60℃ 조건하에 1시간 동안 건조하여 파우더를 수득하였고, 이와 같이 수득된 것을 "시료 5"라 하고, 하기 시험예에서 사용하였다.
The peony was added to a 70% aqueous ethanol solution in an amount of 10% by weight and extracted with a reflux condenser equipped with a condenser at a temperature of 80 캜 for 2 hours. Thereafter, the filtrate was filtered through an 80 mesh filter and a 1.2 쨉 m filter, and the obtained filtrate was concentrated under a condition of 65 h and 20 hPa using a vacuum concentrator (Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan) Concentration was carried out for 1 hour to obtain a concentrated powder. 10 times as much weight of distilled water was added to the obtained concentrated powder to uniformly disperse it. Then, hexane of the same volume as that of distilled water was added and fractionated using a fractional distillation column. Ethyl acetate and n-butanol were sequentially fractionated and finally ethyl acetate layer . The obtained ethyl acetate fraction filtrate was concentrated for 1 hour at 65 DEG C and 20 hPa using a vacuum concentrator (Rotary Evaporator NE-series, Eyela, Japan) to obtain a concentrated powder, The mixture was re-dispersed in distilled water and loaded on a Diaion HP-20 column. Chromatography was carried out using gradient water and distilled water using 99.5% ethanol. The column was finally subjected to a 70% -99.5% ethanol column under a flow rate of 20 ml / (DF-9010, Ilshin, Korea) at -90 ° C for 2 hours. The mixture was centrifuged at 8,000 rpm and 15 ° C for 15 minutes using a centrifuge (Supra 22K, Hanil, Korea), filtered through a 1.2 μm filter, and finally dried at 60 ° C. for 1 hour to obtain a powder , And the thus obtained sample was referred to as "sample 5" and used in the following test examples.

[시험예 1] HPLC를 이용한 탁시폴린-3-글루코사이드(taxifolin-3-glucoside)의 함량분석[Test Example 1] Analysis of the content of taxifolin-3-glucoside by HPLC

본 발명의 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물의 제조방법 단계별에 따른 탁시폴린-3-글루코사이드의 함량변화를 확인하기 위하여, 실시예 별 시료의 HPLC를 이용한 함량분석을 하기와 같이 수행하였다.The method of the present invention for preparing a crude extract containing Taxifolin-3-glucoside In order to confirm the change of the content of Taxifolin-3-glucoside according to the steps, analysis of the content of each sample by HPLC was performed as follows .

상기 실시예를 통해 제조된 제조방법 단계별 시료의 탁시폴린-3-글루코사이드의 정성, 정량분석을 위하여 HPLC(High pressure liquid chromatography)를 이용해 분석을 수행하였다. 시료는 각 용매로 적당 농도를 제조 하여 0.2㎛ 필터에 여과, 전처리 후 기기에 주입하였다. 기기는 HPLC(Agilent 1200series system, Agilent, USA)를 사용하여 UV detector를 이용, UV 전영역에서 분석하였으며, C18컬럼(Zorbax XDB-C18 4.6×250mm, Agilent, USA)을 사용하여 2% 정제수 및 아세트산 용매와 아세토니트릴 용매를 사용한 기울기 용법으로 분석하였다. 분석에 사용된 용매는 모두 HPLC급 시약을 사용하였으며, 표준곡선을 구한 후 정량분석을 수행하였다. 분석결과는 하기 표 1 및 도 2와 같다. 도 2는 추출, 농축, 분획, 컬럼, 초저온재결정 등 5단계 제조방법을 거친(시료5) 작약 추출물의 탁시폴린-3-글루코사이드의 HPLC 크로마토그램이다.
For the qualitative and quantitative analysis of the taciffin-3-glucoside of the step-by-step samples prepared in the above examples, analysis was carried out using HPLC (High Pressure Liquid Chromatography). Samples were prepared at appropriate concentrations with each solvent, filtered through a 0.2 μm filter, pretreated and injected into the instrument. The instrument was analyzed in the whole UV range using a UV detector using HPLC (Agilent 1200 series system, Agilent, USA). The C 18 column (Zorbax XDB-C 18 4.6 × 250 mm, Agilent, USA) using 2% purified water and slanting method using acetic acid solvent and acetonitrile solvent. All of the solvents used in the analysis were HPLC grade reagents, and standard curves were obtained and quantitative analysis was performed. The results of the analysis are shown in Table 1 and FIG. Fig. 2 is an HPLC chromatogram of Taxifolin-3-glucoside of a peony root extract (sample 5) that has undergone five steps of preparation such as extraction, concentration, fractionation, column and cryogenic recrystallization.

시료명Name of sample 제조방법 단계Manufacturing method steps 탁시폴린-3-글루코사이드 함량(%)Taxicol-3-glucoside content (%) 비교예 1Comparative Example 1 추출, 농축Extraction, concentration 2.52.5 비교예 2Comparative Example 2 추출, 농축, 분획Extraction, concentration, fraction 11.411.4 비교예 3Comparative Example 3 추출, 농축, 분획, 컬럼Extraction, concentration, fraction, column 32.932.9 실시예 1Example 1 추출, 농축, 분획, 컬럼, 초고압 재결정Extraction, concentration, fraction, column, ultrahigh pressure recrystallization 97.497.4 실시예 2Example 2 추출, 농축, 분획, 컬럼, 초저온 재결정Extraction, concentration, fractionation, column, cryogenic recrystallization 99.399.3

상기 표 1에 나타난 바와 같이, 작약으로부터 추출, 농축, 분획, 컬럼, 재결정 공정을 거칠수록 탁시폴린-3-글루코사이드의 함량이 비약적으로 상승함을 확인할 수 있었으며, 재결정 공정을 통해 99%가 넘는 고함량의 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물을 제조 할 수 있음을 확인하였다.
As shown in Table 1 above, it was confirmed that the content of taxifolin-3-glucoside was dramatically increased as the extraction, concentration, fractionation, column, and recrystallization were carried out from the peony root, It was confirmed that a crude extract of Panax notoginseng can be prepared which contains the content of Taxifolin-3-glucoside.

[시험예 2]  타이로시네이즈 활성저해 시험[Test Example 2] Tyrosinase activity inhibition test

본 발명의 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물의 미백효과를 검정하기 위해 타이로시네이즈(tyrosinase)라는 효소의 기능이 억제되는 정도를 평가하였다. 타이로시네이즈는 생체내에서 타이로신(tyrosine)이라는 물질의 산화과정을 촉진하여 멜라닌이 생성되게 도와주는 효소이다. 멜라닌이란 흑색의 고분자로서 생체내에서 상기와 같은 산화에 의해 멜라닌이 형성되어 피부 상층부로 이동하게 되면 피부가 검게 변하고 기미, 주근깨를 생성하게 된다. 이러한 타이로시네이즈의 작용을 억제하는 정도를 측정하여 미백효과를 검정하는 방법을 응용해 판정하였다. 시험방법은 하기와 같다.In order to test the whitening effect of the peony root extract containing Taxifolin-3-glucoside of the present invention, the degree of suppression of the function of the enzyme called tyrosinase was evaluated. Tyrosinase is an enzyme that helps the production of melanin by promoting the oxidation process of tyrosine in vivo. Melanin is a black polymer, which melanin is formed in the body by oxidation as described above. When melanin is formed in the upper part of the skin, the skin turns black and produces spots and freckles. The degree of inhibition of the action of tyrosinase was measured to determine the whitening effect. The test method is as follows.

시료 0.9 mL, 0.1 M 인산완충액(pH 6.8) 1.0 mL 및 1.5 mM L-타이로신 용액 1.0 mL을 넣은 후, 37℃에서 10분간 유지시켰다. 머쉬룸타이로시네이즈(1,500 units/mL) 0.1 mL를 첨가하여 37℃에서 10분간 반응시킨 후, UV-분광광도계(Smartspec Plus, Biorad, USA)를 사용하여 475 nm에서 흡광도를 측정하여 타이로시네이즈에 대한 저해율을 측정하였다.0.9 mL of the sample, 1.0 mL of 0.1 M phosphate buffer (pH 6.8), and 1.0 mL of 1.5 mM L-tyrosine solution were added thereto, and the mixture was maintained at 37 DEG C for 10 minutes. 0.1 ml of Mushroom Tyrosinase (1,500 units / mL) was added and reacted at 37 ° C for 10 minutes. Absorbance was measured at 475 nm using a UV-spectrophotometer (Smartspec Plus, Biorad, USA) The inhibition rate against Nausea was measured.

