KR101841216B1

KR101841216B1 - C-myc specific antibodies

Info

Publication number: KR101841216B1
Application number: KR1020160057085A
Authority: KR
Inventors: 이상수; 박재은; 임정채; 유석호
Original assignee: 배재대학교 산학협력단
Priority date: 2015-05-12
Filing date: 2016-05-10
Publication date: 2018-03-22
Also published as: KR20160133368A

Abstract

본 발명은 Myc, 특히 c-Myc에 특이적으로 결합하는 항체에 관한 것으로, 보다 상세하게는 c-Myc에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원결합부위를 포함하는 단편, 상기 항체 또는 이의 항원결합부위를 포함하는 단편을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 상기 항체 또는 이의 항원결합부위를 포함하는 단편을 포함하는 암 진단용 키트에 관한 것이다.The present invention relates to an antibody specifically binding to Myc, particularly c-Myc, and more particularly to an antibody that binds specifically to c-Myc or a fragment comprising an antigen binding site thereof, The present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of cancer comprising as an active ingredient a fragment containing a fragment containing a fragment of the above-mentioned antibody or an antigen-binding portion thereof.

Description

c-Myc specific antibody {C-MYC SPECIFIC ANTIBODIES}

Myc 유전자는 전사 인자(transcription factor)의 코딩에 영향을 미치는 조절 유전자(regulator gene)이다. 이는 DNA결합단백질을 코딩하는　암유전자이기도 하며, v-Myc 및 c-Myc의 두 종류가 있다. v-Myc는 조류에서 골수세포종증을 일으키는 것으로서 조류의 암유전자이다.Myc gene is a regulator gene that affects the coding of transcription factors. It is also a cancer gene that encodes a DNA binding protein, and there are two types, v-Myc and c-Myc. v-Myc is a cancer gene in birds that causes bone marrow cell tumors in algae.

한편, c-Myc는 염기성 영역-나선-루프-나선-류신지퍼영역(bHLH-LZ)의 구조를 이루고 있으며,각종　암세포에서 유전자의 발현을 증폭시키며, 인간의 8번 염색체　장완 24영역에 위치하고 있다. c-Myc에 의해 발현된 단백질은 세포의 주기, 사멸, 및 형질 전환에 중요한 역할을 인산단백질(phosphoprotein) 이며, 유전자는 세포 증식과 형질전환을 촉진시키는 역할을 한다. 즉, 히스톤을 아세틸화 시켜서 DNA와의 접촉이 느슨하게 함으로써　유전자의 전사억제상태를 완화시키며, 이를 통해 Oct3/4와 Sox2가 특정한　유전자　위치에 잘 결합하여 전사를 유도할 수 있도록 한다.On the other hand, c-Myc has a structure of a basic region-helical loop-helical-leucine zipper region (bHLH-LZ) and amplifies the expression of genes in various cancer cells and is located in the region of human chromosome 24 . The protein expressed by c-Myc plays a crucial role in the cycle, death, and transformation of the cell, which is a phosphoprotein. The gene promotes cell proliferation and transformation. In other words, acetylation of histone causes loosening of contact with DNA, thereby relieving the transcriptional repression state of the gene, thereby allowing Oct3 / 4 and Sox2 to bind to specific gene positions and induce transcription.

c-Myc에 돌연변이가 발생하여 과잉활성화되면, 세포가 분열하여 종양을 형성하게 되는데, 이러한 c-Myc-의존성 암세포는 c-Myc가 제거되면 사멸하게 된다. 따라서, 연구자들은 암세포의 이러한 취약성에 착안하여 항암제를 개발하려고 노력해 왔으나, Myc 단백질에 특이적 또는 효과적으로 결합하는 항체를 개발하지 못하는 실정이며, 이는 c-Myc에 상기 항체가 효과적으로 결합하는 영역이 없기 때문이다.When mutations occur in c-Myc and become overactive, the cells divide and form tumors. These c-Myc-dependent cancer cells die when c-Myc is removed. Therefore, researchers have been trying to develop anticancer drugs by focusing on these vulnerabilities of cancer cells, but they fail to develop antibodies that specifically or effectively bind to Myc protein because c-Myc does not have an effective binding site for the antibody to be.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명자들은 c-Myc에 특이적인 결합능을 보이는 항체를 스크리닝하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하게 되었다.Disclosure of the Invention The present invention has been conceived to solve the above-mentioned problems, and the present inventors have screened an antibody exhibiting a binding specificity to c-Myc, and completed the present invention based thereon.

이에, 본 발명의 목적은 c-Myc에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원결합부위를 포함하는 단편을 제공하는 것이다. Accordingly, an object of the present invention is to provide an antibody that specifically binds to c-Myc or a fragment comprising the antigen-binding site thereof.

본 발명의 다른 목적은 상기 항체 또는 이의 항원결합부위를 포함하는 단편을 포함하는, 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, which comprises the antibody or a fragment containing the antigen binding site thereof.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 항체 또는 이의 항원결합부위를 포함하는 단편을 포함하는, 암 진단용 키트에 관한 것이다.Yet another object of the present invention is a cancer diagnostic kit comprising the antibody or a fragment comprising the antigen binding site thereof.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the technical problem to be solved by the present invention is not limited to the above-mentioned problems, and other matters not mentioned can be clearly understood by those skilled in the art from the following description.

상술한 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 (a) 서열번호 1로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 2로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체; (b) 서열번호 3으로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 4로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체; (c) 서열번호 5로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 6으로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체; (d) 서열번호 7로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 8로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체; 및 (e) 서열번호 9로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 10으로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체로 이루어진 군에서 선택되는, c-Myc에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원결합부위를 포함하는 단편을 제공한다.(A) an antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of SEQ ID NO: 1 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of SEQ ID NO: 2; (b) an antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of SEQ ID NO: 3 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of SEQ ID NO: 4; (c) an antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of SEQ ID NO: 5 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of SEQ ID NO: 6; (d) an antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of SEQ ID NO: 8; And (e) an antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of SEQ ID NO: 9 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of SEQ ID NO: 10. An antibody specifically binding to c-Myc Or an antigen-binding portion thereof.

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 항체는 모노클로날 항체 또는 폴리클로날 항체일 수 있다.According to one preferred embodiment of the present invention, the antibody may be a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.

본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 항체는 인간 항체일 수 있다.According to another preferred embodiment of the present invention, the antibody may be a human antibody.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 항체는 IgG 항체일 수 있다.According to another preferred embodiment of the present invention, the antibody may be an IgG antibody.

본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 항원결합부위를 포함하는 단편은 Fab, F (ab'), F (ab')₂, Fv 또는 단쇄 항체 분자일 수 있다. According to another preferred embodiment of the present invention, the fragment comprising the antigen binding site may be Fab, F (ab ') 2, F (ab') ₂ , Fv or single chain antibody molecule.

본 발명은 또한, 전술한 항체 또는 이의 항원결합부위를 포함하는 단편을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.The present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, which comprises the aforementioned antibody or a fragment containing the antigen binding site thereof as an active ingredient.

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 암은 편평상피세포암, 소세포폐암, 비소세포폐암, 폐의 선암, 폐의 편평상피암, 복막암, 피부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 직장암, 항문부근암, 식도암, 소장암, 내분비선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 간세포암, 위장암, 췌장암, 교아종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁암, 침샘암, 신장암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 두경부암, 뇌암 및 골육종으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the cancer is selected from the group consisting of squamous cell carcinoma, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, lung adenocarcinoma, squamous cell carcinoma of the lung, peritoneal cancer, skin cancer, skin or intraocular melanoma, rectal cancer, Cancer, ovarian cancer, liver cancer, bladder cancer, cancer of the esophagus, small intestine cancer, endocrine cancer, parathyroid cancer, adrenal cancer, soft tissue sarcoma, urethral cancer, chronic or acute leukemia, lymphocytic lymphoma, hepatocellular carcinoma, gastric cancer, pancreatic cancer, And may be at least one selected from the group consisting of liver cancer, breast cancer, colon cancer, colon cancer, endometrial or uterine cancer, salivary cancer, renal cancer, prostate cancer, mucin cancer, thyroid cancer, head and neck cancer, brain cancer and osteosarcoma.

본 발명은 또한, 전술한 항체 또는 이의 항원결합부위를 포함하는 단편을 포함하는 암 진단용 키트를 제공한다.The present invention also provides a cancer diagnostic kit comprising a fragment comprising the above-mentioned antibody or antigen-binding portion thereof.

본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 키트는 단백질 칩 키트일 수 있다.According to another preferred embodiment of the present invention, the kit may be a protein chip kit.

본 발명은 Myc에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원결합부위를 포함하는 단편을 제공함으로써, c-Myc-의존성 암의 진행을 막아, 궁극적으로는 c-Myc-의존성 암의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다. 나아가, 본 발명의 항체 또는 이의 항원결합부위를 포함하는 단편을 사용하여 c-Myc-의존성 암을 진단하는데 활용할 수 있다.The present invention provides an antibody specifically binding to Myc or a fragment comprising an antigen binding site thereof to prevent progression of c-Myc-dependent cancer and ultimately to prevent or treat c-Myc-dependent cancer Lt; / RTI > Further, fragments comprising the antibody of the present invention or an antigen-binding portion thereof can be used to diagnose c-Myc-dependent cancer.

