KR101568736B1

KR101568736B1 - Vaccine composition for tuberculosis containing MTBK 24820 protein

Info

Publication number: KR101568736B1
Application number: KR1020140093499A
Authority: KR
Inventors: 신성재; 김우식; 조상래; 한승정
Original assignee: 연세대학교 산학협력단
Priority date: 2014-07-23
Filing date: 2014-07-23
Publication date: 2015-11-12

Abstract

The present invention relates to a vaccine composition for preventing tuberculosis, containing MTBK 24820 protein. According to the present invention, an application of the MTBK 24820 protein as an antigen shows high capability of producing interferon gamma (IFNγ) in spleen and lungs of an animal model infected by tuberculosis bacillus, and also ensures the fast formation of acquired protective immunity and maintains the memorization of T cells, thereby effectively preventing tuberculosis. Moreover, the MTBK 24820 protein according to the present invention can be used for tuberculosis treatment, thereby preventing the reinfection or recurrence of highly pathogenic tuberculosis, which shows high recurrence rate, and being useful for improving treatment efficiency.

Description

[0001] Vaccine composition for tuberculosis containing MTBK 24820 protein [

본 발명은 MTBK 24820 단백질을 포함하는 결핵 예방용 백신 조성물에 관한 것이다The present invention relates to a vaccine composition for preventing tuberculosis comprising MTBK 24820 protein

결핵은 WHO에서 규정한 3대 감염질환 중 하나로 1882년 미생물학자인 로베르트 코흐에 의해 발견되었으며, 마이코박테리움 튜버쿨로시스(Mycobacerium tuberculosis)에 의하여 유발되는 높은 발병률과 사망률을 보이는 치명적인 질병이다. 전 세계적으로 약 6천만명 환자가 활동성 결핵에 감염되어 있으며, 매년 약 5천만에서 1억여명이 새로 결핵에 감염되는 것으로 추정되고 있고, 적어도 매년 900만명 이상의 새로운 결핵 환자가 발생하며, 연간 150만 명 이상이 결핵으로 사망한다고 알려졌다. 결핵 발병률(incidence rate)은 인구 10만명 당 146명, 결핵 사망률은 인구 10만명 당 49명으로 단일 감염병 중에서 가장 많은 사망 원인을 차지하고 있어, 세계적으로 심각한 보건 문제로 남아 있다.Tuberculosis is one of the three major infectious diseases defined by WHO. It was discovered by the microbiologist Robert Koch in 1882 and is a fatal disease with high incidence and mortality caused by Mycobacerium tuberculosis. Approximately 60 million people worldwide are infected with active tuberculosis. It is estimated that between 50 million and 100 million people are newly infected with tuberculosis every year. At least 9 million new tuberculosis patients occur each year and more than 1.5 million people It was reported that this tuberculosis died. The incidence rate of tuberculosis is 146 deaths per 100,000 population, and tuberculosis death rate is 49 per 100,000 population, making it the most common cause of death among infectious diseases.

결핵균들의 우점적인 유전자형을 가진 베이징과의 결핵균은 전 세계에 널리 퍼져있으며 (Glynn et al., 2002), 주로 동아시아에 빈번하게 퍼져있다 (European Concerted Action on New Generation Genetic Markers and Techniques for the Epidemiology and Control of Tuberculosis, 2006). 결핵균 중에서 베이징과에 속하는 유전자형을 가지는 빈도는 중국이 92%, 한국이 72%, 베트남이 40% 인 것으로 추정된다 (Glynn et al., 2002). 베이징과 결핵균의 유전자형은 단일약물 내성 및 다재내성을 포함한 결핵균의 약제내성과 관련되어 있다 (Buu et al., 2009). 또한 베이징과의 유전자형은 잠복기상태의 결핵균의 재발과도 밀접한 연관성을 가지고 있다 (Burman et al., 2009).Mycobacterium tuberculosis with the dominant genotype of Mycobacterium tuberculosis is prevalent worldwide (Glynn et al., 2002), and is frequently distributed in East Asia (see, eg, European Concerted Action on Genetic Markers and Techniques for the Epidemiology and Control of Tuberculosis, 2006). Among the Mycobacterium tuberculosis isolates, the frequencies of genotypes belonging to the genus Beijing are estimated to be 92% for China, 72% for Korea and 40% for Vietnam (Glynn et al., 2002). The genotypes of Beijing and Mycobacterium tuberculosis are associated with drug resistance of Mycobacterium tuberculosis, including single drug resistance and resistance to multiple drugs (Buu et al., 2009). Genotyping with Beijing has also been implicated in the recurrence of latent tuberculosis (Burman et al., 2009).

한국의 전체 결핵 발병률은 감소하고 있는 추세(직접도말양성결핵균의 유병률, 1965년에 10만명에 686명에서 1995년 10만명에 93명)에 있지만 (Hong et al., 1998), 여전히 상대적으로 높은 비율(0.11%)이다 (unpublished survey data by the CDC in Korea). 최근 들어 우리나라에서 발병하는 결핵환자 중에 약제내성을 나타내는 MDR-TB 환자와 XDR TB 환자가 급격하게 증가하는 추세에 있다. 한국 TB 발병 중 약 10%는 다재 내성 결핵(MDR-TB)이지만, 보다 우려되는 것은, 전체 다재내성 결핵균 중 광범위한 다재 내성 결핵(XDR-TB)의 비율이 5~15%로 나타났다는 것이다 (Jain & Dixit, 2008; Kim et al., 2008). 한국 내 결핵균의 유전자 지문은 베이징 결핵균과의 하나가 우점적으로 존재하는 것으로 나타났으며, 이 유전자형은 총 결핵균의 18.4%를 차지하는 것으로 나타났다 (Choi et al., 2010; Kim et al., 2001; Park et al., 2000). 김 등(2001)은 한국에서 고등학교 학생들에게 결핵을 야기시킨 결핵균 중 베이징과에 속하는 전염성이 강한 결핵균을 확인하였으며, 이 균을 K 균이라 명명하였다. The overall incidence of tuberculosis in Korea is decreasing (the prevalence of benign tuberculosis in direct terms, from 686 per 100,000 in 1965 to 93 per 100,000 in 1995) (Hong et al., 1998) The high percentage (0.11%) is (unpublished survey data by the CDC in Korea). Recently, MDR-TB patients and XDR TB patients showing drug resistance have been increasing rapidly in Korea. In Korea, about 10% of patients with MDR-TB are MDR-TB, but the most worrisome thing is that the proportion of broad-spectrum TBDRs is 5 ~ 15% & Dixit, 2008; Kim et al., 2008). The genetic fingerprint of the Mycobacterium tuberculosis in Korea was found to be dominant in the one with the Mycobacterium tuberculosis, and this genotype accounted for 18.4% of the total tuberculosis (Choi et al., 2010; Kim et al., 2001; Park et al., 2000). Kim et al. (2001) identified high-infectious Mycobacterium tuberculosis, belonging to the Beijing strain, among the tubercle bacilli that caused tuberculosis in high school students in Korea.

한국형 고병원성 결핵균인 K 균주는 마우스 감염 시 초기 선천면역을 극복할 수 있는 특이적 병인기전을 나타내며 이는 결핵균 표준 균주인 마이코박테리움 튜버쿨로시스 H37Rv 균주 감염량의 10배에 해당되는 성장속도를 나타낸다. 한국형 고병원성 결핵균인 K 균주 감염에 의한 마우스의 폐사는 결핵균 표준 균주인 마이코박테리움 튜버쿨로시스 H37Rv 균주 감염에 의한 마우스의 폐사보다 2배이상 빠르며, 감염 후 폐사 시기의 균수는 거의 동일한 것으로 보아 감염 후기에는 숙주의 면역반응에 의한 면역병리가 병인기전으로서 매우 중요할 것으로 생각되기에 선천면역보다는 예방백신 등을 통한 후천면역을 특이적으로 올려주는 것이 한국형 고병원성 결핵균인 K 균주를 방어하는 핵심 요소일 것으로 판단되었다. The K strain, a highly pathogenic M. tuberculosis, shows a specific pathogenesis mechanism that can overcome early congenital immune responses in mouse infection, which corresponds to a growth rate corresponding to 10 times the infectivity of Mycobacterium tuberculosis H37Rv strain, which is a standard strain of Mycobacterium tuberculosis . The mortality of mice caused by K-type infectious disease, a Korean type of highly pathogenic M. tuberculosis, is more than twice as fast as that of mice infected with Mycobacterium tuberculosis H37Rv strain, which is a standard strain of Mycobacterium tuberculosis, In the latter period, immune pathology caused by immune response of the host is thought to be crucial as a pathogenesis. Therefore, it is a key factor to defend K-strain, a highly pathogenic M. tuberculosis, Respectively.

