KR101460669B1 - Cosmetic composition with mucus from fish - Google Patents

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Abstract

본 발명은 점액을 분비하는 어류로부터 수득한 점액을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 화장료 조성물은 항산화, 콜라겐 합성 촉진, 피부 잔주름 개선, 미백, 보습, 피부장벽기능 회복, 아토피 개선 효과, 항염증 효과가 매우 뛰어나다. The present invention relates to a cosmetic composition containing a mucus obtained from a mucus-secreting fish. The cosmetic composition of the present invention is useful as an antioxidant, promoting collagen synthesis, improving skin wrinkles, whitening, moisturizing, restoring skin barrier function, Excellent anti-inflammatory effect.

Description

점액을 분비하는 어류로부터 수득한 점액을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition with mucus from fish}The present invention relates to a cosmetic composition containing mucus obtained from a fish which secretes mucus,

본 발명은 점액을 분비하는 어류로부터 수득한 점액을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a cosmetic composition containing a slime obtained from a fish that secretes mucus.

피부노화는 내인성 노화(intrinsic, chronological aging)와 광노화(phtoaging) 두 가지로 나눌 수 있다[Gilchrest BA: J. Am . Acad . Dermatol.,21, 610-613(1989)]. 내인성 노화는 연령이 증가함에 따라 생체의 생리적인 기능이 저하되어 자연적으로 유발되는 노화현상이다[Braverman IM 등: J. Invest. Dermatol., 78, 434-443(1982)]. 광노화는 피부가 광에 반복적으로 노출되어 피부의 외양 또는 기능이 변화되는 것을 의미한다[Ridder GM등: J. Am . Acad . Dermatol., 25, 751-760(1991)]. 상기 외에도, 피부노화는 자외선, 스트레스, 질병상태, 환경인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 활성산소종이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화 될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 좀더 구체적으로 말하자면, 피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부노화 현상이 생겨나는 것이다. 특히 단백질의 산화는 피부의 결합조직인 콜라겐, 히알루론산, 엘라스틴, 프로테오글라이칸, 피브로넥틴 등이 절단되어 심한 과다 염증반응이 일어나고, 피부의 탄력에 지장을 주게 되고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역기능 저하의 사태에 이르게 된다.Skin aging can be divided into two types: intrinsic (chronological aging) and phtoaging (Gilchrest BA: J. Am . Acad . Dermatol ., 21, 610-613 (1989)]. Endogenous aging is a naturally occurring aging phenomenon that is accompanied by decreased physiological function of the body as age increases [Braverman IM et al . : J. Invest. Dermatol ., 78, 434-443 (1982)]. Photoaging means that the skin is repeatedly exposed to light to change the appearance or function of the skin [Ridder GM et al . : J. Am . Acad . Dermatol ., 25, 751-760 (1991)]. In addition to the above, skin aging can be caused by active oxygen species activated by ultraviolet rays, stress, disease states, environmental factors, wounds, and aging. When such conditions are deepened, the antioxidant defense network existing in the living body is destroyed, And tissues to promote adult diseases and aging. More specifically, lipids, proteins, polysaccharides and nucleic acids, which are major constituents of the skin, are oxidized to destroy skin cells and tissues, resulting in skin aging. In particular, the oxidation of proteins causes severe hyperinflammation of collagen, hyaluronic acid, elastin, proteoglycans, and fibronectin, which are connective tissues of the skin, which interferes with skin elasticity. Mutation, cancer induction, and immune function.

그러므로 신체의 대사 과정 중 발생하는 활성산소종이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되는 활성산소종을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부가 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다. 노화에는 활성산소종 뿐만 아니라 MMP(Matrix metallopretease)라는 효소가 관여하는데, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포 외 기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나 노화가 진행되면서 그 합성이 감소하며 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속단백질 분해효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 자외선 노출에 의해 이러한 분해효소가 활성화되기도 한다. 그러므로, 자외선에 의해 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 하지만, 지금까지 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 분해효소(MMP)의 활성만을 단순 억제하는 것이 대부분이었다.Therefore, it is necessary to protect the cell membranes by abolishing reactive oxygen species that are mediated by the body's metabolic processes, ultraviolet irradiation, and inflammatory reactions, and regenerate already damaged cells by active metabolism to proliferate the cells Can be restored and healthy skin can be maintained. In aging, not only reactive oxygen species but also MMP (Matrix metallopretease) enzyme is involved. Synthesis and degradation of extracellular matrix such as collagen are controlled appropriately in vivo, but its synthesis is decreased as aging progresses and enzymes degrading collagen (MMP) is promoted and the elasticity of the skin is lowered and wrinkles are formed. In addition, these degrading enzymes are activated by ultraviolet exposure. Therefore, there is a demand for development of a substance capable of controlling the activation of MMP induced in the cell by ultraviolet light or inhibiting its activity. However, the raw materials used as cosmetic materials have mostly suppressed only the activity of degrading enzyme (MMP).

