KR101933805B1 - Pharmaceutical Composition for Preventing or Treating brain tumor comprising Oxeladin citrate as Active Ingredients - Google Patents

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KR101933805B1 KR1020170134624A KR20170134624A KR101933805B1 KR 101933805 B1 KR101933805 B1 KR 101933805B1 KR 1020170134624 A KR1020170134624 A KR 1020170134624A KR 20170134624 A KR20170134624 A KR 20170134624A KR 101933805 B1 KR101933805 B1 KR 101933805B1
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박채화
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Abstract

The present invention relates to a temozolomide resistant pharmaceutical composition for preventing or treating brain cancer. More specifically, the present invention relates to a temozolomide resistant pharmaceutical composition for preventing or treating brain cancer which inhibits activation of signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3) and comprises oxeladin citrate which is a material for inhibiting tumor formation and metastasis of glioblastoma. A composition of the present invention hinders metastasis of a brain cancer cell and weakens tolerance to temozolomide drugs by selectively inhibiting activation of STAT3 in temozolomide resistant glioblastoma and tumor formation of glioblastoma. The present invention can be utilized for preventing or treating temozolomide resistant brain cancer through an inhibition effect of occurrence and recurrence of glioblastoma, in particular, can increase susceptibility of glioma which is resistant to temozolomide which is known for the only therapeutic agent of brain cancer, and thus is expected to be useful as a next combined therapeutic agent.

Description

옥셀라딘시트레이트를 유효성분으로 포함하는 뇌암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 {Pharmaceutical Composition for Preventing or Treating brain tumor comprising Oxeladin citrate as Active Ingredients} TECHNICAL FIELD The present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating brain cancer comprising oxeladinate citrate as an active ingredient,

본 발명은 테모졸로마이드(temozolomide) 내성 뇌암 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 STAT3(signal transducer and activator of transcription 3)의 활성화를 억제하며, 교모세포종의 종양형성 및 전이능력을 억제하는 물질인 옥셀라딘시트레이트(Oxeladin citrate)를 포함하는 테모졸로마이드(temozolomide) 내성 뇌암 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of brain cancer resistant to temozolomide, and more particularly to a composition for inhibiting the activation of STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) (Oxeladin citrate), which is a substance that inhibits insulin resistance, is a substance that inhibits insulin resistance.

세포질에 존재하는 cytosolic STAT3(signal transducer and activator of transcription 3) 단백질은 활성화된 수용체로 이동하여 인산화효소에 의해 티로신 잔기(Tyr705)가 인산화되어 활성화된다. 활성화된 STAT3는 호모다이머(homodimer) 또는 헤테로다이머(heterodimer)를 형성한 후, 핵으로 이동하여 세포 증식(cell proliferation), 형질전환(transformation), 및 세포사멸(apoptosis)과 관련된 유전자들의 전사를 조절한다. 최근 이처럼 전사인자로 활성화된 STATs가 많은 암세포와 암 조직에서 관찰된다고 보고되고 있으며, 이중 STAT3는 가장 활성화된 전사인자로 알려져 있다. The cytosolic STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) protein in the cytoplasm migrates to the activated receptor and is activated by phosphorylation of the tyrosine residue (Tyr705) by the phosphorylation enzyme. Activated STAT3 forms a homodimer or heterodimer and then migrates to the nucleus to regulate the transcription of genes involved in cell proliferation, transformation, and apoptosis do. Recently, STATs activated by transcription factors have been reported to be observed in many cancer cells and cancer tissues, and STAT3 is known to be the most active transcription factor.

한편, 교모세포종(Glioblastoma) 또는 다형성아교모세포종(Glioblastoma multiforme; GBM)은 뇌종양의 약 12~15%를 차지하는 가장 일반적인 악성 뇌암으로, WHO(World Health Organization)의 암 악성도에 따른 Ⅰ~ Ⅳ의 등급 시스템에서 교모세포종은 성장속도가 매우 빠르고 위험한 잠재력을 지닌 가장 악성도가 높은 종양으로서 Ⅳ 등급으로 분류된다.  Glioblastoma or glioblastoma multiforme (GBM) is the most common malignant brain cancer, accounting for approximately 12-15% of brain tumors. It is classified as a grade I to IV according to WHO (World Health Organization) In the system, glioblastomas are the most malignant tumors with a very rapid growth rate and dangerous potential and are classified as grade IV.

