KR101533638B1 - Composition for improving milk protein synthesis containing Selenium and Methionine, feed additive comprising the same and method for improving milk protein synthesis using the same - Google Patents
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Abstract
본 발명은 셀레늄 및 메티오닌 성분, 바람직하게는 셀레늄 및 메티오닌 성분을 함유하는 나노솜(nanosom)을 유효성분으로 포함하는 유단백 합성 증진용 조성물이다. 이를 통하여 본 발명은 사료 첨가제로 적용하여 이를 급여하는 가축에서 얻어지는 우유의 유단백을 증가시켜 우유의 품질을 고품질화 할 수 있다. 또한, 본 발명을 적용한 가축의 육류 및 우유에 셀레늄의 함유량을 늘릴 수 있다.The present invention relates to a composition for enhancing the synthesis of milk protein comprising selenium and a methionine component, preferably a nanosome containing selenium and a methionine component as an active ingredient. Accordingly, the present invention can be applied as a feed additive to increase the milk protein of the milk obtained from the livestock fed the milk, thereby improving the milk quality. In addition, the content of selenium can be increased in meat and milk of livestock to which the present invention is applied.
Description
본 발명은 유단백 합성 증진용 조성물 및 그의 제조방법, 이를 이용한 유단백 합성 증진 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for promoting synthesis of a milk protein, a method for producing the same, and a method for enhancing the synthesis of milk protein using the same.
셀레늄은 인체 내에서 셀레늄을 함유하고 있는 효소로서 기능을 한다. 대표적인 셀레늄 함유 효소에는 글루타티온 과산화효소(glutathion peroxidase; GSHPx), 티오레독신(thioredoxin), 셀레늄단백질 P(selenoprotein P) 또는 아이오도트레오닌 디아이오다이나이제(iodothyronine deiodinase) 등이 있다. 글루타티온 과산화효소와 티오레독신은 인체 내에서 발생하는 과산화수소를 분해하여 산화적 스트레스에 의한 세포손상을 억제하는 항산화 영양소로서 기능을 가지고 있으며, 셀레늄단백질 P 역시 항산화 기능을 하는 것으로 알려져 있다.Selenium functions as an enzyme that contains selenium in the human body. Typical selenium-containing enzymes include glutathione peroxidase (GSHPx), thioredoxin, selenoprotein P, or iodothyronine deiodinase. Glutathione peroxidase and thioredoxin function as antioxidant nutrients that inhibit cellular damage caused by oxidative stress by decomposing hydrogen peroxide in the body, and selenium protein P is also known to have antioxidant functions.
또한, 셀레늄은 필수 영양소로 알려져 있다. 셀레늄이 부족한 경우 심장근육질환의 일종인 케산병, 사춘기 직전이나 사춘기에 발생하는 골관절염인 카신베크병(Kashin Beck disease), 근육통, 근육소모, 심근증 등이 발생하며, 만성 결핍시에는 심장 비대와 함께 다양한 심장기능 이상이 나타난다. In addition, selenium is known as an essential nutrient. In the absence of selenium, Kessan disease, a kind of cardiac muscle disease, Kashin Beck disease, osteoarthritis, which occurs just before puberty or puberty, myalgia, muscle exhaustion, and cardiomyopathy occur. Various cardiac dysfunctions appear.
한편, 유단백은 우유에서 비롯한 단백질로서 우유 단백질에는 필수아미노산인 리신과 메티오닌 등과 같이 식물성 단백질에 부족하기 쉬운 아미노산이 많아서 특히 곡물을 많이 먹는 사람들에게는 그 가치가 높은 단백질이다. 종래의 이러한 유단백의 함량을 높이고자 많은 시도는 이루어졌으나, 아직까지 유단백의 함량을 높일 수 있는 효과적인 방법이 없었다.On the other hand, milk protein is a protein derived from milk. Milk protein has many amino acids which are insufficient in vegetable protein, such as lysine and methionine, which are essential amino acids. Although many attempts have been made to increase the content of such milk proteins in the past, there has not yet been an effective method for increasing the content of milk proteins.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 유단백을 높이기 위한 조성물을 제공하는 것이다. 또한, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 우유를 생산하는 동물에게 유단백을 높이는 방법을 제공하려는 것이다.The present invention provides a composition for increasing milk protein. In addition, a problem to be solved by the present invention is to provide a method for raising milk protein in an animal producing milk.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 셀레늄(Selenium) 및 메티오닌(Methionine)성분, 바람직하게는 셀레늄 및 메티오닌 성분을 함유하는 나노솜(nanosom)을 유효성분으로 포함하는 유단백 합성 증진용 사료 조성물을 제공한다.In order to solve the above problems, the present invention provides a dietary composition for enhancing the synthesis of milk protein comprising an active ingredient of selenium and a methionine component, preferably a nanosome containing selenium and a methionine component do.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 셀레늄 및 메티오닌 성분의 중량비는 약 1:1일 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the weight ratio of the selenium and methionine components may be about 1: 1.
