KR101885464B1 - Method for manufacturing cell culture case, and the cell culture case manufactured by the method - Google Patents

Method for manufacturing cell culture case, and the cell culture case manufactured by the method Download PDF

Info

Publication number
KR101885464B1
KR101885464B1 KR1020170027427A KR20170027427A KR101885464B1 KR 101885464 B1 KR101885464 B1 KR 101885464B1 KR 1020170027427 A KR1020170027427 A KR 1020170027427A KR 20170027427 A KR20170027427 A KR 20170027427A KR 101885464 B1 KR101885464 B1 KR 101885464B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cell culture
casting
pdms
culture case
flask
Prior art date
Application number
KR1020170027427A
Other languages
Korean (ko)
Inventor
이동경
김건호
Original Assignee
공주대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 공주대학교 산학협력단 filed Critical 공주대학교 산학협력단
Priority to KR1020170027427A priority Critical patent/KR101885464B1/en
Application granted granted Critical
Publication of KR101885464B1 publication Critical patent/KR101885464B1/en

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/20—Material Coatings
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B29—WORKING OF PLASTICS; WORKING OF SUBSTANCES IN A PLASTIC STATE IN GENERAL
    • B29C—SHAPING OR JOINING OF PLASTICS; SHAPING OF MATERIAL IN A PLASTIC STATE, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; AFTER-TREATMENT OF THE SHAPED PRODUCTS, e.g. REPAIRING
    • B29C33/00—Moulds or cores; Details thereof or accessories therefor
    • B29C33/38—Moulds or cores; Details thereof or accessories therefor characterised by the material or the manufacturing process
    • B29C33/3842—Manufacturing moulds, e.g. shaping the mould surface by machining
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B29—WORKING OF PLASTICS; WORKING OF SUBSTANCES IN A PLASTIC STATE IN GENERAL
    • B29C—SHAPING OR JOINING OF PLASTICS; SHAPING OF MATERIAL IN A PLASTIC STATE, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; AFTER-TREATMENT OF THE SHAPED PRODUCTS, e.g. REPAIRING
    • B29C33/00—Moulds or cores; Details thereof or accessories therefor
    • B29C33/42—Moulds or cores; Details thereof or accessories therefor characterised by the shape of the moulding surface, e.g. ribs or grooves
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B29—WORKING OF PLASTICS; WORKING OF SUBSTANCES IN A PLASTIC STATE IN GENERAL
    • B29C—SHAPING OR JOINING OF PLASTICS; SHAPING OF MATERIAL IN A PLASTIC STATE, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; AFTER-TREATMENT OF THE SHAPED PRODUCTS, e.g. REPAIRING
    • B29C41/00—Shaping by coating a mould, core or other substrate, i.e. by depositing material and stripping-off the shaped article; Apparatus therefor
    • B29C41/34—Component parts, details or accessories; Auxiliary operations
    • B29C41/38—Moulds, cores or other substrates
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B29—WORKING OF PLASTICS; WORKING OF SUBSTANCES IN A PLASTIC STATE IN GENERAL
    • B29C—SHAPING OR JOINING OF PLASTICS; SHAPING OF MATERIAL IN A PLASTIC STATE, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; AFTER-TREATMENT OF THE SHAPED PRODUCTS, e.g. REPAIRING
    • B29C41/00—Shaping by coating a mould, core or other substrate, i.e. by depositing material and stripping-off the shaped article; Apparatus therefor
    • B29C41/34—Component parts, details or accessories; Auxiliary operations
    • B29C41/42—Removing articles from moulds, cores or other substrates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0068—General culture methods using substrates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2539/00—Supports and/or coatings for cell culture characterised by properties

Abstract

The present invention relates to a method for manufacturing a case for cell culture, and more specifically, to a method for manufacturing a cell culture case which includes a process of manufacturing a frame to manufacture a cell culture case of a PDMS material, then cast and form PDMS in the frame to manufacture a first cast, and use the first cast as a frame to cast and form PDMS again to manufacture a second cast, and a cell culture case manufactured by the same. The present invention relates to a method for manufacturing a cell culture case and a cell culture case manufactured by the same which allow a cross section of a concave groove of a finally manufactured cell culture case to have a curved U-shape instead of an angulated V-shape to easily detach cells to be cultured afterwards. The present invention relates to a method for manufacturing a cell culture case and a cell culture case manufactured by the same which perform prescribed coating on a surface of a first cast when using the first cast as a frame to cast and form PDMS again to manufacture a second cast to easily separate the first cast and the manufactured second cast.

Description

세포배양 케이스를 제조하는 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 세포배양 케이스{METHOD FOR MANUFACTURING CELL CULTURE CASE, AND THE CELL CULTURE CASE MANUFACTURED BY THE METHOD}TECHNICAL FIELD [0001] The present invention relates to a method of manufacturing a cell culture case, and a cell culture case manufactured by the method. BACKGROUND ART [0002]

본 발명은 세포배양을 위한 케이스를 제조하는 방법에 관한 것으로서, 더욱 구체적으로는 PDMS 재질의 세포배양 케이스를 제조하기 위하여 틀을 선 제작한 뒤, 상기 틀에 PDMS를 주물 성형시켜 1차 주물을 제조하고, 상기 1차 주물을 틀로 하여 PDMS를 다시 주물 성형시켜 2차 주물을 제조하는 과정으로 이루어지는, 세포배양 케이스의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 세포배양 케이스에 관한 것이다.The present invention relates to a method for manufacturing a case for cell culture, more specifically, to a method for manufacturing a cell culture case made of PDMS, And then casting the PDMS again using the primary casting mold to produce a secondary casting. The present invention also relates to a cell culture case made by the above method.

이때, 본 발명은 최종 제조된 세포배양 케이스의 오목한 홈 구성의 단면이 각진 '

Figure 112017021429404-pat00001
'의 형상이 아니라, 만곡된 '
Figure 112017021429404-pat00002
'의 형상이 되도록 하여, 추후 배양될 세포의 탈착이 용이하도록 하는, 세포배양 케이스의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 세포배양 케이스에 관한 것이다.At this time, according to the present invention, the cross-section of the concave groove structure of the finally prepared cell culture case is angled '
Figure 112017021429404-pat00001
'Not the shape of the curved'
Figure 112017021429404-pat00002
To facilitate the subsequent desorption of cells to be cultured, and to a cell culture case made by the above method.

또한, 본 발명은 1차 주물을 틀로 하여 PDMS를 다시 주물 성형시켜 2차 주물을 제조할 때, 1차 주물의 표면에 소정의 코팅을 수행함으로써, 상기 1차 주물과 제조된 2차 주물의 분리가 용이하도록 하는, 세포배양 케이스의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 세포배양 케이스에 관한 것이다.The present invention also relates to a method for producing a secondary casting by performing casting of PDMS using a primary casting mold to perform a predetermined coating on the surface of the primary casting to separate the primary casting and the manufactured secondary casting And to a cell culture case made by the above method.

