KR101790920B1

KR101790920B1 - Crp 검출 스트립

Info

Publication number: KR101790920B1
Application number: KR1020170002382A
Authority: KR
Inventors: 신승식; 전소연
Original assignee: 신승식; 전소연
Priority date: 2017-01-06
Filing date: 2017-01-06
Publication date: 2017-10-26

Abstract

CRP 검출 스트립을 제공한다. 본 발명의 실시예에 따른 CRP 검출 스트립은, 샘플 내에 포함된 기준 농도 이상의 분석 대상 물질을 검출하기 위한 CRP 검출 스트립(100)으로서, 상기 샘플이 투입되는 샘플 패드(110), 상기 샘플 패드(100)의 일측에 연결되며, 상기 분석 대상 물질과 항원-항체 결합하는 제1항체(121) 및 제1항체-결합매개물 결합체(122)가 구비된 블로킹 패드(120), 상기 블로킹 패드(120)의 일측에 연결되며, 상기 분석 대상 물질과 항원-항체 결합하는 제1항체-발색물질 결합체(131)와, 제2항체-발색물질 결합체(132)가 구비된, 컨쥬게이션 패드(130) 및 상기 컨쥬게이션 패드(130)의 일측에 연결되며, 상기 제1항체-결합매개물 결합체(121)를 구성하는 결합매개물과 결합하는 단백질(142)이 고정된 검사선(141) 및 상기 제2항체-발색물질 결합체(132)를 구성하는 제2항체와 결합하는 제3항체(144)가 고정된 대조선(143)이 구비된 검출 패드(140)를 포함할 수 있다.

Description

CRP 검출 스트립{STRIP FOR DETECTING C-REACTIVE PROTEIN}

본 발명은 스트립에 관한 것으로, 보다 상세하게는 기준 농도 이상의 C-반응성 단백질(C-Reactive Protein, 이하 "CRP"라 칭함.) 존재 하에서만 신호가 검출되는 CRP 검출 스트립에 관한 것이다.

신속 면역 진단 키트란 혈액이나 소변 등 체액 한 방울로 10분 이내에 질병 혹은 그 원인 물질을 면역 크로마토그래피법으로 간단히 진단할 수 있는 키트를 말한다. 면역 크로마토그래피법은 면역화학적 방법(Immunochemistry)과 크로마토그래피(Chromatography)를 결합한 검사방법으로 항원에 대한 항체의 특이적인 면역 반응성과 골드입자(Colloidal gold)의 발색 특성 및 유동성 막(Porous membrane)의 모세관현상에 의한 분자의 이동을 응용한 검사 방법이다. 면역 크로마토그래피법을 이용한 신속 면역 진단 키트는 검사결과를 쉽고 빠르게 판정할 수 있다는 점에서 여러 방면의 진단 키트에 이용되며 임신 진단 키트와 독감 진단 키트가 이에 속한다.

CRP는 몸에 염증이 있을 경우 발현되는 단백질이다. 질병이 생긴 경우, CRP는 6~24시간 이내에 증가하며, 질병에서 회복되면 24시간 이내에 감소, 소실하는 특성을 가진다. 이러한 특성 때문에 CRP는 염증성 질환의 판정, 체내 조직의 괴사 여부 및 그 중증도 판정, 경과 관찰과 예후 판정에 있어서 매우 유용한 표지자가 될 수 있다.

2015년 건강 보험 심사 평가원에 따르면 의료기관 방문 시 바이러스성 독감과 같은 질환에는 효과가 없는 항생제의 처방율이 OECD 평균의 1.4배에 이른다고 보고되고 있다.

네덜란드에서는 호흡기 감염 환자의 질병 진단 시 CRP 검사의 효과를 확인하기 위해 431명의 환자를 대상으로 비교 실험을 실시한 바 있다. 실험 결과, CRP 검사를 받은 환자의 항생제 처방율(31%)이 CRP 검사를 받지 않은 환자의 항생제 처방율(53%)보다 유의미하게 낮은 결과를 보였으며, 질병 회복 속도는 CRP 검사를 받은 환자와 받지 않은 환자 간에 차이가 없는 것으로 나타났다.