현재, 결핵은 주로 마이코박테리움 보비스(Mycobacterium bovis)의 비독성 균주인 바실러스 칼메트-구에린(BCG: Bacillus Calmette-Guerin)의 생균을 이용하여 예방하고 있다. 그러나 BCG 백신은 한국형 고병원성 결핵균에는 그 효과가 없는 것으로 알려져 있으며, 안전성 및 효능에 논란이 있어 (Styblo K et al., Tuberc Lung Dis 1976; 7:17-43), 미국과 같은 몇몇 국가는 이의 사용을 금지하고 있다. 또한, BCG는 HIV에 감염된 어린이들에게 사용하기에는 적당하지 못하다고 알려져 있다. 이에 BCG를 대체할 보다 안전하고 효과가 우수한 새로운 결핵 예방 백신의 개발이 요구되고 있다.Currently, tuberculosis is prevented by using live cells of Bacillus Calmette-Guerin (BCG), a non-toxic strain of Mycobacterium bovis. However, BCG vaccine is known to have no effect on Korean high-pathogenic Mycobacterium tuberculosis, and its safety and efficacy are controversial (Styblo K et al., Tuberc Lung Dis 1976; 7: 17-43) . It is also known that BCG is not suitable for use in children infected with HIV. Therefore, the development of safer and more effective new TB vaccine to replace BCG is required.

따라서, 본 발명자는 새로운 결핵 예방 백신을 개발하기 위한 연구를 계속한 결과, 기존의 결핵 표준 균주에는 존재하지 않고, 한국형 결핵균 K 균주에만 특이적으로 존재하는 병원성 인자를 찾아 규명하였으며, 상기 병원성 인자인 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질이 마우스의 결핵균 감염 시 비장과 폐에서 높은 IFN-γ 생성능을 나타내며, 결핵균의 방어 면역을 오랫동안 유도할 수 있고 빠르게 반응할 수 있는 memory CD4 T 세포를 증가 시키는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. Therefore, the present inventor has continued research to develop a new tuberculosis preventive vaccine. As a result, the present inventors searched for a pathogenic factor that is not existing in the conventional tuberculosis strain but specifically existed in the Korean tuberculosis K strain, MTBK 20620 or MTBK 24820 protein showed high IFN-γ production in the spleen and lungs when infected with Mycobacterium tuberculosis in mice and confirmed that it could induce protective immunity of Mycobacterium tuberculosis for a long time, Thereby completing the invention.

본 발명의 목적은 MTBK 24820 단백질을 포함하는 결핵 예방용 백신 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a vaccine composition for preventing tuberculosis containing MTBK 24820 protein.

본 발명의 또 다른 목적은 MTBK 24820 단백질을 포함하는 결핵의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.It is still another object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating tuberculosis containing MTBK 24820 protein.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 MTBK 24820 단백질을 포함하는 결핵 예방용 백신 조성물을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a vaccine composition for preventing tuberculosis containing MTBK 24820 protein.

또한, 본 발명은 MTBK 24820 단백질을 포함하는 결핵의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.The present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating tuberculosis comprising MTBK 24820 protein.

본 발명에 따른 MTBK 24820 단백질을 항원으로 이용할 경우, 결핵균에 의한 감염을 유발시킨 동물모델의 비장과 폐에서 높은 IFN-γ 생성능을 나타내며, 빠른 후천적 방어면역의 형성과 T 세포의 기억화를 유지시켜줌으로써 결핵을 효과적으로 예방할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 MTBK 24820 단백질은 결핵의 치료 시에도 사용 가능하여 재발율이 높은 고병원성 결핵의 재발 또는 재감염을 예방하고 치료 효율을 높이는 데 유용하게 사용될 수 있다. When the MTBK 24820 protein according to the present invention is used as an antigen, it exhibits a high IFN-γ-producing ability in the spleen and lung of an animal model causing an infection by Mycobacterium tuberculosis and maintains rapid acquired defense immunity and T cell memory Tuberculosis can be effectively prevented. The MTBK 24820 protein according to the present invention can also be used in the treatment of tuberculosis and can be useful for preventing recurrence or reinfection of highly pathogenic tuberculosis having a high recurrence rate and improving treatment efficiency.

도 1은 한국형 결핵균 K 균주(Mycobacterium tuberculosis K strain)의 MTBK 20620 유전자 및 주변 유전자들과 결핵 표준 균주인 마이코박테리움 튜버쿨로시스 H37Rv의 동일한 지역을 비교한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 한국형 결핵균 K 균주(Mycobacterium tuberculosis K strain)의 MTBK 24820 유전자 및 주변 유전자들과 결핵 표준 균주인 마이코박테리움 튜버쿨로시스 H37Rv의 동일한 지역을 비교한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 클로닝을 통해 분리한 재조합 MTBK 20620 단백질을 SDS-PAGE를 통해 확인한 도이다.
도 4는 클로닝을 통해 분리한 재조합 MTBK 24820 단백질을 SDS-PAGE를 통해 확인한 도이다.
도 5는 동물 실험 디자인을 나타낸 도이다.
도 6은 결핵균 감염 4주 후, 마우스의 비장 세포에 재조합 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질을 처리 한 후, IFN-γ의 생성능을 나타낸 도이다.
도 7은 결핵균 감염 4주 후, 마우스의 폐 세포에 재조합 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질을 처리 한 후, IFN-γ의 생성능을 나타낸 도이다.
도 8은 결핵균 감염 8주 후, 마우스의 비장 세포에 재조합 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질을 처리 한 후, IFN-γ의 생성능을 나타낸 도이다.
도 9는 결핵균 감염 8주 후, 마우스의 폐 세포에 재조합 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질을 처리 한 후, IFN-γ의 생성능을 나타낸 도이다.
도 10은 결핵균 감염 후 유세포 분석기를 이용한 마우스의 memory T 세포 분석방법을 나타낸 도이다.
도 11은 결핵균 감염 4주 후, 마우스의 비장 세포에 재조합 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질을 처리 한 후, memory CD4 T 세포의 증가를 나타낸 도이다.
도 12는 결핵균 감염 4주 후, 마우스의 폐 세포에 재조합 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질을 처리 한 후, memory CD4 T 세포의 증가를 나타낸 도이다.
도 13은 결핵균 감염 8주 후, 마우스의 비장 세포에 재조합 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질을 처리 한 후, memory CD4 T 세포의 증가를 나타낸 도이다.
도 14는 결핵균 감염 8주 후, 마우스의 폐 세포에 재조합 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질을 처리 한 후, memory CD4 T 세포의 증가를 나타낸 도이다. FIG. 1 shows the results of comparing the MTBK 20620 gene and the peripheral genes of Mycobacterium tuberculosis K strain of the Korean strain Mycobacterium tuberculosis K K and the same region of M. tuberculosis H37Rv, a standard strain of the tuberculosis.
FIG. 2 is a graph showing the results of comparing the MTBK 24820 gene and the peripheral genes of the Mycobacterium tuberculosis K strain of the Korean Mycobacterium tuberculosis K strain to the same region of the Mycobacterium tuberculosis H37Rv, a standard strain of the tuberculosis.
FIG. 3 shows SDS-PAGE of the recombinant MTBK 20620 protein isolated through cloning.
FIG. 4 shows SDS-PAGE of the recombinant MTBK 24820 protein isolated through cloning.
Figure 5 shows an animal experimental design.
Fig. 6 is a graph showing the ability of IFN-y to produce recombinant MTBK 20620 or MTBK 24820 protein after splenocyte proliferation in 4 weeks after infection with Mycobacterium tuberculosis.
Fig. 7 is a graph showing the ability of IFN-y to produce recombinant MTBK 20620 or MTBK 24820 protein after 4 weeks of TB infection.
Fig. 8 is a graph showing the ability of IFN-y to produce recombinant MTBK 20620 or MTBK 24820 protein in mouse spleen cells after 8 weeks of TB infection.
FIG. 9 is a graph showing the production ability of IFN-? After treating recombinant MTBK 20620 or MTBK 24820 protein in lung cells of mice 8 weeks after infection with Mycobacterium tuberculosis.
FIG. 10 is a diagram illustrating a method of analyzing memory T cells of a mouse using a flow cytometry analyzer after infection with Mycobacterium tuberculosis. FIG.
FIG. 11 is a graph showing the increase of memory CD4 T cells after treatment of recombinant MTBK 20620 or MTBK 24820 protein in mouse spleen cells 4 weeks after infection with Mycobacterium tuberculosis.
FIG. 12 is a graph showing an increase in memory CD4 T cells after treatment of recombinant MTBK 20620 or MTBK 24820 protein in mouse lung cells 4 weeks after infection with Mycobacterium tuberculosis.
FIG. 13 shows the increase of memory CD4 T cells after treatment of recombinant MTBK 20620 or MTBK 24820 protein in mouse spleen cells 8 weeks after infection with Mycobacterium tuberculosis.
FIG. 14 is a graph showing an increase in memory CD4 T cells after treatment with recombinant MTBK 20620 or MTBK 24820 protein in lung cells of a mouse after 8 weeks of TB infection.

이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질을 포함하는 결핵 예방용 백신 조성물을 제공한다. The present invention provides a vaccine composition for preventing tuberculosis comprising MTBK 20620 or MTBK 24820 protein.

