KR101950372B1 - 스테로이드 대사 변화 분석 방법, 이에 따른 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측방법 및 이를 실현하기 위한 프로그램이 저장된 컴퓨터 판독 가능한 기록 매체 - Google Patents

스테로이드 대사 변화 분석 방법, 이에 따른 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측방법 및 이를 실현하기 위한 프로그램이 저장된 컴퓨터 판독 가능한 기록 매체 Download PDF

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KR101950372B1 KR1020180130372A KR20180130372A KR101950372B1 KR 101950372 B1 KR101950372 B1 KR 101950372B1 KR 1020180130372 A KR1020180130372 A KR 1020180130372A KR 20180130372 A KR20180130372 A KR 20180130372A KR 101950372 B1 KR101950372 B1 KR 101950372B1
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손혁호
한석원
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한국화학연구원
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Abstract

본 발명은 (a) 시료를 채취하여 가수분해 하는 단계; (b) 가수분해된 시료를 유기용매로 추출하는 단계; (c) 추출된 물질 중 스테로이드에 대한 정량분석을 위하여 분석 조건을 설정하는 단계; (d) 상기 분석 조건에 따른 스테로이드 대사 프로필(steroid metabolic profile)을 획득하는 단계; (e) 인터넷 또는 스마트폰 사용자들의 사용량에 따른 중독지수를 획득하는 단계; 및 (f) 상기 스테로이드 대사 프로필과 상기 중독지수를 변량으로 하는 상관계수를 도출하여 상기 스테로이드 대사 프로필 중 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 인자를 획득하는 단계를 포함하는 스테로이드 대사 변화 분석 방법에 관한 것이다.

Description

스테로이드 대사 변화 분석 방법, 이에 따른 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측방법 및 이를 실현하기 위한 프로그램이 저장된 컴퓨터 판독 가능한 기록 매체{Diagnosis method for steroid metabolic profile, evaluating method of internet and smartphone addiction and computer-readable recording media using the same}
본 발명은 스테로이드 대사 변화 분석 방법, 및 이에 따른 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측방법 및 이를 실현하기 위한 컴퓨터 프로그램 및 컴퓨터 판독 가능한 기록 매체에 관한 것이다.
인터넷 중독이라는 용어는 1996년 미국의 심리학자 킴벌리 영(Kimberly Young)에 의해 보고된 이후 심리학, 정신의학, 뇌 영상의학에서는 지속적으로 인터넷 중독 현상의 근거를 밝히기 위한 다양한 연구를 진행하고 있지만 아직 확실한 발병기전을 밝히지 못하고 있는 실정이다. 현재 인터넷 중독의 경우 동반하는 정신질환에 따라서 주의력결핍 과잉행동장애의 경우 메틸페니데이트(methylphenidate)와 같은 도파민 수용체(dopamin receptor) 차단 약물을 처방하거나 우울증에는 항우울제를 처방하고 있지만 이러한 약물의 복용은 단지 동반된 정신질환을 호전시키기 위한 처방일 뿐 인터넷 중독을 곧바로 치료하는 결과로 이어지지는 않고 있으며, 각각의 치료 방법에 따른 효과에 대한 체계화된 연구 및 검토 작업도 아직 이루어지지 않고 있는 실정이다.
현재 인터넷 또는 게임에 대한 중독평가는 행동 또는 심리학적 분석에 의존하고 있는 실정이며, 사용자가 인터넷을 사용하는 동안 안구의 일정한 운동을 측정하여 인터넷 중독 여부를 판단하는 시스템(특허문헌 1) 등이 개시되어 있으나, 행동을 분석하여 이를 바탕으로 중독성 여부에 대한 정확한 판단이 매우 어려운 문제가 있다.
한편 대사체학(metabolomics)은 생명공학 분야의 발전과 함께 특정 생리, 병리적 상태에서 대사체의 변화를 분석한 후 이것을 생리적 기능과 연관 지어 해석함으로써 그 변화 원인을 규명하는 새로운 기술로서 각광 받으며 많은 연구가 진행되고 있다.
대사 프로필(metabolic profile)이란 대사체학의 연구를 위해 요구되는 데이터로서 한 번의 전처리 과정 및 기기를 이용한 시험분석을 통해 얻어지는 특정 대사에 관여하는 물질들에 대한 정량적인 데이터를 말한다. 인터넷 중독의 발병 기전을 밝히기 위한 생체 내 대사체학적 연구는 현재 DHEA 및 코르티솔(cortisol) 등과 같은 단일 마커(single marker)에 대한 단편적 연구만이 발표된 실정이며 이들 스테로이드(steroids)에 대한 대사 경로(metabolic pathway)에 따른 변화(alteration)에 대한 체계적인 연구는 현재 진행되지 않은 상태이다.
따라서 인터넷 또는 스마트폰 중독에 여부를 확인할 수 있는 보다 정확하고 효율적으로 실행하기 위한 생리학적 분석방법이 매우 필요한 실정이다.
대한민국 등록특허공보 제10-1841370호(2018.03.23 공고)
따라서, 본 발명은 소변을 비롯한 인체 시료를 채취하여 시료 중 스테로이드에 대한 프로필을 획득하고, 이를 통해 인터넷 또는 스마트폰 사용량에 따른 중독 여부의 상관관계 분석을 통해 인터넷과 스마트폰 중독군의 진단 및 예측을 위한 중독 예측 인자를 도출하여, 이를 바탕으로 스테로이드 대사 변화분석을 통한 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측방법 분석방법과 이를 실현 시키는 컴퓨터 판독 가능한 기록 매체를 제공함에 있다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 이상에서 언급한 과제(들)로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제(들)는 이하의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은
(a) 시료를 채취하여 가수분해 하는 단계;
(b) 가수분해된 시료를 유기용매로 추출하는 단계;
(c) 추출된 물질 중 스테로이드에 대한 정량분석을 위하여 분석 조건을 설정하는 단계;
(d) 상기 분석 조건에 따른 스테로이드 대사 프로필(steroid metabolic profile)을 획득하는 단계;
(e) 인터넷 또는 스마트폰 사용자들의 사용량에 따른 중독지수를 획득하는 단계; 및
(f) 상기 스테로이드 대사 프로필과 상기 중독지수를 변량으로 하는 상관계수를 도출하여 상기 스테로이드 대사 프로필 중 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 인자를 획득하는 단계를 포함하는 스테로이드 대사 변화 분석 방법을 제공한다.