생화학 실험, 임상실험, 약제의 개발연구의 분야에서, 여러 세포배양 용기가 사용되고 있다. 예를 들면, 슬라이드 글래스나 커버 글래스, 플라스틱성의 평판 상에, 세포 접착 억제층을 형성 또는 세포 접착 억제층을 패턴 형상으로 형성하는 시도가 많이 이루어지고 있다.In the field of biochemical experiments, clinical experiments, and drug development studies, several cell culture vessels have been used. For example, attempts have been made to form a cell adhesion inhibiting layer or to form a cell adhesion inhibiting layer in a pattern on a slide glass, a cover glass, or a plastic plate.

여기에서, 평판 형상의 기판 상에, 세포 접착 억제층으로서 수용성 고분자를 주체로 한 광감광성 조성물의 패턴 형상의 광경화물을 형성한 세포배양 용기가 제안되어 있다(일본 공개특허 제2005-280076호, 청구항 9, 단락번호 [0093] 및 [0094] 참조).Here, there is proposed a cell culture container in which a photosynthetic substance in the form of a pattern of a photosensitized composition mainly composed of a water-soluble polymer as a cell adhesion-inhibiting layer is formed on a plate-shaped substrate (JP-A No. 2005-280076, Claim 9, paragraphs [0093] and [0094]).

상기 일본 공개특허 제2005-280076호에 의하면, 기판에 감광성 조성물을 스핀코트로 도포하는 등, 평판 기판을 사용함으로써 생산성이 높고 정밀도가 높은 패턴을 용이하게 얻을 수 있다.According to Japanese Patent Application Laid-Open No. 2005-280076, a pattern having high productivity and high precision can be easily obtained by using a flat substrate such as a photosensitive composition coated on a substrate by spin coating.

이러한 세포배양 용기는, 세포의 배양을 용이하게 하고, 세포가 용기 표면에 달라붙지 않아 분리가 용이해야 한다.Such a cell culture container should facilitate the cultivation of the cells, and the cells should not easily stick to the surface of the container to facilitate separation.

즉, 이러한 세포의 배양과 분리의 용이성은 세포배양 용기의 재질과 구조적 특징으로 해결될 수 있는 문제이다.That is, the ease of culturing and separating these cells is a problem that can be solved by the material and structural characteristics of the cell culture container.

본 출원인은, 상기 문제를 극복할 수 있는 방안으로 PDMS 재질을 갖는 세포 배양 용기를 제안하고자 한다. PDMS의 재질을 갖는 세포배양 용기로서, 등록특허공보 제10-0659286호의 식물 세포 배양 챔버용 커버가 기재되어 있고, 해당 기술은 "커버의 재질을 폴리디메틸실록산(PDMS)으로 하고, 이의 두께를 일정 범위로 제한함으로써 적절한 기제 투과율을 제공할 수 있도록 한다"고 기재하고 있다.The present applicant intends to propose a cell culture container having a PDMS material as a means for overcoming the above problem. As a cell culture container having a PDMS material, a cover for a plant cell culture chamber of Patent Publication No. 10-0659286 is described, and the related art is described as "the material of the cover is polydimethylsiloxane (PDMS) Quot ;, so that it is possible to provide appropriate gas permeability. "

즉, 상기 기술은, 용기 자체가 PDMS는 아니나 PDMS를 재질로 채용하고 있으며, 이러한 PDMS를 채용함에 따른 효과가 유사하다고 볼 수 있으나, 구조적으로 전혀 상이하다. 이때 구조적으로 상이하다는 것은, 제조과정에 따른 시계열적인 흐름이 전혀 상이하기 때문에, 이로 인해 제조된 구조물이 상이하게 되는 것이다.That is, the above technology employs PDMS as a material although the container itself is not PDMS, and the effect of adopting such PDMS is similar, but the structure is completely different. In this case, the fact that the structures are different from each other means that the time-series flow according to the manufacturing process is totally different, so that the manufactured structures are different.

한편, 공개특허공보 제10-2008-0109086호에는 세포배양 용기의 제조 방법이 기재되어 있다.On the other hand, Japanese Patent Application Laid-Open No. 10-2008-0109086 discloses a method for producing a cell culture container.

위 기재된 기술은, '생화학 실험·임상실험·약제의 개발연구 등에 적합하게 사용할 수 있는 세포배양 용기를 제공한다. 세포를 배양하는 영역인 오목형상 구획(웰)을 복수개 구비한 세포배양 용기 본체(1)의 이 웰의 바닥면에, 친수성 감광성 조성물을 도포하여 도막(3)을 형성한 후, 상기 도막(3)을 패턴 노광 및 현상하고 미경화 영역을 제거함으로써, 상기 웰의 바닥면이 패턴 형상의 광경화물로 이루어지는 친수성 피막이 설치된 세포배양 용기를 얻는다'고 기재하고 있는데, 상기 기술은 첨부된 도면을 참조하면, 세포를 배양하는 영역인 오목형상 구획(웰)의 형상이 각진 다각의 형상으로 구성되어, 추후 세포를 분리시키기 어렵다고 할 수 있다.The above-described technology provides a cell culture container which can be suitably used for 'biochemical experiment, clinical experiment, drug development study and the like. A hydrophilic photosensitive composition is applied to the bottom surface of a well of a cell culture container main body 1 having a plurality of concave compartments (wells) as a region where cells are to be cultured to form a coating film 3, ) Is pattern-exposed and developed and the uncured region is removed, thereby obtaining a cell culture container provided with a hydrophilic film having a patterned photo-cured bottom surface of the well. , The shape of the concave compartments (wells) for culturing the cells is formed into an angular polygonal shape, and it can be said that it is difficult to separate cells later.

반면, 본 출원인의 제안에 따르면, 웰의 형상이 만곡되어 각이 없고, 또한 PDMS로 이루어짐으로써, 세포의 분리가 매우 유리할 수 있다.On the other hand, according to the proposal of the present applicant, since the shape of the well is curved and has no angle and is made of PDMS, cell separation can be very advantageous.

등록특허공보 제10-0659286호(2006.12.19. 공고)Patent Registration No. 10-0659286 (published on Dec. 19, 2006) 공개특허공보 제10-2008-0109086호(2008.12.16.)Published Patent Publication No. 10-2008-0109086 (Dec. 16, 2008)

본 발명 목적은, 세포배양을 위한 케이스를 제조하는 방법과 상기 방법으로 제조된 세포배양 케이스를 제공하는 데 있다.It is an object of the present invention to provide a method for producing a case for cell culture and a cell culture case manufactured by the method.

상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다른 목적은, PDMS 재질의 세포배양 케이스를 제조하기 위하여 틀을 선 제작한 뒤, 상기 틀에 PDMS를 주물 성형시켜 1차 주물을 제조하고, 상기 1차 주물을 틀로 하여 PDMS를 다시 주물 성형시켜 2차 주물을 제조하는 과정으로 이루어지는, 세포배양 케이스의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 세포배양 케이스를 제공하는 데 있다.Another object of the present invention to accomplish the above object is to provide a method of manufacturing a cell culture case of a PDMS material, comprising the steps of prefabricating a frame to manufacture a cell culture case of PDMS material, casting PDMS on the frame to manufacture a primary casting, And then casting the PDMS again to prepare a secondary casting. The present invention also provides a method of manufacturing a cell culture case and a cell culture case manufactured by the method.