MTBK 20620(AIB48607.1)은 279bp의 유전자 및 92개의 아미노산 서열로 구성되어 있으며, 단백질의 크기는 8.6KDa이고 PI값은 8.36이다. MTBK 20620의 기능은 hypothetical protein으로 아직 알려져 있지 않으며 특정한 도메인이나 모티프도 가지고 있지 않지만, 결핵 표준 균주에 존재하지 않는 유전자로써 M. tuberculosis 210, M. tuberculosis X122, M. tuberculosis HN878, M. tuberculosis CTRI-4, M. tuberculosis CCDC5180, M. tuberculosis CCDC5079, M. tuberculosis R1207, M. tuberculosis W-148 등의 베이징과의 결핵균에서 동일하게 존재하는 것으로 밝혀졌다. 한국형 결핵균 K 균주(Mycobacterium tuberculosis K strain)의 MTBK 20620 유전자 및 주변 유전자들과 결핵 표준 균주인 마이코박테리움 튜버쿨로시스 H37Rv의 동일한 지역을 비교한 결과를 도 1에 나타내었다. MTBK 20620 (AIB48607.1) consists of a 279 bp gene and 92 amino acid sequences, the protein size is 8.6 kDa and the PI value is 8.36. The function of MTBK 20620 is not known yet as a hypothetical protein and does not have a specific domain or motif, but as a gene that does not exist in the tuberculosis standard strain, M. tuberculosis 210, M. tuberculosis X122, M. tuberculosis HN878, M. tuberculosis CTRI- 4, M. tuberculosis CCDC5180, M. tuberculosis CCDC5079, M. tuberculosis R1207, M. tuberculosis W-148 and the like. Fig. 1 shows the results of comparing the MTBK 20620 gene and the peripheral genes of Mycobacterium tuberculosis K strain and the same region of Mycobacterium tuberculosis H37Rv, a standard strain of tuberculosis.

MTBK 24820(PPE39)(AIB49026.1)은 1869bp의 유전자 및 622개의 아미노산서열로 구성되어 있으며, 단백질의 크기는 59KDa이고 PI값은 4.05이다. PE 패밀리, PPE 패밀리, PE-PGR 패밀리의 단백질은 마이코박테리아(mycobacteria)의 전체 게놈의 약 10%에 이르는 큰 비율을 차지하는 반복구조의 단백질 유전자 군으로써, G+C 비율이 높은 단백질을 코드하고 있는 유전자들이다. 그 중에서도 PPE는 단백질의 N 말단(terminal) 부분에 Pro-Pro-Glu의 구조로 구성되어 있어서 PPE로 명명되었으며, MPTRs(major polymorphic tandem repeats)를 가지고 여기에는 Asn-X-Gly-X-Gly-Asn-X-Gly이 반복되는 구조를 가지고 있다. 한국형 결핵균 K 균주(Mycobacterium tuberculosis K strain)의 MTBK 24820 유전자 및 주변 유전자들과 결핵 표준 균주인 마이코박테리움 튜버쿨로시스 H37Rv의 동일한 지역을 비교한 결과를 도 2에 나타내었다. MTBK 24820 (PPE39) (AIB49026.1) consists of 1869 bp genes and 622 amino acid sequences, the size of the protein is 59 KDa and the PI value is 4.05. The PE family, the PPE family, and the PE-PGR family of proteins are repetitive protein genes that occupy about 10% of the total genome of mycobacteria. They encode proteins with high G + C ratios Genes. Among them, PPE is named PPE because it is composed of the structure of Pro-Pro-Glu at the N terminal of the protein. It has major polymorphic tandem repeats (MPTRs) and Asn-X-Gly-X- Asn-X-Gly has a repeating structure. Fig. 2 shows the results of comparison between the MTBK 24820 gene and the peripheral genes of Mycobacterium tuberculosis K strain and the same region of Mycobacterium tuberculosis H37Rv, a standard strain of tubercle bacilli.

상기 MTBK 20620 단백질은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 단백질 또는 서열번호 2로 표시되는 염기서열로 인코딩 되는 단백질, 및 상기 단백질의 기능적 동등물을 포함한다. The MTBK 20620 protein comprises a protein having the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 1 or a protein encoded by the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 2, and a functional equivalent of the protein.

또한, 상기 MTBK 24820 단백질은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 단백질 또는 서열번호 4로 표시되는 염기서열로 인코딩 되는 단백질, 및 상기 단백질의 기능적 동등물을 포함한다.In addition, the MTBK 24820 protein includes a protein having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, a protein encoded by a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 4, and a functional equivalent of the protein.

상기 "기능적 동등물"이란 아미노산의 부가, 치환 또는 결실의 결과, 상기 서열번호 1 또는 3으로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것으로, 서열번호 1 또는 3으로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 단백질과 실질적으로 동질의 생리활성을 나타내는 단백질을 말한다. Is at least 70% or more, preferably 80% or more, more preferably 90% or more, or more preferably 80% or more, more preferably 90% or more, more preferably 90% or more More preferably 95% or more, of a protein having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 3, and exhibiting substantially the same physiological activity.

또한, 본 발명의 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질에는 이의 천연형 아미노산 서열을 갖는 단백질뿐만 아니라 이의 변이체가 또한 본 발명의 범위에 포함된다. 상기 변이체란 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질의 아미노산 서열과 하나 이상의 아미노산 잔기가 결실, 삽입, 비보전적 또는 보전적 치환 또는 이들의 조합에 의하여 상이한 서열을 가지는 단백질을 의미한다. 분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 단백질 및 단편에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다 (H.Neurath, R.L.Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). MTBK 20620 단백질 또는 이의 변이체는 천연에서 추출하거나 합성 (Merrifleld, J. Amer. chem. Soc. 85:2149-2156, 1963) 또는 DNA 서열을 기본으로 하는 유전자 재조합 방법에 의해 제조될 수 있다 (Sambrook et al, Molecular Cloning, Cold Spring Harbour Laboratory Press, New York, USA, 2판, 1989). In addition, the MTBK 20620 or MTBK 24820 protein of the present invention includes not only a protein having a native amino acid sequence thereof but also mutants thereof, within the scope of the present invention. By such variant is meant a protein having a sequence that differs by deletion, insertion, non-conservative or conservative substitution, or a combination thereof, with the amino acid sequence of the MTBK 20620 or MTBK 24820 protein and one or more amino acid residues. Amino acid exchange in proteins and fragments that do not globally alter the activity of the molecule is known in the art (H. Neurath, R. L. Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). The MTBK 20620 protein or its variants can be prepared by natural extraction or by synthesis (Merrifleld, J. Amer. Chem. Soc. 85: 2149-2156, 1963) or by DNA recombination methods (Sambrook et al., Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, USA, Second Edition, 1989).

상기 MTBK 20620 단백질은 서열번호 2의 염기서열로 암호화될 수 있으며, 상기 뉴클레오티드와 기능적으로 동일한 작용을 할 수 있는 변이체가 본 발명의 범위 내에 포함된다. The MTBK 20620 protein can be encoded by the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2, and variants capable of functionally equivalent to the nucleotide are included within the scope of the present invention.

또한, 상기 MTBK 24820 단백질은 서열번호 4의 염기서열로 암호화될 수 있으며, 상기 뉴클레오티드와 기능적으로 동일한 작용을 할 수 있는 변이체가 본 발명의 범위 내에 포함된다. In addition, the MTBK 24820 protein can be encoded by the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 4, and variants capable of functionally equivalent to the nucleotide are included within the scope of the present invention.

본 발명의 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질은 한국형 결핵균 K 균주로부터 유래한 것으로서, DNA 서열을 기초로 하여 재조합 방법에 의해 제조될 수 있다. 유전자 재조합 기술을 이용할 경우 단백질을 코딩하는 핵산을 적절한 발현 벡터에 삽입하고, 재조합 발현 벡터로 형질전환된 형질전환체에서 목적으로 하는 단백질이 발현되도록 숙주 세포를 배양한 후 형질전환체로부터 목적으로 하는 단백질을 회수함으로써 수득될 수 있다.The MTBK 20620 or MTBK 24820 protein of the present invention is derived from the Korean Mycobacterium tuberculosis strain K and can be produced by a recombinant method based on the DNA sequence. When a gene recombination technique is used, a nucleic acid encoding a protein is inserted into an appropriate expression vector, a host cell is cultured so that a protein of interest is expressed in the transformant transformed with the recombinant expression vector, Can be obtained by recovering the protein.

본 발명의 결핵은 안결핵, 피부 결핵, 부신 결핵, 신장결핵, 부고환 결핵, 림프선 결핵, 후두 결핵, 중이 결핵, 장결핵, 다제내성 결핵, 폐결핵, 담결핵, 골결핵, 인후결핵, 임파선 결핵, 폐허증, 유방 결핵 또는 척추 결핵을 포함하며, 이에 제한되지 않는다. The tuberculosis of the present invention can be used for the treatment of tuberculosis, skin tuberculosis, adrenal tuberculosis, renal tuberculosis, epidemic tuberculosis, lymphatic tuberculosis, laryngeal tuberculosis, middle ear tuberculosis, intestinal tuberculosis, multidrug-resistant tuberculosis, pulmonary tuberculosis, , Tuberculosis of the breast, tuberculosis of the spine, or the like.

본 발명의 결핵은 한국형 고병원성 결핵균인 K 균주에 의해 발병되는 것을 포함한다. The tuberculosis of the present invention includes those caused by the K strain which is a highly pathogenic M. tuberculosis of Korean type.