교모세포종은 티로신 인산화효소 수용체(receptor tyrosine kinase; RTK) 신호전달 경로가 비정상적으로 활성화되는 특성을 보이며, 계속적으로 활성화된 STAT3(signal transducer and activator of transcription 3)가 높은 등급의 신경교종에서 EGFR(epidermal growth factor receptor)과 함께 발현한다고 보고되어 있다. 또한, STAT3의 활성화가 교모세포종 암줄기세포의 생존유지에 매우 중요하다고 알려져 있으며, EGFR은 STAT3의 이동을 위한 골격을 제공하며, 인산화에 의해 활성화된 STAT3는 엔도좀 상의 수용체-리간드와 공존하고 세포막에서 핵 주변으로 이동한다고 보고되고 있다. The glioblastoma is characterized by abnormal activation of the receptor tyrosine kinase (RTK) signaling pathway, and the continuously activated STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) growth factor receptor). In addition, STAT3 activation is known to be crucial for the survival of glioblastoma stem cells. EGFR provides a framework for STAT3 transfer, and STAT3 activated by phosphorylation coexists with the receptor-ligand on endosomes, It is reported to move around the nucleus.

현재 악성 뇌암인 교모세포종의 치료법으로는 테모졸로마이드(Temozolomide)가 유일한 경구용 항암제로 알려져 있으나, 대부분의 환자에서 약물에 대한 내성이 일어나며 내성이 일어난 후에는 더 이상 치료 방안이 없다는 문제점이 있어, 이에, 테모졸로마이드 내성 교모세포종에 대한 치료제 개발을 위한 연구가 계속 이루어지고 있다.Currently, Temozolomide is known to be the only oral anticancer drug for the treatment of glioblastoma, a malignant brain tumor. However, most patients have resistance to drug resistance and no treatment after treatment, Therefore, studies for the development of therapeutic agents for the temozolomide resistant glioblastoma are continuing.

한국등록특허 제10-1664663호Korean Patent No. 10-1664663

본 발명자들은 옥셀라딘시트레이트(Oxeladin citrate)가 테모졸로마이드 내성 교모세포종에서 STAT3의 활성화 및 교모세포종의 종양형성 및 전이능력을 억제한다는 것을 확인하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다. The present inventors have confirmed that oxeladin citrate inhibits the activation of STAT3 and the tumorigenic and metastatic ability of germoblastoma in temozolomide resistant glioblastoma cells, and has completed the present invention based thereon.

이에, 본 발명은 옥셀라딘시트레이트를 유효성분으로 포함하는 테모졸로마이드(temozolomide) 내성 뇌암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. Accordingly, it is an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating temozolomide-resistant brain cancer comprising oxeladine citrate as an active ingredient.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the technical problem to be solved by the present invention is not limited to the above-mentioned problems, and other matters not mentioned can be clearly understood by those skilled in the art from the following description.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 옥셀라딘시트레이트(Oxeladin citrate)를 유효성분으로 포함하는, 테모졸로마이드(temozolomide) 내성 뇌암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. In order to achieve the object of the present invention, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating brain cancer resistant to temozolomide, comprising oxeladin citrate as an active ingredient.

본 발명의 일 구현예로, 상기 뇌암은 교모세포종인 것을 특징으로 한다. In one embodiment of the present invention, the brain cancer is a glioblastoma.

본 발명의 다른 구현예로, 상기 조성물은 STAT3(signal transducer and activator of transcription 3)의 활성을 억제하는 것을 특징으로 한다. In another embodiment of the present invention, the composition is characterized by inhibiting the activity of STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3).

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 조성물은 교모세포종의 종양형성 또는 전이능력을 억제하는 것을 특징으로 한다. In another embodiment of the present invention, the composition is characterized by inhibiting tumorigenic or metastatic ability of a glioblastoma.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 조성물은 약리학적으로 허용 가능한 담체(carrier) 또는 보조제(additive)를 더 함유할 수 있다. In another embodiment of the present invention, the composition may further contain a pharmacologically acceptable carrier or additive.