본 발명의 또 다른 목적은, 최종 제조된 세포배양 케이스의 오목한 홈 구성의 단면이 각진 '

Figure 112017021429404-pat00003
'의 형상이 아니라, 만곡된 '
Figure 112017021429404-pat00004
'의 형상이 되도록 하여, 추후 배양될 세포의 탈착이 용이하도록 하는, 세포배양 케이스의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 세포배양 케이스를 제공하는 데 있다.It is still another object of the present invention to provide a method for manufacturing a cell culture container,
Figure 112017021429404-pat00003
'Not the shape of the curved'
Figure 112017021429404-pat00004
To facilitate the subsequent desorption of cells to be cultured, and a cell culture case manufactured by the above method.

본 발명의 또 다른 목적은, 1차 주물을 틀로 하여 PDMS를 다시 주물 성형시켜 2차 주물을 제조할 때, 1차 주물의 표면에 소정의 코팅을 수행함으로써, 상기 1차 주물과 제조된 2차 주물의 분리가 용이하도록 하는, 세포배양 케이스의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 세포배양 케이스를 제공하는 데 있다.It is still another object of the present invention to provide a method for manufacturing a secondary casting by performing a predetermined coating on a surface of a primary casting to produce a secondary casting by further casting the PDMS using the primary casting as a frame, The present invention provides a method of manufacturing a cell culture case and a cell culture case manufactured by the method.

상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명에 따른 세포배양 케이스의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 세포배양 케이스는 다음의 시계열적인 과정으로 이루어지는 것을 특징으로 한다. In order to accomplish the above object, a method of manufacturing a cell culture case according to the present invention and a cell culture case manufactured by the method are characterized by the following time series process.

(a) 만곡된 오목한 홈 구성을 다수 개 갖도록 주형틀을 제작하는 단계;(a) fabricating a flask having a plurality of curved concave groove structures;

(b) 상기 (a)단계에서 제작된 주형틀을, 외부틀을 준비하여 상기 외부틀에 안착시켜 고정하는 단계;(b) preparing a flask prepared in the step (a) by placing the outer flask on the outer frame and fixing the flask;

(c) 상기 (b)단계 후, 주형틀 상부에 PDMS를 충진시켜 주물 성형함으로써 1차 주물을 제조하는 단계;(c) after the step (b), filling the upper part of the flask with PDMS to form a primary casting;

(d) 상기 (c)단계에서 제조된 1차 주물을 외부틀에 고정하는 단계;(d) fixing the primary cast produced in the step (c) to an outer frame;

(e) 상기 (d)단계에서 고정된 1차 주물의 상면에 PDMS 외의 다른 재질을 적층시켜 코팅하는 단계;(e) stacking and coating a material other than PDMS on the upper surface of the primary casting fixed in the step (d);

(f) 상기 (e)단계에서 코팅된 코팅층 상부에 PDMS를 충진시켜 주물 성형함으로써 2차 주물을 제조하는 단계; 및(f) fabricating a secondary casting by filling PDMS on the coating layer coated in step (e) and casting it; And

(g) 상기 (f)단계에서 제조된 2차 주물을 상기 1차 주물 및 코팅층으로부터 분리하는 단계;(g) separating the secondary casting produced in the step (f) from the primary casting and the coating layer;

이때, 상기 1차 주물은 상기 주형틀의 홈 구성에 대응되도록 돌출된 다수의 돌기를 포함하는 것을 특징으로 한다.In this case, the primary casting includes a plurality of projections projected to correspond to the groove structure of the flask.

또한, 상기 2차 주물은 상기 주형틀과 동일한 형상을 갖는 것을 특징으로 한다.Further, the secondary casting has the same shape as the flask.

또한, 상기 (g)단계는 상기 코팅층이 PDMS 외의 다른 재질로 구성됨으로써, PDMS로 이루어진 1차 주물과 2차 주물이 쉽게 분리될 수 있도록 하는 것을 특징으로 한다.In the step (g), the coating layer is made of a material other than PDMS, so that the primary casting and the secondary casting made of PDMS can be easily separated.

또한, 상기 (g)단계를 통해 분리된 2차 주물의 홈 구성의 표면에 세포가 흡착되지 않는 코팅 조성물로 코팅하는 단계를 더 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 한다.Further, the method further comprises a step of coating the surface of the groove structure of the secondary casting separated through the step (g) with a coating composition that does not adsorb cells.

본 발명에 따른 세포배양 케이스의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 세포배양 케이스에 의하면, PDMS 재질의 세포배양 케이스를 제조하는데 있어서, 제조 중 조성물 간에 달라붙어 일체화되는 것을 방지할 수 있고,According to the method of manufacturing a cell culture case according to the present invention and the cell culture case manufactured by the method, it is possible to prevent the PDMS cell culture case from sticking together and integrating during the production,

아울러, 홈 구성의 구조를 만곡지게 함으로써 세포의 분리를 용이하게 하는 한편, 상기 홈 구성에 소정의 조성물로 코팅을 수행함으로써, 세포의 분리를 더욱 쉽게할 수 있는 이점이 있다.In addition, there is an advantage that cells can be easily separated by curving the structure of the groove structure while coating with the predetermined composition is performed on the groove structure.

도 1a 및 도 1b는 본 발명에 따른 세포배양 케이스의 제조방법을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명에 따른 세포배양 케이스의 제조방법으로 제조된 세포배양 케이스의 최적의 배합비를 산출하기 위한 흡착실험 결과를 나타낸 것이다.1A and 1B show a method of manufacturing a cell culture case according to the present invention.
FIG. 2 is a graph showing the results of adsorption experiments for calculating the optimum blending ratio of the cell culture case prepared by the method for producing a cell culture case according to the present invention.

본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 안되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.The terms and words used in the present specification and claims should not be construed as limited to ordinary or dictionary meanings and the inventor can properly define the concept of the term to describe its invention in the best possible way And should be construed in accordance with the principles and meanings and concepts consistent with the technical idea of the present invention.

따라서 본 명세서에 기재된 실시 예와 도면에 도시된 구성은 본 발명의 가장 바람직한 실시 예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형 예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.Therefore, the embodiments described in the present specification and the configurations shown in the drawings are merely the most preferred embodiments of the present invention and are not intended to represent all of the technical ideas of the present invention. Therefore, various equivalents And variations are possible.

이하, 도면을 참조하여 설명하기에 앞서, 본 발명의 요지를 드러내기 위해서 필요하지 않은 사항 즉 통상의 지식을 가진 당업자가 자명하게 부가할 수 있는 공지 구성에 대해서는 도시하지 않거나, 구체적으로 기술하지 않았음을 밝혀둔다.Before describing the present invention with reference to the accompanying drawings, it should be noted that the present invention is not described or specifically described with respect to a known configuration that can be easily added by a person skilled in the art, Let the sound be revealed.

본 발명은 세포배양을 위한 케이스를 제조하는 방법에 관한 것으로서, 더욱 구체적으로는 PDMS 재질의 세포배양 케이스를 제조하기 위하여 틀을 선 제작한 뒤, 상기 틀에 PDMS를 주물 성형시켜 1차 주물을 제조하고, 상기 1차 주물을 틀로 하여 PDMS를 다시 주물 성형시켜 2차 주물을 제조하는 과정으로 이루어지는, 세포배양 케이스의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 세포배양 케이스에 관한 것이다.The present invention relates to a method for manufacturing a case for cell culture, more specifically, to a method for manufacturing a cell culture case made of PDMS, And then casting the PDMS again using the primary casting mold to produce a secondary casting. The present invention also relates to a cell culture case made by the above method.