또한 상기 시료는 인체로부터 배출된 소변, 땀, 혈액 및 세포로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
또한 상기 (a) 단계는 상기 시료에 베타-글루쿠로니다아제(β-glucuronidase) 효소를 첨가하고, pH 4.5 내지 5.5에서 반응시켜 시료 내에 존재하는 스테로이드-글루코로나이드를 가수분해하여 스테로이드를 획득할 수 있다.
또한 상기 (b) 단계는 90 내지 100 %의 메탄올을 유기용매로 하여 스테로이드를 추출할 수 있다.
또한 상기 (c) 단계는 상기 (b) 단계에서 추출된 스테로이드를 액체크로마토그래피-다중질량분석기에 투입하여 정량 분석할 수 있다.
또한 상기 액체크로마토그래피-다중질량분석기의 분석조건은 1 내지 30 분 동안 이동상인 증류수 및 메탄올인 부피비(%)가 70 : 30에서 20 : 80으로 변화되는 기울기 용리(gradient)를 가질 수 있다.
또한 상기 스테로이드 대사 프로필은 스테로이드 종류에 따른 선구이온(precursor ion), 생성 이온(product ion), 충돌에너지(collision energy) 및 콘 전압(cone voltage)의 변화량으로 이루어지는 데이터 세트에 의한 관측농도의 변화로 결정될 수 있다.
또한 상기 (e) 단계는 상기 인터넷 또는 스마트폰 사용자 집단을 구성하고, 상기 구성원의 사용 시간을 미리 선정된 기준에 따라 평가점수로 환산하며, 상기 환산된 평가점수를 모수적 통계방법으로 처리하여 상기 중독지수를 결정할 수 있다.
또한 상기 (f) 단계는 상기 스테로이드 대사 프로필에 따르는 관측농도와 상기 중독지수를 변량으로 하여 상기 상관계수를 도출하며, 0.2 이상의 상관계수를 가지는 스테로이드를 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 인자로 결정할 수 있다.
또한 상기 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 인자는
11β-히드록시안드로스 테론(11β-OH An), 에피토스테스테론(Epi T), 5α-디하이드로-11-디하이드로코르티코스테론(5α-dehydro-11-dehydro-B), 프레그네인트라이올(P-triol), 프레그난올론(P-one), 및 알로프레그 나놀론(Allo-P-one)으로 이루어지는 군에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 의하면, 본 발명은 (1) 시료를 채취하여 전처리하고 추출하는 단계;
(2) 추출된 물질 중 스테로이드에 대한 정량분석을 위하여 분석 조건을 설정하는 단계;
(3) 상기 분석 조건에 따른 스테로이드 대사 프로필(steroid metabolic profile)을 획득하는 단계;
(4) 인터넷 또는 스마트폰 사용자들의 사용량에 따른 중독지수를 획득하는 단계;
(5) 상기 스테로이드 대사 프로필에 따른 관측농도와 상기 중독지수를 변량으로 하는 상관계수를 도출하여, 상기 스테로이드 대사 프로필 중 상기 상관계수가 0.2 이상인 스테로이드를 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측인자로 결정하는 단계;
(6) 중독 예측 대상 시료를 채취하고 상기 (1) 내지 상기 (2)단계를 수행하여 스테로이드를 정량분석하고, 상기 예측인자에 해당하는 스테로이드의 대사변화(metabolic alteration)가 검출되는 경우 인터넷 또는 스마트폰 중독으로 결정하는 단계를 포함하는 스테로이드 대사 변화분석을 통한 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에 의하면, 본 발명은
스테로이드 대사 프로필에 따른 상기 스테로이드의 관측농도와 인터넷 또는 스마트폰 사용량에 따른 중독지수를 변량으로 하는 상관계수를 계산하는 단계;
상기 상관계수가 일정 기준 이상인 스테로이드를 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측인자로 결정하는 단계;
중독 예측 대상 시료 내의 스테로이드 정량분석 결과를 획득하고 이를 입력하는 단계; 및
상기 입력된 스테로이드의 정량분석 결과가 상기 예측인자에 해당하는 스테로이드인지를 확인하여 인터넷 또는 스마트폰 중독임을 판정하여 출력하는 단계;를 실행하는 프로그램이 저장된 컴퓨터 판독 가능 기록 매체를 제공한다.
본 발명에 따르면, 인체 배출 물질 시료에 대상으로 시료 내에 존재하는 스테로이드를 동시에 이온화 시켜 스테로이드 대사 프로필을 정확하게 작성할 수 있다.
획득한 스테로이드 대사 프로필과 인터넷 또는 스마트폰 사용자의 사용량에 따라 결정된 중독지수를 두 가지의 변량으로 하여 상관계수를 도출하고 인터넷 또는 스마트폰 사용량에 따라 유의미한 스테로이드 대사 변화를 확인할 수 있다.
또한 계산된 상관계수에 따라 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 인자를 확정할 수 있으며, 이를 바탕으로 인터넷 또는 스마트폰 사용자의 중독 여부를 위험도에 따라 평가할 수 있다.
또한 설정된 스마트폰 중독 예측 인자를 바탕으로 소변을 비롯한 시료에서 확인의 스테로이드 대사 프로필을 입력하여 인터넷 또는 스마트폰 중독 여부를 평가할 수 있는 프로그램이 저장된 컴퓨터 판독 가능 기록 매체를 매우 효과적으로 구성할 수 있다.
본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 특허청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
도 1은 본 발명의 실시예에 따른 스테로이드 대사 변화 분석 방법의 흐름도이다.
도 2는 본 발명의 실시예에 따른 스테로이드 대사 변화 분석 방법에 있어서, 메탄올 농도에 따른 스테로이드의 고체상 추출 효율을 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실시예에 따른 스테로이드 대사 변화 분석 방법에 있어서, 스테로이드 대사 프로필에 따른 관측농도와 인터넷 또는 스마트폰 사용량에 따른 중독지수를 변량으로 하는 상관계수 도출 그래프이다.
이하 첨부된 도면을 참조하면서 본 발명에 따른 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것을 달성하는 방법은 첨부된 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다.
그러나 본 발명은 이하에 개시되는 실시예들에 의해 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.
또한, 본 발명을 설명함에 있어 관련된 공지 기술 등이 본 발명의 요지를 흐리게 할 수 있다고 판단되는 경우 그에 관한 자세한 설명은 생략하기로 한다.