본 발명에 따른 백신 조성물은 병원성 유기체의 약독화된 균주를 개체에 접종하여 병원체에 대한 면역 반응을 유도한 것이 아니라, 백신 효과를 가지는 단백질 항원을 투여함으로써 이후의 병원균 감염을 예방한 것을 특징으로 하기 때문에, 기존에 알려진 BCG 면역법에 비하여 보다 안전한 면역법임을 특징으로 한다. The vaccine composition according to the present invention is characterized in that infection with a pathogen is prevented by administering a protein antigen having a vaccine effect instead of inducing an immune response to a pathogen by inoculating the attenuated strain of the pathogenic organism to the individual Therefore, it is characterized as a safer immunity method than the BCG immunity method known in the prior art.

또한, 본 발명에 따른 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질은 BCG 백신 투여 후, 부스터(booster) 백신으로 이용될 수 있다. In addition, the MTBK 20620 or MTBK 24820 protein according to the present invention can be used as a booster vaccine after administering BCG vaccine.

본 발명에 따른 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질을 항원으로 이용할 경우, 결핵균에 의한 감염을 유발시킨 동물모델의 비장과 폐에서 높은 IFN-γ 생성능을 나타내며, 빠른 후천적 방어면역의 형성과 T 세포의 기억화를 유지시켜줌으로써 결핵을 효과적으로 예방할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질은 결핵의 치료 시에도 사용 가능하여 재발율이 높은 고병원성 결핵의 재발 또는 재감염을 예방하고 치료 효율을 높이는 데 유용하게 사용될 수 있다.
When the MTBK 20620 or MTBK 24820 protein according to the present invention is used as an antigen, it exhibits a high IFN-γ-producing ability in the spleen and lung of an animal model causing infection by Mycobacterium tuberculosis, and the formation of rapid acquired defense immunity and T cell memory It is possible to effectively prevent tuberculosis. In addition, the MTBK 20620 or MTBK 24820 protein according to the present invention can be used in the treatment of tuberculosis and can be useful for preventing recurrence or reinfection of highly pathogenic tuberculosis having a high recurrence rate and improving treatment efficiency.

본 발명의 백신 조성물은 단독으로 투여 가능하지만 바람직하게는, 애쥬번트와 함께 투여한다. 애쥬번트는 면역세포의 초기 활성화 과정에서 비특이적으로 항원에 대한 면역 반응을 촉진하는 물질로, 숙주에게 면역원은 아니지만 면역계의 세포의 활성을 증대시킴으로써 면역을 강화하는 제제, 분자등을 의미한다(Warren et al., 1986, Annu.Rev.Immunol,. 4:369). 본 발명의 백신 조성물과 함께 투여되어 면역 반응을 증강시킬 수 있는 애쥬번트는 임의의 다양한 애쥬번트를 포함하며, 전형적인 애쥬번트로는 프로인트 애쥬번트(Freund adjuvant), 알룸 화합물(aluminum compound), 무라밀 디펩타이드(muramyl dipeptide), 리포폴리싸카라이드(LPS), 모노포스포릴 리피드 A, 또는 쿠일 A 등이 알려져 있다. 상기 애쥬번트는 백신 조성물과 동시에 투여되거나 시간 간격을 두고 순차적으로 투여될 수 있다.The vaccine composition of the present invention can be administered alone, but is preferably administered together with an adjuvant. The adjuvant refers to a substance that promotes an immune response to an antigen nonspecifically in the initial activation process of the immune cell, and is an agent, a molecule or the like that enhances immunity by increasing the activity of cells of the immune system, although not an immunogen to the host (Warren et al., 1986, Annu. Rev. Immunol., 4: 369). Adjuvants that can be administered with the vaccine composition of the present invention to enhance the immune response include any of a variety of adjuvants, and typical adjuvants include Freund adjuvant, aluminum compound, Muramyl dipeptide, lipopolysaccharide (LPS), monophosphoryl lipid A, or quail A are known. The adjuvant may be administered simultaneously with the vaccine composition or sequentially administered at intervals of time.

또한, 본 발명의 백신 조성물은 추가적으로 용매, 부형제 등을 더 포함할 수 있다. 상기 용매에는 생리식염수, 증류수 등이 포함되며, 상기 부형제에는 알루미늄 포스페이트, 알루미늄 하이드록사이드, 알루미늄 포타슘 설페이트 등이 포함되나, 이에 제한되지 않으며, 본 발명이 속하는 분야에서 통상적으로 백신 제조에 사용하는 물질을 더 포함할 수 있다. In addition, the vaccine composition of the present invention may further comprise solvents, excipients, and the like. The solvent includes physiological saline, distilled water, etc. The excipient includes, but is not limited to, aluminum phosphate, aluminum hydroxide, aluminum potassium sulfate, and the like. In the field of the present invention, As shown in FIG.

본 발명의 백신 조성물은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 이용되는 방법으로 제조할 수 있다. 본 발명의 백신 조성물은 경구형 또는 비경구형 제제로 제조할 수 있고, 바람직하게는 비경구형 제제인 주사액제로 제조하며, 진피 내, 근육 내, 복막 내, 정맥 내, 피하 내, 비강 또는 경막 외(eidural) 경로로 투여할 수 있다. The vaccine composition of the present invention can be prepared by a method commonly used in the art to which the present invention belongs. The vaccine composition of the present invention may be prepared as an oral or parenteral preparation, preferably as a parenteral preparation, in the form of an injection solution, and may be formulated as a solution or suspension in a dermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, subcutaneous, eidural) route of administration.

본 발명의 백신 조성물은 면역학적 유효량으로 개체에 투여할 수 있다. 상기 “면역학적 유효량"이란 결핵 예방효과를 나타낼 수 있을 정도의 충분한 양과 부작용이나 심각한 또는 과도한 면역반응을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 정확한 투여 농도는 투여될 특정 면역원에 따라 달라지며, 예방 접종 대상자의 연령, 체중, 건강, 성별, 개체의 약물에 대한 민감도, 투여 경로, 투여 방법 등 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있으며, 1회 내지 수회 투여가능 하다.
The vaccine composition of the present invention may be administered to an individual in an immunologically effective amount. The term " immunologically effective amount "means an amount sufficient to exhibit a tuberculosis-preventing effect and an amount not causing side effects or a serious or excessive immune response. The exact dosage level depends on the specific immunogen to be administered, May be easily determined by those skilled in the art depending on factors such as the age, body weight, health, sex, sensitivity of the individual to the drug, administration route, administration method, etc., and can be administered once or several times.

또한, 본 발명은 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질을 포함하는 결핵의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.The present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating tuberculosis comprising MTBK 20620 or MTBK 24820 protein.

본 발명의 약학적 조성물은 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질과 함께 결핵의 예방 및 치료 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 포함할 수 있다. The pharmaceutical composition of the present invention may contain at least one known active ingredient having the preventive and therapeutic effect of tuberculosis together with MTBK 20620 or MTBK 24820 protein.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.The pharmaceutical compositions of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents conventionally used in the manufacture of pharmaceutical compositions. Examples of carriers, excipients and diluents that can be included in the pharmaceutical composition of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, Cellulose, methylcellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. In the case of formulation, a diluent or excipient such as a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, or a surfactant is usually used.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 사용하는 것이 바람직하다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention may be formulated in the form of oral, granule, tablet, capsule, suspension, emulsion, syrup, aerosol or other oral formulations, external preparation, suppository and sterilized injection solution, . Suitable formulations known in the art are preferably those disclosed in Remington ' s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton PA. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like. Such solid preparations are prepared by mixing at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions, syrups and the like. Various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives and the like may be included in addition to water and liquid paraffin, which are simple diluents commonly used. have. Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Examples of suppository bases include witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerogelatin, and the like.

본 발명의 조성물은 결핵의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
The composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy, and biological response modifiers for the prevention and treatment of tuberculosis.

이하, 하기 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 이들 실시예는 본 발명을 상세히 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples. These examples are provided for illustrating the present invention in detail and the scope of the present invention is not limited by these examples.