이때, 본 발명은 최종 제조된 세포배양 케이스의 오목한 홈 구성의 단면이 각진 '

Figure 112017021429404-pat00005
'의 형상이 아니라, 만곡된 '
Figure 112017021429404-pat00006
'의 형상이 되도록 하여, 추후 배양될 세포의 탈착이 용이하도록 하는, 세포배양 케이스의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 세포배양 케이스에 관한 것이다.At this time, according to the present invention, the cross-section of the concave groove structure of the finally prepared cell culture case is angled '
Figure 112017021429404-pat00005
'Not the shape of the curved'
Figure 112017021429404-pat00006
To facilitate the subsequent desorption of cells to be cultured, and to a cell culture case made by the above method.

또한, 본 발명은 1차 주물을 틀로 하여 PDMS를 다시 주물 성형시켜 2차 주물을 제조할 때, 1차 주물의 표면에 소정의 코팅을 수행함으로써, 상기 1차 주물과 제조된 2차 주물의 분리가 용이하도록 하는, 세포배양 케이스의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 세포배양 케이스에 관한 것이다.The present invention also relates to a method for producing a secondary casting by performing casting of PDMS using a primary casting mold to perform a predetermined coating on the surface of the primary casting to separate the primary casting and the manufactured secondary casting And to a cell culture case made by the above method.

상술된 본 발명을 첨부된 도면을 통해 아래에서 구체적으로 설명한다.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS The above invention will be described in detail below with reference to the accompanying drawings.

도 1a 및 도 1b는 본 발명에 따른 세포배양 케이스의 제조방법을 나타낸 것이다.1A and 1B show a method of manufacturing a cell culture case according to the present invention.

이러한 첨부된 도면의 도 1a 및 도 1b를 참조하면, 본 발명에 따른 세포배양 케이스의 제조방법은, 주요하게 주형틀을 제작하는 단계; 외부틀에 주형틀을 고정하는 단계; 1차 주물을 제조하는 단계; 외부틀에 1차 주물을 고정하는 단계; 1차 주물의 표면을 코팅하는 단계; 2차 주물을 제조하는 단계; 및 1차 주물로부터 2차 주물을 분리하는 단계;로 이루어진다.Referring to FIGS. 1A and 1B of the accompanying drawings, a method of manufacturing a cell culture case according to the present invention includes: a step of fabricating a flask; Fixing the flask to an outer frame; Producing a primary casting; Fixing the primary casting to an outer frame; Coating the surface of the primary casting; Preparing a secondary casting; And separating the secondary casting from the primary casting.

가. end. 주형틀을Mold 제작하는 단계 Steps to Produce

주형틀을 제작하는 단계는, 첨부된 도면의 도 1a 및 도 1b와 같이 소정의 형태로 구성되되 일측에 오목하게 형성된 홈 구성이 다수 형성되도록 구성되는 주형틀을 제작하는 단계이다.The step of fabricating the flask is a step of fabricating a flask which is formed in a predetermined shape as shown in Figs. 1A and 1B of the accompanying drawings, and has a plurality of grooves formed concavely at one side thereof.

이러한 주형틀은, 스틸 또는 실리콘 등의 재질로 이루어지며, 최초 소정의 형태에서 레이저 또는 절삭기계(CNC)를 이용하여 다수의 홈 구성을 갖도록 가공하여 제조한다.Such a flask is made of a material such as steel or silicon, and is manufactured by processing a plurality of groove structures using a laser or a cutting machine (CNC) in the first predetermined form.

나. I. 외부틀에In the outer frame 주형틀을Mold 고정하는 단계 Fixing step

외부틀에 주형틀을 고정하는 단계는, 주형틀을 제작하는 단계를 통해 제작된 주형틀을 외부틀에 안착시켜 고정하는 단계이다.The step of fixing the flask to the outer frame is a step of placing and fixing the flask manufactured through the step of manufacturing the flask to the outer frame.

이러한 외부틀의 형상은, 주형틀이 안착될 수 있도록 상기 주형틀의 형태에 대응되는 형태로 구성되는데, 즉 외부틀은 주형틀을 고정하면서, 주형틀의 상부에 주물 재료(PDMS)가 충진될 수 있는 높이로 구성되면 충분하다.The outer frame has a shape corresponding to the shape of the flask so that the flask can be seated. That is, while the outer frame is fixed, the upper part of the flask is filled with the casting material (PDMS) It is enough if it is made up to the height that can be.

다. 1차 주물을 제조하는 단계All. The step of manufacturing the primary casting

1차 주물을 제조하는 단계는, 외부틀에 주형틀을 고정하는 단계 후, 외부틀에 고정된 주형틀의 상부에 PDMS를 충진하여 주물 성형함으로써, 1차 주물을 제조하는 단계이다.The step of manufacturing the primary casting is a step of manufacturing the primary casting by fixing the flask to the outer frame, filling the upper part of the flask fixed to the outer frame with the PDMS, and casting it.

따라서, 1차 주물은 주형틀에 존재하는 다수의 홈 구성에 의해 소정의 형상의 표면에 다수의 돌기 구성이 구성될 수 있다.Therefore, the primary casting can be constituted of a plurality of projections on the surface of a predetermined shape by a plurality of groove structures existing in the flask.

그리고 상기에서 지속적으로 사용되는 소정의 형상이라 함은, 첨부된 도면으로부터 사각기둥의 형태를 예측할 수 있는데, 본 명세서에서 사각기둥의 형태로 한정하지 않는 것은 주형틀 및 외부틀의 형태에 따라 상기 소정의 형태는 원기둥, 원뿔, 다각기둥, 다각뿔 등 다양하게 될 수 있기 때문이다.The predetermined shape continuously used in the above description can predict the shape of the quadrangular prism from the accompanying drawings. In this specification, the shape of the quadrangular prism is not limited to the rectangular prism, The shape of the cylinder can be various, such as a cylinder, a cone, a polygonal column, and a polygonal pyramid.

또한, 본 발명에서 사용되는 PDMS는, 'Polydimethylsiloxane'의 약어로 고분자 탄성 중합체로 의미한다.In addition, PDMS used in the present invention is abbreviation of 'Polydimethylsiloxane' and is referred to as a polymeric elastomer.

이러한 PDMS는 다음의 [표 1]과 같은 구조식을 갖으며, 162.38의 분자량과 0.76g/ml의 밀도를 갇고, 녹는점이 -40~-50℃이며, 끓는점이 205℃를 갖는다.Such PDMS has the following structural formula as shown in Table 1, and has a molecular weight of 162.38 and a density of 0.76 g / ml. The PDMS has a melting point of -40 to -50 ° C and a boiling point of 205 ° C.

Figure 112017021429404-pat00007
Figure 112017021429404-pat00007

또한, PDMS는 투명하고 다양한 액체와 증기에 대한 침투성이 있으며, 표면에너지가 낮고, 비활성, 윤활성, 소수성 및 이형성의 특성을 갖는다.In addition, PDMS is transparent, permeable to a variety of liquids and vapors, low in surface energy, inert, lubricating, hydrophobic and releasable.