도 1은 패닝 각 라운드에서 얻어진 양성 파아지 풀에 대한 폴리 파아지 ELISA 의 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 모노 파아지 96종의 인간 SCF-Myc(hSCF-Myc), 쥐 SCF-Myc(mSCF-Myc) 및 ITGA6-Fc 단백질에 대한 결합능을 ELISA를 이용하여 나타낸 것이다.
도 3은 패닝에 의해 선별된 모노 파아지에 대한 BstNI 핑거프린팅을 수행하여 그룹핑한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 패닝에 의해 최종 선별된 5종의 양성 파아지 항체들의 다수의 항원에 대한 비특이적 결합 테스트를 실시한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 단일클론 파아지 항체들을 단일 사슬 항체의 형태에서 human IgG의 형태로 전환하기 위한 모식도를 나타낸 것이다.
도 6은 human IgG 형태로 생산한 항체를 Agilent에 로딩하여 정제 단백질의 순도 및 유동성(mobility) 상태를 나타낸 것이다.
도 7은 1A5항체와 2C7항체의 c-Myc가 태그된 항원 및 다른 단백질이 태그된 항원들에 대한 웨스턴 블랏팅을 수행한 결과를 나타낸 것이다.Figure 1 shows the results of a poly-phage ELISA for positive phage pools obtained in each round of panning.
Fig. 2 shows the binding ability of 96 kinds of monophage to human SCF-Myc (hSCF-Myc), mouse SCF-Myc (mSCF-Myc) and ITGA6-Fc proteins using ELISA.
Figure 3 shows the results of grouping by performing BstNI fingerprinting on monophages selected by panning.
Fig. 4 shows the result of non-specific binding test for a plurality of antigens of 5 kinds of positive phage antibodies ultimately selected by panning.
Figure 5 shows a schematic diagram for converting monoclonal phage antibodies into the form of human IgG in the form of single chain antibodies.
Figure 6 shows the purity and mobility of the purified protein by loading the antibody produced in human IgG form into Agilent.
FIG. 7 shows the results of performing Western blotting on c-Myc-tagged antigens and other protein-tagged antigens of 1A5 antibody and 2C7 antibody.

이하, 본원에 기술된 본 발명을 보다 충분히 이해할 수 있도록 하기 위하여 하기의 상세한 설명을 기재한다. 달리 정의하지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 용어와 과학적 용어는 본 발명이 속하는 분야의 통상의 기술자가 보편적으로 이해하고 있는 것과 동일한 의미를 갖는다.In order that the invention described herein may be more fully understood, the following detailed description is set forth. Unless otherwise defined, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs.

상술한 바와 같이, c-Myc-의존성 암세포는 c-Myc가 제거되면 사멸하게 된다는 것에 착안하여 항암제를 개발하려고 노력해 왔으나, Myc 단백질에 특이적 또는 효과적으로 결합하는 항체를 개발하지 못하는 실정이며, 이는 c-Myc에 상기 항체가 효과적으로 결합하는 영역이 없기 때문이다.As described above, c-Myc-dependent cancer cells have been tried to develop anticancer drugs due to the fact that when c-Myc is eliminated, they kill, but they do not develop antibodies specifically or effectively binding to Myc protein, -Myc has no region in which the antibody binds effectively.

이에 본 발명에서는, c-Myc에 특이적으로 결합하는 항체를 개발하기 위해 예의 노력한 결과, c-Myc에 특이적으로 결합하는 5종의 항체를 최종 선발함으로써 상술한 문제의 해결방안을 모색하였다. 본 발명에서 제공되는 항체 또는 이의 항원결합부위를 포함하는 단편은 c-Myc-의존성 암의 진행을 막아, 궁극적으로는 c-Myc-의존성 암의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다. 나아가, 본 발명의 항체 또는 이의 항원결합부위를 포함하는 단편을 사용하여 c-Myc-의존성 암을 진단하는데 활용할 수 있다.Therefore, in the present invention, as a result of intensive efforts to develop an antibody specifically binding to c-Myc, five kinds of antibodies specifically binding to c-Myc were finally selected to solve the above-mentioned problem. The antibody or antigen-binding fragment thereof of the present invention may inhibit the progression of c-Myc-dependent cancer and ultimately be useful for the prevention or treatment of c-Myc-dependent cancer. Further, fragments comprising the antibody of the present invention or an antigen-binding portion thereof can be used to diagnose c-Myc-dependent cancer.

본 발명은 (a) 서열번호 1로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 2로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체; (b) 서열번호 3으로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 4로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체; (c) 서열번호 5로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 6으로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체; (d) 서열번호 7로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 8로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체; 및 (e) 서열번호 9로 이루어진 중쇄 가변 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 10으로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체로 이루어진 군에서 선택되는, c-Myc에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원결합부위를 포함하는 단편을 제공한다.(A) an antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of SEQ ID NO: 1 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of SEQ ID NO: 2; (b) an antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of SEQ ID NO: 3 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of SEQ ID NO: 4; (c) an antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of SEQ ID NO: 5 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of SEQ ID NO: 6; (d) an antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of SEQ ID NO: 8; And (e) an antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of SEQ ID NO: 9 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of SEQ ID NO: 10. An antibody specifically binding to c-Myc Or an antigen-binding portion thereof.

상기 "c-Myc"는 전사인자(transcription factor)를 암호화하는 조절 유전자 또는 이로부터 암호화된 단백질(전사인자)을 의미하며, 많은 암에서 과발현이 관찰되며, 이는 세포 증식에 관여하는 많은 유전자의 과발현을 유도하여 암을 유발하게 된다. 따라서 c-Myc의 활성화는 암 발생 및 암 진행과 관련이 있다. 상기 c-Myc은 모든 종에서 유래하는 것일 수 있으며, 예컨대, 인간 c-Myc (예컨대, GenBank Accession Number NM_002467; GenPept Accession Number NP_002458), 원숭이 c-Myc (예컨대, GenBank Accession Number NM_001142837; GenPept Accession Number NP_001136345) 등과 같은 영장류 유래의 것, 또는 마우스 c-Myc (예컨대, GenBank Accession Number NM_001177352; GenPept Accession Number NP_001170823), 래트 c-Myc (예컨대, GenBank Accession Number NM_012603; GenPept Accession Number NP_036735) 등과 같은 설치류 유래의 것 등일 수 있다. 본 발명의 일실시예에서는 ANRT사에서 생산한 Myc tagging된 항원을 사용하였다.The term "c-Myc" means a regulatory gene encoding a transcription factor or a protein encoded by the same (transcription factor), and overexpression is observed in many cancers. To induce cancer. Thus, activation of c-Myc is associated with cancer development and cancer progression. The c-Myc may be derived from any species and includes, for example, a human c-Myc (e.g., GenBank Accession Number NM_002467, GenPept Accession Number NP_002458), a monkey c-Myc (e.g., GenBank Accession Number NM_001142837; GenPept Accession Number NP_001136345 ), Or those derived from rodents such as mouse c-Myc (for example, GenBank Accession Number NM_001177352; GenPept Accession Number NP_001170823), rat c-Myc (for example, GenBank Accession Number NM_012603; GenPept Accession Number NP_036735) And so on. In one embodiment of the present invention, Myc tagged antigens produced by ANRT were used.

본 발명과 관련하여 본원에서 사용되는 "항체"라는 용어는 단리된 항체, 재조합 항체 또는 합성 항체, 항체 접합체 또는 항체 유도체를 포함한다. 용어 "항체"는 달리 명시되지 않거나, 문맥상 달리 이해되는 것이 아니라면, 항원 결합 단편을 비롯한 항체 단편을 포함하고자 한다. 본 발명의 "항체"는 전항체 및 그의 임의의 항원 결합 단편, 항체 접합체를 비롯한 하나 이상의 변형(예를 들면, 아미노산의 삽입, 결실, 치환, 번역후 변형 또는 그의 삭제 등)을 포함할 수 있는 항체 유도체 또는 변이체를 포함하며, 이는 통상의 기술자에게 자명한 것이다.The term "antibody ", as used herein in connection with the present invention includes an isolated antibody, a recombinant antibody or a synthetic antibody, an antibody conjugate or an antibody derivative. The term "antibody" is intended to include antibody fragments, including antigen-binding fragments, unless otherwise specified or otherwise understood in context. "Antibody" of the present invention includes, but is not limited to, whole antibodies and any antigen-binding fragments thereof, antibody conjugates that can comprise one or more modifications, including insertion, deletion, substitution, post- Antibody derivatives or variants, which will be apparent to those of ordinary skill in the art.

본원에서 사용되는 용어, "항체의 항원결합부위를 포함하는 단편"이란 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 의미하며, Fab, F (ab'), F (ab')₂ 및 Fv 또는 단쇄 항체 분자 분자 등을 포함한다. 항체 결합 단편 중, Fab는 경쇄 및 중쇄의 가변 영역과 경쇄의 불변 영역 및 중쇄의 첫 번째 불변 영역 (CH1)을 가지는 구조로 1개의 항원결합부위를 가진다. F (ab')는 중쇄 CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 포함하는 힌지 영역 (hinge region)을 가진다는 점에서 Fab와 차이가 있다. F (ab')₂ 는 Fab'의 힌지 영역의 시스테인 잔기가 디설파이드 결합을 이루면서 생성된다. Fv는 중쇄 가변 부위 및 경쇄 가변 부위만을 가지고 있는 최소의 항체조각을 말한다. 이러한 항체 단편은 단백질 가수분해 효소를 이용해서 얻을 수 있고, 예를 들어, 전체 항체를 파파인으로 제한 절단하면 Fab를 얻을 수 있고 펩신으로 절단하면 F (ab')₂ 단편을 얻을 수 있으며, 바람직하게는 유전자 재조합 기술을 통하여 제작할 수 있다.As used herein, the term "a fragment comprising an antigen binding site of an antibody" means a fragment having an antigen binding function, and includes Fab, F (ab '), F (ab') ₂ and Fv or single chain antibody molecules Molecules and the like. Among the antibody-binding fragments, Fab has one antigen-binding site in a structure having a variable region of a light chain and a heavy chain, a constant region of a light chain, and a first constant region (CH1) of a heavy chain. F (ab ') differs from Fab in that it has a hinge region containing at least one cysteine residue at the C-terminus of the heavy chain CH1 domain. F (ab ') ₂ is produced by disulfide bonding of cysteine residues in the hinge region of Fab'. Fv refers to the smallest antibody fragment that has only the heavy chain variable region and the light chain variable region. Such an antibody fragment can be obtained using a protein hydrolyzing enzyme. For example, when the whole antibody is cleaved with papain, a Fab can be obtained. When cut with pepsin, an F (ab ') ₂ fragment can be obtained, Can be produced through recombinant DNA technology.

본원에서 용어, "가변 영역"이란 항원과 특이적으로 결합하는 기능을 수행하면서 서열상의 많은 변이를 보이는 항체 분자의 부분을 의미하고, 가변 영역에는 상보성 결정 영역(complementarity determining region, CDR)인 CDR1, CDR2 및 CDR3가 존재한다. 상기 CDR 사이에는 프레임 워크 영역(framework region, FR) 부분이 존재하여 CDR 고리를 지지해주는 역할을 한다. As used herein, the term "variable region" means a portion of an antibody molecule that exhibits a number of mutations in the sequence while specifically binding to an antigen, and the variable region includes complementarity determining regions (CDRs) CDR2 and CDR3 are present. A framework region (FR) portion exists between the CDRs to support the CDR ring.