실시예 1. 재조합 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질의 준비Example 1. Preparation of recombinant MTBK 20620 or MTBK 24820 protein

한국형 결핵균 K 균주(Mycobacterium tuberculosis K strain)로부터 게놈 DNA를 추출하여, 이로부터 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 유전자를 클로닝하였다. MTBK_20620의 경우 정방향 프라이머(5'-CATATGGTGACCGACCCCGACAT-3') 및 역방향 프라이머(5'-AAGCTTCCACCAT CTGCGCTTTC-3')를 이용하였고, MTBK_24820의 경우 정방향 프라이머(5'-CATATGGTGAATTTTTCGGT-3') 및 역방향 프라이머(5'-AAGCTTTCCGAACAAGTTCT-3')를 이용하여 PCR을 수행하였으며, MTBK 20620 또는 MTBK 24820 부위를 증폭하였다. 상기 PCR 산물을 NdeI 및 HindIII 제한 효소로 절단하고, 이를 발현 벡터인 pET-22b(+) 벡터(Novagen, Madison, WI)에 삽입하였다. MTBK 20620 또는 MTBK 24820 유전자가 삽입된 pET-22b(+) 벡터를 이용하여 E. coli BL21을 형질전환 시킨 후, 이를 600nm에서의 흡광도 (OD)가 0.4 내지 0.5가 될 때까지 30℃에서 배양한 후에 1 mM의 이소프로필-D-티오갈락토피라노사이드 (IPTG)를 첨가하고, 30℃에서 8시간 동안 다시 배양하였다. 상기 형질전환 대장균을 초음파 세포파쇄기를 이용하여 파쇄한 후, 4℃에서 30분간 15000rpm으로 원심분리하여 조추출액을 분리한 뒤, 상층액을 회수하고 ALON Metal Affinity Resin (Clontech)을 이용하여 제조사의 방법에 준하여 정제하였다. 최종적으로 정제한 재조합 단백질을 SDS-PAGE를 통해 확인하였다. 그 결과를 도 3 및 도 4에 나타내었다.
Genomic DNA was extracted from Mycobacterium tuberculosis K strain, and the MTBK 20620 or MTBK 24820 gene was cloned. (5'-CATATGGTGACCGACCCCGACAT-3 ') and reverse primer (5'-AAGCTTCCACCAT CTGCGCTTTC-3') were used for MTBK_20620 and forward primer (5'-CATATGGTGACCGACCCCGACT-3 ') for MTBK_24820 and reverse primer '-AAGCTTTCCGAACAAGTTCT-3') and amplified the MTBK 20620 or MTBK 24820 region. The PCR product was digested with NdeI and HindIII restriction enzymes and inserted into a pET-22b (+) vector (Novagen, Madison, WI) as an expression vector. E. coli BL21 was transformed with pET-22b (+) vector into which MTBK 20620 or MTBK 24820 gene was inserted and cultured at 30 ° C until the absorbance (OD) at 600 nm reached 0.4-0.5 Then, 1 mM isopropyl-D-thiogalactopyranoside (IPTG) was added and re-cultured at 30 DEG C for 8 hours. The transformed Escherichia coli was disrupted using an ultrasonic cell crusher, and centrifuged at 15000 rpm for 30 minutes at 4 ° C to separate the crude extract. The supernatant was recovered and recovered by ALON Metal Affinity Resin (Clontech) &Lt; / RTI > Finally, the purified recombinant protein was confirmed by SDS-PAGE. The results are shown in Fig. 3 and Fig.

실시예 2. MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질의 결핵 예방 백신으로서의 효능 검증 실험 Example 2. Efficacy verification test of MTBK 20620 or MTBK 24820 protein as a tuberculosis preventive vaccine

2-1. 실험 디자인2-1. Experimental design

상기 실시예 1에서 분리한 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질이 결핵 예방 백신으로 이용될 수 있는지 그 효능을 검증하기 위하여, 동물 실험을 수행하였다. Animal experiments were conducted to examine the efficacy of the MTBK 20620 or MTBK 24820 protein isolated in Example 1 as a tuberculosis preventive vaccine.

실험 동물로는 생후 5 내지 6주된 특이적 병원체가 없는 암컷 C57BL/6 마우스(Japan SLC, Inc. Shijuoka, Japan)를 이용하였으며, 상기 마우스를 연세대학교 의학 연구 센터 내의 BL-3 바이오해저드 애닐멀 룸의 제한 공간에서 사육하였다. 마우스에게는 멸균된 판매용 마우스 먹이와 물을 임의적으로 제공하였다.Female C57BL / 6 mice (Japan SLC, Inc. Shijuoka, Japan) were used as the experimental animals. The mice were housed at the BL-3 biohazard annulus room of Yonsei University Medical Research Center . Mice were randomly given sterile, commercial mouse food and water.

한편, 결핵균 표준 균주인 마이코박테리움 튜버쿨로시스 H37Rv(Mycobacterium tuberculosis H37Rv)와 한국형 결핵균 K 균주(Mycobacterium tuberculosis K strain)를 7H9-OADC broth에서 15일간 배양하였다. 배양된 균주를 수집한 후, 6 mm 글래스 비드로 부드럽게 볼텍싱하면서 파쇄하였다. 세포 응집물이 가라앉은 다음, 상청액을 수거하고 각각 나누어 -70℃에 보관하였다. 이를 해동한 후, 살아있는 박테리아를 Middlebrook 7H11 아가(Difco, Detroit, MI, USA)에서 단계적 희석 평판 배양하고 카운팅하였다. On the other hand, Mycobacterium tuberculosis H37Rv and Mycobacterium tuberculosis K strain were cultured in 7H9-OADC broth for 15 days. The cultured strains were collected and then disrupted by gentle vortexing with 6 mm glass beads. After the cell aggregates were submerged, the supernatant was collected and stored at -70 ° C. After thawing, live bacteria were counted in stepwise dilution plates in Middlebrook 7H11 agar (Difco, Detroit, MI, USA).

각 마우스에게 결핵균을 접종하기 위해, 상기 박테리아 현탁액을 음파조(sonic bath)에서 가볍게 음파처리하고, pH7.2의 PBS(phosphate buffered saline)로 희석시켜 원하는 수의 박테리아를 수득하였으며, Glas-Col inhalation device (Terre Haute, IN)를 이용하여 마우스당 200-250개의 마이코박테리움 튜버쿨로시스 H37Rv 또는 한국형 결핵균 K 균주가 들어가도록 흡입시켜 감염시켰다. 감염 4주 및 8주후 마우스의 비장 세포와 폐 세포를 분리하여 항원 자극에 의한 IFN-γ 생성능과 memory T 세포의 증가를 확인하였다. 상기 실험 디자인을 도 5에 나타내었다.
To inoculate each mouse with Mycobacterium tuberculosis, the bacterial suspension was sonicated lightly in a sonic bath and diluted with PBS (phosphate buffered saline) at pH 7.2 to obtain the desired number of bacteria, followed by Glas-Col inhalation 200-250 Mycobacterium tuberculosis H37Rv or Korean Mycobacterium tuberculosis K strain was inoculated by using a device (Terre Haute, IN). After 4 and 8 weeks of infection, the splenocytes and lung cells of the mice were separated to confirm IFN-γ production and memory T cell increase by antigen stimulation. The experimental design is shown in Fig.

2-2. IFN-γ 생성능 분석2-2. IFN-γ production assay

IFN-γ의 생성능을 확인하는 것은 결핵균 예방 백신 후보물질을 발굴하는데 효과적인 방법 중 하나로 알려져있다. 따라서 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질이 IFN-γ의 생성능에 미치는 영향을 확인하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다. It is known that confirming the production ability of IFN-y is one of effective methods for identifying candidate substances for prevention of M. tuberculosis. Therefore, in order to confirm the effect of MTBK 20620 or MTBK 24820 protein on IFN-y production, the following experiment was conducted.

상기 실시예 2-1과 같이, 마이코박테리움 튜버쿨로시스 H37Rv 또는 한국형 결핵균 K 균주 감염 4 주 및 8주 후의 마우스의 비장 및 폐 세포를 분리한 후, 생체 외(X-vivo)에서 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질 자극을 통하여 항원 특이적 IFN-γ의 생성능을 ELISA를 통하여 확인하였다. 대조군으로는 초기 결핵 감염 시 유도되는 항원으로 알려져 있으며, 마이코박테리움 튜버쿨로시스 H37Rv 및 한국형 결핵균 K 균주가 모두 가지고 있는 ESAT-6 항원을 대조군으로 사용하였다. 그 결과를 도 6 내지 도 9에 나타내었다. As in Example 2-1, the spleen and lung cells of mice after 4 weeks and 8 weeks of infection with M. tuberculosis H37Rv or K strains of Korean M. tuberculosis were isolated and then inoculated with MTBK 20620 Or by MTBK 24820 protein stimulation, the ability of antigen-specific IFN-? Production was confirmed by ELISA. As a control group, ESAT-6 antigen, which is known to be induced in early tuberculosis infection, is used as a control. Both M. tuberculosis H37Rv and M. tuberculosis K strain are used as a control. The results are shown in FIG. 6 to FIG.

도 6 내지 도 9에 나타낸 바와 같이, 감염 4 주 후 마우스의 비장 및 폐 세포에서 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질 자극을 통해 IFN-γ의 생성능이 증가되는 것을 확인하였으며, 두 단백질 모두 마이코박테리움 튜버쿨로시스 H37Rv 보다 한국형 결핵균 K 균주에서 더 높은 IFN-γ의 생성능을 보임을 확인하였다. 또한, 감염 8 주 후 MTBK 20620 단백질은 비장세포에서 균주 특이적 IFN-γ 생성을 보이지 않았으나, 한국형 결핵균 K 균주 감염 마우스의 폐 세포에서는 그 특이성이 보이는 것을 확인하였다. 또한, MTBK 24820 단백질은 한국형 결핵균 K 균주 감염 8주 후 마우스의 비장 및 폐 세포 모두에서 한국형 결핵균 K 균주 특이적인 IFN-γ가 생성능의 증가를 보임을 확인하였다.
As shown in FIGS. 6 to 9, it was confirmed that IFN-γ production was increased by MTBK 20620 or MTBK 24820 protein stimulation in spleen and lung cells of mice 4 weeks after infection, It was confirmed that the K-strain of Korean Mycobacterium tuberculosis showed higher IFN-gamma production ability than Vaccurosis H37Rv. In addition, the MTBK 20620 protein did not show the strain-specific IFN-γ production in the spleen cells after 8 weeks of infection, but the specificity of the MTBK 20620 protein was confirmed in the lung cells of the K-strain infected with the Korean M. tuberculosis. In addition, MTBK 24820 protein showed an increase in IFN-γ production by K-strain of Korean Mycobacterium tuberculosis in both spleen and lung cells after 8 weeks of infection with Korean M. tuberculosis strain K.