이러한 특성에 의해 PDMS는 상대적으로 넓은 영역에 안정적으로 점착할 수 있고, 이에 따라 평탄하지 않은 표면에 대해서 안정적인 점착이 가능함을 의미한다.By such a property, PDMS can stably adhere to a relatively wide area, which means that stable adhesion to a non-planar surface is possible.

또한, interfacial free energy가 낮기 때문에 다른 폴리머를 몰딩할 때 접착이 잘 일어나지 않는다.In addition, because of the low interfacial free energy, bonding does not occur when molding other polymers .

또한, 광학적으로 300nm의 두께까지 투명하여, 이를 세포배양 케이스에 적용하는 경우, 세포배양 중 배양이나 광학특성에 관련된 측정에 장점이 있을 수 있다.In addition, when optically transparent to a thickness of 300 nm and applied to a cell culture case, there may be advantages in measurement related to culture or optical properties during cell culture.

라. la. 외부틀에In the outer frame 1차 주물을 고정하는 단계 The step of fixing the primary casting

외부틀에 1차 주물을 고정하는 단계는, 1차 주물을 제조하는 단계를 통해 제조된 1차 주물을, 외부틀에 고정하는 단계이다.The step of fixing the primary casting to the outer frame is a step of fixing the primary casting manufactured through the step of manufacturing the primary casting to the outer frame.

이때 외부틀은, 주형틀이 고정되어 있던 것에서 주형틀을 제거하고 외부틀을 고정할 수도 있고, 새로운 외부틀을 준비하여 1차 주물을 고정할 수도 있다.At this time, the outer frame may be fixed to the outer frame by removing the flask from the fixed frame, or a new outer frame may be prepared to fix the primary casting.

마. 1차 주물의 표면을 코팅하는 단계hemp. Coating the surface of the primary casting

1차 주물의 표면을 코팅하는 단계는, 외부틀에서 1차 주물을 고정하는 단계를 통해 고정된 1차 주물의 표면(상면)에 PDMS 외의 다른 재질을 코팅하는 단계이다.The step of coating the surface of the primary casting is a step of coating a material other than PDMS on the surface (upper surface) of the primary casting fixed through the step of fixing the primary casting in the outer casting mold.

이때 코팅은, 소정의 필름을 적층하는 방법으로 수행됨이 바람직하다.At this time, it is preferable that the coating is performed by a method of laminating a predetermined film.

그리고 상기 다른 재질이라 함은, PDMS 외의 다른 모든 재질일 수 있으나, 제조비용의 절감과 용이한 탈착을 목적으로 주형틀과 동일하게 스틸 또는 실리콘 등의 재질인 것이 바람직할 수도 있다.The other material may be any material other than the PDMS, but it may be preferable to use steel or silicon as the material of the flask for the purpose of reducing the manufacturing cost and easy desorption.

바. 2차 주물을 제조하는 단계bar. The step of manufacturing the secondary casting

2차 주물을 제조하는 단계는, 상기 1차 주물의 표면을 코팅하는 단계에서 d표면이 코팅된 1차 주물의 상부(코팅층 상부)에 PDMS를 충진시켜 주물 성형함으로써 2차 주물을 제조하는 단계이다.In the step of coating the surface of the primary casting, the step of preparing the secondary casting is a step of preparing a secondary casting by filling the upper part of the primary casting coated with the d-surface (upper part of the coating layer) with casting molding .

이때, '마. 1차 주물의 표면을 코팅하는 단계'의 필요성을 더 부가하자면, 2차 주물 제조에서도 충진되는 것이 PDMS이기 때문에 본 단계 시점에서는 1차 주물이 고체 형태의 PDMS이고, 2차 주물이 액체 형태의 PDMS로 동일하기 때문에, 2차 주물의 액체 형태가 굳어짐에 따라 고체형태가 되고, 만약 소정의 코팅이 이루어지지 않는다면, 2차 주물의 PDMS가 고체화되면서 1차 주물과 합쳐지게 되어 분리가 불가능하게 되기 때문이다.At this time, In addition to the necessity of coating the surface of the primary casting, since the PDMS is filled in the production of the secondary casting, the primary casting is the solid form PDMS at this stage, and the secondary casting is the PDMS The PDMS of the secondary casting is solidified and merged with the primary casting, so that it becomes impossible to separate the PDMS because the PDMS of the secondary casting becomes solidified if the predetermined coating is not performed to be.

이와 같이 제조된 2차 주물은, 결과적으로 주형틀과 동일한 형태를 갖는데, 즉 소정의 형태 표면에 오목한 홈 구성이 다수 형성된 형태가 된다.As a result, the secondary casting thus produced has the same shape as that of the flask, that is, a shape in which a plurality of concave groove structures are formed on a predetermined shape surface.

사. 1차 주물로부터 2차 주물을 분리하는 단계four. Separating the secondary casting from the primary casting

1차 주물로부터 2차 주물을 분리하는 단계는, 2차 주물을 제조하는 단계를 통해 제조된 2차 주물을, 1차 주물과 상기 1차 주물의 표면에 적층된 코팅면으로부터 분리하는 단계이다.The step of separating the secondary casting from the primary casting is a step of separating the secondary casting produced through the step of manufacturing the secondary casting from the primary casting and the coated surface laminated on the surface of the primary casting.

한편, 상기 '사. 1차 주물로부터 2차 주물을 분리하는 단계'를 통해 분리된 2차 주물, 즉 세포배양 케이스는 첨부된 도면과 같이 최초 주형틀과 마찬가지로 오목한 다수의 홈을 구성하게 된다.On the other hand, The secondary casting, that is, the cell culture case separated through the step of separating the secondary casting from the primary casting constitutes a plurality of concave grooves like the first flask, as shown in the attached drawing.

이때, 설계 조건에 따라서는 상기 형성된 다수의 홈의 표면에 소정의 물질을 더 코팅함으로써, 상기 세포배양 케이스를 통해 배양되는 세포들이 상기 다수의 홈의 표면에 달라붙는 것을 방지하도록 한다.At this time, according to the design conditions, a predetermined material is further coated on the surface of the formed grooves to prevent cells cultured through the cell culture case from sticking to the surface of the plurality of grooves.

이를 위해 본 발명은 다음의 단계를 더 포함할 수도 있다.To this end, the present invention may further comprise the following steps.

아. 2차 주물의 Ah. Secondary cast 홈부Groove 표면에 코팅을 수행하는 단계 Performing the coating on the surface

2차 주물의 홈부 표면에 코팅을 수행하는 단계는, 1차 주물로부터 2차 주물을 분리하는 단계를 통해 분리된 2차 주물의 표면에 형성된 홈 구성의 표면을 세포가 흡착되지 않는 코팅 조성물로 코팅하는 단계이다.The step of coating the surface of the groove of the secondary casting may include coating the surface of the groove structure formed on the surface of the separated secondary casting with a coating composition in which the cells are not adsorbed by separating the secondary casting from the primary casting .