본 발명의 또 다른 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 나노솜은 인지질 및 물을 포함하는 혼합물에 의하여 제조될 수 있으며, 상기 인지질은 레시틴, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨 및 디팔미토일 포스파티콜린으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있다. According to another preferred embodiment of the present invention, the nanosome can be prepared by a mixture comprising a phospholipid and water, wherein the phospholipid is selected from the group consisting of lecithin, phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylinositol and dipalmitoylphosphatocholic And the like.
본 발명의 또 다른 일 측면에 따르면, 본 발명은 본 발명에 따르는 조성물을 포함하여 유단백 합성 증진용 사료 첨가제를 제공한다.According to another aspect of the present invention, there is provided a feed additive for enhancing milk protein synthesis, comprising a composition according to the present invention.
본 발명의 또 다른 일 측면에 따르면, 본 발명은 셀레늄(Selenium) 및 메티오닌(Methionine)성분, 바람직하게는 셀레늄 및 메티오닌 성분을 함유하는 나노솜(nanosom)을 유효한 양으로 동물에게 투여하여 동물의 유단백 합성을 증진시키는 방법을 제공한다. According to another aspect of the present invention, the present invention provides a method of treating cancer in an animal by administering to the animal an effective amount of nanosom containing selenium and methionine components, preferably selenium and methionine components, Lt; RTI ID = 0.0 > synthesis. ≪ / RTI >
본 발명은 셀레늄 및 메티오닌 성분, 바람직하게는 셀레늄 및 메티오닌 성분을 함유하는 나노솜을 통하여 유선세포에서 유단백을 합성을 증진시킬 수 있다. 이를 통하여 가축으로부터 얻어지는 우유의 유단백이 증가하여 우유의 품질을 고품질화 할 수 있다. 뿐만 아니라 상기 셀레늄 및 메티오닌 성분의 나노좀화로서 셀레늄의 흡수율을 높여 이를 섭취한 가축의 생리활성 촉진 및 가축을 이용한 육류 또는 우유에 셀레늄 함유량이 늘어나서 고품질의 육류 및 우유를 생산할 수 있게 한다.The present invention can enhance the synthesis of milk proteins in mammary gland cells through nano-somes containing selenium and methionine components, preferably selenium and methionine components. As a result, the milk protein content of milk obtained from livestock is increased, and milk quality can be improved. In addition, by increasing the absorption rate of selenium as a nano-sizing of selenium and methionine components, it is possible to promote the physiological activity of the livestock fed the selenium and increase the selenium content in meat or milk using livestock, thereby producing high quality meat and milk.
본 명세서에 첨부되는 다음의 도면들은 본 발명의 바람직한 실시예를 예시하는 것이며, 전술한 발명의 내용과 함께 본 발명의 기술사상을 더욱 이해시키는 역할을 하는 것이므로, 본 발명은 그러한 도면에 기재된 사항에만 한정되어 해석되어서는 아니 된다.
도 1은 본 발명에 따른 조성물의 세포 생존 능력 실험 결과 그래프이다.
도 2는 본 발명에 따른 조성물의 bCSNAS의 유전자에 대한 발현양 시험 결과 그래프이다.
도 3은 본 발명에 따른 나노솜의 bCSNK의 유전자에 대한 발현양 실험 결과 그래프이다. BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS The accompanying drawings, which are incorporated in and constitute a part of the specification, illustrate exemplary embodiments of the invention and, together with the description of the invention, It should not be construed as limited.
1 is a graph showing the cell viability test result of the composition according to the present invention.
Fig. 2 is a graph showing the test results of the expression amount of bCSNAS gene on the composition of the present invention.
FIG. 3 is a graph showing the results of experiments on the expression level of bCSNK in the nanosome according to the present invention.
이하, 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다. 따라서, 본 명세서에 기재된 실시예에 기재된 구성은 가장 바람직한 일 실시예에 불과할 뿐이고, 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail. The terms and words used in the present specification and claims should not be construed as limited to ordinary or dictionary terms and the inventor may appropriately define the concept of the term in order to best describe its invention It should be construed as meaning and concept consistent with the technical idea of the present invention. Therefore, the constitution described in the embodiments described herein is merely the most preferred embodiment, and does not represent all of the technical ideas of the present invention, so that various equivalents and variations And the like.
본 발명은 셀레늄(Selenium) 및 메티오닌(Methionine) 성분, 바람직하게는 셀레늄 및 메티오닌 성분을 함유하는 나노솜(nanosom)을 유효성분으로 포함하는 유단백 합성 증진용 조성물을 제공한다.The present invention provides a composition for enhancing milk protein synthesis comprising as an active ingredient a nanosom containing selenium and a methionine component, preferably selenium and a methionine component.
