KR101774944B1 - A Testing Kit for Determining Sperm Count - Google Patents

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Abstract

본 발명은 정자수 검출 키트에 관한 것으로, 지지체와 상기 지지체 상에 형성되며 반응 시약이 피복된 검출체로 이루어지며, 상기 반응 시약은 락트산염, NAD+, 디아포라아제, 테트라졸륨 염, pH 완충제, 계면활성제를 포함하여 구성되며, 사정후 소변(PEU) 샘플을 이용하여 간편하면서도 빠르게 정자수를 검출할 수 있는 것을 특징으로 한다.The present invention relates to a sperm count detecting kit comprising a support and a detection member formed on the support and coated with a reaction reagent, wherein the reaction reagent is selected from lactate, NAD + , diaphorase, tetrazolium salt, pH buffer, And a surfactant, and is characterized by being able to detect the number of spermatozoa easily and quickly using a sample of urine (PEU) after ejaculation.

Description

정자수 측정 키트{A Testing Kit for Determining Sperm Count}{A Testing Kit for Determining Sperm Count}

본 발명은 정자수를 간편하게 측정할 수 있는 정자수 측정 키트에 관한 것이다.The present invention relates to a kit for measuring the number of spermatozoa capable of easily measuring the number of spermatozoa.

최근 환경오염 및 환경호르몬에 대한 노출로 인해 정자수가 감소하는 경우가 다수 보고되고 있다. 최근에는 남성 정자수가 정액 1㎖당 600만개에 불과해 50년 전의 1억 5000만개의 40%에 불과하다는 보고도 있다.Recently, the number of sperm counts is decreasing due to exposure to environmental pollutants and environmental hormones. In recent years, the number of male sperm per ml of seminal fluid is only 6 million, 50 million years ago, just 40% of the report is only 150 million.

이에 따라 남성불임율이 증가하고 있으며, 남성불임의 진단을 위한 정액검사가 많이 행해지고 있다. 그러나 이러한 정액검사를 위해서는 정액 채취 전 2~3일 간의 금욕이 필요하며, 정자수의 자연변성으로 인해 1~3개월 간격으로 2~3회 반복검사가 필요하다.As a result, the rate of male infertility is increasing, and a lot of semen tests for diagnosis of male infertility are performed. However, for this semen test, abstinence is required for 2 ~ 3 days before sperm sampling, and it is necessary to repeat the test 2-3 times at 1 ~ 3 months intervals due to natural denaturation of sperm count.

정액의 채취를 위해서는 자위행위에 의해 얻은 정액표본을 저장용기에 수집하거나, 정자에 대하여 무독성인 실라스틱 콘돔을 사용한 성교를 통해 수집해야 한다. 이러한 정액검사에는 많은 시간과 비용이 소요되며, 전문가에 의한 판정이 필요하므로, 임상검사를 위한 장소에서의 측정이 필요하게 된다.For semen collection, semen specimens obtained by masturbation must be collected in storage containers or collected through sexual intercourse using a non-toxic silastic condom for sperm. Such a semen test requires a lot of time and money, and it is necessary to make a judgment at a place for clinical examination because it is necessary to make a judgment by an expert.

보다 일반적인 측정방법으로는 정액을 사용한 화학적 검출방법으로서 정액에만 존재하는 특수한 단백질의 측정, 핵산의 측정 등이 알려져 있다. 이러한 측정 방법을 정자수 측정용 시약으로 활용한 예로서 일본 공개특허공보 특개2004-129620호에서는 정자수와 비례하는 유산탈수소효소(lactate dehydrogenase isoenzyme C4: LDH-C4)를 측정함으로써 정자수를 측정하는 방법이 개시되어 있다.As a more general method of measurement, there is known a method of chemical detection using semen, such as measurement of specific proteins present only in semen, measurement of nucleic acid, and the like. As an example of using this measurement method as a reagent for measuring the number of sperm, Japanese Unexamined Patent Application Publication No. 2004-129620 measures sperm count by measuring lactate dehydrogenase isoenzyme C4 (LDH-C4) proportional to the number of sperm Method is disclosed.

그러나 상기 방법에 의해서 정자수를 측정하기 위해서는 결국 정액을 채취하여 시약과 혼합함으로써 측정해야 하는 문제점이 있다.However, in order to measure the number of spermatozoa by the above method, there is a problem that semen is collected and mixed with a reagent.

