KR101683804B1

KR101683804B1 - The composition for prevention and treatment of thyroid diseases containing the extracts of Maackia amurensis or Tectoridin

Info

Publication number: KR101683804B1
Application number: KR1020140083002A
Authority: KR
Inventors: 안미정; 장은철; 심명국; 이영주; 배지영; 박우성; 김혜진
Original assignee: 경상대학교산학협력단
Priority date: 2013-07-31
Filing date: 2014-07-03
Publication date: 2016-12-09
Also published as: KR20150015362A; WO2015016494A1

Abstract

본 발명은 다릅나무(Maackia amurensis Rupr.) 추출물 및 이의 분획물을 함유하고 있는 갑상선 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물, 및 건강식품용 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로 다릅나무 추출물, 이의 분획물, 또는 텍토리딘이 에스트로젠 수용체에 대한 에스트로젠 유사 활성뿐만 아니라 갑상선 호르몬 수용체에 대한 활성을 나타냄을 확인함으로써, 상기 다릅나무 추출물, 이의 분획물, 또는 텍토리딘이 갑상선 질환 예방 및 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.The present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of thyroid disease and a composition for health food, which contain a extract of the genus Maackia amurensis Rupr. And a fraction thereof, and more particularly to a composition for preventing or treating thyroid disease, The inventors of the present invention confirmed that the extract of the elderberry, fractions thereof, or tectoridine can be effectively used as a composition for the prevention and treatment of thyroid disease by confirming that dean exhibits activity against the thyroid hormone receptor as well as estrogen-like activity against the estrogen receptor Respectively.

Description

TECHNICAL FIELD The present invention relates to a composition for prevention and treatment of thyroid disease, which contains a plant extract, a tallwood extract or tectoridine,

본 발명은 다릅나무(Maackia amurensis Rupr.) 추출물, 이의 분획물 또는 텍토리딘을 함유하고 있는 갑상선 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물, 및 건강기능식품용 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of thyroid disease containing an extract of the genus Maackia amurensis Rupr., A fraction thereof or tectoridine , and a composition for health functional foods.

갑상선 기능항진증, 갑상선 기능저하증, 갑상선 결절을 비롯한 갑상선 종양 등의 갑상선 질환은 남성에 비해 여성에게 8 내지 10 배 정도 많이 발병하며, 8명의 여성 중 한명 꼴로 발병한다고 알려져 있다. 더욱이 최근의 진단 기술의 발전으로 그 발생 빈도가 증가하고 있다. 또한, 주요 만성질환 중 갑상선 질환이 최근 5년간 57.4%로 가장 빠르게 증가하였다. 즉, 2006년 대비 최근 5년간 주요 만성질환의 진료 환자 중 갑상선의 장애로 인한 진료 환자가 57.4%, 뇌혈관질환은 34.7%, 고혈압은 29.1%, 당뇨병 23.4%, 심장질환은 17.6% 증가하였다. 한편, 갑상선질환과 같은 내분비 및 대사성 질환은 심장질환, 당뇨 등 다른 질병에도 영향을 미치는 만큼 그 중요성이 더욱 부각되고 있으며, 관절염, 위장염, 아토피, 당뇨, 비만 등의 다빈도 질환과 비교할 경우에도 갑상선 질환의 유병률은 낮지 않으나, 활성검색을 위한 기초연구 및 관련 연구 인프라는 취약한 편이다.
Thyroid diseases such as hyperthyroidism, hypothyroidism, thyroid nodules and thyroid tumors are 8 to 10 times more common in women than men, and it is known that one in 8 women develops. In addition, the frequency of occurrence of this problem is increasing due to the recent development of diagnostic technology. Among the major chronic diseases, thyroid disease has increased at the fastest rate of 57.4% in the last 5 years. In other words, 57.4% of patients with major thyroid disorders, 34.7% of cerebrovascular disease, 29.1% of hypertension, 23.4% of diabetes, and 17.6% of heart disease were the major chronic illness patients in the last five years compared to 2006. On the other hand, the endocrine and metabolic diseases such as thyroid disease are more important as they affect other diseases such as heart disease and diabetes, and even when compared with the multidrug diseases such as arthritis, gastroenteritis, atopy, diabetes and obesity, The prevalence of the disease is not low, but the basic research and related research infrastructure for active search is weak.

갑상선 질환 중 하나인 갑상선 기능항진증은 내분비질환 중 상당히 흔한 질환으로, 여성에게서 많이 발병하는 질환이다. 상기 질환은 갑상선 기능에 이상이 생겨 갑상선 호르몬이 과잉 분비되는 상태로, 갑상선 호르몬이 대사를 촉진해 에너지를 과도하게 소모시키기 때문에 피로감, 전신쇠약 및 체중감소 등의 현상이 나타나게 된다. 이러한 갑상선 기능항진증의 치료 방법으로는 약물 치료, 방사성 요오드 치료법, 수술 치료법 등이 사용되고 있다.Thyroid hyperthyroidism, which is one of the thyroid diseases, is a very common disease among endocrine diseases and it is a disease that occurs in many women. Thyroid hormone is excessively secreted due to abnormalities of thyroid function. Thyroid hormone stimulates metabolism and consumes excess energy, resulting in fatigue, general weakness and weight loss. Drug therapy, radioactive iodine therapy, and surgical treatment have been used to treat hyperthyroidism.

그러나, 갑상선 기능항진증의 치료를 위해 약물을 복용할 경우, 2 내지 3개월 이상 투약해야 하고, 백혈구 감소증이나 간염 등의 심한 부작용을 동반하기도 하는 단점이 있다. 또한, 방사선 요오드 치료법은, 방사성 요오드를 섭취할 경우 오히려 평생 투약이 필요한 갑상선 기능저하증을 불러오는 부작용이 존재하며, 임신한 여성의 경우 방사성 요오드가 태반을 통과하여 태아의 갑상선을 파괴하는 문제가 있다. 한편, 수술 치료법은 입원이 필수적이고 비용이 많이 들며, 합병증이 생길 수도 있어 선택하지 않는 추세이다.
However, when taking medicines for the treatment of hyperthyroidism, the medication should be applied for 2 to 3 months or more, and there is a drawback that severe side effects such as leukopenia and hepatitis are accompanied. In addition, there is a side effect that the radioactive iodine treatment causes the hypothyroidism which requires the lifetime medication to be consumed when the radioactive iodine is consumed. In the case of pregnant women, the radioactive iodine passes through the placenta and destroys the fetal thyroid. On the other hand, surgical treatment is an indispensable tendency for hospitalization because it is necessary, costly, and complicated.

일반적으로 신약 개발 실패요인의 13 내지 25%가 독성 및 안전성 문제로 나타나고 있다. 따라서 천연물 신약 개발방법이 합성방법에 비하여 상대적으로 개발 성공률이 높고, 비용이 적게 소요되는 경우가 많다. 또한, 우리나라는 전통 동양의학에 대한 지식이 풍부하고, 한약재와 같은 천연물질에 대한 임상경험과 지식이 서구 선진국에 비교하여 상대적인 우위를 확보하고 있다.Generally, 13 to 25% of new drug failure factors are toxicity and safety problems. Therefore, the natural product drug development method has a relatively high development success rate and low cost in comparison with the synthetic method. In addition, Korea has abundant knowledge about traditional oriental medicine, and clinical experience and knowledge about natural materials such as herbal medicines have a comparative advantage compared with Western advanced countries.

이중 갑상선 기능항진증 시장은 2010년 37,500,000 달러 규모로, 상대적으로 낮은 성장률인 2.9%로, 2017년에는 45,900,000 달러로 전망되고 있다. 현재 갑상선 기능항진증 시장에는 제네릭 의약품이 많이 차지하고 있고, 승인된 약품이 부족한 실정으로 새로운 약물의 개발이 요구되고 있는 실정이다.
The double thyroid hypertension market is estimated at $ 37,500,000 in 2010, with a relatively low growth rate of 2.9% in 2017 and $ 45,900,000 in 2017. Currently, there are many generic drugs in the hyperthyroidism market, and there is a lack of approved drugs, and new drugs are required to be developed.

다릅나무(Maackia amurensis Rupr.)는 콩과에 속하는 낙엽교목으로 높이가 15 m에 달한다. 잎은 호생하며 홀수 1 회 우상복엽이고 소엽은 타원형 또는 장란형이며 짧은 점첨두이고 원저이며 길이 5 내지 8 cm로 양면에 털이 없다. 꽃차례는 가지 끝에 달리고 총상화서 또는 원추화서로서 길이 10 내지 20 cm이며 위로 향하고 꽃은 7월에 피며 지름 8 mm로서 밀착한다. 꼬투리는 넓은 선형이고 털이 없으며 길이 3.5 내지 5.0 cm, 너비 7 내지 9 mm이고 열매 꼭지는 길이 5 내지 10 mm이다. 종자는 길이 6 mm로서 신장형에 가까우며 열매는 9월에 익는다. 잎 뒷면에 털이 있고 꽃차례에 황갈색 또는 회갈색의 짧은 털이 밀생한 것을 개물푸레나무(Maackia amurensis Rurp. var. buergeri (Maxim.) C.K.Schneid.)라고 한다. 각지의 깊은 산골짜기에서 자라며, 줄기를 자른 단면은 심재가 흑갈색을 띄는 것이 특징이다. 다릅나무는 다름나무라고도 불리며, 쇠코둘개나무, 개박달나무, 소터래나무, 다즙나무로도 불리고 있으며, 민간에서는 선화삼이라 하여 임파선염, 임파선암, 폐암, 자궁근종, 신경쇠약, 생리불순, 편두통 등에 사용되고 있다.The elder tree ( Maackia amurensis Rupr.) Is a deciduous arboreous tree belonging to the soybean family and is 15 m high. Leaves are alternate phyllotaxis, odd numbered oddopharyngeal lobes, and lobules are oval or oblong, short acuminate, original, 5 to 8 cm long, with no hairs on both sides. Inflorescence hangs at the end of branches and is 10 ~ 20 cm in length and 10 ~ 20 cm in length. It is bloomed in July and has a diameter of 8 mm. The pod is wide linear, free of hairs, 3.5-5.0 cm long, 7-9 mm wide, and the fruit nipples 5-10 mm long. The seeds are 6 mm long and close to the elongated form, and the fruit ripens in September. Hairs on the back of the leaf and are called to a short-haired dog of brown or gray-brown ash dense on inflorescence (Maackia amurensis Rurp. Var. Buergeri (Maxim.) CKSchneid.). It grows in deep valleys of various places, and the cross section cut off stem is characterized by the core being dark brown. It is also known as the alternate tree, which is also known as the quercus mongolica, the mulberry tree, the mulberry tree, and the succulent tree. In the civilian area, the mulberry tree is called the lepidoptera, lymphoma, lung cancer, uterine leiomyoma, Migraine and the like.