상기 타이로시네이즈 활성저해시험을 위한 대조군은 시료액 대신 완충용액을 넣어 같은 방법으로 측정하였으며, 타이로시네이즈 대신 완충용액을 넣어 시료와 대조군에 대한 각각의 색 보정값을 얻은 경우로 설정하였다.As a control group for the inhibition of tyrosinase activity, a buffer solution was added in place of the sample solution, and the same method was used. A buffer solution was added instead of tyrosinase to obtain the respective color correction values for the sample and the control group .

시험에 사용한 시료는 실시예 2(시료 5)에서 수득한 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물과 여러 연구결과에서 미백효과가 뛰어나다고 알려진 알부틴(arbutin)(Arbutin synthetic, Sigma)을 비교하였고, 하기 수학식 1을 이용하여 타이로시네이즈 저해율을 수치로 계산하여 하기 표 2에 나타내었다. 표 2에서, IC50은 타이로시네이즈 활성을 50% 저해하는데 소요되는 시료의 농도이며, 값이 작을수록 저해율이 높음을 나타낸다.
The samples used in the test were the peony extracts containing texifolin-3-glucoside obtained in Example 2 (Sample 5) and arbutin (Arbutin synthetic, Sigma), which is known to have excellent whitening effect in various studies , The tyrosinase inhibition rate was calculated numerically using the following equation (1), and the results are shown in Table 2 below. In Table 2, IC 50 is the concentration of the sample required to inhibit tyrosinase activity by 50%, and the lower the value, the higher the inhibition rate.

[수학식 1][Equation 1]

타이로시네이즈 저해율(%) = 100-((시료의 흡광도/대조군의 흡광도)×100)
Inhibition rate (%) = 100 - ((absorbance of sample / absorbance of control group) x 100)

시료sample 타이로시네이즈 활성저해율,
 IC50(mg/mL)
Inhibition rate of tyrosinase activity,
IC 50 (mg / mL)
실시예 2Example 2 0.0220.022 알부틴Arbutin 0.0320.032

표 2에 나타난 바와 같이, 실시예 2의 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물은 현재 미백효과가 뛰어나다고 알려진 알부틴과 비교하여 미백효과가 월등히 우수함을 확인하였다.
As shown in Table 2, it was confirmed that the peony root extract containing Taxon poly-3-glucoside of Example 2 had much better whitening effect than arbutin, which is known to have excellent whitening effect at present.

[시험예 3] 엘라스테이즈 활성저해시험[Test Example 3] Elastase activity inhibition test

본 발명의 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물의 피부주름 억제 및 개선 효과를 검정하기 위하여 엘라스테이즈 활성저해시험(elastase inhibition activity test)을 실시하였다. 엘라스틴은 피부 진피 내 matrix층을 구성하는 성분으로 피부가 노화됨에 따라 엘라스틴이 분해되고 진피 내 matrix층이 무너지며 주름이 생기게 된다. 이러한 원리를 이용하여 엘라스틴(elastin)을 분해하는 효소인 엘라스테이즈의 활성을 측정하는 방법으로 엘라스테이즈 기질인 N-석시닐-(Ala)3 p-니트로아닐린(N-succinyl-(Ala)3 p-nitroaniline, Sigma)을 이용하여 p-니트로아닐린이 분해되면서 생기는 색의 변화를 405 nm의 파장에서 흡광도를 측정함으로써 엘라스테이즈 활성을 측정하는 방법이다. 완충액은 pH 8.0, 0.267 M Trizma-HCl (Sigma), 기질액은 8.8 mM N-석시닐-(Ala)3 p-니트로아닐린, 효소액은 돼지췌장 엘라스테이즈를 10 ㎍/mL (Sigma)의 농도로 사용하였다. 완충액 60 ㎕, 기질액 20 ㎕와 상기 실시예 2(시료 5)를 농도별로 3차 증류수에 희석한 시료액 100 ㎕를 섞은 후, 효소액 20 ㎕를 넣어 25℃ 항온수조에서 15분간 반응시켜 p-니트로아닐린의 생성량을 마이크로플레이트 리더(UVT-06685, Thermo max, USA)를 사용하여 파장 405 nm에서 측정하였다.An elastase inhibition activity test was conducted to examine the skin wrinkle inhibition and improving effect of the extract of Panax notoginsenosides containing Taxifolin-3-glucoside of the present invention. Elastin is a component of the matrix layer in the dermis of the skin. As the skin ages, elastin breaks down and the matrix layer in the dermis breaks down and wrinkles occur. (Ala) 3 p-nitroaniline (N-succinyl- (Ala)), which is an elastase substrate, is used as a method for measuring the activity of Elastase, an enzyme that decomposes elastin, 3 p-nitroaniline, Sigma) to determine the change in color caused by the decomposition of p-nitroaniline by measuring the absorbance at a wavelength of 405 nm. The buffer solution was pH 8.0, 0.267 M Trizma-HCl (Sigma), the substrate solution was 8.8 mM N-succinyl- (Ala) 3 p-nitroaniline and the enzyme solution was incubated with the pancreatic islets in 10 μg / Respectively. 20 μl of the buffer solution and 20 μl of the enzyme solution were mixed with 100 μl of the sample solution diluted with the third distilled water according to the concentration of Example 2 (Sample 5), and then 20 μl of the enzyme solution was added and reacted in a constant temperature water bath at 25 ° C for 15 minutes, The amount of nitroaniline produced was measured at a wavelength of 405 nm using a microplate reader (UVT-06685, Thermo max, USA).

상기 엘라스테이즈 활성도를 측정하기 위한 대조군은 시료 대신 3차 증류수를 넣어 같은 방법으로 측정하였으며, 효소액 대신 3차 증류수를 넣어 각각에 대한 색 보정값을 얻은 경우를 설정하였다.The control group for measuring the activity of the Elastase was prepared by adding the third distilled water instead of the sample, measuring the same method, and adding the third distilled water instead of the enzyme solution to obtain the color correction value for each.

시험에 사용한 시료는 실시예 2(시료 5)에서 수득한 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물과 기존 주름개선효과가 뛰어나다고 알려진 레티놀(>99%, Sigma, USA)을 양성대조군으로 비교하여 실험하였고, 하기 수학식 2를 이용하여 엘라스테이즈 저해율을 수치로 계산하여 하기 표 3에 나타내었다. 표 3에서 IC50은 엘라스테이즈 활성을 50 % 저해하기 위해 소요되는 시료의 농도이며, 값이 작을수록 저해율이 높음을 나타낸다.
The samples used in the test were peanut extracts containing taxol-3-glucoside obtained in Example 2 (sample 5) and retinol (> 99%, Sigma, USA) And the inhibition rate of the ELASTASE was calculated numerically using the following equation (2). In Table 3, IC 50 is the concentration of the sample required to inhibit the enzyme activity by 50%, and the lower the value, the higher the inhibition rate.

[수학식 2]&Quot; (2) &quot;

엘라스테이즈활성저해율(%)= 100-((시료의흡광도)/대조군의 흡광도)×100)
Elastase activity inhibition rate (%) = 100 - ((absorbance of sample) / absorbance of control group) × 100)

시료sample 엘라스테이즈 활성저해율,
 IC50(mg/mL)
Elastase activity inhibition rate,
IC 50 (mg / mL)
실시예 2Example 2 0.200.20 레티놀Retinol 0.380.38

상기 표 3에 나타난 바와 같이, 실시예 2(시료 5)에서 수득한 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물은 기존 주름개선효과가 뛰어나다고 알려진 레티놀과 비교하여 엘라스테이즈 억제효과가 더 우수하였다.
As shown in Table 3, the extract of Panax ginseng containing Taxifolin-3-glucoside obtained in Example 2 (Sample 5) was superior to retinol, which is known to have excellent wrinkle-reducing effect, Respectively.

[시험예 4] 콜라겐 합성 효과 시험[Test Example 4] Collagen synthesis effect test

본 발명의 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물의 피부 주름개선 효과를 검정하기 위하여 콜라겐 합성능을 측정하였다. 콜라겐은 상기 엘라스틴과 함께 피부 내 진피 매트릭스 층을 이루는 구성성분으로서 피부가 서서히 노화 되어가며 진피 내 매트릭스 층을 이루고 있는 구성성분들이 분해되어 감으로 주름이 생성되는데, 진피 매트릭스 층의 구성성분인 콜라겐의 합성효과를 확인함으로써 피부 주름을 개선시키는 효과를 확인 할 수 있다. 시험 방법은 하기와 같이 진행한다.Collagen aggregation performance was measured to examine the skin wrinkle-improving effect of the extract of Panax notoginsenosides containing Taxifolin-3-glucoside of the present invention. Collagen is a constituent component of the dermal matrix layer in the skin together with the elastin, and the skin gradually ages, and the components constituting the matrix layer in the dermis are decomposed to form wrinkles. The collagen is a constituent of the dermal matrix layer By confirming the synthesis effect, the effect of improving the wrinkles of the skin can be confirmed. The test method proceeds as follows.