2-3. memory T 세포 분석2-3. memory T cell analysis

결핵균 감염 시 결핵균 항원에 대한 특이적 T 림프구(lymphocytes)가 복제, 분화하여 effector T 세포가 된다. effector T 세포는 면역반응이 사라지게 되면 대부분 사멸하게 되고 일부는 살아남아 오랫동안 지속되는 memory T 세포를 형성하게 된다. 이렇게 유도된 memory T 세포는 빠른 후천적 방어면역의 형성과 T 세포의 기억화를 유지시켜주는 역할을 한다고 알려져 있다. 따라서 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질이 memory T 세포에 미치는 영향을 확인하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.When infected with Mycobacterium tuberculosis, specific T lymphocytes for mycobacterial antigens replicate and differentiate into effector T cells. When the immune response disappears, effector T cells mostly die, and some survive to form long-lasting memory T cells. These memory T cells are known to play a role in maintaining rapid acquired defense immunity and T cell memory. Therefore, in order to confirm the effect of MTBK 20620 or MTBK 24820 protein on memory T cells, the following experiment was conducted.

상기 실시예 2-1과 같이, 상기 실시예 2-1과 같이, 마이코박테리움 튜버쿨로시스 H37Rv 또는 한국형 결핵균 K 균주 감염 4 주 및 8주 후의 마우스의 비장 및 폐 세포를 분리한 후, MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질 자극을 통한 native T cell (CD3+CD4+CD62L+CD44-CD127+), central memory T cell (CD3+CD4+CD62L+CD44+CD127+), effector memory T cell (CD3+CD4+CD62L-CD44+CD127+), effector T cell (CD3+CD4+CD62L-CD44+CD127-)의 유도를 유세포 분석기(FACSverse, BD)를 통하여 분석하였다(도 10). 보다 구체적으로, 비장과 폐 세포에 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질 자극 후, 24시간 뒤 세포를 PBS로 2회 세척하고 원심 분리하였다. 그 다음, 항-CD3-V450, 항-CD4-PerCP-Cy5.5, 항-CD44-PE, 항-CD62L-FITC 및 항-CD127-APC 등의 항체를 처리한 후 30분간 상온에 방치하였다. isotype control은 Rat IgG2b-FITC, Rat IgG2b-PE, Rat IgG2a-APC를 사용하였다. 이를 PBS로 수회 세척한 후 유세포 분석기를 이용하여 분석하였다. 그 결과를 도 11 내지 도 14에 나타내었다. As in Example 2-1, spleen and lung cells of mice were isolated from mice 4 weeks and 8 weeks after infection with M. tuberculosis H37Rv or K strains of Korean M. tuberculosis, and MTBK (CD3 + CD4 + CD44 + CD127 +), central memory T cell (CD3 + CD4 + CD62 + CD44 + CD127 +) and effector memory T cell (CD3 + CD4 + CD62 + CD44 + CD127 +) and effector T cells (CD3 + CD4 + CD62L-CD44 + CD127-) were analyzed by flow cytometry (FACSverse, BD). More specifically, after 24 hours of MTBK 20620 or MTBK 24820 protein stimulation in spleen and lung cells, the cells were washed twice with PBS and centrifuged. Then, antibodies such as anti-CD3-V450, anti-CD4-PerCP-Cy5.5, anti-CD44-PE, anti-CD62L-FITC and anti-CD127-APC were treated and left at room temperature for 30 minutes. Rat IgG2b-FITC, Rat IgG2b-PE and Rat IgG2a-APC were used for isotype control. The cells were washed several times with PBS and analyzed using flow cytometry. The results are shown in Fig. 11 to Fig.

도 11 및 도 12에 나타낸 바와 같이, 한국형 결핵균 K 균주 감염 4 주 후 마우스의 비장 세포에서 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질 자극을 통해 effector/memory T 세포의 수와 비율이 마이코박테리움 튜버쿨로시스 H37Rv 감염군 보다 증가함을 확인하였다. As shown in FIG. 11 and FIG. 12, the number and ratio of effector / memory T cells were measured by MTBK 20620 or MTBK 24820 protein stimulation in mouse spleen cells 4 weeks after infection with Korean M. tuberculosis strain K, Compared to the infected group.

또한, 도 13 및 도 14에 나타낸 바와 같이, 감염 8주 후 마우스의 비장 및 폐 세포에서 MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질 자극을 통해 effector/memory T 세포의 수와 비율이 증가함을 확인하였으며, 특히 MTBK 20620 단백질은 한국형 결핵균 K 균주 감염군에서 마이코박테리움 튜버쿨로시스 H37Rv 감염군 보다 높은 값을 보임을 확인하였다.
In addition, as shown in FIGS. 13 and 14, it was confirmed that the number and ratio of effector / memory T cells were increased by MTBK 20620 or MTBK 24820 protein stimulation in mouse spleen and lung cells 8 weeks after infection, and MTBK 20620 protein was found to be higher than that of M. tuberculosis H37Rv infection group in Korean M. tuberculosis infection group.

이하 본 발명의 조성물의 제제예를 설명하나, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
Hereinafter, formulation examples of the composition of the present invention will be described, but the present invention is not intended to be limited thereto but is specifically described.

제제예 1. 산제의 제조Preparation Example 1. Preparation of powder

MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질 2 g2 g of MTBK 20620 or MTBK 24820 protein

유당 1 gLactose 1 g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
The above components were mixed and packed in airtight bags to prepare powders.

제제예 2. 정제의 제조Formulation Example 2. Preparation of tablets

MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질 100 mg100 mg of MTBK 20620 or MTBK 24820 protein

옥수수전분 100 mgCorn starch 100 mg

유당 100 mgLactose 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mgMagnesium stearate 2 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
After mixing the above components, tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.

제제예 3. 캡슐제의 제조Formulation Example 3. Preparation of capsules

옥수수전분 100 mgCorn starch 100 mg

유당 100 mgLactose 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mgMagnesium stearate 2 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
After mixing the above components, the capsules were filled in gelatin capsules according to the conventional preparation method of capsules.

제제예 4. 주사제의 제조Formulation Example 4. Preparation of injection

MTBK 20620 또는 MTBK 24820 단백질 10 mgMTBK 20620 or MTBK 24820 protein 10 mg

만니톨 180 mg180 mg mannitol

주사용 멸균 증류수 2974 mgSterile sterilized water for injection 2974 mg

Na₂HPO₄2H₂O 26 mgNa ₂ HPO ₄ 2H ₂ O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ml) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
(2 ml) per 1 ampoule in accordance with the usual injection preparation method.

