KR101948389B1 - Discriminating method of Codonopsis lanceolata and Adenophora triphylla using SSR marker - Google Patents

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Abstract

본 발명은 서열번호 1 및 2로 이루어진 프라이머 세트; 또는 서열번호 3 및 4로 이루어진 프라이머 세트를 포함하는 사삼 품종을 판별하기 위한 SSR(Simple Sequence Repeat) 검출용 프라이머 세트 및 상기 프라이머 세트를 포함하는 사삼 품종 판별용 조성물 또는 키트에 관한 것이다. The present invention relates to a primer set consisting of SEQ ID NOS: 1 and 2; Or a primer set consisting of SEQ ID NOS: 3 and 4, and a primer set for SSR (Simple Sequence Repeat) detection for discriminating four kinds of primers.

Description

SSR 마커를 이용한 더덕 및 잔대의 감별방법{Discriminating method of Codonopsis lanceolata and Adenophora triphylla using SSR marker}{Discriminating method of Codonopsis lanceolata and Adenophora triphylla using SSR marker using SSR markers}

본 발명은 SSR 검출용 프라이머 세트 및 상기 프라이머 세트를 더덕과 잔대 판별용 조성물 또는 키트에 관한 것이고, 상기 프라이머 세트를 이용한 더덕과 잔대 판별방법에 관한 것이다. The present invention relates to a primer set for SSR detection and a composition or kit for distinguishing between a primer set and a primer set, and relates to a method for determining the primer set using the primer set.

더덕(Codonopsis lanceolata)과 잔대(Adenophora triphylla)는 초롱꽃과에 속하는 다년생 식물로 주로 산에 자생하며 뿌리를 주로 이용한다. 더덕의 뿌리는 예로부터 민간에서 천연약제로 사용되어왔으며, 생체로 이용되거나 요리하여 음식으로 이용되어왔다. 더덕은 saponins, phenylpropanoids, alkaloids, triterpenes, flavonoids 등의 유효성분을 갖고 있으며 인삼과 마찬가지로 많은 saponin을 함유하고 있어 다양한 효능을 나타낸다. 잔대는 한국, 일본, 중국 등에 분포하며 vitamin A, C와 칼슘함량이 높으며 주성분으로 saponin과 inulin을 갖고 있며 오래전부터 식용 및 약용으로 이용되어왔다. Codonopsis Lanceolata and Adenophora triphylla are perennial plants belonging to the Lentinaceae family. They are mainly grown in the mountains and mainly use roots. The roots of roe deer have been used as natural medicines in the private sector since ancient times, and have been used as living organisms or cooked food. Dodok has active ingredients such as saponins, phenylpropanoids, alkaloids, triterpenes and flavonoids. It has many saponins as well as ginseng. It is distributed in Korea, Japan and China. It has high vitamin A, C and calcium content. It has saponin and inulin as its main components and has been used for long time as edible and medicinal.

한국은 예로부터 다양한 식물을 한약재로 이용해왔다. 더덕과 잔대는 두가지 모두 사삼[沙參]이라는 생약명으로 혼용되어 사용되고 있다. 더덕과 사삼은 한약재로 가공되었을 경우 형태적으로 큰 차이를 나타내지 않아 구별이 어렵고 동의보감에서는 더덕의 생약명이 사삼으로 기재되어있어 소비자들은 더덕과 잔대를 사삼이라는 생약명의 한약재로 혼용하여 사용하고 있다. 하지만, 한의학대사전에 기재되어있는 더덕의 정확한 생약명은 양유[羊乳]이며 사삼[沙參]의 정확한 기원식물은 잔대이며 더덕과 잔대는 성미(性味)와 효능이 또한 다르다. Korea has been using various plants for herbal medicines since ancient times. Doduk and Jigae are both used together as a medicinal herb called 沙 参. Doduck and ginseng are not distinguishable from each other when they are processed as herbal medicines, and they are difficult to distinguish from each other. However, the accurate description of doduk that is described in the Oriental Medicine Dictionary is "Yang Yum" and the precise origin of the saishan is the remainder, and the dodok and the remainder are different in sexuality and efficacy.

