KR101595445B1 - 수정진동자 바이오센서를 구비하는 개 디스템퍼 바이러스 검출 장치 및 이를 이용한 검출 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 수정진동자(Quartz Crystal Microbalance, QCM) 바이오센서를 이용한 개 디스템퍼 바이러스(Canine distemper virus, CDV) 검출 장치에 관한 것으로, 보다 상세하게는 QCM의 물리적 혹은 화학적인 흡착(Adsorption)에 의해 생성되는 진동주파수의 변화량을 이용하여 표면에 흡착되는 CDV 양을 정교하게 측정하고 CDV 감별을 향상시킬 수 있는 단백질 칩으로 구성된 검출 장치 및 이를 이용한 검출 방법에 관한 것이다.

Description

수정진동자 바이오센서를 구비하는 개 디스템퍼 바이러스 검출 장치 및 이를 이용한 검출 방법{Apparatus for detecting Canine distemper virus comprising quartz crystal microbalance biosensor and detecting method using thereof}
본 발명은 수정진동자(Quartz Crystal Microbalance, QCM) 바이오센서를 이용한 개 디스템퍼 바이러스(Canine distemper virus, CDV) 검출 장치에 관한 것으로, 보다 상세하게는 QCM의 물리적 혹은 화학적인 흡착(Adsorption)에 의해 생성되는 진동주파수의 변화량을 이용하여 표면에 흡착되는 CDV 양을 정교하게 측정하고 CDV 감별을 향상시킬 수 있는 단백질 칩으로 구성된 검출 장치 및 이를 이용한 검출 방법에 관한 것이다.
바이오센서(biosensor)란 효소, 미생물, 항체, 수용체, DNA 탐침 등의 생체물질을 전기적, 물리화학적 소자(transducer)에 결합시키고, 측정 대상물질과의 반응으로부터 발생되는 전극활성물질이나 물리적인 변화를 전극에서 전기적인 신호로 감지하여 농도를 측정하는 장치를 말한다. 특히, QCM 바이오센서는 높은 민감도(sensitivity)와 항체가 지닌 높은 특이성(specificity)을 접목한다는 측면에서 각광을 받기 시작하였다. 구체적으로 QCM 바이오센서는 수정(Quartz)의 금 박막 기판위에 항체 고정화의 최적량을 설정하고, 항원과 항체 반응의 최적 조건 및 최적의 단백질 칩 조건을 설정하여 최소 검출 감도와 특이도를 평가함으로써, 특정 바이러스의 감염여부 확인뿐만 아니라 정량적인 확인이 가능하다는 장점이 있다.
단백질 칩은 단백질이 기판에 고정되어 있는 것으로, 단백질과 단백질 간의 상호작용을 이용하는 것이다. 이를 바이러스 및 박테리아에 대한 항체 감지에 이용할 수 있고, 각종 항원 감지 판독시약을 만들 수 있음은 물론, 암 판독 및 다양한 대사질환 판독에도 이용할 수 있다. 세계적으로는 약 25개 업체에서 단백질 칩 시스템을 개발 및 시판하고 있으나, 국내에서는 일부 바이오 벤처회사와 제약업계에서만 단백질 칩의 기술개발을 탐색하는 단계일 뿐, 단백질 칩을 병원성 미생물 검출 판독분야에 적용하거나 실용화 제품으로 사용화 된 예는 거의 전무한 것으로 확인되었다.
애완견에서 빈발하는 바이러스 감염성 질병의 하나인 개 디스템퍼 바이러스(Canine distemper virus, CDV)는 전염성이 매우 높은 급성 또는 아급성의 열성 전염병을 유발하여 높은 이환율과 폐사율을 나타내는 바이러스성 질병이다. CDV는 파라믹소 바이러스(Paramyxoviridae)과의 모르비리바이러스(Morbillivirus)속에 속하는 RNA 바이러스로서, 크기는 약 16,000 bp이며, 바이러스의 모양은 구형 또는 필라멘트형태이다. CDV는 L 단백질(large protein), H 단백질(hemagglutinin protein), P 단백질(phosphoprotein), F 단백질(fusion protein), M 단백질(matrix protein) 등으로 구성되어 있다. CDV는 주로 호흡기를 통하여 감염되며, 감염된 바이러스는 폐의 대식세포에 탐식된 후 임파절로 이동하여 임파절 괴사를 일으키며, 그 결과로 면역저하를 유발하고, 탈수초성뇌염(demyelinating encephalitis)으로 인한 간질성 경련(epileptiform convulsion)을 유발한다.