또한, 본 발명은 옥셀라딘시트레이트(Oxeladin citrate)를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 테모졸로마이드(temozolomide) 내성 뇌암 예방 또는 치료 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for the prevention or treatment of brain cancer resistant to temozolomide, comprising the step of administering to a subject a pharmaceutical composition containing oxeladin citrate as an active ingredient.

나아가, 본 발명은 옥셀라딘시트레이트(Oxeladin citrate)의 테모졸로마이드(temozolomide) 내성 뇌암 예방 또는 치료 용도를 제공한다.Furthermore, the present invention provides the use of oxeladin citrate for the prevention or treatment of temozolomide-resistant brain cancer.

본 발명의 옥셀라딘시트레이트(Oxeladin citrate)는 테모졸로마이드 내성 교모세포종에서 STAT3의 활성화를 억제하며, 교모세포종의 종양형성 및 전이능력을 억제함으로써, 뇌암 세포의 전이 능력을 저해시키며, 테모졸로마이드 약물에 대한 내성을 약화시키는데 효과적이다. 이와 같은 교모세포종 발병 및 재발 억제효과를 통하여 테모졸로마이드 내성 뇌암의 예방 또는 치료에 유용하게 이용할 수 있을 뿐만 아니라, 특히, 뇌암의 유일한 치료제로 알려진 테모졸로마이드에 내성을 보이는 신경교종의 민감성을 증가시킬 수 있으므로, 향후 뇌암 복합치료제로서 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.The oxeladin citrate of the present invention inhibits the activation of STAT3 in temozolomide resistant glioblastoma and inhibits the metastatic ability of brain cancer cells by inhibiting tumor formation and metastatic ability of glioblastoma, It is effective to weaken the tolerance to the drug. These glioblastomas are effective for the prevention or treatment of brain tumors resistant to temozolomide through the effect of inhibiting the onset of glioblastoma and recurrence. In addition, the sensitivity of gliomas resistant to temozolomide, which is the sole treatment for brain cancer, Therefore, it is expected that the compound can be usefully used as a combination therapy for brain cancer in the future.

도 1은 테모졸로마이드 내성 교모세포종 세포(LN229-TMZR)들을 모체 세포(LN229)와 비교하였을 때 테모졸로마이드에 강한 내성을 갖고 있음을 확인한 결과이다.
도 2는 테모졸로마이드 내성 교모세포종 세포(LN229-TMZR)와 대조군인 모체 세포(LN229)를 비교하였을 때, LN229-TMZR 세포의 STAT3 활성이 상대적으로 높으며, Oxeladin citrate 처리로, STAT3 활성이 감소되었음을 확인한 결과이다.
도 3은 옥셀라딘시트레이트(Oxeladin citrate)를 처리하였을 때, 대조군인 모체 세포(LN229)에는 영향을 미치지 않으나, 테모졸로마이드 내성 교모세포종 세포(LN229-TMZR)에서는 이로 인하여 스피어(sphere) 형성이 감소되었음을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 테모졸로마이드 내성 교모세포종 세포(LN229-TMZR)의 경우 Oxeladin citrate의 억제중간값(median inhibitory concentration; IC50)이 0.496 μmol/L으로 낮은 반면, 대조군인 모체 세포(LN229)는 100μmol/L 이상으로 상대적으로 높음을 확인한 결과이다. Figure 1 shows the results of confirming that temozolomide resistant glioblastoma cells (LN229-TMZR) are resistant to temozolomide when compared to maternal cells (LN229).
FIG. 2 shows that STAT3 activity of LN229-TMZR cells is relatively high and STAT3 activity is decreased by treatment with oxeladin citrate when compared to the temozolomide resistant glioblastoma cell line (LN229-TMZR) and the maternal cell line (LN229) The result is confirmed.
FIG. 3 shows that treatment with oxeladin citrate does not affect the parental cell (LN229), whereas in the temozolomide resistant glioblastoma cell (LN229-TMZR) Of the total population.
Figure 4 shows that the median inhibitory concentration (IC50) of oxeladin citrate is low at 0.496 占 퐉 ol / L in the case of the temozolomide resistant glioblastoma cell line (LN229-TMZR), while the maternal cell (LN229) Of the total.

