KR101530402B1 - 급성 인간 골수성 백혈병 세포를 죽이는 트롬보포이에틴 수용체 효능제 (ｔｐｏｒａ) - Google Patents

급성 인간 골수성 백혈병 세포를 죽이는 트롬보포이에틴 수용체 효능제 (ｔｐｏｒａ) Download PDF

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코니 엘. 에릭슨-밀러
안나 콜라타
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더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아
글락소스미스클라인 엘엘씨
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Abstract

본 발명은 트롬보포이에틴 수용체 효능제 (TpoRA), 그의 유도체 또는 변이체를 AML에 걸린 개체에게 투여함으로써, 인간 골수성 백혈병 세포 성장 및 증식을 억제하는 방법을 제공한다.

Description

급성 인간 골수성 백혈병 세포를 죽이는 트롬보포이에틴 수용체 효능제 (ＴＰＯＲＡ) {THROMBOPOIETIN RECEPTOR AGONIST (TPORA) KILLS ACUTE HUMAN MYELOID LEUKEMIA CELLS}
미국에서 약 11,920건의 새로운 급성 골수원성 백혈병 (AML; 또한 급성 골수구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 골수아구성 백혈병, 급성 과립구성 백혈병 또는 급성 비림프구성 백혈병으로도 알려짐)이 2005년도에 진단되었다 (Surveillance, Epidemiology and End Results [SEER] Program, 2005). 성인에 침범하는 가장 흔한 급성 백혈병인 AML은 어떠한 연령에서도 발생할 수 있지만, 65세 이상의 성인이 더 젊은 사람들보다 더 많이 발병하는 것 같다. 또한, AML은 소아 급성 백혈병 사례의 약 15 내지 20%를 차지한다.
AML에서 악성 세포는 골수모세포이다. 정상 조혈에서, 골수모세포는 골수 백혈구의 미성숙 전구세포이다. 그러나, AML에서, 단일 골수모세포는 세포를 미성숙 상태에서 "동결시키고" 분화를 방지하는 유전자 변화를 축적시킨다. 그러한 돌연변이는 그 단독으로는 백혈병을 유발하지 않지만; "분화 정지"가 증식을 제어하는 유전자를 파괴하는 다른 돌연변이와 조합될 때, 세포 (백혈병 모세포)의 미성숙 클론이 제어되지 않은 상태로 성장하고, 이는 정상 혈액 세포로서 기능을 하지 못하고 또한 정상 골수 세포의 생산을 차단한다. 이는 혈액에서 적혈구 (빈혈), 혈소판 (혈소판감소증), 및 정상 백혈구, 특히 호중구 (호중구감소증)의 결핍을 일으켜, AML의 임상 징후를 일으킨다.
거의 모든 AML 환자는 진단 후 가능한 한 빠른 치료를 필요로 한다. 대부분의 환자에서, 관해를 달성하기 위해 집중적인 화학요법 (관해유도 요법), (그 동안 적어도 2가지의 상이한 화학요법제가 투여된다)이 요구된다.
관해는 혈액 세포 계수가 점차 정상에 접근하고 백혈병 세포가 혈액 또는 골수에서 확인될 수 없을 때 달성된다. 그러나, 관해 상태에서, 잔류 백혈병 세포가 여전히 존재하지만 불활성이고; 정상 혈액 세포 발달을 저해하지 않지만 백혈병을 재성장시키고 그의 재발을 일으킬 가능성이 있다. 이러한 이유로, 자가 줄기 세포 주입 또는 동종 줄기 세포 이식과 함께 또는 이를 실시하지 않으면서 추가의 화학요법이 대체로 권고된다.
혈액에서 또는 골수 검사에 의해 검출될 수 없는 잔류 백혈병 세포가 관해 동안 신체에 남아있다. 따라서, AML의 최적 치료에서는 관해가 달성된 후 대체로 추가의 집중적인 요법을 필요로 한다 (공고 요법 (consolidation therapy)). 심지어 공고 요법의 집중적인 화학요법 후에도, 일부 환자는 골수 내에 잔류 백혈병 세포를 갖고 (불응성 백혈병), 또 다른 환자는 관해를 달성한 후 "재발"을 겪는다.
AML의 환자를 치료할 때 극복할 가장 큰 어려움 중 하나는 일부 환자의 백혈병 세포가 화학요법 약물에 무감수성이라는 점이다. 이 때문에 관해를 유도하거나 유지하는 치료가 실패할 수 있다.
백혈병 세포에서 화학요법의 효과로부터 그를 보호하는 약물 내성의 3가지 주요 메카니즘이 존재한다. 첫 번째로, 특이적 유전자가, 원시 세포를 독소로부터 보호하도록 진화된 단백질 (예를 들어, P-당단백질 (다제-약물 내성 단백질), 폐 내성 단백질, 및 유방암 내성 단백질)을 코딩한다. 이들 단백질 및 다른 단백질은 급성 백혈병 세포에서 화학요법의 유효성을 감소시킬 수 있다. 두 번째로, 화학요법은 강조되고 가속화된 프로그래밍된 세포 사멸을 유도함으로써 세포자멸 유전자 경로를 이용한다. 그러나, 일부 백혈병에서, 이들 유전자는 하향-조절되거나 심지어 차단되고, 문자그대로 화학요법의 결과로서의 세포 사멸을 차단한다. 세 번째로, 환자의 백혈병의 재발을 일으키는 특이적 유전자 패밀리가 화학요법-내성 세포에서 활성일 수 있다. 지금까지, 하나의 또는 다른 이들 경로를 차단하는 성공적인 새로운 임상 방법이 발견되지 않았다.
관해 상태로 되거나, 수년 동안 관해 상태로 머물거나, 사실상 치유된 AML 환자의 비율은 지난 30년에 걸쳐 증가하고 있지만, AML은 치유하기 가장 어려운 혈액암 중 하나로 남아있다. 이러한 어려움 때문에, AML을 치료하기 위한 새로운 요법이 필수적이다. 따라서, 이러한 파괴적인 질병을 치료하는 새로운 방법이 당업계에서 오랫동안 긴급하게 요구되고 있다. 본 발명은 상기 필요를 충족시킨다.
본 발명의 한 실시태양은 트롬보포이에틴 수용체 효능제 (TpoRA), 그의 유도체 또는 변이체를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 급성 골수성 백혈병으로 진단된 인간의 치료 방법을 포함하고, 여기서 조성물은 인간에서 백혈병 세포 성장 및 증식을 억제한다. 한 측면에서, 조성물은 화학요법제의 투여 전에, 투여 동안 또는 투여 후에 인간에게 투여된다. 다른 측면에서, TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체는 TroRA, 그의 유도체 또는 변이체 및 제약상 담체를 포함하는 제약 조성물으로서 인간에게 투여된다. 다른 측면에서, 제약 조성물은 인간에게 비경구 투여된다. 또다른 측면에서, 트롬보포이에틴 수용체 효능제는 화합물 A이다.
본 발명의 다른 실시태양은 트롬보포이에틴 수용체 효능제 (TpoRA), 그의 유도체 또는 변이체를 포함하는 조성물을 인간에게 투여하는 것을 포함하는, 골수이형성 증후군으로 진단된 인간의 치료 방법을 포함하고, 여기서 조성물은 인간에서 백혈병 세포 성장 및 증식을 억제한다. 한 측면에서, 조성물은 화학요법제의 투여 전에, 투여 동안 또는 투여 후에 인간에게 투여된다. 다른 측면에서, TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체는 TroRA, 그의 유도체 또는 변이체 및 제약상 담체를 포함하는 제약 조성물로서 인간에게 투여된다. 다른 측면에서, 제약 조성물은 상기 인간에게 비경구 투여된다. 또다른 측면에서, 트롬보포이에틴 수용체 효능제는 화합물 A이다.
본 발명을 예시하기 위한 목적에서, 도면에서 본 발명의 특정 실시태양을 제시한다. 그러나, 본 발명은 도면에 제시된 실시태양의 정확한 배열 및 수단으로 제한되지 않는다.
도 1 (도 1A 내지 도 1C 포함)은 거대핵세포 (megakaryocyte) 콜로니 형성 분석을 보여주는 일련의 차트 (chart)이다. 도 1A는 트롬보포이에틴 (TPO)의 존재 하에 섬유소 응괴 (fibrin clot) 내에서 성장시킨 인간 CD34+ 세포를 보여주는 영상이다. 도 1B는 화합물 A의 존재 하에 섬유소 응괴 내에서 성장시킨 인간 CD34+ 세포를 보여주는 영상이다. 도 1C는 TPO 또는 화합물 A를 사용한 자극 후에 CD34+ 세포로부터 형성된 콜로니의 수를 보여주는 그래프이다.