본 발명자들은 스테로이드(steroids)의 전체적인 대사 변화(metabolic alteration)가 인터넷 중독과 관련이 있을 것으로 예측하고, 이를 빠르고 정확하게 확인하기 위한 분석방법을 연구하던 중 인체 배출 시료 특히 소변 내에 존재하는 스테로이드 전구체를 가수분해하고 고체상 추출하여 스테로이드의 순도를 증가시킨 후 액체크로마토그래피-다중질량분석기의 분석 조건을 조절하여 시료 내의 복수개의 스테로이드를 동시에 이온화시켜 스케로이드 화합물의 선택성을 증가시키는 방법으로 스테로이드 대사 프로필(steroid metabolic profile)을 획득하였다.
또한 인터넷 또는 스마트폰 사용자들의 사용량에 따른 인터넷 또는 스마트폰의 중독 정도를 정량적을 평가하여 중독지수를 도출한 이후에 통계적 방법으로 스테로이드 대사 프로필과 중독지수 두 가지를 변량으로 하는 상관계수를 확인하고 일정 이상의 상관계수를 가지는 스테로이드의 대사 변화가 스테로이드 대사 프로필 중 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 인자임을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 (a) 시료를 채취하여 가수분해 하는 단계;
(b) 가수분해된 시료를 유기용매로 추출하는 단계;
(c) 추출된 물질 중 스테로이드에 대한 정량분석을 위하여 분석 조건을 설정하는 단계;
(d) 상기 분석 조건에 따른 스테로이드 대사 프로필(steroid metabolic profile)을 획득하는 단계;
(e) 인터넷 또는 스마트폰 사용자들의 사용량에 따른 중독지수를 획득하는 단계; 및
(f) 상기 스테로이드 대사 프로필과 상기 중독지수를 변량으로 하는 상관계수를 도출하여 상기 스테로이드 대사 프로필 중 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 인자를 획득하는 단계를 포함하는 스테로이드 대사 변화 분석 방법을 제공한다.
도 1은 본 발명의 실시예에 따른 스테로이드 대사 변화 분석 방법의 흐름도이다.
도 1을 참조하면, 우선 시료를 채취하여 가수분해 한다(S100).
상기 시료는 인체로부터 배출된 소변, 땀, 혈액 및 세포로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
상기 시료는 인체에서 배출되며, 스테로이드 전구체를 함유하는 것이면 종류에 제한되지 않으나, 본 발명의 실시예에 따라 상기 시료는 소변인 것이 바람직하다.
상기 가수분해는 상기 소변에 용해되어 있는 스테로이드 전구체인 스테로이드-글루코로나이드를 분해하여 호르몬 상태의 스테로이드로 변화시킬 수 있다.
상기 가수분해는 스테로이드-글루코로나이드뿐만 아니라 동화작용 스테로이드와 그 대사체를 효소(enzyme)를 첨가하여 분해하는 것이다.
생체 내에 존재하는 스테로이드는 대사체 또는 설페이트(sulfate) 등이 결합된 포합대사체로 존재하는데 상기 가수분해를 통하여 호르몬과 같은 일반 대사체 변환시키는 경우 고체상 추출이 매우 효과적이다.
상기 S100는 상기 시료에 베타-글루쿠로니다아제(β-glucuronidase) 효소를 첨가하고, pH 4.5 내지 5.5에서 반응시켜 시료 내에 존재하는 스테로이드-글루코로나이드를 가수분해하여 스테로이드를 획득할 수 있다.
상기 베타-글루쿠로니다아제(β-glucuronidase) 효소는 스테로이드 전구체를 상온에서 분해할 수 있는 효과적인 효소이다.
상기 pH 범위에서 반응시키는 경우 상기 베타-글루쿠로니다아제(β-glucuronidase) 효소의 활성을 최대로 유지할 수 있고, 이후의 추출단계에서 유기용매와의 상호 작용을 증가시킬 수 있다.
구체적으로 상기 pH는 인상 완충액을 투입하여 pH 5로 조절하는 것이 바람직하다.
상기 베타-글루쿠로니다아제(β-glucuronidase) 효소는 시료 2 mL당 50 μL를 첨가하고, 50 내지 60 ℃에서 30 분 내지 90분 동안 가수분해할 수 있다.
상기 온도 범위 미만에서는 효소의 활성이 나타나지 않으며, 상기 온도 범위를 초과하는 경우에는 효소의 활성이 오히려 저해되는 문제가 발생한다.
상기 시간 범위 미만에서는 분해가 충분하지 않으며, 초과하는 경우 효소 첨가량에 따른 가수분해 효과가 감소되어 반응을 수행하는 효과가 감소된다.
가수분해된 시료를 유기용매로 추출한다(S200).
상기 효소 가수분해 후 시료에는 가수분해된 스테로이드가 존재한다.
상기 가수분해된 스테로이드를 유기용매로 추출하는 경우 시료 내에서 화학적 성질이 다양한 물질 분석하기 유리하다.
상기 S200에서 90 내지 100 %의 메탄올을 유기용매로 하여 스테로이드를 추출할 수 있다.
상기 메탄올의 농도가 90 % 미만인 경우에는 스테로이드 대사 프로필 획득 과정에 있어서 스테로이드 종류에 따를 질량 분석 시 정확한 관측농도를 확인할 수 있는 상대강도(relative intensity)가 낮아져서 질량 분석의 정확성이 감소될 우려가 있다.
추출된 물질 중 스테로이드에 대한 정량분석을 위하여 분석 조건을 설정한다(S300).
상기 S300은 S200에서 추출된 스테로이드를 액체크로마토그래피-다중질량분석기에 투입하여 정량 분석한다.
상기 액체크로마토그래피-다중질량분석기는 액체크로마토그래피의 컬럼 출구에 질량 분석계의 시료 도입부를 결합하여 액체크로마토그래피의 물질 분리와 동시에 복수의 성분의 질량을 분석할 수 있는 장점이 있다.
상기 액체크로마토그래피는 증류수(A 용매)과 메탄올(B 용매)을 이동상으로 사용할 수 있으며, 상기 이동상에 대한 부피를 시간에 따라 변화시켜 상기 액체크로마토그래피-다중질량분석기의 분석조건을 조절할 수 있다.
상기 액체크로마토그래피-다중질량분석기의 분석조건은 1 내지 30 분 동안 이동상인 증류수 및 메탄올인 부피비(%)가 70 : 30에서 20 : 80으로 변화되는 기울기 용리(gradient)를 가진다.
상기 범위에서 분석조건을 결정하는 경우 추출한 스테로이드를 대상으로 스테로이드 대사 프로필을 효과적으로 획득할 수 있으며, 상기 이동상의 범위를 벗어나는 경우 스테로이드 대사 프로필 중 일부 스테로이드의 대사 변화의 감지가 어려울 수 있다.