다릅나무의 수피에서 시티신(cytisine), N-포밀시티신(formylcytisine), N-(3-옥소부틸)시티신(N-(3-oxobutyl)cytisine), [(3-하이드록시-6-피리디닐)-메틸]-시티신([(3-hydroxy-6-pyridinyl)-methyl]-cytisine), (-)-에피밥티폴린(epibaptifoline), N-메틸시티신(N-methylcytisine)과 같은 알칼로이드 성분 및 마키아플라바논(maackiaflavanone) A, 마키아플라바논 B, 마키아펜톤(maackiapentone), 마키아프테로카르판(maackiapterocarpan) A, 마키아프테로카르판 B와 같은 플라보노이드 성분들이 분리 보고되었다. 이 밖에 내분비세포 표면의 시알산(sialic acid)과 결합하는 마커로서의 다릅나무 중의 렉틴(lectin) 성분들에 대한 연구자료는 많이 보고되고 있으나, 갑상선 질환의 개선 작용과 관련된 직접적인 연구 결과는 알려진 바 없는 실정이다.
City Seen from the bark of the tree varies (cytisine), N - formyl New City (formylcytisine), N - (3- oxo-butyl) New City (N - (3-oxobutyl) cytisine), [(3- hydroxy-6- pyridinyl) -methyl] such as methyl City new (N -methylcytisine) - new City ([(3-hydroxy-6 -pyridinyl) -methyl] -cytisine), (-) - epi bapti morpholine (epibaptifoline), N Flavonoid components such as alkaloid components and maackiaflavanone A, maquia flavanone B, maackiapentone, maackiapterocarpan A, and maquaporocarban B have been isolated. In addition, studies on lectin components in the elder tree as markers binding to sialic acid on the surface of endocrine cells have been reported, but no direct results have been reported on the improvement of thyroid disease It is true.

한편, 최근 들어 에스트로젠 수용체에 활성을 보이는 파이토에스트로젠(phytoestrogen)류나 유방암의 치료와 예방에 사용하는 에스트로젠 수용체 길항제인 타목시펜(tamoxifen)이 갑상선호르몬 수용체에도 작용한다는 사실이 알려지고 있다. 시장성 측면에서, 에스트로젠 및 프로게스테론을 장기 투여한 여성들의 경우, 유방암 발병률이 26% 증가한다고 밝혀져 있다. 따라서, 미국의 경우 호르몬대체요법(HRT) 시장은 170억 달러 규모로, 천연물 요법제를 비롯해 침, 식물에서 추출한 에스트로젠 유사물질인 파이토에스트로젠 등이 이 중 30%를 차지하고 있다. 국내는 연간 10만 명의 신규 폐경 질환자가 발생하고 있고 적어도 10년간 복용해야 하기 때문에 거대시장으로 형성될 가능성이 높다.
In the meantime, it is known that tamoxifen, an estrogen receptor antagonist used for the treatment and prevention of phytoestrogen or breast cancer, is also acting on the thyroid hormone receptor. In terms of marketability, women with long-term administration of estrogen and progesterone have a 26% increase in the incidence of breast cancer. Therefore, in the US, the HRT market is worth US $ 17 billion, accounting for 30% of the total, including natural herbal remedies, phytoestrogens such as salicylates and plant-derived estrogen analogs. In Korea, there are about 100,000 new menopausal patients per year, and it is highly likely to become a huge market because it has to be taken for at least 10 years.

이에, 본 발명자들은 갑상선 질환 치료물질을 개발하기 위하여 노력한 결과, 다릅나무 추출물, 이의 분획물, 또는 텍토리딘이 에스트로젠 및 갑상선 수용체에 대한 유의적인 활성을 나타냄을 확인함으로써, 상기 다릅나무 추출물, 이의 분획물, 또는 텍토리딘이 여성호르몬 대체제뿐만 아니라, 갑상선 질환 예방 및 치료용 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 밝힘으로써, 본 발명을 완성하였다.
Accordingly, the inventors of the present invention have made efforts to develop a therapeutic agent for thyroid disease. As a result, it has been confirmed that the elderberry extract, its fractions, or tectoridine exhibit significant activity on estrogens and thyroid receptors, , Or tectoridine can be effectively used as an effective ingredient of a composition for preventing and treating thyroid disease as well as a female hormone replacement agent.

본 발명의 목적은 다릅나무(Maackia amurensis Rupr.) 추출물 또는 이에 추가적으로 유기용매를 가하여 제조한 분획물을 유효성분으로 함유하는 갑상선 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물, 및 건강기능식품을 제공하는 것이다.
It is an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for preventing and treating thyroid disease and a health functional food containing an extract of the genus Maackia amurensis Rupr. Or a fraction prepared by adding an organic solvent thereto as an active ingredient.

상기 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 다릅나무(Maackia amurensis Rupr.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 갑상선 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In order to accomplish the above object, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing and treating thyroid disease, which comprises an extract of the genus Maackia amurensis Rupr. As an active ingredient.

또한, 본 발명은 다릅나무 추출물에 추가적으로 유기용매를 가하여 제조한 분획물을 유효성분으로 함유하는 갑상선 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.The present invention also provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of thyroid disease, which comprises a fraction prepared by addition of an organic solvent to the elderberry extract as an active ingredient.

또한, 본 발명은 다릅나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 갑상선 질환 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.The present invention also provides a health functional food for preventing and ameliorating thyroid disease, which comprises an elderberry extract as an active ingredient.

또한, 본 발명은 다릅나무 추출물에 추가적으로 유기용매를 가하여 제조한 분획물을 유효성분으로 함유하는 갑상선 질환 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.In addition, the present invention provides a health functional food for preventing and improving thyroid disease, which comprises a fraction prepared by adding an organic solvent to the elderberry extract as an active ingredient.

또한, 본 발명은 하기의 화학식 1로 표시되는 텍토리딘(Tectoridin) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 갑상선 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 갑상선 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.The present invention also relates to a pharmaceutical composition for preventing and treating thyroid disease, comprising tectoridin or a pharmaceutically acceptable salt thereof represented by the following formula 1 as an active ingredient, and a health composition for preventing or ameliorating thyroid disease Provide food.

[화학식 1][Chemical Formula 1]

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본 발명의 다릅나무(Maackia amurensis Rupr.) 추출물, 이의 분획물 또는 텍토리딘이 에스트로젠 및 갑상선 수용체에 대한 유의적인 활성을 나타냄을 확인함으로써, 상기 다릅나무 추출물, 이의 분획물, 또는 텍토리딘은 여성호르몬 대체제뿐만 아니라, 갑상선 질환 예방 및 치료용 조성물의 유효성분으로서 유용하게 사용될 수 있다.
By confirming that the extract of the present invention, its fraction or tectorid , has a significant activity on the estrogen and thyroid receptors, the extract of the elderberry , its fraction, or tectoridine can be used as a female hormone As well as an effective ingredient of a composition for the prevention and treatment of thyroid disease.

도 1은 다릅나무(M. amurensis) 줄기의 수피로부터 추출물 및 이의 분획물의 제조 과정을 나타낸 도이다.
도 2는 ERE-루시퍼라아제가 형질주입된 MCF-7 세포에서 다릅나무 분획물 각각의 에스트로젠(E2) 수용체에 대한 활성을 나타낸 도이다.
도 3은 ERE-루시퍼라아제가 형질주입된 MCF-7 세포에 에스트로젠(E2 10 nM), 텍토리딘 및 에스트로젠 길항제 ICI 182,780(ICI)을 처리한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 에틸아세테이트 분획물(Ethylacetate Fr.) 및 텍토리딘(Tectoridin)에 의한 에스트로젠 수용체(ERα) 발현 억제를 나타낸 도이다:
β-actin: 양성 대조군;
+; 처리; 및
-; 무처리.
도 5는 TRE-루시퍼라아제가 형질주입된 GH3 세포에 T3, 에틸아세테이트 분획물, 텍토리딘, 아비산나트륨(Sodium Arsenite, As) 및 E2를 처리한 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 GH3 세포를 이용한 T-스크린 검사(T-screen assay) 결과를 나타낸 도이다:
1: 텍토리딘 200 nM, T₃10^-11M, 에틸아세테이트 분획물 100 ng/ml, E₂10^-11M;
2: 텍토리딘 2μM, T₃10^-10M, 에틸아세테이트 분획물 1μg/ml, E₂10^-10M;
3: 텍토리딘 20μM, T₃10^-9M, 에틸아세테이트 분획물 10μg/ml, E₂10^-9M; 및
4: 텍토리딘 200μM, T₃10^-8M, 에틸아세테이트 분획물 100μg/ml, E₂10^-8M.Brief Description of the Drawings Fig. 1 is a diagram showing a process for producing an extract and fractions thereof from the bark of a M. amurensis stalk.
2 is a graph showing the activity of EO-luciferase-transfected MCF-7 cells on the estrogen (E2) receptor of each of the elderberry fraction.
Figure 3 shows the results of treatment of ERE-luciferase-transfected MCF-7 cells with estrogen (E2 10 nM), tectoridine and estrogen antagonist ICI 182,780 (ICI).
Figure 4 shows the inhibition of estrogen receptor (ERa) expression by ethylacetate fractions (Ethylacetate Fr.) And tectoridin (Tectoridin)
β-actin: positive control;
+; process; And
-; No treatment.
FIG. 5 shows the results of treatment of TRE-luciferase-transfected GH3 cells with T3, ethyl acetate fraction, tectoridine, sodium arsenite (As) and E2.
FIG. 6 is a graph showing the results of a T-screen assay using GH3 cells:
1: Tectoridine 200 nM, T ₃ 10 ^-11 M, Ethyl acetate fraction 100 ng / ml, E ₂ 10 ^-11 M;
2: tectoridine 2 μM, T ₃ 10 ^-10 M, ethylacetate fractions 1 μg / ml, E ₂ 10 ^-10 M;
3: Tectoridine 20 μM, T ₃ 10 ^-9 M, Ethyl acetate fraction 10 μg / ml, E ₂ 10 ^-9 M; And
4: Tectoridine 200 μM, T ₃ 10 ^-8 M, Ethyl acetate fraction 100 μg / ml, E ₂ 10 ^-8 M.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 다릅나무(Maackia amurensis Rupr.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 갑상선 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
The present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of thyroid disease, which comprises an extract of the genus Maackia amurensis Rupr. As an active ingredient.