도 2 (도 2A 내지 도 2C 포함)는 TPO 또는 화합물 A에 노출된 인간 일차 백혈병 세포의 증식 연구를 나타내는 성장 곡선을 보여주는 일련의 차트이다. 도 2A는 2명의 급성 골수성 백혈병 (AML) 환자로부터 얻은 일차 세포에 대한 TPO, 화합물 A (SB), 대조군 (CTRL) 및 DMSO의 효과를 보여주는 한 쌍의 차트이다. 세포의 총수를 Y-축에 도시하고, 다양한 시점 (제0, 3, 및 4일)을 X-축에 도시한다. 도 2B는 2명의 급성 림프성 백혈병 (ALL) 환자로부터 얻은 일차 세포에 대한 TPO, 화합물 A (SB), 대조군 (CTRL) 및 DMSO의 효과를 보여주는 한 쌍의 차트이다. 세포의 총수를 Y-축에 도시하고, 다양한 시점 (제0, 1, 3, 및 5일)을 X-축에 도시한다. 도 2C는 2명의 만성 골수성 백혈병 (CML) 환자로부터 얻은 일차 세포에 대한 TPO, 화합물 A (SB), 대조군 (CTRL) 및 DMSO의 효과를 보여주는 한 쌍의 차트이다. 세포의 총수를 Y-축에 도시하고, 다양한 시점 (제0, 3, 및 6일)을 X-축에 도시한다.
도 3 (도 3A 내지 도 3F 포함)은 AML 환자로부터 얻은 일차 백혈병 세포의 성장에 대한 대조군, DMSO, 2.8 μM TPO, 5 μM 화합물 A (SB), 2.5 μM 화합물 A (SB), 및 1 μM 화합물 (SB)의 효과를 보여주는 일련의 차트이다. 도 3A는 환자 AML 857로부터 얻은 일차 백혈병 세포의 세포 성장에 대한 1, 2.5, 및 5 μM의 화합물 A (SB) 및 2.8 μM TPO의 효과를 보여주는 차트이다. 도 3B는 환자 AML 794로부터 얻은 일차 백혈병 세포의 세포 성장에 대한 1, 2.5, 및 5 μM의 화합물 A (SB) 및 2.8 μM TPO의 효과를 보여주는 차트이다. 도 3C는 환자 AML 342로부터 얻은 일차 백혈병 세포의 세포 성장에 대한 1, 2.5, 및 5 μM의 화합물 A (SB) 및 2.8 μM TPO의 효과를 보여주는 차트이다. 도 3D는 환자 AML 332로부터 얻은 일차 백혈병 세포의 세포 성장에 대한 1, 2.5, 및 5 μM의 화합물 A (SB) 및 2.8 μM TPO의 효과를 보여주는 차트이다. 도 3E는 환자 AML 774로부터 얻은 일차 백혈병 세포의 세포 성장에 대한 1, 2.5, 및 5 μM의 화합물 A (SB) 및 2.8 μM TPO의 효과를 보여주는 차트이다. 도 3F는 환자 AML 759로부터 얻은 일차 백혈병 세포의 세포 성장에 대한 1, 2.5, 및 5 μM의 화합물 A (SB) 및 2.8 μM TPO의 효과를 보여주는 차트이다. 모든 실험에서 세포를 제3, 5 및 8일에 계수하였다.
도 4 (도 4A 및 도 4B 포함)는 TPO 신호전달에 관여되는 키나제의 인산화의 웨스턴 블롯 (Western blot) 분석을 보여주는 일련의 영상이다. 도 4A는 UT&-TPO 세포의 웨스턴 블롯을 보여주는 영상이다. 도 4B는 인간 전구 세포 CD34+의 웨스턴 블롯을 보여주는 영상이다. 화합물 A는 SB로서 지정된다.
도 5 (도 5A 내지 도 5F 포함)는 증식 분석의 결과를 보여주는 일련의 차트이다. 도 5A는 AML 환자 857로부터 얻은 일차 백혈병 세포에 대해 수행한 증식 분석의 결과를 보여주는 차트이다. 도 5B는 AML 환자 794로부터 얻은 일차 백혈병 세포에 대해 수행한 증식 분석의 결과를 보여주는 차트이다. 도 5C는 AML 환자 342로부터 얻은 일차 백혈병 세포에 대해 수행한 증식 분석의 결과를 보여주는 차트이다. 도 5D는 AML 환자 332로부터 얻은 일차 백혈병 세포에 대해 수행한 증식 분석의 결과를 보여주는 차트이다. 도 5E는 AML 환자 774로부터 얻은 일차 백혈병 세포에 대해 수행한 증식 분석의 결과를 보여주는 차트이다. 도 5F는 AML 환자 759로부터 얻은 일차 백혈병 세포에 대해 수행한 증식 분석의 결과를 보여주는 차트이다. 화합물 A는 SB로서 지정된다.
도 6은 화합물 A 및 rhTPO 모두에 노출된 N2C-TPO 세포에서 ERK1/2, p70S6, S6 및 STAT5 키나제 인산화의 웨스턴 블롯 분석을 보여주는 영상이다. 화합물 A는 SB로서 지정된다.
도 7은 상이한 시점에 TPO 대 화합물 A로 자극된 N2C-TPO 세포에서 모든 시험된 유전자의 발현의 차이를 예시하는 열 지도 (heat map)를 보여주는 영상이다. 화합물 A로 자극된 세포에서 유전자 발현 변화는 보다 연한 색상으로 표시한다.
도 8 (도 8a 및 도 8b 포함)은 TPO 대 화합물 A 자극에 반응한 유전자 조절을 보여주는 열 지도를 보여주는 일련의 영상이다. 도 8a는 TPO 대 화합물 A를 사용한 자극에 의해 상향-조절되는, N2C-TPO 세포에서 세포자멸 경로에 관여하는 유전자를 예시하는 열 지도를 보여주는 영상이다. 도 8b는 TPO 대 화합물 A를 사용한 자극에 의해 하향-조절되는, N2C-TPO 세포에서 세포자멸 경로에 관여하는 유전자를 예시하는 열 지도를 보여주는 영상이다. 화합물 A로 자극된 세포에서 유전자 발현 변화는 보다 연한 색상으로 표시한다.
도 9 (도 9a 및 도 9b 포함)는 TPO 대 화합물 A로 자극된 N2C-TPO 세포에서 전사 인자의 조절을 보여주는 열 지도를 보여주는 일련의 영상이다. 도 9a는 TPO 대 화합물 A로 자극된 N2C-TPO 세포에서 상향-조절되는 전사 인자를 예시하는 열 지도를 보여주는 영상이다. 도 9b는 TPO 대 화합물 A로 자극된 N2C-TPO 세포에서 하향-조절되는 전사 인자를 예시하는 열 지도를 보여주는 영상이다. 화합물 A로 자극된 세포에서 유전자 발현 변화는 보다 연한 색상으로 표시한다.
도 10은 AML 또는 ALL로 진단된 인간 환자로부터 단리된 일차 세포에 대해 수행한 세포자멸 분석의 결과를 보여주는 일련의 영상이다. 3개의 패널의 상부 세트는 AML 환자 774로부터 얻은 데이타를 보여주고, 여기서 단리된 일차 세포는 대조군 (좌측 패널), rhTpo + DMSO (중간 패널) 또는 SB559457 (우측 패널)에 노출한 후 세포자멸에 대해 분석한다. 3개의 패널의 하부 세트는 ALL 환자 710으로부터 얻은 데이타를 보여주고, 여기서 일차 세포는 대조군 (좌측 패널), rhTpo + DMSO (중간 패널) 또는 SB559457 (우측 패널)에 노출한 후 세포자멸에 대해 분석한다. 축에는 프로피듐 요오다이드 (PI; y-축) 또는 아넥신 V (x-축)로 염색된 세포의 수를 표시하였다.
도 11은 6시간 동안 rhTpo (2.86 μM) 또는 SB559457 (5 μM)로 자극된 일차 AML 세포에서 GAPDH (상부 패널) 및 Redd1 (하부 패널) mRNA 수준의 정량적 RT-PCR 분석 결과를 비교하는 일련의 그래프이다.
도 12는 1, 3 또는 5시간 동안 rhTpo 또는 SB559457에 노출시킨 후에 일차 AML 세포의 3가지 상이한 샘플 (AML 774, AML 794 및 AML 971)에서 p70S 및 S6 키나제 인산화의 웨스턴 블롯 분석의 결과를 보여주는 일련의 영상이다. 대조군 = 비자극된 세포; TPO = 2.86 μM rhTpo + 0.05% DMSO로 자극된 세포; SB = 5 μM SB559457로 자극된 세포.
본 발명은 트롬보포이에틴 수용체 효능제 (TpoRA), 그의 유도체 또는 변이체를 AML에 걸린 개체에게 투여함으로써, 인간 골수성 백혈병 세포의 성장 및 증식을 억제하는 방법을 제공한다. 한 실시태양에서, TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체는 AML에 걸린 개체에게 투여된다. 본 발명의 다른 실시태양에서, TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체는 화학요법 계획의 일부로서 AML에 걸린 개체에게 투여된다.
정의:
달리 규정하지 않으면, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 학술 용어는 본 발명이 속하는 분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 가진다. 본원에서 설명되는 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 본 발명의 시험의 실시에서 사용될 수 있지만, 바람직한 물질 및 방법을 본원에서 설명한다. 본 발명을 실시하고 특허 청구하는데 있어서, 다음 용어를 사용할 것이다.
본원에서 사용되는 용어는 단지 특정 실시태양을 설명하기 위한 것이고 그로 제한하고자 의도하지 않음을 또한 이해해야 한다.
부정관사 ("a" 및 "an")는 관사의 하나 또는 하나 초과 (즉, 적어도 하나)의 문법적 대상을 나타내도록 본원에서 사용된다. 예로서, "요소"는 하나의 요소 또는 하나 초과의 요소를 의미한다.