본원에서 용어, "상보성　결정 영역(complementarity determining region, CDR)"이라 함은, 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 중에서 항원과의 결합 특이성을 부여하는 부위를 의미한다. 중쇄 및 경쇄는 각각 3개의 CDR을 포함할 수 있다(CDRH1, CDRH2, CDRH3 및 CDRL1, CDRL2, CDRL3). 상기 CDR은 항체가 항원 또는 에피토프에 결합하는데 있어서 주요한 접촉 잔기를 제공할 수 있다. 한편, 본 명세서에 있어서, 용어, "특이적으로 결합" 또는 "특이적으로 인식"은 당업자에게 통상적으로 공지되어 있는 의미와 동일한 것으로서, 항원 및 항체가 특이적으로 상호작용하여 면역학적 반응을 하는 것을 의미한다.The term "complementarity determining region (CDR)" as used herein means a site which imparts binding specificity to an antigen among the variable regions of the heavy chain and the light chain of the antibody. The heavy and light chains may each contain three CDRs (CDRH1, CDRH2, CDRH3 and CDRL1, CDRL2, CDRL3). The CDRs may provide the major contact residues in binding the antibody to the antigen or epitope. In the present specification, the terms "specifically binding" or "specifically recognizing" are the same as those conventionally known to those skilled in the art, and the antigen and the antibody specifically interact to effect an immunological reaction .

본 발명에서 용어, "에피토프(epitope)"란, 항원 분자에 존재하는 항원 특이성을 결정하는 부위를 의미하며, "항원결정기" 또는 "항원결정부위"와 혼용되어 사용될 수 있다.In the present invention, the term "epitope " refers to a site that determines the antigen specificity present in an antigen molecule, and may be used in combination with an" antigenic determinant "

본원에서 용어, "중쇄"는 항원에 특이성을 부여하기 위한 충분한 가변 영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 도메인 V_H 및 3 개의 불변 영역 도메인 C_H1, C_H2 및 C_H3과 힌지를 포함하는 전체길이 중쇄 및 이의 단편을 모두 의미한다.As used herein, the term "heavy chain" refers to a variable region domain V _H comprising an amino acid sequence with sufficient variable region sequence to confer specificity to an antigen and three constant region domains C _H 1, C _H 2 and C _H 3, Lt; RTI ID = 0.0 > and / or < / RTI > fragments thereof.

본원에서 용어, "힌지 영역(hinge region)"은 항체의 중쇄에 포함되어 있는 영역으로서, CH1 및 CH2 영역 사이에 존재하며, 항체 내 항원결합부위의 유연성(flexibility)를 제공하는 기능을 하는 영역을 의미한다.As used herein, the term "hinge region" refers to a region contained in the heavy chain of an antibody that is between the CH1 and CH2 regions and which functions to provide flexibility of the antigen binding site in the antibody it means.

또한 본원에서 용어, "경쇄"는 항원에 특이성을 부여하기 위한 충분한 가변영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 도메인 V_L 및 불변 영역 도메인 C_L을 포함하는 전체길이 경쇄 및 이의 단편을 모두 의미한다.The term "light chain" as used herein also refers to both the full length light chain and its fragments, including variable region domains V _L and constant region domains C _L comprising amino acid sequences with sufficient variable region sequences to confer specificity to the antigen do.

완전한 항체는 2개의 전장(full length) 경쇄 및 2개의 전장 중쇄를 가지는 구조이며 각각의 경쇄는 중쇄와 이황화 결합으로 연결되어 있다. 항체의 불변 영역은 중쇄 불변 영역과 경쇄 불변 영역으로 나뉘어지며, 중쇄 불변 영역은 감마(γ), 뮤(μ), 알파(α), 델타(δ) 및 엡실론(ε) 타입을 가지고, 서브클래스로 감마1(γ1), 감마2(γ2), 감마3(γ3), 감마4(γ4), 알파1(α1) 및 알파2(α2)를 가진다. 경쇄의 불변 영역은 카파(κ) 및 람다(λ) 타입을 가진다.A complete antibody is a structure with two full length light chains and two full length heavy chains, each light chain linked by a heavy chain and a disulfide bond. The constant region of the antibody is divided into a heavy chain constant region and a light chain constant region and the heavy chain constant region has a gamma (gamma), mu (mu), alpha (alpha), delta (delta) and epsilon Gamma 1, gamma 2, gamma 3, gamma 4, alpha 1, and alpha 2, respectively. The constant region of the light chain has kappa (kappa) and lambda (lambda) types.

본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서 앞서 정의한 중쇄 CDR 및 경쇄 CDR 부위, 또는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 제외한 나머지 부위는 모든 서브타입의 면역글로불린(예컨대, IgA, IgD, IgE, IgG (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, 등)으로부터 유래한 것일 수 있고, 예컨대, 상기 모든 서브타입의 면역글로불린의 경쇄 불변 영역 및/또는 중쇄 불변 영역으로부터 유래한 것일 수 있다. 본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 항체는 IgG 항체일 수 있다.IgG, IgD, IgG, IgG (IgG1, IgG1, IgG2, IgG1, IgG2, IgG3, IgG3, IgG3, IgG3, IgG3, , IgG2, IgG3, IgG4), IgM, etc.), and may be, for example, from a light chain constant region and / or a heavy chain constant region of all subtypes of immunoglobulins. According to one embodiment of the present invention, the antibody may be an IgG antibody.

본원에서 사용되는 "항 c-Myc 항체"는 달리 명시되거나 문맥상 달리 제시되지 않는 한 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다량체 항체, 2가, 3가, 또는 4가 항체 등을 포함한다. 1가의 항체는 오직 하나의 면역글로불린 가변 도메인만을 포함하고, c-Myc에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 나아가, 본 발명의 항 c-Myc 항체는 c-Myc에 대해 1가, 2가, 또는 다가일 수 있다.As used herein, "anti-c-Myc antibody" includes monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, multimeric antibodies, divalent, trivalent, or tetravalent antibodies, etc., unless otherwise specified or indicated otherwise . A monovalent antibody comprises only one immunoglobulin variable domain and includes an antibody that specifically binds c-Myc. Further, the anti-c-Myc antibody of the present invention may be monovalent, divalent, or multivalent to c-Myc.

모노클로날 항체는 당업계에 공지되어 있는 임의의 방법, 예로서, 하이브리도마 기법([Kohler & Milstein, Nature, 1975, 256:495-497]), 트리오마 기법, 인간 B 세포 하이브리도마 기법([Kozbor et al, Immunology Today, 1983, 4, 72]) 및 EBV-하이브리도마 기법([Cole et al, "Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy", pp. 77-96, Alan R. Liss, Inc., 1985])에 의해 제조될 수 있다. 재조합 항체를 생성하고 제작하는 방법은 당 업계에 잘 알려져 있다(예를 들어, US 4,816,397; US 6,331,415; [Simmons et al, 2002, Journal of Immunological Methods, 263, 133-147]; WO 92/02551; [Orlandi et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 3833]; [Riechmann et al., 1988, Nature, 322, 323]; US 5,585,089; WO 91/09967; [Mountain and Adair, 1992, Biotechnol Genet. Eng. Rev, 10, 1-142]; [Verma et al., 1998, J. Immunol. Methods, 216:165-181]; [Holliger and Hudson, 2005, Nature Biotech. 23(9): 1126-1136] 참조).The monoclonal antibody can be produced by any method known in the art, such as the hybridoma technique (Kohler & Milstein, Nature, 1975, 256: 495-497), the trioma technique, the human B cell hybridoma (Cole et al, "Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy ", pp. 77-96, Alan R. Liss, Inc ., 1985). Methods for generating and producing recombinant antibodies are well known in the art (see, for example, US 4,816,397; US 6,331,415; Simmons et al, 2002, Journal of Immunological Methods, 263, 133-147; WO 92/02551; [Riechmann et al., 1988, Nature, 322, 323]; US 5,585,089; WO 91/09967; [Mountain and Adair et al., 1989, Proc Natl Acad Sci USA 86, 3833] , 1992, Biotechnol Genet. Eng. Rev, 10, 1-142]; [Verma et al., 1998, J. Immunol. Methods, 216: 165-181]; [Holliger and Hudson, 2005, Nature Biotech. 9): 1126-1136).

본 발명의 항체는 또한 당업계에 알려져 있는 다양한 파아지 디스플레이 방법을 사용하여 생성될 수 있고, ([Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods, 182:41-50]; [Ames et al., 1995, J. Immunol. Methods, 184, 177-186]; [Kettleborough et al. 1994, Eur. J. Immunol, 24, 952-958]; [Persic et al., 1997, Gene, 187, 9-18]; 및 [Burton et al., 1994, Advances in Immunol, 57, 191-280]; WO 90/02809; WO 91/10737; WO 92/01047; WO 92/18619; WO 93/11236; WO 95/15982; 및 WO 95/20401; 및 US 5,698,426; 5,223,409; 5,403,484; 5,580,717; 5,427,908; 5,750,753; 5,821,047; 5,571,698; 5,427,908; 5,516,637; 5,780,225; 5,658,727; 5,733,743; 및 5,969,108)에 개시된 것을 포함한다.The antibodies of the present invention can also be generated using a variety of phage display methods known in the art (see, for example, Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods, 182: 41-50; Ames et al. , 1995, J. Immunol. Methods, 184, 177-186; Kettleborough et al., 1994, Eur. J. Immunol, 24, 952-958; Persic et al., 1997, Gene, WO 92/18619; WO 93/11236; WO 95/11236; < RTI ID = 0.0 > [Burton et al., 1994, Advances in Immunol, 57,191-280]; WO 90/02809; WO 91/10737; WO 92/01047; WO 92/18619; And 5,952,407 and 5,952,402 and 5,998,402 and 5,698,426, 5,223,409, 5,403,484, 5,580,717, 5,427,908, 5,750,753, 5,821,047, 5,571,698, 5,427,908, 5,516,637, 5,780,225, 5,658,727, 5,733,743, and 5,969,108.