본 발명자들은 테모졸로마이드 내성 교모세포종에 대한 치료제 개발을 위하여 연구 노력한 결과, 옥셀라딘시트레이트(Oxeladin citrate)이 테모졸로마이드 내성 교모세포종에서 STAT3의 활성화를 억제하며, 교모세포종의 종양형성 및 전이능력을 억제한다는 것을 확인하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.As a result of efforts to develop therapeutic agents for temozolomide resistant glioblastoma, the present inventors have found that oxeladin citrate inhibits the activation of STAT3 in temozolomide resistant glioblastoma, and the tumor formation and metastasis of glioblastoma Inhibiting ability, and completed the present invention on the basis thereof.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 옥셀라딘시트레이트를 유효성분으로 포함하는 테모졸로마이드(temozolomide) 내성 뇌암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. The present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating temozolomide-resistant brain cancer comprising oxeladine citrate as an active ingredient.

본 발명에서 사용되는 용어 "뇌암"이란 뇌 속에서 세포가 정상적인 성장 한계를 무시하고 분열 및 성장하는 공격적(aggressive) 특성, 주위 조직에 침투하는 침투적(invasive) 특성 및 체내의 다른 부위로 퍼지는 전이적(metastatic) 특성을 갖는 세포에 의한 질병을 총칭하는 의미이다. 본 명세서에서 상기 뇌암은 악성 종양(malignant tumor)과 동일한 의미로도 사용된다. As used herein, the term "brain cancer" refers to an aggressive characteristic of a cell in the brain that disregards normal growth limits and divides and grows, invasive characteristics that penetrate surrounding tissues, It is a generic term for diseases caused by cells with metastatic characteristics. In this specification, brain cancer is also used in the same sense as malignant tumor.

본 발명에서 사용되는 용어, "예방"이란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 뇌암을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다. As used herein, the term "prophylactic " means any action that inhibits or delays the onset of brain cancer by the administration of the pharmaceutical composition according to the present invention.

본 발명에서 사용되는 용어, "치료"란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 뇌암에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.As used herein, the term "treatment" means any action that improves or alters the symptoms of brain cancer by administration of the pharmaceutical composition according to the present invention.

본 발명의 상기 뇌암은 교모세포종일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. The brain cancer of the present invention may be a glioblastoma, but is not limited thereto.

본 발명의 상기 조성물은 STAT3(signal transducer and activator of transcription 3) 활성을 억제할 뿐만 아니라, 교모세포종의 종양형성 또는 전이능력을 억제하는 것을 특징으로 한다. The composition of the present invention is characterized not only in inhibiting STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) activity, but also inhibiting tumorigenic or metastatic ability of glioblastoma.

본 발명에서, "활성을 억제"하는 것이란 표적 유전자 또는 표적 단백질의 기능 저하를 야기하는 것을 의미한다.In the present invention, "inhibiting activity" means that the function of the target gene or the target protein is degraded.

본 발명에서, "교모세포종"이란 뇌의 교세포에서 발생한 종양 중 조직학적으로 핵의 비정형성, 유사분열상, 혈관내피세포의 증식, 괴사가 관찰되는 악성도가 가장 높은 종양을 의미한다.In the present invention, "glioblastoma" refers to a tumor with the highest degree of malignancy in which tumor necrosis, mitosis, vascular endothelial cell proliferation and necrosis are observed histologically in a tumor of the brain.

본 발명의 실시예에서는, 테모졸로마이드 내성 교모세포종 세포(LN229-TMZR)와 모체 세포(LN229)를 비교하였을 때, LN229-TMZR 세포가 상대적으로 테모졸로마이드에 강한 내성을 갖고 있음을 확인하였으며(실시예 2 참조),In the examples of the present invention, it was confirmed that LN229-TMZR cells were relatively resistant to temozolomide when compared to the temozolomide resistant glioblastoma cell line (LN229-TMZR) and the maternal cell line (LN229 See Example 2),

본 발명의 다른 실시예에서는, 테모졸로마이드 내성 교모세포종 세포에 미치는 옥셀라딘시트레이트(Oxeladin citrate)의 효과를 확인하기 위하여 테모졸로마이드 내성 교모세포종 세포(LN229-TMZR)와 모체 세포(LN229)에 Oxeladin citrate를 처리하였을 때, STAT3의 활성 및 스피어(sphere)의 형성이 유의적으로 감소하였음을 확인하였다(실시예 3 참조).In another embodiment of the present invention, the effect of oxeladin citrate on the temozolomide resistant glioblastoma cells is assessed by measuring the concentration of temozolomide resistant glioma cells (LN229-TMZR) and maternal cells (LN229) , The activity of STAT3 and the formation of spheres were significantly reduced when treated with oxeladin citrate (see Example 3).