현재 CRP 검사는 EIA(Enzyme-immuno-assay, 효소 면역 측정법), RIA(Radio-immuno-assay, 방사 면역 측정법), LPIA(Latex photometric immunoassay, 라텍스 근적외 면역 비탁법) 등이 있으나, 이 방법들은 고가의 장비와 장비 운용을 위한 고숙련 인력이 필요하며 검진 비용 및 검사에 많은 시간이 소요되는 단점이 있다.

CRP 검사는 의료기관의 항생제 남용 예방 및 처방 감소에 효과가 있는 것이 드러났으며 특히 최근에는 지나친 항생제 남용으로 강한 내성이 생긴 슈퍼박테리아가 사회적 문제가 되는 바, 신속하게 CRP를 검사할 수 있는 신속 면역 진단 키트에 대한 수요는 높아지고 있다.

한국등록특허문헌 제10-0560174호 (2006.03.06) 한국등록특허문헌 제10-1540608호 (2015.07.24)

본 발명은 전술한 종래 기술의 문제점들을 해결하기 위하여 안출된 것이다.

특히, 샘플 내에 포함된 CRP의 농도가 항생제 처방의 기준이 되는 농도 이상일 경우 신호가 나타나도록 하는 검출 스트립을 제공하고자 한다.

상기와 같은 과제를 해결하기 위한 본 발명의 일 실시예는, 샘플 내에 포함된 기준 농도 이상의 분석 대상 물질을 검출하기 위한 CRP 검출 스트립(100)으로서, 상기 샘플이 투입되는 샘플 패드(110), 상기 샘플 패드(100)의 일측에 연결되며, 상기 분석 대상 물질과 항원-항체 결합하는 제1항체(121) 및 제1항체-결합매개물 결합체(122)가 구비된 블로킹 패드(120), 상기 블로킹 패드(120)의 일측에 연결되며, 상기 분석 대상 물질과 항원-항체 결합하는 제1항체-발색물질 결합체(131)와, 제2항체-발색물질 결합체(132)가 구비된, 컨쥬게이션 패드(130) 및 상기 컨쥬게이션 패드(130)의 일측에 연결되며, 상기 제1항체-결합매개물 결합체(121)를 구성하는 결합매개물과 결합하는 단백질(142)이 고정된 검사선(141) 및 상기 제2항체-발색물질 결합체(132)를 구성하는 제2항체와 결합하는 제3항체(144)가 고정된 대조선(143)이 구비된 검출 패드(140);를 포함하는, CRP 검출 스트립을 제공한다.

일 실시예에 있어서, 상기 분석 대상 물질은 C-반응성 단백질(C-Reactive Protein : CRP)이고, 상기 제1항체(121)는 CRP 안티바디인 것이 바람직하다.

일 실시예에 있어서, 상기 검사선(141)과 상기 대조선(142)은 발색물질의 발색에 의해 신호가 나타나는 것이 바람직하다.

일 실시예에 있어서, 상기 발색물질은 금 나노 입자인 것이 바람직하다.

일 실시예에 있어서, 상기 단백질(142)은, 복수의 결합 자리(Binding site)를 갖는 것이 바람직하다.

일 실시예에 있어서, 상기 결합매개물은 바이오틴(Biotin)이고, 상기 단백질(142)은 상기 바이오틴과 결합하는 스트렙타아비딘(Streptavidin)인 것이 바람직하다.

일 실시예에 있어서, 상기 검사선(141)의 신호는 상기 단백질(142)이 상기 제1항체-결합매개물 결합체(122) 및 상기 제1항체-발색물질 결합체(131)와 항원-항체 결합한 분석 대상 물질과 결합함으로써 나타나는 것이 바람직하다.

일 실시예에 있어서, 상기 검사선(141)의 신호는 상기 샘플 내에 포함된 분석 대상 물질이 상기 기준 농도 이상일 경우 나타나는 것이 바람직하다.

일 실시예에 있어서, 상기 기준 농도는 10μg/ml인 것이 바람직하다.

일 실시예에 있어서, 상기 대조선(141)의 신호는 상기 제3항체(144)가 상기 제2항체-발색물질 결합체(132)와 결합함으로써 나타나는 것이 바람직하다.