또한, 일본공개특허공보 특개2000-139499호에서는 정액에 포함된 플락토오스로부터 효소반응으로 NADH를 생성하고 상기 NADH에 의해 발광반응할 수 있는 시페아아제를 첨가함으로써 정자수를 측정하는 키트가 개시되어 있다.Japanese Unexamined Patent Application Publication No. 2000-139499 discloses a kit for measuring sperm count by adding NADH from enzyme fructose to fructose contained in semen and adding epiacase capable of emitting light by NADH have.

그러나 상기 키트 역시 정액을 채취하여 ATP, 헥소키나아제 등을 첨가하여 측정하는 번거로운 방법을 취해야 하므로 간편하게 측정하는데에는 문제가 있다.However, the kit also has a problem in that it is difficult to measure easily because it is necessary to take a complicated method of collecting sperm and adding ATP, hexokinase or the like.

이와는 달리, 사정후 소변(Post-ejaculatory urine: PEU) 샘플은 역행성 사정을 진단하는 방법에 사용되고 있다. 즉, 사정시 정액이 요도로 나오지 않고 방광으로 사정되는 경우, 상기 PEU 샘플을 측정하여 정액을 확인할 수 있게 된다.In contrast, post-ejaculatory urine (PEU) samples have been used to diagnose retrograde ejaculation. That is, if the semen does not go out into the urethra during ejaculation and is assessed as a bladder, the PEU sample can be measured to check the semen.

통상적으로 PEU 테스트에서 10~15 sperm/HPF(High Power Field) 이상인 경우 역행성 사정으로 진단되므로, PEU 샘플 내에 존재하는 정자는 역행성 사정에 의해 방광으로 들어간 정자 및 사정후 배뇨에 이해 요도로부터 씻겨져 내려온 정자가 혼재되게 된다. 그럼에도 불구하고, 정상적인 PEU 테스트 값을 나타내는 사람에 대하여 PEU 샘플의 정자수를 측정할 수 있다면, 적어도 평균적인 정자수를 간편하게 측정하여 정자수에 대한 지표로 사용할 수 있을 것이다.In PEU test, it is diagnosed as retrograde ejaculation if it is above 10 ~ 15 sperm / HPF (High Power Field). Therefore, sperm in PEU sample is washed out from the urethra The sperm that came down will be mixed. Nevertheless, if the number of spermatozoa of a PEU sample can be measured for a person exhibiting a normal PEU test value, at least the average number of spermatozoa can be easily measured and used as an indicator of the number of spermatozoa.

따라서, 정상인의 PEU 샘플로부터 정자수를 측정하는 방법은 특수한 장치나 전문가의 도움, 임의적 정액 채취 없이도 가정에서 간단히 정자수를 측정할 수 있는 간편한 방법을 제공할 수 있게 된다.Thus, the method of measuring the number of spermatozoa from a normal human PEU sample can provide a simple method of measuring the sperm count at home, without the aid of special devices or experts, and without taking any semen.

일본 공개특허공보 특개2004-129620호(2004.04.30.)Japanese Patent Application Laid-Open No. 2004-129620 (Apr. 30, 2004) 일본 공개특허공보 특개2000-139499호(2000.05.23.)Japanese Unexamined Patent Application Publication No. 2000-139499 (May 23, 2000)

본 발명은 종래의 정자수 측정 키트의 문제점을 해결하기 위한 것으로, PEU 샘플로 정자수를 측정할 수 있게 함으로써, 특수한 장치나 전문가의 도움, 임의적 정액 채취 없이도 정자수를 간편하게 측정할 수 있는 간이 측정 키트를 제공하고자 하는 것이다.The present invention solves the problems of the conventional sperm count kit, and it is possible to measure the number of spermatozoa by the PEU sample, thereby providing a simple device capable of easily measuring the number of spermatozoa without any special semen collection, Kits. ≪ / RTI >

상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명의 정자수 검출 키트는 사정후 소변 샘플을 이용하여 검출하는 것으로서, 지지체와 상기 지지체 상에 형성되며 반응 시약이 피복된 검출체로 이루어지며, 상기 반응 시약은 락트산염, NAD+, 디아포라아제, 테트라졸륨 염, pH 완충제, 계면활성제를 포함하는 것을 특징으로 한다.In order to accomplish the above object, the present invention provides a sperm count detecting kit comprising a supporter and a detection body formed on the supporter and coated with a reaction reagent, wherein the reaction reagent comprises lactic acid Salts, NAD + , diaphorase, tetrazolium salts, pH buffering agents, and surfactants.

또한, 상기 지지체는 플라스틱 또는 내수성 종이로 이루어지며, 상기 검출체는 부직포, 섬유, 셀룰로오스 중 어느 하나의 다공성 재료인 것을 특징으로 한다.In addition, the support is made of plastic or water-resistant paper, and the detector is a porous material of any one of a nonwoven fabric, a fiber, and a cellulose.