따라서 상기 결과들로 비추어 볼 때, 본 발명에 따른 옥셀라딘시트레이트(Oxeladin citrate)를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 테모졸로마이드(temozolomide) 내성 뇌암의 예방 또는 치료에 유용한 의약품으로 사용될 수 있다.Therefore, in view of the above results, the pharmaceutical composition comprising oxeladin citrate as an active ingredient according to the present invention can be used as a medicine useful for the prevention or treatment of temozolomide-resistant brain cancer have.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 이때, 약제학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세 결정성셀룰로스, 폴리비닐피로리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필 히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention may contain, in addition to the active ingredient, a pharmaceutically acceptable carrier. Herein, pharmaceutically acceptable carriers are those conventionally used at the time of formulation, such as lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia rubber, calcium phosphate, alginate, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose But are not limited to, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, methylcellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. Further, in addition to the above components, a lubricant, a wetting agent, a sweetener, a flavoring agent, an emulsifying agent, a suspending agent, a preservative, and the like may be further included.

본 발명의 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may be administered orally or parenterally (for example, intravenously, subcutaneously, intraperitoneally or topically) depending on the intended method, and the dose may vary depending on the condition and the weight of the patient, The mode of administration, the route of administration, and the time, but may be appropriately selected by those skilled in the art.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. The pharmaceutical composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. In the present invention, the term "pharmaceutically effective amount" means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level will depend on the type of disease, severity, The sensitivity to the drug, the time of administration, the route of administration and the rate of release, the duration of the treatment, factors including co-administered drugs, and other factors well known in the medical arts.

본 발명의 또 다른 양태로서, 본 발명은 옥셀라딘시트레이트(Oxeladin citrate)를 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 테모졸로마이드(temozolomide) 내성 뇌암 예방 또는 치료 방법을 제공한다. As another embodiment of the present invention, the present invention provides a method for preventing or treating brain cancer resistant to temozolomide, comprising the step of administering to a subject a pharmaceutical composition comprising oxeladin citrate as an active ingredient .

본 발명에서 "개체"란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐 (mouse), 쥐 (rat), 개, 고양이, 말 및 소 등의 포유류를 의미한다.The term "individual" as used herein refers to a subject in need of treatment for a disease, and more specifically refers to a human or non-human primate, mouse, rat, dog, cat, It means mammals.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다. Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in order to facilitate understanding of the present invention. However, the following examples are provided only for the purpose of easier understanding of the present invention, and the present invention is not limited by the following examples.

[[ 실시예Example ]]

실시예Example 1. 실험 준비 및 방법 1. Preparation and method of experiment

1-1. 세포 배양 준비1-1. Cell culture preparation

인간 교모세포종(glioblastoma) 세포주 LN229는 10% fetal bovine serum, penicillin/streptomycin(Gibco BRL)이 포함된 DMEM 배지에 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다. Human glioblastoma cell line LN229 was cultured in DMEM medium containing 10% fetal bovine serum, penicillin / streptomycin (Gibco BRL) at 37 ° C and 5% CO 2 .

1-2. 1-2. STAT3STAT3 활성분석  Activity analysis

옥셀라딘시트레이트(Oxeladin citrate)에 의한 STAT3(signal transducer and activator of transcription 3) 활성 억제 효과를 알아보기 위하여, 이중루시퍼라제법(dual luciferase assay)을 사용하여 하기의 실험을 수행하였다. In order to investigate the inhibitory effect of oxeladin citrate on STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3), the following experiment was conducted using a dual luciferase assay.