본 발명의 일실시예에서는 c-Myc에 특이적으로 결합하는 항체를 제작하기 위해 파아지 디스플레이 방법을 사용하였다(도 1 내지 도 4). 도 4에 나타낸 바와 같이, 1A5와 2C7의 경우 특히 c-Myc가 태그된 항원에 가장 특이적으로 결합하는 좋은 파아지 클론임을 알 수 있었다.In one embodiment of the present invention, a phage display method was used to produce an antibody specifically binding to c-Myc (FIGS. 1 to 4). As shown in Fig. 4, in the cases of 1A5 and 2C7, it was found that c-Myc is a phage clone most specifically binding to the tagged antigen.

본 발명에서는 단일클론 파아지 항체들을 단일 사슬 항체의 형태에서 인간 IgG(human IgG)의 형태로 전환하였으며(도 5), 인간 IgG 형태로 생산한 항체를 Agilent에 로딩하여 정제 단백질의 순도 및 유동성(mobility) 상태를 확인하였다(도 6).In the present invention, monoclonal phage antibodies were transformed into a form of human IgG (human IgG) in the form of a single chain antibody (Fig. 5), and antibodies produced in the form of human IgG were loaded on Agilent to determine the purity and mobility (Fig. 6).

나아가, 1A5 항체와 2C7 항체의 c-Myc가 태그된 항원 및 다른 단백질이 태그된 항원들에 대한 웨스턴 블랏팅을 수행한 결과, 도 7에 나타낸 바와 같이 1A5와 2C7의 항체가 c-Myc에 특이적인 것을 알 수 있었다.Furthermore, western blotting of the anti-1A5 antibody and c-Myc tagged antigens tagged with other proteins and 2C7 antibody was performed. As shown in FIG. 7, antibodies of 1A5 and 2C7 were specific for c-Myc .

또한, 트랜스제닉(예를 들면, 유전공학처리된) 마우스, 또는 다른 포유동물을 비롯한 다른 유기체들이 본 발명의 결합 단백질 및 항체를 생산하는데 사용될 수 있다(예를 들어 US 6,300,129 참조). 예를 들어, 마우스 면역 유전자좌의 가변 영역(중쇄 V, D, 및 J 세그먼트, 및 경쇄 V 및 J 세그먼트)만을 상응하는 인간 가변 서열로 대 체시켜 공학처리된 마우스가 인간 가변 서열을 갖는 고친화성 항체를 대량 생산하는데 사용될 수 있다는 것이 알려져 있다(예를 들면, US 6,586,251; US 6,596,541, 및 US 7,105,348 참조).In addition, transgenic (e. G., Genetically engineered) mice, or other organisms including other mammals, can be used to produce the binding proteins and antibodies of the present invention (see, e. G., US 6,300,129). For example, suppose that only engineered mice that have a variable region of the mouse immunity locus (heavy chain V, D, and J segments, and light chain V and J segments) are replaced with the corresponding human variable sequences and the engineered mouse is a high affinity antibody (See, for example, US 6,586,251; US 6,596,541; and US 7,105,348).

본 발명의 또 다른 실시태양에서, "항 c-Myc 항체"는 영장류화된 또는 인간화 항체, 항체 유도체 또는 접합체, 또는 항원 결합 단편을 지칭한다. 영장류화된 항체 및 인간화된 항체는 전형적으로 인간 이외의 영장류 또는 인 간 항체 V 영역 프레임워크 내로 이식된, 일반적으로는 인간 불변 영역을 추가로 포함하는, 뮤린 항체로부터 유 래된 중쇄 및/또는 경쇄 CDR을 포함한다. 예를 들면, [Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327]; US 6,054,297; 5,821,337; 5,770,196; 5,766,886; 5,821,123; 5,869,619; 6,180,377; 6,013,256; 5,693,761; 및 6,180,370을 참조한다.In another embodiment of the present invention, "anti-c-Myc antibody" refers to a primatized or humanized antibody, an antibody derivative or conjugate, or an antigen binding fragment. Primerized and humanized antibodies typically comprise a heavy chain and / or light chain CDRs derived from a murine antibody, typically further comprising a human constant region, transplanted into a non-human primate or human antibody V region framework . See, for example, Riechmann et al. (1988) Nature 332: 323-327; US 6,054,297; 5,821,337; 5,770,196; 5,766,886; 5,821,123; 5,869,619; 6,180,377; 6,013,256; 5,693,761; And 6,180,370.

원하는 항원을 피면역 동물에게 면역시켜 생산하는 동물 유래 항체는 일반적으로 치료 목적으로 인간에 투여 시 면역거부반응이 일어날 수 있으며, 이러한 면역거부반응을 억제하고자 키메릭 항체(chimeric antibody)가 개발되었다. 키메릭 항체는 유전공학적 방법을 이용하여 항-아이소타입(anti-isotype) 반응의 원인이 되는 동물 유래 항체의 불변 영역을 인간 항체의 불변 영역으로 치환한 것이다. 키메릭 항체는 동물 유래 항체에 비하여 항-아이소타입 반응에 있어서 상당 부분 개선되었으나, 여전히 동물 유래 아미노산들이 가변 영역에 존재하고 있어 잠재적인 항-이디오타입(anti-idiotypic) 반응에 대한 부작용을 내포하고 있다. 이러한 부작용을 개선하고자 개발된 것이 인간화 항체(humanized antibody)이다. 이는 키메릭 항체의 가변 영역 중 항원의 결합에 중요한 역할을 하는 CDR(complementaritiy determining regions) 부위를 인간 항체 골격(framework)에 이식하여 제작된다.An animal-derived antibody that produces a desired antigen by immunizing an immunized animal generally has immunomodulation upon administration to a human for therapeutic purposes, and a chimeric antibody has been developed in order to suppress such immune rejection. The chimeric antibody uses a genetic engineering method to replace the constant region of the animal-derived antibody, which is responsible for the anti-isotype reaction, with the constant region of the human antibody. Chimeric antibodies have been significantly improved in anti-isotype reactions compared to animal-derived antibodies, but still animal-derived amino acids are present in the variable region and have side effects on potential anti-idiotypic responses . Humanized antibodies have been developed to improve these side effects. It is constructed by grafting complementarity determining regions (CDRs), which play an important role in the binding of antigens in the variable regions of chimeric antibodies, to the human antibody framework.

인간화 항체를 제작하기 위한 CDR 이식(grafting) 기술에 있어서 가장 중요한 것은 동물 유래 항체의 CDR 부위를 가장 잘 받아들일 수 있는 최적화된 인간 항체를 선정하는 것이며, 이를 위하여 항체 데이터베이스의 활용, 결정구조(crystal structure)의 분석, 분자모델링 기술 등이 활용된다. 그러나, 최적화된 인간 항체 골격에 동물 유래 항체의 CDR 부위를 이식할지라도 동물 유래 항체의 골격에 위치하면서 항원 결합에 영향을 미치는 아미노산이 존재하는 경우가 있기 때문에, 항원 결합력이 보존되지 못하는 경우가 상당수 존재하므로, 항원 결합력을 복원하기 위한 추가적인 항체 공학 기술의 적용은 필수적이라고 할 수 있다.The most important of the CDR grafting techniques for making humanized antibodies is to select an optimized human antibody that can best accommodate the CDR region of the animal-derived antibody. For this purpose, use of the antibody database, crystal structure structure analysis, and molecular modeling techniques. However, even if the CDR region of the animal-derived antibody is transplanted into the optimized human antibody backbone, the amino acid that affects the antigen binding may exist in the skeleton of the animal-derived antibody, The application of additional antibody engineering techniques to restore antigen binding is essential.

상기 약학적 조성물에 포함되는 항체 또는 이의 항원결합부위를 포함하는 단편은 전술한 바와 동일하므로, 중복된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위해 그 기재를 생략한다.Since the antibody or its fragment containing the antigen binding site contained in the pharmaceutical composition is the same as described above, redundant description is omitted in order to avoid the excessive complexity of the present specification.

상기 약학적 조성물은 c-Myc 의존성 암을 예방 또는 치료하는데 사용될 수 있으며, 바람직하게는 편평상피세포암, 소세포폐암, 비소세포폐암, 폐의 선암, 폐의 편평상피암, 복막암, 피부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 직장암, 항문부근암, 식도암, 소장암, 내분비선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 간세포암, 위장암, 췌장암, 교아종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁암, 침샘암, 신장암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 두경부암, 뇌암 및 골육종으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다.The pharmaceutical composition can be used for the prevention or treatment of c-Myc-dependent cancer, and is preferably used for treatment of squamous cell carcinoma, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, adenocarcinoma of the lung, squamous cell carcinoma of the lung, Cancer, endometrioid cancer, pituitary adenocarcinoma, soft tissue sarcoma, urethral cancer, chronic or acute leukemia, lymphocytic lymphoma, hepatocellular carcinoma, gastric cancer, pancreatic cancer, A cancer selected from the group consisting of cervical cancer, ovarian cancer, liver cancer, bladder cancer, liver tumor, breast cancer, colon cancer, colon cancer, endometrial cancer or uterine cancer, salivary cancer, renal cancer, prostate cancer, mucin cancer, thyroid cancer, head and neck cancer, Or more, but is not limited thereto.

본 발명의 약학적 조성물은 전술한 항체의 약학적 유효량을 포함하며, 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제, 및/또는 부형제 등과 함께 제공될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention comprises a pharmaceutically effective amount of the above-mentioned antibody and may be provided together with a pharmaceutically acceptable carrier, diluent, and / or excipient.

상기 약학적 조성물에 포함되는 약학적으로 허용 가능한 담체는, 약물의 제제화에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알지네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 미네랄 오일 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 혼합제 또는 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 약학 조성물 제조에 통상적으로 사용되는 희석제, 부형제, 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 추가로 포함할 수 있다.The pharmaceutically acceptable carrier to be included in the pharmaceutical composition is one which is usually used for the formulation of a drug and includes lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia rubber, calcium phosphate, alginate, gelatin, One selected from the group consisting of calcium, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, methylcellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, But is not limited thereto. The above-mentioned mixture or pharmaceutical composition may further contain at least one selected from the group consisting of a diluent, an excipient, a lubricant, a wetting agent, a sweetener, a flavoring agent, an emulsifying agent, a suspending agent, .