현재 동물병원 및 현장에서 사용되는 CDV 검출 방법은 신속한 래피드 키트(Rapid kit)가 대세를 이루고 있으나, 그 감도가 중합효소 연쇄 반응(Polymerase chain reaction, PCR)법 보다 떨어진다는 단점이 있고, 실험실 내에서 사용하고 있는 PCR방법은 래피드 키트보다 감도는 좋으나, 검출 시간이 길고 바이러스 검출이 아닌 부분 유전자만 증폭시키기 때문에 비특이반응에 의한 양성결과를 초래하는 단점이 있다. 이를 보완하기 위해, CDV가 고정되어 있는 단백질 칩으로 구성된 QCM 바이오센서를 이용한 검출 장치가 주목 받고 있다.
유럽 특허등록공보 제1303613호 (공개일: 2003.04.23) 캐나다 특허등록공보 제2253229호 (공개일: 1997.11.06)
이에, 본 발명자들은 감도가 좋고 신속한 CDV 검출 방법을 연구하는 과정에서, QCM의 물리적 혹은 화학적인 흡착에 의해 생성되는 진동주파수의 변화량을 이용하면, 표면에 흡착되는 CDV 양을 정교하게 측정하고 감별판독을 향상할 수 있음을 발견하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
따라서 본 발명의 목적은 QCM 바이오센서를 이용한 CDV 검출 장치 및 이를 이용한 검출 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 QCM 바이오센서를 이용한 CDV 검출 장치를 제공하며, 또한 최적의 CDV 단클론항체를 수정에 코팅하여 CDV와 특이적으로 반응시킨 후, QCM 장비를 이용하여 전하차를 판단하고, 정해진 음성, 양성 컷오프(Cut off) 수치에 따라 판독하는 검출 방법을 제공한다.
본 발명에 의한 QCM 바이오센서를 이용한 CDV 검출 장치는 바이러스 자체의 표면 흡착양에 따른 진동주파수의 변화량을 측정하는 방법이기 때문에 기존에 PCR법만큼 고감도 검출 방법으로 사용될 수 있을 뿐만 아니라 정량적으로 그 양을 확인할 수 있으므로, 획기적으로 검출시간을 단축시키고, 정확성을 향상시킬 수 있다.
도 1은 CDV 검출을 위한 QCM의 진동수 측정원리 모식도를 나타낸 것이다.
도 2는 QCM 바이오센서를 이용한 실험과정을 나타낸 것이다.
도 3은 QCM 바이오센서로 감별한 CDV 농도별 진동수의 민감도 평가를 나타낸 그래프이다.
도 4는 CDV 농도에 따른 QCM 바이오센서 진동수 값의 변화를 나타낸 그래프이다.
본 발명은 표면에 항체가 고정된 수정진동자(Quartz Crystal Microbalance, QCM) 바이오센서를 포함하는 장치를 이용하여 개 디스템퍼 바이러스(Canine distemper virus, CDV)를 검출하는 것으로, CDV 단클론항체를 수정에 코팅하여 CDV와 특이적으로 반응시킨 후, QCM 장비를 이용하여 진동수 변화값을 판단하고, 정해진 컷오프 값에 따라 양성 또는 음성을 판독하는 것이다.
이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명의 CDV 검출 장치는 QCM 바이오센서, 상기 바이오센서에 전원을 인가하는 전원공급장치, 전원 인가에 따른 QCM의 1차 진동수(F1)를 검출하는 제 1 검출수단, 시료 중의 CDV 항원과, CDV의 H 단백질(hemagglutinin protein)을 특이적으로 인식하는 단클론항체의 항원-항체 반응 후, 수정진동자의 2차 진동수(F2)를 검출하는 제 2 검출수단, 상기 제 1 검출수단 및 제 2 검출수단에 기록된 진동수 값들의 변화값을 측정하는 측정수단, 및 상기 측정수단으로부터 얻은 변화값을 미리 설정된 컷오프(Cut off) 값과 비교하여, 시료 중의 항원이 CDV에서 유래한 것임을 제시하는 판독수단을 포함한다.
본 발명의 QCM 바이오센서는 CDV 단클론항체가 고정되어 있는 단백질 칩으로 구성되어 있으며, 상기 단백질 칩은 CDV 단클론항체가 QCM의 금 박막 기판에 코팅됨으로써, QCM에 고정되어 있다. 구체적으로는, CDV 단클론항체를 버퍼에 섞어 금 박막 기판에 올려놓고 4℃에서 오버나이트 인큐베이션(overnight incubation) 또는 37℃에서 3~4시간 인큐베이션 시킨 후, 단백질 칩을 세척함으로써 CDV 단클론항체가 QCM의 금 박막 기판에 코팅된다.