사람의 정상 섬유아세포(human dermal fibroblast)를 24-웰 마이크로플레이트에 접종시키고(1×105 세포/웰) 37℃, 5 % 농도의 CO2 배양기에서 24시간 배양하였다. 각 시료들을 농도별로 첨가한 혈청이 함유되지 않은 DMEM배지에서 24시간 동안 배양하였다. 콜라겐 합성량은 효소면역측정법을 이용하여 다음과 같이 수행한다.Inoculated with normal fibroblast (human dermal fibroblast) of the person in a 24-well microplate and (1 × 10 5 cells / well) 37 ℃, it was cultured for 24 hours in a CO 2 incubator at 5% concentration. Each sample was incubated in serum-free DMEM medium for 24 hours. The amount of collagen synthesis is measured by enzyme immunoassay as follows.

24시간 배양한 배지를 96-웰 마이크로플레이트에 분주하여 4℃에서 하룻밤 동안 코팅하였다. 세척 버퍼(PBS-T; 0.05 % Tween 20 in phosphate buffered saline)로 3회 세척하고 블로킹 용액(5 % skin milk, Fluka)을 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 블로킹하였다. 블로킹 용액을 버리고 세척 버퍼로 3회 세척하고, 일차항체(rabbit anti-collagen type I, Sigma)를 PBS-T에 희석하여 100 ㎕씩 가하여 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 세척 버퍼로 3회 세척한 다음, 이차 항체(anti-rabbit IgG alkaline phosphatase conjugate, Sigma)를 PBS-T에 희석하여 100 ㎕씩 첨가하여 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 세척 버퍼로 3회 세척 후, 기질용액(alkaline phosphatase substrate solution, Sigma)을 100 ㎕씩 넣고 항온 25℃에서 발색시킨 후, 마이크로플레이트 리더(UVT-06685, Termo max, USA)를 사용하여 405nm에서 흡광도를 측정하였다. The medium cultured for 24 hours was dispensed in a 96-well microplate and coated overnight at 4 占 폚. After washing three times with wash buffer (PBS-T; 0.05% Tween 20 in phosphate buffered saline), blocking solution (5% skin milk, Fluka) was added and blocked for 1 hour at 37 ° C. The blocking solution was discarded and washed three times with washing buffer. The primary antibody (rabbit anti-collagen type I, Sigma) was diluted in PBS-T, and 100 μl of each was added thereto, followed by reaction at 37 ° C for 2 hours. After washing three times with washing buffer, 100 μl of secondary antibody (anti-rabbit IgG alkaline phosphatase conjugate, Sigma) was diluted in PBS-T and reacted at 37 ° C for 2 hours. After washing three times with washing buffer, 100 μl of alkaline phosphatase substrate solution (Sigma) was added and developed at 25 ° C. The absorbance at 405 nm was measured using a microplate reader (UVT-06685, Thermo max, USA) Were measured.

상기 콜라겐 합성효과를 측정하기 위한 대조군은 시료를 처리하지 않은 세포 배양액의 반응 흡광도이며, 콜라겐 합성효과를 판단하기 위해 아스코르빈산을 비교군으로 설정하여 각각 3회씩 실시, 평균값을 구하였다.The control group for measuring the collagen synthesis effect was a reaction absorbance of a cell culture solution not treated with the sample. To determine the collagen synthesis effect, ascorbic acid was set as a comparative group, and the results were averaged three times.

하기 수학식 3을 이용하여 콜라겐 합성효과를 수치로 계산하여 하기 표 4에 나타내었다.
The collagen synthesis effect was numerically calculated using the following equation (3) and shown in Table 4 below.

[수학식 3]&Quot; (3) &quot;

Figure 112011086738233-pat00001
Figure 112011086738233-pat00001








(%)
Call
la
Gen
synthesis
castle
Hyo
and
(%)
시료sample 농도(㎍/mL)Concentration (/ / mL)
00 1One 1010 100100 실시예 2Example 2 100.00100.00 111.59111.59 122.84122.84 133.21133.21 아스코르빈산(vitamin-C)Ascorbic acid (vitamin-C) 100.00100.00 108.45108.45 123.57123.57 131.58131.58

표 4에 나타난 바와 같이, 실시예 2(시료 5)에서 수득한 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물은 기존 콜라겐합성효과가 우수하다고 알려진 아스코르빈산과 비교하였을때, 거의 대등한 콜라겐 합성효과를 나타냈다.
As shown in Table 4, the peony root extract containing Taxifolin-3-glucoside obtained in Example 2 (Sample 5) had almost the same collagen synthesis as that of ascorbic acid, Effect.

[시험예 5] 자외선 조사 후 MMP-1 발현억제 평가[Test Example 5] Evaluation of inhibition of MMP-1 expression after irradiation with ultraviolet light

본 발명의 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물의 자외선 조사 후 MMP-1 발현 억제를 평가하기 위해 UV 조사 및 시료 첨가 후 MMP-1 농도를 측정하는 효소면역분석법(ELISA)을 하기와 같이 실시하였다. Enzymatic immunoassay (ELISA) for measuring MMP-1 concentration after UV irradiation and sample addition to evaluate the inhibition of MMP-1 expression after irradiation with ultraviolet rays of the fungicide extract containing Taxifolin-3-glucoside of the present invention Respectively.

UV 챔버를 이용하여 인간 진피 섬유아세포에 UVA를 5 J/㎠의 에너지로 조사한다. 자외선 조사량과 배양시간은 예비 실험을 통하여 섬유아세포에서 MMP 발현량이 최대가 되는 조건을 확립하였다. 음성 대조군은 은박지로 매스킹 후 UVA의 환경에 같은 시간 유지하였다. UVA 방출량은 UV 라디오미터를 이용하여 측정하였고, UVA가 조사되는 동안의 세포는 이전에 분주된 배지 그대로이며 UVA를 조사 한 후 샘플이 들어간 배지로 교환하여 24시간 배양 후 배지를 회수, 96-웰에 코팅하였다. 일차항체(MMP-1 (Ab-5) 단일클론항체와 MMP-2(Ab-3) 단일클론항체)를 처리하고 37℃에서 60분 반응시키고, 이차항체인 안티마우스 IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 다시 60분 정도 반응시킨 후, 알카린 포스파타제 기질 용액(1mg/ml p-nitrophenyl phosphate in diethanolamine 완충용액)을 상온에서 30분간 반응, 마이크로플레이트 리더로 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 시료를 첨가하지 않은 것을 사용하였다. UVA is irradiated to human dermal fibroblasts at an energy of 5 J / cm &lt; 2 &gt; using a UV chamber. Ultraviolet irradiation dose and incubation time were established by preliminary experiment to maximize MMP expression level in fibroblasts. The negative control group was kept in UVA environment for the same time after masking with silver foil. The UVA emission was measured using a UV radiometer. The UVA-irradiated cells remained in the previously-dispensed medium, irradiated with UVA, exchanged with the medium containing the sample, cultured for 24 hours, Lt; / RTI &gt; The primary antibody (MMP-1 (Ab-5) monoclonal antibody and MMP-2 (Ab-3) monoclonal antibody) was treated and reacted at 37 ° C for 60 minutes. The secondary antibody, anti mouse IgG conjugated) was reacted again for 60 minutes. The reaction solution was incubated with alkaline phosphatase substrate solution (1 mg / ml p-nitrophenyl phosphate in diethanolamine buffer) at room temperature for 30 minutes and absorbance was measured at 405 nm with a microplate reader. As a control group, a sample to which no sample was added was used.

하기 표 5에서 볼 수 있듯이, 자외선 조사시에 발현이 유도되는 MMP-1에 대하여 시료를 처리하지 않은 대조군에 비하여 실시예 2(시료 5)는 48 % 이상의 억제율을 보였으며 이는 대조군으로 사용한 레티놀의 억제율보다 우수한 결과이다.
As shown in Table 5, in Example 2 (Sample 5), the inhibition rate of MMP-1 inducing expression at ultraviolet irradiation was 48% or more as compared with the control not treated with the sample, Which is superior to the inhibition rate.