일 실시예에 있어서, 상기 검출 패드(140)의 일측에 연결되는 흡수 패드(150)를 더 포함하며, 상기 샘플 패드(110)에 투입된 샘플은 상기 블로킹 패드(120), 상기 컨쥬게이션 패드(130), 상기 검출 패드(140) 및 상기 흡수 패드(150) 순으로 전개되는 것이 바람직하다.

일 실시예에 있어서, 상기 제1항체(121)와 상기 제1항체-결합매개물 결합체(122)가 상기 분석 대상 물질의 복수의 항원결정부위(Epitope)에 항원-항체 결합되며, 상기 제1항체-발색물질 결합체(131)가 상기 제1항체(121) 및 상기 제1항체-결합매개물 결합체(122)와 결합하지 않은 나머지 항원결정부위에 결합되며, 상기 제1항체-결합매개물 결합체(122)와 결합한 분석 대상 물질이 상기 단백질(142)에 결합되는 것이 바람직하다.

본 발명의 CRP 검출 스트립에 따르면, 발색 물질로 금 나노 입자를 사용하기 때문에 신호를 육안으로 확인 가능하다. 따라서, 신호를 읽기 위한 별도의 형광 리더기 등의 고가의 장비가 필요치 않다.

또한, 항생제 처방의 기준이 되는 CRP 존재하에서만 신호가 나타나므로, 항생제가 필요치 않은 경우에도 항생제를 남용하는 현상을 방지할 수 있다. 이로 인해, 지나친 항생제 남용으로 강한 내성이 생긴 슈퍼박테리아가 발생하는 사회적 문제 또한 해결 가능하다.

또한, 항생제 처방을 위해서는 CRP 진단이 선결적으로 진행되어야 한다는 국제적 추세를 반영한 발명으로서, 소량의 샘플로도 빠른 시간 내에 체내의 염증 정도를 진단하는 것이 가능하다.

도 1은 본 발명의 실시예에 따른 CRP 검출 스트립의 사시도이다.
도 2는 도 1의 CRP 검출 스트립과 함께 그에 포함된 물질들을 개략적으로 나타낸 도면이다.
도 3은 도 2의 CRP 검출 스트립을 이용한 검출 결과의 일 예를 나타낸 도면으로서, 도 3-(a)는 CRP가 기준 농도 미만일 경우의 검출결과를 나타낸 것이고, 도 3-(b)는 CRP가 기준 농도 이상일 경우의 검출 결과를 나타낸 것이다.
도 4 및 도 5는 샘플 내에 포함된 CRP가 기준 농도 미만일 경우, 샘플이 CRP 검출 스트립에 전개되는 과정을 나타낸 도면이다.
도 6 및 도 7은 샘플 내에 포함된 CRP가 기준 농도 이상일 경우, 샘플이 CRP 검출 스트립에 전개되는 과정을 나타낸 도면이다.

1. CRP 검출 스트립의 구성

도 1 내지 도 3을 참조하여 본 발명의 실시예에 따른 CRP 검출 스트립의 구성에 대해 보다 구체적으로 설명한다.

도 1을 참조하면, 본 발명의 실시예에 따른 CRP 검출 스트립(100)은 샘플 패드(110), 블로킹 패드(120), 컨쥬게이션 패드(130), 검출 패드(140), 흡수 패드(150) 및 지지대(160)를 포함한다.

샘플 패드(110)는 분석 대상 물질을 포함하는 샘플이 투입되는 부분이다. 여기서 샘플로는 혈액 샘플이 대표적으로 적용될 수 있으며, 분석 대상 물질은 복수의 항원결정부위를 갖는 것이 바람직하다. 특히, 분석 대상 물질은 CRP(C-Reactive Protein, C-반응성 단백질)인 것이 바람직하다. 이하에서는, 분석 대상 물질이 CRP인 경우를 예로 들어 보다 구체적으로 설명한다.

샘플 패드(110)에 샘플을 투입하면, 샘플은 모세관 현상에 의해 블로킹 패드(120), 컨쥬게이션 패드(130), 검출 패드(140)를 통하여 이동하며, 최종적으로 흡수 패드(150)에 흡수된다.