"아미노산"은 본원에서 사용될 때 천연 및 합성 아미노산 모두, 및 D 및 L 아미노산 모두를 포함하는 것을 의미한다. "표준 아미노산"은 천연 발생의 펩티드에서 일반적으로 발견되는 임의의 20개의 L-아미노산을 의미한다. "비-표준 아미노산 잔기"는 합성 방식으로 제조되든지 천연 공급원으로부터 유래하든지 상관없이, 표준 아미노산 이외의 임의의 아미노산을 의미한다. 본원에서 사용될 때, "합성 아미노산"은 또한 염, 아미노산 유도체 (예를 들어, 아미드), 및 치환을 포함하지만 이로 제한되지 않는 화학적으로 변형된 아미노산을 포함한다. 펩티드 내에, 특히 카르복시- 또는 아미노-말단에 함유된 아미노산은 메틸화, 아미드화, 아세틸화, 또는 다른 화학기로의 치환에 의해 변형될 수 있고, 이는 펩티드의 활성에 불리하게 영향을 미치지 않으면서 펩티드의 순환 반감기를 변화시킬 수 있다. 추가로, 디술피드 연결기가 펩티드 내에 존재하거나 부재할 수 있다.
"약"은 양, 지속 시간 등과 같은 측정가능한 값을 언급할 때 본원에서 사용될 때, 명시된 값으로부터 ±20% 또는 ±10%, 보다 바람직하게는 ±5%, 더욱 더 바람직하게는 ±1%, 훨씬 더 바람직하게는 ±0.1%의 편차를 포함하는 것을 의미하고, 그러한 편차는 개시된 방법을 수행하기 위해 적절하다.
용어 "효능제" 및 "효능성"은 본원에서 사용될 때, 직접적으로 또는 간접적으로 생물학적 활성 또는 수용체 활성화를 실질적으로 유도하거나 촉진하거나 향상시킬 수 있는 분자를 나타내거나 설명한다.
용어 "화학요법"은 본원에서 사용될 때, 화학요법제가 암으로 진단된 개체에게 투여되는 치료 과정을 나타낸다. 화학요법제는 암에 걸린 개체에게 상기 암을 치료하기 위해 유리하게 투여될 수 있는 약물과 같은 물질을 포함한다. 화학요법제는 종종 세포, 예를 들어 종양 세포에서 세포자멸을 유도하는 세포자멸 유도제를 포함한다. 암 세포를 포함한 세포는 세포자멸로서도 알려진 프로그래밍된 세포 사멸을 겪도록 유도될 수 있다. 세포자멸은 DNA가 고도로 단편화되는, 비교적 작은 단편으로의 세포의 선택적인 프로그래밍된 파괴를 특징으로 한다 (즉, 생성되는 단편은 대개 약 200개 이하의 염기를 갖는다). 세포자멸 동안, 세포는 수축하고, 뉴클레오좀간 DNA 절단이 일어나, DNA의 단편화를 일으킨다.
용어 "유도체"는 다른 것으로부터 유도된 화합물, 구체적으로 본 발명에서 설명되는 화합물 A의 생물활성을 보유하는, 본 발명의 화합물 A의 임의의 변형을 포함하는 화합물을 규정하도록 사용된다.
용어 "DNA"는 본원에서 사용될 때 데옥시리보핵산으로서 정의된다.
"유효량" 또는 "치료 유효량"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 특정 생물학적 결과를 달성하기 위해 효과적인 본원에서 설명되는 화합물, 제형, 물질, 또는 조성물의 양을 나타낸다. 그러한 결과는 당업계에 적합한 임의의 수단에 의해 결정할 때 바이러스 감염의 억제를 포함할 수 있고 이로 제한되지 않는다.
"단리된"은 천연 상태로부터 변경되거나 제거된 것을 의미하다. 예를 들어, 살아있는 동물 내에 자연히 존재하는 핵산 또는 펩티드는 "단리되지" 않은 것이지만, 천연 상태의 공존하는 물질로부터 부분적으로 또는 완전히 분리된 동일한 핵산 또는 펩티드는 "단리된" 것이다. 단리된 핵산 또는 단백질은 실질적으로 정제된 형태로 존재할 수 있거나, 예를 들어, 숙주 세포와 같은 비-천연 환경 내에 존재할 수 있다.
어구 "백혈구감소증"은 본원에서 사용될 때, 포유동물 내에서 혈액 백혈구의 농도의 정상 미만으로의 감소를 나타낸다.
어구 "돌연변이"는 본원에서 사용될 때, 유전자를 나타내는 DNA 스트레치 (stretch)의 일부의 변화로 인해 생성되는 유전자의 변경을 나타낸다.
"생식세포 돌연변이"는 난자 또는 정자 내에 존재하고, 모체(들)로부터 자손체로 전달될 수 있다.
"체세포 돌연변이"는 특정한 조직 세포에서 발생하고, 종양으로의 특정한 조직 세포의 성장을 일으킬 수 있다. 대부분의 암은 체세포 돌연변이 후에 시작된다. 백혈병, 림프종 또는 골수종에서, 원시 골수 또는 림프절 세포는 종양의 형성을 일으키는 체세포 돌연변이(들)을 겪는다. 이들 경우에, 종양은 검출될 때 대체로 널리 분포하고; 대체로 많은 뼈의 골수 또는 몇몇 부위의 림프절을 관련시킨다.
어구 "종양유전자"는 본원에서 사용될 때, 암의 원인인 돌연변이된 유전자를 나타낸다. 급성 골수원성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 림프종의 몇몇 아형, 및 거의 모든 사례의 만성 골수원성 백혈병은 일관된 돌연변이된 유전자 (종양유전자)를 갖는다.
본원에서 사용될 때, 용어 "펩티드", "폴리펩티드" 및 "단백질"은 상호교환가능하게 사용되고, 펩티드 결합에 의해 공유 연결된 아미노산 잔기로 구성된 화합물을 나타낸다. 단백질 또는 펩티드는 적어도 2개의 아미노산을 함유해야 하고, 단백질 또는 펩티드의 서열을 구성할 수 있는 아미노산의 최대 수에는 제한이 없다. 폴리펩티드는 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 2개 이상의 아미노산을 포함하는 임의의 펩티드 또는 단백질을 포함한다. 본원에서 사용될 때, 상기 용어는 짧은 사슬 (당업계에서, 예를 들어 펩티드, 올리고펩티드 및 올리고머로도 일반적으로 언급된다), 및 보다 긴 사슬 (당업계에서 단백질로서 일반적으로 언급되고, 그의 많은 종류가 존재한다)을 모두 나타낸다. "폴리펩티드"는 예를 들어, 특히 생물학적 활성 단편, 실질적으로 상동성 폴리펩티드, 올리고펩티드, 동종이량체, 이종이량체, 폴리펩티드의 변이체, 변형된 폴리펩티드, 유도체, 유사체, 융합 단백질을 포함한다. 폴리펩티드는 천연 펩티드, 재조합 펩티드, 합성 펩티드, 또는 그의 조합을 포함한다.
"제약상 허용되는"은 약물학/독성학 관점으로부터 환자에게, 및 조성물, 제형, 안정성, 환자 허용성 및 생체이용률에 관하여 물리/화학적 관점에서 제약 화학자에게 허용되는 특성 및/또는 물질을 나타낸다. "제약상 허용되는 담체"는 활성 성분(들)의 생물학적 활성의 유효성을 저해하지 않고 투여되는 숙주에게 독성이 없는 매질을 나타낸다.
어구 "중합효소 연쇄 반응 (PCR)"은 본원에서 사용될 때, 특정한 종류의 DNA 또는 RNA를 연구하고 결정할 수 있도록 미량의 DNA 또는 RNA를 팽창시키는 기술을 나타낸다. 상기 기술은 현미경을 사용하여 보기에는 너무 적은 매우 낮은 농도의 잔류 백혈병 또는 림프종 세포를 검출하는데 유용하다. 상기 기술은 5십만 내지 1백만 개의 비백혈병 세포들 사이에서 1개의 백혈병 세포의 존재를 검출할 수 있다. PCR에서는 잔류 비정상 세포를 확인하는데 사용하기 위하여 백혈병 세포 또는 림프종 세포 내에서 종양유전자와 같은 특정한 DNA (또는 RNA) 비정상 또는 마커를 필요로 한다.
용어 "폴리뉴클레오티드"는 본원에서 사용될 때 뉴클레오티드의 사슬로서 정의된다. 또한, 핵산은 뉴클레오티드의 중합체이다. 따라서, 본원에서 사용될 때 용어 핵산 및 폴리뉴클레오티드는 상호교환가능하다. 당업자는 핵산이 폴리뉴클레오티드이고, 이는 가수분해되어 단량체성 "뉴클레오티드"로 될 수 있음을 일반적으로 알고 있다. 단량체성 뉴클레오티드는 가수분해되어 뉴클레오시드로 될 수 있다. 본원에서 사용될 때, 폴리뉴클레오티드는 비제한적으로 재조합 수단을 포함하는 당업계에서 이용가능한 임의의 수단에 의해 얻어지는 모든 핵산 서열을 포함하고 이로 제한되지 않는다.
어구 "불응성 (질병)"은 본원에서 사용될 때, 질병에 대한 표준 요법을 이용한 초기 치료 후에 관해 상태가 되거나 실질적으로 개선되지 않는 질병을 나타낸다.
어구 "재발 (회귀)"는 본원에서 사용될 때, 치료 후에 관해 상태로 있었던 후에 질병의 복귀를 나타낸다.