시험군Test group 처리농도(%)Treatment concentration (%) MMP-1 발현억제율(%)MMP-1 expression inhibition rate (%) 실시예 2Example 2 0.10.1 4848 레티놀Retinol 0.10.1 2828

[시험예 6] B16F1 멜라노싸이트를 이용한 멜라닌 생성 억제효과 측정 실험[Experimental Example 6] Experiment to measure melanin formation inhibitory effect using B16F1 melanocyte

본 발명의 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물의 미백효과를 검정하기 위해 하기와 같이 B16F1 멜라노싸이트에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백 효과를 판단한 것이다.In order to test the whitening effect of peony root extract containing Taxifolin-3-glucoside of the present invention, the degree of inhibition of melanin formation on B16F1 melanocyte was examined to determine whitening effect as described below.

본 시험예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포균주이며, 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 시험예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC (American Type Culture Collection, 기탁번호: 6323)로부터 분양받아 사용하였다.The B16F1 melanocyte used in this test example is a cell strain derived from a mouse, and is a cell that secretes a melanin pigment called melanin. During the artificial culture of these cells, samples were treated to compare the degree of reduction of melanin pigment. The B16F1 melanocyte used in this test example was purchased from ATCC (American Type Culture Collection, Accession No. 6323).

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다. B16F1 멜라노싸이트를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2×106 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 trypsin-EDTA로 떼어 낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포내 멜라닌의 정량은 로탄 (Lotan: Cancer Res ., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1 % Triton X-100, 2 mM PMSF) 1 ml를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리 (3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1 N NaOH (10 % DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405 nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율 (%)을 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 저해율 (%)은 하기 수학식 4에 의하여 계산하였으며, IC50값은 멜라닌 생성을 50 % 저해하는 물질의 농도이다.
The melanin biosynthesis inhibitory effect of B16F1 melanocyte was measured as follows. B16F1 melanocytes were dispensed into 6-well plates at a concentration of 2 × 10 6 cells per well, and the cells were incubated at 72 ° C. for 72 hours at a concentration that did not induce toxicity. After incubation for 72 hours, cells were detached with trypsin-EDTA, and the number of cells was measured and centrifuged to recover the cells. Quantification of intracellular melanin was carried out using Lotan: Cancer Res . , 40: 3345-3350, 1980). Cell pellet was washed once with PBS, and 1 ml of homogenization buffer solution (50 mM sodium phosphate, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) was added and vortexed for 5 minutes to disrupt the cells. To the cell filtrate obtained by centrifugation (3,000 rpm, 10 min), 1 N NaOH (10% DMSO) was added to dissolve the extracted melanin, and the absorbance of melanin was measured at 405 nm with a microplate reader. Melanin was quantified, (%) Of melanin production was measured. B16F1 melanogenesis inhibition rate (%) of melanoma site was calculated by the following Equation 4, IC 50 value is the concentration of a substance that inhibits melanin production by 50%.

[수학식 4]&Quot; (4) &quot;

저해율 (%) = [(A-B)/A] × 100Inhibition rate (%) = [(A-B) / A] x 100

A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양A: Amount of melanin in wells to which no sample was added

B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양
B: Amount of melanin in the well to which the sample was added

하기 표 6에서 볼 수 있듯이, B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 억제효과를 시험한 결과 실시예 2(시료 5)의 IC50은 0.08 %로 기존의 미백제인 알부틴, 유용성 감초 추출물 등에 비해 유사하거나 우수한 효과를 나타내었다.
As shown in Table 6 below, the inhibitory effect of B16F1 melanocyte on melanin production was tested. As a result, the IC 50 of Example 2 (sample 5) was 0.08%, which is similar or superior to that of conventional albutin and soluble licorice extract Respectively.

시료명Name of sample 처리농도(%)Treatment concentration (%) 멜라닌 합성 저해효과(IC50)Melanin synthesis inhibitory effect (IC50) 실시예 2Example 2 0.10.1 0.08%0.08% 알부틴Arbutin 0.10.1 0.21%0.21% 유용성 감초 추출물Usefulness Licorice extract 0.10.1 0.03%0.03%

[시험예 7] 자외선조사에 의한 세포독성 완화 효과[Test Example 7] Effect of mitigation of cytotoxicity by ultraviolet irradiation

본 발명의 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물의 자외선 조사에 의한 세포독성의 완화 효과를 평가하기 위하여 하기와 같이 실험을 실시하였다.The following experiment was conducted to evaluate the mitigation effect of cytotoxicity by ultraviolet irradiation on the extract of falcatum arborescens containing Taxifolin-3-glucoside of the present invention.

섬유아세포(fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 1×105개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선 B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 10% FBS가 첨가된 것) 1 ㎖을 첨가하였다. 여기에 평가하고자 하는 실시예 2(시료 5)를 처리한 후 24시간동안 배양하였다. 24시간이 지나면 배지를 제거하고, 각 웰 당 세포배양 배지 500 ㎕ 배지와 MTT 용액(2.5㎎/㎖) 60 ㎕를 넣은 후 2시간동안 37℃ CO2 배양기에서 배양하였다. 배지를 제거하고 이소프로판올-HCl(0.04 N)을 500 ㎕씩 넣어주었다. 5분간 진탕하여 세포를 용해시키고 상등액 100 ㎕씩을 96-웰 시험 플레이트에 옮긴 후, 마이크로플레이트 판독기에서 565 nm 흡광도를 측정하였다. 하기 수학식 5에 의해 세포생존율(%)을 측정하고 자외선에 의한 세포독성 완화율은 하기 수학식 6에 의하여 계산하였다.
Fibroblasts were placed in a 24-well test plate at 1 × 10 5 cells and adhered for 24 hours. Each well was washed once with PBS and 500 占 퐇 of PBS was added to each well. After irradiating the fibroblasts with 10 mJ / cm 2 of ultraviolet light using an ultraviolet B (UVB) lamp (Model: F15T8, UVB 15W, Sankyo Dennki, Japan), PBS was removed and the cell culture medium (DMEM supplemented with 10% FBS 0.0 &gt; ml) &lt; / RTI &gt; was added. Here, Example 2 (Sample 5) to be evaluated was treated and cultured for 24 hours. After 24 hours, the medium was removed, and 500 μl of the cell culture medium and 60 μl of the MTT solution (2.5 mg / ml) were added to each well, followed by culturing in a 37 ° C. CO 2 incubator for 2 hours. The medium was removed and 500 μl of isopropanol-HCl (0.04 N) was added. After shaking for 5 minutes, the cells were lysed and 100 쨉 l of the supernatant was transferred to a 96-well test plate, and absorbance at 565 nm was measured in a microplate reader. The cell viability (%) was measured by the following equation (5) and the cytotoxic relaxation rate by ultraviolet was calculated by the following equation (6).

[수학식 5]&Quot; (5) &quot;

세포생존율(%) =〔(St-Bo)/(Bt-Bo)〕× 100Cell survival rate (%) = [(St-Bo) / (Bt-Bo)] 100

Bo : 세포배양배지 만을 발색 반응한 웰의 565 nm  흡광도Bo: Absorbance at 565 nm of the well of the cell culture medium alone

Bt : 시료를 처리하지 않은 웰을 발색 반응한 웰의 565 nm  흡광도 Bt: Absorbance at 565 nm of a well that underwent chromogenic reaction in a sample not treated with the sample

St : 시료를 처리한 웰을 발색 반응한 웰의 565 nm  흡광도
St: absorbance at 565 nm of wells treated with the sample

[수학식 6]&Quot; (6) &quot;

자외선에 의한 세포독성 완화율(%) =〔1-(St-Bo)/(Bt-Bo)〕× 100(%) = [1- (St-Bo) / (Bt-Bo)] x 100

Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 세포 생존율Bo: Cell survival rate of wells not irradiated with ultraviolet light and not treated with sample

Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 세포생존율      Bt: Cell viability of wells irradiated with ultraviolet light and not treated with the sample

St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 세포생존율 
St: Cell viability of well treated with ultraviolet light and treated with sample

실험결과 하기 표 7에서 볼 수 있듯이, 실시예 2(시료 5)는 자외선에 의한 세포 독성을 0.1% 농도에서 41%의 세포독성을 완화하여 자외선에 의한 세포독성을 효과적으로 방어함을 알 수 있었다. 상기 실험을 통해 자외선에 의한 세포손상을 낮은 농도에서 효과적으로 방어함을 알 수 있다.
Experimental Results As shown in Table 7 below, Example 2 (Sample 5) showed that cytotoxicity by ultraviolet rays was mitigated by cytotoxicity of 41% at a concentration of 0.1%, thereby effectively preventing ultraviolet cytotoxicity. It can be seen from the above experiment that the cell damage by ultraviolet rays is effectively prevented at a low concentration.