상기 혼합제 또는 약학 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있다. 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 내피 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여 및 직장내 투여 등으로 투여할 수 있다. 경구 투여시, 단백질 또는 펩타이드는 소화가 되기 때문에 경구용 조성물은 활성 약제를 코팅하거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화 되어야 한다. 또한, 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.The combination or pharmaceutical composition may be administered orally or parenterally. In the case of parenteral administration, it can be administered by intravenous injection, subcutaneous injection, muscle injection, intraperitoneal injection, endothelial administration, topical administration, intranasal administration, intrapulmonary administration and intrathecal administration. When administered orally, the protein or peptide is extinguished and the oral composition should be formulated to coat the active agent or protect it from degradation from above. In addition, the composition may be administered by any device capable of transferring the active agent to the target cell.

본원에서 용어, "약학적 유효량"은 약물이 약학적으로 의미있는 효과를 나타낼 수 있는 양을 의미한다. 1회 투여를 위한 항 c-Myc 항체의 약학적 유효량은 각각의 약물의 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 간격, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 따라서 다양하게 처방될 수 있다. 예컨대, 1회 투여를 위한 상기 항 c-Myc 항체의 약학적 유효량은 0.001 내지 100㎎/kg, 또는 0.02 내지 10㎎/kg 범위일 수 있고, 1회 투여를 위한 상기 항 c-Myc 항체의 약학적 유효량은 0.001 내지 100㎎/kg, 또는 0.02 내지 10 ㎎/kg 범위일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.As used herein, the term "pharmaceutically effective amount" means the amount by which a drug can exhibit a pharmaceutically significant effect. The pharmacologically effective amount of the anti-c-Myc antibody for single administration can be determined by the method of formulation, the manner of administration, the age, weight, sex, pathological condition, food, administration time, administration interval, administration route, And may be variously prescribed depending on factors such as the sensitivity of the reaction. For example, the pharmaceutically effective amount of said anti-c-Myc antibody for a single dose may be in the range of 0.001 to 100 mg / kg, or 0.02 to 10 mg / kg, An effective effective amount may be in the range of 0.001 to 100 mg / kg, or 0.02 to 10 mg / kg, but is not limited thereto.

상기 1회 투여를 위한 약학적 유효량은 단위 용량 형태로 하나의 제제로 제제화되거나, 적절하게 분량하여 제제화되거나, 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 상기 키트에 있어서, 1회 투여를 위한 항 c-Myc 항체의 약학적 유효량이 기본단위로 각각 포장용기에 포함되어 있는 것일 수 있다.The pharmaceutically effective amount for the single administration may be formulated into a single dosage form in unit dosage form, formulated in an appropriate amount, or introduced into a multi-dose container. In the kit, a pharmaceutically effective amount of the anti-c-Myc antibody for single administration may be contained in the packaging container as a basic unit.

본 발명의 약학적 조성물은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 등의 형태로 제형화될 수 있으며, 제형화를 위하여 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.The pharmaceutical compositions of the present invention can be formulated in the form of solutions, suspensions, syrups or emulsions in an oil or aqueous medium, or in the form of excipients, powders, powders, granules, tablets or capsules, Or < / RTI > stabilizers.

상기 암의 예방 또는 치료 효과는 암세포의 성장을 억제하는 효과뿐 아니아니라, 이동(migration), 침습(invasion), 전이(metastasis) 등으로 인한 암의 악화를 억제하는 효과를 포함한다.The prophylactic or therapeutic effect of the cancer includes not only an effect of inhibiting the growth of cancer cells but also an effect of inhibiting cancer deterioration due to migration, invasion, metastasis, and the like.

본 발명은 또한, 상기 약학적 조성물을 개체에게 투여하는 것을 포함하는 암의 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.The present invention also provides a method of preventing or treating cancer, comprising administering the pharmaceutical composition to a subject.

본 발명에서 용어 "개체"는 소, 돼지, 양, 닭, 개, 인간 등을 포함하는 포유 동물, 조류 등을 포함하며, c-Myc 의존성 암이 의심되는 개체는 제한없이 포함된다.The term "individual" in the present invention includes mammals, birds, and the like, including cows, pigs, sheep, chickens, dogs,

본 발명에서 용어, "진단"은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 진단은 c-Myc 의존성 암의 발병 여부를 확인하거나, 나아가 질환의 진행 여부 또는 심화 여부를 확인하는 것이다.As used herein, the term "diagnosis" means identifying the presence or characteristic of a pathological condition. For the purpose of the present invention, the diagnosis is to confirm the onset of c-Myc-dependent cancer, and further to ascertain whether the disease progresses or not.

본 발명의 암 진단용 키트는 항원-항체 결합 반응을 통해 시료 중 c-Myc의 발현 정도를 측정하여 암을 진단할 수 있다.The cancer diagnostic kit of the present invention can diagnose cancer by measuring the expression level of c-Myc in a sample through an antigen-antibody binding reaction.

본 발명에서 c-Myc 단백질의 검출 방법은 대조군(예를 들어, 건강인) 및 실험군(예를 들어, c-Myc 의존성 암 여부를 진단하고자 하는 환자)의 시료에 본 발명의 항체를 처리한 후 항원-항체 반응의 반응 수준을 비교할 수 있는데, 본 발명에서 항원-항체 반응 수준이란 시료 중의 상기 c-Myc 단백질과 이를 인지하는 본 발명의 항체 또는 이의 항원결합부위와 결합된 양을 의미하며, 항원-항체 복합체의 양을 의미한다. 이러한 항원-항체의 반응 수준은 당업계에서 통상적으로 사용되는 측정방법을 제한 없이 사용하여 비교할 수 있으며, 예를 들어, 검출 라벨 (detection label)의 시그널의 크기를 통해서 정량적으로 측정 가능하다.In the present invention, the method for detecting c-Myc protein can be carried out by treating the antibody of the present invention in a sample of a control group (for example, a healthy person) and an experimental group (for example, a patient to be diagnosed as having c- The level of the antigen-antibody reaction in the present invention refers to the amount of the c-Myc protein in the sample and the amount of the antibody of the present invention or its antigen binding site which recognizes the c-Myc protein, - < / RTI > antibody complex. The level of the reaction of such an antigen-antibody can be compared using an unlimited number of assay methods commonly used in the art, for example quantitatively measuring the size of the signal of a detection label.

상기에서 면역 측정은 항원과 항체의 결합을 측정할 수 있는 있는 방법이라면 모두 포함될 수 있다. 이러한 방법들은 당 분야에 공지되어 있으며 예를 들어, 웨스턴블랏 (western blotting), ELISA (enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석법 (Radioimmunoassay, RIA), 방사면역 확산법 (Radioimmunodiffusion), 면역형광분석법 (Immunofluorescence assay, IFA), 면역 블롯 (immunoblotting), 오우크레로니 (Ouchterlony) 면역 확산법, 로케트 (Rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역 침전분석법 (immunoprecipitation assay), 보체 고정 분석법 (complete fixation assay), FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting) 또는 단백질 칩 (protein chip) 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.Immunoassays may include any method capable of measuring the binding of an antigen to an antibody. Such methods are well known in the art and include, for example, Western blotting, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), radioimmunodiffusion, immunofluorescence assay Immunoblotting, Ouchterlony immunodiffusion, Rocket immunoelectrophoresis, tissue immuno staining, immunoprecipitation assay, complete fixation assay, FACS (immunohistochemistry) Fluorescence Activated Cell Sorting, or protein chip, but are not limited thereto.

바람직하게는 ELISA 법을 이용하여 시료 내 c-Myc 단백질을 검출할 수 있다.Preferably, the c-Myc protein in the sample can be detected using an ELISA method.

ELISA는 고체 지지체에 부착된 항체와 항원의 복합체에서 항원을 인지하는 표지된 또 다른 항체를 이용하는 직접적 샌드위치 ELISA, 또는 고체 지지체에 부착된 항체와 항원의 복합체에서 항원을 인지하는 또 다른 항체와 반응시킨 후 이 항체를 인지하는 표지된 2차 항체를 이용하는 간접적 샌드위치 ELISA 등 다양한 ELISA 방법이 바람직하다. 예를 들어, 고체 지지체에 항체를 부착시키고 시료를 반응시킨 후 항원-항체 복합체의 항원을 인지하는 표지된 항체를 부착시켜 효소적으로 발색시키거나 항원-항체 복합체의 항원을 인지하는 항체에 대해 표지된 2차 항체를 부착시켜 효소적으로 발색시키는 샌드위치 ELISA 방법에 의해서 검출할 수 있다. 이와 같이 항원 및 항체의 복합체 형성 정도를 확인하여, 시료 내 c-Myc 단백질을 검출할 수 있다.The ELISA can be performed by direct sandwich ELISA using another labeled antibody that recognizes the antigen in the complex of antibody and antigen attached to the solid support or with another antibody recognizing the antigen in the complex of antibody and antigen attached to the solid support And indirect sandwich ELISA using a labeled secondary antibody recognizing the antibody. For example, an antibody may be attached to a solid support, reacted with a sample, labeled with an antibody that recognizes an antigen of an antigen-antibody complex, and then labeled with an antibody that recognizes the antigen of the antigen-antibody complex The secondary antibody can be detected and detected by a sandwich ELISA method in which the secondary antibody is enzymatically developed. The c-Myc protein in the sample can be detected by confirming the complex formation degree of the antigen and the antibody.

본 발명에서 용어 "생물학적 시료"란 개체의 조직, 세포, 전혈, 혈장, 혈청, 혈액, 타액, 활액, 뇨, 객담, 림프액, 뇌척수액, 조직 부검 시료(뇌, 피부, 림프절, 척수 등), 세포 배양 상등액, 또는 파열된 진핵세포 등을 포함하며, 암의 원발 병소 뿐 아니라 전이 병소에서 유래한 시료를 포함한다. 이들 생물학적 시료를 조작하거나 조작하지 않은 상태로 본 발명의 항체와 반응시켜 c-Myc 단백질의 존재 및 암의 유무를 확인할 수 있다.The term "biological sample" in the present invention refers to a tissue, cell, whole blood, plasma, serum, blood, saliva, synovial fluid, urine, sputum, lymph, cerebrospinal fluid, tissue autopsy sample (brain, skin, lymph node, Culture supernatant, or ruptured eukaryotic cells, and includes samples derived from metastatic lesions as well as primary lesions of cancer. These biological samples can be reacted with the antibody of the present invention without manipulation or manipulation to confirm the presence of c-Myc protein and the presence of cancer.