또한, 상기 검출체 상에 겹쳐서 사용하며, 일면에 굴절율 이방성을 갖는 물질로 이루어진 광효율 향상층이 형성된 폴리이미드 필름을 추가적으로 포함하며, 상기 광효율 향상층은 일축성 필름층 및 등방성 필름층이 교대로 번갈아 다수층으로 형성되는 것을 특징으로 한다.The optical efficiency enhancing layer may be formed by alternately alternating a monolithic film layer and an isotropic film layer, wherein the optical efficiency enhancing layer is formed of a material having a refractive index anisotropy, And is formed of a plurality of layers.

본 발명에 따른 정자수 검출 키트는 사정후 소변 샘플로 간편하게 정자수를 측정할 수 있으므로, 특수한 장치나 전문가의 도움, 임의적 정액 채취 없이도 가정에서 간단히 정자수를 측정할 수 있다.The sperm count kit according to the present invention can easily measure the number of spermatozoa with a urine sample after the ejaculation, so that it is possible to easily measure the number of spermatids at home without the help of a special apparatus or an expert or arbitrary semen collection.

도 1은 본 발명에 따른 정자수 검출 키트의 사시도를 나타낸 도면이다.1 is a perspective view of a sperm count detecting kit according to the present invention.

통상적으로 PEU 테스트에서 10~15 sperm/HPF(High Power Field) 이상인 경우 역행성 사정으로 진단되므로, 본 발명의 정자수 측정을 위해서는 PEU 샘플 내의 정자수가 10~15 sperm/HPF 이하인 경우에 한해서만 유효한 측정결과를 얻을 수 있다. In general, in the PEU test, when the sperm count is 10 to 15 sperm / HPF (High Power Field) or more, it is diagnosed as a retrograde spermatozoa. Therefore, in order to measure the number of spermatozoa of the present invention, Results can be obtained.

이는 본 발명의 검출 키트는 정자수의 측정 뿐만 아니라 역행성 사정의 진단에도 활용할 수 있음을 의미한다.This means that the detection kit of the present invention can be utilized not only for measurement of sperm count but also for diagnosis of retrograde ejaculation.

본 발명의 정자수 검출 키트에 의한 정자수 측정방법은 반응 시약이 도포된 검출체에 PEU 샘플이 접촉할 때, 상기 반응 시약에 포함된 락트산 염을 기질로 하여 피루브산을 생성함으로써, 유산탈수소효소에 비례하여 NAD+가 NADH로 환원되며, 상기 NADH에 의존하여 테트라졸륨 염이 디아포라아제에 의해 포르마잔을 생성한다. 이러한 반응에 의해 유산탈수소효소의 양에 비례하여 발색 강도가 달라지게 된다. 이러한 발색 강도를 측정함으로써 정자수를 측정할 수 있게 된다.The method for measuring sperm count using the sperm count kit of the present invention is characterized in that when a PEU sample is brought into contact with a detection substance coated with a reaction reagent, pyruvic acid is produced using the lactate salt contained in the reaction reagent as a substrate, Proportionately, NAD + is reduced to NADH, and depending on the NADH, tetrazolium salt forms formazan by diaphorase. This reaction causes a change in the color intensity in proportion to the amount of lactate dehydrogenase. By measuring the intensity of color development, the number of spermatozoa can be measured.

본 발명의 정자수 검출 키트는 정액을 직접 반응시키는 것이 아니라 정액이 소량 포함된 PEU 샘플을 통해 정자수를 측정하는 것이므로, 검출 키트의 PEU 샘플에 대한 응답성이 가장 큰 문제가 된다.Since the sperm count kit of the present invention measures sperm count using a PEU sample containing a small amount of semen rather than directly reacting the sperm, the response to the PEU sample of the detection kit is the biggest problem.

즉, 통상적으로, 정액을 첨가했을 때, pH가, pH 8 이상이 되어야 유효한 측정이 가능하므로, PEU 샘플에 대해서도 pH 8 이상의 값이 나올 수 있는 조건을 찾아야 한다.(통상적인 소변 샘플의 pH는 5.0 내지 6.0의 범위에 있다.)That is, normally, when the semen is added, the pH must be at least 8 to make effective measurements. Therefore, the PEU sample should also be found to have a pH of at least 8 (the pH of a typical urine sample is 5.0 to 6.0).