 
시료명
 

Name of sample
 
처리농도(%)
 

Treatment concentration (%)
 
세포독성 완화율(%)
 

Cytotoxic Relaxation Rate (%)
실시예 2Example 2  0.10.1 4141

[시험예 8] 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과[Test Example 8] Inhibitory effect of inflammatory cytokine expression by ultraviolet irradiation

본 발명의 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물의 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제효과를 평가하기 위하여 하기와 같이 실험을 수행하였다.The following experiment was conducted to evaluate the inhibitory effect of the extract of Panax notoginsenosides containing Taxifolin-3-glucoside of the present invention on the expression of inflammatory cytokines expressed by ultraviolet irradiation.

사람의 표피조직에서 분리한 섬유아세포(Fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5×104개씩 넣고 24시간동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500 ㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350 ㎕를 첨가하였다. 여기에 평가하고자 하는 실시예 2(시료 5)를 처리한 후 5시간동안 배양하였다. 배양 상층액을 150 ㎕ 취하여 IL-1α를 정량함으로서 실시예 2(시료 5)의 염증성 사이토카인 발현억제효과를 판단하였다. IL-1α의 양은 효소면역분석법 (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)를 이용하여 정량화하였으며, IL-1α의 생성율은 하기 수학식 7에 의해 계산하였다.
Fibroblasts isolated from human epidermal tissue were placed in a 24-well test plate at 5 × 10 4 and adhered for 24 hours. Each well was washed once with PBS and 500 占 퐇 of PBS was added to each well. After irradiating the fibroblasts with 10 mJ / cm 2 of ultraviolet light using an ultraviolet B (UVB) lamp (Model: F15T8, UVB 15W, Sankyo Dennki, Japan), PBS was removed and the cell culture medium &Lt; / RTI &gt; medium). Here, Example 2 (Sample 5) to be evaluated was treated and incubated for 5 hours. 150 [mu] l of the culture supernatant was taken to quantitate IL-1 [alpha] to determine the effect of inhibiting the inflammatory cytokine expression of Example 2 (Sample 5). The amount of IL-1? Was quantitated using an enzyme-linked immunosorbent assay, and the production rate of IL-1? Was calculated by the following equation (7).

[수학식 7]&Quot; (7) &quot;

염증성 사이토카인 발현 억제율(%) =〔1-(St-Bo)/(Bt-Bo)〕× 100Inhibitory rate of inflammatory cytokine expression (%) = [1- (St-Bo) / (Bt-Bo)] 100

Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량Bo: IL-1? Production in wells without UV irradiation

Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량    Bt: IL-1? Production in wells irradiated with ultraviolet light and not treated with the sample

St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 IL-1α생성량
St: IL-1α production in wells irradiated with ultraviolet light and treated with the sample

실험결과 하기 표 8에서 볼 수 있듯이, 실시예 2(시료 5)는 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1α의 생성을 0.1 % 농도에서 41 % 억제하여, 자외선에 의한 염증 발생을 낮은 농도에서 효과적으로 방어함을 알 수 있다.
Experimental Results As shown in Table 8 below, Example 2 (Sample 5) inhibits the production of IL-1α, which is an inflammatory cytokine caused by ultraviolet light, by 41% at a concentration of 0.1% You can see the defense.

 
시료명
 

Name of sample
처리농도(%)Treatment concentration (%) 염증성 사이토카인 발현 억제율(%)Inhibitory rate of inflammatory cytokine expression (%)
실시예 2Example 2 0.050.05 2525 0.10.1 4141

[시험예 9] 항균 효과[Test Example 9] Antibacterial effect

본 발명의 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물(실시예 2)에 대한 항균력 효과 검정시험으로 고체 배양 희석법과 원형여과지법(Paper disc method)에 의하여 항균시험을 실시하였다. 실험균주는 한국생명공학연구원으로부터 분양 받았으며, 그람양성균으로 포도상구균(Staphylococcus aureus KCTC 6910), 그람음성균으로 녹농균(Pseudomonas aeruginosa KCTC 1637), 대장균(E. Coli KCTC 1039), 효모로는 캔디다 효모(Candida albicans KCTC 7965), 사상균으로 흑국균(Aspergillus niger KCTC 6910) 이상 총 4종의 균주를 사용하였으며, 실험 방법과 결과는 하기와 같다.
The antimicrobial test was carried out by the solid culture dilution method and the paper disc method by the antimicrobial activity test for the peony extract (Example 2) containing the taxoidin-3-glucoside of the present invention. The test strains were distributed from the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology. Staphylococcus aureus KCTC 6910), gram-negative bacteria such as Pseudomonas aeruginosa KCTC 1637), Escherichia coli (E. Coli KCTC 1039), a yeast Candida yeast (Candida albicans KCTC 7965), black Aspergillus (Aspergillus fungi as niger KCTC 6910) were used. The experimental methods and results are as follows.

상기 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물의 항균력을 측정하기 위해 고체 배양 희석법(Agar Serial Dilution Method)을 이용하여 최소 저해 농도를 측정하였다. The minimum inhibitory concentration was determined using the Agar Serial Dilution Method to determine the antimicrobial activity of the peony root extract containing Taxon poly-3-glucoside.

세균류는 트립틱 소이 배지를 사용하였고, 배지에 균을 접종하여 37℃ 진탕 배양기에서 24시간동안 전배양하여 사용하였다. 효모의 배양에는 포테이토 덱스트로스 배지를 사용하였고 배지에 균을 접종하여 25℃ 진탕 배양기에서 2일간 전배양하여 사용하였다. 사상균의 배양에는 포테이토덱스트로스 한천배지를 사용하였고 배지에 균을 접종하여 25℃배양기에서 7일간 전배양하여 사용하였다.Tritic soy broth was used as the fungi, and the broth was inoculated on the medium and pre-cultured for 24 hours in a 37 ° C shaking incubator. Potato dextrose culture medium was used for culture of yeast, and the bacteria were inoculated on the medium and cultured for 2 days in a 25 ° C shaking incubator. Potato dextrose agar medium was used for culture of molds, and the bacteria were inoculated on the medium and pre-cultured for 7 days in a 25 ° C incubator.

보다 구체적인 항균시험은 먼저 세균의 경우, 트립틱소이 배지에 균을 접종하여 37℃에서 24시간 전배양하여 준비하고, 효모의 경우, 포테이토덱스트로스 배지에 균을 접종하여 25℃에서 2일간 전배양하며, 사상균은 포테이토 덱스트로스 한천배지에 균을 접종하여 25℃ 배양기에서 7일간 전배양한 후, 도말봉을 이용, 배지 표면에 형성된 사상균의 포자를 회수하여 멸균된 식염수에 희석하여 사용하였다.More specifically, in the case of bacteria, bacteria are inoculated on a tryptic soy medium and cultured at 37 ° C for 24 hours. In the case of yeast, bacteria are inoculated on a potato dextrose medium and cultured for 2 days at 25 ° C. The filamentous fungus was inoculated on a potato dextrose agar medium and pre-cultured for 7 days in a 25 ° C. incubator. Spores of filamentous fungus formed on the surface of the medium were recovered by using a smear rod and diluted in sterilized saline.

멸균된 패트리 디쉬에 시료 및 실험균종 별로 5% 디메틸설폭사이드(Dimethylsulfoxide, DMSO) 생리식염수용액에 적절한 농도로 희석한 각각의 추출물을 2 mL씩 넣고, 대조군은 5% 생리식염수 용액에 적절한 농도로 희석한 각 시료 2 mL씩 넣고, 대조군은 5% DMSO 생리식염수용액 2 mL을 넣은 후, 각 패트리 디쉬에 멸균하고 48 ℃로 냉각한 트립틱소이 한천배지 및 포테이토덱스트로스 한천배지를 18 mL씩 첨가하여 교반 후 정치하여 응고시킨다.2 mL of each extract diluted to the appropriate concentration in 5% dimethylsulfoxide (DMSO) physiological saline solution is added to the sterilized Patriedish by the sample and the experimental species, and the control is diluted to a proper concentration in 5% physiological saline solution 2 mL of each sample was added, and 2 mL of 5% DMSO physiological saline solution was added to the control. Samples were sterilized in each Patridish, and 18 mL of a tryptic soy agar medium and a potato dextrose agar medium cooled to 48 DEG C After stirring, the mixture is allowed to solidify.