본 발명의 암 진단용 키트는 c-Myc 단백질에 대한 항체 이외에 면역학적 분석에 사용되는 당업계에 공지된 도구 또는 시약을 추가로 포함할 수 있다.The cancer diagnostic kit of the present invention may further comprise tools or reagents known in the art used for immunological analysis in addition to the antibody against the c-Myc protein.

상기에서 면역학적 분석은 항원과 항체의 결합을 측정할 수 있는 있는 방법이라면 모두 포함될 수 있다. 이러한 방법들은 당 분야에 공지되어 있으며 예를 들어, 웨스턴블랏, ELISA, 방사선면역분석법, 방사면역 확산법, 면역형광분석법, 면역 블롯, 오우크레로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역 침전분석법, 보체 고정 분석법, FACS, 단백질 칩 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.Immunological analysis may include any method capable of measuring the binding of an antigen to an antibody. Such methods are well known in the art and include, for example, Western blotting, ELISA, radioimmunoassay, radial immunodiffusion, immunofluorescence, immunoblot, ooclonus immunodiffusion, rocket immunoelectrophoresis, Assay methods, complement fixation assays, FACS, protein chips, and the like, but are not limited thereto.

면역학적 분석에 사용되는 도구 또는 시약으로는 적합한 담체 또는 지지체, 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지, 용해제, 세정제, 및 안정화제 등을 포함할 수 있다. 적합한 담체로는, 이에 한정되지는 않으나, 또한, 표지물질이 효소인 경우에는 효소활성을 측정할 수 있는 기질, 적당한 완충용액, 발색 효소 또는 형광물질로 표지된 2차 항체, 발색 기질 및 반응 정지제 등을 포함할 수 있다.Tools or reagents used in immunological assays may include suitable carriers or supports, labels capable of generating a detectable signal, solubilizers, detergents, and stabilizers, and the like. Suitable carriers include, but are not limited to, a substrate capable of measuring the enzyme activity, a suitable buffer solution, a secondary antibody labeled with a chromogenic or fluorescent substance, a chromogenic substrate, and a reaction stop when the labeling substance is an enzyme And the like.

본 발명의 키트에 포함되는, c-Myc 단백질에 대한 항체는 바람직하게는 적합한 담체 또는 지지체에 문헌에 개시된 바와 같은 다양한 방법을 이용하여 고정될 수 있으며 (Antibodies: A Labotory Manual, Harlow ＆ Lane; Cold SpringHarbor, 1988), 적합한 담체 또는 지지체의 예로는 PBS, 폴리스틸렌, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리에스테르, 폴리아크릴로니트릴, 불소 수지, 아가로스, 셀룰로즈, 니트로셀룰로즈, 덱스트란, 세파덱스, 세파로즈, 리포솜, 카복시메틸 셀룰로즈, 폴리아크릴아미드, 폴리스테린, 반려암, 여과지, 이온교환수지, 플라스틱 필름, 플라스틱 튜브, 폴리아민-메틸 비닐-에테르-말레산 공중합체, 아미노산 공중합체, 에틸렌-말레산 공중합체, 나일론, 금속, 유리, 글래스 비드, 또는 자성 입자 등이 포함된다. 그 외의 다른 고체 기질로는 세포 배양 플레이트, ELISA 플레이트, 튜브 및 폴리머성 막이 있다. 상기 지지체는 임의의 가능한 형태, 예를 들어 구형 (비드), 원통형 (시험관 또는 웰 내면), 평면형 (시트, 시험 스트립)을 가질 수 있다.Antibodies to the c-Myc protein included in the kits of the present invention can be immobilized, preferably using a variety of methods, as described in the literature, to suitable carriers or supports ( Antibodies : A Laboratory Manual, Harlow & Examples of suitable carriers or supports are PBS, polystyrene, polyethylene, polypropylene, polyester, polyacrylonitrile, fluororesin, agarose, cellulose, nitrocellulose, dextran, sephadex, sepharose, liposome , Carboxymethylcellulose, polyacrylamide, polysterine, gabbro, filter paper, ion exchange resin, plastic film, plastic tube, polyamine-methyl vinyl ether-maleic acid copolymer, amino acid copolymer, ethylene-maleic acid copolymer, nylon , Metal, glass, glass beads, or magnetic particles. Other solid substrates include cell culture plates, ELISA plates, tubes and polymeric membranes. The support may have any possible shape, for example spherical (bead), cylindrical (test tube or well inner surface), planar (sheet, test strip).

검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지는 항원-항체 복합체의 형성을 정성 또는 정량적으로 측정가능하게 하며, 이의 예로는 효소, 형광물질, 리간드, 발광물질, 미소입자 (microparticle), 레독스 분자 및 방사성 동위원소 등을 사용할 수 있다. 효소로는 β-글루쿠로니다제, β-D-글루코시다제, 우레아제, 퍼옥시다아제 (호스라디시 퍼옥시다제 등), 알칼라인 포스파타아제, 아세틸콜린에스테라아제, 글리코즈 옥시다아제, 헥소키나제, 말레이트 디하이드로게나아제, 글루코스-6-인산디하이드로게나아제, 인버타아제 등을 사용할 수 있다. 형광물질로는 플루오레신, 이소티오시아네이트, 로다민, 피코에리테린, 피코시아닌, 알로피코시아닌, 플루오르신이소티옥시아네이트 등을 사용할 수 있다. 리간드로는 바이오틴 유도체 등이 있으며, 발광물질로는 아크리디늄 에스테르, 루시페린, 루시퍼라아제 등이 있다. 미소입자로는 콜로이드 금, 착색된 라텍스 등이 있고 레독스 분자로는 페로센, 루테늄 착화합물, 바이올로젠, 퀴논, Ti 이온, Cs 이온, 디이미드, 1,4-벤조퀴논, 하이드로퀴논 등이 있다. 방사성 동위원소로는 ³H, ¹⁴C, ³²P, ³⁵S, ³⁶Cl, ⁵¹Cr, ⁵⁷Co, ⁵⁸Co, ⁵⁹Fe, ⁹⁰Y, ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹⁸⁶Re 등이 있다. 그러나 상기 예시된 것들 외에 면역학적 분석법에 사용할 수 있은 것이라면 어느 것이라도 사용할 수 있다.A label capable of producing a detectable signal enables the formation of an antigen-antibody complex to be qualitatively or quantitatively measurable, and examples thereof include an enzyme, a fluorescent substance, a ligand, a luminescent material, a microparticle, a redox molecule, Isotopes and the like can be used. Examples of the enzymes include? -Glucuronidase,? -D-glucosidase, urease, peroxidase (such as hosadradia peroxidase), alkaline phosphatase, acetylcholinesterase, glycosidoxidase, Dehydrogenase, glucose-6-phosphate dehydrogenase, invertase and the like can be used. Examples of the fluorescent substance include fluorescein, isothiocyanate, rhodamine, picoeriterine, picocyanin, allophycocyanin, fluorine synthase, and the like. Examples of the ligand include biotin derivatives, and examples of the luminescent material include acridinium ester, luciferin, and luciferase. Examples of the fine particles include colloidal gold and colored latex. Examples of redox molecules include ferrocene, ruthenium complex, viologen, quinone, Ti ion, Cs ion, diimide, 1,4-benzoquinone, hydroquinone and the like. Radioactive isotopes include ³ H, ¹⁴ C, ³² P, ³⁵ S, ³⁶ Cl, ⁵¹ Cr, ⁵⁷ Co, ⁵⁸ Co, ⁵⁹ Fe, ⁹⁰ Y, ¹²⁵ I, ¹³¹ I and ¹⁸⁶ Re. However, in addition to those exemplified above, any of them can be used as long as they can be used for immunological assays.

효소 발색 기질로서, 예를 들어 효소 표지로서 호스라디시 퍼옥시다제 (HRP) 를 선택한 경우에는 기질로 3-아미노-9-에틸카르바졸, 5-아미노살리실산, 4-클로로-1-나프톨, o-페닐렌디아민, 2,2'-아지노-비스(3-에틸벤즈티아졸린-6-술폰산), 3,3-디아미노벤지딘, 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘, o-디아니시딘, 또는 3,3-디메톡시벤지딘 포함 용액을 사용할 수 있다. 또한, 효소 표지로서 알칼라인 포스파타아제를 선택한 경우에는 기질로 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴 포스페이트, 니트로블루 테트라졸륨, 또는 p-니트로페닐 포스페이트 포함 용액을 사용할 수 있다. 또한, 효소 표지로서 β-D-갈락토시다제를 선택한 경우에는 기질로 o-니트로페닐-β-D-갈락토시드 또는 5-브로모-4-클로로-3-인돌-β-D-갈락토피라노시드 포함 용액을 사용할 수 있다. 이 외에도 당업계에 알려진 다양한 효소 및 효소 발색 기질을 사용할 수 있다.As an enzyme coloring substrate, for example, when hosadradici peroxidase (HRP) is selected as the enzyme label, 3-amino-9-ethylcarbazole, 5-aminosalicylic acid, 4-chloro-1-naphthol, o (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid), 3,3-diaminobenzidine, 3,3 ', 5,5'-tetramethylbenzidine, o- Dianisidine, or 3,3-dimethoxybenzidine-containing solution may be used. Further, when alkaline phosphatase is selected as the enzyme label, a solution containing 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate, nitroblue tetrazolium, or p-nitrophenyl phosphate as a substrate can be used. When β-D-galactosidase is selected as the enzyme label, o-nitrophenyl-β-D-galactoside or 5-bromo-4-chloro-3-indole- Lactopyranoside-containing solutions may be used. In addition, various enzyme and enzyme chromogenic substrates known in the art can be used.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples. However, the following examples are illustrative of the present invention, and the present invention is not limited by the following examples.

c-c- Myc에On Myc 특이적인 항체 스크리닝 Screening for specific antibodies

1-1. 1-1. 바이오패닝Bio-panning

항원 준비 : ANRT사에서 생산한 Myc tagging된 항원 50 ㎍ 을 가지고 실험을 수행하였다. Antigen preparation : Experiments were performed with 50 μg of Myc tagged antigen produced by ANRT.