본 발명에서 유단백이란 우유 속의 단백질로서 대표적인 유단백으로 카제인을 들 수 있으며, 본 발명에 따른 조성물은 이러한 유단백의 합성을 증진시킬 수 있으며, 이러한 조성물은 사료 첨가제에 적용하여 가축에게 급여될 수 있다. 이러한 본 발명에 따른 사료 첨가제는 우유를 생성하는 가축, 예를 들어 젖소, 염소 및 산양 등에 적용하는 사료 첨가제로서, 본 발명에 따른 사료 첨가제는 이를 적용하는 가축에게서 얻어지는 우유의 유단백의 ?량을 증진시킬 수 있다.In the present invention, milk protein is exemplified by milk protein as milk protein, and the composition according to the present invention can enhance the synthesis of milk protein, and such composition can be applied to feed additives to be fed to livestock. The feed additive according to the present invention is a feed additive to be applied to livestock producing dairy products such as dairy cattle, goat, goat and goat. The feed additive according to the present invention enhances the milk protein content of milk obtained from livestock .
본 발명자들은 셀레늄 및 메티오닌 성분, 바람직하게는 셀레늄 및 메티오닌 성분을 함유하는 나노솜을 통하여 유단백 합성 유전자의 발현양이 증가하는 것을 발견하였으며, 따라서 이를 토대로 상기 유효성분이 유단백의 합성 증진시키는 용도로 사용이 가능하다는 것을 착안하여 본 발명을 완성하였다. 즉, 본 발명은 셀레늄 및 메티오닌 성분, 바람직하게는 셀레늄 및 메티오닌 성분을 함유하는 나노솜을 포함하는 조성물 및 이를 포함하는 사료첨가제를 개발하여, 우유를 생산하는 가축에게 상기 사료첨가제를 적용하여 상기 가축으로부터 얻어지는 우유에서 유단백이 더 증진되도록 하였다.The present inventors have found that the expression amount of a milk protein synthesis gene is increased through a nano-som containing selenium and a methionine component, preferably a selenium and a methionine component, and thus the above-mentioned active ingredient is used for the purpose of promoting the synthesis of milk protein And thus the present invention has been completed. That is, the present invention provides a composition comprising a nano-som containing selenium and a methionine component, preferably a selenium and a methionine component, and a feed additive comprising the same, wherein the feed additive is applied to a livestock producing milk, To increase milk protein in milk.
뿐만 아니라 본 발명에 따른 조성물을 포함하는 사료첨가제가 적용되는 가축의 육류 및 우유에도 역시 셀레늄의 함량이 증가하게 된다. 셀레늄은 필수 영양소로 알려져 있으며, 특히 임산부, 모유 중인 여성에게는 더욱 더 필요한 영양소이다. 이러한 셀레늄의 주요 공급원은 육류 및 우유이며, 본 발명에 따른 조성물 더 바람직하게 본 발명에 따른 사료 첨가물을 투여한 가축에게서 얻는 육류 및 우유에서는 셀레늄의 함량이 증가하여, 이를 섭취하는 인간에게 셀레늄의 섭취를 늘릴 수 있다.In addition, the content of selenium is also increased in livestock meat and milk to which the feed additive including the composition according to the present invention is applied. Selenium is known as an essential nutrient, and is especially needed for pregnant women and breastfeeding women. The main source of such selenium is meat and milk, and the composition according to the present invention more preferably the selenium content in meat and milk obtained from the livestock to which the feed additive according to the present invention is administered is increased and the consumption of selenium .
본 발명에 따른 유단백 합성 증진용 조성물의 유효성분은 셀레늄 및 메티오닌의 혼합물로서, 즉 셀레늄 및 메티오닌을 동시에 첨가하는 것을 특징으로 하며, 두 성분을 함께 사용하였을 때 본 발명의 현저한 효과를 얻을 수 있다. 이 때, 셀레늄은 소디움 셀레나이트(Sodium Selenite)의 형태로 셀레늄이 포함될 수 있다.The active ingredient of the composition for enhancing the synthesis of a milk protein according to the present invention is characterized in that it is a mixture of selenium and methionine, that is, selenium and methionine are added at the same time, and when two components are used together, the remarkable effect of the present invention can be obtained. At this time, selenium may include selenium in the form of sodium selenite.
또한, 셀레늄 및 메티오닌을 유효성분으로 포함하는 것은 다른 아미노산 성분들과의 조합들 보다 질적으로 유리한 유단백 합성의 효과를 나타낼 수 있을 것이라 예상된다.
In addition, it is expected that the inclusion of selenium and methionine as an active ingredient may have the effect of a milk protein synthesis which is more favorable than combinations with other amino acid components.