이후 전배양시킨 각각의 시험균을 세균의 경우 최종농도 약 1×106 CFU/mL 의 균농도로 각각의 페트리디쉬에 도말하고, 효모의 경우 1×105 CFU/mL, 사상균의 경우 약 1×104 CFU/mL의 균농도로 각각의 페트리디쉬에 도말한다. 각각의 페트리 디쉬는 세균은 37℃에서 24시간 배양하고 효모는 25℃에서 3일간 배양, 사상균은 25℃배양기에서 7일간 배양한 후 각 구획 안에 콜로니(Colony) 형성여부를 관찰하여 성장이 되지 않은 평판의 최소 시료 농도를 최소저해농도(MIC, Minimum inhibitory concentration)로 하며, 그 결과를 표 9에 나타내었다. 이때, 최소저해농도는 값이 작을수록 항균효과가 높음을 의미한다.
Each of the pre-cultivated test bacteria was applied to each petri dish at a final concentration of about 1 × 10 6 CFU / mL for bacteria, 1 × 10 5 CFU / mL for yeast, about 1 X 10 &lt; 4 &gt; CFU / mL in each petri dish. Each petri dish was incubated at 37 ° C for 24 hours, the yeast was cultured at 25 ° C for 3 days, the filamentous bacteria were cultured in a 25 ° C incubator for 7 days, and then colony formation was observed in each compartment, The minimum sample concentration of the plate was defined as the minimum inhibitory concentration (MIC), and the results are shown in Table 9. At this time, the minimum inhibitory concentration means that the smaller the value, the higher the antibacterial effect.

균주Strain 최소저해농도(MIC, ㎍/mL)Minimum inhibitory concentration (MIC, / / mL) S. S. aureusaureus 5050 P. P. aeruginosaaeruginosa 2121 E. E. ColiColi 1212 C. C. albicansalbicans 110110 A. A. nigerniger 140140

표 9에 나타난 바와 같이, 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물은 4종의 세균, 효모, 사상균에 대하여 모두 월등한 항균력 효과를 나타내었다.
As shown in Table 9, the peony root extract containing Taxifolin-3-glucoside exhibited superior antimicrobial activity against all four bacteria, yeast and mold.

또한, 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물의 항균력 효과를 검정하기 위해 원형여과지법(Paper disc method)에 의하여 다음와 같이 실험 하였다. 평판 배지에 배양된 각 균주를 1 백금이량 취해서 액체 배지 10 mL에서 24시간 배양하여 활성화시킨 후 다시 액체 배지 10 mL에 균액을 0.1 mL 접종하여 6시간배양한 후 평판배지 1개당 균액을 약 107 cfu/mL이 되게 접종하여 멸균된 도발봉으로 균일하게 도말하였다. 그 후 멸균된 원형여과지 (6 mm, Satorius, Germany)를 고체 평판 배지에 올려놓은 다음 용매에 녹인 시료 5를 0.05 ml/disk가 되도록 흡수시켜 배양하였다.  포도상구균(Staphylococcus aureus ), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 대장균(E. Coli )은 37℃, 진균 종류인 캔디다 효모(Candida albicans), 흑국균(Aspergillus niger)은 27℃에 각각 24시간, 120시간 배양하여 여과지 주위 투명존의 직경을 측정하였다. 비교군으로 항균활성이 강력하다고 알려진 메틸 파라벤(methyl paraben)을 사용하였으며, 결과는 하기 표 10에 나타내었다. 이 때, 여과지주위의 투명존은 해당 균주에 대해 증식억제 정도의 지표이며, 직경이 클수록 해당 균주에 대해 항균력 효과가 높음을 의미한다.
In order to test the antimicrobial activity of peony root extract containing Taxifolin-3-glucoside, the following experiment was conducted by the paper disc method. Each strain cultivated on a plate culture medium was plated in a volume of 1 pl, cultured in 10 mL of liquid culture medium for 24 hours, and then inoculated with 10 mL of the culture broth in 0.1 mL of the bacterial culture solution for 6 hours, 7 cfu / mL, and uniformly plated with a sterilized donor rod. Then sterilized round filter paper (6 mm, Satorius, Germany) was placed on a solid plate medium, and then sample 5 dissolved in a solvent was absorbed to 0.05 ml / disk and cultured. Staphylococcus aureus , Pseudomonas aeruginosa), Escherichia coli (E. Coli) was measured for 37 ℃, the type of fungi Candida yeast (Candida albicans), black Aspergillus (Aspergillus niger) are each 24 hours in 27 ℃, the diameter of the clear zone around the filter paper using 120 hours of incubation . As a comparative group, methyl paraben, which is known to have a strong antibacterial activity, was used, and the results are shown in Table 10 below. At this time, the transparent zone around the filter paper is an index of the degree of inhibition of proliferation of the strain, and the larger the diameter, the higher the antibacterial effect against the strain.

균주Strain 추출방법Extraction method 투명존 직경(mm)Transparent zone diameter (mm) S. aureusS. aureus 실시예 2Example 2 1313 메틸 파라벤Methyl paraben 1111 P. aeruginosaP. aeruginosa 실시예 2Example 2 1515 메틸 파라벤Methyl paraben 1212 E. ColiE. Coli 실시예 2Example 2 2424 메틸 파라벤Methyl paraben 1818 C. albicansC. albicans 실시예 2Example 2 1717 메틸 파라벤Methyl paraben 1313 A. nigerA. niger 실시예 2Example 2 2525 메틸 파라벤Methyl paraben 2424

표 10에 나타난 바와 같이, 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물은 강력한 항균제로 알려진 메틸 파라벤보다 4종의 세균, 효모, 사상균에 대해 더 강력한 항균활성을 나타내었다.
As shown in Table 10, the peony root extract containing Taxifolin-3-glucoside exhibited stronger antimicrobial activity against four bacteria, yeast and mold than the methylparaben known as a strong antimicrobial agent.

[제형실시예 1 및 제형비교예 1][Formulation Example 1 and Formulation Comparative Example 1]

상기 실시예 2(시료 5)에 따른 탁시폴린-3-글루코사이드를 포함하는 작약 추출물을 함유하는 영양크림의 성분구성을 하기 표 11과 같이 구성하여 제조하였다.
The composition of the nutritional cream containing the peony root extract containing Taxon poly-3-glucoside according to Example 2 (Sample 5) was prepared as shown in Table 11 below.

번호number 성 분ingredient 제형 비교예 1Formulation Comparative Example 1 제형 비교예 1Formulation Comparative Example 1 1One 친유형 모노스테아린산글리세린Pro-type glycerin monostearate 2.02.0 2.02.0 22 스테아린산Stearic acid 1.51.5 1.51.5 33 세테아릴 알콜Cetearyl alcohol 2.22.2 2.22.2 44 밀납Wax 1.01.0 1.01.0 55 스쿠알란Squalane 3.03.0 3.03.0 66 경화식물유Hardened vegetable oil 1.01.0 1.01.0 77 소르비탄 스테아레이트Sorbitan stearate 0.60.6 0.60.6 88 광물유Mineral oil 5.05.0 5.05.0 99 폴리솔베이트 60Polysorbate 60 1.51.5 1.51.5 1010 디메치콘Dimethicone 1.01.0 1.01.0 1111 트리옥타노인Trioctanoin 5.05.0 5.05.0 1212 베타인Betaine 3.03.0 3.03.0 1313 트리에탄올아민Triethanolamine 1.01.0 1.01.0 1414 글리세린glycerin 5.05.0 5.05.0 1515 소듐히아루로네이트Sodium hyaruronate 3.03.0 3.03.0 1616 실시예 2의 작약 추출물The peony extract of Example 2 1.01.0 -- 1717 증류수Distilled water 잔량Balance 잔량Balance 1818 방부제, 향, 색소Preservative, fragrance, pigment 미량a very small amount 미량a very small amount

상기 표 11의 조성으로 구성된 성분 중에서 먼저 원료 12 내지 15 및 17의 수성성분을 80℃로 가온하여 완전 용해시킨 다음, 원료 1 내지 11 및 16을 80℃로 가온하여 상기 원료 12 내지 15 및 17의 용액에 투입하고 호모믹서(Homo Mixer Mark Ⅱ, Primix, JPN)를 이용하여 3,000rpm에서 15분간 유화시켰다. 그 후, 원료 18를 투입하여 5분간 교반 시킨 후 실온으로 냉각하였다.
The aqueous components of the raw materials 12 to 15 and 17 were completely dissolved by heating to 80 DEG C and then the raw materials 1 to 11 and 16 were heated to 80 DEG C to obtain the raw materials 12 to 15 and 17 (Homo Mixer Mark II, Primix, JPN) for 15 minutes at 3,000 rpm. Thereafter, the raw material 18 was added, stirred for 5 minutes, and then cooled to room temperature.