이때, 세포가 흡착되지 않는 코팅 조성물로는, (a)세포의 흡착을 방지하는 Poly-L-Lysine, PBS(Phosphate Buffer Saline) 및 TAE(Tris Acetate EDTA)와, 이들의 배합을 돕는 유화제를 포함할 수 있는데, 각각 Poly-L-Lysine 50~60중량%, PBS 25~30중량%, TAE 10~20중량% 및 유화제 1~2중량%를 배합하여 코팅 조성물로 사용된다.(A) Poly-L-Lysine, PBS (Phosphate Buffer Saline) and TAE (Tris Acetate EDTA), which prevent the adsorption of cells, and emulsifiers to assist in the compounding thereof 50 to 60% by weight of Poly-L-Lysine, 25 to 30% by weight of PBS, 10 to 20% by weight of TAE and 1 to 2% by weight of an emulsifier, respectively.

이러한 코팅은 상기 조성물을 배합하여 제조된 액체의 코팅 조성물을 분무하는 형태로 코팅이 수행될 수 있다.Such a coating can be carried out by spraying a liquid coating composition prepared by blending the composition.

이에 대하여 본 출원인은, 다음과 같은 몇 가지 실험을 수행하여 상기 배합비의 기술적 의의를 살펴보았다.The applicant of the present invention conducted several experiments as follows to examine the technical significance of the blending ratio.

실험예Experimental Example 1. 흡착실험 1. Adsorption experiment

(실험과정)(Experimental procedure)

실험예 1에 따른 흡착실험에서는, 동물세포를 대상세포로 하였으며, 2차 주물, 즉 세포배양 케이스의 홈부에 (a)아무것도 코팅하지 않은 No Control, (b)Poly-L-Lysine만 코팅한 대조군 1, (c)PBS만 코팅한 대조군 2, (d)TAE만 코팅한 대조군 3, (e)다음과 같이 설정된 실험군 1 내지 4를 실험대상으로 하되, 1개의 세포배양 케이스에 8개 홈 구성을 형성하고, 각각의 상기한 실험대상을 코팅하여, 총 3개의 세포배양 케이스를 준비한다.In the adsorption experiment according to Experimental Example 1, the animal cells were used as target cells, and the control was performed in the same manner as in Example 1 except that (a) no control was applied to the groove of the secondary casting or cell culture case, (b) 1, (c) a control group 2 coated with PBS alone, (d) a control group 3 coated with TAE only, (e) experimental groups 1 to 4 set as follows, And each of the above-mentioned experimental subjects is coated to prepare a total of three cell culture cases.

즉, 총 3개의 세포배양 케이스에 각각의 동물세포를 1주일간 배양한 뒤, 각각 3번씩 세포를 분리시키면서 세포배양 케이스의 홈 구성 표면에 잔여된 세포 면적을 총 세포면적을 100%로 대비하여 분리된 세포 면적의 평균치를 %로 산출하는 방법이다.That is, each of the animal cells was cultured for 3 weeks in a total of 3 cell culture cases, and then the cells were separated 3 times, and the cell area remaining on the surface of the groove of the cell culture case was 100% And the average value of the cell areas is calculated as%.

상기 실험군 1 내지 4는 다음과 같다.The experimental groups 1 to 4 are as follows.

실험군 1 : Poly-L-Lysine 40중량%, PBS 40중량%, TAE 19중량% 및 유화제 1중량%Experimental group 1: 40% by weight of Poly-L-Lysine, 40% by weight of PBS, 19% by weight of TAE and 1%

실험군 2 : Poly-L-Lysine 50중량%, PBS 30중량%, TAE 19중량% 및 유화제 1중량%Experimental group 2: 50% by weight of Poly-L-Lysine, 30% by weight of PBS, 19% by weight of TAE and 1%

실험군 3 : Poly-L-Lysine 60중량%, PBS 20중량%, TAE 19중량% 및 유화제 1중량%Experimental group 3: Poly-L-Lysine 60% by weight, PBS 20% by weight, TAE 19% by weight and emulsifier 1%

실험군 4 : Poly-L-Lysine 70중량%, PBS 30중량%, TAE 19중량% 및 유화제 1중량%Experimental group 4: Poly-L-Lysine 70% by weight, PBS 30% by weight, TAE 19% by weight and emulsifier 1%

이때, 유화제는 1중량%로 고정하였으며, 첨부된 도면의 도 2에서의 결과와 같이 대조군 중 흡착률이 가장 높아서 세포의 분리 정도가 낮은 TAE 역시 19중량%로 고정하여, 총합 100중량%의 코팅 조성물이 되도록 한다.In this case, the emulsifier was fixed at 1% by weight. As shown in FIG. 2 of the accompanying drawings, the TAE having the highest degree of adsorption among cells in the control group was also fixed to 19% by weight, Composition.

(실험결과)(Experiment result)

실험결과는 첨부된 도면의 도 2를 참조할 수 있다.The results of the experiment can be referred to FIG. 2 of the accompanying drawings.

도 2는 본 발명에 따른 세포배양 케이스의 제조방법으로 제조된 세포배양 케이스의 최적의 배합비를 산출하기 위한 흡착실험 결과를 나타낸 것이다.FIG. 2 is a graph showing the results of adsorption experiments for calculating the optimum blending ratio of the cell culture case prepared by the method of manufacturing the cell culture case according to the present invention.

첨부된 도면의 도 2에 따른 실험결과는, No control의 경우 세포의 분리된 평균 면적은 100%를 기준으로 45%로 나타났다.The results of the experiment according to FIG. 2 of the accompanying drawings show that the isolated average area of cells in the case of No control was 45% based on 100%.

반면, 세포의 분리를 위해 기존에 사용되던 Poly-L-Lysine, PBS 및 TAE를 각각 사용한 대조군 1 내지 3은, 각각 79%, 66%, 57%로 나타났다.On the other hand, the control groups 1 to 3, which used Poly-L-Lysine, PBS and TAE, respectively, were 79%, 66% and 57%, respectively.

즉, 세포의 분리를 용이하게 하는 것은 Poly-L-Lysine > PBS > TAE의 순서인 것으로 나타났다.In other words, it was shown that Poly-L-Lysine> PBS> TAE was the order of facilitating cell separation.

다음으로, 상술된 바와 같이 설정된 실험군들 중에서 실험군 1은, Poly-L-Lysine와 PBS의 함량이 동일한 경우 오히려, Poly-L-Lysine만 사용한 대조군 1에 비해 분리된 면적이 75%로 낮게 나타났고, 이는 PBS만 사용한 대조군 2보다 높은 결과이다. 그러나 Poly-L-Lysine만 사용한 대조군 1에 비해 실험군 1의 결과가 낮은 이유는 대조군들 중에서 가장 높은 분리면적을 갖던 Poly-L-Lysine의 함량이 줄어들었기 때문일 것으로 판단되며, Poly-L-Lysine과 PBS가 같이 사용된다고 세포의 분리면적이 증가되는 것은 아님을 확인할 수 있었다.Next, among the experimental groups set up as described above, in Experiment 1, when the contents of Poly-L-Lysine and PBS were the same, the isolated area was 75% lower than that of Control 1 which used only Poly-L-Lysine , Which is higher than control group 2 using PBS only. L-lysine content of the control group was lower than that of control group 1, which was used only for Poly-L-lysine. The reason for this is that the content of Poly-L-Lysine, It was confirmed that the use of PBS did not increase the cell separation area.