한편, 분자생물학 분야의 급진적인 발전과 더불어 식물의 속, 종간 또는 종 내 품종 간 분류에 분자생물학적인 방법들이 다양하게 사용되고 있으며, 이를 위하여 핵산(DNA) 수준에서 유전자원의 다양성(genetic diversity) 연구를 가능케 하는 핵산 지문 분석 방법 및 다양한 DNA 마커들이 개발되고 있다. 분자생물학 수준에서의 DNA 분석에 의한 변종의 감별은 그 변종의 양적 수준과 더불어 다수의 특성을 파악할 수 있으며 환경의 영향을 배제할 수 있는 장점이 있다. 그 중에서 RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism; 제한효소 단편 다형성)는 일련의 DNA 사슬을 제한효소로 처리했을 때 생기는 DNA 단편들이 개체간의 유전적 조성의 차이, 즉 염기 서열상의 차이에 따라서 그 수나 길이가 서로 다르게 나타난다는 사실에 기초한 것으로써 다양하게 이용되고 있다. 하지만, RFLP는 순도가 높은 DNA가 다량으로 필요하며 시간과 노력과 비용이 많이 소요될 뿐 아니라 시험과정이 복잡하고 방사성 동위원소를 이용해야 하는 단점이 있다.In addition to the radical development of molecular biology, molecular biology methods have been widely used to classify plant species, interspecies, or species within a plant. For this purpose, genetic diversity research at the level of DNA (DNA) And a variety of DNA markers are being developed. The discrimination of strains by DNA analysis at the level of molecular biology has the advantage of being able to grasp many characteristics along with the quantitative level of the strains and to exclude the influence of the environment. Among them, Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) is a restriction fragment length polymorphism (RFLP) in which DNA fragments generated when a series of DNA chains are treated with restriction enzymes are different in their genetic composition, that is, And it is used variously based on the fact that it appears differently. However, RFLP requires a large amount of high purity DNA, is time-consuming, laborious and costly, has a complicated test procedure, and has a disadvantage of using radioactive isotopes.

SSR(Simple Sequence Repeat) 마커는 짧은 염기서열의 반복으로 만들어져 있어, PCR(Polymerase Chain Reaction; 중합효소연쇄반응) 반응에서 식물 유전체에 결합하여 DNA를 증폭시킨다. 그 결과, 식물의 종 또는 속에 따라 다양한 크기의 DNA 조각을 만들어 증폭시킨다. 이것은 전기영동 방법을 사용하여 그 패턴을 판독함으로서 고유한 프로필을 SSR 반응에서 수집할 수 있다. The SSR (Simple Sequence Repeat) marker is made up of repetitions of short nucleotide sequences, which bind to the plant genome in PCR (Polymerase Chain Reaction) to amplify the DNA. As a result, various sizes of DNA fragments are produced and amplified depending on the plant species or genus. This allows the unique profile to be collected in the SSR reaction by reading the pattern using an electrophoretic method.

1. 한국등록특허 제10-1271330호1. Korean Patent No. 10-1271330

본 발명의 목적은 서열번호 1 및 2로 이루어진 프라이머 세트; 또는 서열번호 3 및 4로 이루어진 프라이머 세트를 포함하는 사삼 품종을 판별하기 위한 SSR(Simple Sequence Repeat) 검출용 프라이머 세트를 제공하는 것이다. An object of the present invention is to provide a primer set consisting of SEQ ID NOS: 1 and 2; Or a primer set consisting of SEQ ID NOS: 3 and 4, and a primer set for detecting SSR (Simple Sequence Repeat)

본 발명의 또 다른 목적은 상기 프라이머 세트를 포함하는 사삼 품종 판별용 조성물 및 키트를 제공하는 것이다. It is still another object of the present invention to provide a composition and a kit for distinguishing four cultivars comprising the primer set.