본 발명의 검출 키트에 의해 얻어지는 발색 강도와 정자수와의 관계는 표준 색도표와 비교함으로써 확인할 수 있으므로, 색도를 관찰하는 것만으로 개략적인 정자수를 확인할 수 있게 된다.Since the relationship between the color intensity and the number of spermatozoa obtained by the detection kit of the present invention can be confirmed by comparing with the standard color chart, it is possible to confirm the approximate number of spermatozoa simply by observing the chromaticity.

본 발명의 정자수 검출 키트는 PEU 샘플과 접촉하여 적어도 3 단계의 뚜렷한 발색 강도의 변화를 나타내어야 한다. 즉, 색상 변화가 없는 단계는 PEU 샘플 내에 유효한 정자수가 검출되지 않는 경우이며, 발색 강도가 보통인 단계는 PEU 샘플 내에 유효한 정자수가 검출되는 경우, 마지막으로 PEU 샘플의 발색 강도가 가장 큰 경우는 역행성 사정에 해당하는 경우가 된다.The sperm count detection kit of the present invention should exhibit at least three distinct changes in the intensity of color intensity in contact with the PEU sample. That is, the step without color change is a case where the number of effective sperm counts is not detected in the PEU sample. In the case where the number of spermatents in the PEU sample is detected and the colorimetric intensity of the PEU sample is the largest, It corresponds to a planetary condition.

또한, 상기 발색 강도는 정자수에 따라 서서히 변하게 되므로, 표준 색도표를 세분하여 정자수의 범위에 대한 더 자세한 정보를 제공할 수도 있다.Further, since the intensity of the color gradually changes according to the number of sperm, the standard color chart may be subdivided to provide more information on the range of the number of sperm.

본 발명의 검출체에 도포되는 반응시약은 락트산염, NAD+, 디아포라아제, 테트라졸륨 염, pH 완충제, 계면활성제를 포함하여 구성된다. 상기 반응시약은 상기 구성성분들을 혼합하여 하나의 시약으로 하여 검출체에 도포된다.The reaction reagent applied to the detector of the present invention comprises a lactate, NAD + , a diaphorase, a tetrazolium salt, a pH buffer, and a surfactant. The reaction reagent is applied to the detection body as a reagent by mixing the components.

본 발명에서 상기 락트산염은 락트산아연, 락트산칼슘, 락트산구리 등을 사용할 수 있으며, 유산탈수소효소의 기질이 될 수 있는 것이라면 어떠한 것이라도 사용할 수 있다. 상기 락트산염은 검출체에 도포되어야 하므로 도포후 고체상태로 형성되는 것이 바람직하다. 상기 락트산은 1 내지 10 중량부, 바람직하게는 1 내지 5 중량부를 포함하는 것이 바람직하다.In the present invention, the lactate may be zinc lactate, calcium lactate, copper lactate or the like, and any lactate may be used as long as it can serve as a substrate for the lactate dehydrogenase. Since the lactic acid salt should be applied to the detector, it is preferably formed into a solid state after application. The lactic acid preferably comprises 1 to 10 parts by weight, preferably 1 to 5 parts by weight.

또한, 상기 NAD+로서는 β-NAD가 바람직하지만, 디아포라아제 및 락트산 탈수소효소 중 어느 하나에 대해 보조 효소로서 작용할 수 있는 것이라면 어떠한 것이라도 사용할 수 있다. 상기 NAD+는 락트산염을 기질로서 생성한 피루브산에 의해 락트산 탈수소효소에 비례하여 NADH로 환원되며, 0.001 내지 0.1 중량부를 포함하는 것이 바람직하다.NAD + is preferably β-NAD, but any of NAD + may be used as long as it can act as a coenzyme for either diaphorase or lactate dehydrogenase. The NAD + is reduced to NADH in proportion to the lactate dehydrogenase by pyruvic acid produced as a substrate of the lactate, and preferably contains 0.001 to 0.1 part by weight.

또한, 상기 디아포라아제는 NADH에 의존하여 테트라졸륨염으로부터 포르마잔을 생성시키는 작용을 하는 것이므로, 상기 반응을 일으킬 수 있는 것이라면 어떠한 것이라도 사용할 수 있다. 상기 디아포라아제는 1 내지 100 당량, 바람직하게는 0.5 내지 50 당량을 포함할 수 있다.In addition, since the diaphorase acts to generate formazan from the tetrazolium salt depending on NADH, any diazomethane that can cause the reaction can be used. The diaphorase may contain 1 to 100 equivalents, preferably 0.5 to 50 equivalents.