또한, Poly-L-Lysine의 함량이 70중량%이고 PBS의 함량이 10중량%인 실험군 4의 경우에는, Poly-L-Lysine만 사용한 대조군 1의 79%보다는 세포의 분리면적이 증가됨을 알 수 있었으나, 온전히 Poly-L-Lysine만 사용한 대조군 1과 큰 차이가 없는 유의한 수준인 것으로 확인되었다.In addition, in the case of the experimental group 4 in which the content of Poly-L-Lysine was 70% by weight and the content of PBS was 10% by weight, it was found that the cell separation area was increased rather than 79% of the control group 1 using only Poly-L-Lysine L-Lysine, but not significantly different from control group 1, which used only Poly-L-Lysine.

다만, Poly-L-Lysine의 함량이 다소 감소되어도 PBS의 함량이 적절히 증가된다면, 오히려 각각의 조성물만 사용한 대조군들에 비해 세포의 분리면적이 증가되는 것을 실험군 2 및 3을 통해 확인하였고, 이들은 각각 95% 및 92%의 세포 분리면적을 갖는 것으로 확인되었다.However, when the content of poly-L-lysine was slightly decreased, the separation area of the cells was increased compared to the control group in which the composition alone was used, when the content of PBS was appropriately increased. 95% and 92%, respectively.

추가적으로, 본 출원인은 다음의 실험예 2를 통해, 실험예 1에서 가장 우수한 세포 분리면적을 보인, 실험군 2 및 실험군 3을 대상으로 TAE의 함량은 고정하되, 유화제의 함량을 조절함에 따른 배합률을 실험하였는데, 그 결과 유화제 1~5중량%까지는 Poly-L-Lysine, PBS 및 TAE의 배합이 용이하게 되었으나, 5중량%를 초과하는 경우에는 유화제의 함량이 증가함에 따라 다른 조성물의 함량이 저하되고 이로 인해 코팅 조성물로의 배합이 용이하지 않았다.In addition, the applicant of the present invention, through the following Experimental Example 2, tested the TAE content in Experimental Group 2 and Experimental Group 3, which showed the best cell separation area in Experimental Example 1, while adjusting the content of emulsifier As a result, it was easy to blend Poly-L-Lysine, PBS and TAE to 1 to 5% by weight of the emulsifier. When the amount of the emulsifier was more than 5% by weight, The formulation into the coating composition was not easy.

이에 본 출원인은, 실험군 2 및 실험군 3의 범위를 갖는 코팅 조성물에 대하여, TAE는 실험예 1과 동일하게 19중량%로 고정하고, 유화제의 함량을 1~5중량%로 변경하면서, 이에 따른 세포 제거면적의 변화를 실험하였다.Thus, the present applicant found that TAE was fixed to 19% by weight in the same manner as in Experimental Example 1, while changing the content of the emulsifier to 1 to 5% by weight for the coating composition having the range of Experiment 2 and Experiment 3, The removal area was experimented.

실험예Experimental Example 2. 유화제 비율에 따른 배합률 실험 2. Experiments of mixing ratio according to emulsifier ratio

(실험결과)(Experiment result)

실험예 2에 따른 실험결과는, 다음의 [표 2]와 같이 나타났다.The results of the experiment according to Experimental Example 2 were as shown in Table 2 below.

실험군 5Experiment group 5 실험군 6Experiment group 6 실험군 7Experiment group 7 실험군 8Experiment group 8 실험군 9Experiment group 9 Poly-L-LysinePoly-L-Lysine 5050 5050 5555 5555 6060 PBSPBS 3030 2929 2323 2222 1616 TAETAE 1919 1919 1919 1919 1919 유화제Emulsifier 1One 22 33 44 55 세포 제거면적Cell removal area 95%95% 93%93% 87%87% 85%85% 82%82%

즉, 유화제가 함유되지 않는 경우에는 당연히 배합이 용이하지 못해 실험대상이 되지 못해 위 [표 2]에 도시되진 않았으며, 유화제의 함량 의존적으로 세포 제거면적은 저하되었다.That is, in the case where the emulsifier is not contained, it is not easy to formulate it and it is not shown in Table 2 because it is not easy to formulate, and the cell removal area is decreased depending on the content of emulsifier.

그리고 실험예 1의 우수한 세포 제거면적에 해당되는 92~95%의 범주 내의 결과를 충족하는 실험군은 5 및 6으로서 유화제가 1~2중량% 함유된 경우였다.Experimental groups satisfying the results within the range of 92 to 95% corresponding to the excellent cell removal area of Experimental Example 1 were 5 and 6 as the case of containing 1 to 2% by weight of emulsifier.

상기에서 도면을 이용하여 서술한 것은, 본 발명의 주요 사항만을 서술한 것으로, 그 기술적 범위 내에서 다양한 설계가 가능한 만큼, 본 발명이 도면의 구성에 한정되는 것이 아님은 자명하다.It is apparent that the present invention is not limited to the configuration of the drawings, as described above with reference to the drawings, only the main points of the present invention are described, and various designs can be made within the technical scope thereof.

Claims (6)

(a) 만곡된 오목한 홈 구성을 다수 개 갖도록 주형틀을 제작하는 단계;
(b) 상기 (a)단계에서 제작된 주형틀을, 외부틀을 준비하여 상기 외부틀에 안착시켜 고정하는 단계;
(c) 상기 (b)단계 후, 주형틀 상부에 PDMS를 충진시켜 주물 성형함으로써 1차 주물을 제조하는 단계;
(d) 상기 (c)단계에서 제조된 1차 주물을 외부틀에 고정하는 단계;
(e) 상기 (d)단계에서 고정된 1차 주물의 상면에 PDMS 외의 다른 재질을 적층시켜 코팅하는 단계;
(f) 상기 (e)단계에서 코팅된 코팅층 상부에 PDMS를 충진시켜 주물 성형함으로써 2차 주물을 제조하는 단계;
(g) 상기 (f)단계에서 제조된 2차 주물을 상기 1차 주물 및 코팅층으로부터 분리하는 단계; 및
(h) 상기 (g)단계를 통해 분리된 2차 주물의 표면에 형성된 홈 구성의 표면을 세포가 흡착되지 않는 코팅 조성물로 코팅하는 단계;로 이루어지되,
상기 (h)단계의 코팅 조성물은 Poly-L-Lysine 50~60중량%, PBS 25~30중량%, TAE 10~20중량% 및 유화제 1~2중량%를 배합하여 사용되는 것을 특징으로 하는, 세포배양 케이스의 제조방법.
(a) fabricating a flask having a plurality of curved concave groove structures;
(b) preparing a flask prepared in the step (a) by placing the outer flask on the outer frame and fixing the flask;
(c) after the step (b), filling the upper part of the flask with PDMS to form a primary casting;
(d) fixing the primary cast produced in the step (c) to an outer frame;
(e) stacking and coating a material other than PDMS on the upper surface of the primary casting fixed in the step (d);
(f) fabricating a secondary casting by filling PDMS on the coating layer coated in step (e) and casting it;
(g) separating the secondary casting produced in the step (f) from the primary casting and the coating layer; And
(h) coating the surface of the groove structure formed on the surface of the secondary casting separated through the step (g) with a coating composition in which the cells are not adsorbed,
Wherein the coating composition of step (h) comprises 50 to 60 wt% of Poly-L-Lysine, 25 to 30 wt% of PBS, 10 to 20 wt% of TAE, and 1 to 2 wt% of an emulsifier. A method for manufacturing a cell culture case.
청구항 1에 있어서,
상기 1차 주물은,
상기 주형틀의 홈 구성에 대응되도록 돌출된 다수의 돌기를 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포배양 케이스의 제조방법.
The method according to claim 1,
The primary casting may include,
And a plurality of protrusions protruded to correspond to the groove structure of the flask.
청구항 1에 있어서,
상기 2차 주물은,
상기 주형틀과 동일한 형상을 갖는 것을 특징으로 하는, 세포배양 케이스의 제조방법.
The method according to claim 1,
The secondary casting may be formed,
Wherein the flask has the same shape as the flask.
청구항 1에 있어서,
상기 (g)단계는,
상기 코팅층이 PDMS 외의 다른 재질로 구성됨으로써, PDMS로 이루어진 1차 주물과 2차 주물이 쉽게 분리될 수 있도록 하는 것을 특징으로 하는, 세포배양 케이스의 제조방법.
The method according to claim 1,
The step (g)
Wherein the coating layer is made of a material other than PDMS, so that the primary casting and the secondary casting made of PDMS can be easily separated from each other.
삭제delete 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 기재된 방법으로 제조된 세포배양 케이스.A cell culture case manufactured by the method according to any one of claims 1 to 4.
KR1020170027427A 2017-03-03 2017-03-03 Method for manufacturing cell culture case, and the cell culture case manufactured by the method KR101885464B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020170027427A KR101885464B1 (en) 2017-03-03 2017-03-03 Method for manufacturing cell culture case, and the cell culture case manufactured by the method