한편, 멜라닌은 색소 세포 내에 존재하는 티로시나제의 작용에 의해 타이로신으로부터 도파(dopa), 도파퀴논(dopaquinone)으로 변환되어 도파크롬(dopachrome) 등을 거처 생성된다. 멜라닌은 피부에 존재하여 자외선 등으로부터 신체를 보호하고 체내 호르몬 분비 조절에 중요한 기능을 나타낸다. 그러나, 멜라닌이 과잉생산되면 기미, 주근깨 등을 형성하고 피부노화를 촉진하며, 피부암 유발에 중요한 작용을 하는 것으로 알려져 있는데, 멜라닌 과잉생산을 예방하기 위한 연구개발이 현재 활발히 진행되고 있다. 이미 아스코르빈산(일본특개평 4-9320), 하이드로퀴논(일본특개평 6-192062), 코직산(일본특개소 56-7710), 알부틴(일본특개평 4-93150) 및 식물 추출물 등이 티로시나제 저해 활성을 나타내어 미백 화장료로 이용되고 있다. 하지만, 이들 성분은 화장품 제형 중에서 안정성이 나빠, 분해되어 착색되거나, 이취가 발생하거나, 생체 수준에서의 효능, 효과가 불분명하거나 또는 안전성이 문제가 되어 그 사용이 제한되고 있는 실정이다.On the other hand, melanin is converted from tyrosine to dopa and dopaquinone by the action of tyrosinase existing in pigment cells, and is generated by dopachrome. Melanin is present in the skin, protects the body from ultraviolet light and has an important function in regulating hormone secretion in the body. However, when melanin is overproduced, it is known that it forms spots and freckles, promotes skin aging, and plays an important role in skin cancer induction, and research and development for preventing melanin overproduction has been actively carried out. (Japanese Patent Laid-open No. 4-93050) and plant extracts inhibit tyrosinase (Japanese Patent Laid-open Publication No. 4-9320), hydroquinone (Japanese Patent Laid Open No. 6-192062), kojic acid And is used as a whitening cosmetic. However, these components are poor in stability among cosmetic formulations, they are decomposed to cause coloration, odor generation, efficacy at a living body level, effects are unclear, or safety is a problem, and their use is limited.

한편, 인체에 있어서 피부는 외부환경으로부터 생체를 보호하는 보호막의 기능을 하는 기관으로서, 인체 내의 생체성분 즉, 물이나 전해질 등의 손실을 방지하는 동시에 외부로부터 유해물질이 인체 내로 침입하지 못하도록 하는 역할을 한다. 이러한 피부는 크게 표피층, 진피층 및 피하지방층으로 구분된다. 표피층은 각질세포와 멜라닌 세포로 구성되는데, 피부 최외곽의 각질세포층은 외부환경과 직접 접촉하기 때문에 물리적, 화학적 혹은 물질의 투과에 대한 강한 저항성이 요구되며, 인체로부터 외부로 수분이 손실되는 것을 막아줌과 동시에 자체로도 적당한 수분을 보유함으로써 유연성을 유지하여야 한다.On the other hand, in the human body, the skin is an organ acting as a protective film for protecting the living body from the external environment. It prevents loss of biological components in the human body, that is, water and electrolytes, and prevents harmful substances from entering the human body from the outside . The skin is divided into the skin layer, the dermal layer and the subcutaneous fat layer. The epidermal layer consists of keratinocytes and melanocytes. Since the keratinocytes in the outermost layer of the skin are in direct contact with the external environment, they are required to have strong resistance against physical, chemical, or material permeation and prevent moisture from being lost to the outside At the same time as zooming, it should maintain its flexibility by holding proper water on its own.

일반적으로 피부의 수분량은 진피층에서는 70% 정도이나 표피층으로 갈수록 감소하여 각질세포층에서는 약 10 내지 30%가 된다. 진피층에서 공급된 물은 주로 수동적 확산에 의해 각질층 상부로 이동하며 최종적으로는 외부로 배출된다. 이를 경피수분 손실(Trans Epidermal Water Loss : TEWL)이라 하며, 이러한 경피수분 손실을 적절한 수준으로 유지시켜주는 것이 각질세포층의 지질막 성분인 피지성분과 표피지질이라고 알려져 있다. Generally, the moisture content of the skin is about 70% in the dermal layer, but decreases to the skin layer, which is about 10 to 30% in the keratin layer. The water supplied from the dermis layer mainly migrates to the upper part of the stratum corneum by passive diffusion and eventually to the outside. This is called Trans Epidermal Water Loss (TEWL). It is known that the lipid component of the keratinocyte layer and epidermal lipid, which maintains the transdermal water loss at an appropriate level, is the lipid component.

한편, 각질세포층에는 천연보습 인자(Natural Moisturizing Factor : NMF) 라고 하는 친수성의 수분 보유능을 가진 물질이 존재하여 피부의 보습에 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다. 정상적인 각질세포층은 수분이 10내지 30% 정도가 유지되면 피부는 매끄럽고 부드러우며, 신체 보호기능을 정상적으로 발휘하게 된다. 하지만, 각질세포층의 수분함량이 10% 이하가 되면 피부는 거칠어지고 신체의 보호기능을 잃게 되어 노화현상이 일어난다. 예를 들어, 건성피부의 경우에는 각질세포의 결집력이 약화되어 피부표면으로부터 비늘조각과 같이 각질세포가 허옇게 벗겨져 나오는 스케일링현상이 나타난다. 이와 같이 피부가 건성화되는 것은 각질세포층의 수분함량이 정상피부에 비해 적기 때문이다. 이 외에, 건강한 피부라 할지라도 혹독한 외부환경 즉, 바람, 추운 날씨, 햇빛, 세안, 면도 등에 의해 수분 부족현상이 일어나 피부상태가 나빠지기도 한다.On the other hand, it is known that the keratinocyte layer has a hydrophilic water retention ability called a natural moisturizing factor (NMF) and plays an important role in moisturizing the skin. Normal keratinocyte layer maintains skin smoothness and softness and maintains normal body protection function when moisture is maintained at about 10 to 30%. However, when the moisture content of the keratinocyte layer is less than 10%, the skin becomes rough and the protective function of the body is lost and the aging phenomenon occurs. For example, in the case of dry skin, the keratinocyte aggregation is weakened, and a scaling phenomenon appears in which the keratinocytes are peeled off like scales from the skin surface. The reason why the skin is dried in this way is that the moisture content of keratinocyte layer is smaller than that of normal skin. In addition to this, even healthy skin may be in a harsh environment, such as wind, cold weather, sunshine, cleansing, shaving, etc., which causes water shortage, which can lead to poor skin condition.