또한, 본 발명은 CDV의 검출 방법에 관한 것으로, 하기 단계들을 포함한다.:
(a) QCM의 금 박막 기판 상에 CDV의 H 단백질을 특이적으로 인식하는 단클론항체를 고정화하는 단계;
(b) 상기 기판에 전기를 인가하여 고유한 진동수를 발생시키는 단계;
(c) 상기 기판에 시료를 로딩하는 단계; 및
(d) 상기 QCM 상의 항체 및 시료 중의 항원 간의 항원-항체반응을 일으키는 단계;
(e) 상기 항원-항체 반응 종료 후, QCM의 진동수 변화값을 측정하는 단계; 및
(f) 상기 진동수 변화값을 미리 설정된 컷오프 값과 비교하여, 시료를 판독하는 단계.
본 발명에서 사용되는 QCM은 수정의 역압전 현상(converse piezoelectric effects)에 의해 바이오 센서 표면에 특정 물질이 결합하면 진동주파수가 줄어드는 원리를 이용하여 CDV를 판별하고 검출한다(도 1 참조).
본 발명의 QCM을 이용하면, 개로부터 시료를 추출하여 단백질 칩을 이용하여 시료마다 진동수를 구하고, 그 정도에 따라 감염 유무와 함께 CDV의 정량을 구할 수 있다(도 2 참조). 본 발명자들은 항체와 항원에 따라 진동수의 변화가 다르기 때문에, 민감도 및 특이도를 고려하여 PCR을 통해 양성 및 음성으로 이미 확인된 시료를 이용하여 최적의 컷오프 값을 도출하였다. QCM의 수정에 전기적인 공급을 가하면 고유한 진동수가 발생되는데, 상기 수정에 양성 또는 음성인지 알지 못하는 시료를 로딩하였을 때 시료 내에 존재하는 항원이 수정에 존재하는 항체와 결합하게 되면, 고유 진동수가 변하게 된다. 따라서, 진동수의 변화값과 미리 설정된 컷오프 값을 비교함으로써, 시료의 양성 또는 음성을 구분한다. 이 때, 새로운 시료의 양성 또는 음성을 판별하는 컷오프 값의 적절성은 PCR이나 래피트 키트와의 비교 실험을 통해 재확인 하는 것이 바람직하다.
본 발명의 CDV는 파라믹소 바이러스(Paramyxoviridae)과의 모르비리바이러스(Morbillivirus)속에 속하는 RNA 바이러스로서, 크기는 약 16,000 bp이며, 바이러스의 모양은 구형 또는 필라멘트형태이다. CDV는 L 단백질(large protein), H 단백질(hemagglutinin protein), P 단백질(phosphoprotein), F 단백질(fusion protein), M 단백질(matrix protein) 등으로 구성되어 있는데, 그 중 H 단백질은 숙주의 범위와 숙주에 면역반응을 유도하는 주요 항원 결정 인자(antigenic determinants)로 알려져 있다.
본 발명은 CDV의 H 단백질을 검출할 수 있는 항체를 사용할 수 있으며, 일 실시예로 바이오노트(bionote)사의 시판용 제품(5-4 Lot.0170, 한국)을 사용하였다. 상기 H 단백질은 CDV에서 보존되어 있기 때문에, 이 영역을 특이적으로 인식하는 단클론항체는 다른 바이러스와의 교차반응(cross-reaction)없이 표적으로 하는 CDV 항원만을 탐지할 수 있다.
이하, 본 발명의 내용을 실시예 및 시험예를 통하여 보다 구체적으로 설명한다. 이들 실시예는 본 발명의 내용을 이해하기 위해 제시되는 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이들 실시예로 한정되는 것은 아니고, 당업계에서 통상적으로 주지된 변형, 치환 및 삽입 등을 수행할 수 있으며, 이에 대한 것도 본 발명의 범위에 포함된다.