본 발명의 또 다른 목적은 시료로부터 추출된 DNA에 대해 상기 프라이머 세트를 이용하여 PCR을 수행하는 단계를 포함하는 사삼 품종의 판별 방법을 제공하는 것이다. It is still another object of the present invention to provide a method for distinguishing four species of a variety including a step of performing PCR using the primer set for DNA extracted from a sample.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1 및 2로 이루어진 프라이머 세트; 또는 서열번호 3 및 4로 이루어진 프라이머 세트를 포함하는 사삼 품종을 판별하기 위한 SSR(Simple Sequence Repeat) 검출용 프라이머 세트를 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a primer set consisting of SEQ ID NOS: 1 and 2; Or a primer set consisting of SEQ ID NOS: 3 and 4, is provided for detecting SSR (Simple Sequence Repeat).

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 사삼은 더덕(Codonopsis lanceolata) 또는 잔대(Adenophora triphylla)인 것일 수 있다. In one embodiment of the invention, the ginseng is selected from the group consisting of Codonopsis lanceolata or Adenophora triphylla .

본 발명의 용어, "사삼"은 더덕과 잔대를 말하는 것으로서, 더덕과 잔대 모두 사삼[沙參]이라는 생약명으로 혼용되어 사용되고 있다.The term "samsam" of the present invention refers to dodok and its tail, and both dodok and its tail are used in combination as a generic name of samsan.

본 발명의 용어, "SSR(Simple Sequence Repeat)"은 짧은 염기서열의 반복으로 만들어져 있어, DNA의 다형성을 검출하고 유전적 다양성을 분석하는데 유용하게 사용될 수 있는 것을 말한다. The term "SSR (Simple Sequence Repeat)" of the present invention is made up of repetitions of short nucleotide sequences and is used to detect DNA polymorphism and analyze genetic diversity.

본 발명의 용어, "프라이머"는 그 서열과 상보적인 염기서열을 갖는 주형과 염기쌍(base pair)을 형성할 수 있고 주형 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 핵산 서열을 의미한다. 상기 본 발명의 프라이머 세트는 SSR 마커의 증폭을 위하여 각각 정방향(forward) 및 역방향(reverse) 프라이머로 구성되어 있다.The term "primer" of the present invention means a short nucleic acid sequence capable of forming a base pair with a template having a base sequence complementary to the sequence and functioning as a starting point for template strand replication. The primer set of the present invention is composed of forward and reverse primers for amplification of the SSR marker.

또한, 본 발명은 상기 프라이머 세트를 포함하는 사삼 품종 판별용 조성물을 제공한다. In addition, the present invention provides a composition for distinguishing four cultivars comprising the primer set.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 사삼은 더덕(Codonopsis lanceolata) 또는 잔대(Adenophora triphylla)인 것일 수 있다. In one embodiment of the invention, the ginseng is selected from the group consisting of Codonopsis lanceolata or Adenophora triphylla .

또한, 본 발명은 상기 프라이머 세트를 포함하는 사삼 품종 판별용 키트를 제공한다. In addition, the present invention provides a kit for distinguishing four cultivars comprising the primer set.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 사삼은 더덕(Codonopsis lanceolata) 또는 잔대(Adenophora triphylla)인 것일 수 있다. In one embodiment of the invention, the ginseng is selected from the group consisting of Codonopsis lanceolata or Adenophora triphylla .

본 발명에서, 상기 키트는 상기 프라이머 세트 외에도 PCR 반응에 필요한 반응완충용액, 중합효소, dNTP를 더 포함할 수 있으며, 그 외에도 안정화제 및 모든 생물학적 또는 화학적 시약, 사용설명서 등을 포함할 수 있다. 이러한 키트의 다른 구성은 당업자에 의하여 적절히 선택될 수 있다.In the present invention, the kit may further include a reaction buffer solution, a polymerase, and dNTP necessary for a PCR reaction in addition to the primer set. In addition, the kit may include a stabilizer and all biological or chemical reagents and instructions for use. Other configurations of such kits may be suitably selected by those skilled in the art.