또한, 상기 테트라졸륨염은 p-요오드니트로테트라졸륨 바이올렛, p-니트로테트라졸륨 블루 등을 사용할 수 있으며, 디아포라아제의 기질이 되어 NADH에 의존하여 발색을 일으키는 것이면 어떠한 것이라도 사용할 수 있다. 상기 테트라졸륨염의 양은, 0.01 중량부 내지 1 중량부, 바람직하게는 0.05 중량부 내지 0.2 중량부를 사용할 수 있다.The tetrazolium salt may be p-iodonitrotrazolium violet, p-nitrotetrazolium blue, or the like, and may be any as long as it becomes a substrate of diaphorase and causes color development depending on NADH. The amount of the tetrazolium salt may be 0.01 part by weight to 1 part by weight, preferably 0.05 part by weight to 0.2 part by weight.

본 발명의 정자수 검출 키트는 PEU 샘플을 가했을 때 발색이 일어나야 하며, pH 값이 8.0 이상인 것이 바람직하므로, pH 완충제를 첨가하여 pH를 조절할 필요가 있다. 상기 pH 완충제는 중성에서 약알칼리성의 완충제가 바람직하며, 예를 들어, 트리스히드록시메틸아미노메탄과 구연산의 혼합물을 사용할 수 있다. 또한, 검출체에의 피복을 고려하여 말레인산, 숙신산 등의 고형 유기산을 사용할 수도 있다.In the sperm count detecting kit of the present invention, coloring should occur when a PEU sample is applied, and it is preferable that pH value is 8.0 or more. Therefore, it is necessary to adjust the pH by adding a pH buffer. The pH buffer is preferably a neutral to weakly alkaline buffer, for example, a mixture of trishydroxymethylaminomethane and citric acid. It is also possible to use a solid organic acid such as maleic acid or succinic acid in consideration of coating on the detection body.

상기 pH 완충제로서, 예를 들면, 트리스히드록시메틸아미노메탄/구연산의 혼합액의 경우, 트리스하이드록시아미노메탄을 1:1 내지 5:1의 중량비로 혼합하여 사용할 수 있으며, PEU 샘플과 접촉했을 때 pH가 8 내지 8.5 정도의 범위가 되도록 조절하여 함유하게 된다.As the pH buffer, for example, in the case of a mixed solution of trishydroxymethylaminomethane / citric acid, trishydroxyaminomethane can be mixed in a weight ratio of 1: 1 to 5: 1, and when it is contacted with the PEU sample the pH is adjusted to be in the range of about 8 to 8.5.

본 발명에서는 상기 구성성분 외에 계면활성제를 더 포함할 수 있다. 상기 계면활성제는 검출용액의 분산도를 향상시키고 검출체 표면과의 상호작용을 증진시켜 도포를 더욱 용이하게 하며, PEU 샘플의 접촉에 의해 검출용액이 검출체로부터 분리되지 않도록 하기 위해 포함되는 성분이다.The present invention may further comprise a surfactant in addition to the above components. The surfactant is a component contained in order to improve dispersion of the detection solution and to enhance the interaction with the surface of the detector to facilitate the application and prevent the detection solution from being separated from the detector by contact of the PEU sample .

상기 계면활성제는 통상적인 중성 계면활성제를 사용할 수 있으며, 예를 들어, Pluronic P-123, F-127, Triton X-100 등을 사용할 수 있다.For example, Pluronic P-123, F-127, and Triton X-100 may be used as the surfactant.

본 발명의 검출용액은 상기 검출체에 도포되어 고정되게 된다. 상기 검출체는 상기 검출용액을 도포할 수 있는 것이라면 어떠한 것이라도 사용할 수 있으나, 바람직하게는 부직포, 섬유, 셀룰로오스 중 어느 하나의 다공성 재료가 바람직하다.The detection solution of the present invention is applied to the detector to be fixed. The detecting member may be any member as long as it can apply the detection solution. Preferably, the porous member is any one of a nonwoven fabric, a fiber and a cellulose.

또한, 본 발명의 검출체가 부착되는 지지체는 플라스틱 또는 내수성 종이로 이루어지는 것이 바람직하다.Further, the support to which the detector of the present invention is attached is preferably made of plastic or water-resistant paper.

본 발명의 정자수 검출 키트는 가요성의 지지체와 검출체로 이루어지므로, 테이프 형상으로 감아서 보관하거나 표면에 방수, 방오, 및 내약품성의 폴리에틸렌 필름 등을 덮을 수도 있다.Since the sperm count detecting kit of the present invention is composed of a flexible support and a detector, it can be wound in a tape form or covered with a waterproof, stainproof, and chemical resistant polyethylene film.