[시험예 1] QCM을 이용한 CDV 농도별 진동수의 민감도 평가
링커(Linker)가 코팅된 수정의 금 박막 기판위에 CDV 단클론항체(5-4 Lot.0170, 바이오노트, 한국) 2.5㎍을 총 부피가 50㎕이 되도록 버퍼(PBS + 30% 글리신)에 섞어 금 박막 기판 중심부에 단클론항체(monoclonal antibody; mAb) 혼합물을 올려놓고 4℃에서 오버나이트 인큐베이션(overnight incubation) 또는 37℃에서 3~4시간 인큐베이션 시켰다. 40회 이상의 정밀도 시험(Inter/Intra assay)을 통해 항원, 항체 반응이 재현성 있게 일어나는 것을 확인하였고, 인큐베이션이 끝나면 버퍼를 제거한 뒤 0.1% PBS-T 버퍼(PBS + 0.1% Tween 20)와 증류수로 세척한 후, 질소 가스로 빠르게 건조시키고 실험에 사용될 때까지 4℃에서 보관하였다.
실험 시에는 수정을 반응기(reactor)에 고정시키고 프로그램 활성화 상태에서 그래프 변화가 없어질 때까지 기다린 후 증류수 100㎕을 주입시켜 그래프가 평형을 이룰 때까지 안정화 시켰다. 안정화된 수정 위에 시료를 팁 끝이 수정에 닿지 않도록 주입한 후, 전기 주파수, 질량 그래프를 확인하여 그래프가 평형을 이루는 시점부터 5분에서 10분동안 모니터링 하면서 진동수의 변화 값을 살펴보았다. 시료와 수정은 온도에 민감하므로 실험하기 전 실온에서 20분정도 인큐베이션 시켰다. 하기 표 1은 기존의 RT-PCR을 통해 확인된 양성 시료(실시예)의 측정값을 나타낸 것이고, 하기 표 2는 기존의 RT-PCR을 통해 확인된 음성 시료(비교예)의 측정값을 나타낸 것이다.또한, QCM 바이오센서를 이용하여 CDV의 민감도를 평가하기 위한 농도별 진동수 그래프를 도 3 및 도 4에 나타내었다.
실시예 1차 2차 3차 평균 표준편차 분산계수
1 -503 -512 -497 -338 293.6171 -86.869
2 -300 -304 -295 -200.667 175.5259 -87.4714
3 -385 -374 -377.5 -252 220.905 -87.6607
4 -352 -350.7 -342 -232.9 205.1624 -88.0904
5 -350.7 -348 -358 -231.233 204.5885 -88.4771
6 -300.5 -298 -265.5 -197.5 176.2406 -89.2357
7 -300.5 -298 -311 -197.167 176.8179 -89.6794
8 -432 -421 -247 -281.667 250.919 -89.0837
9 -278 -291 -284 -186.667 169.5769 -90.8448
10 -321 -305 -317 -205.333 186.6557 -90.9037
11 -299 -303 -312 -197 180.1444 -91.4439
12 -256 -278 -286 -174 161.4559 -92.7907
13 -251 -274 -260 -170.667 159.4752 -93.4425
14 -304 -299 -310 -196.333 182.1712 -92.7867
15 -330 -315 -327.5 -210.00 195.0000 -92.8571
16 -330 -341 -333 -218.333 203.0131 -92.9831
17 -286 -275 -279 -179 171.8497 -96.0054
18 -305 -297 -304 -194.333 184.2182 -94.7949
19 -365 -374 -374.5 -243.167 224.3457 -92.2601
20 -302 -299 -287 -188.667 185.0468 -98.0814
21 -318 -309 -321 -203 193.1761 -95.1606
22 -279 -280 -290.3 -182.767 174.0718 -95.2427
23 -305 -310 -324 -203.667 190.8306 -93.6975
24 -289 -260 -277 -171 172.948 -101.139
25 -247 -233 -250 -151.667 153.1579 -100.983
26 -262 -254 -260.5 -163.333 164.0163 -100.418
27 -274 -280 -262 -175.667 175.5401 -99.928
28 -245 -250 -263 -155.667 159.0796 -102.192
29 -306 -299 -317 -192 191.4236 -99.6998
30 -311 -308 -295 -196.333 196.0162 -99.8384
31 -260 -243 -255 -157.333 163.3228 -103.807
32 -292 -283 -303 -181 184.5183 -101.944
33 -335 -346 -342 -216 215.7105 -99.866
34 -328 -337 -326.5 -210.333 211.6467 -100.624
35 -364 -350.7 -360 -226.567 226.621 -100.024
36 -278.7 -277 -260 -173.233 181.2034 -104.601
37 -231 -240 -234 -144.667 157.3923 -108.797
38 -222 -235 -230 -139.667 154.0011 -110.263
39 -241 -240.7 -253 -147.567 161.5715 -109.491
40 -341 -365 -348 -222 227.2158 -102.349
비교예 1차 2차 3차 평균 표준편차 분산계수
1 -84 -80 -72 -78.6667 6.110101 -7.76708
2 -155 -143 -137 -145 9.165151 -6.32079
3 -166 -170.3 -172 -169.433 3.092464 -1.82518
4 -101 -117 -109 -109 8.00000 -7.33945
5 -64 -58 -60 -60.6667 3.05505 -5.0358
6 -127 -118 -132 -125.667 7.094599 -5.64557
7 -156 -147 -152 -151.667 4.50925 -2.97313
8 -154 -147.5 -144 -148.5 5.074446 -3.41714
9 -167 -157 -154 -159.333 6.806859 -4.27209
10 -121 -129 -113 -121 8.00000 -6.61157
11 -71 -68 -79 -72.6667 5.686241 -7.8251
12 -119 -128 -123 -123.333 4.50925 -3.65615
13 -165 -147 -145 -152.333 11.01514 -7.23095
14 -132 -141 -141.4 -138.133 5.315386 -3.84801
15 -157 -168 -166 -163.667 5.859465 -3.58012
16 -155 -163 -162 -160 4.358899 -2.72431
17 -162 -158 -168 -162.667 5.033223 -3.09419
18 -112 -138 -125 -125 13.00000 -10.4
19 -168 -170 -163.5 -167.167 3.329164 -1.99152
20 -135 -148 -142 -141.667 6.506407 -4.59276
상기 표 2를 살펴보면, 비교예(CDV 음성시료)를 QCM으로 측정한 결과 진동수는 -210 이상이었으며 이를 기준으로 컷오프 값을 -210으로 결정하였다. 다만, 실제 적용시, ± 10%의 오차 범위를 적용하는 것이 바람직하다. 또한, 도 3 및 도 4에서 확인할 수 있듯이, 민감도 실험 결과 CDV 양이 많을수록 즉, CDV 농도가 높아질수록 수정에 결합하는 양이 많기 때문에, 진동수의 변화값이 컸으며, 도 4에서 그래프가 일직선상에 놓여 있다는 사실은 농도에 따른 진동수가 거의 비례하여 증가하고 있다는 것을 의미한다. 구체적으로, 103.5 TCID50/㎖, 102.5 TCID50/㎖, 101.5 TCID50/㎖의 CDV의 진동수는 각각 -361, -296, -240.3을 나타내었고, 이는 QCM 바이오센서를 통해 정량적으로 바이러스 검출을 확인할 수 있다는 것을 의미한다. 다만, 101 TCID50/㎖ 이하의 농도부터는 그 차이가 미미하여 농도 별 확인이 어려웠다.
본 발명의 CDV 단백질 칩으로 구성된 QCM 바이오센서의 특이성을 확인하기 위하여, CDV 외에 다른 바이러스들, 예를 들어, 개 인플루엔자바이러스(Canine influenzavirus, CIV) 또는 개 파보바이러스(Canine parvovirus, CPV)와의 반응성을 정밀도 시험(Inter/Intra assay)을 통해 확인하였고, 그 결과를 하기 표 3 및 표 4에 나타내었다. 하기 표 3은 QCM을 이용하여 CIV를 검출한 것이고, 표 4는 QCM을 이용하여 CPV를 검출한 것이다.
샘플 1차 2차 3차 평균 표준편차 분산계수
1 -53 -54 -55.3 -54.1 1.153256 -2.13171
2 -63 -64 -62.1 -63.0333 0.950438 -1.50783
3 -52 -56 -57.1 -55.0333 2.683903 -4.87687
4 -58 -60.3 -59 -59.1 1.153256 -1.95136
5 -62.3 -59 -60 -60.4333 1.692139 -2.80001
6 -54 -56 -59.2 -56.4 2.622975 -4.65067
7 -60.5 -60 -63 -61.1667 1.607275 -2.6277
8 -61 -59 -60.5 -60.1667 1.040833 -1.72992
9 -58.4 -59 -61.3 -59.5667 1.530795 -2.56989
총 -58.7778 1.603875 -2.76066
샘플 1차 2차 3차 평균 표준편차 분산계수
1 -97.2 -95 -93 -95.0667 2.100794 -2.20981
2 -100 -99.2 -93 -97.4 3.831449 -3.93373
3 -90.2 -93 -95 -92.7333 2.411086 -2.60002
4 -97.3 -95.2 -93 -95.1667 2.150194 -2.2594
5 -95 -92.7 -96 -94.5667 1.692139 -1.78936
6 -96 -94 -93.1 -94.3667 1.484363 -1.57297
7 -90.2 -95 -94.7 -93.3 2.688866 -2.88196
8 -92 -93.5 -94 -93.1667 1.040833 -1.11717
9 -92 -94.2 -93 -93.0667 1.101514 -1.18358
총 -94.3148 2.055693 -2.172
상기 표 3 및 표 4를 살펴보면, QCM으로 측정한 결과 CIV의 진동수 값의 평균은 -58.7, CPV의 진동수 값의 평균은 -94.3으로 나타났다. 따라서, 단백질 칩에 코팅되어 있는 단클론항체는 다른 바이러스들과는 특이적으로 반응하지 않는 것을 확인할 수 있었으며, 본 발명의 검출 장치는 CDV와의 특이성이 있음을 확인할 수 있었다.

