KR101731618B1 - Single nucleotide polymorphism marker composition for identification of paternity and its use - Google Patents
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Abstract
부계 확인용 마커 조성물 및 이를 포함하는 마이크로어레이, 부계 확인용 마커 조성물을 이용하여 동일 부계를 확인하는 방법에 관한 것이다. 일 구체예에 따른 부계 확인용 마커 조성물에 따르면, 동일 부계를 효과적으로 확인할 수 있다.A marker composition for identifying a paternity, a microarray comprising the same, and a marker composition for identifying a paternity. According to the marker composition for identifying a paternity according to one embodiment, the same paternity can be effectively confirmed.
Description
부계 확인용 마커 조성물 및 이를 포함하는 마이크로어레이, 부계 확인용 마커 조성물을 이용하여 동일 부계를 확인하는 방법에 관한 것이다.A marker composition for identifying a paternity, a microarray comprising the same, and a marker composition for identifying a paternity.
1985년 영국의 제프리스가 개인 식별을 위한 DNA 프로파일링(DNA profiling), DNA 지문(DNA fingerprinting)을 개발한 이후, 점차 발전을 하여, 지난 10여 년의 전부터 표준화 과정을 통하여 현재 STR 유전자 마커 분석을 통한 개인식별법이 정착되어 사용되어 왔으며, 뛰어난 분석능력과 변별력으로 인해 현재 다수 국가에서 널리 사용되고 있다. 그러나, 높은 식별력과 뛰어난 분석 능력에도 불구하고 상대적으로 높은 돌연변이율(~10-3)로 인해 가족관계 확인 시의 오판가능성이 존재하며, 특히 미아찾기사업 등 대용량 데이터베이스 검색 시 실종자 가족 수가 편부/편모 등의 이유로 제한되어 있는 경우 그 변별력에서 일부 문제가 존재함이 확인되고 있다. Since the development of DNA profiling and DNA fingerprinting for personal identification in 1985 by JEFFREIS in the UK, progress has been made, and through the standardization process over the last decade, the current STR gene marker analysis Has been established and used, and is now widely used in many countries due to its excellent analytical ability and discrimination. However, despite the high discriminatory power and excellent analytical ability, there is a possibility of misidentification due to the relatively high mutation rate (~ 10 -3 ), and in particular, the number of missing persons It is confirmed that there are some problems in the discrimination power.
이러한 문제점을 해결하기 위한 노력의 일환으로 낮은 돌연변이율 (2~2.5 X 10-8)을 가지고 개인 식별 뿐만 아니라 인종의 추정, 혈액형, 눈 색깔 등 신체적인 특성의 추정이 가능하며, 동시에 여러 개의 마커를 판독할 수 있는 시스템이 가능한 SNP 마커에 대한 연구 개발이 꾸준히 진행되고 있다. As a part of efforts to solve these problems, it is possible to estimate physical characteristics such as race estimation, blood type, eye color as well as individual identification with a low mutation rate (2 to 2.5 X 10 -8 ) Research and development on SNP markers capable of system that can read out is progressing steadily.
Krawczak는 하나의 STR 마커의 부권배제력(paternity exclusion power)은 대립인자 발현빈도 0.5의 SNP 4.2개와 유사하다고 보고하였으며, Gill 등은 0.2-0.8사이의 대립인자 발현빈도를 가지는 SNP 50개의 부권배제력은 0.999로 12개의 STR과 유사한 예측력을 나타내는 것으로 보고한 바 있다.Krawczak reported that the paternity exclusion power of an STR marker is similar to that of SNPs with an allele frequency of 0.5 (Gill et al., 2000). Gill et al. Reported that 50 SNPs with allelic frequencies between 0.2 and 0.8 Was 0.999, which is similar to 12 STR.
Y 염색체는 부계로만 유전되기 때문에, 정상적인 유전자형을 지닌 남자 본인과 남자조상, 남자 자손은 모두 동일한 Y 염색체를 가지게 된다. 그러므로 Y 염색체 유전자 검사를 통하여 형제지간, 부자지간, 조부-손자지간, 삼촌-조카 지간등 동일 부계의 친족 확인이 가능하다.Since the Y chromosome is inherited only by the paternal system, the male, male ancestor, and male offspring with the normal genotype have the same Y chromosome. Therefore, it is possible to identify relatives of the same parent, such as brothers, grandchildren, grandchildren, grandchildren, and uncle-nephews through the Y chromosome gene test.
Y 염색체의 SNP 연구로는 2003년 Juan J. Sanchez 등이 35개의 SNP 를 발굴하여 보고하였고, Vallone 과 Butler는 Caucasian과 African American 을 대상으로 50 개의 SNP 마커를 발굴하여 보고 하였다. 이러한 결과들은 주로 서구인들을 대상으로한 연구를 통하여 얻어진 결과로 한국인의 MAF 와는 큰 차이를 보여 직접 한국인에 적용하기에는 제한점이 있다. 따라서, 한국인에게서 유효한 Y 염색체 SNP marker의 선정을 위해서는 대규모 SNP data를 통한 광범위한 선별과정이 필요하며, 이를 바탕으로 부계 탐색을 위한 한국인 집단에 적합한 부계판별용 단일염기다형성 유전자 마커를 개발이 요구되고 있다.In 2003, Juan J. Sanchez et al. Found 35 SNPs, while Vallone and Butler discovered 50 SNP markers in Caucasian and African American. These results are mainly obtained from the study of Western people, and show a great difference from Korean MAF, which is a limitation to apply directly to Koreans. Therefore, selection of Y-chromosome SNP markers that are effective in Korean requires extensive screening through large-scale SNP data, and development of a single nucleotide polymorphism marker for paternity discrimination suitable for Korean population for paternity search is required .
일 양상은 부계 확인용 마커 조성물을 제공하는 것이다.One aspect is to provide a marker composition for paternity identification.
다른 양상은 부계 확인용 마커 조성물을 포함하는 마이크로어레이를 제공하는 것이다.Another aspect is to provide a microarray comprising a marker composition for paternity identification.
또 다른 양상은 부계 확인용 마커 조성물을 이용하여 동일 부계를 확인하는 방법을 제공하는 것이다.Another aspect is to provide a method for identifying the same paternity using a marker composition for identifying the paternity.
일 양상은 서열번호 1 내지 서열번호 27의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 폴리뉴클레오티드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오티드에서, 상기 폴리뉴클레오티드의 101번째 위치에 단일염기다형성(SNP)이 존재하고, 상기 101번째 염기를 포함한 10개 이상의 연속된 뉴클레오티드로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 포함하는 부계 확인용 마커 조성물을 제공한다.In one aspect, at least one polynucleotide or a complementary polynucleotide thereof selected from the group consisting of the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 27 has a single nucleotide polymorphism (SNP) at the 101st position of the polynucleotide, And a polynucleotide consisting of at least 10 contiguous nucleotides, including the base sequence.
일 구체예에 따르면, 상기 마커 조성물은 부자 사이, 형제 사이, 조부-손자 사이 및 삼촌-조카 사이로 이루어진 군으로부터 선택되는 동일 부계의 친족 관계를 확인하기 위한 것일 수 있다.According to one embodiment, the marker composition may be for identifying the same paternal relationship selected from the group consisting of between riches, between brothers, between grandparents and grandchildren, and between uncles-nephews.
일 구체예에 따른 부계 확인을 위해 이용되는 단일염기다형성 마커 조성물의 유용성은 "짝확률(matching probability: PI)" 및 "부권배제력(power of exclusion)"에 의해 판단될 수 있다.The usefulness of the single base polymorphic marker composition used for identification of the paternity according to one embodiment can be judged by the "matching probability (PI)" and "power of exclusion".
상기 용어, "짝확률(matching probability: PI)"은 특정 유전자형이 임의의 집단에서 우연히 발견될 확률을 의미한다. 여러 마커들의 조합에 대해서는 누적 짝확률에 의해 부계 확인용 마커로서의 유용성을 판단한다. 정확한 부계 관계 판별을 위해서는 짝확률이나 누적짝확률이 낮은 마커가 요구된다.The term "matching probability (PI)" means the probability that a particular genotype will be found by chance in any population. For a combination of several markers, we determine the usefulness as a marker for paternity confirmation by the cumulative probability. In order to determine the exact paternity relationship, a marker with a lower probability of being mated or a cumulative probability is required.