라이브러리 파아지의 준비 : 2.7 X10¹⁰의 다양성을 가진 1 세트의 인간 단일 사슬 항체 라이브러리 셀을 파지 감염시킨 후, 30에 16 시간 배양하고 폴리에틸렌글리콜로 농축한 다음, PBS 완충용액에 부유시켜 준비하였다. Preparation of library phage : A set of human single-chain antibody library cells with a variety of 2.7 ^{X 10 10} were harvested and infected, cultured at 30 for 16 hours, concentrated with polyethylene glycol, and then suspended in PBS buffer.

패닝 : 일반적으로 파아지 디스플레이 기법을 통한 바이오패닝을 실시할 경우 목적하는 타겟과 강한 결합능력을 가지는 파지 개체수가 패닝 횟수를 거듭할수록 증가하기 때문에, 패닝 횟수에 따른 파지 역가의 증가 현상은 파지 디스플레이 실험에 있어서 실험이 의도한 방향으로 진행되고 있는지를 결정하는 기본적인 파라미터이다. Panning : Generally, when bio panning is performed by phage display technique, the number of purged individuals having a strong binding ability with a target increases as the number of panning times increases. Therefore, Is a basic parameter that determines whether the experiment is proceeding in the intended direction.

Immunotube에 라이브러리 파아지를 넣어, 실온에서 2시간 반응시킨 후에, 1XPBS/T와 1XPBS 로 세척한 후 항원에 특이적으로 결합한 단일 사슬 항체-파아지들만 추출하였다. 상기 추출된 파아지를 다시 대장균에 감염시켜 증폭시키는 패닝과정을 통해 양성 파아지의 풀을 얻었다. 1회차의 패닝에서 증폭된 파아지를 가지고 세척 단계에서 횟수만 늘리고, 나머지는 동일한 방법으로 2회차와 3회차의 패닝을 수행하여, 이를 표 1에 나타내었다.The library phage was added to the immunotubes, reacted at room temperature for 2 hours, washed with 1XPBS / T and 1XPBS, and then single chain antibody-phages specifically bound to the antigen were extracted. The extracted phage was infected with E. coli again and amplified to obtain a positive phage pool. In the panning of the first round, the amplified phage was increased in number of times in the washing step and the rest was subjected to the second round and the third round of panning in the same manner.

타겟 항원Target antigen 패닝 라운드Panning round 초기 파아지 수Initial phage count 패닝 후의 파아지 수Number of phage after panning c-Mycc-Myc 1회차 hSCF-Myc1st round hSCF-Myc 3.5 X 10¹¹ 3.5 X 10 ¹¹ 3.0 X 10⁷ 3.0 X 10 ⁷ 2회차 mSCF-Myc2nd round mSCF-Myc 1.7 X 10¹² 1.7 X 10 ¹² 3.0 X 10⁶ 3.0 X 10 ⁶ 3회차 hSCF-Myc3 times hSCF-Myc 3.3 X 10¹² 3.3 X 10 ¹² 1.4 X 10⁷ 1.4 X 10 ⁷

1-2. 1-2. 폴리Poly 파아지Phage ELISA ELISA

상기 패닝을 통하여 얻어진 양성 폴리 ScFv-파아지 항체 풀에 대한 항원과의 특이성을 알아보기 위해 폴리 파아지 ELISA를 수행하였다. 하나의 플레이트는 항원인 인간 SCF-Myc(hSCF-Myc) 또는 쥐 SCF-Myc(mSCF-Myc) 로 코팅하였고, 다른 하나의 플레이트는 Fc 단백질 및 ITGA6-Fc 단백질로 코팅하여, 각 라운드에서 얻어진 파아지 풀로 동시에 ELSIA를 수행하였다. 한편, 항원이 제시되지 않은 M13 파아지의 #38 및 BL(blank)이 ELISA의 음성 대조군으로 사용되었다.The polyphage ELISA was performed to examine the specificity of the positive poly ScFv-phage antibody pool obtained through the panning with the antigen. One plate was coated with human SCF-Myc (hSCF-Myc) or mouse SCF-Myc (mSCF-Myc) and the other plate was coated with Fc protein and ITGA6-Fc protein, ELSIA was performed simultaneously with the pool. On the other hand, # 38 and BL (blank) of M13 phage in which no antigen was presented were used as a negative control for ELISA.

상기 폴리 파아지 ELISA 의 결과를 도 1에 나타내었으며, 3회차의 패닝에서 인간 SCF-Myc(hSCF-Myc) 또는 쥐 SCF-Myc(mSCF-Myc) 항원에 대한 결합능이 증가함을 확인할 수 있었다. The results of the polyphage ELISA are shown in Fig. 1, and it was confirmed that the binding ability to human SCF-Myc (hSCF-Myc) or mouse SCF-Myc (mSCF-Myc) antigen was increased in the third round of panning.

1-3. 모노 1-3. Mono 파아지Phage ELISA ELISA

폴리 파아지 ELSIA 에서 결합능이 큰 3회차의 패닝으로부터 각 96개의 단일 클론들을 선별하였고, 이들을 96-웰 플레이트에 접종하여 헬퍼 파아지를 감염시켜 배양하였다, 이후, 상층액에 존재하는 단일사슬-파아지를 항원이 코팅된 플레이트에 접종하여 ELISA를 수행하였다.Each of the 96 monoclonal clones was screened from panning of 3 times greater binding capacity in the polyphage ELSIA and infected with the helper phage by inoculating them into a 96-well plate. After that, the single chain-phage present in the supernatant was incubated with antigen The coated plate was inoculated and ELISA was performed.

인간 SCF-Myc(hSCF-Myc) 또는 쥐S CF-Myc(mSCF-Myc) 항원에 대한 모노 파아지 ELISA와 대조군인 비특이적 항원 ITGA6-Fc 단백질에 대한 ELISA를 동시에 수행하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었으며, 인간 SCF-Myc(hSCF-Myc) 및 쥐 SCF-Myc(mSCF-Myc) 항원에만 결합능을 갖는 다수의 예비 항체 클론을 선별하였다. Monophage ELISA for human SCF-Myc (hSCF-Myc) or murine SFC-Myc (mSCF-Myc) antigen and ELISA for control non-specific antigen ITGA6-Fc protein were performed simultaneously. The results are shown in Fig. 2, and a number of spare antibody clones having binding ability only to human SCF-Myc (hSCF-Myc) and murine SCF-Myc (mSCF-Myc) antigens were screened.

1-4. 1-4. 그룹핑Grouping

상기 선별한 양성 파아지 클론들을 그룹핑 하기 위하여 단일 사슬 항체를 증폭할 수 있는 프라이머 세트를 이용하여 PCR을 수행하였다. PCR 절편을 BstNI 으로 처리한 후 8% DNA 폴리아크릴아마이드 젤에서 BstNI 에 의해 잘려진 단일 클론 파아지 항체들의 단편들을 도 3에 나타내었다. 도 3에 나타낸 바와 같이 크게 10가지 그룹으로 나뉘었다.PCR was performed using a set of primers capable of amplifying a single chain antibody to group the selected positive phage clones. The PCR fragment was treated with BstNI and then stained with 8% DNA polyacrylamide gel in BstNI The fragments of the monoclonal phage antibodies truncated by the probe are shown in Fig. As shown in Fig. 3, there are roughly 10 groups.

1-5. 염기서열 분석 및 최종 양성 1-5. Sequence analysis and final positive 파아지Phage 항체 선별 Antibody screening

상기 그룹핑에서 10가지 그룹으로 나뉜 것과 달리, 염기서열 분석 결과에서는 서로 다른 5종의 염기서열을 갖는 클론으로 밝혀졌고, 이를 하기의 표 2에 나타내었다. 이는 BstNI 의 불충분한 다이제스쳔(digestion)에 의한 것으로 추정된다. 최종 양성 파아지 항체로 선별된 5종의 중쇄와 경쇄의 가변영역에 대한 아미노산 서열을 인간항체 germline 서열과 비교한 결과, 비교적 높은 상동성을 나타내었다.Unlike the case of dividing into 10 groups in the grouping, in the result of base sequence analysis, clones having five different base sequences were found, which is shown in Table 2 below. This is because BstNI , Due to insufficient digestion of the sample. The amino acid sequences of the variable regions of the heavy chain and the light chain selected by the final positive phage antibody were compared with the human antibody germline sequence, and they showed comparatively high homology.

파아지 클론Phage clone 중쇄
영역Heavy chain
domain 인간
항체 germline 과의 상동성human
Homology with antibody germline 경쇄 영역Light chain region 인간항체 germline 과의
상동성With human antibody germline
Homology 중쇄 영역
(CDR3-아미노산
서열)Heavy chain region
(CDR3-amino acid
order) 경쇄 영역
(CDR3-아미노산 서열)Light chain region
(CDR3-amino acid sequence) 1A51A5 VH1-69VH1-69 87.8% 87.8% L5L5 89.5% 89.5% DSSGHRYEYSYAFDIDSSGHRYEYSYAFDI QQSYSSPTQQSYSSPT 2B12B1 VH3-30 VH3-30 81.6%81.6% A18bA18b 92.0%92.0% RASAMDRASAMD MQGLHLPYTMQGLHLPYT 2C72C7 VH3-30VH3-30 93.9%93.9% V3-4V3-4 93.9%93.9% RGTTMDVRGTTMDV VLYMGSGIRVVLYMGSGIRV 2E82E8 VH3-9VH3-9 94.9%94.9% L5L5 93.7%93.7% KAFYGSGSSHRSFKAFYGSGSSHRSF QQGKSFPYTQQGKSFPYT 2F82F8 VH3-9VH3-9 90.9%90.9% L12aL12a 92.6%92.6% REKKGGNFREKGGNF QQHNTYPLTQQHNTYPLT

1-6. 다수의 항원에 대한 비특이적 결합 테스트1-6. Nonspecific binding test for multiple antigens

상기 선별된 5개의 파아지 클론에 대하여, c-Myc가 태그된 다른 항원 및 c-Myc가 태그되지 않은 항원에 대한 결합능을 살펴보기 위하여 다수의 항원에 대하여 비특이적 결합을 테스트 하였으며, 이를 도 4에 나타내었다.Non-specific binding of the selected five phage clones to multiple antigens was tested in order to examine the binding ability of c-Myc-tagged antigens and c-Myc-untagged antigens to antigens. .