상기 분석 조건에 따른 스테로이드 대사 프로필(steroid metabolic profile)을 획득한다(S400).
상기 스테로이드 대사 프로필은 정량적인 데이터의 집합이다.
특정 물질에 대한 대사 변화 정보를 가지고 있는 대사 프로필을 분석하는 경우 대사적으로 혹은 분석적으로 서로 관련이 있는 다수의 물질들을 동시에 검출 및 확인할 수 있을 뿐만 아니라 대사체들의 정량을 통해서 여러 성분들 간의 상대적 농도 비율의 변화를 통한 정상 상태 및 대사 이상에 관련된 대사체들에 대한 많은 정보를 연구할 수 있다.
상기 대사 프로필 연구로부터 얻은 정보를 통해서 다른 대사체로 전환되는 대사체 농도의 상대적 변화 탐지, 대사 경로 상에서의 전구물질(metabolites of precursors)과 생성물질 (metabolites of products) 간의 변화 탐지, 그리고 대사 경로 상에서 나타나는 불균형으로부터 이에 관련된 효소의 비활성도 등을 예상할 수 있다.
본 발명의 실시예에서 스테로이드 정량 분석에 대한 분석 조건을 설정하고 이에 따라 스테로이드 대사 프로필을 획득한 이후에 인터넷 또는 스마트폰 사용량에 따른 중독지수를 산출하여 상기 중독지수와 스테로이드 대사 프로필과 상관 관계를 확인하여 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 인자를 도출하였다.
상기 스테로이드 대사 프로필은 스테로이드 종류에 따른 선구이온(precursor ion), 생성 이온(product ion), 충돌에너지(collision energy) 및 콘 전압(cone voltage)의 변화량으로 이루어지는 데이터 세트에 의한 관측농도의 변화로 결정된다.
인터넷 또는 스마트폰 사용자들의 사용량에 따른 중독지수를 획득한다(S500).
상기 S500은 상기 인터넷 또는 스마트폰 사용자 집단을 구성하고, 상기 구성원의 사용 시간을 미리 선정된 기준에 따라 평가점수로 환산하며, 상기 환산된 평가점수를 모수적 통계방법으로 처리하여 상기 중독지수를 결정한다.
상기 중독지수는 인터넷 또는 스마트폰 사용량에 따른 누적점수로 평가되며, 최소한 2개 이상의 사용자 집단을 구성하고 T-검정(T-test)과 같은 모수적 통계처리를 통하여 결정될 수 있다.
상기 스테로이드 대사 프로필과 상기 중독지수를 변량으로 하는 상관계수를 도출하여 상기 스테로이드 대사 프로필 중 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 인자를 획득한다(S600).
상기 스테로이드 대사 프로필과 상기 중독기수를 두 가지 변량으로 하여 상관계수를 도출하는 경우 두 변량의 연관성을 확인할 수 있다.
상기 S600은 상기 스테로이드 대사 프로필에 따르는 관측농도와 상기 중독지수를 변량으로 하여 상기 상관계수를 도출하며, 0.2 이상의 상관계수를 가지는 스테로이드를 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 인자로 결정한다.
상기 상관계수가 0.2 미만인 경우에는 상기 중독지수와 스테로이드 대사 변화와의 상관 관계가 낮아서 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 유효한 인자로 선택할 수 없다.
상기 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 인자는 11β-히드록시안드로스 테론(11β-OH An), 에피토스테스테론(Epi T), 5α-디하이드로-11-디하이드로코르티코스테론(5α-dehydro-11-dehydro-B), 프레그네인트라이올(P-triol), 프레그난올론(P-one), 및 알로프레그 나놀론(Allo-P-one)으로 이루어지는 군에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상이다.
상기 스테로이드 이외에는 상기 중독지수와 상관 관계가 낮아서 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 유효한 인자로 선정할 수 없다.
본 발명의 또 다른 측면에 의하면, 본 발명은
(1) 시료를 채취하여 전처리하고 추출하는 단계;
(2) 추출된 물질 중 스테로이드에 대한 정량분석을 위하여 분석 조건을 설정하는 단계;
(3) 상기 분석 조건에 따른 스테로이드 대사 프로필(steroid metabolic profile)을 획득하는 단계;
(4) 인터넷 또는 스마트폰 사용자들의 사용량에 따른 중독지수를 획득하는 단계;
(5) 상기 스테로이드 대사 프로필에 따른 관측농도와 상기 중독지수를 변량으로 하는 상관계수를 도출하여, 상기 스테로이드 대사 프로필 중 상기 상관계수가 0.2 이상인 스테로이드를 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측인자로 결정하는 단계; 및
(6) 중독 예측 대상 시료를 채취하고 상기 (1) 내지 상기 (2) 단계를 수행하여 스테로이드를 정량분석하고, 상기 예측인자에 해당하는 스테로이드의 대사변화(metabolic alteration)가 검출되는 경우 인터넷 또는 스마트폰 중독으로 결정하는 단계를 포함하는 스테로이드 대사 변화분석을 통한 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측방법을 제공한다.
상술한 바와 같이 상기 스테로이드 대사 프로필 중 상기 상관계수가 0.2 이상인 스테로이드를 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측인자로 결정하고 이에 따라 11β-히드록시안드로스 테론(11β-OH An), 에피토스테스테론(Epi T), 5α-디하이드로-11-디하이드로코르티코스테론(5α-dehydro-11-dehydro-B), 프레그네인트라이올(P-triol), 프레그난올론(P-one), 및 알로프레그 나놀론(Allo-P-one)으로 이루어지는 군에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상을 선택하여 예측인자로 미리 선정한다.
이후에 중독 예측 대상 시료를 채취하고 이를 정량분석하고 상기 예측인자에 해당하는 스테로이드의 대사변화(metabolic alteration)가 검출되는 경우 인터넷 또는 스마트폰 중독으로 결정할 수 있다.
이 때 스테로이드 정량 분석 방법은 상술한 스테로이드 대사 변화 분석 방법을 따른다.