블로킹 패드(120)는 샘플 패드(110)의 일측에 연결된다. 도 2를 참조하면, 블로킹 패드(120)에는 제1항체(121)와 제1 항체-결합매개물 결합체(122)가 구비된다.

여기서, 제1항체(121)는 CRP와 결합하는 CRP 안티바디인 것이 바람직하다.

CRP는 도 3에 도시된 바와 같이, 5개의 항원결정부위(Epitope)를 갖는다. (첨부된 도면에는 편의를 위하여 정오각형으로 도시하였다.)

제1항체-결합매개물 결합체(122)는 후술하는 검사선(141)에 고정된 단백질(142)에 결합하게 된다. 단백질(142)과 결합한 CRP는 CRP에 결합된 제1항체-발색물질 결합체(131)의 발색에 의해 신호가 나타난다.

제1항체(121)와 제1항체-결합매개물 결합체(122)는 CRP에 존재하는 5곳의 항원결정 부위 각각에 동일한 확률로 결합하며, 그 결합의 분포는 제1항체(121)와 제1항체-결합매개물(122)의 농도비를 조절함으로써 결정된다. 이 때, 제1항체(121)는 항원결정 부위를 블로킹하는 역할을 하며, 제1항체-결합매개물 결합체(122)는 검사선(141)에 결합하도록 하는 가교 역할을 한다. 그리고, 제1항체-발색물질 결합체(131)는 발색신호를 나타내는 역할을 한다. 샘플 내 CRP의 농도가 낮은 경우(10ug/ml 미만일 경우), 제1항체(121)와 제1항체-결합매개물 결합체(122)에 의하여 CRP 상에 존재하는 모든 항원결정 부위가 결합되며, 제1항체-발색물질 결합체(131)는 결합하지 못하므로 검사선(141)에 결합하더라도 신호는 나타나지 않는다. 그러나, CRP의 농도가 높은 경우(10ug/ml 이상일 경우), 컨쥬게이션 패드(130)에 구비되는 모든 제1항체(121)와 제1항체-결합매개물 결합체(122)가 CRP에 결합하더라도, 비어있는 항원결정 부위가 존재하게 된다. 이 비어 있는 항원결정 부위에 제1항체-발색물질 결합체(131)가 결합하게 되고, 이 경우에만 검사선(141)에 발색 신호가 나타난다. 이 때, 제1항체(121), 제1항체-결합매개물 결합체(122), 제1항체-발색물질 결합체(131)의 비율은 실험적인 값으로 결정된다.

여기서, 언급한 CRP의 10μg/ml 기준 농도는 항생제 처방의 기준이 되는 농도이다. 따라서, 검사선(141)의 신호 유무에 의해 항생제 처방 유무가 결정될 수 있다.

블로킹 패드(120)에 구비된 제1항체(121)의 양을 조절할 경우, 검사선(141)에 신호가 나타나도록 하는 기준 농도가 변동될 수 있음은 물론이다.

컨쥬게이션 패드(130)는 블로킹 패드(120)의 일측에 연결된다. 도 2를 참조하면, 컨쥬게이션 패드(130)에는 제1항체-발색물질 결합체(131)와 제2항체-발색물질 결합체(132)가 구비된다. 여기서 제2항체는 토끼 면역글로블린(Rabbit IgG)인 것이 바람직하다.

발색물질은 육안 또는 형광 센서 등을 이용하여 감지할 수 있는 신호를 발생시키는 표지이다. 발색물질로 형광물질을 사용하는 경우, 별도의 리더기가 필요하다는 점에서, 발색물질은 육안으로 관찰 가능한 금 나노 입자인 것이 바람직하다.

제1항체-발색물질 결합체(131) 또한 CRP의 항원결정부위에 결합하는 제1항체를 포함하는 것이므로, CRP의 항원결정부위에 결합할 수 있다. 다시 말해, 제1항체-발색물질 결합체(131)는 제1항체(121)와 제1항체-결합매개물 결합체(122)가 결합하지 않은 항원결정부위에 결합한다.