본 발명의 정자수 검출 키트는 PEU 샘플과 접촉하여 상기 샘플에 평균 정자수가 5 내지 30 중량%인 경우 정상적인 발색 강도를 나타내어 연한 보라색으로부터 약간 진한 보라색의 색도를 나타내며, 30 중량% 이상인 경우 매우 진한 보라색을 띄게 되어 역행성 사정 증상이 의심되는 것으로 진단할 수 있다. 또한, 평균 정자수가 5 중량% 미만인 경우, 발색이 일어나지 않아 정자수가 부족하다는 것을 확인할 수 있다.The sperm count detecting kit according to the present invention is in contact with a PEU sample and exhibits a normal color intensity when the sample has an average sperm count of 5 to 30% by weight and exhibits a purple to slightly purplish chromaticity. When the sample contains more than 30% And it can be diagnosed that the symptom of retrograde ejaculation is suspected. In addition, when the average sperm count is less than 5% by weight, color development does not occur and it can be confirmed that the number of sperm is insufficient.

상기 측정은 상기 정자수 검출 키트를 컵 등에 채취한 PEU 샘플에 30초 내지 1분간 담근 후 꺼내어 약 10 내지 15분 후의 발색 정도를 관찰함으로써 측정할 수 있으며, 배뇨 중 상기 정자수 검출 키트를 10 내지 30초간 직접 소변에 닿게 한 후 이를 약 10 내지 15분 방치하여 발색 정도를 관찰함으로써도 측정할 수 있다.The measurement can be performed by immersing the sperm count detecting kit in a PEU sample collected in a cup or the like for 30 seconds to 1 minute and then taking out and observing the degree of color development after about 10 to 15 minutes. It is also possible to measure the degree of color development by allowing the urine to be directly exposed to urine for about 30 to about 10 to 15 minutes.

본 발명의 정자수 검출 키트는 기존의 정액으로부터 검사하는 방법과는 달리 PEU 샘플을 사용하므로, 정자수에 따른 발색 강도가 상대적으로 약하게 된다. 이에 따라, 색상의 변화 정도를 관찰하기 어려워 3 단계의 뚜렷한 색상 변화만을 관찰할 수 있다.Since the sperm count detecting kit of the present invention uses a PEU sample unlike the conventional method of inspecting from semen, the color intensity of the sperm count kit is relatively weak according to the number of sperm counts. As a result, it is difficult to observe the degree of color change, so that only a clear color change of the three levels can be observed.

이러한 문제점을 보완하기 위해, 본 발명의 정자수 검출 키트는 PEU 샘플에 노출시킨 검출체 상에 광효율 향상층이 폴리이미드 필름을 겹쳐서 관찰함으로써 색상 변화를 더 세분화할 수 있게 된다.In order to solve this problem, the sperm count detecting kit of the present invention can further refine the color change by observing the polyimide film overlaid on the detector exposed to the PEU sample.

즉, 상기 광효율 향상층이 형성된 폴리이미드 필름에서 상기 광효율 향상층은 굴절율 이방성을 갖는 물질로 형성된 일축성 필름층과, 등방성 필름층이 교대로 번갈아 다수층으로 적층되어 형성될 수 있다. That is, in the polyimide film in which the light efficiency-enhancement layer is formed, the light efficiency-enhancing layer may be formed by alternately stacking a plurality of layers of a monoaxial film layer formed of a material having refractive index anisotropy and an isotropic film layer alternately.

이에 따라, 상기 일축성 필름층과, 등방성 필름층이 다수층으로 형성된 광효율 향상층은 편광자의 역할을 하게 되며, 검출판의 반응 물질에 의해 형성된 색상의 편광상태가 상기 광효율 향상층에 의하여 결정된다. 따라서 색상의 작은 차이를 크게 하며, 상기 폴리이미드 필름을 상기 색상층 위에 올림으로써 색상의 변화율을 2배 이상 증가시키게 된다.Accordingly, the light efficiency enhancing layer in which the uniaxial film layer and the isotropic film layer are formed in plural layers serves as a polarizer, and the polarization state of the hue formed by the reaction material in the detection plate is determined by the light efficiency enhancing layer . Thus, a small difference in color is increased, and the rate of change of color is increased more than two times by raising the polyimide film on the color layer.

즉, 상기 폴리이미드 필름을 PEU 샘플에 의해 색상을 나타내는 검출판에 겹침으로써 색상 차이를 더욱 확실하게 할 수 있어 더욱 정확한 정자수를 검출할 수 있게 된다.That is, by superimposing the polyimide film on the detection plate showing the color by the PEU sample, the color difference can be more surely detected, and more accurate sperm count can be detected.

이하에서는 실시예를 들어 본 발명에 관하여 더욱 상세하게 설명할 것이나, 이들 실시예는 단지 설명의 목적을 위한 것으로 본 발명의 보호 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples, but these examples are for illustrative purposes only and are not intended to limit the scope of protection of the present invention.