어구 "관해"는 본원에서 사용될 때, 대체로 치료의 결과로서 질병 증거의 소실을 나타낸다. 용어 "완전" 또는 "부분적"은 용어 "관해"를 수식하도록 사용된다. 완전 관해는 질병의 모든 증거가 사라지는 것을 의미한다. 부분 관해는 치료에 의해 질병이 현저하게 개선되지만, 질병의 잔류 증거가 존재하는 것을 의미한다. 장기 이익은 대체로 특히 급성 백혈병 또는 진행 림프종에서 완전 관해를 필요로 한다.
어구 "치료에 대한 내성"은 본원에서 사용될 때, 보통은 세포를 치사시키고 그들의 성장을 억제하는 화학물질에 대한 노출에도 불구하고 생존하고 분열하는 세포의 능력을 나타낸다. 불응성 백혈병은 일부분의 악성 세포가 약물(들)의 손상 효과에 저항하는 상황이다. 세포는 약물 내성을 발달시키는 몇몇 방식을 갖는다.
용어 "치료적"은 본원에서 사용될 때 치료 및/또는 예방을 의미한다. 치료 효과는 간 질병과 연관된 질병 상태의 억제, 관해, 또는 근절에 의해 얻어진다.
어구 "혈소판감소증"는 본원에서 사용될 때, 포유동물 내에서 혈소판 농도의 정상 미만으로의 감소를 나타낸다.
용어 "치료"는 본 발명의 문맥에서 사용될 때 치료적 처치와 질병 또는 질환에 대한 예방적 또는 억제적 수단을 또한 포함하는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들어, 용어 치료는 질병 또는 질환의 모든 징후를 예방 또는 제거하는, 질병 또는 질환의 발병 전 또는 후의 물질의 투여를 포함한다. 다른 예로서, 질병의 증상과 싸우기 위한 질병의 임상 소견 후 물질의 투여가 질병의 "치료"를 구성한다.
용어 "변이체"는 본원에서 사용될 때, 각각 참조 핵산 서열 또는 펩티드 서열과 서열이 상이하지만 참조 분자의 필수 특성을 보유하는 핵산 서열 또는 펩티드 서열이다. 핵산 변이체의 서열 변화는 참조 핵산에 의해 코딩되는 펩티드의 아미노산 서열을 변경할 수 없거나, 아미노산 치환, 부가, 결실, 융합 및 말단절단 (truncation)을 일으킬 수 있다. 펩티드 변이체의 서열 변화는 대개 제한적 또는 보존적이어서, 참조 펩티드의 서열 및 변이체는 전체적으로 밀접하게 유사하고, 많은 구역에서 동일하다. 변이체 및 참조 펩티드는 하나 이상의 치환, 부가, 결실의 임의의 조합에 의해 아미노산 서열이 상이할 수 있다. 핵산 또는 펩티드의 변이체는 대립유전자 변이체와 같이 천연 발생할 수 있거나, 천연 발생하는 것으로 알려지지 않은 변이체일 수 있다. 핵산 및 펩티드의 비-천연 발생 변이체는 돌연변이 유발 기술 또는 직접 합성에 의해 이루어질 수 있다. 용어 변이체는 또한 기능을 변경시키지 않는, 분자에 대한 변형을 나타낼 수 있다.
설명:
본 발명에서는 인간 골수성 백혈병 세포 성장 및 증식을 억제하기 위해 트롬보포이에틴 수용체 효능제를 사용하는 방법을 제공한다. 본 발명의 방법은 특히 급성 골수성 백혈병에 관련된, 세포 증식성 및/또는 분화성 질환의 치료에서 유용하다.
본 발명에서 트롬보포이에틴 수용체 효능제
본 발명은 AML 세포의 성장 및 증식을 억제하기 위한 트롬보포이에틴 수용체 효능제 (TpoRA)의 용도를 포함한다. 용어 "트롬보포이에틴 수용체 효능제" 또는 "TPO 수용체 효능제" (TpoRA)는 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 트롬보포이에틴 수용체인 mpl에 결합하는 특성을 보유하고, mpl 효능제의 생물학적 특성을 갖는 임의의 제약 화합물, 소분자, 펩티드 또는 핵산을 포함한다. 본 발명에서, TPO 수용체 효능제의 생물학적 특성은 AML 세포의 성장 및 증식의 억제이다.
본 발명의 방법에서 유용한 바람직한 TpoRA는 3'-{N'-[1-(3,4-디메틸페닐)-3-메틸-5-옥소-1,5-디히드로피라졸-4-일리덴]히드라진}-5'-플루오로-2'-히드록시비페닐-3-카르복실산 (이하 화합물 A로서 공지됨)이다. 화합물 A는 그의 개시내용이 본원에 참조로 포함되는 국제 특허 출원 PCT/US01/16863 (국제 특허 출원 공개 WO 01/89457; 미국 특허 공개 US2004/0019190 A1)에서 TPO 수용체의 효능제로서, 특히 혈소판 생산을 향상하는데 및 특히 혈소판감소증의 치료에 유용한 것으로서 그의 제약상 허용되는 염, 수화물, 용매화물 및 에스테르와 함께 개시되고 (실시예 13으로서) 특허 청구된 화합물이고, 그의 구조는 다음과 같다:
Figure 112010029393304-pct00001
치료 방법
본 발명의 방법의 한 실시태양에서, TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체는 AML로 진단된 개체에게 투여된다. 본 발명의 한 측면에서, TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체는 화학요법제의 효능을 증대시키기 위해 화학요법 계획의 일부로서 AML에 걸린 개체에게 투여된다.
본 발명의 방법의 다른 실시태양에서, TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체는 골수이형성 증후군으로 진단된 개체에게 투여된다. 본 발명의 한 측면에서, TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체는 화학요법제의 효능을 증대시키기 위해 화학요법 계획의 일부로서 골수이형성 증후군에 걸린 개체에게 투여된다.
"화학요법제의 효능을 증대시키다"는 TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체를 투여하는 것이 개체의 생존을 증가시키거나, 개체에서 AML 또는 골수이형성 증후군의 임상 징후를 감소시키거나, 화학요법제의 투여량 또는 화학요법제의 투여 빈도, 또는 둘 모두의 감소를 허용하여, 화학요법제의 독성과 연관된 바람직하지 않은 부작용을 감소시키고 화학요법 계획을 보다 잘 견딜 수 있도록 하는 것을 포함하고 이로 제한되지 않는 유익한 임상 결과를 야기할 것임을 의미한다. TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체는 개체의 치료를 위해 효과적인 것으로 여겨지는, 화학요법제의 투여 전에, 화학요법제의 투여 동안 또는 화학요법제의 투여 후에, 또는 그의 일부의 조합으로 개체에게 투여될 수 있다. TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체를 화학요법 계획의 일부로서 투여하기 위한 최적 스케줄을 확립하는 것은 당업계의 기술 범위 내에 있다.
본 발명의 다른 측면에서, TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체는 화학요법의 투여 전에 개체에게 투여된다. 어떠한 이론에 얽매이기를 바라지는 않지만, 당업자는 화학요법의 개시 전에 TpoRA를 개체에게 투여하는 것이 화학요법에 내성인 백혈병 세포를 표적으로 하고 화학요법제의 효능을 증대시킬 것임을 이해할 것이다. 추가로, TPO 수용체를 발현하는 모든 백혈병 세포는 TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체의 표적이다. 화학요법을 개시하기 전에 TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체를 개체에게 제공하는 것이 백혈병 세포를 화학요법제에 대해 보다 감수성으로 만들어, 치료를 보다 효과적으로 만든다는 것이 당업자에게 명백할 것이다.
본 발명의 또 다른 측면에서, TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체는 개체에 대한 화학요법 과정이 완료된 후에 개체에게 투여된다. 어떠한 이론에 얽매이기를 바라지는 않지만, 당업자는 화학요법의 완료 후에 잔류하는 비검출된 순환 백혈병 세포가 AML 환자에서 재발 위험을 증가시킴을 이해할 것이다. TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체를 화학요법 과정이 완료된 개체에게 투여하는 것은 여전히 비활성인 상태로 존재하는 잔류 백혈병 세포를 표적으로 하고 질병 회귀의 위험을 감소시킨다.
본 발명의 또다른 측면에서, TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체는 AML의 유일한 치료 방법으로서 화학요법 대신에 개체에게 투여된다. 당업자는 AML으로 진단된 많은 개체에서 백혈병 세포가 화학요법에 대해 불응성임을 알 것이다. 이들 개체를 TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체로 치료하는 것은 백혈병 세포가 화학요법제를 회피하도록 하는 메카니즘을 우회시키는 대체 요법이다.
본 발명의 또다른 측면에서, TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체는 AML의 유일한 치료 방법으로서 화학요법 대신에 개체에게 투여된다.
본 발명의 조성물 및 방법은 바이러스저해 및 바이러스독성제, 항생제, 항진균제, 소염제, 통증 감소 요법, 및 조합 요법 등을 포함한 다른 치료 계획과 조합으로 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 다른 치료 방식, 예를 들어 화학요법, 냉동요법, 온열요법, 방사선 요법 등과 조합으로 사용될 수 있다.