따라서, 피부 각질세포층의 수분함량을 적절히 유지하는 것은 매우 중요하다. 이를 위하여 화장품에는 피지와 유사한 성분이나 NMF 성분 또는 폴리올과 같은 보습제 등이 첨가되어 사용되었다. 예를 들어, 수용성 폴리올로서 수산기(OH 기)가 3개 이상인 글리세린, 솔리톨 등은 뛰어난 보습력을 나타내나 끈적임이 심하여 사용할 때 불쾌감을 느끼게 하며, 수산기(OH 기)가 2개인 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 등은 피부의 부작용이 발생하기도 한다. 또한, 다른 천연보습인자인 피롤리돈 카르복실산 나트륨(PCA-Na), 젖산나트륨(Sodium lactate), 요소 등은 전해성이 강해 화장료의 유화안정성을 해치는 문제점이 있다. 아미노산, 콜라겐, 엘라스틴 등도 보습능력이 있다고 하나 보습능력에 한계가 있었다. Therefore, it is very important to properly maintain the moisture content of the keratinocyte layer. To this end, cosmetics were added with ingredients similar to sebum, moisturizers such as NMF or polyol, and the like. For example, glycerin, solitol and the like having three or more hydroxyl groups (OH groups) as water-soluble polyols exhibit excellent moisture resistance, but they are very sticky and feel uncomfortable when used. Propylene glycol having two hydroxyl groups (OH groups) 3-butylene glycol, etc. may cause side effects of the skin. In addition, other natural moisturizing factors such as sodium pyrrolidonecarboxylate (PCA-Na), sodium lactate, urea, etc., are highly electrolytic, which deteriorates emulsion stability of the cosmetic. Amino acids, collagen, elastin, etc. are also capable of moisturizing, but also had a limited ability to moisturize.

각질층의 수분을 보유할 수 있는 능력은 피지성분과 아미노산, 젖산, 요소 및 무기염 등으로 이루어진 천연보습인자(NMF)에 의해 조절되어질 수 있는데, 피부 외용제에서 천연보습인자와 같이 안전하면서도 사용성이 우수하고, 보습효과가 높은 물질의 개발이 화장품에서 중요한 연구과제 중 하나이다. The ability of the horny layer to retain moisture can be controlled by natural moisturizing factor (NMF), which consists of sebum components, amino acids, lactic acid, urea, and inorganic salts. And the development of a substance with high moisturizing effect is one of the important research subjects in cosmetics.

한편, 최근에는 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다. Meanwhile, in recent years, many cosmetic products using natural products have been developed to reduce skin irritation caused by various chemical substances and the like. In addition to low adverse effects on skin, natural materials have recently become increasingly appreciated as a cosmetic raw material as consumers' response to cosmetics using natural materials has increased.

본 발명자들은 여러 천연물들에 있어서 화장품으로의 응용 가능성을 연구한 결과, 점액을 분비하는 표피를 갖는 어류로부터 수득된 점액을 선정하였으며, 이들 점액에서 항산화, 콜라겐 합성 촉진, 피부 잔주름 개선, 미백, 보습, 피부장벽기능 회복, 아토피 개선 효과, 항염증의 효과를 확인하고, 본 발명을 완성하기에 이른 것이다.The present inventors have studied the applicability of various natural products to cosmetics. As a result, they have found that mucus obtained from fishes having mucus-secreting epidermis is selected from these mucilages and has antioxidants, promotes collagen synthesis, improves skin wrinkles, , Skin barrier function recovery, atopy improvement effect, and anti-inflammatory effect, and completed the present invention.

본 발명은 점액을 분비하는 표피를 갖는 어류로부터 점액을 수득하여 항산화, 콜라겐 합성 촉진, 피부 잔주름 개선, 미백, 보습, 피부장벽기능 회복, 항염증의 효과, 아토피 개선 효과를 가지는 화장료 조성물로 개발하여 제공하는데 그 목적이 있다.
The present invention has been developed as a cosmetic composition having antioxidant activity, promotion of collagen synthesis, improvement of skin wrinkles, whitening, moisturizing, restoration of skin barrier function, anti-inflammatory effect and atopy improvement by obtaining mucus from fish having epidermis secreting mucus The purpose is to provide.

상기의 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 피부로 점액을 분비하는 점액성 표피를 갖는 어류로부터 수득된 점액을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a cosmetic composition characterized by containing mucilage obtained from a fish having mucus epidermis secreting mucus to the skin as an active ingredient.

본 발명에서 ‘피부로 점액을 분비하는’ 소위, ‘점액성 표피’를 갖는 어류란 민물고기, 바닷고기를 막론하고 비늘이 없으면서(메기) 표피가 점액성 물질로 싸여 있거나, 비늘이 체표면에 깊이 파묻혀있는 둥근비늘을 가지고 있으면서 표피가 점액성 물질로 싸여있는 어류를 포함한다. 일 예로는, 바다장어, 뱀장어, 미꾸라지, 미꾸리, 메기, 먹장어 등이 있으며, 작업의 편의상 장어, 먹장어를 사용하는 것이 좋다. In the present invention, a fish having a so-called 'mucous epidermis' that secretes mucus into the skin is a fish which has no scales (catfish) and is covered with a mucous substance, Includes fishes with deeply buried round scales and the epidermis enclosed in mucous material. Examples include sea eel, eel, loach, mudfish, catfish, and horseshoe. For the convenience of work, it is better to use eel and eel.