상기 용어, "부권배제력(Power of Exclusion: PE)"은 남자, 특히, 아버지의 친척을 생물학적 아버지(biological father)일 가능성에서 배제할 수 있는 능력을 의미한다. 부권배제력은 어머니와 자녀 모두의 유전자형(genetics) 및 어머니와 추정되는 아버지의 인종적 배경에 의존적이다. The term "Power of Exclusion (PE)" means the ability to exclude the possibility that a relative, especially a father, of a man is a biological father. Paternity exclusion depends on the genetics of both mother and child, and on the ethnic background of the mother and the presumed father.
상기 서열번호 1 내지 서열번호 27의 101번째에 위치한 SNP를 포함한 10개 이상의 연속된 뉴클레오티드로 구성된 부계 확인용 폴리뉴클레오티드 마커는 27개의 마커가 모두 사용될 경우 최소 0.996694에서 최대 (1-2.83345E-23)의 부권배제력(Overall EP : overall exclusion probability)을 갖는다. The polynucleotide marker for paternity confirmation consisting of 10 or more consecutive nucleotides including the SNP located at position 101 of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 27 has a maximum (1-2.83345E-23) at minimum 0.996694 when 27 markers are used, (Overall EP: exclusion probability) .
한편, 본 발명에서 "폴리뉴클레오티드"는 DNA 또는 RNA일 수 있다. 상기 폴리뉴클레오티드는 또한, 단일가닥 또는 이중가닥 형태일 수 있다. 상기 폴리뉴클레오티드는 또한, 상보적 뉴클레오티드에 수소 결합에 의하여 혼성화될 수 있는 성질을 갖는 것이면, 천연 뉴클레오티드로 구성된 것뿐만 아니라, 천연 뉴클레오티드, 천연 뉴클레오티드의 유사체, 천연 뉴클레오티드의 당, 염기 또는 인산 부위가 변형되어 있는 뉴클레오티드 및 이들 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드를 포함하는 것일 수 있다 (Scheit, Nucleotide Analogs, John Wiley, New York (1980); Uhlman 및 Peyman, Chemical Reviews, 90:543-584 (1990)). 또한, 상기 폴리뉴클레오티드는 PNA(peptide nucleic acid)를 포함할 수 있다. 상기 폴리뉴클레오티드는 예를 들면, 분석 반응에서 상기 폴리뉴클레오티드 또는 그가 결합되어 있는 복합체의 검출의 편이를 위하여, 검출가능한 표지(예를 들면, Cy3, Cy5 등의 형광성 물질)가 예를 들면, 3'말단 또는 5'말단에 부착되어 있는 것일 수 있다. In the present invention, "polynucleotide" may be DNA or RNA. The polynucleotide may also be in single stranded or double stranded form. The polynucleotide may also be modified so that the sugar, base or phosphate site of a natural nucleotide, an analogue of a natural nucleotide, or a natural nucleotide is modified, as long as it has a property of hybridizing to a complementary nucleotide by hydrogen bonding, (Scheit, Nucleotide Analogs, John Wiley, New York (1980); Uhlman and Peyman, Chemical Reviews, 90: 543-584 (1990)), and nucleotides selected from the group consisting of . In addition, the polynucleotide may comprise a peptide nucleic acid (PNA). The polynucleotide can be detected, for example, in a manner such that a detectable label (for example, a fluorescent substance such as Cy3 or Cy5) is changed to a 3 'position in order to facilitate detection of the polynucleotide or a complex to which the polynucleotide is bound, Terminal or 5 ' end.
일 구체예에 따르면, 상기 폴리뉴클레오티드는 SNP 부위에서 단일염기다형성을 나타내는 것이다. 하나의 단일가닥 폴리뉴클레오티드가 부계 관계의 판별과 연관되어 있는 경우, 상기 단일가닥 폴리뉴클레오티드에 상보적인 폴리뉴클레오티드도 당연히 부계 관계의 판별과 연관되어 있는 것으로 판단될 수 있다. 따라서, 본 발명의 일 구체예에 따른 폴리뉴클레오티드는, 하나의 특정한 서열을 가진 부계 관계의 판별과 연관되어 있는 단일가닥 폴리뉴클레오티드 및 그 상보적인 서열을 가진 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 예를 들면, 서열번호 1의 폴리뉴클레오티드는 101번째(SNP위치) 뉴클레오티드가 "C 또는 A"이다. 이 경우, 상기 폴리뉴클레오티드는, 101번째 (SNP 위치)의 "C 또는 A" 뉴클레오티드를 포함하고 서열번호 1의 폴리뉴클레오티드로부터 선택된 10개 이상의 연속된 뉴클레오티드 뿐만 아니라, 101번째 (SNP 위치)에 대응되는 위치에 "G 또는 T" 뉴클레오티드를 갖는 상보적인 단일가닥 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 이러한 측면에서, 본 명세서의 모든 서열은, 특별한 언급이 없는 한, 게놈 DNA에서 센스 가닥에 있는 서열을 기준으로 표기한다. 본 발명에서 단일염기 다형성(single nucleotide polymorphism: SNP)은 당업계에 통상적으로 알려진 의미로 사용된다. SNP는 집단 내의 게놈에 존재하는 단일 뉴클레오티드 다형성을 나타낼 수 있다. 상기 SNP는 집단 내의 SNP의 소수 대립인자의 빈도가 1% 이상인 것일 수 있다.According to one embodiment, the polynucleotide exhibits a single base polymorphism at the SNP site. If one single-stranded polynucleotide is associated with the determination of a paternal relationship, it can be determined that the polynucleotide complementary to the single-stranded polynucleotide is also naturally associated with the determination of the paternal relationship. Thus, a polynucleotide according to one embodiment of the present invention may comprise a single-stranded polynucleotide and a polynucleotide with a complementary sequence thereof that are associated with a determination of a paternal relationship having one particular sequence. For example, the polynucleotide of SEQ ID NO: 1 is the 101st (SNP position) nucleotide is "C or A ". In this case, the polynucleotide includes not only 10 or more consecutive nucleotides selected from the polynucleotide of SEQ ID NO: 1 but also the nucleotide sequence of " C or A "at the 101st (SNP position) Quot; G < / RTI > or T "nucleotides at a single site. In this regard, all sequences herein are referred to by reference to sequences on the sense strand in the genomic DNA, unless otherwise noted. In the present invention, single nucleotide polymorphism (SNP) is used as is commonly known in the art. SNPs can represent a single nucleotide polymorphism present in the genome within a population. The SNP may have a frequency of a minor allele of the SNP in the population of 1% or more.
본 발명의 일 구체예에서, 폴리뉴클레오티드는 길이가 10 내지 100 뉴클레오티드인 것일 수 있다. 예를 들면, 상기 폴리뉴클레오티드는 길이가 10 내지 50 뉴클레오티드, 또는 10 내지 30 뉴클레오티드인 것일 수 있다.In one embodiment of the invention, the polynucleotide may be 10-100 nucleotides in length. For example, the polynucleotide may be 10 to 50 nucleotides in length, or 10 to 30 nucleotides in length.
일 구체예에 따르면, 상기 폴리뉴클레오티드는 프라이머 또는 프로브일 수 있다. According to one embodiment, the polynucleotide may be a primer or a probe.