요법 및 제약 제제
TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체는 예를 들어 정맥내 치료 프로토콜을 포함한 당업계에 공지된 임의의 적합한 경로를 이용하여 개체에게 투여될 수 있다. 투여는 신속한, 직접 주사에 의해 또는 일정 기간에 걸쳐 느린 주입에 의해 이루어질 수 있다. 서방형 제형을 또한 사용할 수 있다. 또한, TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체는 TpoRA에 용해도, 안정성, 연장된 반감기 및 다른 제약상 유리한 특성과 같은 바람직한 특성을 부여하기 위해 폴리에틸렌 글리콜과 같은 중합체에 안정하게 연결될 수 있다 (예를 들어 [Burnham, 1994, AM. J. Hosp. Pharm. 51:210-8] 참조).
TpoRA에 용해도, 안정성, 연장된 반감기 및 다른 제약상 유리한 특성과 같은 바람직한 특성을 부여하기 위해 포스파타제 억제제 및 활성화제, 및 키나제 억제제 및 활성화제가 또한 TpoRA에 연결되거나 컨쥬게이팅될 수 있다.
본 발명은 본 발명의 방법을 실시하기 위한, 적절한 치료 화합물 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물의 용도를 포함한다.
본원에서 사용될 때, 용어 "제약상 허용되는 담체"는 치료 화합물이 그와 조합될 수 있고, 조합 후에, 포유동물에게 적절한 치료 화합물을 투여하도록 사용될 수 있는 화학 조성물을 의미한다.
본 발명을 실시하기 위해 유용한 제약 조성물은 1 ng/kg/일 내지 100 mg/kg/일의 투여량을 전달하도록 투여될 수 있다. 투여되는 정확한 용량은 동물의 종류 및 치료되는 질병 상태의 종류, 동물의 연령 및 투여 경로를 포함하고 이로 제한되지 않는 임의의 많은 인자에 따라 변할 것이다. 최대 임상 이익을 위해 요구되는 TpoRA, 그의 유도체 또는 변이체의 최적 용량을 확립하는 것은 당업계의 기술 범위 내에 있다.
본 발명의 방법에서 유용한 제약 조성물은 정맥내 제형으로 전신 투여될 수 있다. 적절한 치료 화합물에 추가하여, 그러한 제약 조성물은 제약상 허용되는 담체 및 약물 투여를 향상시키고 용이하게 하는 것으로 공지된 다른 성분을 함유할 수 있다.
본 발명은 활성 성분으로서 본원에 개시되는 AML의 치료에 유용한 화합물을 포함하는 제약 조성물의 제조 및 사용을 포함한다. 그러한 제약 조성물은 대상에게 투여하기 위해 적합한 형태로 활성 성분 단독으로 이루어질 수 있거나, 제약 조성물은 활성 성분 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 하나 이상의 추가의 성분, 또는 이들의 일부 조합을 포함할 수 있다. 활성 성분은 제약 조성물 내에 당업계에 잘 알려져 있는 바와 같이 생리학상 허용되는 에스테르 또는 염의 형태로, 예를 들어 생리학상 허용되는 양이온 또는 음이온과 조합으로 존재할 수 있다.
본원에서 사용될 때, 용어 "생리학상 허용되는" 에스테르 또는 염은 제약 조성물의 임의의 다른 성분에 적합성인 활성 성분의 에스테르 또는 염 형태를 의미하고, 이는 조성물을 투여할 대상에게 유해하지 않다.
본원에서 설명되는 제약 조성물의 제형은 약물학 분야에 공지되거나 향후에 개발되는 임의의 방법에 의해 제조할 수 있다. 일반적으로, 그러한 제조 방법은 활성 성분을 담체 또는 하나 이상의 다른 보조 성분과 결합시킨 후, 필요하거나 바람직한 경우에 생성물을 목적하는 단일- 또는 다수-투여 단위로 성형 또는 포장하는 단계를 포함한다.
본 발명의 방법에서 유용한 제약 조성물은 비경구, 정맥내 또는 다른 투여 경로에 적합한 제형으로 제조되거나, 포장되거나, 시판될 수 있다.
본 발명의 제약 조성물은 벌크 (bulk)로, 단일 단위 투여량으로서 또는 다수의 단일 단위 투여량으로서 제조되거나, 포장되거나, 시판될 수 있다. 본원에서 사용될 때, "단위 투여량"은 소정량의 활성 성분을 포함하는 제약 조성물의 별개의 양이다. 활성 성분의 양은 일반적으로 대상에게 투여될 활성 성분의 용량, 또는 그러한 용량의 편리한 분획, 예를 들어, 그러한 용량의 1/2 또는 1/3과 동일하다.
본 발명의 제약 조성물 내의 활성 성분, 제약상 허용되는 담체, 및 임의의 추가의 성분의 상대적인 양은 치료되는 대상의 종류, 체격, 및 상태에 따라 및 추가로 조성물이 투여될 경로에 따라 변할 것이다. 예로서, 조성물은 0.1% 내지 100% (w/w)의 활성 성분을 포함할 수 있다.
활성 성분에 추가로, 본 발명의 제약 조성물은 하나 이상의 추가의 제약 활성 물질을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 제약 조성물의 제어 방출 또는 지속 방출 제형은 통상적인 기술을 이용하여 제조할 수 있다.
본원에서 사용될 때, 제약 조성물의 "비경구 투여"는 대상의 조직의 물리적 천공 및 조직 내의 구멍을 통한 제약 조성물의 투여를 특징으로 하는 임의의 투여 경로를 포함한다. 따라서, 비경구 투여는 조성물의 주사에 의해, 수술적 절개를 통한 조성물의 적용에 의해, 조직-관통 비-수술적 상처를 통한 조성물의 적용 등에 의한 제약 조성물의 투여를 포함하고 이로 제한되지 않는다. 특히, 비경구 투여는 정맥내, 피하, 복강내, 근육내, 흉골내 주사, 및 신장 투석 주입 기술을 포함하고 이로 제한되지 않는 것으로 고려된다.
비경구 투여에 적합한 제약 조성물의 제형은 제약상 허용되는 담체, 예를 들어 멸균수 또는 멸균 등장 염수와 조합된 활성 성분을 포함한다. 그러한 제형은 볼러스 (bolus) 투여를 위해 또는 연속 투여를 위해 적합한 형태로 제조되거나, 포장되거나, 시판될 수 있다. 주사가능한 제형은 단위 용량 형태로, 예를 들어 앰플 (ampule) 내에 또는 보존제를 함유하는 다수-투여량 용기 내에 제조되거나, 포장되거나, 시판될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제형은 유성 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액, 에멀젼, 페이스트, 및 이식가능한 지속 방출 또는 생분해성 제형을 포함하고 이로 제한되지 않는다. 그러한 제형은 물질을 현탁제, 안정화제 또는 분산제를 포함하고 이로 제한되지 않는 하나 이상의 추가의 성분을 추가로 포함할 수 있다. 비경구 투여를 위한 제형의 한 실시태양에서, 활성 성분은 재구성된 조성물의 비경구 투여 전에 적합한 비히클 (예를 들어, 발열원 미함유 멸균수)을 사용한 재구성을 위한 건조 (즉, 분말 또는 과립) 형태로 제공된다.
제약 조성물은 멸균 주사가능한 수성 또는 유성 현탁액 또는 용액의 형태로 제조되거나, 포장되거나, 시판될 수 있다. 상기 현탁액 또는 용액은 공지의 기술에 따라 제형화될 수 있고, 활성 성분에 추가로, 본원에서 설명되는 분산제, 습윤제 또는 현탁제와 같은 추가의 성분을 포함할 수 있다. 그러한 멸균 주사가능한 제형은 무독성의 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매, 예를 들어 물 또는 1,3-부탄 디올을 사용하여 제조할 수 있다. 다른 허용되는 희석제 및 용매는 링거 (Ringer) 용액, 등장성 염화나트륨 용액, 및 고정유, 예를 들어 합성 모노- 또는 디-글리세라이드를 포함하고 이로 제한되지 않는다. 유용한 다른 비경구로 투여가능한 제형은 활성 성분을 미세결정질 형태로, 리포좀 제제로, 또는 생분해성 중합체 시스템의 성분으로서 포함하는 것을 포함한다. 지속 방출 또는 이식을 위한 조성물은 제약상 허용되는 중합체 또는 소수성 물질, 예를 들어 에멀젼, 이온 교환 수지, 난용성 중합체, 또는 난용성 염을 포함할 수 있다.
화합물은 매일 수회와 같이 빈번하게 개체에게 투여될 수 있거나, 덜 빈번하게, 예를 들어 매일 1회, 매주 1회, 2주마다 1회, 매월 1회, 또는 훨씬 덜 빈번하게, 예를 들어 수개월마다 1회 또는 심지어 매년 1회 이하로 투여될 수 있다. 투여 빈도는 당업자에게 쉽게 자명할 것이고, 임의의 많은 인자, 예를 들어 비제한적으로 치료되는 질병의 종류 및 심도, 개체의 종류 및 연령 등에 따라 결정될 것이다.
실험 실시예
본 발명은 다음 실험 실시예를 참조로 하여 보다 상세히 설명된다. 이들 실시예는 단지 예시의 목적으로 제공되고, 달리 명시하지 않으면 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 따라서, 본 발명은 어떠한 방식으로도 다음 실시예로 제한되는 것으로 해석되어서는 안 되고, 오히려 본원에서 제공되는 교시내용의 결과로서 자명해지는 임의의 모든 변동을 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
본원에 개시되는 실험에서 사용되는 물질 및 방법을 이제 설명한다.