한편, 본 발명의 화장료 조성물은 점액성 표피를 갖는 어류로부터 수득된 점액을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는데, 조성물 중 첨가되는 점액의 양은 특정한 범위로 한정되는 것은 아니나, 바람직하게는 화장료 조성물 전체에 대해 0.001~30 중량% 함유되는 것이 좋다. 상기 범위 내로 점액을 함유하면 화장료 조성물의 품질 적성을 훼손하지 않으면서 상기의 점액성 표피를 갖는 어류로부터 수득된 점액의 효과가 충분히 발휘되게 된다. On the other hand, the cosmetic composition of the present invention is characterized by containing mucilage obtained from a fish having mucus epidermis as an active ingredient. The amount of mucus added in the composition is not limited to a specific range, but preferably, By weight based on the total weight of the composition. If the mucus is contained in the above range, the effect of the mucilage obtained from the fish having the mucous epidermis can be fully exerted without deteriorating the quality suitability of the cosmetic composition.

한편, 본 발명의 화장료 조성물은 일 예로, 항산화용, 주름 개선용, 피부 미백용, 아토피 개선용, 피부보습용, 피부장벽기능 회복용, 항염증용 중 선택되는 어느 하나의 용도를 가질 수도 있다. On the other hand, the cosmetic composition of the present invention may be used, for example, as any one of antioxidant, wrinkle, skin whitening, atopic dermatitis, skin moisturizing, skin barrier function recovery, .

한편, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 점액성 표피를 갖는 어류로부터 수득된 점액 외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유하는 것도 무방하다.On the other hand, the cosmetic composition according to the present invention may contain, besides the slime obtained from the fish having the mucous epidermis, other ingredients capable of synergizing with the main effect within a range not impairing the main effect of the present invention It is also possible to do.

한편, 본 발명에 따른 조성물은 화장 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제, 예컨대 친수성 또는 친유성 겔화제, 친수성 또는 친유성 활성제, 보존제, 항산화제, 용매, 방향제, 충전제, 차단제, 안료, 흡취제 및 염료를 함유할 수 있다. 이들 다양한 보조제의 양은 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 양이며, 예컨대 조성물 총중량에 대해 0.001 내지 30중량%이다. 다만, 어떠한 경우라도 보조제 및 그 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 악영향을 미치지 않도록 선택될 것이다.Meanwhile, the composition according to the present invention can be used as an adjuvant commonly used in cosmetics such as hydrophilic or lipophilic gelling agents, hydrophilic or lipophilic active agents, preservatives, antioxidants, solvents, perfumes, fillers, ≪ / RTI > The amounts of these various adjuvants are those conventionally used in the art, for example, 0.001 to 30% by weight based on the total weight of the composition. However, in any case, the adjuvant and its proportion will be selected so as not to adversely affect the desirable properties of the cosmetic composition according to the present invention.

한편, 본 발명의 화장료 조성물의 제형은 특정한 것에 한정되는 것은 아니고, 일 예로 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 에멀젼, 연고로 이루어진 기초화장료 제형, 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형 중에서 선택되는 어느 하나인 것이 좋다. 또한, 이는 선택적으로 에어로졸 형태로 피부에 적용될 수도 있고, 고체 형태 예컨대, 스틱의 형태일 수도 있으며, 피부용 케어 제품 및/또는 메이크업 제품으로서 사용될 수도 있다.
Meanwhile, the formulations of the cosmetic composition of the present invention are not limited to specific ones, and examples thereof include emulsions of lotion, gel, water-soluble liquid, cream, essence, oil-in-water type and w / A color cosmetic formulation consisting of an essential cosmetic formulation made of ointment, an underwater type and a water-in-oil type make-up base, a foundation, a skin cover, a lipstick, a lip gloss, a face powder, a two way cake, an eye shadow, a teak color and an eyebrow pencil One is good. It may also optionally be applied to the skin in aerosol form, in solid form, e.g. in the form of a stick, and as a skin care and / or makeup product.

본 발명의 화장료 조성물은 항산화, 콜라겐 합성 촉진, 피부 잔주름 개선, 미백, 보습, 피부장벽기능 회복, 아토피 개선 효과, 항염증 효과가 매우 뛰어나다. The cosmetic composition of the present invention is excellent in antioxidation, promoting collagen synthesis, improving skin wrinkles, whitening, moisturizing, restoring skin barrier function, improving atopy and anti-inflammatory effect.

또한, 본 발명은 어류 점액을 이용하기 때문에 인체에 무해하여 안전성이 우수한 화장료 조성물을 제공할 수 있다.
Further, since the present invention uses fish mucus, it is possible to provide a cosmetic composition which is harmless to human body and is excellent in safety.

이하, 본 발명에 대해 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지 모두 포함한다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail in the following examples. However, the scope of the present invention is not limited to the following examples, and all the equivalent technical ideas are included.

실시예Example : 점액성 표피를 갖는 어류로부터 점액의 수득 : Obtain mucus from fish with mucoid epidermis

점액성 어류로는 시중에서 구할 수 있는 50~60㎝ 정도의 장어와 먹장어를 선별하였으며 일반적 방법으로 사육하였다. 장어와 먹장어를 흐르는 깨끗한 물에 세척하고 비슷한 크기(50~60㎝)만 선별하여 70% 에탄올로 깨끗이 소독하고 정확하게 점액을 얻기 위해 무게를 측정하였다.Eucalyptus and eelgrass of about 50 ~ 60 ㎝, which can be obtained commercially, were selected as the mucous fishes and they were raised by the general method. Eel and eel were washed in clean running water and selected for similar size (50 ~ 60 cm), cleaned with 70% ethanol and weighed to obtain accurate mucilage.