용어, "프라이머"란 중합효소에 의한 뉴클레오티드의 중합반응에서, 개시점으로 작용할 수 있는 단일가닥의 폴리뉴클레오티드를 말한다. 예를 들면, 상기 프라이머는 적합한 온도 및 적합한 완충액 내에서 적합한 조건, 즉, 4종의 다른 뉴클레오시드 트리포스페이트 및 중합효소의 존재 하에서 주형-지시(template-directed) DNA 합성의 개시점으로 작용할 수 있는 단일가닥의 폴리뉴클레오티드일 수 있다. 프라이머의 적합한 길이는 다양한 인자, 예를 들면, 온도와 프라이머의 용도에 따라 달라질 수 있다. 상기 프라이머는 길이가 10 내지 50 뉴클레오티드인 것일 수 있다. 일반적으로, 프라이머의 길이가 짧을수록, 낮은 어닐링(annealing) 온도에서 주형과 충분히 안정된 하이브리드 복합체를 형성할 수 있다.The term "primer " refers to a single-stranded polynucleotide capable of acting as a starting point in the polymerization of a nucleotide by a polymerase. For example, the primer can serve as a starting point for template-directed DNA synthesis in the presence of suitable conditions, i.e., four different nucleoside triphosphates and polymerases, at the appropriate temperature and in the appropriate buffer Lt; RTI ID = 0.0 > polynucleotides < / RTI > The appropriate length of the primer may vary depending on various factors, for example, temperature and use of the primer. The primer may be 10 to 50 nucleotides in length. In general, the shorter the length of the primer, the more stable hybrid complex can be formed with the template at lower annealing temperatures.
프라이머의 서열은 주형의 일부 서열과 완전하게 상보적인 서열을 가질 필요는 없으며, 주형과 혼성화되어 프라이머 고유의 기능을 수행할 수 있는 범위 내의 상보성을 가지면 충분하다. 따라서, 프라이머는 상기 폴리뉴클레오티드 자체 뿐만 아니라, 상기 폴리뉴클레오티드에 특이적으로 혼성화하는 서열로서 중합반응에서 개시점으로작용할 수 있는 것도 포함된다. 예를 들면, 서열번호 1의 폴리뉴클레오티드에 완벽하게 상보적인 서열뿐만 아니라, 이 서열에 혼성화되어 프라이머 작용을 할 수 있는 범위 내에서 상보성을 갖는 서열일 수 있다. 프라이머의설계는 주어진 증폭하고자 하는 표적핵산의 서열을 참조하여 당업자에 의해 용이하게 실시할 수 있다. 예를 들면, 상업적으로 구입가능한 프라이머 설계용 프로그램을 사용하여 설계할 수 있다. 상업적으로 구입가능한 프라이머 설계용 프로그램은 예를 들면, PRIMER 3 프로그램을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.The sequence of the primer does not need to have a sequence completely complementary to a partial sequence of the template, and it is sufficient if the primer has complementarity within a range capable of hybridizing with the template to perform the primer-specific function. Therefore, the primer includes not only the polynucleotide itself but also a sequence that specifically hybridizes to the polynucleotide, and can act as a starting point in the polymerization reaction. For example, it may be a sequence completely complementary to the polynucleotide of SEQ ID NO: 1, or a sequence complementary to such a sequence that hybridizes to this sequence and can perform a primer action. The design of the primer can be readily carried out by those skilled in the art by reference to the sequence of the target nucleic acid to be amplified. For example, it can be designed using a commercially available program for primer design. Commercially available primer design programs include, but are not limited to, the PRIMER 3 program, for example.
일 구체예에 따르면, 상기 폴리뉴클레오티드가 PCR 프라이머로서 사용되는 경우, 상기 폴리뉴클레오티드에 더하여, 그의 상보적 가닥에 특이적으로 결합하는 프라이머를 포함할 수 있다.According to one embodiment, when the polynucleotide is used as a PCR primer, in addition to the polynucleotide, it may include a primer that specifically binds to its complementary strand.
용어, "프로브"란 특정 표적 서열에 특이적으로 결합하는 폴리뉴클레오티드를 말한다. 상기 폴리뉴클레오티드는 DNA 또는 RNA일 수 있다. 상기 폴리뉴클레오티드는 단일가닥 형태일 수 있다. 상기 폴리뉴클레오티드는 또한, 상보적 뉴클레오티드에 수소 결합에 의하여 혼성화될 수 있는 성질을 갖는 것이면, 천연 뉴클레오티드로 구성된 것 뿐만 아니라, 천연 뉴클레오티드, 천연 뉴클레오티드의 유사체, 천연 뉴클레오티드의 당, 염기 또는 인산 부위가 변형되어 있는 뉴클레오티드 및 이들 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드를 포함하는 것일 수 있다. 상기 폴리뉴클레오티드는 PNA를 포함한다. 또한, 상기 폴리뉴클레오티드는 예를 들면, 분석 반응에서 상기 폴리뉴클레오티드 또는 그가 결합되어 있는 복합체의 검출의 편이를 위하여, 검출가능한 표지 (예, Cy3, Cy5 등의 형광성 물질)가 예를 들면, 3'말단 또는 5'말단에 부착되어 있는 것일 수 있다. The term "probe" refers to a polynucleotide that specifically binds to a specific target sequence. The polynucleotide may be DNA or RNA. The polynucleotide may be in single stranded form. The polynucleotide may also be a polynucleotide which is not only composed of a natural nucleotide but also a natural nucleotide, an analogue of a natural nucleotide, a sugar, a base or a phosphate site of a natural nucleotide, which is capable of being hybridized to a complementary nucleotide by hydrogen bonding And nucleotides selected from the group consisting of combinations thereof. The polynucleotide includes PNA. The polynucleotide may be a detectable label (for example, a fluorescent substance such as Cy3 or Cy5), for example, in order to detect the polynucleotide or a complex to which the polynucleotide is bound in the assay reaction, Terminal or 5 ' end.
상기 프로브는, SNP 부위를 포함하는 상기 폴리뉴클레오티드에 완전 상보적인 서열일 수 있다. 또한, 상기 프로브는, SNP 부위를 포함하는 상기 폴리뉴클레오티드에 대한 특이적 혼성화를 방해하지 않는 범위 내에서 실질적으로 상보적인 서열을 갖는 것일 수 있다. 또한, 상기 프로브는, SNP 부위를 포함하는 상기 폴리뉴클레오티드에 대한 특이적 혼성화를 손상되지 않는 범위 내에서, 변형된 뉴클레오티드를 갖는 것일 수 있다. 상기 프로브의 예는, SNP 부위를 포함하는 상기 폴리뉴클레오티드에 완전 상보적인 서열로 이루어진 완전 매치 프로브 (perfect probe) 및 SNP 부위를 포함하는 상기 폴리뉴클레오티드에 대하여, 상기 SNP 부위를 제외한 모든 서열에 대하여 완전 상보적인 서열을 갖는 미스매치 (mismatch probe)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.The probe may be an entirely complementary sequence to the polynucleotide comprising the SNP site. In addition, the probe may have a substantially complementary sequence within a range that does not interfere with specific hybridization to the polynucleotide including the SNP site. In addition, the probe may have a modified nucleotide within a range that does not impair the specific hybridization to the polynucleotide including the SNP site. Examples of such probes include a perfect probe consisting of a sequence complementary to the polynucleotide including a SNP site, and a polynucleotide comprising a SNP site, And a mismatch probe having a complementary sequence.
상기 프라이머 및 프로브를 사용하여 SNP 부위에 특정한 대립인자를 가진 뉴클레오티드 서열을 증폭하거나 그 존재를 확인할 수 있다.
The primers and probes can be used to amplify or confirm the presence of nucleotide sequences with specific alleles at the SNP site.
다른 양상은 상기 부계 확인용 마커 조성물을 포함하는 부계 확인용 마이크로어레이를 제공한다.Another aspect provides a pantograph identification microarray comprising the marker composition for identifying the paternity.
본 발명에서 "마이크로어레이"란 기판 표면의 구분된 영역에 상기 폴리뉴클레오티드가 높은 밀도로 고정화되어 있는 것을 의미한다. 상기 마이크로어레이는, 상기 영역이 예를 들면 400/cm2 이상, 103/cm2, 또는 104/cm2의 밀도로 기판 상에 배열되어 있는 것일 수 있다.The term "microarray" in the present invention means that the polynucleotide is immobilized at a high density in the divided region of the substrate surface. The microarray may be such that the region is arranged on the substrate at a density of, for example, 400 / cm 2 or more, 10 3 / cm 2 , or 10 4 / cm 2 .
본 발명의 또 다른 구체예는, 상기 부계 확인용 마커 조성물을 포함하는 부계 확인을 위한 키트를 제공한다. Another embodiment of the present invention provides a kit for identifying a paternity comprising the marker composition for identifying the paternity.