화합물
화합물 A는 글락소 스미쓰클라인 파마슈티칼스 (Glaxo SmithKline Pharmaceuticals, 미국 펜실베니아주 칼리지빌))로부터 입수하였다. 화합물을 100% DMSO에 용해시켜 10 mM 원액을 제조한 후, IMDM (이스코브스 (Iscoves) 변형 둘베코 (Dulbecco) 배지, 인비트로겐 (Invitrogen; 미국 캘리포니아주 칼스바드)) 내에 희석하여 1 mM 작업 용액을 얻었다. 전장 재조합 인간 트롬보포이에틴 (rhTPO)을 알앤디 시스템즈 (R&D Systems, 미국 미네소타주 미네아폴리스)로부터 입수하고, IMDM 배지 내에 최종 농도 5 ng/ml로 용해시켰다.
세포 배양
N2C-TPO 세포는 rhTpo 내에서 10주 동안 거대핵모세포 세포주의 배양에 의해 유도되고, 글락소 스미쓰클라인 파마슈티칼스에서 제공하였다. N2C-TPO 세포를 10% 동물 혈청 복합체 - Fetalplex (제미니 바이오-프러덕츠 (Gemini Bio-Products, 미국 캘리포니아주 웨스트 새크라멘토)), 0.5% 페니실린/스트렙토마이신 (인비트로겐; 미국 캘리포니아주 칼스바드) 및 20 ng/ml rhTPO를 보충한 RPMI (인비트로겐) 배지 내에서 배양하였다.
Mo7e 세포를 10% 페탈플렉스(Fetalplex), 0.5% 페니실린/스트렙토마이신, 및 GM-CSF 10 ng/ml (알앤디 시스템즈; 미국 미네소타주 미네아폴리스)를 보충한 DMEM (둘베코 변형 이글 (Eagle) 배지; 인비트로겐; 미국 캘리포니아주 칼스바드) 내에서 배양하였다. 두 세포주로부터의 세포를 각각의 실험 전에 24시간 동안 단식시켰다.
인간 일차 백혈병 세포를 펜실베니아 대학 (University of Pennsylvania)의 스템 셀 앤 류케미아 코어 (Stem Cell and Leukemia Core)로부터 입수하였다. 세포를 EGM-2 (내피 세포 배지-2, 캄브렉스 (Cambrex; 미국 뉴저지주 이스트 루터포드)) 내에서 배양하였다. 모든 세포를 가습 인큐베이터 (incubator) 내에서 37℃ 및 5% CO2에서 배양하였다.
거대핵세포 콜로니 형성 분석
정상 인간 전구 세포를 섬유소원 (fibrinogen) 응괴 내에 5000 CD34+ 세포/ml의 밀도로 플레이팅하였다. 섬유소원 응괴는 다음과 같이 제조하였다: 세포를 중탄산나트륨 (3 mg/ml); 3-머캅토-1,2-프로판디올 (0.002%); 트랜스페린 (300 ㎍/ml); CaCl2 (37 ㎍/ml); 지방산 미함유 탈이온화 BSA (10%); 인슐린 (20 ㎍/ml); 콜레스테롤 (5.6 ㎍/ml); 시토킨: IL-3 (10 ng/ml), SCF (10 ng/ml) 및 rhTPO (100 ng/ml, 2.8 μM에 해당) 또는 화합물 A (5 μM)를 보충한 IMDM 배지 내에 재현탁하였다. 이어서, 섬유소원 (0.2%) 및 트롬빈 (0.2 u/ml)을 함유하는 응고 믹스 (clotting mix)를 첨가하였다. 세포를 35 mm 배양 접시에 플레이팅하고, 가습 인큐베이터 내에서 37℃ 및 5% CO2에서 배양하였다. 10일 후에, 콜로니를 고정하고, 거대핵세포 마커 CD41a에 대해 형광 표지된 항체로 염색하였다. 도립 형광 현미경을 사용하여 거대핵세포 콜로니를 계수하였다.
키나제 인산화의 웨스턴 블롯 분석
대조군 및 rhTPO 또는 화합물 A로 자극된 세포를 PBS 내에서 2회 세척한 후, 펠렛화하였다. 펠렛을 50 mM TRIS, 150 mM NaCl, 0.02% 나트륨 아지드, 0.1% 나트륨 도데실 술페이트 (SDS) 및 1% 이게팔 (Igepal) (시그마 (Sigma, 미국 미주리주 세인트루이스))로 구성된 삼중-용해 버퍼 내에 용해시킨 후, 10 min마다 볼텍싱하면서 30 min 동안 얼음 상에서 인큐베이팅하였다. 이어서, 용해물을 최대 속도에서 미세원심분리기 내에서 4℃에서 10 min 동안 원심분리하였다. 추출된 세포 상등액을 웨스턴 블롯 분석에 사용하였다.
단백질 농도는 브래드포드 (Bradford) 단백질 분석 (Bio-Rad, 미국 캘리포니아주 허큘레스))에 의해 결정하였다. 총 150 ㎍의 단백질 추출물을 10% 폴리아크릴아미드 겔 (150V, 60 min.) 상에서 분해한 후, 폴리비닐리덴 플루오라이드 (PVDF) 막으로 옮겼다 (25V, 60 min). 농축 우유 (5%)를 차단 용액으로서 사용하였다. 막을 밤새 4℃에서 1:1000의 희석률로 일차 항체와 함께 인큐베이팅하였다. 인큐베이션 후에, 막을 TBS-T 버퍼 내에서 3회 세척하고, 2차 HRP-컨쥬게이팅된 항체 (아머샴 바이오사이언시즈 (Amersham Biosciences; 미국 뉴저지주 피츠카타웨이))로 1:1000의 희석률에서 2시간 동안 실온에서 프로빙하였다. 모든 항체는 셀 시그널링 테크놀로지 (Cell Signaling Technology, 미국 매사추세츠주 댄버스)로부터 구입하였다.
마이크로어레이 분석
N2C-TPO 세포 (10% FBS로 보충한 RPMI 배지 1 ml 당 1x106 세포)를 2.8 μM TPO 또는 5 μM 화합물 A로 30분, 1 및 3시간 동안 자극하였다. 이어서, 세포를 PBS 내에서 2회 세척하고, 퀴아젠 (Qiagen)의 RNaesy 키트 (퀴아젠 (Qiagen, 미국 캘리포니아주 발렌시아))를 사용하여 RNA를 단리하는데 사용하였다. 각각의 조건을 3벌로 수행하였다. RNA를 Penn Microarray Facility (펜실베니아 대학; 미국 펜실베니아주 필라델피아))에 제출하였다. 분석은 Affymetrix GeneChip U133A vs 2를 사용하여 수행하였다. 통계학적 데이타 분석은 Penn Bioinformatics Core (펜실베니아 대학; 미국 펜실베니아주 필라델피아)에서 GCRMA 알고리즘 및 Array Assistlite 3.4 프로그램을 이용하여 수행하였다. 유전자 프로필의 시각화는 스팟파이어 (spotfire) 소프트웨어를 사용하여 수행하였다.
실험 실시예 #1: 재조합 인간 TPO 에 비교한 화합물 A 분자의 세포 배양 평가
화합물 A가 트롬보포이에틴 수용체 (TpoR) 효능제로서 기능하고 인간 거대핵세포의 증식 및 분화를 자극하는 능력을 갖는지 결정하기 위해, Tpo 의존 세포주 (N2C-TPO) 및 정상 인간 CD34+ 세포를 이용하여 많은 세포 배양 실험을 수행하였다. TPO 의존 세포주 N2C-TPO의 증식을 자극하는 화합물 A의 능력은 1 내지 10 μM에서 세포 증식의 투여량 의존적 증대를 보이는 것으로 밝혀졌고, 최대 효과는 5-10 μM에서 나타났다. 따라서, rhTPO 대 화합물 A의 특성을 직접 비교하는 추가의 실험에서 5 μM의 투여량을 사용하였다.
거대핵세포의 증식 및 분화를 자극하는 화합물 A의 능력을 평가하기 위해, 정상 인간 전구 세포 (CD34+)를 사용하였다. CD34+ 세포를 섬유소 응괴 내에 플레이팅하고, 10일 동안 배양하고, 그 후 콜로니를 고정하고 거대핵세포 마커 CD41에 특이적인 항체로 염색하였다. 화합물 A로 자극한 세포로부터 얻은 거대핵세포 콜로니의 수는 rhTPO로 자극한 세포로부터의 거대핵세포 콜로니의 수에 비해 약간 더 높지만, 콜로니의 크기 및 형태의 차이는 없었다 (도 1). 이들 결과는 또한 인간 전구 세포의 액체 배양에 의해 확인하였다. CD34+ 세포를 시토킨 내에서 rhTPO 또는 화합물 A와 함께 7-10일 동안 인큐베이팅한 후, 배양액 내의 세포를 다배수체화 (polyploidization) 정도, 및 거대핵세포 계열 마커 CD41 및 CD61의 발현에 대해 검사하였다. 화합물 A 내에서 성장시킨 세포의 14%가 rhTPO의 8%에 비해 보다 큰 4N DNA 함량을 보였다. 이들 동일한 세포는 35%의 세포에서 거대핵세포 마커 CD41 및 CD61을 발현하였고, 이는 rhTPO를 사용한 결과에 대등하였다.