또한, 셀레늄 및 메티오닌의 혼합물을 나노솜한 것이 나노솜화 하지 않은 것모두 유단백 합성 효과가 있으나, 셀레늄 및 메티오닌의 혼합물을 나노솜화 한 것이 α-Casein의 합성 유전자 중 하나인 bCSNAS의 유전자에 대한 발현양 및 κ-Cacein의 합성 유전자 중 하나인 bCSNK 유전자에 발현양이 현저하게 높아졌다는 점에서 특히, 상기 유효성분을 나노솜화 한 것이 보다 바람직하다고 볼 수 있다. 또한, 상기 유효성분을 나노솜화한 것 세포에 처리하여도, 나노솜화 하지 않은 것을 세포에 처리하였을 때와 비슷한 세포 생존능력을 가질 수 있다.In addition, all of the nano-somatosensory mixtures of selenium and methionine are nano-encapsulated, but the nano-encapsulated mixture of selenium and methionine is expressed in the gene of bCSNAS, one of the synthetic genes of α-Casein And the expression level of bCSNK gene, which is one of the synthetic genes of κ-Cacein, is remarkably increased. In particular, it is more preferable that the active ingredient is nano-encapsulated. In addition, even when the active ingredient is treated with nano-encapsulated cells, it can have a cell viability similar to that obtained when the nano-encapsulated cells are treated.
상기 나노솜에 함유되는 셀레늄 및 메티오닌 성분은 나노솜을 제조하기 위한 혼합물 총 중량 대비 5 내지 20중량%로 사용되는 것이 바람직하며, 5 내지 15중량%로 사용되는 것이 더 바람직하며, 10중량% 내외로 사용되는 것이 더 바람직하다. The selenium and methionine components contained in the nanosome are preferably used in an amount of 5 to 20% by weight, more preferably 5 to 15% by weight, and more preferably 10 to 30% by weight, based on the total weight of the mixture for preparing nanosome Is more preferably used.
상기 나노솜(nanosom)은 인지질, 및 물을 포함하는 혼합물에 의하여 제조된다. 또는 상기 인지질의 특성에 따라 상기 인지질을 용해시키기 위한 물 이외에 다른 용매가 더 첨가될 수도 있으며, 예를 들어 에탄올 등 인지질을 용해시킬 수 있을 모든 종류의 용매가 첨가 가능하며, 이러한 종류에 한정되지 아니하나, 에탄올이 바람직하다.The nanosomes are prepared by a mixture comprising a phospholipid, and water. Or a solvent other than the water for dissolving the phospholipid may be further added according to the properties of the phospholipid. For example, all kinds of solvents capable of dissolving phospholipids such as ethanol may be added, One, ethanol is preferred.
셀레늄 및 메티오닌 성분을 함유한 나노솜은 인지질, 셀레늄 및 메티오닌 성분, 물 등을 포함하는 혼합물에 의하여 제조될 수 있다. 또는 상기 인지질의 특성에 따라 상기 인지질을 용해시키기 위한 물 이외에 다른 용매가 더 첨가될 수도 있으며, 예를 들어 에탄올 등 인지질을 용해시킬 수 있을 모든 종류의 용매가 첨가가 사용 가능하며, 바람직하게 에탄올이 더 첨가될 수 있으며 이러한 종류에 한정되지 아니한다.Nanosomes containing selenium and methionine components can be prepared by a mixture comprising phospholipids, selenium and methionine components, water, and the like. Or a solvent other than water for dissolving the phospholipid may be further added according to the properties of the phospholipid. For example, any kind of solvent capable of dissolving phospholipids such as ethanol may be added, preferably ethanol And it is not limited to this kind.
나노솜은 나노좀, 마이쉘(micelle), 리포솜 등으로 다양하게 표현되는 물질로서 이러한 명칭에 한정하지 아니한다. 양친매성, 예컨대 친수성기와 소수성기를 동시에 갖는 저분자량의 물질들이 이루는 열역학적으로 안정하고 균일한 구조이다. 양친매성 물질은 수성 용액에서 양친매성 물질의 친수성기는 외부로, 소수성기는 내부로 모아져 층을 이루게 되며 구 모양의 회합체인 마이쉘을 이루게 된다. 이러한 마이쉘을 캡슐로 표현될 수도 있으며 명칭은 다양할 수 있다. 또한, 이러한 인지질에 의한 층은 단일층 뿐만 아니라, 이중층(bilayer) 또는 다중층(multilayer)가 될 수도 있으며, 이러한 인지질 층의 수는 한정하지 아니한다. 이러한 양친매성 인지질에 의하여 만들어진 마이쉘 혹은 캡슐은 평균 입자 지름이 나노입자크기, 예를 들어 1 내지 1000nm이다. Nanosome is a substance expressed in various ways by nanosome, micelle, liposome and the like, and is not limited to this name. Is a thermodynamically stable and homogeneous structure made up of amphiphilic, for example, low molecular weight materials having both a hydrophilic group and a hydrophobic group at the same time. The amphipathic substance is an amphipathic substance in the aqueous solution, the hydrophilic group of the amphipathic substance is collected externally, and the hydrophobic group is gathered to form a layer, thereby forming a myoshell as a spherical association. These my shells can be represented as capsules and their names can vary. In addition, the layer by the phospholipid may be a bilayer or a multilayer as well as a single layer, and the number of such phospholipid layers is not limited. Mycels or capsules made with such amphiphilic phospholipids have an average particle size of nanoparticle size, for example from 1 to 1000 nm.