제1항체-발색물질 결합체(131)와 결합한 CRP는 후술하는 검사선(141)에 고정된 단백질(142)과 결합한다. 이렇듯, 검사선(141)의 단백질(142)에 결합한 CRP는 발색물질을 포함하게 된다. 발색물질의 발색으로 인해, 검사선(141)은 신호를 나타내게 된다.

또한, 컨쥬게이션 패드(130)에 구비된 제2항체-발색물질 결합체(132)는 샘플의 이동에 따라 흡수 패드(150) 쪽으로 함께 이동한다. 샘플의 이동에 따라 이동하는 제2항체-발색물질 결합체(132)는 후술하는 대조선(143)의 제3항체(144)와 결합하게 된다.

도 2를 참조하면, 검출 패드(140)는 컨쥬게이션 패드(130) 일측에 연결된다. 검출 패드(140)에는 검사선(141)과 대조선(143)이 형성된다.

검사선(141)에는 결합매개물과 결합하는 단백질(142)이 고정된다. 단백질(142)은 스트렙타아비딘(Streptavidin)인 것이 바람직하다. 스트렙타아비딘은 4분자의 바이오틴과 결합 가능하다. 스트렙타아비딘의 이러한 특성은 샘플 내에 지나치게 많은 CRP가 포함되어 있는 경우, 후크 효과(Hook's Effect)에 의해 검사선(141)에 신호가 나타나지 않는 현상을 방지한다.

검사선(141)에 고정된 단백질(142)은 결합매개물과 결합한다. 다시 말해, 제1항체-결합매개물 결합체(122)와 결합한 CRP는 제1항체-결합매개물 결합체(122)를 매개로 단백질(142)과 결합하여, 검사선(141)에 포획되는 것이다.

대조선(143)은 검사선(141)과 이격되어 형성된다. 대조선(143)에는 제2항체와 결합하는 제3항체(144)가 고정된다. 제3항체(144)는 제2항체인 토끼 면역글로블린과 결합하는 산양 항 토끼 면역글로블린(Goat anti Rabbit IgG)인 것이 바람직하다.

컨쥬게이션 패드(130)에 구비된 제2항체-발색물질 결합체(132)는 샘플의 이동에 따라 흡수 패드(150) 쪽으로 함께 이동함을 전술한 바 있다. 샘플과 함께 이동하는 제2항체-발색물질 결합체(132)는 대조선(143)에 고정된 제3항체(144)와 결합하게 된다. 다시 말해, 제3항체(144)는 제2항체-발색물질 결합체(132)를 포획하여 대조선(143)에 발색 신호가 나타나게끔 한다.

대조선(143)에 제1항체와 결합하는 항체를 고정시켜, 컨쥬게이션 패드(130)에 구비된 제1항체-발색물질 결합체(131)를 포획하여 대조선(143)에 신호가 나타나도록 할 수도 있으나, 이 경우 제1항체-발색물질 결합체(131)는 검사선(141)과 대조선(143) 신호 발색 모두에 관여하게 된다. 이는 검사선(141)의 신호 강도를 불균일하게 하는 결과를 낳게 된다.

본 발명의 실시예에 따른 검출 스트립은 대조선(143)에 포획되는 제2항체-발색물질 결합체(132)가 따로 구비되어, 검사선(141)과 대조선(143)이 어떠한 관계 없이 독립적으로 신호를 나타낼 수 있도록 하였다.

흡수 패드(150)는 검출 패드(140)의 일측에 연결된다. 샘플 패드(110)에 투입된 샘플은 흡수 패드(150) 쪽으로 이동하게 된다. 흡수 패드(150) 쪽으로 이동하면서 검사선(141)이나 대조선(143)에 포획되지 않은 물질은 흡수 패드(150)에 흡수된다.

지지대(160)는 샘플 패드(110), 블로킹 패드(120), 컨쥬게이션 패드(130), 검출 패드(140) 및 흡수 패드(150)를 지지하는 부분이다. 지지대(160) 상에 상기한 패드들을 부착하여 제조함으로써 스트립의 내구성을 높일 수 있고, 취급 및 보관을 용이하게 할 수 있다. 또한, 추가적인 외부 케이스 장착을 용이하게 할 수 있다. 지지대(160)는 나일론, PVDF, 유리 및 플라스틱으로 이루어진 군에서 선택된 재료로 형성된 것일 수 있다.