실험 실시예 #2: 일차 백혈병 세포에 대한 화합물 A의 차별적인 효과
18명의 급성 골수원성 백혈병 (AML) 환자, 7명의 급성 림프구성 백혈병 (ALL) 환자 및 3명의 만성 골수원성 백혈병 (CML) 환자로부터 샘플을 얻었다. 18개의 시험된 AML 샘플 중 17개에서, 화합물 A는 비처리 대조군 또는 rhTPO와 함께 배양한 세포에 비해 세포 증식을 70-90% 억제하였다 (도 2A). 화합물 A의 유의한 효과는 ALL 및 CML 환자 샘플로부터의 일차 세포에서 관찰되지 않았다 (도 2B 및 C).
또한, AML 샘플에 대한 다양한 투여량의 화합물 A (1 μM, 2.5 μM 및 5 μM)의 효과를 검사하였다. 상기 실험을 6개의 상이한 샘플에 대해 수행하였다. 3개의 샘플에서, 1 및 2.5 μM의 화합물 A의 투여량이 세포 증식에 대해 효과를 가졌다. 샘플 857 및 332에서, 1 및 2.5 μM 투여량의 화합물 A에 의한 세포 증식의 억제는 5 μM 투여량을 사용하여 달성된 억제와 유사하였다 (도 3). 나머지 3개의 샘플에서, 1 μM 및 2.5 μM 화합물 A의 투여량은 세포 증식 및 생존에 대해 효과가 없었다. 이들 경우에, 단지 5 μM의 화합물 A가 백혈병 세포 성장 및 증식을 억제하였다. ALL 또는 CML 환자 샘플에서 세포 성장 또는 생존력에 대한 유의한 효과는 관찰되지 않았다.
실험 실시예 #3: rhTPO 및 화합물 A에 의해 자극된 신호전달 경로의 비교
화합물 A가 AML 세포의 세포 사멸을 촉발시키는 메카니즘을 이해하기 위해, rhTPO 및 화합물 A에 의해 자극된 세포내 신호전달 경로를 비교하였다. 이들 연구는 조혈 전구 세포 (CD34+) 및 TpoR을 발현하도록 공학 처리된 거대핵모세포 세포주 N2C-TPO에 대해 수행하였고, 여기서 세포 증식은 Tpo에 의한 자극에 의해 제어된다.
Tpo 신호전달 경로에서 중요한 것으로 알려진 키나제의 인산화에 대한 화합물 A의 효과를 검사하였다. 평가된 키나제는 STAT5, ERK, p70S6, 및 리보좀 키나제 S6을 포함한다. 10 또는 30분 동안 rhTPO로 자극한 N2C-TPO 세포는 상기 나열된 모든 키나제의 높은 인산화 수준을 보여주었다. 그러나, 세포를 화합물 A에 10 또는 30분 동안 노출시킬 때, 이들 키나제 중 어느 것도 활성화되지 않았다 (도 4A). 동일한 실험을 인간 전구 세포 CD34+에 대해 수행하였고, 이는 화합물 A에 의해 자극되어 거대핵세포로 분화한다. N2C-TPO 세포와 달리, CD34+ 세포는 rhTPO (2.8 μM) 또는 화합물 A (5 μM)에 노출된 후 ERK, p70S6 및 S6 리보좀 단백질 인산화의 활성화를 보여주었다. 그러나, rhTPO에 노출된 세포만이 STAT5 (AML 세포에서 과-인산화되는 키나제)의 인산화를 자극하였다 (도 4B).
실험 실시예 #4: rhTPO 자극은 AML 세포에 대한 화합물 A의 효과를 차단할 수 있다
6명의 AML 환자로부터 얻은 세포에 대해 증식 분석을 수행하였다. 일부 실험에서, 세포를 먼저 화합물 A에 노출시킨 후, 5분 후에 rhTPO로 자극하였다. 모든 수용체가 화합물 A에 의해 점령되고, 따라서 rhTPO가 결합하는 것을 방지할 가능성을 피하기 위해, 세포를 먼저 rhTPO로 자극한 후 5분 후에 화합물 A에 노출시킴으로써 다른 실험을 또한 수행하였다. 6개의 샘플 중 4개에서 (857, 774, 759, 342), AML 세포 생존은 화합물 A로 자극한 후 rhTPO를 첨가함으로써 또는 세포를 먼저 rhTPO로 자극한 후 화합물 A에 노출함으로써 회복되지 않았다. 그러나, 샘플 794 및 332에서, rhTPO를 첨가하면 화합물 A의 효과를 약화시켰다 (도 5). 이들 결과는 많은 가능성을 제안한다: 첫 번째로, 화합물 A는 rhTPO보다 TpoR에 대해 훨씬 더 강한 친화도를 가질 수 있거나; 두 번째로, rhTPO의 KD는 훨씬 더 낮고, 따라서 화합물 A는 수용체로부터 rhTPO를 대체할 수 있거나; 세 번째로, 화합물 A는 AML 세포의 세포 사멸을 촉발시키는 다른 경로를 자극한다.
이들 가능성을 처리하기 위한 노력으로, TPO 경로에 관여하는 키나제의 인산화를 평가하면서 유사한 구조 실험을 N2C-TPO 세포에 대해 수행하였다. 2세트의 실험 (rhTPO를 먼저 첨가한 후 화합물 A를 첨가하거나, 화합물 A를 먼저 첨가한 후 rhTPO를 첨가하는)에서, 화합물 A 단독으로의 자극 후에는 인산화되지 않았던 STAT5, ERK p70S6 키나제 및 S6 리보좀 단백질의 인산화의 회복이 관찰되었다 (도 6). 이들 데이타는 화합물 A가 AML 세포의 사멸을 일으키는 다른 경로를 활성화함을 제안한다.
실험 실시예 #5: TPO 대 화합물 A로 자극한 세포에서 유전자 발현의 차이에 대한 마이크로어레이 분석
화합물 A 신호전달에 관여하는 메카니즘을 더욱 이해하기 위해, Affymetrix GeneChips을 이용하여 Tpo 또는 화합물 A로 자극한 세포에 대해 마이크로어레이 분석을 수행하였다. 제1 세트의 실험에서, 일차 AML 세포를 사용한 추가의 분석을 위한 최적 시점을 확립하기 위해 N2C-TPO 세포주를 프로빙하였다.
세포를 TPO (2.8 μM) 또는 화합물 A (5 μM)로 30분, 1 또는 3시간 동안 자극하였다. 이어서, RNA를 세포로부터 단리하고, 어레이 실험에 사용하였다. Tpo 대 화합물 A로 자극한 후에, 유전자 발현에서 유의한 차이가 존재하였다. TPO에 의해 자극된 샘플에 비해 화합물 A 샘플에서 30분의 자극 후에 200개의 유전자가 차별적으로 발현되었고, 1시간의 자극 후에 ~400개의 유전자가 차별적으로 발현되었고, 3시간 후에 2000개 초과의 유전자가 상향 또는 하향-조절되었다 (도 7).
이들 유전자 중에서, 세포자멸 경로에 관여하는 많은 유전자 (도 8) 및 전사 인자 (도 9)의 발현의 차이를 관찰하였다. 가장 하향-조절된 유전자 (50-200배 변화)는 초기 성장 인자 반응 유전자 1-4 (이는 세포외 신호의 핵 효과기로서 작용하는 단백질을 코딩함)의 패밀리, 시토킨 신호전달 3의 억제인자 (suppressor), 및 대부분의 세포의 신호전달 경로에 관여하는 시토킨 유도가능 SH2-함유 단백질을 포함하였다.
실험 실시예 6: 인간 암 환자로부터의 단리된 일차 세포의 세포자멸 분석
아넥신-V는 포스파티딜세린 (PS)에 대한 높은 친화도를 갖는 인지질 결합 단백질이다. 아넥신 V는 정상적인 무손상 세포에 결합하지 않을 것이지만, 괴사 세포는 아넥신 V가 내부 막 PS에 접근하도록 충분히 누출성이다. 프로피듐 요오다이드는 DNA를 염색한다. 따라서, 분석은 세포자멸 중인 세포를 확인한다.
일차 세포를 AML (환자 774; 상부 열) 또는 ALL (환자 710; 하부 열) 환자로부터 단리하였다. 이어서, 세포를 대조 용액 (패널의 좌측쌍), rhTpo + DMSO (패널의 중간쌍), 또는 SB559457 (패널의 우측쌍)에 72시간 동안 노출시켰다. 도 10은 대조 세포 (상부, 좌측 패널) 및 Tpo + DMSO로 자극한 세포 (상부, 중간 패널)에 비해 SB55945에 72시간 노출된 AML 샘플 (상부, 우측 패널)에서 아넥신 V 및 PI 양성 세포의 증가를 보여준다. ALL 환자로부터 단리된 일차 세포에서 세포성 세포자멸의 유의한 증가를 관찰할 수 없었다. 이는 SB559457이 AML 세포에서 세포자멸을 유도함을 제안한다.