상기 키트에서 폴리뉴클레오티드 마커는 기판 표면 상의 구분된 영역에 고밀도로 배열되어 있는 마이크로어레이 형태일 수 있다. 본 발명의 일 구체예에서, 상기 폴리뉴클레오티드 마커는 서열번호 1 내지 서열번호 27의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 폴리뉴클레오티드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오티드에서, 상기 폴리뉴클레오티드의 101번째 위치에 단일염기다형성(SNP)이 존재하고, 상기 101번째 염기를 포함한 10개 이상의 연속된 뉴클레오티드로 이루어진 폴리뉴클레오티드의 조합일 수 있다. The polynucleotide markers in the kit may be in the form of microarrays that are arranged at high density in distinct regions on the substrate surface. In one embodiment of the present invention, the polynucleotide marker comprises at least one polynucleotide selected from the group consisting of the nucleotide sequences of SEQ ID NOS: 1 to 27, or a complementary polynucleotide thereof, wherein the polynucleotide has a single base Polymorphism (SNP) exists and may be a combination of polynucleotides consisting of 10 or more consecutive nucleotides, including the 101st nucleotide.
상기 키트는 상기 폴리뉴클레오티드를 특이적으로 증폭하고, 증폭 산물의 존재 유무를 통하여, 동일 부계를 확인하기 위한 키트일 수 있다. 이 경우, 상기 키트는 상기 폴리뉴클레오티드를 프라이머로서 포함하는 동시에, 증폭에 필요한 시약을 포함할 수 있다. 상기 증폭 시약은 예를 들면, dNTP, 폴리머라제, 및 적절한 버퍼를 포함할 수 있다. 상기 프라이머는 예를 들면, SNP 부위에 해당하는 뉴클레오티드 서열이 프라이머의 3' 말단 뉴클레오티드를 형성하고, 상기 3' 말단 뉴클레오티드는 상기 SNP 부위의 뉴클레오티드에 상보적이거나 (특이적 프라이머) 상보적이지 않은 것 (비특이적 프라이머)으로 이루어진 것일 수 있다. 상기 비특이적 프라이머는 상기 3' 말단 뉴클레오티드뿐만 아니라 다른 부위에도 상보적이지 않은 서열을 포함할 수 있다. 상기 키트는 또한, 사용 설명서를 포함할 수 있다. 상기 사용 설명서는 예를 들면, 상기 특이적 프라이머를 사용한 증폭 반응에서 표적 서열이 증폭되고, 상기 비특이적 프라이머를 사용한 증폭 반응에서 표적 서열이 증폭되지 않는 경우, 증폭에 사용된 시료 중에서 개인식별과 연관된 표적 서열이 존재하는 것으로 결정하고, 그 결과로부터 개인을 식별하는 것에 대한 설명을 포함한, 결과 판정에 대한 설명을 포함할 수 있다.The kit may be a kit for specifically amplifying the polynucleotide and confirming the same paternity through the presence or absence of an amplification product. In this case, the kit may include the polynucleotide as a primer and the reagent necessary for amplification. The amplification reagent may comprise, for example, dNTPs, polymerases, and suitable buffers. For example, the primer may be one in which the nucleotide sequence corresponding to the SNP site forms the 3'-terminal nucleotide of the primer, the 3'-terminal nucleotide is complementary to the nucleotide at the SNP site (specific primer) (Non-specific primers). The non-specific primer may include a sequence that is not complementary to the 3 'terminal nucleotide as well as other sites. The kit may also include instructions for use. For example, in the case where the target sequence is amplified in the amplification reaction using the specific primer and the target sequence is not amplified in the amplification reaction using the non-specific primer, May include an explanation of the result determination, including determining that the sequence is present and identifying individuals from the results.
상기 키트는, 상기 폴리뉴클레오티드 또는 그로부터 유래된 프로브를 시료 중의 핵산과 혼성화시키고, 그 혼성화 결과로부터 개인을 식별하기 위한 키트일 수 있다. 이 경우, 상기 키트는, 상기 프로브 및 혼성화에 필요한 시약을 포함할 수 있다. 혼성화에 필요한 시약이란 예를 들면, 혼성화 버퍼가 포함될 수 있다. 상기 핵산은 증폭 또는 증폭되지 않은 것일 수 있다. 따라서, 상기 키트는 핵산의 증폭에 필요한 시약을 더 포함할 수 있다. 상기 핵산은 검출가능한 표지로 표지될 수 있다. 상기 키트는, 상기 폴리뉴클레오티드에 완전 상보적인 프로브 (perferct match probe) 또는 상기 폴리뉴클레오티드에 있어서, SNP 부위를 제외한 모든 부위에서 상보적인 미스매치 프로브 (mismatch probe)를 포함할 수 있다. 상기 프로브는 기판 상의 복수 개의 구분된 영역에 고정되어 있는 마이크로어레이의 형태일 수 있다. 상기 키트는 또한, 사용 설명서를 포함할 수 있다. 상기 사용 설명서는 예를 들면, 상기 완전 상보적인 프로브를 사용한 혼성화 반응에서 표적 서열이 검출되고, 상기 미스매치 프로브를 사용한 혼성화 반응에서 표적 서열이 검출되지 않는 경우, 시료별로 각 프로브에 의해 수득된 프로파일을 비교하고, 그 결과로부터 동일 부계임을 결정하는 것에 대한 설명을 포함한, 결과 판정에 대한 설명을 포함할 수 있다.The kit may be a kit for hybridizing the polynucleotide or a probe derived therefrom with a nucleic acid in a sample and identifying an individual from the hybridization result. In this case, the kit may include the probe and a reagent necessary for hybridization. Reagents necessary for hybridization include, for example, a hybridization buffer. The nucleic acid may not be amplified or amplified. Thus, the kit may further comprise reagents necessary for amplification of the nucleic acid. The nucleic acid may be labeled with a detectable label. The kit may comprise a perferct match probe that is completely complementary to the polynucleotide or a mismatch probe that is complementary at all sites except for the SNP site in the polynucleotide. The probes may be in the form of microarrays fixed to a plurality of discrete regions on the substrate. The kit may also include instructions for use. For example, when the target sequence is detected in the hybridization reaction using the fully complementary probe and the target sequence is not detected in the hybridization reaction using the mismatch probe, the user's manual may include a profile obtained by each probe And a description of the result determination, including an explanation of determining that the same sub-category is determined from the result.
일 구체예에 따르면, 상기 키트는 부자 사이, 형제 사이, 조부-손자 사이 및 삼촌-조카 사이로 이루어진 군으로부터 선택되는 동일 부계의 친족 관계를 확인하기 위한 키트일 수 있다.
According to one embodiment, the kit may be a kit for identifying the same parent-child relationship selected from the group consisting of between rich, brothers, grand-grandchildren, and uncle-nephews.
또 다른 양상은 분리된 핵산 시료를 제공하는 단계; 및 Yet another aspect provides a method for detecting nucleic acid, comprising: providing an isolated nucleic acid sample; And
상기 부계 확인용 마커 조성물에 포함된 폴리뉴클레오티드의 SNP 위치의 뉴클레오티드를 결정하는 단계를 포함하는 동일 부계의 확인 방법을 제공한다.And determining the nucleotide at the SNP position of the polynucleotide contained in the marker composition for identifying the pendant.