락트산아연 1g, β-NAD 10mg, 디아포라아제 5 당량, p-요오드니트로테트라졸륨바이올렛 15mg, 트리스하이드록시메틸 아미노메탄/구연산를 1:2 중량비로 혼합한 혼합물 1g, 시트르산 2g 및 Pluronic P-123 2g을 실온에서 30분간 혼합하였다.1 g of a mixture of zinc lactate, 10 mg of? -NAD, 5 equivalents of diaphorase, 15 mg of p-iodonitrotrazolium violet and 1: 2 by weight of trishydroxymethylaminomethane / citric acid, 2 g of citric acid and 2 g of Pluronic P- Were mixed at room temperature for 30 minutes.

상기 혼합물을 내수성 종이 지지체 상에 형성된 1㎠ 넓이의 검출체에 50mg/㎠의 양으로 도포한 후 실온에서 1시간 동안 건조하여 도 1에서 도시된 형태의 정자수 검출 키트를 제조하였다.
The mixture was applied to a 1 cm wide detector formed on a water-resistant paper support in an amount of 50 mg / cm 2 and dried at room temperature for 1 hour to prepare a sperm count kit of the type shown in FIG.

[시험예 1][Test Example 1]

실시예 1의 방법에 따라 제조된 정자수 검출 키트를 A 내지 C를 준비하고, 각각의 정자수 검출 키트에 정자수 4,000만개/㎖, 2,000만개/㎖, 100만개/㎖에 해당하는 1600, 800, 40 시그마 단위/㎖의 락트산탈수소효소를 30초간 접촉시킨 후, 접촉 완료로부터 15분이 경과할 때까지의 색상 변화를 관찰하였다.Sperm count detection kits A to C prepared according to the method of Example 1 were prepared, and each of the sperm count detection kits was filled with 1600, 800, and 10000 cells / ml, which corresponded to 40 million cells / ml, , And the change in hue from 15 s to 15 s after completion of the contact was observed after contacting the 40-sigma unit / ml lactic acid dehydrogenase for 30 seconds.

다음으로, 실시예 1의 방법에 따라 제조된 정자수 검출 키트 D 내지 F에 대하여 각각 1600, 800, 40 시그마 단위/㎖의 락트산탈수소효소를 접촉시킨 후, 광효율 향상층이 형성된 폴리이미드 필름을 검출체 위에 겹친 상태로, 접촉 완료로부터 15분이 경과할 때까지의 색상 변화를 관찰하였다.Next, the lactic acid dehydrogenase was contacted with 1600, 800, and 40 sigma units / ml for the sperm count kits D to F prepared according to the method of Example 1, and then the polyimide film having the light efficiency- The color change from the completion of the contact to the elapse of 15 minutes was observed in the state of being superimposed on the sieve.

색상변화는 미놀타 CM-2002 분광색차계를 이용하여 측정하였다.The color change was measured using a Minolta CM-2002 spectrocolorimeter.

측정결과 폴리이미드 필름을 사용하지 않은 경우, 접촉 완료로부터 15분이 경과할 때까지의 색차가 3개의 검출 키트에 대하여 평균 1.6이었으나, 폴리이미드 필름을 겹친 경우, 접촉 완료로부터 15분이 경과할 때까지의 색차가 3개의 검출 키트에 대하여 평균 3.2를 나타내어 폴리이미드 필름을 겹침으로써 시각적 색상 분리가 세분화될 수 있음을 확인하였다.As a result of measurement, when the polyimide film was not used, the chrominance from 15 minutes to 15 minutes after completion of the contact was 1.6 on average for the three detection kits. However, when the polyimide film was overlapped, It was confirmed that the visual color separation can be subdivided by overlapping the polyimide film with the color difference showing an average of 3.2 for the three detection kits.

또한, 락트산탈수소효소가 상대적으로 가장 많은 검출 키트 A, D에 대해서는 접촉 완료로부터 15분 후 진한 보라색으로 발색되는 현상이 관찰되었으나, 락트산탈수소효소가 가장 적은 검출 키트 C, F에 대해서는 접촉 완료로부터 15분 후에도 색상 변화가 거의 없었다. 또한, 검출 키트 B, E에 대해서는 접촉 완료로부터 15분 후에 밝은 보래색으로 발색되는 현상이 관찰되었다.For the detection kits A and D, which are the most abundant in lactate dehydrogenase, color development was observed in dark purple after 15 minutes from the completion of the contact. However, for the detection kits C and F in which the lactate dehydrogenase was the least, There was little color change after minutes. Further, for the detection kits B and E, a phenomenon of coloring to a bright color after 15 minutes from completion of contact was observed.