무게를 측정한 장어와 먹장어를 망에 넣어 10분간 분비된 점액을 수집하고 다시 먹이를 준 후 12시간 회복기를 주고 위와 동일한 방법으로 다시 점액을 수집하였으며, 수집한 점액은 냉장보관하였다.
The eels were weighed and ewes were weighed for 10 minutes. After feeding for 12 hours, the mucilage was recovered in the same manner as above. The collected mucilage was stored in the refrigerator.

시험예 1: NBT법을 이용한 항산화 효과 측정 실험Test Example 1: Measurement of antioxidative effect using NBT method

본 시험예는 실시예에서 수득한 장어와 먹장어 점액의 항산화 효과를 측정하기 위해 실험실 조건에서 레티놀과 BHT와 같은 항산화제를 비교샘플로 하여, NBT법을 이용, 항산화 활성을 측정하였다.In this test example, the antioxidative activity of retinol and BHT was compared with the antioxidant such as retinoic acid and BHT in a laboratory to determine the antioxidative effect of the eel and the moxa obtained in the examples.

항산화 효과를 측정하기 위해서 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소를 NBT법에 의해 측정하고 피검물질이 활성산소를 제거하는 효과, 즉 활성산소 소거효과를 평가한다. 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 활성산소를 생성시키고, 이 활성산소가 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium ; NBT)과 반응하여 생성되는 청색을 파장 560nm에서 측정하는 것으로 활성산소 소거율을 측정한다.To measure the antioxidant effect, active oxygen produced by xanthine and xanthine oxidase is measured by the NBT method and the effect of the test substance on the removal of active oxygen, that is, the effect of active oxygen scavenging is evaluated. The active oxygen scavenging rate is measured by measuring the blue color produced by the reaction of active oxygen with Nitro Blue Tetrazolium (NBT) at a wavelength of 560 nm by generating active oxygen by xanthine and xanthine oxidase .

측정방법으로서,As a measuring method,

1. 0.05M Na2CO3 ------------------------------------ 2.4ml1. 0.05M Na2CO3 ------------------------------------ 2.4ml

2. 3mM 크산틴 용액---------------------------------- 0.1ml2. 3 mM xanthine solution - 0.1 ml

3. 3mM EDTA 용액------------------------------------ 0.1ml3. 3 mM EDTA solution ------------------------------------ 0.1 ml

4. BSA 용액----------------------------------------- 0.1ml4. BSA solution ----------------------------------------- 0.1ml

5. 0.72mM NBT 용액---------------------------------- 0.1ml5. 0.72 mM NBT solution - 0.1 ml

6. 크산틴 옥시다제 용액----------------------------- 0.1ml6. Xanthine oxidase solution - 0.1 ml

7. 6mM CuCl2 용액----------------------------------- 0.1ml7. 6 mM CuCl2 solution - 0.1 ml

① 바이엘병에 1,2,3,4,5를 가하고 여기에 시료용액 0.1ml을 첨가하고 25℃에서 10분간 방치한다.① Add 1, 2, 3, 4, and 5 to Bayer's disease, add 0.1 ml of sample solution, and leave at 25 ℃ for 10 minutes.

② 6을 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 20분간의 배양을 개시한다.② Add 6, stir rapidly, and start culturing at 25 ℃ for 20 minutes.

③ 그 후 7을 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.③ Then, 7 is added to stop the reaction, and the absorbance St at 560 nm is measured.

④ 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다.(4) The absorbance Bt is measured by using distilled water instead of the sample solution.

⑤ 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 6대신에 증류수를 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.⑤ Blank of the sample solution should be treated by distilled water instead of 6 to measure the absorbance Bo.

효과의 결과는 수학식 1에 의하여 산출하였으며, 결과는 표 1과 같다.The result of the effect was calculated by Equation (1), and the results are shown in Table 1.

[수학식 1][Equation 1]

억제율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕X 100Inhibition rate (%) = [1- (St-So) / (Bt-Bo)] X 100

St : 시료용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도St: Absorbance at 560 nm after enzyme reaction of sample solution

Bt : 공시험용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도Bt: Absorbance at 560 nm after enzyme reaction of blank test solution

So : 시료용액의 효소 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도So: the absorbance at 560 nm before the reaction in the absence of enzyme in the sample solution

Bo : 공시험용액의 효소 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
Bo: absorbance at 560 nm before the reaction in the absence of enzyme in the blank test solution

시험 결과, 표 1과 같이 0.1% 처리농도에서 시험한 시료 모두에서 우수한 항산화 효과를 확인할 수 있었고, 장어 및 먹장어 점액의 항산화 효과는 88, 90%로 레티놀 및 BHT과 비슷한 우수한 항산화 효과가 있음이 확인되었다.As shown in Table 1, excellent antioxidative effects were observed in all of the samples tested at the treatment concentration of 0.1%, and the antioxidative effects of eel and eel mushroom were 88 and 90%, respectively, indicating excellent antioxidative effects similar to those of retinol and BHT .