일 구체예에 따른 동일 부계를 확인하는 방법은, 분리된 핵산 시료를 제공하는 단계를 포함할 수 있다. 개체로부터 핵산을 분리하는 방법은 당업계에 알려져 있다. 예를 들면, 조직 또는 세포로부터 DNA를 직접적으로 분리하거나 PCR과 같은 핵산 증폭 방법에 의하여 특정한 영역을 증폭함으로써 분리될 수 있다. 상기 분리된 핵산 시료에는 순수하게 분리된 핵산뿐만 아니라 조 분리된 핵산, 예를 들면, 핵산을 포함하는 세포 파쇄물도 포함한다. 상기 핵산 증폭 방법에는 PCR, 리가제 연쇄반응(LCR), 전사증폭(transcription amplification), 자기 유지 서열 복제 및 핵산에 근거한 서열 증폭(NASBA)가 포함될 수 있다. 상기 분리된 핵산은, DNA 또는 RNA일 수 있다. 상기 DNA에는 게놈 DNA, cDNA 또는 재조합 DNA일 수 있다. 상기 RNA는 mRNA 일 수 있다.A method for identifying the same paternity according to one embodiment may comprise providing a separate nucleic acid sample. Methods for separating nucleic acids from an individual are known in the art. For example, DNA can be isolated directly from tissues or cells by amplifying specific regions by nucleic acid amplification methods such as PCR. The separated nucleic acid sample includes not only the purely isolated nucleic acid but also a cell lysate containing a crude nucleic acid, for example, a nucleic acid. The nucleic acid amplification method may include PCR, ligase chain reaction (LCR), transcription amplification, self-sustained sequence replication, and nucleic acid-based sequence amplification (NASBA). The separated nucleic acid may be DNA or RNA. The DNA may be a genomic DNA, a cDNA, or a recombinant DNA. The RNA may be mRNA.
상기 방법은, 또한, 상기 부계 확인용 마커 조성물에 포함된 폴리뉴클레오티드의 SNP 위치의 뉴클레오티드를 결정하는 단계를 포함할 수 있다. The method may further comprise determining the nucleotide at the SNP position of the polynucleotide contained in the marker composition for identifying the pendant.
일 구체예에 따르면, 상기 폴리뉴클레오티드 마커의 SNP 위치의 뉴클레오티드를 결정하는 단계는 서열결정(sequencing), 프로브에 의한 혼성화 또는 단일염기 프라이머 연장(single base primer extension)에 의해 수행될 수 있다. According to one embodiment, the step of determining the nucleotide at the SNP position of the polynucleotide marker can be performed by sequencing, hybridization with a probe, or single base primer extension.
SNP 위치의 뉴클레오티드를 결정하는 방법은 당업계에서 잘 알려져 있다. 예를 들면, 알려진 핵산의 뉴클레오티드 서열 결정 방법(sequencing method)에 의하여 SNP 위치의 뉴클레오티드를 직접적으로 결정할 수 있다. 뉴클레오티드 서열 결정 방법에는 상거(또는 디데옥시) 방법 또는 막삼-길버트(화학 절단) 방법이 포함될 수 있다. 또한, SNP 위치의 서열을 포함하는 프로브를 대상 폴리뉴클레오티드와 혼성화시키고, 혼성화 결과를 분석함으로써, SNP 위치의 뉴클레오티드를 결정할 수 있다. 혼성화 정도는 예를 들면, 검출가능한 표지를 대상 핵산에 표지하고, 혼성화된 대상 핵산을 검출함으로써 확인되거나, 전기적 방법 등에 의하여 확인될 수 있다. 또한, 단일염기 프라이머 연장 (single base primer extension: SBE) 방법이 이용될 수 있다.Methods for determining the nucleotides at SNP positions are well known in the art. For example, the nucleotide at the SNP position can be determined directly by a nucleotide sequencing method of known nucleic acids. The nucleotide sequence determination method may include a sanguine (or dideoxy) method or a curd-gilbert (chemical cleavage) method. In addition, the nucleotide at the SNP position can be determined by hybridizing a probe containing the sequence of the SNP position with the polynucleotide of interest, and analyzing the hybridization result. The degree of hybridization can be confirmed, for example, by marking a detectable label on the target nucleic acid, detecting the hybridized target nucleic acid, or confirming it by an electrical method or the like. In addition, a single base primer extension (SBE) method can be used.
상기 방법에 있어서, 상기 SNP 부위의 뉴클레오티드를 결정하는 단계는 상기 폴리뉴클레오티드 마커가 고정화되어 있는 마이크로어레이에 상기 핵산 시료를 혼성화시키는 단계; 및 상기 혼성화 결과를 검출하는 단계를 포함할 수 있다.In the above method, the step of determining the nucleotide at the SNP site comprises: hybridizing the nucleic acid sample to a microarray in which the polynucleotide marker is immobilized; And detecting the hybridization result.
일 구체예에 따르면, 상기 동일 부계를 확인하는 방법은 결정된 부계 확인용 마커 조성물에 포함된 폴리뉴클레오티드의 SNP 위치의 뉴클레오티드를 대조군 시료의 결과와 비교하는 단계를 더 포함할 수 있다. 일 구체예에 따르면, 상기 대조군 시료는 비교대상인 개인의 DNA이거나 또는 등록된 개인의 DNA 프로파일일 수 있다.According to one embodiment, the method for identifying the same paternity may further comprise comparing the nucleotide at the SNP position of the polynucleotide included in the determined paternity identifying marker composition to the result of the control sample. According to one embodiment, the control sample may be a DNA of an individual to be compared or a DNA profile of a registered individual.
일 구체예에 따른 부계 확인용 마커 조성물에 따르면, 동일 부계를 효과적으로 확인할 수 있다.According to the marker composition for identifying a paternity according to one embodiment, the same paternity can be effectively confirmed.
이하 하나 이상의 구체예를 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, one or more embodiments will be described in more detail by way of examples. However, these embodiments are intended to illustrate one or more embodiments, and the scope of the invention is not limited to these embodiments.
실시예Example 1: 부계 확인용 1: for checking paternity SNPSNP 마커의Marker 선정 selection
(1) 대상자 분류(1) Subject classification
한국인 표본 6586명을 대상으로 Affymetrix 사의 Genome-Wide Human SNP Array 6.0에 대한 유전형 분석(genotyping)을 실시하여 시료별 call rate(전체 SNP에서 유전형 결과가 수득되는 비율)의 최소 수준을 90% 이상인 SNP에 대하여 검증을 실시하였다.
Genome-wide genome-wide human SNP array 6.0 of Affymetrix was applied to 6586 Korean specimens to determine the minimum level of call rate per sample (the ratio of genotype results to total SNPs) to SNPs of more than 90% .
(2) (2) SNPSNP 마커Marker 선정 selection
Affymetrix Genome-Wide Human SNP Array 6.0에는 Y 염색체에 위치한 SNP가 257개 존재하는데, 이 중 한국인 남성 6586명을 대상으로 SNP에 대한 call rate가 90% 이상, MAF가 10% 이상인 SNP을 우선 선정하였다. 정확한 부계 판별용 Y 염색체 연관 단일염기 다형성 마커를 선정하기 위하여 다음과 같은 방법으로 통계 처리 후, 마커를 선별하였다.In Affymetrix Genome-Wide Human SNP Array 6.0, there are 257 SNPs located on the Y chromosome. Of these, 6586 Korean males selected SNP with a call rate of 90% or more and MAF of 10% or more. In order to select the Y chromosome-related monoclonal polymorphism markers for identifying the correct paternal markers, markers were selected after statistical processing in the following manner.
LD의 추정에는 보수적인 방법인 r-square 적용하였다. SNP 간에 LD가 높다면, SNP 정보가 중복되는 것이므로, 이러한 경우 태킹(tagging) SNP를 선정하여 적은 개수의 SNP로 충분한 정보를 확보할 수 있게 된다. 본 실시예에서는 r-square가 0.8 이상으로 강력한 LD를 기준으로 태깅 SNP을 선정하였다.The conservative method r-square was applied to the estimation of LD. If the LD is high among the SNPs, the SNP information is duplicated. In this case, the tagging SNPs can be selected and sufficient information can be obtained with a small number of SNPs. In this embodiment, the tagging SNP is selected based on the strong LD with r-square of 0.8 or more.