본 발명의 또 다른 측면에 의하면, 본 발명은
스테로이드 대사 프로필에 따른 상기 스테로이드의 관측농도와 인터넷 또는 스마트폰 사용량에 따른 중독지수를 변량으로 하는 상관계수를 계산하는 단계;
상기 상관계수가 일정 기준 이상인 스테로이드를 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측인자로 결정하는 단계;
중독 예측 대상 시료 내의 스테로이드 정량분석 결과를 획득하고 이를 입력하는 단계; 및
상기 입력된 스테로이드의 정량분석 결과가 상기 예측인자에 해당하는 스테로이드인지를 확인하여 인터넷 또는 스마트폰 중독임을 판정하여 출력하는 단계;를 실행하는 프로그램이 저장된 컴퓨터 판독 가능 기록 매체를 제공한다.
컴퓨터 판독 가능한 기록 매체는 프로그램 명령어, 데이터 파일, 데이터 구조 등을 단독으로 또는 조합하여 포함할 수 있다. 컴퓨터 판독 가능한 기록 매체에 기록되는 프로그램 명령어는 본 발명을 위하여 특별히 설계되고 구성된 것들이거나 컴퓨터 소프트웨어 분야의 당업자에게 공지되어 사용 가능한 것일 수도 있다.
컴퓨터 판독 가능한 기록 매체의 예에는, 하드 디스크, 플로피 디스크 및 자기 테이프와 같은 자기 매체, CD-ROM, DVD와 같은 광기록 매체, 플롭티컬 디스크(floptical disk)와 같은 자기-광 매체(magneto-optical media), 및 ROM, RAM, 플래시 메모리 등과 같은 프로그램 명령어를 저장하고 수행하도록 특별히 구성된 하드웨어 장치가 포함된다.
프로그램 명령어의 예에는, 컴파일러에 의해 만들어지는 것과 같은 기계어 코드뿐만 아니라 인터프리터 등을 사용해서 컴퓨터에 의해서 실행될 수 있는 고급 언어 코드도 포함된다. 상기 하드웨어 장치는 본 발명에 따른 처리를 수행하기 위해 하나 이상의 소프트웨어 모듈로서 작동하도록 구성될 수 있으며, 그 역도 마찬가지이다.
상기 프로그램이 저장된 컴퓨터 판독 가능 기록 매체는 미리 선정된 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측인자를 바탕으로 입력된 중독 예측 대상 시료 내의 스테로이드 정량분석 결과에 따라 인터넷 또는 스마트폰 중독임을 매우 신속하고 정확하게 판정할 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시하나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 스테로이드 대사 변화 분석
(1) 채취 및 가수분해
인체에서 배출된 소변 시료를 채취하여 시료 내의 스테로이드를 분석하였다.
15 mL 튜브(tube)에 준비한 인뇨(human urine) 2 mL에 내부표준물질의 4종 혼합용액을 20 μL을 첨가하고 효소 가수분해(enzymatic hydrolysis)를 위해 1 mL 0.2 M 인산 완충액(Phosphate buffer, pH 5.0)과 50 μL의 베타-글루쿠로니다아제(β-glucuronidase)를 첨가한 후, 55 ℃에서 1시간 동안 효소 가수분해를 수행하였다.
(2) 고체상 추출
효소 가수분해(enzymetic hydrolysis)가 끝나면 상온에서 잠시 식혀준 뒤, 미리 준비해둔 Oasis PRiME HLB 카트리지에 시료를 로딩(loading)한 후 2 mL의 증류수로 세척하고 100% 메탄올(methanol) 4 mL를 이용하여 용리(elution)하는 고체추출법을 진행하였다.
이 때 이동상인 증류수 및 메탄올인 부피비(%)가 70 : 30에서 20 : 80으로 변화되는 기울기 용리(gradient)를 가지도록 분석 조건을 변화시켰다.
이 추출액을 35 ℃로 세팅(Setting)된 가열 블록(Heating block)에 장착 후, N2 가스(gas)를 이용하여 증발시켰다.
(3) 스테로이드 대사 프로필 획득
액체크로마토그래피-다중질량분석기로 정량분석을 위하여 시료를 100 μL 이동상에 녹인 후 이중 2 μL의 시료를 액체크로마토그래피-다중질량분석기에 주입하여 분석하였다.
스테로이드 분석을 위한 액체크로마토그래피-다중질량분석기는 Waters 사의 ACQUITY UPLC I-Class 초고성능 액체 크로마토그래피(Waters Co., Milford, MA)와 전자 분사 이온화(electrospray ionization) (ESI) 프루브(probe)가 장착된 Xevo TQ-S micro tandem mass spectrometry (Waters Co., Milford, MA)를 사용하였다.
분석물질의 농축과 분리분석을 위한 컬럼은 Waters ACQUITY BEH C18 (2.1 mm i.d. × 10 mm length, 1.7 ㎛ particle size, Waters Co., Milford, MA)을 사용하였고, 데이터 처리 시스템은 MassLynx을 사용하였다.
스테로이드 분석을 위한 액체크로마토그래피-다중질량분석기 분석조건을 다음과 같이 설정하였다.
총 39개의 스테로이드 호르몬을 분리하기 위해 사용된 이동상은 0.01% 포름산(formic acid) 와 1 mM 포름산암모늄(ammonium formate)을 첨가한 물(water; A 용매), 0.01% 포름산(formic acid) 과 1 mM 포름산암모늄(ammonium formate)을 첨가한 메탄올(methanol; B 용매)이며, 30 % B 전개용매로부터 시작하여 5분 동안 30% B 용매를 유지하고, 15분에 B 용매를 50 %까지 올린 후, 다시 5분동안 유지시켜 준 후, 23분에 55% B, 27분에 80% B가 되도록 한 후 3분간 유지시켜 주며 분당 0.4 mL의 유속으로 분석물질을 용출시켰다.
다중질량 분석을 위한 자세한 조건은 하기 표 1에 나타내었다.
Run time (min) 0.01% formic acid and 1mM ammonium formate in water (%) 0.01% formic acid and 1mM ammonium formate in Methanol (%)
0 70 30
5 70 30
15 50 50
20 50 50
23 45 55
27 40 60
27.1 20 80
30 20 80
각각의 스테로이드(steroids)는 정량 분석을 위하여 다중 반응 감시 모드(multiple reaction monitoring mode; MRM)로 분석되었고 질량분석 조건(Mass condition)은 다음과 같이 설정하였다.
모세관 전압(capillary voltage)은 1 kV, 콘 전압(con voltage)은 10V - 54V로 물질별로 각각 다르게 설정하였고, 탈 용매 온도(desolvation temperature)는 450 ℃, 탈 용매 가스 흐름(desolvation gas flow)은 800 L/hr, 콘 가스 흐름(cone gas flow)은 30 L/hr로 하였다.