시료명Name of sample 처리농도(%)Treatment concentration (%) 항산화효과(%)Antioxidative effect(%) 장어 점액Eel mucus 0.10.1 8888 먹장어 점액Mite mucus 0.10.1 9090 레티놀Retinol 0.10.1 8888 BHTBHT 0.10.1 8484

시험예Test Example 2:  2: DPPHDPPH 법을 이용한 항산화 효과 측정 실험Experiment on antioxidant effect test

본 시험예는 실시예에서 수득한 장어 및 먹장어 점액의 항산화 효과를 측정하기 위해 실험실 조건에서 녹차추출물과 비타민 E와 같은 항산화제를 비교 샘플로 하여 DPPH법을 이용, 항산화 활성을 측정하였다.In order to measure the antioxidant activity of the eel and moxa mushroom obtained in the Examples, this test example was conducted by using the DPPH method with antioxidants such as green tea extract and vitamin E as a comparative sample under laboratory conditions.

DPPH법은 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical (DPPH)라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 활성을 측정한다. 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율을 측정한다.The DPPH method measures antioxidative activity by reducing power using a free radical called 2,2-Di (4-tert-octylphenyl) -1-picrylhydrazyl free radical (DPPH). The degree of reduction of the absorbance by reduction of DPPH by the test substance is compared with the absorbance of the blank test solution and the free radical scavenging ratio is measured at a wavelength of 560 nm.

사용한 시약으로서는 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical (Aldrich Chem. Co., MW=618.76) 0.1mM 용액으로서 61.88mg을 메탄올에 용해하여 100ml로 한다.As a reagent used, 61.88 mg of a 0.1 mM solution of 2,2-Di (4-tert-octylphenyl) -1-picrylhydrazyl free radical (Aldrich Chemical Co., MW = 618.76) was dissolved in methanol to make 100 ml.

측정방법으로서,As a measuring method,

① 96-웰 플레이트에 0.1mM DPPH 용액 0.15ml에 시료용액 0.15ml를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양을 개시한다.(1) Add 0.15 ml of the sample solution to 0.15 ml of 0.1 mM DPPH solution in a 96-well plate, stir rapidly, and start culturing at 25 ° C for 10 minutes.

② 그 후 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.② Measure the absorbance St at 560 nm thereafter.

③ 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다.(3) The absorbance Bt is measured by the same procedure as above except that distilled water is used instead of the sample solution.

④ 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 0.1mM DPPH 용액 대신에 메탄올을 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.(4) Blank of sample solution is measured by the same procedure using methanol instead of 0.1 mM DPPH solution.

효과의 결과는 수학식 2에 의하여 산출하였으며, 결과는 표 2에 나타내었다.The result of the effect was calculated by Equation (2), and the results are shown in Table 2.

[수학식 2]&Quot; (2) "

억제율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕X 100Inhibition rate (%) = [1- (St-So) / (Bt-Bo)] X 100

St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도St: absorbance at 560 nm after free radical scavenging of the sample solution

Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도Bt: absorbance at 560 nm after free radical scavenging of the blank test solution

So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도So: the absorbance at 560 nm before the reaction in the absence of free radicals in the sample solution

Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
Bo: absorbance at 560 nm before the reaction in the absence of the free radical of the blank test solution

시험 결과, 표 2에 나타난 바와 같이 장어 및 먹장어 점액은 0.01% 농도에서 녹차추출물과 비타민E 보다 우수한 항산화 효과를 가지고 있었다.As shown in Table 2, eel and eel mucus had better antioxidative effect than green tea extract and vitamin E at the concentration of 0.01%.

시료명Name of sample 처리농도 (%)Treatment concentration (%) 항산화 효과 (%)Antioxidative effect (%) 장어 점액Eel mucus 0.010.01 5858 먹장어 점액Mite mucus 0.010.01 6161 녹차추출물Green tea extract 0.010.01 4040 비타민 EVitamin E 0.010.01 3737

시험예Test Example 3:  3: inin vitrovitro MMPMMP -1 -One inhibitioninhibition assayassay

본 시험예는 실시예에서 수득한 장어 및 먹장어 점액의 항노화 효과를 측정하기 위해 기질 금속단백질분해효소(MMP-1) 저해 활성을 생화학적 모델에서 측정하였는데, 정제된 콜라게나제 및 이의 기질인 플루오레세인에 접합된 콜라겐과 젤라틴의 이용을 기초로 하였다(EnzChek(상표명) 젤라티나제/콜라게나제 키트, 몰큘라 프루브). This test example measures the inhibitory activity of substrate metalloproteinases (MMP-1) in a biochemical model in order to measure the anti-aging effect of the eel and eel mucus obtained in the examples. The purified collagenase and its substrate (EnzChek® gelatinase / collagenase kit, Molecular Probes), based on the use of collagen and gelatin conjugated to fluorescein.

클로스트리디움 히스토리티컴으로부터 정제된 콜라게나제를 상기 EnzChek (상표명)젤라티나제/콜라게나제 키트내에 공급하였다. 돼지 피부로부터 정제하고 플로오레세인에 접합된 DQ-콜라겐과 0.05M 트리스-HCl, 0.15M NaCl, 5mM CaCl2 및 0.2mM 나트륨 아지드(pH 7.6)로 이루어지는 반응 완충액은 EnzChek(상표명) 젤라티나제/콜라게나제 키트(몰큘라 프로브스)를 이용하였다. 장어 및 먹장어 점액은 상기 반응 완충액 내에 용해시켰다. 이는 4; 2; 0.4; 0.2; 0.1%(w/v)에서 테스트하였다. 테스트 추출물의 희석액은 25ug/ml의 DQ-콜라겐 및 0.1U/ml의 콜라게나제와 함께 실온에서 15분, 45분, 120분 동안 항온처리하였다.The collagenase purified from Clostridium histiochem was supplied into the EnzChek (TM) gelatinase / collagenase kit. The reaction buffer consisting of DQ-collagen purified from porcine skin and conjugated to fluorescein and 0.05 M Tris-HCl, 0.15 M NaCl, 5 mM CaCl2, and 0.2 mM sodium azide (pH 7.6) was diluted with EnzChek gelatinase / Collagenase kit (Molecular Probes) was used. Eel and eel mucus were dissolved in the reaction buffer. This is 4; 2; 0.4; 0.2; 0.1% (w / v). The dilution of the test extract was incubated with DQ-collagen at 25 ug / ml and 0.1 U / ml collagenase for 15, 45 and 120 minutes at room temperature.