상기와 같은 기준으로 Y 염색체에서 총 27개의 SNP를 선별하였으며, 선정된 SNP의 리스트를 하기 표 1에 나타내었다 A total of 27 SNPs were selected from the Y chromosome based on the above criteria, and a list of selected SNPs is shown in Table 1 below
freqAA_
freq
freqAB_
freq
freqBB_
freq
상기 표 1에서, 번호는 서열목록 상의 서열 번호를 나타내고, rs_number는 기준 염기서열(reference sequence)을 의미하며, 이는 인간게놈 프로젝트 후, 미국 국립보건원 산하 생물공학정보연구소(NCBI)의 데이터베이스에서 각 단일염기다형성을 구분하기 위해 붙인 이름이다. 염색체는 상기 단일염기다형성이 위치하고 있는 염색체의 번호를 나타낸다. Position은 각 염색체에서 각 서열번호가 존재하는 위치를 나타낸다.In Table 1, the numbers indicate the sequence numbers on the sequence listing, and rs_number means the reference sequence. After the human genome project, the single nucleotide sequence (SEQ ID NO: 1) in the database of the National Institute of Biotechnology Information (NCBI) This is the name given to distinguish the base polymorphism. The chromosome represents the number of the chromosome in which the single nucleotide polymorphism is located. Position indicates the position where each sequence number exists on each chromosome.
allele_A 및 allele_B는 유전자형 분석에서 실험의 편의상 임의적으로 대립형질을 명명한 것이며, Freq_A 및 Freq_B는 각각 대립형질 A와 B의 빈도를 나타낸다. AA, AB 및 BB는 유전형을 갖는 대상자의 수이고, AA_freq, AB_freq 및 BB_freq는 그 빈도를 나타낸다.
Allele_A and allele_B are randomly named alleles for ease of experiment in genotyping, and Freq_A and Freq_B represent frequencies of alleles A and B, respectively. AA, AB and BB are the number of subjects with a genotype, and AA_freq, AB_freq and BB_freq represent the frequency.
(3) 동일 부계 판정기준 (3) The same paternity criteria
전체 마커 중 비교대상 시료간의 유전자형(genotype)이 확실히 상이한 경우는 1개 항목이라도 서로 다를 경우에 동일 부계 관계가 아닌 것으로 판정하는 것이 원칙이며, 이 경우 부계식별지수는 0으로 표시하고, 판정가능한 검사항목이 모두 일치할 경우, 유전자형일치로 판정하며 동일부계에 대한 확률적 평가치를 제공한다.When the genotypes of the samples to be compared are clearly different from each other among all the markers, it is a rule to judge that the same paternity relationship is not obtained when one item is different from another. In this case, the paternity identification index is set to 0, If all of the items match, a genotypic match is determined and a probabilistic estimate of the same parent is provided.
추정부의 Y 염색체 특정 locus에서 allele ai를 갖는다고 할 때, 추정아들 또한 allele ai를 갖게 된다. 이 경우 Exclusion probability(EP)는 (1-pi)이다. 여기서 pi는 ai의 allele 빈도(frqeuency)이다. Locus l 에서 exclusion probability를 EP l 라고 할 때, K개의 SNP 정보를 결합한 overall exclusion probability은 다음과 같다.If we assume that allele a i is in the locus Y of the putative Y chromosome, the putative son also has allele a i . In this case, the Exclusion probability (EP) is (1-p i ). Where p i is the allele frequency of a i (frqeuency). The exclusion probability from Locus l is EP l , The overall exclusion probability of combining K SNP information is as follows.
Overall EP = Overall EP =
Y 염색체는 상염색체와는 달리 추정 아버지와 추정 아들 모두 하나의 locus에서 한 개의 allele만을 가지므로, overall exclusion probability은 다음과 같이 간략하게 요약된다.Since the Y chromosome, unlike autosomes, has only one allele in one locus, both the estimated father and the presumed son, the overall exclusion probability is briefly summarized as follows.
Overall EP = Overall EP =
여기서 pi l 는 locus l 에서 allele ai의 빈도(frqeuency)이다.Where p i l is the frequency of allele a i in locus l (frqeuency).
SNP 마커는 우선 적용범위를 멘델리안 유전법칙에서 공통 대립인자가 반드시 존재하는 동일 부계간의 가족관계에 한정을 두었다. 판정기준은 사전정보에 의해 가족관계확인이 요구되는 1:1 지정 비교 건에 대해서는 AABB의 가이드라인인 99.9%를 삼인검사시 1차 기준으로 적용하였다. 또한 1,000명 이상의 데이터베이스에서 가족관계확인을 요하는 실종자확인, 미아찾기, 대량재해사건 등의 경우에는 99.99%이상을 2차 기준으로 적용하였다.
SNP markers have limited coverage to family relationships between identical parental families in which the common allele is necessarily present in the Mendelian genetic code. The criterion was applied to 99.9% of the AABB guidelines for the 1: 1 designation comparison case, which requires confirmation of the family relationship by prior information, as the first criterion for the third person survey. In addition, more than 99.99% of the cases of missing persons, finding missing persons, mass casualties, etc.
실시예Example 2: 동일 부계 판별 예시 및 결과 2: Example of identification of the same parent and results
부자 관계의 3쌍을 대상으로 선정된 마커를 대상으로 분석한 결과를 하기 표 2에 나타내었다.The results are shown in Table 2 below. [Table 2] < tb > < TABLE >
각 쌍의 부자관계의 경우 분석된 결과, 가족 내에서는 부의 allele 모두 자에게서도 관찰되었으며, 이 경우 부권배제력은 최소 99.9998454%로 생물학적 가족이라는 것을 확인할 수 있었으며(동일부계의 가능성을 배제 할 수 없음) 타가족의 부자 사이에서는 일치하지 않은 allel 들이 많아, 부자 관계가 아님을 확인할 수 있었다.As a result of analysis of each pair of rich relationships, all negative alleles in the family were observed, and in this case, it was confirmed that the exclusion power for paternity was at least 99.9998454% (the possibility of the same paternity can not be excluded) There were many incongruous alleles among the rich of other families, and it was confirmed that it was not a rich relationship.
<110> DNA LINK, INC. <120> Single nucleotide polymorphism marker composition for identification of paternity and its use <130> PN096234 <160> 27 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 tcctttgaat tgaataatga taatgacaca agttaccaaa aagtgtggga tacagtgaaa 60 tcagtgcttt acaaaaaaag gttatagcac tgaatgtcta cgtagaaaag cctgaagggg 120 tcaagggcag aaactgacaa cctcctgtca tacctcaatg aactagagaa acaagaacaa 180 actaaaccca aagctagaag a 201 <210> 2 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 agcactgtcc atgtcctctg tcttcacctt ttttgcaggt gaagttgcag gaccccgtcc 60 acccctcacc agattgtatg ctcaccccta tgtgaactta cggctgctca cactctctgt 120 ttcagaatga aatcccaaga caatggagga gtttccccta atgacgttaa gcacctgctt 180 ggctgggaaa tgaattggag g 201 <210> 3 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 tggtccttag gctcctattt cctcatggct tagacttttt atatggaaat gcagctctgt 60 cactgtcata gcacacagtg gtagctggcc ttgccaccag ctagatttgg cttgatggaa 120 acctgaatat caatttctag ttattatgaa atagacactc ttattcttca 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cggaagtgta aagtcattta gctgtatgat cctttattgc catttttttt ctgacagatt 180 ttatgaattt atctttgtct c 201 <210> 11 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 11 ccaaccaatg cttaaataag tggggaaaac attgctttca cctctgaggc cagcgaaatg 60 atgactaatt ggttgcacaa caatctgtta cagaccttct gcttgaaagg ttattaccct 120 tctgctgtcc ttcagcagaa acatgattag ttttcaaacc cttgtttatt taactcaatc 180 atcctatgta gctttctcta g 201 <210> 12 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 12 acacaactat tttaatacta agttctgtac tcttgacatt gttttatgtt ctcttctgct 60 gatatgactg aacaaactca tctaaacatt gacaaacagc attataggac tcattaaata 120 aattctagta aatacaatag ggttctaatt tatttttgaa aggaatgagg gagacctata 180 tttactgaca tagaaagact t 201 <210> 13 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 