[시험예 2][Test Example 2]

실시예 1의 방법에 따라 제조된 정자수 검출키트를 준비하고, 정자수가 정상범위에 속하는 시험대상자, 역행성 사정 증상이 있는 시험대상자, 및 정자수가 정상범위에 미치지 못하는 시험대상로부터 얻어진 PEU 샘플을 30초간 정자수 검출키트에 접촉시킨 후, 15분 후의 발색도를 측정하였다. 발색도 측정은 검출체 상에 폴리이미드 필름을 겹친 상태로 미놀타 CM-2002 분광색차계를 이용하여 실시하였다.Sperm count detection kit prepared according to the method of Example 1 was prepared and PEU samples obtained from test subjects whose sperm counts were within the normal range, test subjects with retrograde ejaculatory symptoms, and test subjects whose sperm counts fell below the normal range After contact with the sperm count detection kit for 30 seconds, the color development degree after 15 minutes was measured. The colorimetric measurement was carried out using a Minolta CM-2002 spectroscopic colorimeter in a state in which a polyimide film was laminated on a detection body.

측정결과 CIE-L*ab 색도값이 정자수가 정상범위에 미치는 시험대상자, 역행성 사정 증상이 있는 시험대상자, 정자수가 정상범위에 미치지 못하는 시험대상자에 대하여 각각 (63.1, 73.1, -38.8), (32.9, 61.6, -29.4), (96.9, 0.01, -0.01)로 나타났다. 즉, 상기 시험결과로부터 역행성 사정 증상이 있는 시험대상자는 짙은 보라색으로 발색하며, 정자수가 정상범위에 미치는 시험대상자에 대해서는 밝은 보라색으로 발색하고, 정자수가 정상범위에 미치지 못하는 시험대상자에 대해서는 발색이 거의 발생하지 않는 것을 알 수 있었다.(63.1, 73.1, -38.8) for the test subjects who had CIE-L * ab chromaticity values in the normal range, test subjects who had retrograde ejaculatory symptoms, and subjects whose sperm counts did not reach the normal range 32.9, 61.6, -29.4), (96.9, 0.01, -0.01). That is, from the above test results, the test subjects who developed retrograde ejaculatory symptoms developed a deep purple color, and developed a light purple color for the test subjects whose sperm counts were within the normal range, and developed color for the test subjects whose sperm counts did not reach the normal range And it was found that it hardly occurs.

Claims (5)

지지체와 상기 지지체 상에 형성되며 반응 시약이 피복된 검출체 및 상기 검출체 상에 겹쳐서 색상 변화를 관찰하기 위한 폴리이미드 필름으로 이루어지며, 상기 반응 시약은 락트산염, NAD+, 디아포라아제, 테트라졸륨 염, pH 완충제, 계면활성제를 포함하며,
상기 폴리이미드 필름은 일면에 굴절율 이방성을 갖는 물질로 이루어진 광효율 향상층이 형성되는 것을 특징으로 하는 사정후 소변 샘플을 이용한 정자수 검출 키트.
And a polyimide film formed on the support and coated with a reaction reagent and a polyimide film stacked on the detector to observe a change in hue, wherein the reaction reagent is selected from the group consisting of lactate, NAD + , diaphorase, tetra Zolinium salts, pH buffering agents, and surfactants,
Wherein the polyimide film has a light efficiency enhancing layer formed of a material having a refractive index anisotropy on one side thereof.
청구항 1에 있어서,
상기 지지체는 플라스틱 또는 내수성 종이로 이루어지는 것을 특징으로 하는 사정후 소변 샘플을 이용한 정자수 검출 키트.
The method according to claim 1,
Characterized in that the support is made of plastic or water-resistant paper.
청구항 1에 있어서,
상기 검출체는 부직포, 섬유, 셀룰로오스 중 어느 하나의 다공성 재료인 것을 특징으로 하는 사정후 소변 샘플을 이용한 정자수 검출 키트.
The method according to claim 1,
Wherein the detector is a porous material selected from the group consisting of a nonwoven fabric, a fiber, and a cellulosic material.
삭제delete 청구항 1에 있어서,
상기 광효율 향상층은 일축성 필름층 및 등방성 필름층이 교대로 번갈아 다수층으로 형성되는 것을 특징으로 하는 사정후 소변 샘플을 이용한 정자수 검출 키트.
The method according to claim 1,
Wherein the light efficiency enhancing layer is formed by alternately alternating a monolayer film layer and an isotropic film layer into a plurality of layers.
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