[시험예 10] 제형 적용 미백효과 측정[Test Example 10] Measurement of whitening effect of formulation application

상기 제형 실시예1 및 제형 비교예1에서 제조된 영양크림의 미백효과를 측정하기 위하여 다음과 같은 방법을 통하여 측정하였다. 기미, 주근깨 및 색소 침착증을 갖고 있는 25세 이상 여성 30명을 대상으로 상기 제형 실시예1 및 제형 비교예1의 영양크림을 12주간 사용하게 한 후 피부색의 변화를 색도계(Chromameter)(CR-410, Minolta, Japan)를 이용하여 색의 밝기 변화 (ΔL)을 측정하였다. 총 30명의 평균값을 통하여 계산하였으며, 밝기 변화 값이 높을수록 미백효과가 높음을 의미한다. 실험 결과는 하기 표 12과 같다.
The whitening effect of the nutritional cream prepared in Formulation Example 1 and Comparative Formulation Example 1 was measured by the following method. 30 women aged 25 years or older who had spots, freckles and pigmentosis were subjected to the nutritional creams of Formulation Example 1 and Comparative Example 1 for 12 weeks. The changes in skin color were measured with a chromometer (CR-410 , Minolta, Japan) was used to measure the change in color brightness (ΔL). The average value of 30 persons was calculated. The higher the brightness change value, the higher the whitening effect. The experimental results are shown in Table 12 below.

  평균값medium 제형 실시예1Formulation Example 1 제형 비교예1Formulation Comparative Example 1 피부색 밝기 변화(ΔL)Skin color change (ΔL) 6.196.19 0.220.22

상기 표 12와 같이 실시예 2(시료 5)가 첨가된 제형 실시예 1의 영양크림은 실시예 2(시료 5)가 첨가되지 않은 제형 비교예 1의 영양크림과 비교하였을 때, 미백효과가 월등히 우수함을 확인하였다.
As shown in Table 12, the nutritional cream of Formulation Example 1 to which Example 2 (Sample 5) was added had a much higher whitening effect than the nutrition cream of Formulation Comparative Example 1 to which Example 2 (Sample 5) was not added .

[시험예 11] 제형 적용 주름개선효과 측정[Test Example 11] Measurement of wrinkle improvement effect

상기 제형 실시예 1 및 제형 비교예 1에서 제조된 영양크림의 주름개선효과를 측정하기 위하여 다음과 같은 방법을 통하여 측정하였다. 피부노화가 진행중인 30대이 상 여성 10명을 대상으로 상기 제형 실시예 1 및 제형 비교예 1의 영양크림을 12주간 양쪽 눈가주름(crow feets)부위에 사용하게 한 후 4주, 8주, 12주 간격으로 눈가 주름 주형(replica)을 영상분석법으로 피부노화측정기(Skin visiometer)(SV-600, C+K, Germany)를 이용하여 주름의 깊이(㎛)를 측정하고, 그 결과를 하기 표 13에 나타내었다.
In order to measure the wrinkle-reducing effect of the nutritional cream prepared in Formulation Example 1 and Comparative Formulation Example 1, the following method was used. Ten women aged 30 or older undergoing skin aging were allowed to use the nutritional cream of Formulation Example 1 and Comparative Example 1 for 12 weeks on the crow feets region, and after 4 weeks, 8 weeks, 12 weeks The depth of the wrinkles (탆) was measured using a skin visiometer (SV-600, C + K, Germany) by an image analysis method using an interval wrinkle replica template, Respectively.

  평균값medium 제형 실시예1Formulation Example 1 제형 비교예1Formulation Comparative Example 1 도포 전Before application 329 ± 13329 ± 13 326 ± 12326 ± 12 도포 12주 후 After 12 weeks of application 255 ± 11255 ± 11 320 ± 22320 ± 22 주름깊이 감소율(%)Wrinkle depth reduction rate (%) 22.522.5 1.81.8

상기 결과와 같이 실시예 2(시료 5)가 첨가된 제형 실시예 1의 영양크림은 실시예 2(시료 5)가 첨가되지 않은 제형 비교예 1의 영양크림과 비교하였을 때, 주름개선효과가 월등히 우수함을 확인하였다.
As shown above, the nutritional cream of Formulation Example 1 to which Example 2 (Sample 5) was added had a significantly improved wrinkle-reducing effect compared with the nutritional cream of Formulation Comparative Example 1 to which Example 2 (Sample 5) .

[시험예 12] 제형 적용 아토피 개선효과 측정[Test Example 12] Measurement of atopy improvement effect of application of formulation

상기 제형 실시예 1 및 제형 비교예 1에서 제조된 영양크림의 아토피 개선효과를 측정하기 위하여 다음과 같은 방법을 통하여 측정하였다. 피부장벽 손상방법으로 아세톤을 도포하였다. 8-12주령의 무모생쥐의 배부에 아세톤을 점적하여 경피수분손실량(TEWL; transepidermal water loss)이 4.0 g/m2/h에 도달하면 상기제형 비교예 1 및 제형 비교예 1의 영양크림을 도포하였다. TEWL은 C+K사(Cologne, Germany)의 증발계인 Tewameter 210으로 측정하였다. 도포 6시간 경과후에 TEWL을 측정하여 TEWL이 감소되는 정도를 측정하여 TEWL이 감소되는 정도를 평가함으로써 피부장벽기능이 회복되는 정도를 측정하였다. 효능평가에 사용된 회복율의 계산은 하기 수학식 8과 같이 계산하였고 그 결과를 하기 표 14에 나타내었다.
In order to measure the atopic improvement effect of the nutritional cream prepared in Formulation Example 1 and Comparative Formulation Example 1, the following method was used. Acetone was applied as a skin barrier damaging method. When the transepidermal water loss (TEWL) reached 4.0 g / m 2 / h by dispensing acetone into the aliquots of 8-12 week old hairless mice, the nutritional cream of Formulation Comparative Example 1 and Comparative Formulation Example 1 was applied Respectively. TEWL was measured with a Tewameter 210 evaporator from C + K (Cologne, Germany). After 6 hours of application, TEWL was measured and the degree of reduction of TEWL was measured to evaluate the degree of reduction of TEWL. The recovery rate used in the efficacy evaluation was calculated as shown in Equation 8 below and the results are shown in Table 14 below.

[수학식 8]&Quot; (8) &quot;

Br(Barrier Recovery, 피부장벽 회복율)= (1-(Bt =6- Bt =0)/(Bt =d - Bt =0))×100
(Barrier recovery rate) = (1- (B t = 6 - B t = 0 ) / (B t = d - B t = 0 )

 Bt =6 : 피부장벽 손상 후 6시간 경과후의 TEWL 측정값B t = 6 : TEWL measurement after 6 hours after skin barrier damage

 Bt =0 : 피부장벽 손상 이전의 TEWL 측정값B t = 0 : TEWL measured before skin barrier damage

 Bt =d : 피부장벽 손상 직후의 TEWL 측정값
B t = d : TEWL measured immediately after skin barrier damage


회복율(%)

Recovery rate (%)
평균값medium
제형 실시예1Formulation Example 1 제형 비교예1Formulation Comparative Example 1 6시간 경과 회복율
(초기TEWL기준)
6 hour recovery rate
(Based on initial TEWL)
3939 1212

상기 결과와 같이 실시예 2(시료 5)가 첨가된 제형 실시예 1의 영양크림은 실시예 2(시료 5)가 첨가되지 않은 제형 비교예 1의 영양크림과 비교하였을 때, 피부장벽 손상후 회복 효과가 상승하는 것으로 나타났다.
As shown above, the nutritional cream of Formulation Example 1 to which Example 2 (Sample 5) was added had a higher recovery than the nutritional cream of Formulation Comparative Example 1 in which Example 2 (Sample 5) was not added, The effect was shown to increase.

이하, 본 발명의 제형예로서 유연 화장수, 수렴화장수, 영양 화장수, 마사지 크림, 에센스 및 팩을 예시하나 본 발명의 화장료 조성물의 제형은 이에 제한되는 것으로 해석해서는 안 되며, 본 발명의 범위 내에서 당업자의 통상적인 변화가 가능하다.
Examples of formulations of the present invention are a soft lotion, a convergent lotion, a nutritional lotion, a massage cream, an essence and a pack, but the formulation of the cosmetic composition of the present invention should not be construed as being limited thereto. Lt; / RTI &gt; is possible.