2. CRP 검출 과정

도 4 내지 도 7을 참조하여 CRP 검출 스트립(100)을 이용한 CRP 검출 과정을 구체적으로 설명한다.

도 4 및 도 5는 샘플 내에 포함된 CRP가 기준 농도 미만일 경우, 샘플이 CRP 검출 스트립(100)에 전개되는 과정을 나타낸 도면이다. 여기서 기준 농도는 항생제 처방의 기준이 되는 10μg/ml인 것이 바람직하다.

먼저, 도 4-(a)에 도시된 바와 같이, 샘플 패드(110)에 CRP를 포함하는 샘플을 투입한다. 샘플 패드(110)에 투입된 샘플은 모세관 현상에 의해 흡수 패드(150) 쪽으로 전개된다.

다음, 도 4-(b)에 도시된 바와 같이, 블로킹 패드(120)로 전개된 샘플의 CRP가 제1항체(121) 및 제1항체-결합매개물 결합체(122)와 결합한다. 제1항체(121)는 제1항체-결합매개물 결합체(122)와 경쟁적으로 CRP의 항원결정부위에 결합하게 된다. 샘플 내의 CRP가 낮은 농도일 경우, CRP 상의 항원결정부위는 제1항체(121)와 제1항체-결합매개물 결합체(122)에 의해 모두 결합되며, 컨쥬게이션 패드(130) 상에 구비된 제1항체-발색물질 결합체(131)는 CRP의 항원결정부위에 결합되지 못한다. 다시 말해, 도 4-(c)에 도시된 바와 같이, 컨쥬게이션 패드(130)로 전개된 낮은 농도의 CRP는 항원결정부위가 제1항체(121)와 제1항체-결합매개물 결합체(122)에 모두 결합된 상태이므로, 제1항체-발색물질 결합체(131)와 결합하지 못하게 되어 발색은 나타나지 않는다. 여기서 결합매개물은, 바이오틴(Biotin)인 것이 바람직하며, 발색물질은 금 나노 입자인 것이 바람직하다.

다음, 도 5-(d)에 도시된 바와 같이, 검출 패드(140)의 검사선(141)으로 전개된 샘플은 검사선(141)에 고정된 단백질(142)과 결합할 수 있는 결합매개물을 포함하지 않은 상태이거나, 포함하였다 하더라도 발색물질을 포함하지 않은 상태이다. 따라서, 검사선(141)에 고정된 단백질(142)과 결합하더라도 발색을 하지 못하며, 결합을 하지 않을 경우에는 대조선(143) 쪽으로 이동하게 된다. 여기서 단백질(142)은, 바이오틴과 결합하는 복수의 결합자리를 갖는 것이 바람직하며 특히, 스트렙타아비딘(Streptavidin)인 것이 바람직하다.

다음, 도 5-(e)에 도시된 바와 같이, 검출 패드(140)의 대조선(143)으로 전개된 샘플에 포함된 제2항체-발색물질 결합체(132)는 대조선(143)에 고정된 제3항체(144)와 결합한다. 다시 말해, 발색물질은 제2항체를 매개로 하여 제3항 체(144)와 결합하는 것이다. 대조선(143)에 고정된 제3항체(144)에 의해 발색물질을 포함하는 제2항체-발색물질 결합체(132)가 포획되므로, 대조선(143)은 신호를 나타내게 된다.

다음, 검사선(141)과 대조선(143)에 모두 포획되지 않은 나머지 샘플 물질이 흡수 패드(150)에 흡수된다.

도 4와 도 5에 도시된 바와 같이, 샘플 내에 포함된 CRP가 기준 농도 미만일 경우, 검사선(141)에는 신호가 나타나지 않고 대조선(143)에만 신호가 나타남을 확인할 수 있다.

도 6 및 도 7은 샘플 내에 포함된 CRP가 기준 농도 이상일 경우, 샘플이 CRP 검출 스트립(100)에 전개되는 과정을 나타낸 도면이다. 여기서 기준 농도는 항생제 처방의 기준이 되는 10μg/ml인 것이 바람직하다.