상기 다릅나무는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 다릅나무는 다릅나무의 줄기, 잎 또는 뿌리가 모두 이용가능하나, 다릅나무 줄기의 수피를 이용하는 것이 보다 바람직하다.
The above-mentioned elder tree can be used without limitation such as cultivated or commercially available. It is more preferable to use the trunks of the elder trunks, although the trunks of the elder trees can be used.

상기 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조 방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:The extract is preferably, but not exclusively, prepared by a process comprising the steps of:

1) 다릅나무에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;1) extracting the elder tree with an extraction solvent;

2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계; 및2) filtering the extract of step 1); And

3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축한 후 건조하여 다릅나무의 추출물을 제조하는 단계.
3) Concentrating the filtrate obtained in step 2) under reduced pressure and then drying to produce an extract of the elder tree.

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 다릅나무는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 다릅나무는 잎, 줄기 또는 뿌리가 모두 이용가능하고, 줄기의 수피를 이용하는 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
In the above method, the plant of step 1) can be used without limitation such as cultivated or marketed. It is most preferable to use the leaves, stalks or roots of the elder tree, and the bark of the stem, but the present invention is not limited thereto.

상기 방법에 있어서, 상기 단계 1)의 추출용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코올로는 C₁ 내지 C₂ 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 추출방법으로는 진탕추출, Soxhlet 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출용매를 건조된 다릅나무 분량에 1 내지 40 배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고, 2 내지 3배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하다. 추출온도는 20℃ 내지 100℃ 인 것이 바람직하고, 20℃ 내지 40℃ 인 것이 더욱 바람직하고, 실온인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 추출시간은 10 내지 48 시간인 것이 바람직하며, 15 내지 30 시간인 것이 더욱 바람직하고, 24 시간인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 아울러, 추출 회수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3 내지 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하고, 3회인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
In the above method, it is preferable to use water, an alcohol or a mixture thereof in the extraction solvent of the step 1). As the alcohol, C ₁ to C ₂ lower alcohol is preferably used, and as the lower alcohol, ethanol or methanol is preferably used. As the extraction method, it is preferable to use shaking extraction, Soxhlet extraction or reflux extraction, but it is not limited thereto. It is preferable that the extraction solvent is added by 1 to 40 times the amount of the dry matter to be extracted, and it is more preferable that the extraction solvent is added by 2 to 3 times. The extraction temperature is preferably 20 占 폚 to 100 占 폚, more preferably 20 占 폚 to 40 占 폚, and most preferably room temperature, but is not limited thereto. The extraction time is preferably 10 to 48 hours, more preferably 15 to 30 hours, most preferably 24 hours, but is not limited thereto. In addition, the extraction number is preferably 1 to 5 times, more preferably 3 to 4 times, and most preferably, 3 times, but not limited thereto.

상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
In the above method, it is preferable to use a vacuum decompression concentrator or a vacuum rotary evaporator for the decompression concentration in step 3), but it is not limited thereto. The drying is preferably performed under reduced pressure, vacuum drying, boiling, spray drying or freeze drying, but is not limited thereto.

상기 다릅나무는 화학식 1로 표시되는 텍토리딘(tectoridin)을 포함하는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. It is preferable that the elongated tree contains tectoridin represented by the formula (1), but it is not limited thereto.

[화학식 1][Chemical Formula 1]

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상기 다릅나무 추출물은 에스트로젠 수용체 및 갑상선 호르몬 수용체에 대한 활성을 가지는 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.The elderberry extract may have activity against estrogen receptors and thyroid hormone receptors, but is not limited thereto.

상기 갑상선 질환은 갑상선 기능항진증, 갑상선 기능저하증 또는 갑상선 결절인 것이 바람직하고, 특히 갑상선 기능항진증인 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
The thyroid disease is preferably hyperthyroidism, hypothyroidism, or thyroid nodule, and more preferably hyperthyroidism, but the present invention is not limited thereto.

또한, 본 발명은 다릅나무 추출물에 추가적으로 유기용매를 가하여 제조한 분획물을 유효성분으로 함유하는 갑상선 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
The present invention also provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of thyroid disease, which comprises a fraction prepared by addition of an organic solvent to the elderberry extract as an active ingredient.

상기 분획물은 하기의 단계들을 포함하는 제조 방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:The fraction is preferably, but not limited to, prepared by a process comprising the steps of:

2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계;2) filtering the extract of step 1);

3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축한 후 건조하여 다릅나무의 추출물을 제조하는 단계; 및3) concentrating the filtered extract of step 2) under reduced pressure and then drying it to prepare an extract of the elder tree; And

4) 단계 3)의 다릅나무 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하여 다릅나무 분획물을 제조하는 단계.
4) Extracting the elder tree extract of step 3) with an organic solvent to prepare a fraction of the elder tree.

상기 방법에 있어서, 단계 4)의 유기용매는 헥산, 염화메틸렌, 에틸아세테이트 또는 부탄올인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 분획물은 다릅나무 추출물을 물에 현탁시킨 후 헥산, 염화메틸렌, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물로 순차적으로 계통 분획하여 수득한 헥산 분획물, 염화메틸렌 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 또는 물 분획물 중 어느 하나인 것이 바람직하며, 에틸아세테이트 분획물임이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 분획물은 상기 다릅나무 추출물로부터 분획 과정을 1 내지 5회, 바람직하게는 3회 반복하여 수득할 수 있고, 분획 후 감압 농축하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
In the above method, the organic solvent in step 4) is preferably, but not limited to, hexane, methylene chloride, ethyl acetate or butanol. The fraction is any one of a hexane fraction, a methylene chloride fraction, an ethyl acetate fraction, a butanol fraction or a water fraction obtained by suspending the elderberry extract in water and sequentially fractionating the fraction with hexane, methylene chloride, ethyl acetate, butanol and water More preferably an ethyl acetate fraction, but is not limited thereto. The fraction may be obtained by repeating the fractionation process from the elderberry extract for 1 to 5 times, preferably 3 times, and after fractionation, concentration under reduced pressure is preferable, but is not limited thereto.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 다릅나무 줄기의 수피를 사용하여, 추출물 및 이의 분획물을 제조하였고(도 1 참조), 에스트로젠 수용체에 대한 활성을 측정한 결과, 다릅나무 추출물 또는 이의 분획물이 에스트로젠 및 갑상선 수용체에 대한 유의적인 활성을 나타냄을 확인하였다 (도 2 및 도 3 참조). 상기 에틸아세테이트 분획물로부터 생리적 활성을 보이는 단일 화합물을 순수 분리한 결과, 텍토리딘(tectoridin)을 분리하였고(화학식 1 참조), 에스트로젠 수용체에 대한 활성 검사 결과, 텍토리딘이 양성대조군인 에스트로젠(E2)과 유사한 효과를 지님을 확인하였다(도 3 참조). 또한, 텍토리딘 및 다릅나무 에틸아세테이트 분획물의 에스트로젠 수용체(ERα)에 대한 활성을 정량적으로 분석한 결과, 텍토리딘과 에틸아세테이트분획물이 에스트로젠(E2)과 유사하게 에스트로젠 수용체의 발현을 억제함을 확인하였다(도 4 참조). 한편, 갑상선호르몬(T3) 수용체에 대한 활성을 T-스크린 검사를 통해 측정한 결과, 텍토리딘 및 에틸아세테이트 분획물의 갑상선호르몬 유사 작용을 확인하였고, 갑상선호르몬 수용체의 길항제인 As를 함께 처리한 경우에는 활성 증가가 억제됨을 확인함으로써, 텍토리딘 및 에틸아세테이트 분획물이 모두 갑상선호르몬이 작용하는 수용체에 경쟁적으로 작용함을 확인하였다(도 5 참조). 또한, 에틸아세테이트 분획물은 갑상선 호르몬과 유사하게 GH3 세포의 증식을 촉진시키므로, 갑상선관련 질환의 개선을 위해서 에틸아세테이트 분획물을 이용하는 것이 더욱 효과적임을 확인하였다(도 6 참조).
In a specific example of the present invention, extracts and fractions thereof were prepared using the bark of an elder trunk (see Fig. 1). As a result of measuring the activity against the estrogen receptor, the extracts of the elderberry or its fractions were divided into estrogen and thyroid Receptor (Fig. 2 and Fig. 3). From the ethyl acetate fraction, a single compound showing a physiological activity was purified, and as a result, tectoridin was isolated (see Chemical Formula 1). As a result of the test for the estrogen receptor, tectoridine showed a positive control (E2 ) (See Fig. 3). In addition, quantitative analysis of the activity of the tectoridine and ethylacetate ethyl acetate fractions against the estrogen receptor (ERa) revealed that the tectoridine and ethyl acetate fractions inhibit estrogen receptor expression similar to estrogen (E2) (See FIG. 4). On the other hand, thyroid hormone (T3) receptor activity was measured by T-screen test. Tetoridine and ethyl acetate fractions showed thyroid hormone-like activity and treated with thyroid hormone receptor antagonist As Confirming that the tectoridine and ethyl acetate fractions all competitively acted on receptors on which thyroid hormone acts (see FIG. 5). In addition, the ethyl acetate fraction promoted the proliferation of GH3 cells similarly to thyroid hormone, and thus it was confirmed that the ethyl acetate fraction was more effective for improving thyroid-related diseases (see FIG. 6).