또한, 본 발명은 시료로부터 추출된 DNA에 대해 상기 프라이머 세트를 이용하여 PCR을 수행하는 단계를 포함하는 사삼 품종의 판별 방법을 제공한다. In addition, the present invention provides a method for distinguishing four species of a variety including a step of performing PCR using the primer set for DNA extracted from a sample.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 방법은 PCR 산물의 전기영동 패턴을 분석하는 단계를 더 포함하는 것일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the method may further comprise analyzing an electrophoresis pattern of the PCR product.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 PCR 수행을 통해 증폭된 표적 서열은 검출 가능한 표지 물질로 표지될 수 있다. 하나의 구체적 예로서, 상기 표지 물질은 형광, 인광 또는 방사선을 발하는 물질일 수 있으나, 이로 제한되지 않는다. 바람직하게는 상기 표지 물질은 에티디움브로마이드(Ethidium Bromide: EtBr), Cy-5 또는 Cy-3이다. 표적 서열의 증폭 시 프라이머의 5′-말단에 Cy-5 또는 Cy-3를 표지하여 PCR을 수행하면 표적 서열이 검출 가능한 형광 표지 물질로 표지될 수 있다. 또한, 방사선 물질을 이용한 표지는 PCR 수행 시 32P 또는 35S 등과 같은 방사선 동위원소를 PCR 반응액에 첨가하면 증폭 산물이 합성되면서 방사선이 증폭 산물에 혼입되어 증폭 산물이 방사선으로 표지될 수 있다. In one embodiment of the present invention, the amplified target sequence may be labeled with a detectable labeling substance. In one specific example, the labeling material can be, but is not limited to, a material that emits fluorescence, phosphorescence, or radiation. Preferably, the labeling substance is Ethidium Bromide (EtBr), Cy-5 or Cy-3. When the target sequence is amplified, PCR is carried out by labeling the 5'-end of the primer with Cy-5 or Cy-3, and the target sequence may be labeled with a detectable fluorescent labeling substance. In addition, if the radioactive isotope such as 32 P or 35 S is added to the PCR reaction solution, the amplification product may be synthesized and the radiation may be incorporated into the amplification product and the amplification product may be labeled with the radiation.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 증폭된 산물의 검출은 DNA 칩, 겔 전기영동, 방사선 측정, 형광 측정 또는 인광 측정을 통해 수행될 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다. 증폭 산물을 검출하는 방법 중의 하나로서, 겔 전기영동을 수행할 수 있다. 겔 전기영동은 증폭 산물의 크기에 따라 아가로스 겔 전기영동 또는 아크릴아미드 겔 전기영동을 이용할 수 있다. 또한, 형광 측정 방법은 프라이머의 5′-말단에 Cy-5 또는 Cy-3를 표지하여 PCR을 수행하면 표적 서열이 검출 가능한 형광 표지 물질로 표지되며, 이렇게 표지된 형광은 형광 측정기를 이용하여 측정할 수 있다. 또한, 방사선 측정 방법은 PCR 수행시 32P 또는 35S 등과 같은 방사선 동위원소를 PCR 반응액에 첨가하여 증폭 산물을 표지한 후, 방사선 측정기구, 예를 들면, 가이어 계수기(Geiger counter) 또는 액체섬광계수기(liquid scintillation counter)를 이용하여 방사선을 측정할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the detection of the amplified product can be performed through DNA chip, gel electrophoresis, radiation measurement, fluorescence measurement or phosphorescence measurement, but is not limited thereto. As one method of detecting the amplification product, gel electrophoresis can be performed. Gel electrophoresis can be performed using agarose gel electrophoresis or acrylamide gel electrophoresis depending on the size of the amplification product. Also, in the fluorescence measurement method, Cy-5 or Cy-3 is labeled at the 5'-end of the primer. When PCR is carried out, the target is labeled with a fluorescent label capable of detecting the target sequence. The labeled fluorescence is measured using a fluorescence meter can do. In addition, in the case of performing the PCR, the radioactive isotope such as 32 P or 35 S is added to the PCR reaction solution to mark the amplification product, and then the radioactivity is measured by a radiation measuring device such as a Geiger counter or liquid scintillation counter The radiation can be measured using a liquid scintillation counter.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 사삼은 더덕(Codonopsis lanceolata) 또는 잔대(Adenophora triphylla)인 것일 수 있다. In one embodiment of the invention, the ginseng is selected from the group consisting of Codonopsis lanceolata or Adenophora triphylla .