관측농도를 확인할 수 있는 총 39 종류의 스테로이드와 내부표준 시료를 포함하는 스테로이드 대사 프로필을 획득하였다.
실시예 2. 중독지수 획득
38명의 남성(나이 22.8 ± 2.8세)을 구성원으로 하여 소변 시료를 수집하여 스테로이드 농도를 측정하였다.
실시예 1에 따라 채취한 시료를 분석하였다.
이들은 또한 소변 시료 수집 전에 인터넷 또는 스마트폰 중독을 평가하기 위하여 설문조사를 실시하여 중독지수를 0 ~ 40까지 평가점수로 환산하여 결정하였다.
2개 이상의 구성원 집단을 비교하여 평가점수를 검정하여 오차율을 감소시켜 최종 중독지수를 설정하였다.
실험예 1. 유기 용매에 따른 추출 효과
도 2는 본 발명의 실시예에 따른 스테로이드 대사 변화 분석 방법에 있어서, 메탄올 농도에 따른 스테로이드의 고체상 추출 효율을 나타낸 그래프이다.
도 2를 참조하면, 농도가 90 % 미만인 메탄올에서 일정 부분의 스테로이드에 대한 상대강도가 감소되는 것을 확인하여 추출효과가 감소되는 것을 확인하였다.
실험예 2. 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 인자 획득
(1) 탐색 대상 스테로이드
분석물질은 에스트리올(Estriol; E3), 16-에피에스트라이올 (16-Epiestriol; 16-epi E3), 17-에피에스트라이올(17-Epiestriol; 17-epi E3), 에스트론(Estrone; E1), 에스트라디올(Estradiol; E2), 4-메톡시에스트라디올(4-Methoxyestradiol; 4-MeO E2), 2-메톡시 에스트론 (2-Methoxyestrone; 2-MeO E1), 2-메톡시에스트라디올(2-Methoxyestradiol; 2-MeO E2), 16α- 히드록시디하이드로에피란드로스테론(16α-hydroxydehydroepiandrosterone; 16α-OH DHEA), 11β-히드록시에티오콜라놀론(11β-hydroxyetiocholanolone; 11β-OH Et), 11β-히드록시안드로스 테론(11β-hydroxyandrosterone; 11β-OH An), 안드로스틴다이온(androstenedione; An-dion), 테스토스테론(testosterone; T), 디하이드로에피안드로스테론(dehydroepiandrosterone; DHEA), 에피안드로스테론 (epiandrosterone; Epi An), 에피토스테스테론(epitestosterone; Epi T), 디히드로테스토스테론(dihydrotestosterone; DHT), 에티오콜라놀론(etiocholanolone; Et), 안드로스테론(androsterone; An), 알도스테론(aldosterone; Al), 20α-디하이드로코르티손(20α-dihydrocortisone; 20α-dihydro-E), 20α- 디하이드로코티솔(20α-dihydrocortisol; 20α-dihydro-F), 코르티손(cortisone; E), 코티솔(cortisol; F), 11-디하이드로코르티코스테론(11-dehydrocorticosterone; 11-dehydro-B), 21-디옥시코티솔 (21-deoxycortisol; 21-deoxy-F), 5α-디하이드로-11-디하이드로코르티코스테론(5α-dehydro-11-dehydrocorticosterone; 5α-dehydro-11-dehydro-B), 코르티코스테론(corticosterone; B), 11-디 옥시코티솔(11-desoxycortisol; 11-desoxy-F), 17α-하이드로옥시프로게스테론(17α-hydroxyprogesterone; 17α-OH Prog), 프로게스테론(progesterone; Prog), 20α-하이드로옥시 프로게스테론(20α-hydroxyprogesterone; 20α-OH Prog), 프레그네놀론(pregnenolone; Preg), 5α-디하이드로프로게스테론(5α-dihydroprogesterone; 5α-dihydro-Prog), 5β-디하이드로프로게스테론(5β-dihydroprogesterone; 5β-dihydro-Prog), 에피프레그난올론라놀론(epipregnanolone; Epi Preg), 프레그네인트라이올(pregnanetriol; P-triol), 프레그난올론(pregnanolone; P-one), 알로프레그 나놀론(allopregnanolone; Allo-P-one)을 선택하였다.
상기 스테로이드 종류를 한 번에 분석하였다.
정량 분석을 위한 내부표준물질로 에스트라디올-d5 (Estradiol-d5; E2--d5), 디히드로에피안드로스테론-d6(dehydroepiandrosterone-d6; DHEA- d6), 코티솔 -d4(cortisol-d4; F- d4), 프레그네놀론-d4(pregnenolone-d4; Preg- d4)을 선택하였다.
(2) 스테로이드 대사 프로필
실시예 2에 따라 분석 조건에 따른 스테로이드 대사 프로필을 획득하였다.