13 ttaaatttta tttgctgatg ctgaaatgat tgaaataaca tgattaatgt tttcttgttc 60 agtttgtttt acaaggtaat aggcattgat tgggcattgt atattccaca attttacgaa 120 catttttcac tttcacataa ctgatttttt tattttgaga cagagtcagg ctttgttacc 180 taggctggat tgcagtgatg t 201 <210> 14 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 14 atgattaaaa agatattgtt tgatggttca gcttccagat attaccagca tgcagattta 60 gagaaccggt gttttcttta gcattttggt cccatctttt ataagaggca gagtttccaa 120 agagggataa agaggatgaa tgggaggaaa aagaggggag catgaataat tgagaaaaaa 180 gctaaagctg acagaaagga g 201 <210> 15 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 15 aatattttct tgcaggcttg ggcaagtact gtagaccatc tgtcctcatc catttaaagg 60 ccaatggtgt ttcaggcatt cagctaggta tttcagacat cgtagttccc aaatgccggt 120 ctgttaaata gtattggtgc aggctgaatt ttcagtgctc tgaagtcaaa ttagaagata 180 catagttacg atgtttttca t 201 <210> 16 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 16 ggagttagat ctctgaaatc ctgaatggaa gagagagcac tccccttcta tcaccagaca 60 tagtatgctt gcttcacagg cttgttctag caacaaatcc cacctgctat tctccctgga 120 cagattgttt ggtaaagtat aaatgtgacg gtgaacactc ctaggccttc ttgctttctt 180 ctctgccttg ccacagcaag a 201 <210> 17 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 17 ccttttaaaa gaaaggattc atgatgaaat ctgctttttg ttttgcagag agcttggaga 60 taattctggt ggctgtgtgg agtatgtgtt ggaggtgagt cgctagctga agaattaaaa 120 caatagtttt agcagtttgg gtaagagatg tttacagaaa tgttttgtgg aataaaactg 180 aacagtcaga gacctatgag a 201 <210> 18 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 18 gagtcttatc ctatgaggtg ccatgaaagt ggggcccaca gaaggatgct gctcagcttc 60 ctggattcag ctctcttcct aaggttatgt acaaaaatct catctctcac tttgcctgag 120 ttgcagctac ctttgctggt gatcctggac ccaaagtgtg ccagcctctc ctgatactct 180 gtgtgtacct gagcagctat t 201 <210> 19 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 19 aggccatata aaaacgcagc attctgttaa tataaaacac aaaacaacct ttataacaga 60 ttttatatct attactatta catatattaa taagaagtca cgtaacgaga tgttttaagt 120 tctgaatatt ttaccatata ttacaatatt cttctctact ttttctcaag ttctctccat 180 tttgaaaatt ggaatcaatt t 201 <210> 20 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 20 caccagaggg ttctgaaaca gattccccct tggcaaggtt tcccaaatgt ctaaattact 60 aaatcagtat gggagatcat cagctctgtg actggttaat atagtttttc ccaagagcac 120 tccttctctg accgaggaaa tgctggaaat cgatgggata agtaatgtct gggtgactgc 180 tttaggctgg ctttgtgttt a 201 <210> 21 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 21 tttggctctc cctggtccta ttgctcatgg attctctctc ttctttctat tggtctcttg 60 ttttgggcat cccattttgc agtcctccaa tatggagtaa cttctctctc catccaaaag 120 aaaggtaagc taaacaatat ctccagctgt cttctaggaa ggaactactg gctctcacat 180 cagatgagta taggatttac a 201 <210> 22 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 22 tatggcttct cctgctacaa catgaaaaca tcattacaac tcataggcaa tatgaataaa 60 tactaaaggc tgcaatgaaa gattataagg gaacctgatt gcttgggagt gataattcag 120 gagaaacttt tctaaggaac tgatttaaat tatttttagt taatttgata ctgcagcttt 180 cttctgaccc tatcacattg a 201 <210> 23 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 23 tggcctattt ctccctgtca ggttgcacag atgcatgtag agcattctta ggagaccatt 60 gttttagaaa actttgattt gtacatgtta gttttcatga aattgcaaca cagagatagg 120 tcctaaaagt ggaatgtatt taaaacttgt tgaattagac acacacacac agacacacac 180 aaagaatcag cagagaaaac a 201 <210> 24 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 24 tttgaggcta caagttagtt aatcttttgg aacatgttat cttctgctat ttatagcaaa 60 gatcctaagt gtaactattg tcattttctt ctatatctgc aagttggtat gtttacatac 120 aggtgaaaga gcctcttttc catatagtct agtcataagt aaaagacctt ttaggcttag 180 gtctggaaaa cttttaagtc c 201 <210> 25 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 25 aactgctagg tcgttactag agtgcaggtc tttcctcact caaacacaaa ggcaggccag 60 cagcatcaca ctgaccaact tgagagggag aatagacaga aatatccctg cttttatact 120 caggtcccag aaaagtctat tctttcactg ggaaaaatta aaatggatgt ttgttttctg 180 tggatgcttt tttttttttt t 201 <210> 26 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 26 gatcagtgtc actgtaaagc aactatacaa acaacaaaca taataactcc atttatgtaa 60 ctatgtttac aagttaacag cacaatgtca agatcagata cacatattaa tactaatctt 120 acatgtaaat gacctaaatg tcccatttaa aaggcacaga gaagagtggc aagctggata 180 aaattgcaag actcaattgt a 201 <210> 27 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 27 ttccagggct tgagaaacca acagattgat ctgactctgt cttcatcagt ttaaaggaaa 60 gggccagtgg gataaatatg attttttttt tggtaatgat cttgaaacaa gaaagaaaaa 120 aaaaagcaat ctatttattc ttctctatat taaggtatgg tcaattggta ccaaaagaaa 180 gccacttccc tttgacttta t 201 ≪ 110 > DNA LINK, INC. <120> Single nucleotide polymorphism marker composition for identification of paternity and its use <130> PN096234 <160> 27 <170> Kopatentin 1.71 <210> 1 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 tcctttgaat tgaataatga taatgacaca agttaccaaa aagtgtggga tacagtgaaa 60 tcagtgcttt acaaaaaaag gttatagcac tgaatgtcta cgtagaaaag cctgaagggg 120 tcaagggcag aaactgacaa cctcctgtca tacctcaatg aactagagaa acaagaacaa 180 actaaaccca aagctagaag a 201 <210> 2 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 agcactgtcc atgtcctctg tcttcacctt ttttgcaggt gaagttgcag gaccccgtcc 60 acccctcacc agattgtatg ctcaccccta tgtgaactta cggctgctca cactctctgt 120 ttcagaatga aatcccaaga caatggagga gtttccccta atgacgttaa gcacctgctt 180 ggctgggaaa tgaattggag g 201 <210> 3 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 tggtccttag gctcctattt cctcatggct tagacttttt atatggaaat gcagctctgt 60 cactgtcata gcacacagtg gtagctggcc ttgccaccag ctagatttgg cttgatggaa 120 acctgaatat caatttctag ttattatgaa atagacactc ttattcttca gtgactttta 180 agaatttttt ttgaattatc t 201 <210> 4 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4 tagctatagt cattagtagt tccttctcta taaacgactt ctcaattctc gcaaatagta 60 gcagaaacct tattaagaaa ggtatagtgt tcaaaatgta acctgtctcc taccactctt 120 ggctcctacc acatgtcaaa tgttagcata taatgtaaag aatcataact cttccacaat 180 gagtaggtgg atggcactgc c 201 <210> 5 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 ccttttatca agccatcctc aattatcctt acatgagagt gccatctgtt tcccttaaac 60 ctcaactcag acaagtagag ctaaatatat taatgtctta cgaatccatc ccaaaaattc 120 tcggtgaaat ttcaagcaaa tacaaatgcc catgttcatt ttccacattc cacacaagac 180 atgtcgtata catttattct g 201 <210> 6 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 6 gaatttttgt ttgtttttta ttcctttgct cattttcccc ttccaacaat ggtctccttt 60 ttgcccacca cccaaatcct acccaaggcc ttgatggagt cacatatatt ccaagagatg 120 atctagatca cttccatctt ccaccacctc ccctttacac tccttactta gtttaccatg 180 ttattttaat tcctgctcaa t 201 <210> 7 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 7 gaaagggtaa agtattttct tatctttttt