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020170027427A KR101885464B1 (en) 2017-03-03 2017-03-03 Method for manufacturing cell culture case, and the cell culture case manufactured by the method

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR101885464B1 true KR101885464B1 (en) 2018-08-03

Family

ID=63250429

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020170027427A KR101885464B1 (en) 2017-03-03 2017-03-03 Method for manufacturing cell culture case, and the cell culture case manufactured by the method

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101885464B1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20210015024A (en) * 2019-07-31 2021-02-10 중앙대학교 산학협력단 Preparation method of 3D cell culture container
KR20220008032A (en) 2020-07-13 2022-01-20 홍익대학교세종캠퍼스산학협력단 Multi-well plate for imaging small animals

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100659286B1 (en) 2006-01-10 2006-12-19 단국대학교 산학협력단 Cover for plant cell culture chamber
JP2008006819A (en) * 2006-06-29 2008-01-17 Lg Philips Lcd Co Ltd Manufacturing method of soft mold and forming method of thin film pattern using it
KR20080109086A (en) 2006-04-26 2008-12-16 도요 고세이 고교 가부시키가이샤 Method of producing cell culture container
KR20130044809A (en) * 2011-10-25 2013-05-03 주식회사 마이크로이즈 Cell culture apparatus
KR20150047598A (en) * 2012-09-14 2015-05-04 스미또모 베이크라이트 가부시키가이샤 Microwell plate
KR20170003177A (en) * 2015-06-30 2017-01-09 (주) 마이크로핏 Polygons microplate, preparation mehthod thereof and culture method of cell aggregation using the same

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100659286B1 (en) 2006-01-10 2006-12-19 단국대학교 산학협력단 Cover for plant cell culture chamber
KR20080109086A (en) 2006-04-26 2008-12-16 도요 고세이 고교 가부시키가이샤 Method of producing cell culture container
JP2008006819A (en) * 2006-06-29 2008-01-17 Lg Philips Lcd Co Ltd Manufacturing method of soft mold and forming method of thin film pattern using it
KR20130044809A (en) * 2011-10-25 2013-05-03 주식회사 마이크로이즈 Cell culture apparatus
KR20150047598A (en) * 2012-09-14 2015-05-04 스미또모 베이크라이트 가부시키가이샤 Microwell plate
KR20170003177A (en) * 2015-06-30 2017-01-09 (주) 마이크로핏 Polygons microplate, preparation mehthod thereof and culture method of cell aggregation using the same

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20210015024A (en) * 2019-07-31 2021-02-10 중앙대학교 산학협력단 Preparation method of 3D cell culture container
KR102230413B1 (en) 2019-07-31 2021-03-22 중앙대학교 산학협력단 Preparation method of 3D cell culture container
KR20220008032A (en) 2020-07-13 2022-01-20 홍익대학교세종캠퍼스산학협력단 Multi-well plate for imaging small animals

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101885464B1 (en) Method for manufacturing cell culture case, and the cell culture case manufactured by the method
ES2656509T3 (en) Guidance device for cell migration and guidance method used by said device
KR101282926B1 (en) Surface tension induced concave microwell fabrication and cell aggregation using the same
US20180243984A1 (en) Method for manufacturing three-dimensional object and method for preparing data for nozzle movement path to be used therein, and apparatus for manufacturing three-dimensional object and program for preparing data for nozzle movement path to be used therein
US8263391B2 (en) Specimen carrier for the study of cell growth
KR20170090519A (en) Engineered liver tissues, arrays thereof, and methods of making the same
US20140093953A1 (en) Non-adherent cell support and manufacturing method
US20150050686A1 (en) Omnidirectional, multiaxial bioprinted tissue system, techniques and applications
Cha et al. Nano Petri dishes: a new polystyrene platform for studying cell-nanoengineered surface interactions
Ajalik et al. Human organ-on-a-chip microphysiological systems to model musculoskeletal pathologies and accelerate therapeutic discovery
Maher et al. An adaptable soft-mold embossing process for fabricating optically-accessible, microfeature-based culture systems and application toward liver stage antimalarial compound testing
KR101201939B1 (en) Microfluidic platform and preparation method of the same
Stoecklin et al. A new approach to design artificial 3D microniches with combined chemical, topographical, and rheological cues
US9644177B2 (en) Extracellular matrix films and methods of making and using same
US8129188B2 (en) Cell culture apparatus and method of fabricating the apparatus
Hampe et al. Defined 2-D microtissues on soft elastomeric silicone rubber using lift-off epoxy-membranes for biomechanical analyses
KR101894279B1 (en) Oxygen permeability controllable chip for 3D cell culture
US20150368599A1 (en) Design and hot embossing of macro and micro features with high resolution microscopy access
WO2016210115A1 (en) Method for making an epoxy resin mold from a lithography patterned microstructure master
Escobar et al. Reproducing Superhydrophobic Leaves as Coatings by Micromolding Surface‐Initiated Polymerization
KR101327642B1 (en) Device for In Vitro Blood Vessel Formation
KR101471928B1 (en) Cell culture container
US20200071563A1 (en) Amphiphilic surface-segregating polymer mixtures
CN108159495B (en) 3D biological protein and preparation method and application thereof
Yang et al. A microfluidic chip for growth and characterization of adult rat hippocampal progenitor cell neurospheroids

Legal Events

Date Code Title Description
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant