KR101590492B1 - Disinfectant composition comprising fermented natural product as effective component and production method thereof - Google Patents

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Abstract

본 발명은 유산균 및 효모 중에서 선택된 하나 이상의 균주를 이용하여 인동등, 황금, 갈근 및 생지황 중에서 선택된 둘 이상을 포함하는 혼합물을 알콜 발효시키는 단계; 상기 알콜 발효물을 초산균으로 초산 발효시키는 단계; 및 상기에서 발효시킨 초산 발효물을 정제하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 살균소독용 발효물의 제조방법 및 상기 발효물을 유효성분으로 하는 살균소독용 조성물에 관한 것으로, 병원성 미생물에 대한 소독 효과가 뛰어나, 축사, 축제 및 음수 소독 등에 유용한 안전하고 친환경적인 소독제일 뿐만 아니라 악취제거, 유기질 축분비료 생산, 사육 생산성 향상, 축사환경 개선 등 다양한 기능을 가진 천연소독제로서 사용될 것으로 기대된다. The present invention relates to a method for fermenting a fermented milk, comprising fermenting a mixture containing at least two selected from the group consisting of fermented soybeans, golden rice gruel, and raw fermented soybeans with one or more strains selected from lactic acid bacteria and yeast; Fermenting the fermented alcohol with acetic acid to acetic acid; And a step of purifying the fermented acetic acid fermented by the above-mentioned method. The present invention relates to a method for producing a fermented product for sterilization and disinfection using the fermented product as an effective ingredient, It is expected to be used as a natural disinfectant with various functions such as odor elimination, organic fertilizer production, improvement of breeding productivity, and improvement of housing environment, which are excellent for safe and environmentally friendly disinfection useful for housing, festivals and water disinfection.

Description

발효된 천연물을 유효성분으로 포함하는 살균소독용 조성물 및 이의 제조방법{Disinfectant composition comprising fermented natural product as effective component and production method thereof}TECHNICAL FIELD The present invention relates to a disinfecting composition comprising a fermented natural product as an effective ingredient and a method for producing the fermented natural product,

본 발명은 발효된 천연물을 유효성분으로 포함하는 살균소독용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 유산균 및 효모 중에서 선택된 하나 이상의 균주를 이용하여 인동등, 황금, 갈근 및 생지황 중에서 선택된 둘 이상을 포함하는 혼합물을 알콜 발효시키는 단계; 상기 알콜 발효물을 초산균으로 초산 발효시키는 단계; 및 상기에서 발효시킨 초산 발효물을 정제하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 살균소독용 조성물의 제조방법과 이의 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for sterilizing and disinfecting a fermented natural product as an effective ingredient and a method for producing the fermented natural product. More particularly, the present invention relates to a composition for sterilization and disinfection, Fermenting the mixture comprising alcohol; Fermenting the fermented alcohol with acetic acid to acetic acid; And a step of purifying the fermented acetic acid fermented by the above-mentioned method, and a composition therefor.

최근 구제역, 조류독감, 신종 플루 등의 바이러스와 리스테리아, 포도상구균, 연쇄상 구균, 폐렴균, 디프테리아균, 파상풍균, 탄저균, 방선균 등의 그람양성균 및 대장균, 살모넬라, 이질균, 티푸스균, 콜레라균 등의 그람음성균 등의 미생물이 체내에 침입하여 다양한 질병을 유발하여 소, 돼지, 닭 등 주요 가축 뿐 아니라 어린이, 노인 또는 만성질환자 등의 고위험군에서 이환율 및 사망률의 증가를 초래해 막대한 사회경제적 손실을 일으키고 있다. In recent years, there have been recently reported that the viruses such as foot-and-mouth disease, avian influenza and swine flu viruses and gram-positive bacteria such as Listeria, Staphylococcus, Streptococcus, Streptococcus, Diphtheriaceae, Tetanus, Anthrax, Actinomycetes, and Gram-positive bacteria such as Escherichia coli, Salmonella, Microbes such as pathogenic microorganisms invade the body and cause various diseases and cause a great socioeconomic loss by causing morbidity and mortality increase in high risk groups such as cattle, pig, and chicken as well as children, elderly or chronic patients.

이에 따른 다양한 살균 및 소독제가 출시되고 있으나 대부분이 합성화학 물질이며 세균이나 바이러스에 내성을 일으켜서 또 다른 문제를 유발하고 있다. 가축방역의 경우, 다량의 화학소독제를 축사와 그 주변 및 도로 등에 분사하고 있지만 효율성이 낮고 동물이나 인체에 피해 우려 등의 문제점이 많다. 한편, 화학소독제의 가격 경쟁력을 극복하여 활용중인 천연물 소독제는 매우 한정적이고 대량생산의 어려움이 있어 실용화되지 못하는 실정이다. 따라서 높은 살균 및 살바이러스 활성을 가지는, 안전한 친환경 소재의 천연물 소독제를 개발하는 것은 매우 시급하다. Various disinfection and disinfecting agents have been introduced, but most of them are synthetic chemicals and cause resistance to bacteria or viruses and cause other problems. In the case of livestock pest control, a large amount of chemical disinfectant is sprayed on the pond, its surroundings, roads, etc. However, its efficiency is low and there are many problems such as concern about damage to animals and human body. On the other hand, the natural disinfectant that is being used to overcome the price competitiveness of the chemical disinfectant is very limited, and it is difficult to mass-produce it and it can not be practically used. Therefore, it is very urgent to develop a natural disinfectant for safe and environmentally friendly materials having high sterilization and virucidal activity.

천연물이란 인공을 가하지 않은 자연 그대로의 것을 의미하는데, GRAS(Generally Recognized As Safe)로 분류된 천연물들은 사용량이나 식품에 규제받지 않으며, 국내에서는 천연첨가물로 분류되어 식품첨가물로도 사용이 되고 있는 실정이다. 외국에서는 특별한 제한 없이 사용자의 뜻에 따라 자유롭게 이용할 수 있는 물질로 기능성이 탁월하여 건강식품과 의약품으로도 이용되고 있다.Natural products are natural products that are not artificially added. Natural products classified as GRAS (Generally Recognized As Safe) are not regulated by usage or food, and they are classified as natural additives in Korea and are also used as food additives . In foreign countries, it can be freely used according to users' wishes without any special restrictions, and it is also used as health food and medicines because of its excellent functionality.

인류는 오래전부터 천연물을 이용하여 병원균을 항균 및 살균해왔다. 살구, 복숭아, 매실, 마늘, 양파, 키토산, 허브, 등심초 등이 사용되고 있으며, 현재 개발되어 시판 중인 천연물 소독제의 경우 대부분이 인체식품용으로 가축 방역 등에 이용된 예는 많지 않다. Humans have long since used antibacterial and antimicrobial pathogens using natural products. Apricot, apricot, peach, plum, garlic, onion, chitosan, herb, syrup, etc. are used. Most of the commercially available natural disinfectants are not used for livestock protection for human food.

또한, 상기에서 언급한 천연물들은 추출 및 농축 등의 가공을 통해 천연물 소독제로 판매하고 있으나, 발효된 천연물을 이용한 소독제품은 거의 알려진 바가 없다. 발효미생물을 이용하여 발효천연물 소독제를 만들면 친환경적 소독제로서 뿐만 아니라, 악취제거, 유기물 축분비료, 축산 생산성 등 다양한 축산물 가치 향상까지 기대할 수 있다. In addition, the above-mentioned natural products are sold as disinfectants of natural products through processing such as extraction and concentration, but sterilization products using fermented natural products are hardly known. If fermented microorganisms are used as a disinfectant for fermented natural products, it can be expected not only to be an environmentally friendly disinfectant, but also to improve the value of a variety of animal products such as odor removal, organic fertilizer, and productivity.

한국등록특허 제1322851호에는 '한약재 추출물을 포함하는 뉴캐슬병 바이러스 또는 조류독감 바이러스의 증식 억제용 조성물'이 개시되어 있고, 한국등록특허 제1130691호에는 '천연물질 추출물을 포함하는 항균활성 증강용 손소독제 조성물'이 개시되어 있으나, 본 발명의 발효된 천연물을 유효성분으로 포함하는 살균소독용 조성물 및 이의 제조방법에 대해서는 개시된 바가 없다.Korean Patent No. 1322851 discloses a composition for inhibiting the proliferation of Newcastle Disease virus or avian influenza virus including an extract of Chinese herb medicine, and Korean Patent No. 1130691 discloses a composition for preventing the growth of antimicrobial activity, The composition for sterilization and disinfection containing the fermented natural product of the present invention as an active ingredient and the preparation method thereof have not been disclosed.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명은 인동등, 황금, 갈근 및 생지황의 천연물소재를 활용하여 유산균, 효모에 의한 알콜 발효 및 초산균에 의한 초산 발효과정을 거치면서 대장균, 살모넬라, 리스테리아 및 포도상구균 등의 병원성 미생물 성장을 효과적으로 억제함을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.The present invention has been made in view of the above-mentioned needs, and it is an object of the present invention to provide a method of fermentation of lactic acid bacteria, yeast, and fermented acetic acid using acetic acid, , Listeria, and Staphylococcus, and thus completed the present invention.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 유산균 및 효모 중에서 선택된 하나 이상의 균주를 이용하여 인동등, 황금, 갈근 및 생지황 중에서 선택된 둘 이상을 포함하는 혼합물을 알콜 발효시키는 단계; 상기 알콜 발효물을 초산균으로 초산 발효시키는 단계; 및 상기 초산 발효물을 정제하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 살균소독용 발효물의 제조방법을 제공한다.In order to solve the above problems, the present invention provides a method for fermenting a fermented milk, comprising fermenting a mixture containing two or more selected from among gold, granite, and raw bean sprouts, such as potato, with alcohol using one or more strains selected from lactic acid bacteria and yeast; Fermenting the fermented alcohol with acetic acid to acetic acid; And purifying the acetic acid fermentation product. The present invention also provides a method for producing a fermented product for sterilization.

또한, 본 발명은 상기 제조방법에 따라 제조된 살균소독용 발효물을 제공한다.In addition, the present invention provides a fermented product for sterilization and disinfection produced according to the above production method.

또한, 본 발명은 상기 발효물을 유효성분으로 포함하는 살균소독용 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition for sterilization and disinfection comprising the fermented product as an effective ingredient.

본 발명에 따른 천연물 소독제는 인동등, 황금, 갈근 및 생지황의 혼합물을 유산균, 효모에 의한 알콜 발효 및 초산균에 의한 초산 발효 과정을 거치면서 시너지 효과를 낼 수 있는 대사산물을 생성하여 미생물에 대한 소독 효과가 뛰어나, 축사, 축제 및 음수 소독 등에 유용한 안전하고 친환경적인 소독제 뿐만 아니라 악취제거, 유기질 축분비료 생산, 사육 생산성 향상, 축사환경 개선 등 다양한 기능을 가진 천연물 소독제로서 사용될 것으로 기대된다. The natural disinfectant according to the present invention produces a metabolite capable of producing a synergistic effect through the fermentation of acetic acid by fermentation of alcohol, fermentation with lactic acid bacteria and yeast, and fermentation with acetic acid bacteria, and disinfecting microorganisms It is expected to be used not only as a safe and environmentally friendly disinfectant useful for housing, festivals, and water disinfection but also as a disinfectant for natural materials having various functions such as eliminating odor, producing organic fertilizer, improving breeding productivity and improving housing environment.

도 1은 발효미생물(Lactic acid bacteria;유산균, Bacillus;바실러스, Yeast;효모)에 따른 천연물 추출물의 발효패턴 변화를 나타낸 것이다.
도 2는 천연물 추출액, 혼합액 및 발효추출물 혼합액의 병원성 미생물에 대한 항균력 조사 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명에 사용된 천연물 소재(인동등, 황금, 갈근 및 생지황) 및 이의 발효 배지의 사진을 나타낸 것이다.
도 4는 각 천연물을 사용한 배지에서의 발효미생물(Lactic acid bacteria;유산균, Bacillus;바실러스, Yeast;효모)의 발효능을 알아보기 위해 생균수(A, C, E) 및 pH 변화(B, D, F)를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 유산균 발효 추출 농축액의 대장균(E. coli) K88 및 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium) KCCM40253에 대한 항균력 조사 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 천연물 배지 조성의 차이에 따라 실온에서 30일간 숙성시킨 후 유산균 또는 효모의 생균수를 측정한 결과를 나타낸 것이다(유산균;LAB, 효모;YEAST, 포도당;Glu).
도 7은 알콜 함량(0, 1, 3, 5, 7%(v/v))에 따른 초산균주 ATCC23746 및 ATCC15973의 생균수(A) 및 초산 생산량(B)을 나타낸 것이다.
도 8은 천연물 배지 조성의 차이에 따른 2차 초산발효시 초산 생성량을 나타낸 것이다(유산균;LAB, 효모;YEAST, 포도당;Glu).
도 9는 천연물 배지 조성의 차이에 따른 1차 저온발효 후 초산균 접종 배양 유무에 따른 천연물의 병원성 미생물에 대한 항균력 조사를 나타낸 것이다(유산균;LAB 또는 L, 효모;YEAST 또는 Y).
도 10은 유산균 및 효모에 의한 천연물 배지에서의 1차 발효에 의한 알콜 생성량(A) 및 2차 발효에 의한 초산 생성량(B)의 변화를 나타낸 것이다.
도 11은 천연물 배지에 첨가된 포도당(0, 1, 3, 5, 10, 20%(w/v))에 따른 장기 숙성시 초산 생성량 변화를 나타낸 것이다(Y;효모, L;유산균, G;포도당).
도 12는 장기 숙성시 온도 차이에 따른 초산 생성량 변화(A) 및 병원성 미생물에 대한 항균력 조사(B)를 나타낸 것이다.
도 13은 천연물 배지 조성의 차이에 따른 병원성 미생물에 대한 항균력 조사를 나타낸 것이다.
도 14는 천연물 발효 공정도 및 시제품을 나타낸 것이다.
Figure 1 shows changes in fermentation patterns of natural product extracts according to Lactic acid bacteria (Bacillus, Bacillus, Yeast; yeast).
Fig. 2 shows the results of the investigation of the antibacterial activity against the pathogenic microorganisms of the natural substance extract, the mixed solution and the fermented extract mixture.
Fig. 3 shows photographs of the natural material used in the present invention (iridium, golden, pungsten and raw persimmon) and its fermentation medium.
Figure 4 shows the viable cell counts (A, C, E) and pH changes (B, D, B) of the fermenting microorganisms (Lactic acid bacteria, Bacillus, , F), respectively.
FIG. 5 is a graph showing the concentration of E. coli in a lactic acid fermentation- K88 and Salmonella typhimurium (Salmonella typhimurium) shows an antibacterial activity findings for KCCM40253.
6 shows the result of measuring the number of viable cells of lactic acid bacteria or yeast after aging at room temperature for 30 days according to the difference in the composition of the natural product medium (LAB, yeast, YEAST, glucose; Glu).
7 shows the viable cell count (A) and acetic acid production (B) of the acetic acid bacteria ATCC 23746 and ATCC 15973 according to the alcohol contents (0, 1, 3, 5, 7% (v / v)).
8 shows the amount of acetic acid produced during the secondary acetic acid fermentation according to the difference in the composition of the natural product medium (LAB, yeast, YEAST, glucose, Glu).
9 shows the antibacterial activity against a pathogenic microorganism of a natural product according to the presence or absence of inoculation with a culture medium after the first low temperature fermentation according to the difference in the composition of the natural product medium (LAB or L, yeast, YEAST or Y).
10 shows changes in the amount of alcohol produced (A) by primary fermentation and the amount of produced nitric acid (B) by secondary fermentation in a natural material medium by lactic acid bacteria and yeast.
11 shows changes in the amount of acetic acid produced during long-term fermentation according to the glucose (0, 1, 3, 5, 10, 20% (w / v)) added to the natural material medium (Y; yeast; L; glucose).
Fig. 12 shows changes in acetic acid production amount (A) and antimicrobial activity against pathogenic microorganisms (B) according to temperature difference during aging of the organs.
Fig. 13 shows the investigation of the antimicrobial activity against pathogenic microorganisms according to differences in the composition of the natural material medium.
Fig. 14 shows a natural product fermentation process diagram and a prototype product.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은In order to achieve the object of the present invention,

(1) 유산균 및 효모 중에서 선택된 하나 이상의 균주를 이용하여 인동등, 황금, 갈근 및 생지황 중에서 선택된 둘 이상을 포함하는 혼합물을 알콜 발효시키는 단계;(1) alcohol fermentation of a mixture containing two or more selected from among gold, purl, and raw persimmon by using one or more strains selected from among lactic acid bacteria and yeast;

(2) 상기 단계 (1)에서 발효시킨 알콜 발효물을 초산균으로 초산 발효시키는 단계; 및(2) fermenting the fermented alcohol fermented in step (1) with acetic acid to acetic acid; And

(3) 상기 단계 (2)에서 발효시킨 초산 발효물을 정제하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 살균소독용 발효물의 제조방법을 제공한다.(3) purifying the fermented acetic acid fermented in the step (2). The present invention also provides a method for producing a fermented product for sterilization.

인동등(Lonicera japonica Thunberg)은 예로부터 우리나라 전국 각지의 산야지에서 자생하는 인동과의 반상록 덩굴성 관목 식물인 인동의 잎과 줄기로서, 약재로 널리 사용된 무독한 한방 생약이다. 인동등에 함유된 유효성분으로는 아피게닌(Apigenin), 로니세린(Lonicerin), 루테오린(Luteolin) 등의 플라보노이드(Flavonoid)가 있으며, 이들 플라보노이드에 의해 항염증 효과 및 항암 효과 등을 갖는 것으로 알려져 있다.Lonicera japonica Thunberg is a non-toxic herbal medicine widely used as a medicinal plant, which is the leaves and stalks of an adult plant, which is a semi-evergreen shrub plant which is native to all parts of Korea. (Flavonoid) such as Apigenin, Lonicerin, and Luteolin are known to be effective ingredients contained in the sweet potato starch and the like, and these flavonoids have anti-inflammatory and anti-cancer effects by these flavonoids have.

황금은 꿀풀과의 다년생 초본으로 플라보노이드를 포함하는 것으로 알려져 있다. 황금에 함유된 유효성분으로는 비칼린(Bicalin), 오록실린A(Oroxylin A), 비칼레인(Bicalein) 등이 있으며, 이들 성분이 항균, 항바이러스 작용, 소염, 항알레르기 작용 및 해열 작용을 갖는다.Gold is a perennial herb of Lamiaceae and is known to contain flavonoids. The active ingredients in gold include Bicalin, Oroxylin A, and Bicalein. These ingredients have antibacterial, antiviral, anti-inflammatory, antiallergic and antipyretic properties. .

갈근은 콩과에 속하는 칡(Pueraria thunbergiana BENTHAM)의 뿌리를 적당히 썰어서 건조한 것으로, 예로부터 생즙을 내서 먹거나 건조시켜 차로 마시기도 하고 전분을 내어 식품 등에 이용하기도 하였다. 주요성분으로는 다이드자인(daidzein), 다이드진(daidzin), 게니스테인(genistein), 파라쿠마릭산, 푸에라린, 케르세틴, 등이 있으며 예로부터 해독제, 구토방지제, 진경제, 강심제, 진통제, 정화제, 발한제, 해열제, 유즙분비제, 혈당강하제, 혈압강하제 등으로 쓰이기도 하였다.Pueraria thunbergiana BENTHAM, which is rooted in the bean curd, is dried by slicing and roasting it appropriately. It has been used for drinking and drinking tea, starch, and food. The main ingredients are daidzein, daidzin, genistein, paracumaric acid, fuerarin, and quercetin. They have been used as antioxidants, vomiting preventives, antispasmodics, cardiac agents, analgesics, , Antiperspirants, antipyretics, milk secretions, hypoglycemic agents, hypotensive agents, and so on.

생지황은 지황(Rehmannia glutinosa) 뿌리의 날것을 의미하며, 성질이 차서 해열 작용이 뛰어나며, 허약 체질, 토혈, 코피, 자궁 출혈, 생리불순 및 변비의 치료에 사용한다.Reishi (Rehmannia glutinosa) refers to the roots of the root, and is excellent in fever-fighting activity due to its properties. It is used for the treatment of fragile constitution, hematemesis, nosebleeds, uterine bleeding, menstrual irregularities and constipation.

본 발명에서 인동등, 황금, 갈근 및 생지황은 자체 또는 추출물을 사용할 수 있다. 바람직하게는 인동등, 황금, 갈근 및 생지황 자체를 분쇄하여 사용할 수 있다. 또한, 인동등, 황금, 갈근 및 생지황 중 어느 하나 이상, 바람직하게는 둘 이상을 혼합하여 혼합물 형태로 사용할 수 있으며, 가장 바람직하게는 인동등, 황금, 갈근 및 생지황이 모두 포함된 혼합물을 사용할 수 있다.In the present invention, it is possible to use an indigo or the like as a raw material, an extract or an extract thereof. Preferably, it can be used by pulverizing iron, etc., gold, brassiere and raw persimmon itself. In addition, a mixture of any one or more, preferably two or more, of gold, granite, and raw persimmon can be used as a mixture, and most preferably, a mixture containing all of gold, have.

본 발명은, 상기 단계 (1)에서 혼합물 100 중량부를 기준으로, 1 내지 50 중량부의 인동등, 1 내지 50 중량부의 황금, 1 내지 50 중량부의 갈근 및 1 내지 50 중량부의 생지황 중에서 선택된 하나 이상을 이용하여 알콜 발효를 할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The present invention relates to a method for preparing a mixture comprising, in step (1), 1 to 50 parts by weight of gold, 1 to 50 parts by weight of gold, 1 to 50 parts by weight of brassiere and 1 to 50 parts by weight of raw persimmon, Alcohol fermentation can be performed using, but not limited to.

상기 단계 (1)의 유산균은 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 퍼멘툼(Lactobacillus fermentum) 및 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 중에서 선택된 2종 이상의 유산균을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 바람직하게는 L. acidophilus PF-01, L. fermentum NLRI201, L. plantarum NLRI112를 사용할 수 있다.Lactic acid of step (1) is Lactobacillus ash FIG filler's (Lactobacillus acidophilus), Lactobacillus buffer lactofermentum (Lactobacillus fermentum ) and Lactobacillus planta ( Lactobacillus plantarum), but use of two or more lactic acid bacteria selected from among, not limited to this, preferably L. acidophilus PF-01, L. fermentum NLRI201, L. plantarum NLRI112 can be used.

상기 단계 (1)의 효모는 사카로미세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae)을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 바람직하게는 S. cerevisiae KCTC 7919를 사용할 수 있다.The yeast of step (1) may be Saccharomyces cerevisiae , but is not limited thereto. Preferably, S. cerevisiae KCTC 7919 can be used.

본 발명의 일 구현 예에 따른 제조방법에 있어서, 상기 단계 (1)에서 알콜 발효는 14 내지 60일 동안 20 내지 35℃의 온도로 발효시킬 수 있으며, 바람직하게는 20 내지 40일 동안 20-25℃의 온도로 발효시킬 수 있다.In the production method according to an embodiment of the present invention, the alcohol fermentation in the step (1) may be carried out at a temperature of 20 to 35 캜 for 14 to 60 days, preferably 20 to 25 Lt; 0 > C.

본 발명의 일 구현 예에 따른 제조방법에 있어서, 상기 단계 (1)에서 추가로 1 내지 20 %(w/v), 바람직하게는 5-10%(w/v)의 당, 더 바람직하게는 5-10%(w/v)의 포도당을 첨가하는 것을 특징으로 한다. In the production method according to an embodiment of the present invention, the amount of the sugar in the step (1) is 1 to 20% (w / v), preferably 5-10% (w / v) And adding 5-10% (w / v) glucose.

본 발명의 일 구현 예에 따른 제조방법에 있어서, 상기 단계 (2)의 초산균은 아세토박터 아세티(Acetobacter aceti)를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 Acetobacter aceti ATCC15973 또는 Acetobacter aceti ATCC23746을 사용할 수 있다. In the production method according to an embodiment of the invention, chosangyun the above step (2) requires the acetonide bakteo Oh Shetty (Acetobacter aceti), preferably Acetobacter aceti ATCC15973 or Acetobacter aceti ATCC 23746 can be used.

본 발명의 일 구현 예에 따른 제조방법에 있어서, 상기 단계 (2)의 초산 발효 직전의 알콜 발효물의 알콜 함량을 4 내지 6 부피%, 바람직하게는 5 부피%로 조절한 후, 초산균을 접종하여 발효할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In the production method according to one embodiment of the present invention, the alcohol content of the alcohol fermentation product immediately before the acetic acid fermentation in step (2) is adjusted to 4 to 6% by volume, preferably 5% by volume, But are not limited to, fermentation.

본 발명의 일 구현 예에 따른 제조방법에 있어서, 상기 단계 (2)의 초산 발효는 15 내지 300일 동안 20 내지 35℃의 온도로 발효시킬 수 있으며, 바람직하게는 90 내지 300일 동안 20-25℃의 온도로 발효시킬 수 있다. In the preparation method according to an embodiment of the present invention, the acetic acid fermentation of the step (2) may be carried out at a temperature of 20 to 35 DEG C for 15 to 300 days, preferably 20 to 25 hours for 90 to 300 days Lt; 0 > C.

상기 단계 (2)에서 제조된 초산 발효물의 초산 함량은 3 내지 10 부피%일 수 있으며, 바람직하게는 초산 함량이 5 내지 10 부피%일 수 있다.The acetic acid content of the acetic acid fermented product prepared in the step (2) may be 3 to 10% by volume, and preferably the acetic acid content may be 5 to 10% by volume.

본 발명의 일 구현 예에 따른 제조방법에 있어서, 상기 단계 (3)은 상기 단계 (2)에서 발효시킨 초산 발효물을 정제하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 초산 발효물의 정제는 초산 발효물을 여과하여 불순물을 제거하고 농축하거나 여과 없이 농축할 수도 있으나, 이에 제한되지 않는다.In the production method according to an embodiment of the present invention, the step (3) may include a step of purifying the fermented acetic acid fermented in the step (2). The acetic acid fermentation product may be purified by filtration of the fermented product of acetic acid to remove impurities and be concentrated or may be concentrated without filtration.

상기 발효물은 병원성 미생물에 대한 항균력을 가지는 것을 특징으로 한다. 상기 병원성 미생물은 대장균, 살모넬라, 리스테리아 및 포도상구균으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있고, 바람직하게는 대장균(Escherichia coli), 살모넬라(Salmonella typhimurium), 리스테리아 모노시토게네스(Listeria monocytogenes), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus) 등일 수 있으나, 이에 제한하지는 않는다.The fermented product is characterized by having an antimicrobial activity against a pathogenic microorganism. The pathogenic microorganism may be at least one selected from the group consisting of Escherichia coli, Salmonella, Listeria and Staphylococcus, preferably Escherichia coli , Salmonella typhimurium , Listeria monocytogenes , Staphylococcus, aureus , and the like.

또한, 본 발명은 상기 제조방법에 따라 제조된 살균소독용 발효물을 제공한다.In addition, the present invention provides a fermented product for sterilization and disinfection produced according to the above production method.

또한, 본 발명은 상기 발효물을 유효성분으로 포함하는 살균소독용 조성물을 제공한다. The present invention also provides a composition for sterilization and disinfection comprising the fermented product as an effective ingredient.

상기 조성물은 병원성 미생물에 대한 항균력을 가지는 것을 특징으로 한다. 상기 병원성 미생물은 대장균, 살모넬라, 리스테리아 및 포도상구균으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있고, 바람직하게는 대장균(Escherichia coli), 살모넬라(Salmonella typhimurium), 리스테리아 모노시토게네스(Listeria monocytogenes), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus) 등일 수 있으나, 이에 제한하지는 않는다.The composition is characterized by having antimicrobial activity against pathogenic microorganisms. The pathogenic microorganism may be at least one selected from the group consisting of Escherichia coli, Salmonella, Listeria and Staphylococcus, and preferably Escherichia coli , Salmonella typhimurium , Listeria monocytogenes , ( Staphylococcus aureus , and the like.

본 발명의 살균소독용 조성물은 적용 대상 및 형태에 따라 축산음료, 사료, 식품, 의약품, 또는 화장품 등 어느 하나의 형태의 것일 수 있다. 상기 조성물에 함유된 인동등, 황금, 갈근 및 생지황 혼합물의 함량은 적용 형태에 따라 적절히 조절 가능하여 특별히 제한하지는 않는다.
The composition for sterilization and disinfection of the present invention may be in the form of any one of livestock beverage, feed, food, medicines, cosmetics, etc., depending on the application subject and form. The content of the mixture of ganoderma, such as ganoderma, gangrene and persimmon, contained in the composition is not particularly limited as it can be appropriately adjusted according to the application form.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to examples. However, the following examples are illustrative of the present invention, and the present invention is not limited to the following examples.

실시예 1. 천연물 추출 및 천연물 소재의 항균력 조사EXAMPLES Example 1: Extraction of natural products and investigation of antibacterial activity of natural materials

천연물 소재(인동등, 황금, 갈근, 생지황)를 천연물 라이브러리(library)로 선발한 후 천연물 발효를 위한 배지 배합비(표 1)를 작성하고 각각의 미생물 균주(락토바실러스, 바실러스, 효모)를 스타터로 1% 첨가하고, 수분 45%에서 48시간 배양하면서 각 미생물의 발효 변화를 조사하였다(도 1). 각 배지 배합비에 따른 미생물의 발효경향은 도 1과 같으며, 3개 균주(유산균, 효모, 바실러스) 발효 결과, 배지 A가 B, C에 비해 다소 높게 나타나 포도당이나, 효모추출물 등을 첨가할 필요는 없는 것으로 나타났다. 유산균의 경우, 3일 배양 이후에 발효가 이루어지는 것으로 나타났으며, 바실러스와 효모의 경우 2일 배양 시 최고 피크를 보였다. 미생물을 첨가하지 않은 대조구의 경우 발효가 일어나지 않은 것으로 나타났으며, 발효 후반에 곰팡이에 의한 부패를 확인할 수 있었다. After selecting the natural material (eg, indigo, gold, purple, and bamboo) as a library of natural materials, prepare a mixture ratio (Table 1) for the fermentation of natural materials and add each microorganism strain (Lactobacillus, Bacillus, and yeast) 1%, and the fermentation of each microorganism was examined while culturing at 45% moisture for 48 hours (Fig. 1). The fermentation tendency of the microorganisms according to the mixing ratio of each medium is as shown in Fig. 1, and as a result of fermentation of three strains (lactic acid bacteria, yeast, Bacillus), medium A is higher than B and C so that glucose or yeast extract . Lactic acid bacteria showed fermentation after 3 days of culture. Bacillus and yeast showed the highest peak for 2 days. The fermentation did not occur in the control without addition of microorganism, and the mold was found to be corrupt in the latter half of fermentation.

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인동등, 황금, 갈근 및 생지황의 천연물 추출액과 상기 발효조건으로부터 얻은 발효추출액의 항균력을 확인하기 위해 발효가 끝난 고상배지를 70% 에탄올로 40℃에서 12시간 추출하고 감압농축기(Evaporator;EYELA CCA-1111, 일본)로 농축하였다. 상기 추출 및 농축과정이 끝난 천연물 및 발효된 천연물 추출액을 disc paper diffusion 방법을 사용하여 표 2의 대장균(Escherichia coli) K88, 살모넬라(Salmonella typhimurium) KCCM 40253, 리스테리아(L. monocytogenes) ATCC 19114 및 포도상구균(Staphylococcus aureus) KFRI 00188 등에 대한 항균력과 유산균(L. acidophilus) PF-01, 바실러스(B. subtilis) KCTC 3239 및 효모(S. cerevisiae) KCTC 7919에 대한 억제 정도를 조사하였다(표 3 및 도 2). 그 결과 표 3 및 도 2에서 보이는 바와 같이 인동등을 비롯한 천연물 및 발효된 천연물 추출액에서의 뚜렷한 항균력은 확인할 수 없었다.To confirm the antibacterial activity of the fermented extract obtained from the fermented extracts obtained from the fermentation conditions, the fermented solid medium was extracted with 70% ethanol at 40 ° C for 12 hours, and the mixture was filtered through a vacuum evaporator (EYELA CCA- 1111, Japan). The natural and fermented natural product extracts obtained by the extraction and concentration process were subjected to disc paper diffusion method to obtain Escherichia coli coli ) K88, Salmonella typhimurium KCCM 40253, L. monocytogenes ATCC 19114 and Staphylococcus aureus KFRI 00188 and L. acidophilus PF-01, B. subtilis KCTC 3239 and S. cerevisiae KCTC 7919 (Table 3 and Fig. 2). As a result, as shown in Table 3 and FIG. 2, no distinct antibacterial activity was observed in natural products including fermented soybeans and fermented natural product extracts.

따라서, 상기 결과로부터 천연물 추출물 및 단순 발효된 천연물은 낮은 항균 효과를 보여준다는 것을 알 수 있었다.Therefore, it was found from the above results that the natural product extract and the simple fermented natural product showed a low antibacterial effect.

항균력 검증을 위해 사용한 균주Strain used for the verification of antibacterial activity AA L. acidophilus PF-01 L. acidophilus PF-01 BB S. cerevisiae KCTC 7919 S. cerevisiae KCTC 7919 CC B. subtilis KCTC 3239 B. subtilis KCTC 3239 DD Escherichia coli K88 Escherichia coli K88 EE Salmonella typhimurium KCCM 40253 Salmonella typhimurium KCCM 40253 FF Staphylococcus aureus KFRI 00188 Staphylococcus aureus KFRI 00188 GG L. monocytogenes ATCC 19114 L. monocytogenes ATCC 19114

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* 단위 cm는 억제대의 직경을 나타낸다.
* The unit cm indicates the diameter of the restraint.

실시예 2. 천연물 함량 증가에 따른 유산균 및 Example 2: Lactic acid bacteria and 바실러스의Bacillus 발효능Efficacy 조사 Research

표 4와 도 3에 개시한 바와 같이 인동등, 황금, 갈근, 생지황을 대두박과 동량으로 혼합한 배합비를 작성하고, 증류수 150ml를 첨가하여 수분 35%로 조절하였으며, 90℃에서 1시간 열처리 후 30℃로 냉각한 다음 각각의 천연물 고상 배지에 유산균(L. fermentum NLRI201 및 L. plantarum NLRI112), 바실러스(B. subtilis) KCTC 3239 및 효모(S. cerevisiae) KCTC 7919를 각각 10% 접종하고, 30℃에서 3일간 발효하면서 미생물 생장 및 pH 변화를 측정하였다(도 4). As shown in Table 4 and FIG. 3, a blending ratio of soybean meal and soybean meal was prepared by adding flour, etc., 150 ml of distilled water to adjust the water content to 35%. After heat treatment at 90 ° C for 1 hour, ( L. fermentum NLRI201 and L. plantarum NLRI112), B. subtilis KCTC 3239 and yeast ( S. cerevisiae ) KCTC 7919 were each inoculated with 10% each of the natural material solid medium, For 3 days to measure microbial growth and pH change (Fig. 4).

천연물 배합비Natural compounding ratio 구분division 대두박 처리구Soybean meal treatment 인동등 처리구Irrigation processing 황금 처리구Golden Treatment 갈근 처리구Patchwork 생지황 처리구Dried persimmon 대두박Soybean meal 500500 250250 250250 250250 250250 인동등Incandescent light 250250 황금Gold 250250 갈근Changwon 250250 생지황Raw persimmon 250250 500500 500500 500500 500500 500500

상기 유산균의 경우에 천연물소재가 첨가되지 않은 대조구(대두박 처리구)보다 천연물 소재가 첨가된 처리구가 발효능이 좋은 것으로 나타났으며 24시간 발효시 109-1010cfu/g 수준으로 대체적으로 높은 수준을 보였으며, 인동등, 갈근, 황금, 생지황 순으로 발효능력에 차이를 보였으나, 처리구 간에 유의성은 없었다(도 4A). 다음으로, 천연물과 유산균를 배양한 경우, pH 5.0에서 시작하여 4.0 수준으로 감소했으며 인동등이 가장 낮은 pH 3.88을 보였다(도 4B). In the case of the lactic acid bacteria, the treatment with natural material was found to be more effective than the control (soybean meal treatment) without natural material, and it was found to be 10 9 -10 10 cfu / g at 24 hours (Fig. 4A). The fermentation ability was different in the order of fermentation, fermentation, browning, golden, and fermentation. Next, when the natural product and the lactic acid bacteria were cultured, the pH was decreased from 5.0 to 4.0 and the pH was 3.88 (Fig. 4B).

바실러스 경우도 유산균와 비슷한 발효 패턴(108-109cfu/g 수준)을 보였으며, 48시간에 최고 피크를 보였다. 바실러스로 배양하는 경우, pH 5.0에서 시작하여 6.0 수준을 보이다 약간 낮아졌으며 pH 5.0-5.5 수준을 유지하였다.
Bacillus showed similar fermentation patterns (10 8 -10 9 cfu / g) to lactic acid bacteria, and showed the highest peak at 48 hours. When cultured with Bacillus, the pH was started at pH 5.0 and showed a slight decrease of 6.0 and maintained a pH of 5.0-5.5.

실시예Example 3. 유산균 및  3. Lactic acid bacteria and 바실러스로By Bacillus 고상배양한Solid culture 천연물 소재  Natural material 발효물의Fermented 유기용매 추출 및 농축 Organic solvent extraction and concentration

유산균 및 바실러스로 배양한 천연물 소재 발효물 100g에 70% 에탄올 250ml를 가해 30℃에서 24시간 추출하였다. Whatman No.2 여과지로 여과 후 회전 감압농축기(rotary evaporator, Eyela N-1100S-W, 일본)를 사용하여 45℃ 항온수조에서 감압 농축하였다. 농축액의 양이 추출액의 1/10이 되면 농축을 멈추고 농축액을 회수하였다. 유산균 발효 추출 농축액의 항균력은 종이 디스크(paper disc;ø 8mm)를 이용한 한천배지 확산법(Disc Diffusion Assay)으로 실험하였다. 100 g of the natural material fermented product cultured with lactic acid bacteria and bacillus was extracted with 250 ml of 70% ethanol at 30 ° C for 24 hours. After filtration with a Whatman No. 2 filter paper, the filtrate was concentrated under reduced pressure in a constant temperature water bath at 45 ° C using a rotary evaporator (Eyela N-1100S-W, Japan). When the amount of the concentrate reached 1/10 of the extract, the concentration was stopped and the concentrate was recovered. The antimicrobial activity of the lactic acid fermented extract concentrate was tested by using a disc diffusion assay using a paper disc (ø 8 mm).

TSB(Tryptic Soy Broth) 배지 100ml에 대장균(E. coli) K88 및 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium) KCCM40253를 각각 접종하여 37℃ 배양기에서 24시간 동안 배양한 후 100배 희석하였다. TSA(Trytic Soy Agar) 배지에 희석한 병원성 균액을 멸균 면봉으로 도말하고 실린지 필터로 제균시킨 농축액 80㎕, 60㎕, 30㎕를 종이 디스크에 흡수시킨 후 배지에 밀착시켰다. 37℃ 배양기에서 24시간 배양한 후 디스크 주위에 억제대(inhibition zone; mm)의 직경을 측정하였다. 유산균 발효 추출 농축액의 항균력을 조사한 결과는 항균력이 미약한 것으로 나타났다(도 5).
E. coli was added to 100 ml of TSB (Tryptic Soy Broth) K88 and Salmonella typhimurium (Salmonella typhimurium ) KCCM40253 were inoculated and cultured in a 37 ° C incubator for 24 hours and diluted 100 times. A pathogenic bacterium diluted in TSA (Trytic Soy Agar) medium was sterilized with a sterilized cotton swab and sterilized with a syringe filter. Then, 80 μl, 60 μl, and 30 μl of the concentrated solution were adsorbed on a paper disk and adhered to the medium. After incubation in a 37 ° C incubator for 24 hours, the diameter of the inhibition zone (mm) was measured around the disk. The antibacterial activity of lactic acid bacteria fermented extract concentrate was found to be weak (FIG. 5).

실시예 4. 천연물의 저온 장기 숙성 중 유산균 및 효모의 변화 Example 4: Changes in Lactic Acid Bacteria and Yeast During Long-term Aging of Natural Products at Low Temperatures

기존에 발효시킨 천연물을 혼합하여 천연물 100g에 증류수 400ml를 혼합하여 90℃에서 2시간 용출시킨 다음 냉각하였다. 각각의 처리구에 포도당을 5%(25ml) 접종한 다음, 실온(20~25℃)에서 30일간 숙성시키며 생균수를 측정하였다(*처리구 ; 유산균(LAB) 처리구, 효모(Yeast) 처리구, 유산균+효모 처리구, 유산균+5% 포도당 처리구, Yeast+5% 포도당 처리구, LAB+Yeast+5% 포도당 처리구). 유산균 또는 효모의 저온 장기 숙성 결과는 특히 유산균+효모+5% 포도당 처리구에서 log6.7과 7.7 cfu/g으로서 제일 높게 나타났으며, 대부분의 처리구에서 105cfu/g 이상을 유지하였다(도 6).
400 g of distilled water was mixed with 100 g of the natural product, and the mixture was eluted at 90 ° C for 2 hours and then cooled. Each of the treatments was inoculated with 5% (25 ml) of glucose and then aged at room temperature (20 to 25 ° C) for 30 days to measure the number of viable cells (LAB treatment, yeast treatment, lactic acid bacteria, Yeast treatment, Lactobacillus + 5% glucose treatment, Yeast + 5% glucose treatment, LAB + Yeast + 5% glucose treatment). The results of low-temperature organs fermentation of lactic acid bacteria or yeast were highest at log 6,7 and 7.7 cfu / g in lactic acid bacteria + yeast + 5% glucose treatment, and maintained at 10 5 cfu / g or more in most treatments ).

실시예 5. 초산 발효를 위한 초산균의 선발Example 5. Selection of Acetic Acid Bacteria for Acetic Acid Fermentation

유전자은행을 통해 2개의 초산균주(Acetobacter aceti ATCC15973, Acetobacter aceti ATCC23746)를 구입하여 실험에 사용하였다. 활성화된 균주를 YPD 액상배지(Yeast extract 5g/L, peptone 3g/L, glucose 10g/L) 100ml에 접종한 후 30℃, 180rpm의 조건으로 24시간 동안 진탕배양 후 종균으로 사용하였으며, 알콜 함량에 따른 생균수 및 초산 생성 차이를 확인하기 위해 알콜 0~7% 첨가된 YPD 액상배지를 만들고 30℃, 180rpm에서 6일간 배양하며 초산 함량을 측정하였다.Through the gene bank, two acetic acid bacteria ( Acetobacter aceti ATCC15973, Acetobacter aceti ATCC23746) was purchased and used for the experiment. The activated strain was inoculated in 100 ml of YPD liquid medium (Yeast extract 5 g / L, peptone 3 g / L, glucose 10 g / L) and cultured for 24 hours at 30 ° C and 180 rpm. YPD liquid medium containing 0 ~ 7% alcohol was prepared and incubated at 30 ℃ and 180 rpm for 6 days to determine acetic acid content.

총산도는 시료 1ml를 취하여 1% 페놀프탈레인 용액을 2~3방울 넣은 후 0.1N-NaOH로 적정하여 소요된 NaOH용액의 양을 초산(acetic acid)로 환산하여 총산도 분석하였다.Total acidity was determined by taking 1 ml of sample, adding 2 ~ 3 drops of 1% phenolphthalein solution, titrating with 0.1N-NaOH, and calculating the total acidity by converting the amount of NaOH solution into acetic acid.

Figure 112014051629158-pat00003
Figure 112014051629158-pat00003

V: 0.1N-NaOH 용액의 적정 소요량(ml), D: 희석배수V: Appropriate amount (ml) of 0.1N-NaOH solution, D: Dilution factor

A: 0.1N-NaOH 용액 1ml에 상당하는 초산의 양(0.006g), S:시료채취량(ml)
A: Amount of acetic acid (0.006 g) equivalent to 1 ml of 0.1 N NaOH solution, S: Amount of sample (ml)

YPD 배지에서 초산균의 생장은 48시간에 108 cfu/ml 정도 생장하였으며, 0~7%의 알콜 함량에서 생장에는 크게 영향을 주지 않는 것으로 나타났다(도 7A). 그러나, 각 초산균주 ATCC23746 및 ATCC15973을 알콜 함량 0, 1, 3, 5, 7%(v/v)로 조성하여 배양한 결과에서 초산균주 ATCC15973은 알콜 함량 7%에서 초산 함량을 1.62%로 가장 높게 생성하였으며, 상기 초산균주가 상대적으로 초산 생성량이 많은 것으로 나타났다(도 7B).
Chosangyun of growth in YPD medium were grown about 10 8 cfu / ml at 48 hours, it showed that the growth is not significantly affected in the alcohol content of 0 to 7% (Fig. 7A). However, in the case of incubation with each of acetic acid bacterium ATCC 23746 and ATCC 15973 with alcohol contents 0, 1, 3, 5, and 7% (v / v), acetic acid bacterium ATCC15973 had the highest acetic acid content at 1.62% (FIG. 7B), and the amount of acetic acid produced in the acetic acid was relatively high (FIG. 7B).

실시예 6. 초산균을 활용한 초산 발효Example 6. Acetic acid fermentation using acetic acid bacteria

실시예 4에서 저온발효시킨 천연물에 초산균을 2% 접종시킨 후 30℃, 180rpm에서 11일간 배양하면서 0, 7, 11일의 초산 함량을 측정하였다. 유산균과 포도당이 함유된 배지에서 배양한 후 초산균 배양한 경우가 초산 함량을 1.44%로 가장 높게 생성하고, 나머지 조건하에서는 0.8~1.2%의 초산을 생성함을 나타났다(도 8).
The acetic acid was inoculated 2% to the natural product fermented at low temperature in Example 4, and then the acetic acid content was measured at 0, 7, and 11 days while cultured at 30 DEG C and 180 rpm for 11 days. When cultured in medium containing lactic acid bacterium and glucose, the acetic acid bacteria culture showed the highest acetic acid content at 1.44% and 0.8-1.2% acetic acid at the other conditions (FIG. 8).

실시예 7. Example 7. 알콜Alcohol 발효 및 초산 발효된 천연물의 항균력 조사 Investigation of the antibacterial activity of fermented and fermented natural products

1차 알콜 저온발효 및 2차 초산균 접종 배양에 의해 제조된 인동등, 황금, 갈근 및 생지황을 포함하는 혼합물의 발효물의 항균력 조사를 위해 한천 홈 확산법(Agar-well diffusion assay)을 이용하였다. 병원성 균주 대장균(Escherichia coli) K88, 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium) KCCM40253, 스타필로코쿠우스 아우레우스(Staphylococuus aureus) KFRI00188, 리스테리아 모노시토게네스(Listeria monocytogenes) ATCC19114를 각각 TSB 배지 100ml에 접종한 후 32℃, 160rpm에서 24시간 배양했다.Agar-well diffusion assay was used to investigate the antimicrobial activity of the fermented product of the mixture including the golden, the browned and the raw persimmon produced by the first alcohol lower temperature fermentation and the second incubation cultivation. The pathogenic Escherichia coli K88, Salmonella typhimurium , KCCM40253, Staphylococuus aureus KFRI00188 and Listeria monocytogenes ATCC19114 were each inoculated in 100 ml of TSB medium and cultured at 32 DEG C and 160 rpm for 24 hours.

항균력 실험용 NA 고체 플레이트(1000ml 증류수, 8g NB, 15g 한천)을 준비했다. 병원성 균주 수만큼 100ml의 TSB 배지를 준비하고 한천을 0.75% 넣어 멸균한 후 TSB 소프트 한천이 적당한 온도로 식으면 각각의 TSA 배지에 병원성 균주를 600㎕ 넣어 미리 굳혀놓은 NA 배지에 적당량 부었다. 완전히 굳으면 직경 1cm 크기로 배지 층에 구멍을 뚫어 원기둥 모양의 홈을 만들었다. 미리 만들어 놓은 배지의 홈에 병원성 균주를 75~150㎕씩 분주한 후 4℃에서 3시간 방치한 후 32℃ 배양기에서 24시간 배양했다.An antibacterial NA solid plate (1000 ml distilled water, 8 g NB, 15 g agar) was prepared. When TSB soft agar was cooled to an appropriate temperature, 600 .mu.l of pathogenic strain was added to each TSA medium, and an appropriate amount of the TSB medium was poured into the pre-hardened NA medium. When completely hardened, a hole was made in the medium layer with a diameter of 1 cm to make a cylindrical groove. 75 ~ 150 ㎕ of pathogenic strain was dispensed into the wells of the previously prepared medium, and the mixture was allowed to stand at 4 캜 for 3 hours and then cultured in a 32 캜 incubator for 24 hours.

대부분의 처리구에서 초산균 접종 전보다 접종 후에 병원성 미생물에 대한 억제효과가 분명하게 관찰되었다(도 9 및 표 5). 특히 유산균+효모 처리구의 경우 초산균 접종 전에는 4개의 병원균에 대한 억제력이 전혀 없다가 접종 후에 억제력이 생성된 것은 앞으로 그 원인에 대해 연구할 가치가 있다고 판단된다. In most treatments, the inhibitory effect against pathogenic microorganisms was clearly observed after inoculation than before the inoculation with the acetic acid bacteria (FIG. 9 and Table 5). Especially, lactic acid bacteria and yeast treatments showed no inhibitory effect against four pathogenic bacteria before the inoculation of the acetic acid bacteria.

Figure 112014051629158-pat00004
Figure 112014051629158-pat00004

단위; 억제대 직경(cm)
unit; Restraining Diameter (cm)

실시예 8. 1차 및 2차 발효균주의 Example 8. Primary and secondary fermenting bacteria 알콜Alcohol 생성과 초산 생성량 조사 Production and acetic acid production

효모 및 유산균 균주에 의한 천연물 배지에서 1차 발효에 의한 알콜 생성량은 2주 경과 후 3%를 피크로 이후 휘발성 물질로서 알콜 함량이 줄어든 것으로 보였다(도 10A). 초산균에 의한 2차 초산발효는 21일 배양 후 2.5%를 기록하였다(도 10B). 1, 2차 발효 모두 예상했던 목표치를 얻지 못하였지만, 90일과 300일 배양 시 효모+유산균+10% 포도당 배지에서 초산 함량 각각 4.5%와 6.0%를 얻어 목표치에 근접하였다(도 11B 및 11C). 또한 상기 발효물이 4개 병원균에 대한 억제효과가 가장 좋은 것으로 나타났다(도 13 및 표 6). 1, 2차 발효시간은 도 10 및 11에 표기된 시간이며, 온도는 실온(20-25℃)에서 실시하였다. The amount of alcohol produced by the first fermentation in the natural material medium by the yeast and the lactic acid bacterium strain was 3% after 2 weeks, and the alcohol content as a volatile substance was decreased thereafter (FIG. 10A). The secondary acetic acid fermentation by the acetic acid bacteria was 2.5% after 21 days of culture (FIG. 10B). 1 and 2 fermentation did not achieve the expected target values, but reached 90% and 6.0%, respectively (Fig. 11B and 11C), respectively, for acetic acid contents of yeast + lactic acid bacteria + 10% glucose medium at 90 and 300 days of culture. The fermented product showed the best inhibitory effect against four pathogens (FIG. 13 and Table 6). The 1st and 2nd fermentation times were the times indicated in FIGS. 10 and 11 and the temperature was at room temperature (20-25 ° C).