먼저, 도 6-(a)에 도시된 바와 같이, 샘플 패드(110)에 CRP를 포함하는 샘플을 투입한다. 샘플 패드(110)에 투입된 샘플은 모세관 현상에 의해 흡수 패드(150) 쪽으로 전개된다.

다음, 도 6-(b)에 도시된 바와 같이, 블로킹 패드(120)로 전개된 샘플의 CRP가 제1항체(121) 및 제1항체-결합매개물 결합체(122)와 결합한다. 도 6-(b)와 같이 높은 농도의 CRP 하에서는, 블로킹 패드(120)의 모든 제1항체(121)와 제1항체-결합매개물 결합체(122)가 CRP의 항원결정부위에 결합하더라도 비어 있는 항원결정부위가 존재한다. 여기서 결합매개물은, 바이오틴(Biotin)인 것이 바람직하다.

다음, 도 6-(c)에 도시된 바와 같이, 컨쥬게이션 패드(130)로 전개된 샘플의 CRP의 비어 있는 항원결정부위에 제1항체-발색물질 결합체(131)가 결합한다. 따라서, 높은 농도의 CRP 하에서는 컨쥬게이션 패드(130)에 구비된 제1항체-발색물질 결합체(131)가 CRP의 항원결정부위에 결합할 수 있는 것이다.

또한, 컨쥬게이션 패드(130)에 구비된 제2항체-발색물질 결합체(132)는 샘플과 함께 흡수 패드(150) 쪽으로 이동하게 된다. 여기서 발색물질은, 육안으로 관찰할 수 있는 금 나노 입자인 것이 바람직하다.

다음, 도 7-(d)에 도시된 바와 같이, 검출 패드(140)의 검사선(141)으로 전개된 샘플은 검사선(141)에 고정된 단백질(142)과 결합하는 결합매개물을 포함하고 있는 상태이다. 따라서, 제1항체-결합매개물 결합체(122)와 결합하는 CRP는 검사선(141)에 고정된 단백질(142)에 의해 포획된다. 또한, 단백질(142)과 결합하는 CRP는 제1항체-발색물질 결합체(131) 또한 가지는 것이므로 발색물질의 발색에 의해 검사선(141)에 신호가 나타나게 된다. 여기서 단백질(142)은, 바이오틴과 결합하는 복수의 결합자리를 갖는 것이 바람직하며 특히, 스트렙타아비딘(Streptavidin)인 것이 바람직하다.

다음, 도 7-(e)에 도시된 바와 같이, 검출 패드(140)의 대조선(143)으로 전개된 샘플에 포함된 제2항체-발색물질 결합체(132)는 대조선(143)에 고정된 제3항체(144)와 결합한다. 다시 말해, 발색물질은 제2항체를 매개로 하여 제3항체(144)와 결합하는 것이다. 대조선(143)에 고정된 제3항체(144)에 의해 발색물질을 포함하는 제2항체-발색물질 결합체(131)가 포획되므로, 대조선(143)은 신호를 나타내게 된다.

다음, 도 7-(f)에 도시된 바와 같이, 검사선(141)과 대조선(143)에 모두 포획되지 않은 나머지 샘플 물질이 흡수 패드(150)에 흡수된다.

도 6 및 도 7에 도시된 바와 같이, 샘플 내에 포함된 CRP가 기준 농도 이상일 경우, 검사선(141)과 대조선(143)에 모두 신호가 나타남을 확인할 수 있다.

이상, 본 명세서에는 본 발명을 당업자가 용이하게 이해하고 재현할 수 있도록 도면에 도시한 실시예를 참고로 설명되었으나 이는 예시적인 것에 불과하며, 당업자라면 본 발명의 실시예로부터 다양한 변형 및 균등한 타 실시예가 가능하다는 점을 이해할 것이다. 따라서 본 발명의 보호범위는 청구범위에 의해서 정해져야 할 것이다.