도 4에 나타낸 바와 같이, 1A5와 2C7의 경우 특히 c-Myc가 태그된 항원에 가장 특이적으로 결합하는 좋은 파아지 클론임을 알 수 있었다.As shown in Fig. 4, in the cases of 1A5 and 2C7, it was found that c-Myc is a phage clone most specifically binding to the tagged antigen.

c-c- Myc에On Myc 특이적이고, Specific, IgGIgG 형태인 항체 생산 Antibody production in the form of

2-1. 2-1. IgGIgG 형태로의 전환 Conversion to form

상기 실시예 1에서 선별된 단일클론 파아지 항체들을 단일 사슬 항체에서 human IgG로 전환하기 위하여, 중쇄 및 경쇄의 가변영역 부분을 PCR하여 중쇄 및 경쇄의 불변영역이 포함되어 있는 발현벡터에 서브 클로닝(sub-cloning)하였다(도 5). 최종 선별된 항체 중쇄와 경쇄 두 종의 플라스미드를 HEK 293F 세포에 동시-형질주입시켜(co-transfeciton) 6일간 배양하였다.In order to convert the monoclonal phage antibodies selected in Example 1 from the single chain antibody to human IgG, the variable region portion of the heavy chain and the light chain was subjected to PCR to subclone the expression vector containing the constant region of the heavy chain and the light chain -cloning) (Fig. 5). The final selected antibody heavy and light chain plasmids were co-transfected into HEK 293F cells (co-transfeciton) for 6 days.

2-2. 2-2. IgGIgG 항체 생산 Antibody production

6일간 임시발현 시스템을 이용하여 생산된 항체들은 세포 배양액에서 세포와 세포 파쇄물들(cell debris)을 제거한 후, 단백질 A 친화도 크로마토그래피(protein A affinity chromatography)를 수행하여 IgG 항체를 정제하였다. 정제 후 글라이신 버퍼를 이용해 항체를 분리하고, 최종 재부유 버퍼는 PBS로 교환하였다. 정제된 항체를 BCA Assay 및 Nano Drop을 통해 정량하였고, 상기 항체를 환원 및 비-환원 조건에서 Agilent에 로딩하여 정제 단백질의 순도 및 유동성(mobility) 상태를 확인하였으며, 이를 도 6에 나타내었다.Antibodies produced using the transient expression system for 6 days were subjected to protein A affinity chromatography to remove IgG antibody after cell and cell debris was removed from the cell culture fluid. After purification, antibodies were separated using glycine buffer and the final resuspended buffer was exchanged with PBS. The purified antibody was quantified by BCA Assay and Nano Drop, and the purity and mobility of the purified protein were confirmed by loading the antibody on the Agilent under reducing and non-reducing conditions, as shown in FIG.

2-3. 2-3. IgGIgG 항체의 Antibody 웨스턴Western 블랏팅Blasting

Myc가 태그된 항원과 다른 단백질이 태그된 항원들을 SDS-PAGE 에 로딩하고 이를 NC 멤브레인에 트랜스퍼(transfer)시킨 뒤에, 1A5 항체와 2C7항체를 이용하여 웨스턴 블랏팅을 수행하였고, 이를 도 7에 나타내었다. 도 7에 나타낸 바와 같이, 앞선 ELISA에서의 결과에서처럼 1A5와 2C7의 항체가 c-Myc에 특이적인 것을 알 수 있었다.Antigens tagged with Myc and other proteins were loaded onto SDS-PAGE and transferred to NC membrane. Western blotting was then performed using antibodies 1A5 and 2C7, which are shown in FIG. 7 . As shown in Fig. 7, it was found that the antibodies of 1A5 and 2C7 were specific to c-Myc as in the results of the previous ELISA.

<110> PAICHAI UNIVERSITY INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION A and RT CO. ltd. <120> C-MYC SPECIFIC ANTIBODIES <130> 1060799 <150> 2015-0065788 <151> 2015-05-12 <160> 10 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of 1A5 antibody <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Asn Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Asp Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ala Ile Ile Pro Met Tyr Glu Thr Pro Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Ser Ile Thr Ala Asp Glu Ala Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Ser Ser Gly His Arg Tyr Glu Tyr Ser Tyr Ala Phe Asp 100 105 110 Ile Trp Gly His Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of 1A5 antibody <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Lys Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro His Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ile Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ser Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 3 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of 2B1 antibody <400> 3 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Met 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Pro Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Ala Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Ala Trp Val 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Lys Ala Tyr Phe Ala Asp Ser Val 50 55 60 Arg Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr Val Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Ser Ala Met Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 4 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of 2B1 antibody <400> 4 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asp Arg Lys Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Thr Glu Asp Ala Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly 85 90 95 Leu His Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 5 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of 2C7 antibody <400> 5 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Pro Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Thr Thr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 6 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of 2C7 antibody <400> 6 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Leu Ser Ser Gly Ser Val Ser Ala Ser 20 25 30 Asn Tyr Pro Ser Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ser Pro Arg Thr 35 40 45 Leu Ile Tyr Arg Thr Asn Thr Arg Ser Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Ile Leu Gly Asn Glu Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Ala Asp Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Val Leu Tyr Met Gly Ser 85 90 95 Gly Ile Arg Val Phe Gly Arg Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 7 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of 2E8 antibody <400> 7 Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Arg Leu Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ala Phe Tyr Gly Ser Gly Ser Ser His Arg Ser Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 8 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of 2E8 antibody <400> 8 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Trp 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Lys Ser Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 9 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of 2F8 antibody <400> 9 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Arg Ile Val Tyr Ala Asp Ser Met 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Lys Lys Gly Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Ser 100 105 110 Leu Ile Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of 2F8 antibody <400> 10 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Asp Lys Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Thr Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <110> PAICHAI UNIVERSITY INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION A and RT CO. ltd. <120> C-MYC SPECIFIC ANTIBODIES <130> 1060799 <150> 2015-0065788 <151> 2015-05-12 <160> 10 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of 1A5 antibody <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Asn Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Asp Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ala Ile Pro Met Tyr Glu Thr Pro Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Ser Ile Thr Ala Asp Glu Ala Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Ser Ser Gly His Arg Tyr Glu Tyr Ser Tyr Ala Phe Asp 100 105 110 Ile Trp Gly His Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of 1A5 antibody <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Lys Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro His Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ile Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Ser Ser Ser Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 3 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of 2B1 antibody <400> 3 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Met 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Pro Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Ala Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Ala Trp Val 35 40 45 Ala Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Lys Ala Tyr Phe Ala Asp Ser Val 50 55 60 Arg Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Thr Val Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Ser Ala Met Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 4 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of 2B1 antibody <400> 4 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asp Arg Lys Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Thr Glu Asp Ala Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly 85 90 95 Leu His Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 5 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of 2C7 antibody <400> 5 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Pro Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Thr Thr Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 6 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of 2C7 antibody <400> 6 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Leu Ser Ser Ser Ser Val Ser Ala Ser 20 25 30 Asn Tyr Pro Ser Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ser Pro Arg Thr 35 40 45 Leu Ile Tyr Arg Thr Asn Thr Arg Ser Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Ile Leu Gly Asn Glu Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Ala Asp Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Val Leu Tyr Met Gly Ser 85 90 95 Gly Ile Arg Val Phe Gly Arg Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 7 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of 2E8 antibody <400> 7 Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Arg Leu Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ala Phe Tyr Gly Ser Gly Ser Ser His Arg Ser Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 8 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of 2E8 antibody <400> 8 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Trp 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Lys Ser Phe Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 9 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of 2F8 antibody <400> 9 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Arg Ile Val Tyr Ala Asp Ser Met 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Lys Lys Gly Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Ser 100 105 110 Leu Ile Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of 2F8 antibody <400> 10 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Asp Lys Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Thr Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105

Claims

An antibody specifically binding to c-Myc, or a fragment comprising the antigen-binding site thereof, selected from the group consisting of (a) to (e)
(a) an antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of SEQ ID NO: 1 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of SEQ ID NO: 2;
(b) an antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of SEQ ID NO: 3 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of SEQ ID NO: 4;
(c) an antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of SEQ ID NO: 5 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of SEQ ID NO: 6;
(d) an antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising a light chain variable region consisting of SEQ ID NO: 8; And
(e) an antibody comprising a heavy chain comprising a heavy chain variable region consisting of SEQ ID NO: 9 and a light chain variable region comprising a light chain variable region consisting of SEQ ID NO: 10.

The fragment of claim 1, wherein the antibody is a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.

The fragment of claim 1, wherein said antibody is a human antibody.

2. The fragment of claim 1, wherein said antibody is an IgG antibody.

2. The antibody of claim 1, wherein the fragment comprising the antigen binding site is a Fab, F (ab '), F (ab') ₂ , Fv or single chain antibody molecule. snippet.

delete

A cancer diagnostic kit comprising an antibody according to any one of claims 1 to 5 or a fragment comprising an antigen binding site thereof.

10. The method of claim 8, wherein the cancer is selected from the group consisting of squamous cell carcinoma, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, adenocarcinoma of the lung, squamous cell carcinoma of the lung, peritoneal cancer, skin cancer, skin or intraocular melanoma, rectal cancer, Cancer, breast cancer, liver cancer, breast cancer, liver cancer, endometrioid cancer, endometrioid cancer, pituitary cancer, adrenal cancer, soft tissue sarcoma, urethral cancer, chronic or acute leukemia, lymphocytic lymphoma, hepatocellular carcinoma, gastric cancer, pancreatic cancer, Wherein the cancer is at least one selected from the group consisting of colon cancer, colon cancer, endometrial or uterine cancer, salivary gland cancer, renal cancer, prostate cancer, mucin cancer, thyroid cancer, head and neck cancer, brain cancer and osteosarcoma.

9. The kit of claim 8, wherein the kit is a protein chip kit.