Figure 112014051629158-pat00005
Figure 112014051629158-pat00005

단위; 억제대 직경(cm)
unit; Restraining Diameter (cm)

또한, 장기 숙성의 기간을 단축하고자 초산 발효온도 30℃에서 배양을 하였으나, 실온에서 배양한 것이 초산 함량 5.2%로 30℃ 배양 시 3.9%보다 초산 함량이 높게 나타났다(도 12).
In addition, in order to shorten the period of long-term aging, the culture was carried out at an acetic acid fermentation temperature of 30 ° C. However, the acetic acid content was 5.2% at room temperature and higher than 3.9% at 30 ° C. (FIG.

실시예 9. 천연물의 발효 공정도 및 시제품Example 9 Fermentation Process and Prototype of Natural Products

본 연구에서 최종적으로 인동등, 황금, 갈근, 생지황 등을 천연물로 선발하였다. 증류수와 섞은 후 유산균, 효모 균주로 1달 이상 발효시키면서 알콜 함량이 5% 이상 될 때까지 1차 알콜 발효를 하였다. Whatman No.2 여과지로 여과한다. 여과액의 알콜 함량을 5%로 조정 후 초산균 2% 접종하여 20~25℃에서 3달 이상 초산함량이 5% 이상 되도록 초산 발효를 한 후 정제공정을 거쳐 완제품으로 제조했다(도 14).In the present study, we finally selected natural dyes such as indigo, gold, purke, and rhizome. After mixing with distilled water, fermentation with lactic acid bacteria and yeast strains for one month or more was performed and primary alcohol fermentation was performed until the alcohol content exceeded 5%. Filter through a Whatman No.2 filter paper. After the alcohol content of the filtrate was adjusted to 5%, the acetic acid was inoculated at 2%, and the acetic acid was fermented at 20 to 25 ° C. for 3 months or more to have an acetic acid content of 5% or more.

Claims (14)

(1) 유산균 및 효모 중에서 선택된 하나 이상의 균주를 이용하여 인동등, 황금, 갈근 및 생지황을 포함하는 혼합물을 알콜 발효시키는 단계;
(2) 상기 단계 (1)에서 발효시킨 알콜 발효물을 초산균으로 초산 발효시키는 단계; 및
(3) 상기 단계 (2)에서 발효시킨 초산 발효물을 정제하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 살균소독용 발효물의 제조방법.
(1) fermenting a mixture containing fermented soybeans, golden, baker's yeast, and fresh persimmon with alcohol using one or more strains selected from lactic acid bacteria and yeast;
(2) fermenting the fermented alcohol fermented in step (1) with acetic acid to acetic acid; And
(3) purifying the fermented acetic acid fermented in the step (2).
삭제delete 제1항에 있어서, 상기 단계 (1)의 유산균은 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 퍼멘툼(Lactobacillus fermentum) 및 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 중에서 선택된 2종 이상의 유산균인 것을 특징으로 하는 살균소독용 발효물의 제조방법.The method of claim 1, wherein the lactic acid bacteria of step (1) is selected from the group consisting of Lactobacillus acidophilus , Lactobacillus < RTI ID = 0.0 > fermentum ) and Lactobacillus planta ( Lactobacillus wherein the fermented product is at least two kinds of lactic acid bacteria selected from the group consisting of plantarum and plantarum . 제1항에 있어서, 상기 단계 (1)의 효모는 사카로미세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae)인 것을 특징으로 하는 살균소독용 발효물의 제조방법.The method according to claim 1, wherein the yeast in step (1) is Saccharomyces cerevisiae . 제1항에 있어서, 상기 단계 (1)에서 알콜 발효는 20 내지 40일 동안 20 내지 25℃의 온도로 발효시키는 것을 특징으로 하는 살균소독용 발효물의 제조방법.The method according to claim 1, wherein the alcohol fermentation in step (1) is carried out at a temperature of 20 to 25 ° C for 20 to 40 days. 제1항에 있어서, 상기 단계 (1)에서 추가로 5 내지 10%(w/v)의 당을 첨가하는 것을 특징으로 하는 살균소독용 발효물의 제조방법.The method according to claim 1, wherein an additional 5 to 10% (w / v) sugar is added to the fermented product in step (1). 제1항에 있어서, 상기 단계 (2)의 초산균은 아세토박터 아세티(Acetobacter aceti)인 것을 특징으로 하는 살균소독용 발효물의 제조방법.According, chosangyun the above step (2) is acetonitrile bakteo Oh Shetty (Acetobacter aceti), a fermentation method for water disinfection, characterized in that in claim 1. 제1항에 있어서, 상기 단계 (2)의 초산 발효 직전의 알콜 발효물의 알콜 함량을 4 내지 6 부피%로 조절하는 것을 특징으로 하는 살균소독용 발효물의 제조방법.The method according to claim 1, wherein the alcohol content of the alcohol fermentation product immediately before the acetic acid fermentation in step (2) is adjusted to 4 to 6% by volume. 제1항에 있어서, 상기 단계 (2)의 초산 발효는 90 내지 300일 동안 20 내지 25℃의 온도로 발효시키는 것을 특징으로 하는 살균소독용 발효물의 제조방법.The method of claim 1, wherein the acetic acid fermentation of step (2) is performed at a temperature of 20 to 25 ° C for 90 to 300 days. 제1항에 있어서,
(1) 유산균 및 효모의 혼합 균주를 이용하여 인동등, 황금, 갈근 및 생지황을 포함하는 혼합물을 20 내지 40일 동안 20 내지 25℃의 온도로 알콜 발효시키는 단계;
(2) 상기 단계 (1)에서 발효시킨 알콜 발효물의 알콜 함량을 4 내지 6 부피%로 조절한 후, 초산균으로 90 내지 300일 동안 20 내지 25℃의 온도로 초산 발효시키는 단계; 및
(3) 상기 단계 (2)에서 발효시킨 초산 발효물을 정제하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 살균소독용 발효물의 제조방법.
The method according to claim 1,
(1) fermenting a mixture containing fermentation broth, golden, baker's yeast, and fresh persimmon by 20 to 40 days at a temperature of 20 to 25 캜 using a mixed strain of lactic acid bacteria and yeast;
(2) adjusting the alcohol content of the fermented alcohol fermented in the step (1) to 4 to 6% by volume, and then fermenting the fermented product to acetic acid at a temperature of 20 to 25 ° C for 90 to 300 days; And
(3) purifying the fermented acetic acid fermented in the step (2).
제1항, 제3항 내지 제10항 중 어느 한 항의 제조방법에 따라 제조된 살균소독용 발효물.A fermentation product for sterilization and disinfection produced according to the production method of any one of claims 1 and 3 to 10. 제11항의 발효물을 유효성분으로 포함하는 살균소독용 조성물. A composition for sterilization and disinfection comprising the fermented product of claim 11 as an active ingredient. 제12항에 있어서, 상기 조성물은 병원성 미생물에 대한 항균력을 가지는 것을 특징으로 살균소독용 조성물.13. The composition for sterilization according to claim 12, wherein the composition has antibacterial activity against a pathogenic microorganism. 제13항에 있어서, 상기 병원성 미생물은 대장균, 살모넬라, 리스테리아, 포도상구균으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 살균소독용 조성물.14. The composition for sterilization according to claim 13, wherein the pathogenic microorganism is at least one selected from the group consisting of E. coli, Salmonella, Listeria, Staphylococcus.
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