따라서, 본 발명의 다릅나무 추출물, 또는 이의 분획물은 에스트로젠 및 갑상선 수용체에 대한 유의적인 활성을 나타냄을 확인함으로써, 본 발명의 다릅나무 추출물, 또는 이의 분획물이 여성호르몬 유사작용 및 갑상선 기능항진 예방 및 치료용 약학적 조성물로서 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.
Accordingly, the inventive plant extract of the present invention, or a fraction thereof, shows significant activity against estrogen and thyroid receptors. Thus, the extract of the invention plant of the present invention or its fractions is effective in preventing and treating hyperhidrosis and thyroid function It can be used as a pharmaceutical composition.

본 발명의 약학적 조성물은 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염, 완충제 등의 약학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화할 수 있다.
The pharmaceutical composition of the present invention may further contain a preservative, a stabilizer, a wetting agent or an emulsifying accelerator, a pharmaceutically auxiliary agent such as a salt for controlling osmotic pressure, a buffer, and other therapeutically useful substances, Oral or parenteral administration.

경구 투여용 제형으로는 예를 들어 정제, 환제, 경질 및 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제 등의 약학적 첨가제를 함유할 수 있다. 정제는 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다. 또한 비경구 투여용 제형의 대표적인 것은 주사용 제형으로 등장성 수용액 또는 현탁액이 바람직하다.
Examples of formulations for oral administration include tablets, pills, hard and soft capsules, liquids, suspensions, emulsions, syrups, granules and the like. These formulations may contain, in addition to the active ingredient, a diluent such as lactose, dextrose, Sucrose, mannitol, sorbitol, cellulose and glycine), lubricants (such as silica, talc, stearic acid and magnesium or calcium salts thereof and polyethylene glycols). Tablets may also contain binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and polyvinylpyrrolidine, optionally mixed with starch, agar, alginic acid or its sodium salt Such as disintegrants, sorbents, coloring agents, flavoring agents, and sweetening agents. Tablets can be prepared by conventional mixing, granulating or coating methods. Also typical of parenteral administration formulations are isotonic aqueous solutions or suspensions which are suitable for injectable use.

또한, 본 발명의 조성물은 기존의 치료제와 병합 투여될 수 있으며, 이 경우 동시 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 표면에 전달하는 임의의 방식으로 개체에게 투여될 수 있다. 적합한 비경구 투여경로는 혈관 내 투여(예: 정맥 내 볼루스 주사, 정맥 내 주입, 동맥 내 볼루스 주사, 동맥 내 주입, 맥관 내로의 카테터 점적 주입), 피하 주입을 포함하는 피하 주사 또는 침착(deposition)(예: 삼투압 펌프 이용), 조직 주위 및 조직 내 투여 또는 침착 등을 포함한다.
In addition, the composition of the present invention may be administered in combination with an existing therapeutic agent, and may be administered simultaneously or sequentially. The compositions of the present invention can be administered to a subject in any manner that delivers to the surface. Suitable parenteral routes of administration include, but are not limited to, intravenous administration (eg, intravenous bolus injection, intravenous infusion, intraluminal bolus injection, intramuscular injection, catheter instillation into the vasculature), subcutaneous injection deposition (e.g., using an osmotic pump), peri-and per-tissue administration or deposition, and the like.

본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 성별, 연령, 건강상태, 체중, 투여 방법과 횟수, 표적 조직이나 세포 등 다양한 요인을 고려하여 당 분야의 전문가들에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 각 치료에 요구되는 총 용량은 수회 용량 또는 일회량으로 투여될 수 있다.
The dosage of the pharmaceutical composition of the present invention can be easily determined by those skilled in the art in consideration of various factors such as sex, age, health condition, body weight, administration method and number of times, target tissues and cells. The total dose required for each treatment may be administered in several doses or doses.

또한, 본 발명은 다릅나무 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 갑상선 질환 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.
The present invention also provides a health functional food for preventing and ameliorating thyroid disease, which contains the elderberry extract or a fraction thereof as an active ingredient.

상기 다릅나무 추출물은 에스트로젠 수용체 및 갑상선 호르몬 수용체에 대한 활성을 가지는 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
The elderberry extract may have activity against estrogen receptors and thyroid hormone receptors, but is not limited thereto.

상기 분획물은 다릅나무 추출물을 물에 현탁시킨 후 헥산, 염화메틸렌, 에틸아세테이트, 부탄올로 순차적으로 계통 분획하여 수득한 헥산 분획물, 염화메틸렌 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 중 어느 하나인 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 에틸아세테이트 분획물인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
The fraction is preferably any one of a hexane fraction, a methylene chloride fraction, an ethyl acetate fraction and a butanol fraction obtained by suspending the elderberry extract in water and sequentially fractionating the fraction with hexane, methylene chloride, ethyl acetate and butanol, More preferably an ethyl acetate fraction, but is not limited thereto.

본 발명의 다릅나무 추출물 또는 이의 분획물은 에스트로젠 및 갑상선 수용체에 대한 유의적인 활성을 나타냄을 확인함으로써, 본 발명의 다릅나무 추출물 또는 이의 분획물이 여성호르몬 유사작용 및 갑상선 기능항진 개선용 건강기능식품용 조성물로서 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.
The inventive plant extract or fraction thereof exhibits significant activity against estrogen and thyroid receptors. Thus, the plant extract of the present invention or a fraction thereof is useful as a composition for health functional foods for improving female hormone-like action and hyperthyroidism And thus it can be used as a useful product.

본 명세서의 "건강기능식품"이란 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분 (기능성원료)을 사용하여 제조한 것으로, 인체의 정상적인 기능을 유지하거나 생리기능 활성화를 통하여 건강을 유지하고 개선하는 식품으로 식품의약품안전처장이 정한 것을 의미하나, 이에 한정되지 않으며 통상적인 의미의 건강식품을 배제하는 의미로 사용된 것이 아니다.
As used herein, the term "health functional food" is produced by using raw materials or ingredients (functional raw materials) having functions useful for nutrients or human body that are likely to be deficient in daily eating, and is intended to maintain the normal function of the human body, But is not limited to, and is not meant to exclude health food in the usual sense.

본 발명의 다릅나무 추출물 또는 이의 분획물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 중의 상기 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
The elongated plant extract or fraction thereof of the present invention can be added directly to food or used together with other food or food ingredients, and can be suitably used according to conventional methods. The amount of the active ingredient to be mixed can be suitably determined according to the intended use (for prevention or improvement). In general, the amount of the compound in the health functional food may be 0.01 to 90 parts by weight based on the total weight of the food. However, in the case of long-term intake intended for health and hygiene purposes or for the purpose of controlling health, the amount may be less than the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount exceeding the above range.

본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 단당류, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 이당류, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 다당류, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 g 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.
The health functional beverage composition of the present invention is not particularly limited to the other ingredients other than the above-mentioned compounds as essential ingredients in the indicated ratios and may contain various flavors or natural carbohydrates as additional ingredients such as ordinary beverages. Examples of the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose, etc .; And polysaccharides, for example, conventional sugars such as dextrin, cyclodextrin and the like, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol. Natural flavors (tau martin, stevia extracts (e.g., rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavors (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used as flavors other than those described above The ratio of the natural carbohydrate is generally about 1 to 20 g, preferably about 5 to 12 g per 100 g of the composition of the present invention.

상기 외에 본 발명의 다릅나무 추출물 또는 이의 분획물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 다릅나무 추출물 또는 이의 분획물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
In addition to the above, the plant extract of the present invention or a fraction thereof may be in the form of a flavoring agent such as various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavors and natural flavors, coloring agents and aging agents (cheese, Salts of alginic acid and its salts, organic acids, protective colloid thickening agents, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonating agents used in carbonated drinks and the like. In addition, the plant extract or fraction thereof of the present invention may contain natural fruit juice and pulp for the production of fruit juice drinks and vegetable drinks.

이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 다릅나무 추출물 또는 이의 분획물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
These components may be used independently or in combination. The proportion of such additives is not so critical, but is generally selected in the range of 0.1 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the elderberry extract or fraction thereof of the present invention.

또한 본 발명은 하기의 화학식 1로 표시되는 텍토리딘(Tectoridin), 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 갑상선 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 갑상선 질환 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.The present invention also relates to a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of thyroid disease, comprising tectoridin represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, and a health function for the prevention and improvement of thyroid disease Provide food.

[화학식 1][Chemical Formula 1]

.

또한, 상기 텍토리딘은 다릅나무 추출물 또는 이의 분획물로부터 분리된 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않으며, 다른 동물체, 식물체, 또는 미생물로부터 분리된 화합물, 또는 당업계에 알려진 모든 방법을 통하여 인위적으로 합성된 것을 포함한다.
In addition, the tectoridine may be isolated from the elderberry extract or its fraction, but is not limited thereto, and may be a compound isolated from other animals, plants, or microorganisms, or artificially synthesized through any method known in the art .