Claims (7)

  1. 수정진동자(Quartz Crystal Microbalance) 바이오센서;
    상기 바이오센서에 전원을 인가하는 전원공급장치;
    전원 인가에 따른 수정진동자의 1차 진동수(F1)를 검출하는 제 1 검출수단;
    시료 중의 개 디스템퍼 바이러스 항원과, 개 디스템퍼 바이러스의 H 단백질을 특이적으로 인식하는 단클론항체의 항원-항체 반응 후, 수정진동자의 2차 진동수(F2)를 검출하는 제 2 검출수단;
    상기 제 1 검출수단 및 제 2 검출수단에 기록된 진동수 값들의 변화값을 측정하는 측정수단; 및
    상기 측정수단으로부터 얻은 변화값을 미리 설정된 컷오프(Cut off) 값과 비교하여, 시료 중의 항원이 개 디스템퍼 바이러스에서 유래한 것임을 제시하는 판독수단;
    을 포함하는 개 디스템퍼 바이러스(Canine distemper virus) 검출장치에 있어서,
    상기 미리 설정된 컷오프 값은 -210이고,
    상기 판독수단은 상기 측정수단으로부터 얻은 진동수의 변화값이 -210 이하일 때, 시료 중의 항원이 개 디스템퍼 바이러스에서 유래한 것으로 판독하는 것을 특징으로 하는, 개 디스템퍼 바이러스 검출 장치.
  2. 제1항에 있어서, 상기 수정진동자 바이오센서는 개 디스템퍼 바이러스 단클론항체가 수정진동자의 금 박막 기판 상에 코팅되어 있는 단백질 칩으로 구성되어 있는 것을 특징으로 하는, 개 디스템퍼 바이러스 검출장치.
  3. 제2항에 있어서, 상기 코팅은 개 디스템퍼 바이러스 단클론항체를 버퍼에 섞어 금 박막 기판에 올려놓고, 인큐베이션 시킴으로써 이루어지는 것을 특징으로 하는, 개 디스템퍼 바이러스 검출장치.
  4. 삭제
  5. (a) 수정진동자의 금 박막 기판 상에 개 디스템퍼 바이러스의 H 단백질을 특이적으로 인식하는 단클론항체를 고정화하는 단계;
    (b) 상기 기판에 전기를 인가하여 고유한 진동수를 발생시키는 단계;
    (c) 상기 기판에 시료를 로딩하는 단계;
    (d) 상기 수정진동자 상의 항체 및 시료 중의 항원 간의 항원-항체반응을 일으키는 단계;
    (e) 상기 항원-항체 반응 종료 후, 수정진동자의 진동수 변화값을 측정하는 단계; 및
    (f) 상기 진동수 변화값을 미리 설정된 컷오프 값과 비교하여, 시료를 판독하는 단계;
    를 포함하는 개 디스템퍼 바이러스(Canine distemper virus)의 검출 방법에 있어서,
    상기 (f) 단계의 미리 설정된 컷오프 값은 -210이고,
    상기 (f) 단계의 진동수의 변화값이 -210 이하일 때, 시료 중의 항원이 개 디스템퍼 바이러스에서 유래한 것으로 판독하는 것을 특징으로 하는, 개 디스템퍼 바이러스의 검출방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 (a)단계의 고정화는 개 디스템퍼 바이러스를 버퍼에 섞어 금 박막 기판에 올려놓고, 인큐베이션 시켜 코팅시킴으로써 이루어지는 것을 특징으로 하는, 개 디스템퍼 바이러스의 검출 방법.
  7. 삭제
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