뇌암 세포주(LN229)에 STAT3의 활성에 비례하여 반딧불 루시퍼라제(firefly luciferase)의 발현이 증가하는 플라스미드(STAT3 luciferase plasmid)와 STAT3의 활성에 비례하여 레닐라 루시퍼라제(Renilla luciferase)를 발현하는 플라스미드를 동시에 트랜스펙션(transfection)하였다. 상기 플라스미드들이 트랜스펙션(transfection)된 뇌암 세포주들을 16시간 배양하였고, 옥셀라딘시트레이트는 5 μmol/L로 두 시간동안 처리하였다. 두 시간이 지난 후, 반딧불 루시퍼라제와 레닐라 루시퍼라제에 lysis buffer로 수세하였고, 특이적인 별도의 기질(Beetle luciferin과 coelenterazine)을 순차적으로 첨가한 다음, 이를 측정하였다. 이때, 기질의 분해에 의한 발광 강도는 루미노미터(Luminometer)를 이용하여 측정하였다.A plasmid (STAT3 luciferase plasmid) that increases the expression of firefly luciferase in proportion to the activity of STAT3 in the brain cancer cell line (LN229) and a plasmid that expresses Renilla luciferase in proportion to the activity of STAT3 And transfected simultaneously. The brain cell lines transfected with the plasmids were cultured for 16 hours, and oxeladinate citrate was treated at 5 μmol / L for 2 hours. After two hours, the firefly luciferase and lenalla luciferase were washed with lysis buffer, and the specific substrate (Beetle luciferin and coelenterazine) was sequentially added and then measured. At this time, the luminescence intensity due to decomposition of the substrate was measured using a luminometer.

1-3. Sphere forming assay1-3. Sphere forming assay

옥셀라딘시트레이트의 처리에 따른 스피어(Sphere)의 형성을 분석하고자, Sphere forming assay를 수행하기 위하여, EGF(20ng/mL; BD science), bFGF(20ng/mL; Invitrogen), 및 N2 supplement(1X; Invitrogen)가 포함된 DMEM/F12(Invotrogen) 배지에 세포를 부유시킨 상태로 배양하였다. 배양 후 5 내지 7일이 지났을 때, 형성된 sphere를 회수하여 추가 실험을 위해 단백질을 추출하거나 Accutase(Invitrogen)으로 분리한 후, 이를 분석하였다. (20 ng / mL; BD science), bFGF (20 ng / mL; Invitrogen), and N2 supplement (20 ng / mL) to perform the sphere forming assay in order to analyze the formation of sphere according to the treatment of oxeladinate citrate 1X; Invitrogen) in DMEM / F12 (Invotrogen) medium. After 5 to 7 days of incubation, the sphere formed was recovered and proteins were extracted or assayed for Accutase (Invitrogen) for further experiments.

실시예Example 2.  2. 테모졸로마이드Temozolomide 내성 교모세포종 세포와 모체세포의  Resistant glioblastoma and maternal cell 테모졸로마이드에Temozolomide 대한 내성 비교 Comparison of immunity against

테모졸로마이드 내성 교모세포종 세포(LN229-TMZR)와 모체 세포(LN229)의 테모졸로마이드에 대한 내성을 비교하기 위하여, 상기 실시예 1-1의 방법으로 배양한 LN229 세포를 준비하고, 테모졸로마이드의 억제중간값(median inhibitory concentration; IC50)을 측정하였다.To compare the resistance of temozolomide resistant glioblastoma cells (LN229-TMZR) and maternal cells (LN229) to temozolomide, LN229 cells cultured by the method of Example 1-1 were prepared, and temozolomide The median inhibitory concentration (IC50) was measured.

그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, LN229-TMZR 세포의 IC50는 300μmol/L 이상이었던 반면, 대조군인 LN229 세포의 IC50는 10μmol/L로 상대적으로 낮았다. 이는 테모졸로마이드 내성 교모세포종 세포가 모체세포와 비교하여 테모졸로마이드에 강한 내성을 갖고 있음을 의미한다. As a result, as shown in FIG. 1, the IC50 of LN229-TMZR cells was higher than 300 μmol / L, whereas the IC50 of the control LN229 cells was relatively low, 10 μmol / L. This means that the temozolomide resistant glioblastoma cells are more resistant to temozolomide compared to the maternal cells.