<110> Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University <120> Vaccine composition for tuberculosis containing MTBK 20620 or MTBK 24820 protein <130> 10 <160> 4 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 92 <212> PRT <213> MTBK 20620 <400> 1 Met Thr Asp Pro Asp Ile Ala Thr Val Leu Arg Gln Met Lys Ile Pro 1 5 10 15 Glu Arg Met Thr Ser Ser Gln Ala Leu Arg Asp Phe Leu Leu Ala Asn 20 25 30 Thr Glu Asp Gly Arg Asn Val Pro Thr Gly Pro Glu Gln Val Leu Gln 35 40 45 Leu Asn Gly Leu Leu Leu Leu Ser His Leu Glu Val Ile Asn Ala Leu 50 55 60 Gly Ala Leu Glu Glu Arg Phe Ala Leu Glu His Tyr Gln Lys Phe Gln 65 70 75 80 Gln Glu Leu Lys Lys His Arg Lys Arg Arg Trp Trp 85 90 <210> 2 <211> 279 <212> DNA <213> MTBK 20620 <400> 2 gtgaccgacc ccgacatcgc caccgtcttg cggcagatga agatccccga gcgtatgacc 60 agcagccagg cgctccgcga cttcttgctg gccaacaccg aggacggacg gaacgtgcca 120 actggtcccg aacaagtcct tcagttgaat gggctgctcc tcctttcgca cctggaggtc 180 attaacgccc ttggggcttt ggaagagcga ttcgcgctgg agcattacca gaagttccag 240 caagagctga agaagcaccg aaagcgcaga tggtggtag 279 <210> 3 <211> 622 <212> PRT <213> MTBK 24820 <400> 3 Met Val Asn Phe Ser Val Leu Pro Pro Glu Ile Asn Ser Gly Arg Met 1 5 10 15 Phe Phe Gly Ala Gly Ser Gly Pro Met Leu Ala Ala Ala Ala Ala Trp 20 25 30 Asp Gly Leu Ala Ala Glu Leu Gly Leu Ala Ala Glu Ser Phe Gly Leu 35 40 45 Val Thr Ser Gly Leu Ala Gly Gly Ser Gly Gln Ala Trp Gln Gly Ala 50 55 60 Ala Ala Ala Ala Met Val Val Ala Ala Ala Pro Tyr Ala Gly Trp Leu 65 70 75 80 Ala Ala Ala Ala Ala Arg Ala Gly Gly Ala Ala Val Gln Ala Lys Ala 85 90 95 Val Ala Gly Ala Phe Glu Ala Ala Arg Ala Ala Met Val Asp Pro Val 100 105 110 Val Val Ala Ala Asn Arg Ser Ala Phe Val Gln Leu Val Leu Ser Asn 115 120 125 Val Phe Gly Gln Asn Ala Pro Ala Ile Ala Ala Ala Glu Ala Thr Tyr 130 135 140 Glu Gln Met Trp Ala Ala Asp Val Ala Ala Met Val Gly Tyr His Gly 145 150 155 160 Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Leu Ala Pro Trp Gln Gln Ala Val 165 170 175 Pro Gly Leu Ser Gly Leu Leu Asp Ser Ala Gln Ser Ser Ala Gln Ala 180 185 190 Val Thr Ala Gln Ala Val Gly Ser Thr Val Pro Gly Pro Leu Gln Gly 195 200 205 Ile Asn Phe Gly Phe Gly Asn Ile Gly Ser Leu Asn Leu Gly Ser Gly 210 215 220 Asn Thr Gly Asp Thr Asn Val Gly Ser Gly Asn Ile Gly Asn Thr Asn 225 230 235 240 Leu Gly Gly Gly Asn Ile Gly Ser Phe Asn Leu Gly Ser Gly Asn Gln 245 250 255 Gly Asp Ile Asn Leu Gly Ile Gly Asn Val Gly Asn Leu Asn Leu Gly 260 265 270 Ser Gly Asn Phe Gly Ser Gln Asn Leu Gly Ser Gly Asn Ile Gly Ser 275 280 285 Thr Asn Val Gly Ser Gly Asn Ile Gly Ser Thr Asn Val Gly Ser Gly 290 295 300 Asn Ile Gly Asp Thr Asn Phe Gly Asn Gly Asn Asn Gly Asn Phe Asn 305 310 315 320 Phe Gly Ser Gly Asn Thr Gly Ser Asn Asn Ile Gly Phe Gly Asn Thr 325 330 335 Gly Ser Gly Asn Phe Gly Phe Gly Asn Thr Gly Asn Asn Asn Ile Gly 340 345 350 Ile Gly Leu Thr Gly Asp Gly Gln Ile Gly Ile Gly Gly Leu Asn Ser 355 360 365 Gly Ser Gly Asn Ile Gly Phe Gly Asn Ser Gly Thr Gly Asn Val Gly 370 375 380 Leu Phe Asn Ser Gly Thr Gly Asn Val Gly Phe Gly Asn Ser Gly Thr 385 390 395 400 Ala Asn Thr Gly Phe Gly Asn Ala Gly Asn Val Asn Thr Gly Phe Trp 405 410 415 Asn Gly Gly Ser Thr Asn Thr Gly Leu Ala Asn Ala Gly Ala Gly Asn 420 425 430 Thr Gly Phe Phe Asp Ala Gly Asn Tyr Asn Phe Gly Ser Leu Asn Ala 435 440 445 Gly Asn Ile Asn Ser Ser Phe Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly 450 455 460 Phe Leu Asn Ala Gly Asp Val Asn Ser Gly Val Gly Asn Ala Gly Asp 465 470 475 480 Val Asn Thr Gly Leu Gly Asn Ser Gly Asn Ile Asn Thr Gly Gly Phe 485 490 495 Asn Pro Gly Thr Leu Asn Thr Gly Phe Phe Ser Ala Met Thr Gln Ala 500 505 510 Gly Pro Asn Ser Gly Phe Phe Asn Ala Gly Thr Gly Asn Ser Gly Phe 515 520 525 Gly His Asn Asp Pro Ala Gly Ser Gly Asn Ser Gly Ile Gln Asn Ser 530 535 540 Gly Phe Gly Asn Ser Gly Tyr Val Asn Thr Ser Thr Thr Ser Met Phe 545 550 555 560 Gly Gly Asn Ser Gly Val Leu Asn Thr Gly Tyr Gly Asn Ser Gly Phe 565 570 575 Tyr Asn Ala Ala Val Asn Asn Thr Gly Ile Phe Val Thr Gly Val Met 580 585 590 Ser Ser Gly Phe Phe Asn Phe Gly Thr Gly Asn Ser Gly Leu Leu Val 595 600 605 Ser Gly Asn Gly Leu Ser Gly Phe Phe Lys Asn Leu Phe Gly 610 615 620 <210> 4 <211> 1869 <212> DNA <213> MTBK 24820 <400> 4 gtggtgaatt tttcggtgtt gccgccggag attaattcgg ggcggatgtt ttttggtgcg 60 gggtcggggc cgatgttggc ggcggcggcg gcctgggatg ggttggcggc tgagttgggg 120 ttggcggcgg agtcgtttgg gttggtgacc tcgggtctgg cgggtgggtc gggtcaggcg 180 tggcagggtg cggcggcggc ggcgatggtg gtggcggcgg cgccgtatgc ggggtggttg 240 gctgctgcgg cggcgcgggc tgggggggct gcggttcagg ctaaggcggt ggccggcgcg 300 tttgaggcgg cgcgggcggc catggtggat ccggtggtgg tggcggctaa tcgcagtgcg 360 tttgtgcagt tggtgctgtc gaatgtgttt gggcagaatg cgccggcgat tgccgctgct 420 gaggccacct atgagcagat gtgggctgcc gatgtggcgg cgatggtggg ttatcacggt 480 ggggcatcgg cggcggcggc ggcgttggcg ccatggcagc aggcggtgcc gggcttgtcg 540 ggcttgctag atagtgcaca gtccagcgcg caagcggtga ccgcccaagc agtcggctcc 600 accgtgcctg ggcctctgca gggcatcaac ttcggctttg gcaacatcgg gtccctcaat 660 ttgggcagcg gaaataccgg tgacacgaac gtcggcagcg gcaatatcgg caacaccaac 720 ctaggcggcg gcaatatcgg cagcttcaac ctgggcagcg gtaaccaagg tgacatcaac 780 ctgggcatcg gtaacgttgg caacctcaac ctgggcagcg gaaacttcgg tagccaaaac 840 ctgggtagcg gcaacatcgg cagcaccaac gtgggcagcg gcaacatcgg cagcaccaac 900 gtgggcagcg gcaacatcgg cgacacgaac ttcggtaacg gaaacaacgg caacttcaac 960 tttggtagcg gcaataccgg cagtaacaac atcggcttcg gaaacaccgg cagcgggaat 1020 ttcggtttcg gaaacacggg caacaacaac atcggtatcg ggctcaccgg cgatggtcag 1080 atcggcatcg gcggactgaa ctcgggcagc ggaaacatcg gtttcgggaa ctccggcacc 1140 ggaaacgtcg gtttgttcaa ctccggcacc ggcaacgtag gcttcgggaa ctccggtact 1200 gcgaacactg gattcgggaa cgcgggcaac gtcaacaccg gattttggaa cggcggcagc 1260 acaaacactg gcctcgctaa cgccggcgcc ggcaacacag gctttttcga cgctggcaac 1320 tacaacttcg gcagtcttaa cgccggaaac ataaactcga gttttgggaa ttcgggtgac 1380 ggcaacagtg gtttcctcaa tgctggcgac gtcaactccg gtgtgggcaa tgcgggtgat 1440 gtcaacactg gcttagggaa ctcgggcaac atcaatactg gtgggtttaa tccgggcacg 1500 ctcaacacgg gcttcttcag cgcgatgacc caagctggtc cgaattcggg cttcttcaac 1560 gccggtaccg gtaactctgg tttcgggcac aacgacccgg ctggcagtgg caactcgggc 1620 attcagaact cgggcttcgg caactcgggc tatgtcaata ccagcaccac aagcatgttc 1680 ggcggtaact caggggtgct caacacgggc tacggcaact caggtttcta taacgcggcc 1740 gtcaacaaca ccgggatttt tgtgaccggc gtgatgagtt cgggattttt caattttggg 1800 acgggcaact cgggcctgct ggtcagcggc aatgggcttt cgggtttctt caagaacttg 1860 ttcggatag 1869 <110> Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University <120> Vaccine composition for tuberculosis containing MTBK 20620 or MTBK 24820 protein <130> 10 <160> 4 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 92 <212> PRT <213> MTBK 20620 <400> 1 Met Thr Asp Pro Asp Ile Ala Thr Val Leu Arg Gln Met Lys Ile Pro 1 5 10 15 Glu Arg Met Thr Ser Ser Gln Ala Leu Arg Asp Phe Leu Leu Ala Asn 20 25 30 Thr Glu Asp Gly Arg Asn Val Pro Thr Gly Pro Glu Gln Val Leu Gln 35 40 45 Leu Asn Gly Leu Leu Leu Le Ser Ser Le Leu Glu Val Ile Asn Ala Leu 50 55 60 Gly Ala Leu Glu Glu Arg Phe Ala Leu Glu His Tyr Gln Lys Phe Gln 65 70 75 80 Gln Glu Leu Lys Lys His Arg Lys Arg Arg Trp Trp 85 90 <210> 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Gly Gln Asn Ala Pro Ala Ile Ala Ala Ala Glu Ala Thr Tyr 130 135 140 Glu Gln Met Trp Ala Ala Asp Val Ala Ala Met Val Gly Tyr His Gly 145 150 155 160 Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Lea Ala Pro Trp Gln Gln Ala Val 165 170 175 Pro Gly Leu Ser Gly Leu Leu Asp Ser Ala Gln Ser Ser Ala Gln Ala 180 185 190 Val Thr Ala Gln Ala Val Gly Ser Thr Val Pro Gly Pro Leu Gln Gly 195 200 205 Ile Asn Phe Gly Phe Gly Asn Ile Gly Ser Leu Asn Leu Gly Ser Gly 210 215 220 Asn Thr Gly Asp Thr Asn Val Gly Ser Gly Asn Ile Gly Asn Thr Asn 225 230 235 240 Leu Gly Gly Gly Asn Ile Gly Ser Phe Asn Leu Gly Ser Gly Asn Gln 245 250 255 Gly Asp Ile Asn Leu Gly Ile Gly Asn Val Gly Asn Leu Asn Leu Gly 260 265 270 Ser Gly Asn Phe Gly Ser Gly Asn Leu Gly Ser Gly Asn Ile Gly Ser 275 280 285 Thr Asn Val Gly Ser Gly Asn Ile Gly Ser Thr Asn Val Gly Ser Gly 290 295 300 Asn Ile Gly Asp Thr Asn Phe Gly Asn Gly Asn Asn Gly Asn Phe Asn 305 310 315 320 Phe Gly Ser Gly Asn Thr Gly Ser Asn Asn Ile Gly Phe Gly Asn Thr 325 330 335 Gly Ser Gly Asn Phe Gly Phe Gly Asn Thr Gly Asn Asn Asn Ile Gly 340 345 350 Ile Gly Leu Thr Gly Asp Gly Gly Ile Gly Ile Gly Gly Leu Asn Ser 355 360 365 Gly Ser Gly Asn Ile Gly Phe Gly Asn Ser Gly Thr Gly Asn Val Gly 370 375 380 Leu Phe Asn Ser Gly Thr Gly Asn Val Gly Phe Gly Asn Ser Gly Thr 385 390 395 400 Ala Asn Thr Gly Phe Gly Asn Gly Asn Val Asn Thr Gly Phe Trp 405 410 415 Asn Gly Gly Ser Thr Asn Thr Gly Leu Ala Asn Ala Gly Ala Gly Asn 420 425 430 Thr Gly Phe Phe Asp Ala Gly Asn Tyr Asn Phe Gly Ser Leu Asn Ala 435 440 445 Gly Asn Ile Asn Ser Ser Phe Gly Asn Ser Gly Asp Gly Asn Ser Gly 450 455 460 Phe Leu Asn Ala Gly Asp Val Asn Ser Gly Val Gly Asn Ala Gly Asp 465 470 475 480 Val Asn Thr Gly Leu Gly Asn Ser Gly Asn Ile Asn Thr Gly Gly Phe 485 490 495 Asn Pro Gly Thr Leu Asn Thr Gly Phe Phe Ser Ala Met Thr Gln Ala 500 505 510 Gly Pro Asn Ser Gly Phe Phe Asn Ala Gly Thr Gly Asn Ser Gly Phe 515 520 525 Gly His Asn Asp Pro Ala Gly Ser Gly Asn Ser Gly Ile Gln Asn Ser 530 535 540 Gly Phe Gly Asn Ser Gly Tyr Val Asn Thr Ser Thr Thr Ser Met Phe 545 550 555 560 Gly Gly Asn Ser Gly Val Leu Asn Thr Gly Tyr Gly Asn Ser Gly Phe 565 570 575 Tyr Asn Ala Ala Val Asn Asn Thr Gly Ile Phe Val Thr Gly Val Met 580 585 590 Ser Ser Gly Phe Phe Asn Phe Gly Thr Gly Asn Ser Gly Leu Leu Val 595 600 605 Ser Gly Asn Gly Leu Ser Gly Phe Phe Lys Asn Leu Phe Gly 610 615 620 <210> 4 <211> 1869 <212> DNA <213> MTBK 24820 <400> 4 gtggtgaatt tttcggtgtt gccgccggag attaattcgg ggcggatgtt ttttggtgcg 60 gggtcggggc cgatgttggc ggcggcggcg gcctgggatg ggttggcggc tgagttgggg 120 ttggcggcgg agtcgtttgg gttggtgacc tcgggtctgg cgggtgggtc gggtcaggcg 180 tggcagggtg cggcggcggc ggcgatggtg gtggcggcgg cgccgtatgc ggggtggttg 240 gctgctgcgg cggcgcgggc tgggggggct gcggttcagg ctaaggcggt ggccggcgcg 300 tttgaggcgg cgcgggcggc catggtggat ccggtggtgg tggcggctaa tcgcagtgcg 360 tttgtgcagt tggtgctgtc gaatgtgttt gggcagaatg cgccggcgat tgccgctgct 420 gaggccacct atgagcagat gtgggctgcc gatgtggcgg cgatggtggg ttatcacggt 480 ggggcatcgg cggcggcggc ggcgttggcg ccatggcagc aggcggtgcc gggcttgtcg 540 ggcttgctag atagtgcaca gtccagcgcg caagcggtga ccgcccaagc agtcggctcc 600 accgtgcctg ggcctctgca gggcatcaac ttcggctttg gcaacatcgg gtccctcaat 660 ttgggcagcg gaaataccgg tgacacgaac gtcggcagcg gcaatatcgg caacaccaac 720 ctaggcggcg gcaatatcgg cagcttcaac ctgggcagcg gtaaccaagg tgacatcaac 780 ctgggcatcg gtaacgttgg caacctcaac ctgggcagcg gaaacttcgg tagccaaaac 840 ctgggtagcg gcaacatcgg cagcaccaac gtgggcagcg gcaacatcgg cagcaccaac 900 gtgggcagcg gcaacatcgg cgacacgaac ttcggtaacg gaaacaacgg caacttcaac 960 tttggtagcg gcaataccgg cagtaacaac atcggcttcg gaaacaccgg cagcgggaat 1020 ttcggtttcg gaaacacggg caacaacaac atcggtatcg ggctcaccgg cgatggtcag 1080 atcggcatcg gcggactgaa ctcgggcagc ggaaacatcg gtttcgggaa ctccggcacc 1140 ggaaacgtcg gtttgttcaa ctccggcacc ggcaacgtag gcttcgggaa ctccggtact 1200 gcgaacactg gattcgggaa cgcgggcaac gtcaacaccg gattttggaa cggcggcagc 1260 acaaacactg gcctcgctaa cgccggcgcc ggcaacacag gctttttcga cgctggcaac 1320 tacaacttcg gcagtcttaa cgccggaaac ataaactcga gttttgggaa ttcgggtgac 1380 ggcaacagtg gtttcctcaa tgctggcgac gtcaactccg gtgtgggcaa tgcgggtgat 1440 gtcaacactg gcttagggaa ctcgggcaac atcaatactg gtgggtttaa tccgggcacg 1500 ctcaacacgg gcttcttcag cgcgatgacc caagctggtc cgaattcggg cttcttcaac 1560 gccggtaccg gtaactctgg tttcgggcac aacgacccgg ctggcagtgg caactcgggc 1620 attcagaact cgggcttcgg caactcgggc tatgtcaata ccagcaccac aagcatgttc 1680 ggcggtaact caggggtgct caacacgggc tacggcaact caggtttcta taacgcggcc 1740 gtcaacaaca ccgggatttt tgtgaccggc gtgatgagtt cgggattttt caattttggg 1800 acgggcaact cgggcctgct ggtcagcggc aatgggcttt cgggtttctt caagaacttg 1860 ttcggatag 1869