상기 셀레늄 및 메티오닌 성분은 마이쉘의 중심에 혹은 인지질 층과 층 사이에 포함될 수 있다. 예를 들어 셀레늄 및 메티오닌 성분은 공동으로 하나의 물질처럼 마이쉘 중심에 혹은 인지질 층과 층 사이에 포함되어 나노솜화 될 수 있다. 이러한 셀레늄 및 메티오닌 성분의 나노솜화를 통하여 셀레늄의 가축 내 흡수율을 높일 뿐만 아니라, 특히 본 발명에서는 셀레늄 성분의 나노솜화를 통하여 유단백 합성을 더욱 더 증진시킬 수 있다.The selenium and methionine components may be contained in the center of the my shell or between the phospholipid layer and the layer. For example, selenium and methionine components can be naturally encapsulated as a single substance in the center of the my shell or between the phospholipid layer and the layer. In addition to enhancing the uptake rate of selenium into the livestock through nano-souring of the selenium and methionine components, the present invention can further enhance the synthesis of milk protein through the nano-somatization of the selenium component.
본 발명에 있어 마이쉘의 평균 입자 지름이 1 내지 500nm인 마이쉘이 바람직하며, 마이쉘의 평균 입자 지름이 10 내지 400nm인 경우에 더 바람직하다. 또한 마이쉘 평균 입자 지름이 100 내지 300nm인 경우에 더욱 바람직하다. 상기 마이쉘의 평균 입자 크기일 경우에 마이쉘 입자의 안정성 뿐만 아니라, 활성물질의 함입능력 및 생체흡수를 높일 수 있기 때문이다.In the present invention, the microshell having an average particle diameter of 1 to 500 nm is preferable, and the microshell is more preferably an average particle diameter of 10 to 400 nm. It is further preferable that the average shell diameter of the shell is 100 to 300 nm. This is because, in the case of the average particle size of the my shell, not only the stability of the my shell particle but also the ability of the active substance to penetrate and the bio-absorption can be increased.
상기 나노솜에 포함되는 인지질로는 당업계에 공지된 다양한 인지질을 사용할 수 있으며, 예를 들어 난황 레시틴, 대두 레시틴, 수첨 레시틴 등의 레시틴, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨, 디팔미토일 포스파티콜린 등이 1종 이상 사용될 수 있다. 이러한 인지질은 나노솜을 제조하기 위한 혼합물의 총 중량 대비 2 내지 10중량%인 것이 바람직하다.As the phospholipid contained in the nanosome, various phospholipids known in the art can be used. Examples of the phospholipid include phospholipids such as lanolin such as egg yolk lecithin, soybean lecithin and hydrogenated lecithin, phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylinositol, Choline, etc. may be used. The phospholipid is preferably 2 to 10% by weight based on the total weight of the mixture for preparing the nanosome.
본 발명은 또한 나노솜을 제조하기 위한 혼합물에 유화안정보조제로 나노솜의 안정화를 위하여 폴리올을 더 포함할 수 있다. 이러한 폴리올로는 프로필렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 메틸프로판디올, 이소프렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 에리스리톨, 자이리톨, 솔비톨 등이 사용될 수 있으며, 이러한 폴리올로는 글리세린, 부틸렌글라이콜, 프로필렌글라이콜 등이 더욱 바람직하다. 이러한 폴리올은 활성성분을 포함한 나노솜을 제조하기 위한 혼합물 총 중량 대비 2 내지 15 중량%으로 사용되는 것이 바람직하며, 5 내지 10 중량%로 사용되는 것이 더욱 바람직하다.The present invention may further comprise a polyol for stabilizing the nanosome as an emulsion stabilizing adjuvant in a mixture for making the nanosome. As the polyol, propylene glycol, dipropylene glycol, 1,3-butylene glycol, glycerin, methylpropanediol, isoprene glycol, pentylene glycol, erythritol, xylitol, sorbitol and the like can be used. Propylene glycol, and the like are more preferable. Such a polyol is preferably used in an amount of 2 to 15% by weight, more preferably 5 to 10% by weight, based on the total weight of the mixture for preparing the nanosome containing the active ingredient.