각각의 실험조건에서 콜라게나제와 DQ-콜라겐 혼합물에 상응하는 대조용 혼합물 (control)도 동일하게 항온처리하였다.In each experimental condition, the control mixture corresponding to the collagenase and DQ-collagen mixture was similarly incubated.

또한, 각각의 실험 조건에서 Blank, 이하 '효소 비함유 blank'이라 칭하는 샘플은 DQ-콜라겐의 존재 및 콜라게나제의 부재하에서 항온처리하였다. 각각의 실험은 3회 수행하였다.Also, in each experimental condition, a sample called Blank, hereinafter referred to as an " enzyme-free blank " was incubated in the presence of DQ-collagen and in the absence of collagenase. Each experiment was performed three times.

15분, 45분, 120분 경과 후 DQ-콜라겐의 분해에 상응하는 신호는 형광측정기 (여기:485nm, 방출 505nm)로 측정하였다.After 15 minutes, 45 minutes and 120 minutes, the signal corresponding to the decomposition of DQ-collagen was measured with a fluorescence analyzer (excitation: 485 nm, emission 505 nm).

‘효소 비함유 blank' 형광값을 기준으로 하여 각각의 샘플의 형광값을 측정하였다. 결과는 샘플당 형광 단위 및 대조군에 대한 변이율(%)로 나타냈다.The fluorescence value of each sample was measured based on the 'enzyme-free blank' fluorescence value. The results were expressed as fluorescence units per sample and percent change relative to the control.

결론적으로 선택된 실험 조건하에서 0.04 내지 4%(v/v)에서 테스트된 장어 및 먹장어 점액은 투여량 의존성으로 항콜라게나제/젤라티나제 활성을 보유하였다.In conclusion, eel and eel mucus tested at 0.04 to 4% (v / v) under selected experimental conditions possessed anti-collagenase / gelatinase activity in a dose-dependent manner.

결과는 표 3에 나타난 바와 같이 장어 및 먹장어 점액은 0.04% 처리 시 클로스트리디움 콜라게나제의 콜라겐 분해활성의 83%를 억제하였으며 이는 녹차추출물의 저해 효과보다 우수한 것으로 확인되었다.As a result, as shown in Table 3, it was confirmed that 83.4% of the collagenolytic activity of clostridium collagenase was inhibited by 0.04% of eel and eel mucus, which is superior to the inhibitory effect of green tea extract.

실험샘플Experimental Sample 저해율 (%)Inhibition rate (%) 처리농도 (%) 0.02Treatment concentration (%) 0.02 처리농도 (%) 0.04Treatment concentration (%) 0.04 장어 점액Eel mucus 6868 8585 먹장어 점액Mite mucus 6767 8383 레티놀Retinol 00 99 녹차추출물Green tea extract 5555 7070

시험예Test Example 4: 자외선 조사 후 장어 및 먹장어 점액에 의한  4: Euphorbia and Euphorbia after UV irradiation MMPMMP -1 발현억제 평가-1 expression inhibition evaluation

본 시험예는 실시예에서 수득한 장어 및 먹장어 점액의 UV 조사 및 시료 첨가 후 MMP-1 농도를 측정하기 위해서 ELISA를 실시하였다.In this test example, ELISA was performed to measure the concentration of MMP-1 after UV irradiation and sample addition of eel and eel mucus obtained in the examples.

UV 챔버를 이용하여 인간 진피 섬유아세포에 UVA를 5J/㎠의 에너지로 조사한다. 자외선 조사량과 배양시간은 예비 실험을 통하여 섬유아세포에서 MMP 발현량이 최대가 되는 조건을 확립하였다. 음성 대조군은 은박지로 싸서 UVA의 환경에 같은 시간 유지하였다. UVA 방출량은 UV 라디오미터를 이용하여 측정하였다. UVA가 조사되는 동안의 세포는 이전에 분주된 배지 그대로이고 UVA를 조사 한 후 샘플이 들어간 배지로 교환하여 24시간 배양 후 배지를 회수하여 96-웰 플레이트에 코팅하였다. 일차항체(MMP-1 (Ab-5) 단일클론항체와 MMP-2(Ab-3) 단일클론항체)를 처리하고 37℃ 에서 60분 반응시켰다. 이차항체인 안티마우스 IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 다시 60분 정도 반응시킨 후, 알카린 포스파타제 기질 용액(1mg/mlρ-nitrophenyl phosphate in diethanolamine 완충용액)을 상온에서 30분간 반응시키고 마이크로플레이트 리더로 405nm 에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 시료를 첨가하지 않은 것을 사용한다.UVA is irradiated to human dermal fibroblasts at an energy of 5 J / cm < 2 > using a UV chamber. Ultraviolet irradiation dose and incubation time were established by preliminary experiment to maximize MMP expression level in fibroblasts. Negative controls were wrapped in silver foil and kept in the UVA environment for the same amount of time. UVA emission was measured using a UV radiometer. During UVA irradiation, cells were kept in the previously dispensed medium, irradiated with UVA, exchanged with the medium containing the sample, cultured for 24 hours, and the medium was recovered and coated on a 96-well plate. The primary antibody (MMP-1 (Ab-5) monoclonal antibody and MMP-2 (Ab-3) monoclonal antibody) was treated and reacted at 37 ° C for 60 minutes. After incubation for 60 minutes with a secondary antibody, anti mouse IgG (alkaline phosphatase conjugated), the reaction was carried out at room temperature for 30 minutes with an alkaline phosphatase substrate solution (1 mg / ml ρ-nitrophenyl phosphate in diethanolamine buffer) Absorbance at 405 nm. As a control group, a sample to which no sample is added is used.