Compound (MW) Precursor Ion (m/z) Product Ion (m/Z) Con voltage (V) Collision Energy
Aldosterone (360) 361.3 [M+H]+ 343.3 / 109.1 30 30 / 15
20α-dihydrocortisone (362) 363.2 [M+H]+ 163.2 / 121.1 30 25 / 30
20α-dihydrocortisol (364) 365.3 [M+H]+ 269.3 / 121.1 30 15 / 25
Cortisone (360) 361.2 [M+H]+ 163.0 30 25
Cortisol-d4 (366) 367.0 [M+H]+ 121.0 / 97.0 35 26 / 34
Cortisol (362) 363.3 [M+H]+ 97.0 / 121.0 30 30 / 30
11-dehydrocorticosterone (344) 345.3 [M+H]+ 121.1 / 105.0 30 20 / 22
21-deoxycortisol (346) 347.3 [M+H]+ 311.2 / 121.1 30 15 / 20
5α-dehydro- 11-dehydrocorticosterone (346) 347.2 [M+H]+ 105.0 / 91.0 54 62 / 34
Corticosterone (346) 347.3 [M+H]+ 121.1 / 329.2 20 20 / 15
11-deoxycortisol (346) 347.3 [M+H]+ 97.1 / 109.1 30 25 / 30
17α-OH Progesterone (330) 331.2 [M+H]+ 97.0 / 109.0 20 25 / 25
Progesterone (314) 315.2 [M+H]+ 97.0 / 109.0 20 25 / 25
20α-OH Progesterone (316) 317.2 [M+H]+ 97.0 / 109.0 20 25 / 20
Pregnenolone-d4 (320) 321.3 [M+H]+ 303.3 30 10
Pregnenolone (316) 299.1 [M+H-H2O]+ 281.2 / 159.1 40 10 / 21
5α-dihydroprogesterone (316) 317.2 [M+H]+ 281.2 30 15
5β-dihydroprogesterone (316) 317.2 [M+H]+ 281.2 30 15
Epipregnanolone (318) 301.2 [M+H-H2O]+ 283.2 /135.1 30 15 / 15
Pregnanetriol (336) 301.1 [M+H-2H2O]+ 283.1 40 15
Estriol (288) 306.2 [M+NH4]+ 289.1 / 107.0 10 10 / 25
16-epiestriol (288) 306.3 [M+NH4]+ 289.1 / 271.1 30 5 / 10
17-epiestriol (288) 271.2 [M+H-H2O]+ 159.0 / 157.0 50 15 / 10
Estrone (270) 271.2 [M+H]+ 253.2 / 133.1 20 10 / 20
Estradiol-d5 (277) 278.0 [M+H]+ 112.0 / 140.0 14 22 / 14
Estradiol (272) 273.0 [M+H]+ 107.0 / 135.0 14 22 / 14
4-methoxyestradiol (302) 303.0 [M+H]+ 137.0 / 135.0 10 20 / 15
2-methoxyestrone (300) 301.2 [M+H]+ 137.0 / 187.0 10 20 / 20
2-methoxyestradiol (302) 303.2 [M+H]+ 137.0 / 135.0 10 20 / 15
16α-hydroxydehydroepiandrosterone (304) 322.3 [M+NH4]+ 287.2 / 296.2 10 10 / 10
11β-hydroxyetiocholanolone (306) 289.2 [M+H-H2O]+ 271.2 / 253.2 10 10 / 10
11β-hydroxyandrosterone (306) 289.2 [M+H-H2O]+ 271.2 / 151.1 10 10 / 10
Androstenedion (286) 287.2 [M+H]+ 97.1 / 109.1 30 20 / 10
Testosterone (288) 289.2 [M+H]+ 97.1 / 109.1 30 25 / 25
Dehydroepiandrosterone-d6 (294) 277.2 [M+H-H2O]+ 259.2 / 236.1 10 10 / 5
Dehydroepiandrosterone (300) 271.2 [M+H-H2O]+ 253.1 / 239.1 10 10 / 5
Epiandrosterone (290) 291.2 [M+H]+ 255.2 / 273.3 30 15 / 10
Epitestosterone (288) 289.2 [M+H]+ 97.1 / 109.1 30 25 / 25
Dihydrotestosterone (290) 291.3 [M+H]+ 255.2 / 95.1 40 15 / 25
Etiocholanolone (290) 273.2 [M+H-H2O]+ 255.2 / 215.1 10 10 / 15
Androsterone (290) 273.2 [M+H-H2O]+ 255.2 / 147.1 10 15 / 20
상기 표 2는 획득한 스테로이드 대사 프로필을 나타낸 것이다.
각 스테로이드 별로 선구이온과 최적의 충돌에너지에 따른 생성이온을 확인하여 스테로이드 별로 분자량을 측정하고, 이에 따라 최종적으로 관측농도를 도출하였다.
실험예 3. 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측 인자
도 3은 본 발명의 실시예에 따른 스테로이드 대사 변화 분석 방법에 있어서, 스테로이드 대사 프로필에 따른 관측농도와 인터넷 또는 스마트폰 사용량에 따른 중독지수를 변량으로 하는 상관계수 도출 그래프이다.
이때 인체의 뇨 시료를 사용할 경우 개인마다 신장의 능력이 상이하고, 이에 따라 스테로이드 농도의 묽힘 정도가 달라질 수 있으므로 뇨 시료를 사용할 경우 크레아틴 농도로 보정하여 관측농도를 결정하였다.
도 3을 참조하면, 중독지수와 스테로이드 농도 사이에 0.2이상의 상관계수를 가지는 스테로이드 호르몬은 11β-히드록시안드로스 테론(11β-OH An, R2 = 0.46), 에피토스테스테론(Epi T, R2 = 0.42), 5α-디하이드로-11-디하이드로코르티코스테론(5α-dehydro-11-dehydro-B, R2 = 0.25), 프레그네인트라이올(P-triol, R2 = 0.27), 프레그난올론(P-one, R2 = 0.24), 알로프레그 나놀론(Allo-P-one, R2 = 0.23)으로 확인하여 스테로이드 대사 변화 분석을 통하여 최종적으로 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측 인자를 결정하였다.
실험예 4. 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측
인터넷 또는 스마트폰 중독 여부를 확인하기 위한 대상 시료를 채취하여, 실시예 1의 방법으로 시료 내 스테로이드를 추출하고 정량분석하되, 11β-히드록시안드로스 테론(11β-OH An), 에피토스테스테론(Epi T), 5α-디하이드로-11-디하이드로코르티코스테론(5α-dehydro-11-dehydro-B), 프레그네인트라이올(P-triol), 프레그난올론(P-one), 및 알로프레그 나놀론(Allo-P-one)으로 이루어지는 군에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상인 스테로이드 대사의 변화가 검축되는 경우 인터넷 또는 스마트폰 중독으로 판단하여 중독 여부를 예측할 수 있다.
따라서, 본 발명에 따른 스테로이드 대사 변화 분석 방법은 대상 시료에 대한 분석 조건을 선택하여 시료 내에 복수의 스테로이드를 동시에 분석할 수 있으며, 획득한 중독지수와의 상관 관계를 확인하여 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 예측 인자를 도출할 수 있다.
또한 상기 예측 인자를 바탕으로 새로운 분석 대상 시료를 쉽게 분석하고 예측 인자에 따라 스테로이드 대사 변화를 검출하여 인터넷 또는 스마트폰 중독으로 판단할 수 있다.
지금까지 본 발명에 따른 스테로이드 대사 변화 분석 방법, 스테로이드 대사 변화분석을 통한 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측방법 및 이를 실현하기 위한 프로그램이 저장된 컴퓨터 판독 가능 기록 매체의 구체적인 실시예에 관하여 설명하였으나, 본 발명의 범위에서 벗어나지 않는 한도 내에서는 여러 가지 실시 변형이 가능함은 자명하다.
그러므로 본 발명의 범위에는 설명된 실시예에 국한되어 정해져서는 안 되며, 후술하는 특허청구범위뿐만 아니라 이 특허청구범위와 균등한 것들에 의해 정해져야 한다.