본 발명은 또한 나노솜을 제조하기 위한 혼합물에 나노솜의 안정화를 위하여계면활성제를 더 포함할 수 있다. 이러한 계면활성제로는 당업계에 공지된 어떠한 것도 사용할 수 있으며, 예를 들어, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 양성 계면활성제 또는 비이온성 계면활성제가 사용될 수 있고, 바람직하게는 음이온성 계면활성제 또는 비이온성 계면활성제가 사용된다. 음이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알킬아실글루타메이트, 알킬포스페이트, 알킬락틸레이트, 디알킬포스페이트, 알킬락테이트 및 트리알킬포스페이트를 포함한다. 비이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알콕시레이티드알킬에테르, 알콕시레이티드알킬에스테르, 알킬폴리글리코사이드, 폴리글리세릴에스테르 및 슈가에스테르를 포함한다. 보다 바람직하게는, 상기 계면활성제는 디이에이세틸포스페이트이다. 계면활성제의 함량은 활성성분을 포함한 나노솜을 제조하기 위한 물 함유 혼합물 총 중량 대비 0.5 내지 1.5 중량%으로 사용되는 것이 바람직하며, 0.8 내지 1.0 중량%로 사용되는 것이 더욱 바람직하다.The present invention may further comprise a surfactant for stabilizing the nanosome in the mixture for making the nanosome. As such a surfactant, any of those known in the art may be used, and for example, an anionic surfactant, a cationic surfactant, a positive surfactant or a nonionic surfactant may be used, and preferably an anionic surfactant Or a nonionic surfactant is used. Specific examples of anionic surfactants include alkyl acyl glutamates, alkyl phosphates, alkyl lactylates, dialkyl phosphates, alkyl lactates and trialkyl phosphates. Specific examples of nonionic surfactants include alkoxylated alkyl ethers, alkoxylated alkyl esters, alkyl polyglycosides, polyglyceryl esters and sugar esters. More preferably, the surfactant is diacetyl phosphate. The content of the surfactant is preferably 0.5 to 1.5% by weight, more preferably 0.8 to 1.0% by weight, based on the total weight of the water-containing mixture for preparing the nanosome containing the active ingredient.
본 발명의 나노솜은 곧은 통로 또는 굴곡 통로를 가진 필터를 통하여 압출하거나, 호모게나이저를 통하여 균질화함으로써 축소된 균일한 크기분포를 가지도록 할 수 있으며, 제조된 용액을 탈수법 또는 동결 건조시킬 수 있다.
The nanosome of the present invention can be extruded through a filter having a straight passage or a curved passage or homogenized through a homogenizer to have a reduced uniform size distribution and the prepared solution can be dewatered or lyophilized have.
또한, 본 발명은 셀레늄 및 메티오닌 성분, 인지질 및 물을 포함하는 혼합물을 고압 균질기(High Pressure Homogenizer) 등에 통과시켜 본 발명에 따른 활성성분을 함유된 나노솜을 제조하는 방법을 제공한다.
The present invention also provides a method for producing a nanosome containing an active ingredient according to the present invention by passing a mixture containing selenium and a methionine component, a phospholipid and water to a high pressure homogenizer or the like.
또한, 본 발명은 셀레늄 및 메티오닌 성분, 바람직하게는 셀레늄 및 메티오닌 성분을 함유하는 나노솜(nanosom)을 유효성분으로 포함하는 조성물을 이용하여 유단백을 증진시키는 방법을 제공한다. 즉, 본 발명은 셀레늄 및 메티오닌 성분을 유효한 양으로 동물(즉 젖소, 산양 및 염소 등 우유를 생산하는 가축)에게 투여하여 동물에서 얻어진 우유 내의 유단백의 함량을 증가시키는 방법을 제공한다.
The present invention also provides a method for enhancing milk protein using a composition comprising as an active ingredient nanosomes containing selenium and a methionine component, preferably selenium and a methionine component. That is, the present invention provides a method for increasing the content of milk protein in milk obtained by administering an effective amount of selenium and methionine components to an animal (i.e., a livestock producing milk such as cows, goats and chlorine).
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail to facilitate understanding of the present invention. However, the embodiments according to the present invention can be modified into various other forms, and the scope of the present invention should not be construed as being limited to the following embodiments. Embodiments of the invention are provided to more fully describe the present invention to those skilled in the art.
<실시예><Examples>
실시예 1 (이하, 셀레늄-메티오닌, Selenium-Methionine 또는 SM으로 지칭)Example 1 (hereinafter referred to as selenium-methionine, Selenium-Methionine or SM)
셀레늄과 메티오닌의 1:1 혼합물인 셀레늄-메티오닌 성분을 제조하였다.A selenium-methionine component, a 1: 1 mixture of selenium and methionine, was prepared.
실시예 2 (이하, 셀레늄-메티오닌의 나노솜, Selenium-Methionine Nanosome 또는 SMN으로 지칭)Example 2 (hereinafter referred to as a selenium-methionine nanosome, Selenium-Methionine Nanosome or SMN)
레시틴(Pharmachem 사의 Lipoid S) 및 에탄올을 섞어서 혼합하여 녹인 후, 셀레늄과 메티오닌의 1:1 혼합물인 셀레늄-메티오닌을 섞어 준다. 그 이후 물을 넣어서 완전히 녹을때 까지 교반하여 혼합물을 제조하였다. 상기 혼합물에서 각 함량은 활성성분 10중량%, 레시틴 5중량%, 에탄올 10중량% 및 물 75중량%였다. 즉, 성분 구성은 셀레늄 5중량%, 메티오닌 5중량%, 에탄올 10중량%, 레시틴 5중량%, 증류수 75중량%이다. 그 이후 나노화 장비(MICRONOX사의 MN400을 이용)하여 압력을 1000 bar에서 3회 사이클하여 가공하였다.