본 발명에 따른 SSR 프라이머 세트를 이용하여 사삼 품종으로 혼용하여 사용되고 있는 더덕과 잔대를 빠르고 간단하게 판별할 수 있어 농업분야에서 유용하게 활용될 수 있다. Using the SSR primer set according to the present invention, it is possible to quickly and simply discriminate dodecs and dodecs, which are used in combination with each other, so that they can be usefully used in agriculture.

도 1은 CLtri0750 프라이머 세트를 이용한 더덕(Codonopsis lanceolata)과 잔대(Adenophora triphylla)에 대한 전기영동 패턴을 나타낸 결과이다.
도 2는 CLtetra2277 프라이머 세트를 이용한 더덕(Codonopsis lanceolata)과 잔대(Adenophora triphylla)에 대한 전기영동 패턴을 나타낸 결과이다.
1 is Codonopsis (Codonopsis using the primer set CLtri0750 lanceolata ) and the adenophora triphylla (electrophoretic pattern).
2 is Codonopsis (Codonopsis using the primer set CLtetra2277 lanceolata ) and the adenophora triphylla (electrophoretic pattern).

이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. These examples are for further illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

실시예Example 1. 더덕과  1. Doduk and 잔대로부터의From DNA 추출 DNA extraction

더덕(Codonopsis lanceolata)과 잔대(Adenophora triphylla)는 잎을 채취하여 준비하였다. 상기 준비된 더덕과 잔대의 잎은 분쇄 후 CTAB 방법으로 추출되었다. 구체적으로, 더덕과 잔대의 잎을 분쇄한 후 마이크로 튜브에 분쇄된 샘플 1g과 0.2% 2-머캅토에탄올(Mercaptoethanol)이 첨가된 700㎕의 CTAB 용액를 넣고 혼합한 뒤 항온수조 65℃에서 30분간 배양하였다. 배양 후 클로로폼(chloroform)과 이소-아밀알콜(iso-amylalchol)을 24:1 비율로 700㎕를 첨가하여 10분간 12,000 rpm으로 16℃에서 원심분리하고 상등액을 수득하였다. 수득한 상등액은 이소프로파놀(isopropanol)을 1:1 비율로 동일하게 첨가한 후 인버팅하여 DNA 펠릿을 확인 후 5분간 12,000 rpm으로 4℃에서 원심분리하여 생성된 펠릿에 70% 에탄올 200㎕를 넣어준 뒤, 12,000rpm, 4℃, 5분의 조건으로 원심분리하고 상온에서 10분 방치하여 에탄올을 휘발시킨 후 1X TE buffer 200㎕ 첨가하여 녹인 후, RNase(10mg/ml)를 1㎕, 37℃, 30분 처리하여 DNA 농도를 확인하였다. Codonopsis lanceolata ) and ginseng ( Adenophora triphylla ) were prepared by harvesting leaves. The prepared dodeca and leaves were extracted by the CTAB method after grinding. Specifically, 1 g of the crushed sample and 1 ml of CTAB solution containing 0.2% 2-mercaptoethanol were added to a microtube, and the mixture was incubated at 65 ° C for 30 minutes Respectively. After the incubation, chloroform and iso-amylalchol were added at a ratio of 24: 1 at a ratio of 700: 1, centrifuged at 12,000 rpm for 10 minutes at 16 ° C, and a supernatant was obtained. After the DNA pellet was identified by inverting after adding isopropanol in a ratio of 1: 1, the resulting supernatant was centrifuged at 12,000 rpm for 5 minutes at 4 ° C, and 200 μl of 70% ethanol was added to the pellet The mixture was centrifuged at 12,000 rpm at 4 ° C for 5 minutes and allowed to stand at room temperature for 10 minutes. Ethanol was volatilized and then 200 μl of 1 × TE buffer was added to dissolve and then 1 μl of RNase (10 mg / ml) C for 30 minutes to confirm the DNA concentration.