또한, 상기 분획물은 하기의 단계들을 포함하는 제조 방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:In addition, the fraction is preferably, but not limited to, prepared by a process comprising the steps of:

본 발명의 상기 화학식 1의 텍토리딘은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.
Tertoridine of Formula 1 of the present invention can be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and as the salt, an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid is useful. Acid addition salts include those derived from inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid or phosphorous acid, and aliphatic mono- and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxyalkanoates, Derived from organic acids such as acetic acid, benzoic acid, citric acid, lactic acid, maleic acid, gluconic acid, methanesulfonic acid, 4-toluenesulfonic acid, tartaric acid, fumaric acid, and the like. Such pharmaceutically innocuous salts include, but are not limited to, sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogenphosphate, dihydrogenphosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide, Butyrate, caprate, heptanoate, propiolate, oxalate, malonate, succinate, succinate, maleic anhydride, maleic anhydride, , Sebacate, fumarate, maleate, butyne-1,4-dioate, hexane-1,6-dioate, benzoate, chlorobenzoate, methylbenzoate, dinitrobenzoate, hydroxybenzoate, Methoxybenzoate, phthalate, terephthalate, benzene sulfonate, toluene sulfonate, chlorobenzene sulfide Propyl sulphonate, naphthalene-1-yne, xylenesulfonate, phenylsulfate, phenylbutyrate, citrate, lactate,? -Hydroxybutyrate, glycolate, maleate, Sulfonate, naphthalene-2-sulfonate or mandelate.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 화학식 1의 유도체를 유기용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조하여 제조되거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조하거나 유기용매 하에서 결정화시켜셔 제조할 수 있다.
The acid addition salt according to the present invention can be obtained by a conventional method, for example, by dissolving a derivative of Chemical Formula 1 in an organic solvent such as methanol, ethanol, acetone, methylene chloride, acetonitrile, , Or may be prepared by drying, or after the solvent and excess acid are distilled off under reduced pressure, followed by drying or crystallization in an organic solvent.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
In addition, bases can be used to make pharmaceutically acceptable metal salts. The alkali metal or alkaline earth metal salt is obtained, for example, by dissolving the compound in an excess amount of an alkali metal hydroxide or an alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the insoluble compound salt, and evaporating and drying the filtrate. At this time, it is preferable for the metal salt to produce sodium, potassium or calcium salt. The corresponding silver salt is also obtained by reacting an alkali metal or alkaline earth metal salt with a suitable salt (such as silver nitrate).

또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 텍토리딘 및 이의 약학적으로 허용되는 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물, 수화물 등을 모두 포함한다.
In addition, the present invention encompasses tectorines and their pharmaceutically acceptable salts represented by the above formula (1) as well as possible solvates, hydrates and the like which can be prepared therefrom.

상기 텍토리딘은 에스트로젠 수용체 및 갑상선 호르몬 수용체에 대한 활성을 가지는 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
The tectoridine may have an activity against an estrogen receptor and a thyroid hormone receptor, but is not limited thereto.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 상기 다릅나무 에틸아세테이트 분획물을 클로로포름에 녹인 후 메탄올을 가하고 상온에서 방치하여 황백색의 결정을 얻었고, 이를 다시 클로로포름에 녹이고 메탄올로 재결정을 실시하여 순수 텍토리딘(tectoridin) 화합물을 분리하였다 (화학식 1 참조).
In a specific example of the present invention, the elongated ethyl acetate fraction was dissolved in chloroform, methanol was added, and the mixture was left at room temperature to obtain yellowish white crystals. The crystals were dissolved again in chloroform and recrystallized from methanol to obtain pure tectoridin The compound was isolated (see Chemical Formula 1).

또한 본 발명의 구체적인 실시예에서, 상기 텍토리딘(tectoridin)의 에스트로젠 수용체에 대한 활성 검사 결과, 텍토리딘이 양성대조군인 에스트로젠(E2)과 유사한 효과를 지님을 확인하였다(도 3 참조). 또한, 텍토리딘 및 다릅나무 에틸아세테이트 분획물의 에스트로젠 수용체(ERα)에 대한 활성을 정량적으로 분석한 결과, 텍토리딘과 에틸아세테이트 분획물이 에스트로젠(E2)과 유사하게 에스트로젠 수용체의 발현을 억제함을 확인하였다(도 4 참조). 한편, 갑상선호르몬(T3) 수용체에 대한 활성을 T-스크린 검사를 통해 측정한 결과, 텍토리딘 및 에틸아세테이트 분획물의 갑상선호르몬 유사 작용을 확인하였고, 갑상선호르몬 수용체의 길항제인 As를 함께 처리한 경우에는 활성 증가가 억제됨을 확인함으로써, 텍토리딘 및 에틸아세테이트 분획물이 모두 갑상선호르몬이 작용하는 수용체에 경쟁적으로 작용함을 확인하였다(도 5 참조). 또한, 에틸아세테이트 분획물 및 텍토리딘은 갑상선 호르몬과 유사하게 GH3 세포의 증식을 촉진시킴을 확인하였다(도 6 참조).
In a specific example of the present invention, tectoridin was tested for activity against estrogen receptors, confirming that tectoridine had an effect similar to estrogen (E2), which is a positive control (see FIG. 3). In addition, quantitative analysis of the activity of the tectoridine and ethylacetate ethyl acetate fractions against the estrogen receptor (ERa) showed that the tectoridine and ethyl acetate fractions inhibit estrogen receptor expression similar to estrogen (E2) (See FIG. 4). On the other hand, thyroid hormone (T3) receptor activity was measured by T-screen test. Tetoridine and ethyl acetate fractions showed thyroid hormone-like activity and treated with thyroid hormone receptor antagonist As Confirming that the tectoridine and ethyl acetate fractions all competitively acted on receptors on which thyroid hormone acts (see FIG. 5). In addition, it was confirmed that the ethyl acetate fraction and tectoridine accelerate the proliferation of GH3 cells similarly to thyroid hormone (see FIG. 6).

따라서, 본 발명의 텍토리딘은 에스트로젠 및 갑상선 수용체에 대한 유의적인 활성을 나타내었으므로, 본 발명의 텍토리딘 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 여성호르몬 유사작용 및 갑상선 기능항진 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 갑상선 기능항진 개선용 건강기능식품 조성물로서 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.
Thus, the tectoridine of the present invention exhibited significant activity against estrogen and thyroid receptors, and thus the tectoridine and its pharmaceutically acceptable salts of the present invention are useful for the prevention and treatment of female hormone-like action and hyperthyroidism And can be used as a pharmaceutical composition and a health functional food composition for improving hyperthyroidism.

본 명세서의 "건강기능식품"이란 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분 (기능성원료)을 사용하여 제조한 것으로, 인체의 정상적인 기능을 유지하거나 생리기능 활성화를 통하여 건강을 유지하고 개선하는 식품으로 식품의약품안전처장이 정한 것을 의미하나, 이에 한정되지 않으며 통상적인 의미의 건강식품을 배제하는 의미로 사용된 것이 아니다.As used herein, the term "health functional food" is produced by using raw materials or ingredients (functional raw materials) having functions useful for nutrients or human body that are likely to be deficient in daily eating, and is intended to maintain the normal function of the human body, But is not limited to, and is not meant to exclude health food in the usual sense.

상기 건강기능식품은 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조, 가공될 수 있으나, 이에 한정되지 않으며 법률에 따라 어떤 형태로든지 제조, 가공될 수 있다.
The health functional food may be manufactured and processed in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids, and circles, but is not limited thereto and may be manufactured and processed in any form according to the law.

본 발명의 텍토리딘 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적 (예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 중의 상기 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.01내지 90 중량부로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
The tectoridine or its pharmaceutically acceptable salt of the present invention can be added directly to food or used with other food or food ingredients, and can be suitably used according to conventional methods. The amount of the active ingredient to be mixed can be suitably determined according to the intended use (for prevention or improvement). Generally, the amount of the compound in the health functional food is 0.01 To 90 parts by weight. However, in the case of long-term intake intended for health and hygiene purposes or for the purpose of controlling health, the amount may be less than the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount exceeding the above range.

본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
The health functional beverage composition of the present invention is not particularly limited to the other ingredients other than the above-mentioned compounds as essential ingredients in the indicated ratios and may contain various flavors or natural carbohydrates as additional ingredients such as ordinary beverages. Examples of the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And polysaccharides, for example, conventional sugars such as dextrin, cyclodextrin and the like, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol. Natural flavors (tau martin, stevia extracts (e.g., rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavors (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used as flavors other than those described above .

상기 외에 본 발명의 텍토리딘 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 텍토리딘 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 텍토리딘 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
In addition to the above, tectoridine or a pharmaceutically acceptable salt thereof of the present invention can be used as a flavoring agent, coloring agent and thickening agent (cheese, chocolate, etc.) such as various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavors and natural flavors, , A pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloid thickening agents, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonating agents used in carbonated beverages and the like. In addition, tectoridine or its pharmaceutically acceptable salts of the present invention may contain flesh for the production of natural fruit juices and fruit juice drinks and vegetable drinks. These components may be used independently or in combination. The proportion of such additives is not critical, but is generally selected in the range of 0.1 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the tectoridine or its pharmaceutically acceptable salt of the present invention.

이하, 본 발명을 실시예 및 제조예에 의하여 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples and Production Examples.

단, 하기 실시예 및 제조예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 실시예 및 제조예에 의해 한정되는 것은 아니다.
However, the following examples and preparation examples illustrate the present invention specifically, and the content of the present invention is not limited by the examples and the production examples.

<실시예 1> 다릅나무 추출물 및 분획물의 제조&Lt; Example 1 > Production of elongated tree extract and fractions

경동시장으로부터 다릅나무의 가지(줄기)를 구입하여 가지의 코르크층을 제거한 수피만을 모아 분말로 파쇄한 다음, 상기 분말 52 g을 취하여 70% 에탄올 500 ml에 넣어 초음파 추출장치로 90 분간 2회 추출하였다. 추출액을 5,000 rpm, 4℃에서 10 분 동안 원심분리한 다음, 상등액을 감압건조하여 다릅나무 추출물(13 g)을 얻었다. 이 추출물에 물을 추가하여 현탁시킨 후, 헥산 400 ml로 3회 분획하여 헥산 분획물 340 mg을 수득하였다. 그런 다음 염화메틸렌, 에틸아세테이트, 부탄올 순으로 분획하여, 각각의 분획물 180, 300, 560 mg을 얻었고, 최종적으로 물층을 수득하였다(도 1).
The branch (stem) of the elder tree was purchased from the Kyungdong market, and only the bark with the cork layer removed was crushed into powder. Then, 52 g of the powder was taken into 500 ml of 70% ethanol and extracted twice for 90 minutes using an ultrasonic extraction apparatus Respectively. The extract was centrifuged at 5,000 rpm at 4 ° C for 10 minutes, and the supernatant was dried under reduced pressure to obtain a seedling extract (13 g). Water was added to the extract to suspend, and the mixture was then divided three times with 400 ml of hexane to obtain 340 mg of a hexane fraction. Then, methylene chloride, ethyl acetate and butanol were fractionated in order to obtain 180, 300 and 560 mg of each fraction, and finally a water layer was obtained (FIG. 1).