[제형예 1] 유연화장수[Formulation Example 1] Flexible longevity

번호number 성 분ingredient 함량(%)content(%) 1One 글리세린glycerin 5.005.00 22 1,3-부틸렌 글라이콜1,3-butylene glycol 3.003.00 33 PEG 1500PEG 1500 1.001.00 44 알란토인Allantoin 0.100.10 55 DL-판테놀DL-Panthenol 0.300.30 66 EDTA-2NaEDTA-2Na 0.020.02 77 벤조페논-9Benzophenone-9 0.040.04 88 에탄올ethanol 10.0010.00 99 옥틱도데세스-16Octidodeces-16 0.200.20 1010 폴리솔베이트 20Polysorbate 20 0.200.20 1111 실시예 1의 작약 추출물The peony extract of Example 1 5.05.0 1212 방부제, 향, 색소Preservative, fragrance, pigment 미량a very small amount 1313 증류수Distilled water 잔량Balance

[제형예 2] 수렴화장수[Formulation Example 2] Convergent lotion

번호number 성 분ingredient 함량(%)content(%) 1One 글리세린glycerin 2.002.00 22 1,3-부틸렌 글라이콜1,3-butylene glycol 2.002.00 33 알란토인Allantoin 0.100.10 44 DL-판테놀DL-Panthenol 0.300.30 55 EDTA-2NaEDTA-2Na 0.020.02 66 벤조페논-9Benzophenone-9 0.040.04 77 에탄올ethanol 15.0015.00 88 폴리솔베이트 20Polysorbate 20 0.200.20 99 실시예 2의 작약 추출물The peony extract of Example 2 1.01.0 1010 구연산Citric acid 미량a very small amount 1111 방부제, 향, 색소Preservative, fragrance, pigment 미량a very small amount 1212 증류수Distilled water 잔량Balance

[제형예 3] 영양화장수[Formulation Example 3] Nutritional lotion

번호number 성 분ingredient 함량(%)content(%) 1One 세테아릴 알콜Cetearyl alcohol 1.001.00 22 글리세릴스테아레이트Glyceryl stearate 0.500.50 33 폴리소르베이트 60Polysorbate 60 1.001.00 44 소르비탄세스퀴올리에이트Sorbitan sesquioleate 0.300.30 55 세틸옥타노에이트Cetyl octanoate 6.006.00 66 스쿠알란Squalane 4.004.00 77 샤플라워오일Shapower Oil 4.004.00 88 부틸렌글라이콜Butylene glycol 4.004.00 99 글리세린glycerin 4.004.00 1010 카보머Carbomer 0.100.10 1111 트리에탄올아민Triethanolamine 0.100.10 1212 실시예 1의 작약 추출물The peony extract of Example 1 1.001.00 1313 방부제, 향, 색소Preservative, fragrance, pigment 미량a very small amount 1414 증류수Distilled water 잔량Balance

[제형예 4] 에센스[Formulation Example 4] Essence

번호number 성 분ingredient 함량(%)content(%) 1One 글리세린glycerin 10.0010.00 22 베타인Betaine 5.005.00 33 PEG 1500PEG 1500 2.002.00 44 알란토인Allantoin 0.100.10 55 DL-판테놀DL-Panthenol 0.300.30 66 EDTA-2NaEDTA-2Na 0.020.02 77 벤조페논-9Benzophenone-9 0.040.04 88 히드록시에틸 셀룰로오스Hydroxyethylcellulose 0.100.10 99 카르복시비닐 폴리머Carboxyvinyl polymer 0.200.20 1010 트리에탄올아민Triethanolamine 0.180.18 1111 옥틸도데칸올Octyldodecanol 0.300.30 1212 옥틸도데세스-16Octyldodec-16 0.400.40 1313 에탄올ethanol 6.006.00 1414 실시예 2의 작약 추출물The peony extract of Example 2 1.001.00 1515 방부제, 향, 색소Preservative, fragrance, pigment 미량a very small amount 1616 증류수Distilled water 잔량Balance

[제형예 5] 팩[Formulation Example 5] Pack

번호number 성 분ingredient 함량(%)content(%) 1One 폴리비닐 알콜Polyvinyl alcohol 15.0015.00 22 셀룰로오스 검Cellulose sword 0.150.15 33 글리세린glycerin 3.003.00 44 PEG 1500PEG 1500 2.002.00 55 시이크데스트린Sheik Destrin 0.150.15 66 DL-판테놀DL-Panthenol 0.300.30 77 알란토인Allantoin 0.100.10 88 글리시리진산 모노암모늄Monoammonium glycyrrhizin acid 0.200.20 99 니코틴 아미드Nicotinamide 0.400.40 1010 에탄올ethanol 5.005.00 1111 PEG 40 경화피마자유PEG 40 hardened castor oil 0.300.30 1212 실시예 1의 작약 추출물The peony extract of Example 1 1.001.00 1313 방부제, 향, 색소Preservative, fragrance, pigment 미량a very small amount 1414 증류수Distilled water 잔량Balance

Claims (17)

탁시폴린 배당체를 포함하는 작약 추출물을 유효성분으로 함유하며,
상기 작약 추출물은 물 및 에탄올 추출물이고,
상기 탁시폴린 배당체는 탁시폴린-3-글루코사이드인 아토피 피부의 피부 수분 손실 억제용 화장료 조성물.
Containing as an active ingredient a fungicidal extract comprising a taxane polyglycoside,
The peony extract is water and ethanol extract,
The cosmetic composition for inhibiting skin water loss of atopic skin, wherein the taxifolin glycoside is taxifolin-3-glucoside.
삭제delete 삭제delete 제 1항에 있어서,
상기 작약 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 10중량% 함유되는 것인 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the crude extract is contained in an amount of 0.0001 to 10% by weight based on the total weight of the composition.
삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 작약을 용매에 넣고 탁시폴린 배당체를 용출하는 단계;
용출된 추출물을 농축하는 단계;
농축된 추출물을 둘 이상의 용매에 넣고 분획시키는 단계;
분획된 층에서 얻어진 추출물을 컬럼에 통과시키는 단계; 및
컬럼 통과액을 침전시켜 재결정화하는 단계;를 포함하며,
상기 탁시폴린 배당체는 탁시폴린-3-글루코사이드이고,
상기 분획 단계의 용매는 물 및 에탄올이고,
상기 재결정화 단계는 -300 내지 25℃ 및 0.5 내지 800MPa에서 수행되는 것인 작약 추출물의 추출방법.
Dissolving the taxane-containing glyceride in a solvent;
Concentrating the eluted extract;
Placing the concentrated extract in two or more solvents and fractionating;
Passing the extract obtained in the fractioned layer through a column; And
And recrystallizing the column passing liquid by precipitation,
Wherein said taxifolin glycoside is taxifolin-3-glucoside,
The solvent of the fractionation step is water and ethanol,
Wherein the recrystallization step is performed at -300 to 25 ° C and 0.5 to 800 MPa.
제 9항에 있어서,
상기 용출 단계의 용매는 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에틸아세테이트, 에틸에테르, 클로로포름, 헥산으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 것인 작약 추출물의 추출방법.
10. The method of claim 9,
Wherein the solvent of the elution step is at least one selected from the group consisting of water, ethanol, methanol, butanol, ethyl acetate, ethyl ether, chloroform and hexane.
제 9항에 있어서,
상기 용출된 추출물의 농축 단계는 가열건조, 감압건조, 분무건조 및 동결건조로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상으로 수행되는 것인 작약 추출물의 추출방법.
10. The method of claim 9,
Wherein the step of concentrating the eluted extract is carried out with at least one selected from the group consisting of heat drying, vacuum drying, spray drying and freeze drying.
삭제delete 제 9항에 있어서,
상기 컬럼 통과 단계의 컬럼은 레진 컬럼인 것인 작약 추출물의 추출방법.
10. The method of claim 9,
Wherein the column in the column passing step is a resin column.
제 13항에 있어서,
상기 레진은 엠버라이트 XAD 레진, 다우엑스 레진, 수페라이트 DAX 레진 및 다이아이온 HP-10, 20, 30, 40, 50 레진으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 레진인 것인 작약 추출물의 추출방법.
14. The method of claim 13,
Wherein the resin is at least one resin selected from the group consisting of Amberlite XAD resin, Dow X resin, Suferite DAX resin, and Diaion HP-10, 20, 30, 40, and 50 resins.
삭제delete 제 9항에 있어서,
상기 분획 단계는 분획시킨 후 분획된 층의 용매를 제거하여 농축하는 것인 작약 추출물의 추출방법.
10. The method of claim 9,
Wherein the fractionation step comprises fractionating and then removing the solvent of the fractionated layer and concentrating.
제 9항에 있어서,
상기 추출방법은 재결정화 이후에 재결정화된 추출물을 건조하여 수득하는 단계;를 더 포함하는 것인 작약 추출물의 추출방법.
10. The method of claim 9,
Wherein said extracting method further comprises the step of drying and obtaining the recrystallized extract after recrystallization.
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