실험 실시예 7: AML 세포에서 차별적인 신호전달의 분자 결과
Affymetrix 유전자 칩 분석을 5개의 상이한 일차 AML 세포 샘플 (AML 환자 332, 342, 774, 및 794)에 대해 수행하였다. 일차 세포를 6시간 동안 Tpo 또는 SB559457로 자극하였다. 칩 상에 표시된 22,000개의 유전자 중 2개에서만 발현에서 통계학상 유의한 차이가 발견되었다 (오류발견률 (false discovery rate)이 36% 미만임을 표시함): 글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나제 (GAPDH) 및 DNA 손상-유도가능 전사체 4 (Redd1로서도 알려짐). 이들 결과를 정량적 실시간 PCR (QRT-PCR)을 이용하여 확인하였다. 일차 AML 샘플에서, SB559457로 처리한 세포에서 GAPDH의 발현은 동일한 시간 (6시간) 동안 rhTpo로 처리한 세포에서보다 적어도 2배 더 높았다. 유사하게, Redd1 유전자의 발현은 rhTpo와 함께 인큐베이팅한 대조 세포보다 SB559457과 함께 인큐베이팅한 세포에서 ~3 내지 4배 더 높았다 (도 11).
세포 신호전달 및 어레이 데이타 사이의 상관관계를 확립하기 위한 노력으로, 일차 백혈병 세포에서 Tpo 신호전달 경로에 관여하는 키나제의 인산화를 검사하였다. 리보좀 S6 및 p70S6 키나제의 인산화를 3개의 일차 AML 샘플에서 1, 3 및 5시간 동안 SB559457 (5 μM) 및 Tpo (2.86 μM)로 자극한 세포에서 비교하였다. 모든 AML 샘플에서, 3시간 동안 SB559457로 자극한 세포는 Thr421/Ser424에서 p70S6 키나제 및 리보좀 키나제 S6의 높은 인산화를 보인 반면, 비자극된 대조 세포 및 Tpo로 자극한 세포에서는, 이들 키나제의 인산화는 검출되지 않거나 매우 적게 검출되었다 (도 12).
본원에 인용되는 각각의 및 모든 특허, 특허 출원 및 공개의 개시내용은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다. 본 발명을 특정한 실시태양을 참조고 하여 개시하였지만, 다른 당업자가 본 발명의 진정한 취지와 범위를 벗어나지 않으면서 본 발명의 다른 실시태양 및 변형을 고안할 수 있음이 명백하다. 첨부된 청구의 범위는 그러한 모든 실시태양 및 동등한 변형을 포함하는 것으로 해석되도록 의도된다.

Claims (10)

  1. 3'-{N'-[1-(3,4-디메틸페닐)-3-메틸-5-옥소-1,5-디히드로피라졸-4-일리덴]히드라진}-5'-플루오로-2'-히드록시비페닐-3-카르복실산을 포함하고, 급성 골수성 백혈병으로 진단된 인간에서 백혈병 세포 성장 및 증식을 억제하는, 급성 골수성 백혈병으로 진단된 인간의 치료를 위한 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 화학요법제의 투여 전에, 투여 동안 또는 투여 후에 상기 인간에게 투여되는 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 3'-{N'-[1-(3,4-디메틸페닐)-3-메틸-5-옥소-1,5-디히드로피라졸-4-일리덴]히드라진}-5'-플루오로-2'-히드록시비페닐-3-카르복실산 및 제약상 담체를 포함하는 제약 조성물인 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 인간에게 비경구 투여되는 제약 조성물인 조성물.
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110129550A1 (en) 2007-02-16 2011-06-02 Connie Erickson-Miller Cancer treatment method
WO2016205784A1 (en) * 2015-06-19 2016-12-22 The Scripps Research Institute Methods and compositions for producing activated natural killer cells and related uses
WO2022114603A1 (ko) * 2020-11-24 2022-06-02 재단법인대구경북과학기술원 신규한 항-c-mpl 항체 및 이의 용도

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002540142A (ja) * 1999-03-29 2002-11-26 シャイアー・バイオケム・インコーポレイテッド 白血病の処置方法
KR20070087255A (ko) * 2000-05-25 2007-08-27 스미스클라인 비참 코포레이션 트롬보포이에틴 모방체

Family Cites Families (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5559235A (en) 1991-10-29 1996-09-24 Glaxo Wellcome Inc. Water soluble camptothecin derivatives
US5342947A (en) 1992-10-09 1994-08-30 Glaxo Inc. Preparation of water soluble camptothecin derivatives
AP9300587A0 (en) 1992-11-12 1995-05-05 Glaxo Inc Water soluble camptothecin derivatives.
US5681835A (en) 1994-04-25 1997-10-28 Glaxo Wellcome Inc. Non-steroidal ligands for the estrogen receptor
US5491237A (en) 1994-05-03 1996-02-13 Glaxo Wellcome Inc. Intermediates in pharmaceutical camptothecin preparation
GB9716557D0 (en) 1997-08-06 1997-10-08 Glaxo Group Ltd Benzylidene-1,3-dihydro-indol-2-one derivatives having anti-cancer activity
US6737249B1 (en) * 1997-08-22 2004-05-18 Genentech, Inc. Agonist antibodies
WO1999011262A1 (en) 1997-09-02 1999-03-11 Roche Diagnostics Gmbh Mpl-receptor ligands, process for their preparation, medicaments containing them and their use for the treatment and prevention of thrombocytopaenia and anaemia
WO1999022733A1 (en) 1997-10-31 1999-05-14 Smithkline Beecham Corporation Novel metal complexes
CN1376150A (zh) 1999-07-26 2002-10-23 盐野义制药株式会社 具有血栓形成素受体拮抗作用的药物组合物
EP1104674A1 (de) 1999-11-10 2001-06-06 Curacyte AG O,o'-Dihydroxyazofarbstoffe als Bestandteile von Arzneimitteln mit TPO-Agonistischer oder -Synergetischer Wirkung
TWI284639B (en) 2000-01-24 2007-08-01 Shionogi & Co A compound having thrombopoietin receptor agonistic effect
WO2001092211A1 (fr) 2000-05-30 2001-12-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Composes possedant des activites analogues a celles de la thrombopoietine
ATE292640T1 (de) 2000-05-31 2005-04-15 Genzyme Corp Therapeutische verbindungen gegen eierstockkrebs
WO2002015926A1 (fr) * 2000-08-24 2002-02-28 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Compositions medicinales contenant des ligands c-mpl, destinees a l'augmentation des plaquettes et des erythrocytes
JP4458746B2 (ja) 2001-01-16 2010-04-28 グラクソ グループ リミテッド 癌の治療方法
WO2002059099A1 (fr) 2001-01-26 2002-08-01 Shionogi & Co., Ltd. Composes cycliques presentant un agonisme envers le recepteur de thrombopoietine
EP1354880A4 (en) 2001-01-26 2004-08-25 Shionogi & Co HALOGEN COMPOUNDS HAVING AGONISM TOWARDS THROMBOPOIETIN RECEPTOR
EP1357116A4 (en) 2001-02-02 2005-06-01 Yamanouchi Pharma Co Ltd 2-ACYLAMINOTHIAZOLE DERIVATIVE OR SALT THEREOF
US20030171306A1 (en) * 2001-06-04 2003-09-11 Davis Stephen Thomas Cancer treatment method
JP4120586B2 (ja) 2002-01-18 2008-07-16 アステラス製薬株式会社 ２−アシルアミノチアゾール誘導体又はその塩
TWI280128B (en) 2002-05-22 2007-05-01 Smithkline Beecham Corp 3'-[(2Z)-[1-(3,4- dimethylphenyl)-1,5-dihydro-3-methyl-5-oxo-4H-pyrazol-4-ylidene]hydrazino]-2'-hydroxy-[1,1'-biphenyl]-3-carboxylic acid bis-(monoethanolamine)
US20070105824A1 (en) 2003-04-29 2007-05-10 Erickson-Miller Connie L Methods for treating degenerative diseases/injuries
WO2005118551A2 (en) 2004-05-28 2005-12-15 Ligand Pharmaceuticals Inc. Thrombopoietin activity modulating compounds and methods
BRPI0516883A (pt) 2004-10-25 2008-09-23 Ligand Pharm Inc compostos e métodos para modulação da atividade de trombopoietina
WO2007044982A2 (en) * 2005-10-13 2007-04-19 Smithkline Beecham Corporation Methods for the preservation of platelet efficacy during storage
EP1951667A2 (en) 2005-11-23 2008-08-06 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Thrombopoietin activity modulating compounds and methods
AU2007225115A1 (en) 2006-03-15 2007-09-20 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Synthesis of thrombopoietin activity modulating compounds
WO2008073864A1 (en) 2006-12-12 2008-06-19 Smithkline Beecham Corporation Novel combinations
US20110129550A1 (en) * 2007-02-16 2011-06-02 Connie Erickson-Miller Cancer treatment method
US20110160130A1 (en) * 2007-02-16 2011-06-30 Connie Erickson-Miller Cancer treatment method
UY30915A1 (es) * 2007-02-16 2008-09-02 Smithkline Beecham Corp Método de tratamiento de canceres
WO2009151862A1 (en) 2008-05-15 2009-12-17 Smithkline Beecham Corporation Method of treatment
EP2348858A4 (en) 2008-10-16 2013-06-12 Glaxosmithkline Llc PROCESS FOR THE TREATMENT OF THROMBOCYTOPENIA

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002540142A (ja) * 1999-03-29 2002-11-26 シャイアー・バイオケム・インコーポレイテッド 白血病の処置方法
KR20070087255A (ko) * 2000-05-25 2007-08-27 스미스클라인 비참 코포레이션 트롬보포이에틴 모방체

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