<실시예 2> 실험재료 및 기기Example 2 Experimental Materials and Devices

상기 <실시예 1>과 같은 방법으로 수득한 다릅나무 추출물, 헥산 분획물, 염화메틸렌 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 및 물 분획물을 하기 실시예에서 이용하였다.The elongate extracts, hexane fractions, methylene chloride fractions, ethyl acetate fractions, butanol fractions and water fractions obtained in the same manner as in <Example 1> were used in the following examples.

구체적으로, 다릅나무 추출물 및 이의 분획물, 텍토리딘을 DMSO(dimethylsulfoxide)에 녹여 사용하였으며 DMSO의 최종농도가 0.4% 이하가 되도록 하여 검사에 사용하였다. 17β-에스트라디올(17β-estradiol; E₂)과 RPMI, ICI 182,780, 아비산나트륨(Sodium Arsenite; As)은 시그마(Sigma, St. Louis, MO, USA)로부터 구입하였고, FCS(fetal calf serum), 항생제 페니실린(penicillin) 및 스트렙토마이신(streptomycin)은 깁코 인비트로젠(Gibco Invitrogen, Grand Island, NY, USA)으로부터 구입하였다. 구체적으로 폴리에틸렌이민(Polyethylene imine; PEI; Poly-Sciences, Warrington, PA, USA)을 사용하여 MCF-7 세포 내에 플라스미드를 형질주입시켰으며, 약물 처리가 끝난 세포를 PBS로 세척하고 용해(lysis) 완충용액(125 mM Tris pH 7.8, 10 mM CDTA, 10 mM DTT, 50% 글리세롤(glycerol), 5% 트리톤(Triton) X-100을 넣고 -70℃에서 30 분간 방치한 후 빠르게 37℃ 항온 수조에 띄워 세포를 파괴한 후 상층액을 취하여 브래드포드 방법을 사용하여 단백질을 정량하였다. 루시퍼라아제 활성은 20㎕의 세포추출물에 5㎕ 의 루시퍼라아제 검사 반응물(luciferase assay system, Promega Corp., Madison, WI, USA)을 혼합하여 처리한 다음 24 시간, 48 시간 후에 AutoLumat LB953 luminometer(Berthold Technologies, Wildbad, Germany)를 사용하여 측정하였다. 세 번 실험을 반복하여 결과값을 얻었으며, 그 결과는 평균 ± 평균의 표준오차(standard error of the mean; S.E.M.)로 나타내었다.
Specifically, the elderberry extract and its fractions, tectoridine, were dissolved in dimethylsulfoxide (DMSO), and the final concentration of DMSO was 0.4% or less. (17β-estradiol; E ₂ ) and RPMI, ICI 182,780 and sodium arsenite (As) were purchased from Sigma (St. Louis, Mo., USA) The antibiotics penicillin and streptomycin were purchased from Gibco Invitrogen (Grand Island, NY, USA). Specifically, plasmids were transfected into MCF-7 cells using polyethylene imine (PEI; Poly-Sciences, Warrington, PA, USA). Cells treated with the drug were washed with PBS and lysed (125 mM Tris pH 7.8, 10 mM CDTA, 10 mM DTT, 50% glycerol, and 5% Triton X-100 were added to the wells and left at -70 ° C for 30 minutes. After lysing the cells, the supernatant was taken and the proteins were quantitated using the Bradford method. The luciferase activity was measured by adding 5 [mu] l of luciferase assay system (Promega Corp., Madison, WI, USA) and then measured 24 hours and 48 hours later using an AutoLumat LB953 luminometer (Berthold Technologies, Wildbad, Germany). The results were repeated three times, The standard error of the mean rror of the mean (SEM).

<실시예 3> 세포 배양&Lt; Example 3 > Cell culture

에스트로젠 수용체 검사(estrogen receptor assay)에서는 유방암 세포주인 MCF-7(Human breast adenocarcinoma) 세포주를 사용하였고, T-스크린 검사(screen assay)에서는 흰쥐의 뇌하수체 세포인 GH3(Rat pituitary tumour) 세포주를 이용하였다. MCF-7 세포주는 10% 우태아혈청(fetal calf serum; FBS)을 함유하는 RPMI에서 배양하였으며, GH3 세포주는 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium)에 10% 우태아혈청을 첨가하여 배양하였다. 세포는 5%(v/v) CO₂를 포함하는 습한 대기 조건의 37℃ 환경에서 자라도록 하였다. 배지는 1 내지 2일 간격으로 교환하고 시약을 처리할 때 새 배지로 갈아주었으며, 시료를 처리할 때에는 최소 24 시간 이상 석탄으로 처리한 혈청을 사용한 배지에서 배양한 후 시료를 처리하였다. 대조군에는 에탄올 용매를 처리하였다.
Human breast adenocarcinoma (MCF-7) cell line was used for the estrogen receptor assay and GH3 (rat pituitary tumor) cell line for the rat pituitary cell was used for T-screen assay. MCF-7 cells were cultured in RPMI containing 10% fetal calf serum (FBS). GH3 cells were cultured in DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium) supplemented with 10% fetal bovine serum. The cells were allowed to grow in a 37 0 C environment at humid atmospheres containing 5% (v / v) CO ₂ . The medium was exchanged at intervals of 1 to 2 days. When the reagent was treated, the medium was changed to a new medium. When the sample was treated, the sample was treated after culturing in a medium containing serum treated with coal for at least 24 hours. The control group was treated with an ethanol solvent.

<실시예 4> 다릅나무 분획물의 에스트로젠 수용체에 대한 활성 측정Example 4 Measurement of Activity on the Estrogen Receptor of the Fractions of the Elbow Trees

다릅나무 추출물로부터 순차적으로 계통 분획하여 수득한 분획물의 에스트로젠 수용체에 대한 활성 정도를 확인하기 위하여, 상기 <실시예 3>의 유방암 세포를 이용하여 에스트로젠 수용체 검사를 실시하였다.The estrogen receptor assay was performed using the breast cancer cells of Example 3 in order to confirm the degree of activity of the fractions obtained from the fractionation of the plant from the elderberry extracts sequentially to the estrogen receptors.

구체적으로, 유방암 세포 MCF-7에 에스트로젠 수용체 효능제(agonist)인 17β-에스트라디올(estradiol)(E₂)을 대조군으로 하여 상기 <실시예 2>와 같은 방법으로 시료의 에스트로젠 수용체 활성을 관찰하였다.Specifically, the estrogen receptor activity of the sample was observed in the same manner as in Example 2 using 17β-estradiol (E ₂ ), which is an estrogen receptor agonist, as a control for breast cancer cell MCF-7 .

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 다릅나무의 추출물과 각 유기용매로 분획하여 얻은 헥산 분획물, 염화메틸렌 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물, 물 분획물을 100 ㎍/ml로 처리한 결과, 에틸아세테이트 분획물과 부탄올 분획물이 다른 분획물에 비해서 에스트로젠 수용체 알파 의존적인 전사활성의 유의한 증가를 보여주었다. 한편, 부탄올 분획물의 경우에는 양성대조군인 E2와 비슷한 활성을 보여주었으나 총 추출물보다는 활성이 낮은 반면, 에틸아세테이트 분획물의 경우에는 그 활성이 총 추출물과 유사하였으며, E2의 일반적인 실험 농도인 10 nM에서보다 1.6 배 높은 활성을 보여주었다(도 2).
As a result, as shown in FIG. 2, treatment with 100 μg / ml of the hexane fraction, the methylene chloride fraction, the ethyl acetate fraction, the butanol fraction, and the water fraction obtained from the extracts of the elderwood and the respective organic solvents, Fractions and butanol fractions showed a significant increase in estrogen receptor alpha dependent transcriptional activity compared to other fractions. On the other hand, the butanol fraction showed similar activity to the E2 positive control but less active than the total extract, whereas the ethyl acetate fraction had similar activities to the total extract, and the normal experimental concentration of E2 was 10 nM (Fig. 2).

<실시예 5> 다릅나무 에틸아세테이트 분획물로부터 텍토리딘(tectoridin)의 분리Example 5: Isolation of tectoridin from the fraction eluted with ethyl acetate

상기 <실시예 4>에서 에스트로젠 수용체에 가장 강한 활성, 특히 총 추출물보다도 높은 활성을 보인 에틸아세테이트 분획물에 대하여, 생리 활성을 나타내는 단일화합물의 분리를 시도하였다.In Example 4, isolation of a single compound exhibiting physiological activity was attempted on the ethyl acetate fraction showing the strongest activity on the estrogen receptor, particularly on the activity higher than the total extract.

구체적으로, 에틸아세테이트 분획물을 소량의 클로로포름에 녹인 다음 메탄올 100 ml를 가한 후 상온에서 이틀간 방치하여 황백색의 결정을 얻었고 이를 다시 소량의 클로로포름에 녹인다음 메탄올로 재결정을 실시하여 30 mg의 순수 화합물을 분리하였다. 이 화합물의 ¹H-NMR, ¹³C-NMR, ¹H-¹³C COSY-NMR, FAB-MS 등의 분광학적 데이터는 하기와 같다:Specifically, the ethyl acetate fraction was dissolved in a small amount of chloroform, and 100 ml of methanol was added. The mixture was left at room temperature for two days to obtain yellowish white crystals, which were then dissolved in a small amount of chloroform and recrystallized with methanol to obtain 30 mg of pure compound Respectively. Spectroscopic data of ¹ H-NMR, ¹³ C-NMR, ¹ H- ¹³ C COY-NMR and FAB-MS of this compound are as follows:

HREI-MS [M]⁺: m/z 462.1157(calcd. for C₂₂H₂₂O₁₁, 462.1163); ^{HREI-MS [M] +:} m / z 462.1157 (calcd for C 22 H 22 O 11, 462.1163.);