Lecithin (Lipoid S from Pharmachem) and ethanol are mixed and dissolved, and then selenium-methionine, a 1: 1 mixture of selenium and methionine, is mixed. After that, water was added and stirred until completely dissolved to prepare a mixture. The respective contents in the mixture were 10% by weight of the active ingredient, 5% by weight of lecithin, 10% by weight of ethanol and 75% by weight of water. That is, the components are composed of 5% by weight of selenium, 5% by weight of methionine, 10% by weight of ethanol, 5% by weight of lecithin and 75% by weight of distilled water. After that, the nanotubes were processed by using the MN400 of MICRONOX Co., Ltd., and the pressure was cycled three times at 1000 bar.
<세포 생존 능력 실험> <Experiments on cell viability>
세포 주는 소 유래 유선세포인 MAC-T cell line을 사용하였다. MAC-T 세포의 배지 조성은 페니실린 100unit/㎖, 스트렙토마이신 100ug/㎖, 인슐린 5ug/㎖, 젠타마이신 50 ug/㎖, 하이드로코르티손 1ug/㎖ 및 FBS 10%를 함유한 DMEM 배지를 이용하였다. 본 실험은 세포 생존도(Cell viability)를 측정하는 실험으로 황색 테트라졸리움 염 MTT(yellow tetrazolium salt MTT)는 살아있는 세포에서 물에 녹지 않는 포르마잔 결정(formazan crystal)으로 환원되는데, 이 결정을 나중에 DMSO로 녹여서 생성된 크리스탈의 양을 분광학적인 방법(Spectroscopic method)으로 측정하였다. 결국, 살아있는 세포의 수가 많을수록 이 결정의 생성도 많아지므로 이러한 방법을 통해 세포의 생존도를 쉽게 측정할 수 있다.The cell line used was the MAC-T cell line, a bovine-derived mammary cell. The medium composition of the MAC-T cells was DMEM medium containing 100 units / ml of penicillin, 100 ug / ml of streptomycin, 5 ug / ml of insulin, 50 ug / ml of gentamicin, 1 ug / ml of hydrocortisone and 10% of FBS. This experiment was conducted to measure cell viability. Yellow tetrazolium salt MTT (MTT) was reduced from living cells to water-insoluble formazan crystals. The crystals were dissolved in DMSO And the amount of the generated crystal was measured by a spectroscopic method. As a result, as the number of living cells increases, the number of these crystals increases. Therefore, the viability of cells can be easily measured by this method.
우선, 상기의 MAC-T 세포를 12-웰 플레이트에 2 X 104로 깔아놓앗다. 실시예 1(SM), 실시예 2(SMN)을 각 세포에 18㎍/㎖ 내지 300㎍/㎖를 처리하였다. 그 후 각 웰에 MTT 용액을 10% 볼륨으로 넣고 37℃ CO2 인큐베이터에서 2시간 반에서 3시간 가량 두었다. 그 후, 배지를 제거하고 여기에 DMSO를 500 ul 넣었다. 파이펫팅으로 잘 섞어준 후, 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.First, the MAC-T cells were plated on a 12-well plate at 2 x 10 < 4 & gt ;. Example 1 (SM) and Example 2 (SMN) were treated with 18 占 퐂 / ml to 300 占 퐂 / ml for each cell. MTT solution was then added to each well at a volume of 10% and placed in a 37 ° C CO 2 incubator for 2 to 3 hours. Then, the medium was removed, and 500 μl of DMSO was added thereto. After thoroughly mixing with pipetting, absorbance was measured at 570 nm.
상기에 세포 생존도에 대한 결과는 도 1에 나타내었다. 도 1을 참고하면 나노솜화 하지 아니한 실시예 1과 나노솜화한 실시예 2 모두 세포 생존능력이 80% 이상임을 확인하였다.
The results of the above cell viability are shown in Fig. Referring to FIG. 1, it was confirmed that the cell viability was more than 80% in both Example 1 in which nano-shedding was not performed and Example 2 in which nano-shedding was performed.
<MAC-T세포에서 유단백 합성 관련 mRNA 발현 실험>≪ Experimental Expression of mRNA Expression Related to Milk Protein Synthesis in MAC-T Cells &
MAC-T 세포에 실시예 1(SM) 및 실시예 2(SMN) 100㎍/㎖ 농도로 처리하여 α-Casein의 합성 유전자 중의 하나인 bCSNAS의 유전자에 대한 발현량 및 κ-Casein의 합성 유전자 중의 하나인 bCSNK의 유전자에 대한 발현량을 확인하였다The expression levels of bCSNAS gene and one of the synthetic genes of κ-Casein in one of the synthetic genes of α-Casein were determined by treating MAC-T cells with 100 μg / ml of Example 1 (SM) and Example 2 (SMN) The expression level of one bCSNK gene was confirmed
보다 구체적으로 상기 실시예 1 및 실시예 2 성분을 24시간 반응시킨 후 클로로포름 추출법으로 RNA를 추출한 후, 역전사효소를 이용하여 cDNA를 합성한다. 반응 조건은 25°C에서 10분 반응한 후, 48°C에서 120분 반응시키고, 그 후 95°C에서 5분 반응시켰다.More specifically, the components of Example 1 and Example 2 were reacted for 24 hours, RNA was extracted by chloroform extraction, and cDNA was synthesized using reverse transcriptase. The reaction was carried out at 25 ° C for 10 minutes, then at 48 ° C for 120 minutes, then at 95 ° C for 5 minutes.