실시예Example 3.  3. 테모졸로마이드Temozolomide 내성 교모세포종 세포에 미치는  On resistant glioblastoma cells 옥셀라딘시트레이트의Oxceladine citrate 효과 확인 Check the effect

테모졸로마이드 내성 교모세포종 세포(LN229-TMZR)에서 옥셀라딘시트레이트(Oxeladin citrate)가 STAT3의 활성 및 스피어(sphere)의 형성에 미치는 효과를 확인하기 위하여, 상기 실시예 1-2 및 1-3의 방법에 따라, LN229-TMZR 세포주에 Oxeladin citrate를 처리한 다음, tumor sphere forming assay를 수행하였다. To confirm the effect of oxeladin citrate on the activity of STAT3 and the formation of sphere in the temozolomide resistant glioblastoma cell line (LN229-TMZR), the cells of Examples 1-2 and 1- 3, LN229-TMZR cell line was treated with Oxeladin citrate and then tumor sphere forming assay was performed.

그 결과, 도 2 및 도 3에 나타낸 바와 같이, Oxeladin citrate을 처리하였을 때, LN229-TMZR 세포에서의 STAT3활성은 감소하였으나, LN229 세포의 STAT3 활성은 이에 영향을 받지 않았고(도 2 참조), LN229-TMZR 세포에서 sphere 형성은 현저히 감소한 반면, LN229 세포는 sphere 형성에 영향을 받지 않았다(도 3 참조). As a result, as shown in FIG. 2 and FIG. 3, STAT3 activity in LN229-TMZR cells decreased when Oxeladin citrate was treated, but STAT3 activity of LN229 cells was not affected (see FIG. 2) Sphere formation was significantly reduced in TMZR cells, whereas LN229 cells were not affected by sphere formation (see FIG. 3).

상기로부터, Oxeladin citrate이 테모졸로마이드 내성 교모세포종 세포의 STAT3 활성을 억제하며, 스피어 형성을 감소시켜, 교모세포종의 종양형성 능력을 무력화시키고, 교모세포종의 전이능력도 감소시킨다는 사실을 알 수 있다.From the above, it can be seen that Oxeladin citrate inhibits the STAT3 activity of the temozolomide resistant glioblastoma cells, reduces spear formation, inactivates the tumorigenic ability of glioblastoma, and reduces the metastatic ability of glioblastoma.

아울러, 도 4에 나타낸 바와 같이, Oxeladin citrate의 억제중간값(median inhibitory concentration; IC50)을 측정한 결과, 대조군인 모체 세포(LN229)의 IC50은 100μmol/L이상으로 높은 반면, LN229-TMZR 세포의 경우는 0.496μmol/L으로 상대적으로 낮은 값을 보였는바, 이는 낮은 Oxeladin citrate농도에서도 효과적으로 교모세포종의 증식이 억제되는 것을 의미한다. As shown in FIG. 4, the median inhibitory concentration (IC50) of oxeladin citrate was measured. The IC50 of the control cell (LN229) was higher than 100 .mu.mol / L, while that of LN229-TMZR cells , And 0.496 μmol / L, respectively, which means that the proliferation of glioblastoma is effectively suppressed even at a low concentration of oxeladin citrate.

상기 진술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. It will be apparent to those skilled in the art that various modifications and variations can be made in the present invention without departing from the spirit or scope of the invention. There will be. It is therefore to be understood that the above-described embodiments are illustrative in all aspects and not restrictive.

Claims (5)

옥셀라딘시트레이트(Oxeladin citrate)를 유효성분으로 포함하는, 테모졸로마이드(temozolomide) 내성 뇌암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
A pharmaceutical composition for preventing or treating brain cancer resistant to temozolomide, comprising oxeladin citrate as an active ingredient.
제1항에 있어서,
상기 뇌암은 교모세포종인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the brain cancer is a glioblastoma.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 STAT3(signal transducer and activator of transcription 3)의 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein said composition inhibits the activity of STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3).
제1항에 있어서,
상기 조성물은 교모세포종의 종양형성 또는 전이능력을 억제하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein said composition inhibits tumorigenic or metastatic ability of a glioblastoma.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 약리학적으로 허용 가능한 담체(carrier) 또는 보조제(additive)를 더 함유하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.The method according to claim 1,
Wherein said composition further comprises a pharmacologically acceptable carrier or adjuvant.
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