Claims

A vaccine composition for preventing tuberculosis, comprising MTBK 24820 protein as an active ingredient.

delete

The vaccine composition for preventing tuberculosis according to claim 1, wherein the MTBK 24820 protein is represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3.

5. The vaccine composition for the prevention of tuberculosis according to claim 4, wherein the MTBK 24820 protein is encoded by the nucleotide sequence of SEQ ID NO:

The method according to claim 1, wherein the tuberculosis is selected from the group consisting of tuberculosis, skin tuberculosis, adrenal tuberculosis, renal tuberculosis, epidemic tuberculosis, lymphatic tuberculosis, laryngeal tuberculosis, middle ear tuberculosis, intestinal tuberculosis, multidrug-resistant tuberculosis, pulmonary tuberculosis, Wherein the vaccine composition is at least one selected from the group consisting of tuberculosis, lymphadenitis, pulmonary tuberculosis, breast tuberculosis, and spinal tuberculosis.

The vaccine composition for preventing tuberculosis according to claim 1, wherein the tuberculosis is caused by K strain which is a Korean highly pathogenic tuberculosis.

2. The vaccine composition according to claim 1, wherein the vaccine composition comprises an adjuvant.

2. The vaccine composition according to claim 1, wherein the vaccine composition is a booster vaccine.

A pharmaceutical composition for preventing or treating tuberculosis comprising MTBK 24820 protein as an active ingredient.