100: CRP 검출 스트립
110: 샘플 패드
120: 블로킹 패드
121: 제1항체
122: 제1항체-결합매개물 결합체
130: 컨쥬게이션 패드
131: 제1항체-발색물질 결합체
132: 제2항체-발색물질 결합체
140: 검출 패드
141: 검사선
142: 단백질
143: 대조선
144: 제3항체
150: 흡수 패드
160: 지지대

Claims

샘플 내에 포함된 기준 농도 이상의 분석 대상 물질을 검출하기 위한 CRP 검출 스트립(100)으로서,
상기 샘플이 투입되는 샘플 패드(110);
상기 샘플 패드(100)의 일측에 연결되며, 상기 분석 대상 물질과 항원-항체 결합하는 제1항체(121) 및 제1항체-결합매개물 결합체(122)가 구비된 블로킹 패드(120);
상기 블로킹 패드(120)의 일측에 연결되며, 상기 분석 대상 물질과 항원-항체 결합하는 제1항체-발색물질 결합체(131)와, 제2항체-발색물질 결합체(132)가 구비된, 컨쥬게이션 패드(130); 및
상기 컨쥬게이션 패드(130)의 일측에 연결되며, 상기 제1항체-결합매개물 결합체(121)를 구성하는 결합매개물과 결합하는 단백질(142)이 고정된 검사선(141) 및 상기 제2항체-발색물질 결합체(132)를 구성하는 제2항체와 결합하는 제3항체(144)가 고정된 대조선(143)이 구비된 검출 패드(140);를 포함하며,
상기 분석 대상 물질은 복수의 항원결정부위(Epitope)를 갖는 것이고,
상기 블로킹 패드(120)에서, 상기 제1항체(121)와 상기 제1항체-결합매개물 결합체(122)가, 상기 분석 대상 물질의 복수의 항원결정부위에 항원-항체 결합되며,
상기 컨쥬게이션 패드(130)에서, 상기 제1항체-발색물질 결합체(131)가, 상기 제1항체(121) 및 상기 제1항체-결합매개물 결합체(122)와 결합하지 않은 나머지 항원결정부위에 결합되고,
상기 검사선(141)에서, 상기 제1항체-결합매개물 결합체(122)와 결합한 분석 대상 물질이, 상기 단백질(142)에 결합되며,
상기 검사선(141)의 신호는 상기 단백질(142)이 상기 제1항체-결합매개물 결합체(122) 및 상기 제1항체-발색물질 결합체(131)와 항원-항체 결합한 분석 대상 물질과 결합함으로써 나타나는,
CRP 검출 스트립.
제1항에 있어서,
상기 분석 대상 물질은 C-반응성 단백질(C-Reactive Protein : CRP)이고,
상기 제1항체(121)는 CRP 안티바디인,
CRP 검출 스트립.
제1항에 있어서,
상기 검사선(141)과 상기 대조선(142)은 발색물질의 발색에 의해 신호가 나타나는,
CRP 검출 스트립.
제3항에 있어서,
상기 발색물질은 금 나노 입자인,
CRP 검출 스트립.
삭제
제1항에 있어서,
상기 결합매개물은 바이오틴(Biotin)이고,
상기 단백질(142)은 상기 바이오틴과 결합하는 스트렙타아비딘(Streptavidin)인,
CRP 검출 스트립.
삭제
제3항에 있어서,
상기 검사선(141)의 신호는 상기 샘플 내에 포함된 분석 대상 물질이 상기 기준 농도 이상일 경우 나타나는,
CRP 검출 스트립.
제8항에 있어서,
상기 기준 농도는 10μg/ml인,
CRP 검출 스트립.
제3항에 있어서,
상기 대조선(141)의 신호는 상기 제3항체(144)가 상기 제2항체-발색물질 결합체(132)와 결합함으로써 나타나는,
CRP 검출 스트립.
제1항에 있어서,
상기 검출 패드(140)의 일측에 연결되는 흡수 패드(150)를 더 포함하며,
상기 샘플 패드(110)에 투입된 샘플은 상기 블로킹 패드(120), 상기 컨쥬게이션 패드(130), 상기 검출 패드(140) 및 상기 흡수 패드(150) 순으로 전개되는,
CRP 검출 스트립.
삭제