tggattattt attaagagtt tcttcctcca 60 ctgactgtaa aatgctgaat tatagttaag tgtttataga ctaggtctgt ttctccctct 120 ttgaattcat attgtacctg cactaaatat atttgttata taccaagtgg gtactaaatt 180 tgaaaaaaaa aatttggctt c 201 <210> 8 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 8 tgatttcagc tccatgaaaa actgttccct aaaacaaggg gtcgattgat taaaataacg 60 aaagaaaaga aaatcagaat aataacagag taattggcag acgtatacaa tagacttttt 120 ttctttcttt tatatatata tttttttatt atactttagg ttcaagggca catgtgcaca 180 acgtgcaggt ttgttacata g 201 <210> 9 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 9 ccttttta gccaaaaaat tgagtagcac tttaaaacaa gacagagaga ctcactttgc tgtgtttaga 120 attgattttc tcctggaaaa tgtagactgg tgttacatgc catatttaga agttagccac 180 ttatgctctc ataattttat t 201 <210> 10 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 10 agaaaagatt gctctaatca gcctatttat ttaaaattgt ttaagatagg taagtgttcc 60 tagcttagca gttattgcaa tcagaaatgg gaagacttca agaatttcta tgttgctctt 120 cggaagtgta aagtcattta gctgtatgat cctttattgc catttttttt ctgacagatt 180 ttatgaattt atctttgtct c 201 <210> 11 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 11 ccaaccaatg cttaaataag tggggaaaac attgctttca cctctgaggc cagcgaaatg 60 atgactaatt ggttgcacaa caatctgtta cagaccttct gcttgaaagg ttattaccct 120 tctgctgtcc ttcagcagaa acatgattag ttttcaaacc cttgtttatt taactcaatc 180 atcctatgta gctttctcta g 201 <210> 12 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 12 acacaactat tttaatacta agttctgtac tcttgacatt gttttatgtt ctcttctgct 60 gatatgactg aacaaactca tctaaacatt gacaaacagc attataggac tcattaaata 120 aattctagta aatacaatag ggttctaatt tatttttgaa aggaatgagg gagacctata 180 tttactgaca tagaaagact t 201 <210> 13 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 13 ttaaatttta tttgctgatg ctgaaatgat tgaaataaca tgattaatgt tttcttgttc 60 agtttgtttt acaaggtaat aggcattgat tgggcattgt atattccaca attttacgaa 120 catttttcac tttcacataa ctgatttttt tattttgaga cagagtcagg ctttgttacc 180 taggctggat tgcagtgatg t 201 <210> 14 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 14 atgattaaaa agatattgtt tgatggttca gcttccagat attaccagca tgcagattta 60 gagaccggt gttttcttta gcattttggt cccatctttt ataagaggca gagtttccaa 120 agagggataa agaggatgaa tgggaggaaa aagaggggag catgaataat tgagaaaaaa 180 gctaaagctg acagaaagga g 201 <210> 15 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 15 aatattttct tgcaggcttg ggcaagtact gtagaccatc tgtcctcatc catttaaagg 60 ccaatggtgt ttcaggcatt cagctaggta tttcagacat cgtagttccc aaatgccggt 120 ctgttaaata gtattggtgc aggctgaatt ttcagtgctc tgaagtcaaa ttagaagata 180 catagttacg atgtttttca t 201 <210> 16 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 16 ggagttagat ctctgaaatc ctgaatggaa gagagagcac tccccttcta tcaccagaca 60 tagtatgctt gcttcacagg cttgttctag caacaaatcc cacctgctat tctccctgga 120 cagattgttt ggtaaagtat aaatgtgacg gtgaacactc ctaggccttc ttgctttctt 180 ctctgccttg ccacagcaag a 201 <210> 17 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 17 ccttttaaaa gaaaggattc atgatgaaat ctgctttttg ttttgcagag agcttggaga 60 taattctggt ggctgtgtgg agtatgtgtt ggaggtgagt cgctagctga agaattaaaa 120 caatagtttt agcagtttgg gtaagagatg tttacagaaa tgttttgtgg aataaaactg 180 aacagtcaga gacctatgag a 201 <210> 18 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 18 gagtcttatc ctatgaggtg ccatgaaagt ggggcccaca gaaggatgct gctcagcttc 60 ctggattcag ctctcttcct aaggttatgt acaaaaatct catctctcac tttgcctgag 120 ttgcagctac ctttgctggt gatcctggac ccaaagtgtg ccagcctctc ctgatactct 180 gtgtgtacct gagcagctat t 201 <210> 19 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 19 aggccatata aaaacgcagc attctgttaa tataaaacac aaaacaacct ttataacaga 60 ttttatatct attactatta catatattaa taagaagtca cgtaacgaga tgttttaagt 120 tctgaatatt ttaccatata ttacaatatt cttctctact ttttctcaag ttctctccat 180 tttgaaaatt ggaatcaatt t 201 <210> 20 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 20 caccagaggg ttctgaaaca gattccccct tggcaaggtt tcccaaatgt ctaaattact 60 aaatcagtat gggagatcat cagctctgtg actggttaat atagtttttc ccaagagcac 120 tccttctctg accgaggaaa tgctggaaat cgatgggata agtaatgtct gggtgactgc 180 tttaggctgg ctttgtgttt a 201 <210> 21 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 21 tttggctctc cctggtccta ttgctcatgg attctctctc ttctttctat tggtctcttg 60 ttttgggcat cccattttgc agtcctccaa tatggagtaa cttctctctc catccaaaag 120 aaaggtaagc taaacaatat ctccagctgt cttctaggaa ggaactactg gctctcacat 180 cagatgagta taggatttac a 201 <210> 22 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 22 tatggcttct cctgctacaa catgaaaaca tcattacaac tcataggcaa tatgaataaa 60 tactaaaggc tgcaatgaaa gattataagg gaacctgatt gcttgggagt gataattcag 120 gagaaacttt tctaaggaac tgatttaaat tatttttagt taatttgata ctgcagcttt 180 cttctgaccc tatcacattg a 201 <210> 23 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 23 tggcctattt ctccctgtca ggttgcacag atgcatgtag agcattctta ggagaccatt 60 gttttagaaa actttgattt gtacatgtta gttttcatga aattgcaaca cagagatagg 120 tcctaaaagt ggaatgtatt taaaacttgt tgaattagac acacacacac agacacacac 180 aaagaatcag cagagaaaac a 201 <210> 24 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 24 tttgaggcta caagttagtt aatcttttgg aacatgttat cttctgctat ttatagcaaa 60 gatcctaagt gtaactattg tcattttctt ctatatctgc aagttggtat gtttacatac 120 aggtgaaaga gcctcttttc catatagtct agtcataagt aaaagacctt ttaggcttag 180 gtctggaaaa cttttaagtc c 201 <210> 25 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 25 aactgctagg tcgttactag agtgcaggtc tttcctcact caaacacaaa ggcaggccag 60 cagcatcaca ctgaccaact tgagagggag aatagacaga aatatccctg cttttatact 120 caggtcccag aaaagtctat tctttcactg ggaaaaatta aaatggatgt ttgttttctg 180 tggatgcttt tttttttttt t 201 <210> 26 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 26 gatcagtgtc actgtaaagc aactatacaa acaacaaaca taataactcc atttatgtaa 60 ctatgtttac aagttaacag cacaatgtca agatcagata cacatattaa tactaatctt 120 acatgtaaat gacctaaatg tcccatttaa aaggcacaga gaagagtggc aagctggata 180 aaattgcaag actcaattgt a 201 <210> 27 <211> 201 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 27 ttccagggct tgagaaacca acagattgat ctgactctgt cttcatcagt ttaaaggaaa 60 gggccagtgg gataaatatg attttttttt tggtaatgat cttgaaacaa gaaagaaaaa 120 aaaaagcaat ctatttattc ttctctatat taaggtatgg tcaattggta ccaaaagaaa 180 gccacttccc tttgacttta t 201
Claims (8)
제1항 또는 제2항의 마커 조성물에 포함된 폴리뉴클레오티드의 SNP 위치의 뉴클레오티드를 결정하는 단계를 포함하는 동일 부계를 확인하는 방법.Providing an isolated nucleic acid sample; And
Determining the nucleotide at the SNP position of the polynucleotide included in the marker composition of claim 1 or 2. < Desc / Clms Page number 24 >
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