실시예Example 2.  2. PCR을PCR 이용한 DNA 증폭 DNA amplification using

상기 실시예 1에서 CTAB 방법으로 추출된 더덕 및 잔대의 DNA는 5 pmol로 희석하여 DNA 10 ng, RAPD primer 10 ng을 넣어 20㎕의 PCR 반응 혼합물을 만들었고, PCR 과정은 다음과 같다: preheating 94℃ 300초; denaturation 94℃ 30초; annealing 58℃ 60초; extension 72℃ 60초; 35 cycle 반복; 및 post extension 72℃ 600초. 10 ng of DNA and 10 ng of RAPD primer were added to 5 μl of DNA extracted with CTAB in Example 1, and 20 μl of PCR reaction mixture was prepared. The PCR procedure was as follows: preheating 94 ° C. 300 seconds; denaturation 94 캜 30 sec; annealing 58 ° C for 60 seconds; extension 72 ° C for 60 seconds; Repeat 35 cycles; And post extension 72 ° C for 600 seconds.

실시예Example 3.  3. PCR에In PCR 사용된 SSR  Used SSR 프라이머primer (primer)(primer)

더덕과 잔대를 구별하기 위하기 위하여 next generation sequencing을 수행하여 더덕의 유전체를 분석하고 SSR(Simple Sequence Repeat) 마커를 개발하였다. 더덕과 잔대를 구별하기 위하여 PCR에 사용된 SSR 프라이머에 대한 서열정보는 하기 표 1과 같다. In order to distinguish dodeca from dodec, next generation sequencing was performed to analyze the genomes of dodeca and to develop SSR (Simple Sequence Repeat) markers. Sequence information for the SSR primers used in the PCR to distinguish between dodeca and dodeca is shown in Table 1 below.

프라이머primer 방향direction 서열정보Sequence information CLtri0750CLtri0750 forwardforward 5'-ACTATGGAGGTCTCTCCTCACTC-3' (서열번호 1)5'-ACTATGGAGGTCTCTCCTCACTC-3 '(SEQ ID NO: 1) reversereverse 5'-GAAGTATACGCTGTCCCATACG-3' (서열번호 2)5'-GAAGTATACGCTGTCCCATACG-3 '(SEQ ID NO: 2) CLtetra2277CLtetra2277 forwordforword 5'-TAAAGACGTGTGGCCATGT-3' (서열번호 3)5'-TAAAGACGTGTGGCCATGT-3 '(SEQ ID NO: 3) reversereverse 5'-CTATGCAAAGTGTGCTCGTC-3' (서열번호 4)5'-CTATGCAAAGTGTGCTCGTC-3 '(SEQ ID NO: 4)

실시예Example 4.  4. PCR을PCR 사용하여 다형성을 나타내는 SSR  SSRs showing polymorphism using 프라이머의Primer 패턴 판독 Pattern reading

PCR 산물은 DNA Fragment Analyzer Automated CE System (Advanced Analytical Technologies, Ankeny, IA, USA)으로 분석하였다. 더덕과 잔대에서 다형성을 나타내는 밴드를 통해 패턴을 판독하였다.PCR products were analyzed by DNA Fragment Analyzer Automated CE System (Advanced Analytical Technologies, Ankeny, IA, USA). Patterns were read through the bands indicating polymorphism in the dodeca and the remainder.