그 후 지표에 해당하는 Primer와 SYBR을 이용하여 Real-Time PCR을 수행한다. 반응 조건은 95°C에서 40 cycle과 60°C에서 1분 동안 annealing을 시킨다.Then, real-time PCR is performed using Primer and SYBR corresponding to the indicator. The reaction conditions are annealing at 95 ° C for 40 cycles and at 60 ° C for 1 minute.
사용된 프라이머는 다음과 같다.The primers used were as follows.
유단백 중 α-Casein의 합성 유전자 중의 하나인 bCSNAS의 유전자에 대한 발현량에 대한 결과는 도 2에 나타내었으며, 유단백 중 κ-Casein의 합성 유전자 중의 하나인 bCSNK의 유전자에 대한 발현량은 도 3에 나타내었다. 도 2를 살펴보면, 나노솜화 한 실시예 2 및 나노솜화 아니한 실시예 1 모두 bCSNAS의 유전자에 대하여 높은 발현량을 나타냈으며, 특히 나노솜화 한 실시예 2가 약 40%정도 증가한 것을 알 수 있다. 또한, 도 3을 살펴보면, 나노솜화 한 실시예 2 및 및 나노솜화 하지 않은 실시예 1 모두 bCSNK 유전자에 대하여 높은 발현양을 나타냈으며, 특히 나노솜화 한 실시예 2가 약 52%정도 증가한 것을 알 수 있다.The expression level of bCSNAS, which is one of the synthetic genes of α-casein in milk protein, is shown in FIG. 2. The expression level of bCSNK, which is one of the synthetic genes of κ-casein in milk protein, Respectively. Referring to FIG. 2, both the nano-cocooned Example 2 and the non-nano-cocooned Example 1 exhibited a high expression level for the bCSNAS gene, and the nano-cocooned Example 2 was increased by about 40%. In addition, as shown in FIG. 3, both the nano-encapsulated Example 2 and the non-nano-encapsulated Example 1 exhibited a high expression level on the bCSNK gene, and in particular, the nano-encapsulated Example 2 was increased by about 52% have.
Claims (11)
상기 셀레늄 및 메티오닌 성분을 함유하는 나노솜(nanosom)을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 유단백 합성 증진용 조성물.The method according to claim 1,
Wherein said composition comprises nanosomes containing selenium and a methionine component as an effective ingredient.
상기 셀레늄 및 메티오닌 성분의 중량비는 1:1임을 특징으로 하는 유단백 합성 증진용 조성물.The method according to claim 1,
Wherein the weight ratio of the selenium and methionine components is 1: 1.
상기 나노솜은 인지질 및 물을 포함하는 혼합물에 의하여 제조되는 것을 특징으로 하는 유단백 합성 증진용 조성물.3. The method of claim 2,
Wherein the nanosome is produced by a mixture comprising a phospholipid and water.
상기 인지질은 레시틴, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨 및 디팔미토일 포스파티콜린으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 유단백 합성 증진용 조성물.5. The method of claim 4,
Wherein the phospholipid is at least one selected from the group consisting of lecithin, phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylinositol, and dipalmitoylphosphaticholine.
상기 셀레늄 및 메티오닌 성분을 함유하는 나노솜(nanosom)을 유효한 양으로 동물에게 투여하는 것을 특징으로 하는 동물의 유단백 합성을 증진시키는 방법.8. The method of claim 7,
A method of promoting milk protein synthesis in an animal, comprising administering to the animal an effective amount of nanosomes comprising selenium and a methionine component.
상기 셀레늄 및 메티오닌 성분의 중량비는 1:1임을 특징으로 하는 동물의 유단백 합성을 증진시키는 방법.8. The method of claim 7,
Wherein the weight ratio of selenium and methionine components is 1: 1.
상기 나노솜은 인지질 및 물을 포함하는 혼합물에 의하여 제조되는 것을 특징으로 하는 동물의 유단백 합성을 증진시키는 방법.9. The method of claim 8,
Wherein the nanosome is produced by a mixture comprising a phospholipid and water.
상기 인지질은 레시틴, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜이노시톨 및 디팔미토일 포스파티콜린으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 동물의 유단백 합성을 증진시키는 방법.11. The method of claim 10,
Wherein the phospholipid is at least one selected from the group consisting of lecithin, phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylinositol, and dipalmitoylphosphaticholine.
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