즉, 전술된 실시예는 모든 면에서 예시적인 것이며, 한정적인 것이 아닌 것으로 이해되어야 하며, 본 발명의 범위는 상세한 설명보다는 후술될 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 그 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (12)

  1. (a) 시료를 채취하여 가수분해 하는 단계;
    (b) 가수분해된 시료를 유기용매로 추출하는 단계;
    (c) 추출된 물질 중 스테로이드에 대한 정량분석을 위하여 분석 조건을 설정하는 단계;
    (d) 상기 분석 조건에 따른 스테로이드 대사 프로필(steroid metabolic profile)을 획득하는 단계;
    (e) 인터넷 또는 스마트폰 사용자들의 사용량에 따른 중독지수를 획득하는 단계; 및
    (f) 상기 스테로이드 대사 프로필과 상기 중독지수를 변량으로 하는 상관계수를 도출하여 상기 스테로이드 대사 프로필 중 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 인자를 획득하는 단계를 포함하되,
    상기 (f) 단계는 상기 스테로이드 대사 프로필에 따르는 관측농도와 상기 중독지수를 변량으로 하여 상기 상관계수를 도출하며, 0.2 이상의 상관계수를 가지는 스테로이드를 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 인자로 결정하고, 상기 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 인자는 11β-히드록시안드로스 테론(11β-OH An), 에피토스테스테론(Epi T), 5α-디하이드로-11-디하이드로코르티코스테론(5α-dehydro-11-dehydro-B), 프레그네인트라이올(P-triol), 프레그난올론(P-one), 및 알로프레그 나놀론(Allo-P-one)으로 이루어지는 군에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상인 것을 특징으로 하는 스테로이드 대사 변화 분석 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 시료는
    인체로부터 배출된 소변, 땀, 혈액 및 세포로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 스테로이드 대사 변화 분석 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 (a) 단계는
    상기 시료에 베타-글루쿠로니다아제(β-glucuronidase) 효소를 첨가하고, pH 4.5 내지 5.5에서 반응시켜 시료 내에 존재하는 스테로이드-글루코로나이드를 가수분해하여 스테로이드를 획득하는 것을 특징으로 하는 스테로이드 대사 변화 분석 방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 (b) 단계는
    90 내지 100 %의 메탄올을 유기용매로 하여 스테로이드를 추출하는 것을 특징으로 하는 스테로이드 대사 변화 분석 방법.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 (c) 단계는
    상기 (b) 단계에서 추출된 스테로이드를 액체크로마토그래피-다중질량분석기에 투입하여 정량 분석하는 것을 특징으로 하는 스테로이드 대사 변화 분석 방법.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 액체크로마토그래피-다중질량분석기의 분석조건은
    1 내지 30 분 동안 이동상인 증류수 및 메탄올인 부피비(%)가 70 : 30에서 20 : 80으로 변화되는 기울기 용리(gradient)를 가지는 것을 특징으로 하는 스테로이드의 대사 변화 분석 방법.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 스테로이드 대사 프로필은
    스테로이드 종류에 따른 선구이온(precursor ion), 생성 이온(product ion), 충돌에너지(collision energy) 및 콘 전압(cone voltage)의 변화량으로 이루어지는 데이터 세트에 의한 관측농도의 변화로 결정되는 것을 특징으로 하는 스테로이드 대사 변화 분석 방법.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 (e) 단계는
    상기 인터넷 또는 스마트폰 사용자 집단을 구성하고,
    상기 구성원의 사용 시간을 미리 선정된 기준에 따라 평가점수로 환산하며,
    상기 환산된 평가점수를 모수적 통계방법으로 처리하여 상기 중독지수를 결정하는 것을 특징으로 하는 스테로이드 대사 변화 분석 방법.
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. (1) 시료를 채취하여 전처리하고 추출하는 단계;
    (2) 추출된 물질 중 스테로이드에 대한 정량분석을 위하여 분석 조건을 설정하는 단계;
    (3) 상기 분석 조건에 따른 스테로이드 대사 프로필(steroid metabolic profile)을 획득하는 단계;
    (4) 인터넷 또는 스마트폰 사용자들의 사용량에 따른 중독지수를 획득하는 단계;
    (5) 상기 스테로이드 대사 프로필에 따른 관측농도와 상기 중독지수를 변량으로 하는 상관계수를 도출하여, 상기 스테로이드 대사 프로필 중 상기 상관계수가 0.2 이상인 스테로이드를 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측인자로 결정하는 단계; 및
    (6) 중독 예측 대상 시료를 채취하고 상기 (1) 내지 상기 (2)단계를 수행하여 스테로이드를 정량분석하고, 상기 예측인자에 해당하는 스테로이드의 대사변화(metabolic alteration)가 검출되는 경우 인터넷 또는 스마트폰 중독으로 결정하는 단계를 포함하되,
    상기 (5) 단계에서, 상기 인터넷 또는 스마트폰 중독을 예측할 수 있는 인자는 11β-히드록시안드로스 테론(11β-OH An), 에피토스테스테론(Epi T), 5α-디하이드로-11-디하이드로코르티코스테론(5α-dehydro-11-dehydro-B), 프레그네인트라이올(P-triol), 프레그난올론(P-one), 및 알로프레그 나놀론(Allo-P-one)으로 이루어지는 군에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상인 것을 특징으로 하는 스테로이드 대사 변화분석을 통한 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측방법.
  12. 스테로이드 대사 프로필에 따른 상기 스테로이드의 관측농도와 인터넷 또는 스마트폰 사용량에 따른 중독지수를 변량으로 하는 상관계수를 계산하고,
    상기 상관계수가 일정 기준 이상인 스테로이드를 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측인자로 결정하며,
    중독 예측 대상 시료 내의 스테로이드 정량분석 결과를 획득하여 이를 입력하고,
    상기 입력된 스테로이드의 정량분석 결과가 상기 예측인자에 해당하는 스테로이드인지를 확인하여 인터넷 또는 스마트폰 중독임을 판정하여 출력하되,
    계산된 상기 상관계수가 0.2 이상인 스테로이드로써, 인터넷 또는 스마트폰 중독 예측인자는 11β-히드록시안드로스 테론(11β-OH An), 에피토스테스테론(Epi T), 5α-디하이드로-11-디하이드로코르티코스테론(5α-dehydro-11-dehydro-B), 프레그네인트라이올(P-triol), 프레그난올론(P-one), 및 알로프레그 나놀론(Allo-P-one)으로 이루어지는 군에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상인 것을 특징으로 하는 프로그램이 저장된 컴퓨터 판독 가능 기록 매체.
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