CLtri0750 프라이머 세트(서열번호 1 및 2로 이루어진 프라이머 세트)를 사용하여 더덕(Codonopsis lanceolata)과 잔대(Adenophora triphylla)의 밴드를 살펴본 결과, 잔대의 경우 159 bp의 정확한 밴드가 나타나는 반면, 더덕은 159 bp보다 작은 사이즈의 밴드가 형성됨을 확인할 수 있었다(도 1). Using the CLtri0750 primer set (primer set consisting of SEQ ID NOS: 1 and 2), Codonopsis lanceolata and Adenophora triphylla showed that the band of 159 bp was observed in the case of the remainder, while the band of 159 bp in the case of the case of dodeca was formed (Fig. 1).

또한, CLtetra2277 프라이머 세트(서열번호 3 및 4로 이루어진 프라이머 세트)를 사용하여 더덕(Codonopsis lanceolata)과 잔대(Adenophora triphylla)의 밴드를 살펴본 결과, 잔대의 경우 395 bp의 정확한 밴드가 형성되어 있는 반면, 더덕200 bp 이하의 진한 밴드가 형성됨을 확인할 수 있었다. Further, using the CLtetra2277 primer set (a primer set consisting of SEQ ID NOS: 3 and 4), Codonopsis lanceolata and Adenophora triphylla showed that the band of 395 bp was formed in the remainder, while the band of less than 200 bp was formed in the bands of Adenophora triphylla .

따라서, SSR 마커에 대한 CLtri0750 프라이머 세트 또는 CLtetra2277 프라이머 세트를 이용하여 더덕과 잔대를 구별할 수 있음을 확인하였다. Therefore, it was confirmed that the dodeca can be discriminated by using the CLtri0750 primer set or the CLtetra2277 primer set for SSR markers.

<110> Industry-Academic Cooperation Foundation of Chungbuk University <120> Discriminating method of Codonopsis lanceolata and Adenophora triphylla using SSR marker <130> PN1610-377 <160> 4 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 1 actatggagg tctctcctca ctc 23 <210> 2 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 2 gaagtatacg ctgtcccata cg 22 <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 3 taaagacgtg tggccatgt 19 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 4 ctatgcaaag tgtgctcgtc 20 <110> Industry-Academic Cooperation Foundation of Chungbuk University <120> Discriminating method of Codonopsis lanceolata and Adenophora          triphylla using SSR marker <130> PN1610-377 <160> 4 <170> KoPatentin 3.0 <210> 1 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 1 actatggagg tctctcctca ctc 23 <210> 2 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 2 gaagtatacg ctgtcccata cg 22 <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 3 taaagacgtg tggccatgt 19 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 4 ctatgcaaag tgtgctcgtc 20

Claims (9)

서열번호 1 및 2로 이루어진 프라이머 세트를 포함하는 더덕과 잔대를 구별하기 위한 SSR(Simple Sequence Repeat) 검출용 프라이머 세트.A primer set for detecting SSR (Simple Sequence Repeat) for distinguishing between dodec and dodecontaining a primer set consisting of SEQ ID NOS: 1 and 2. 삭제delete 제 1 항의 프라이머 세트를 포함하는 더덕과 잔대 구별용 조성물.A composition for distinguishing between dodeca and halite, comprising the primer set of claim 1. 삭제delete 제 1 항의 프라이머 세트를 포함하는 더덕과 잔대 구별용 키트.A kit for distinguishing between dodeca and halitosis comprising the primer set of claim 1. 삭제delete 시료로부터 추출된 DNA에 대해 제 1 항의 프라이머 세트를 이용하여 PCR을 수행하는 단계를 포함하는 더덕과 잔대의 구별 방법. And performing PCR using the primer set of claim 1 for the DNA extracted from the sample. 제 7 항에 있어서,
상기 방법은 PCR 산물의 전기영동 패턴을 분석하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
8. The method of claim 7,
Wherein the method further comprises analyzing an electrophoresis pattern of the PCR product.
삭제delete
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