¹H-NMR(DMSO-d ₆ + D₂O, 500 MHz): δ 8.37(s, H-2), 6.86(s, H-8), 7.38(d, J = 8.5 Hz, H-2', 6'), 6.83(d, J = 8.5 Hz, H-3', 5'), 5.08(d, J = 7.5 Hz, H-1"), 3.34(m, H-2"), 3.33(m, H-3"), 3.19(m, H-4"), 3.45(m, H-5"), 3.47(m, H-6"a), 3.68(m, H-6"b); ^{_{1 H-NMR (DMSO- d 6}} + D 2 O, 500 MHz): δ 8.37 (s, H-2), 6.86 (s, H-8), 7.38 (d, J = 8.5 Hz, H-2 ' , 6 '), 6.83 (d, J = 8.5 Hz, H-3', 5 '), 5.08 (d, J = 7.5 Hz, H- m, H-3 "), 3.19 (m, H-4"), 3.45 (m, H-5 "), 3.47 (m, H-6" a), 3.68 (m, H-6 "b);

¹³C-NMR(DMSO-d ₆ + D₂O, 125 MHz): δ 154.9(C-2), 122.5(C-3), 181.1(C-4), 152.9(C-5), 132.7(C-6), 156.8(C-7), 94.5(C-8), 152.9(C-9), 106.8(C-10), 121.5(C-1'), 130.5(C-2',6'), 115.4(C-3',5'), 157.6(C-4'), 60.7(6-OCH₃), 100.5(C-1"), 73.3(C-2"), 76.5(C-3"), 69.9(C-4"), 77.1(C-5"), 60.9(C-6"). ^{_{13 C-NMR (DMSO- d 6}} + D 2 O, 125 MHz): δ 154.9 (C-2), 122.5 (C-3), 181.1 (C-4), 152.9 (C-5), 132.7 (C 6), 156.8 (C-7), 94.5 (C-8), 152.9 (C-9), 106.8 , 115.4 (C-3 ', 5'), 157.6 (C-4 '), 60.7 (6-OCH 3), 100.5 (C-1 "), 73.3 (C-2"), 76.5 (C-3 " ), 69.9 (C-4 "), 77.1 (C-5"), 60.9 (C-6 ").

이상의 분광학적 데이터를 바탕으로, 에틸아세테이트 분획물에 대하여 생리 활성을 나타내는 단일화합물은 화학식 1과 같이 표시되는 이소플라본(isoflavone)의 한 종류인 텍토리딘(tectoridin)으로 동정하였다(화학식 1)(Park et al., Phytochemistry, 51, 147-151).
Based on the above spectroscopic data, a single compound exhibiting physiological activity against the ethyl acetate fraction was identified as tectoridin, which is one kind of isoflavone represented by Chemical Formula 1 (Chemical Formula 1) (Park et al., Phytochemistry , 51, 147-151).

<실시예 6> 텍토리딘의 에스트로젠 수용체에 대한 활성 확인&Lt; Example 6 > Determination of activity of tectoridine on estrogen receptor

다릅나무의 에틸아세테이트 분획물에서 분리한 텍토리딘에 대하여, 에스트로젠 수용체에 대한 활성을 확인하기 위해 에스트로젠 수용체 검사를 수행하였다.Estrogen receptor test was performed to examine the activity against estrogen receptors of tectoridins isolated from the ethyl acetate fraction of the elder tree.

구체적으로, 에스트로젠 수용체 검사는 상기 <실시예 4>에 나타낸 바와 같이 수행하였다. 유방암 세포주인 MCF-7 세포에 에스트로젠 수용체와 루시퍼라아제를 발현하는 유전자를 포함하는 플라스미드를 형질주입한 다음, 상기 세포에 텍토리딘을 20μM씩 처리하고 24 시간 후에 루시퍼라아제(luciferase) 활성을 측정하였다.Specifically, the estrogen receptor test was performed as shown in Example 4 above. A plasmid containing an estrogen receptor and a gene expressing luciferase was transfected into MCF-7, a breast cancer cell line, treated with 20 μM of tectoridine in the cells, and luciferase activity was measured after 24 hours. Respectively.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 텍토리딘은 E2와 같이 에스트로젠 수용체에 대한 알파(ERα) 의존적인 전사 활성을 증가시킴을 확인하였다. 또한, 에스트로젠 수용체 길항제인 ICI 182,780(ICI)을 함께 처리하였을 경우에는 텍토리딘에 의해 증가된 에스트로젠 수용체 알파의 의존적인 전사 활성이 억제됨으로써, 텍토리딘이 에스트로젠(E2)과 동일한 에스트로젠 수용체에 작용함을 확인하였다(도 3).
As a result, as shown in Fig. 3, it was confirmed that tectoridine increases alpha (ERα) -dependent transcriptional activity on estrogen receptor such as E2. In addition, when the estrogen receptor antagonist ICI 182,780 (ICI) is co-administered, the estrogen receptor-dependent transcriptional activity of estrogen receptor alpha, which is increased by tectoridine, is inhibited, and thus tectoridine acts on the same estrogen receptor as estrogen (E2) (Fig. 3).

<실시예 7> 에스트로젠 수용체에 대한 텍토리딘 활성의 정량적 확인 Example 7 Quantitative Determination of Tectoridine Activity on Estrogen Receptor

에스트로젠 수용체에 대하여 에스트로젠(E2)과 유사한 활성이 있는 텍토리딘 및 상기 <실시예 1>에 의해 수득한 다릅나무 에틸아세테이트 분획물에 대하여, 그 에스트로젠 수용체에 대한 활성 정도를 정량적으로 확인하기 위하여 웨스턴 블럿을 각각 수행하였다.To quantitatively determine the degree of activity of the tectoridine having similar estrogen (E2) activity to the estrogen receptor and the fraction eluted with ethyl acetate from the above-mentioned <Example 1>, the Western blot Respectively.

구체적으로, MCF-7 세포주에 에틸아세테이트 분획물의 최종 농도가 100㎍/ml 이 되도록 처리하고, 텍토리딘의 최종농도가 200μM이 되도록 처리하여 24 시간 후에 에스트로젠 수용체의 발현수준을 웨스턴 블럿을 통해 분석하였다. 우선, 단백질을 추출하기 위하여 세포에 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 50 mM Tris-HCl(pH 8.0), 1% NP40, 1 mM 아프로티닌(aprotinin), 0.1 mM 류펩틴(leupeptin), 1 mM 펩스타인(pepstatin)이 함유된 용액을 첨가한 후 분쇄한 후 얼음에서 1 시간 동안 반응시켰고, 이를 4℃에서 13,000 rpm으로 25 분 동안 원심분리한 후 상등액을 분리하여 수득하였다. 그런 다음, 브래드포드(Bradford) 방법을 사용하여 단백질을 정량하였다. 상기와 같은 방법으로 분리된 단백질을 20㎍씩 8% SDS-PAGE 젤에서 전기영동한 후 PVDF 멤브레인으로 단백질을 전이하기 위해, 전력공급장치(power supply basic, Bio-rad)를 이용하여 350 mA에서 1 시간 동안 블럿팅(blotting)한 후 단백질이 전이된 멤브레인을 5% 탈지분유(non-fat dry milk)에 넣고 1 시간 동안 반응시켰다. 블락킹 완충용액(blocking buffer)을 제거한 다음 멤브레인을 1차 항체(ERα 1:1000, β-액틴(actin); 1:4000)를 5% 탈지분유와 TBST로 만든 완충용액에 섞은 용액에 담고 16 시간 동안 반응시켰다. TBST에 5 분씩 3 번 세척한 다음 2차 항체 항-토끼(Invitrogen, USA, dilution 1:4000) 또는 항-마우스(Invitrogen, USA, dilution 1:4000)가 첨가된 5% 탈지분유 조건에서 1 시간 동안 반응시키고 TBST로 비특이성 결합을 제거한 후, ECL 키트(Amersham Bioscience, Little Chalfont, UK)로 단백질의 발현을 관찰하였다.Specifically, the MCF-7 cell line was treated so that the final concentration of the ethyl acetate fraction was 100 μg / ml, and the final concentration of tectoridine was adjusted to 200 μM. After 24 hours, the expression level of the estrogen receptor was analyzed by Western blot Respectively. First, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1% NP40, 1 mM aprotinin, 0.1 mM leupeptin, 1 mM Pep After addition of the solution containing pepstatin, the mixture was pulverized and reacted on ice for 1 hour. The mixture was centrifuged at 4,000 rpm at 13,000 rpm for 25 minutes, and the supernatant was separated. Proteins were then quantified using the Bradford method. The proteins separated by the above method were electrophoresed on 20% of 8% SDS-PAGE gels, and then transferred to PVDF membrane at 350 mA using a power supply basic (Bio-rad) After 1 hour blotting, the protein-transferred membrane was placed in 5% non-fat dry milk and allowed to react for 1 hour. Blocking buffer was removed and the membrane was placed in a solution of primary antibody (ERα 1: 1000, β-actin; 1: 4000) in buffer solution made up of 5% defatted milk powder and TBST Lt; / RTI > The cells were washed three times for 5 minutes each in TBST and incubated for 1 hour at 5% skim milk supplemented with secondary antibody anti-rabbit (Invitrogen, USA, dilution 1: 4000) or anti-mouse (Invitrogen, USA, dilution 1: 4000) After removing the non-specific binding with TBST, protein expression was observed with ECL kit (Amersham Bioscience, Little Chalfont, UK).

그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 에틸아세테이트 분획물이 에스트로젠(E2)(10 nM)과 동일하게 에스트로젠 수용체 발현을 억제함을 확인하였으며, 텍토리딘 또한 에틸아세테이트 분획물과 비슷한 수준으로 에스트로젠 수용체 알파의 발현을 억제하였다(도 4).
As a result, as shown in FIG. 4, it was confirmed that the ethyl acetate fraction inhibited estrogen receptor expression in the same manner as estrogen (E2) (10 nM), and tectoridine also inhibited estrogen receptor alpha (Fig. 4).

<실시예 8> 에틸아세테이트 분획물 및 텍토리딘의 갑상선호르몬 수용체와 GH3 세포증식에 미치는 영향Example 8 Effect of Ethyl Acetate Fraction and Tectorid on Thyroid Hormone Receptor and GH3 Cell Proliferation

에스트로젠 수용체에 활성을 갖는 다릅나무 에틸아세테이트 분획물 및 텍토리딘의 갑상선 수용체에 대한 활성을 측정하기 위하여, 흰쥐의 뇌하수체 세포주인 GH3 세포를 이용해서 T-스크린 검사(screen assay)를 수행하였다.T-screen assay was performed using GH3 cells, a rat pituitary cell line, to measure the activity of the ethoxyacetate fraction of the elder tree having an estrogen receptor and tactoridine on thyroid receptors.

구체적으로, GH3 세포에 갑상선 호르몬 반응 수용체(thyroid hormone responsive reporter) 유전자인 TRE-Luc를 0.5㎍씩 형질주입한 다음, 갑상선 호르몬인 T3(10^-8M), 에틸아세테이트 분획물(100 ㎍/ml), 텍토리딘(200μM), As(sodium arsenite)(10μM), E2(10 nM)를 24 시간 동안 처리하였다. 96 웰 플레이트(well plate)에 GH3 세포 부유액을 0.4 X 10⁴세포/웰(well) 농도로 넣어주고, 하루 동안 배양한 후 배지를 교환한 후 약물을 처리하였다. 약물 처리 3일 후 WST-1 10 ㎕/웰 처리하였다. 1 시간 동안 배양한 다음 ELISA leader(450 nm, reference 630 nm)에서 수치를 측정하였다.Specifically, 0.5 μg of TRE-Luc, a thyroid hormone responsive reporter gene, was transfected into GH3 cells. T3 (10 ^-8 M) thyroid hormone, ethyl acetate fraction (100 μg / ml) , Tetoridine (200 μM), As (sodium arsenite) (10 μM) and E2 (10 nM) for 24 hours. GH3 cell suspension was added to a 96-well plate at a concentration of 0.4 × 10 ⁴ cells / well, cultured for one day, and then the medium was changed and treated with the drug. After 3 days of drug treatment, WST-1 was treated with 10 [mu] l / well. After incubation for 1 hour, the values were measured in an ELISA leader (450 nm, reference 630 nm).

그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 에스트로젠(E2)를 처리하였을 경우에는 대조군에 비교하여 루시퍼라아제(TRE-luc)의 활성에 큰 변화가 없었다. 그러나, 에틸아세테이트 분획물 또는 텍토리딘을 처리하였을 경우에는 모두 에스트로젠의 결과와는 달리 루시퍼라아제(TRE-luc)의 활성이 2.5 배 이상 증가하였으며, 이 수용체의 길항제인 As를 함께 처리한 경우에는 활성 증가가 억제됨으로써, 에틸아세테이트 분획물 및 텍토리딘 모두 갑상선호르몬이 작용하는 수용체에 경쟁적으로 작용함을 확인하였다(도 5).As a result, as shown in Fig. 5, when estrogen (E2) was treated, there was no significant change in the activity of luciferase (TRE-luc) as compared with the control group. However, when the ethyl acetate fraction or tectoridine was treated, the activity of luciferase (TRE-luc) was increased 2.5 times or more, unlike the result of estrogen, and when the receptor antagonist, As, By inhibiting the increase in activity, it was confirmed that both the ethyl acetate fraction and tectoridine competitively acted on receptors that acted on thyroid hormone (FIG. 5).

또한, 도 6에 나타낸 바와 같이, 뇌하수체 세포주인 GH3 세포에 갑상선 호르몬인 T3(10^-11M, 10^-10M, 10^-9M, 10^-8M)와 에틸아세테이트 분획물(100 ng/ml, 1 ㎍/ml, 10 ㎍/ml, 100 ㎍/ml), 텍토리딘(200 nM, 2 μM, 20 μM, 200 μM), E2(10^-11M, 10^-10M, 10^-9M, 10^-8M)를 24 시간 동안 처리하여 GH3 세포의 증식을 비교하였을 경우, 갑상선 호르몬(T₃)은 GH3 세포 증식을 촉진시킨 반면, 에스트로젠(E2)은 세포 증식에 영향을 미치지 않았다. 반면에, 에틸아세테이트 분획물과 텍토리딘이 갑상선 호르몬과 유사하게 GH3 세포의 증식을 촉진시킴을 확인하였다 (도 6).
As shown in FIG. 6, the thyroid hormone T3 (10 ^-11 M, 10 ^-10 M, 10 ^-9 M, 10 ^-8 M) and ethyl acetate fraction (100 ng / 10 ^-11 M, 10 ^-9 M, 10 ^-10 M, 10 ^-10 M, 10 ^-9 M, 10 ^-8 M) for 24 h to compare the proliferation of GH3 cells, thyroid hormone (T ₃ ) promoted GH3 cell proliferation, while estrogen (E2) did not affect cell proliferation. On the other hand, it was confirmed that the ethyl acetate fraction and tectoridine accelerate the proliferation of GH3 cells similarly to thyroid hormone (Fig. 6).

<제조예 1> 약제의 제조&Lt; Preparation Example 1 > Preparation of medicine

<1-1> 산제의 제조<1-1> Preparation of powder

다릅나무 추출물, 이의 분획물, 또는 텍토리딘 100 mgThe elderberry extract, fraction thereof, or tectoridine 100 mg

유당 1 gLactose 1 g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
The above components were mixed and packed in airtight bags to prepare powders.

<1-2> 정제의 제조<1-2> Preparation of tablets

옥수수전분 100 ㎎Corn starch 100 mg

유당 100 ㎎Lactose 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 ㎎2 mg of magnesium stearate

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
After mixing the above components, tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.

<1-3> 캡슐제의 제조&Lt; 1-3 > Preparation of capsules

옥수수전분 100 ㎎Corn starch 100 mg

유당 100 ㎎Lactose 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 ㎎2 mg of magnesium stearate

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
After mixing the above components, the capsules were filled in gelatin capsules according to the conventional preparation method of capsules.

<1-4> 주사제의 제조&Lt; 1-4 > Preparation of injection

만니톨 180 ㎎180 mg mannitol

Na₂HPO₄ㆍ2H₂O 26 ㎎Na ₂ HPO ₄ .2H ₂ O 26 mg

증류수 2974 ㎎2974 mg of distilled water

통상적인 주사제의 제조방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 함유시켜 주사제를 제조하였다.
According to the conventional method for preparing an injectable preparation, an injectable preparation was prepared by incorporating the aforementioned components in the amounts indicated.

<제조예 2> 건강기능식품의 제조&Lt; Preparation Example 2 > Preparation of health functional foods

<2-1> 건강기능식품의 제조<2-1> Production of Health Functional Food

비타민 혼합물 적량Vitamin mixture quantity

비타민 A 아세테이트 70 ㎍70 [mu] g of vitamin A acetate

비타민 E 1.00 ㎎Vitamin E 1.00 mg

비타민 0.13 ㎎0.13 mg of vitamin

비타민 B2 0.15 ㎎0.15 mg of vitamin B2

비타민 B6 0.50 ㎎0.50 mg vitamin B6

비타민 B12 0.20 ㎍0.20 [mu] g vitamin B12

비타민 C 10 ㎎10 mg vitamin C

비오틴 10 ㎍Biotin 10 μg

니코틴산아미드 1.70 ㎎Nicotinic acid amide (1.70 mg)

엽산 50 ㎎50 mg of folic acid

판토텐산 칼슘 0.50 ㎎Calcium pantothenate 0.50 mg

무기질 혼합물 적량Mineral mixture quantity

황산제1철 1.75 ㎎1.75 mg of ferrous sulfate

산화아연 0.82 ㎎0.82 mg of zinc oxide

탄산마그네슘 25.30 ㎎25.30 mg of magnesium carbonate

제1인산칼륨 15 ㎎15 mg of potassium phosphate monobasic

제2인산칼슘 55 ㎎Secondary calcium phosphate 55 mg

구연산칼륨 90 ㎎Potassium citrate 90 mg

탄산칼슘 100 ㎎100 mg of calcium carbonate

염화마그네슘 24.80 ㎎
24.80 mg of magnesium chloride

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강기능식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
Although the composition ratio of the above-mentioned vitamin and mineral mixture is comparatively mixed with a component suitable for a health functional food as a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified, and the above components may be mixed , Granules may be prepared and used in the manufacture of a health functional food composition according to a conventional method.

<2-2> 건강 음료의 제조<2-2> Manufacture of health drinks

구연산 1000 ㎎Citric acid 1000 mg

올리고당 100 g100 g of oligosaccharide

매실농축액 2 gPlum concentrate 2 g

타우린 1 gTaurine 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖
Purified water was added to a total of 900 ml

통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강 음료 조성물 제조에 사용하였다.The above components were mixed according to a conventional health drink manufacturing method, and the mixture was stirred and heated at 85 DEG C for about 1 hour. The resulting solution was filtered to obtain a sterilized container, which was sealed and sterilized, And used for manufacturing.

상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
Although the compositional ratio is relatively mixed with a component suitable for a favorite drink, it is also possible to arbitrarily modify the compounding ratio according to the regional or national preference such as the demand class, the demanding country, and the use purpose.

Claims

delete

A pharmaceutical composition for preventing and treating hypothyroidism or hyperthyroidism comprising tectoridin represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
[Chemical Formula 1]

.

[Claim 12] The pharmaceutical composition according to claim 11, wherein the tectoridin is isolated from the elderberry extract.

[Claim 13] The pharmaceutical composition according to claim 12, wherein the tectoridin is isolated from a fraction prepared by addition of an organic solvent to the elderberry extract, or a thyroid dysfunction or hyperthyroidism.

14. The method of claim 13, wherein the fraction is selected from the group consisting of a hexane fraction, a methylene chloride fraction, an ethyl acetate fraction, and a butanol fraction obtained by suspending the elderberry extract in water and sequentially fractionating the fraction with hexane, methylene chloride, ethyl acetate, Or a pharmaceutically acceptable salt thereof. The pharmaceutical composition for preventing and treating hypothyroidism or hyperthyroidism,

[Claim 13] The pharmaceutical composition for preventing and treating hyperthyroidism or hyperthyroidism according to claim 12, wherein the extract of the elderberry is a elk bark extract.

delete

A health functional food for improving hypothyroidism or hyperthyroidism comprising tectoridin represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
[Chemical Formula 1]

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