결과는 표 4에 나타난 바와 같이, 자외선 조사시에 발현이 유도되는 MMP-1에 대하여, 시료를 처리하지 않은 대조군에 비하여 장어 및 먹장어 점액은 20% 이상의 억제율을 보였으며, 이는 대조군으로 사용한 레티놀의 억제율보다 우수한 결과이다.The results are shown in Table 4. As shown in Table 4, the inhibition rate of MMP-1 induced by UV irradiation was 20% or more, compared to the control group without treatment, Which is superior to the inhibition rate.

시험군Test group 처리농도 (%)Treatment concentration (%) MMP-1 발현억제율(%)MMP-1 expression inhibition rate (%) 대조군Control group -- -- 장어 점액Eel mucus 0.10.1 2525 먹장어 점액Mite mucus 0.10.1 2424 레티놀Retinol 0.10.1 2121

시험예Test Example 5: B16F1  5: B16F1 멜라노싸이트를Melanocyte 이용한 멜라닌 생성 억제효과 측정 실험 Experiment to measure the inhibitory effect of melanin formation

본 실시예는 실시예에서 수득한 장어 및 먹장어 점액의 미백효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라노싸이트에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백 효과를 판단한 것이다.The present example is to determine the whitening effect of B16F1 melanocyte by checking the degree of inhibition of melanin formation in order to confirm the whitening effect of the eel and mite mucus obtained in the examples.

본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포균주이며, 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC (American Type Culture Collection, 기탁번호 : 6323)로부터 분양받아 사용하였다.The B16F1 melanocyte used in this example is a cell strain derived from a mouse, and is a cell that secretes a melanin pigment called melanin. During the artificial culture of these cells, samples were treated to compare the degree of reduction of melanin pigment. The B16F1 melanocyte used in this example was purchased from ATCC (American Type Culture Collection, Accession No. 6323).

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다. B16F1 멜라노싸이트를 6-웰 플레이트에 각 웰당 2 x 106 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 trypsin-EDTA로 떼어 낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다.The melanin biosynthesis inhibitory effect of B16F1 melanocyte was measured as follows. B16F1 melanocyte was dispensed in a 6-well plate at a concentration of 2 x 10 6 cells per well and the cells were incubated for 72 hours at a concentration that did not induce toxicity. After incubation for 72 hours, cells were detached with trypsin-EDTA, and the number of cells was measured and centrifuged to recover the cells.

세포내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan : Cancer Res ., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1 ml를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리 (3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH (10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405 nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 저해율(%)은 수학식 3에 의하여 계산하였으며, IC50값은 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.Quantification of intracellular melanin was carried out using Lotan: Cancer Res . , 40: 3345-3350, 1980). Cell pellet was washed once with PBS, and 1 ml of homogenization buffer solution (50 mM sodium phosphate, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) was added and vortexed for 5 minutes to disrupt the cells. After centrifugation (3,000 rpm, 10 min), 1N NaOH (10% DMSO) was added to the cell filtrate to dissolve the extracted melanin, and the absorbance of melanin was measured at 405 nm with a microplate reader. The inhibition rate (%) of melanin formation was measured. Melanogenesis inhibition rate (%) of B16F1 melanoma site was calculated by the equation 3, IC 50 value is the concentration of a substance that inhibits melanin production by 50%.

[수학식 3]&Quot; (3) "

저해율 (%) = [(A-B)/A]x 100Inhibition rate (%) = [(A-B) / A] x 100

A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양A: Amount of melanin in wells to which no sample was added

B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양
B: Amount of melanin in the well to which the sample was added

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 억제효과를 시험한 결과 하기 표 5에서와 같이 장어 및 먹장어 점액의 IC50값은 각각 0.10%와 0.09%로, 기존의 미백제인 하이드로퀴논, 알부틴, 유용성 감초 추출물, 상백피 추출물 등에 비해 비슷하거나 우수한 효과를 나타내는 것을 알 수 있었다.As shown in Table 5, the IC 50 values of eel and eel mucus were 0.10% and 0.09%, respectively, and the conventional whitening agents hydroquinone, arbutin, oil soluble licorice extract, The results are similar or superior to those of the conventional method.

시료명Name of sample 멜라닌 생성 억제효과(IC50)Melanin formation inhibitory effect (IC 50 ) 장어 점액Eel mucus 0.10%0.10% 먹장어 점액Mite mucus 0.09%0.09% 하이드로퀴논Hydroquinone 0.06%0.06% 알부틴Arbutin 0.31%0.31% 상백피 추출물Eucalyptus extract 0.12%0.12% 유용성 감초 추출물Usefulness Licorice extract 0.04%0.04%

시험예Test Example 6: 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과 6: Inhibitory effect of inflammatory cytokine expression by ultraviolet irradiation

본 시험예는 실시예에서 수득한 장어 및 먹장어 점액의 항염증효과를 확인하기 위해 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제 정도를 평가한 것이다.This test example evaluates the degree of suppression of inflammatory cytokine expression expressed by ultraviolet irradiation to confirm the anti-inflammatory effect of the eel and eel mucus obtained in the examples.

사람의 표피조직에서 분리한 섬유아세포(Fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5X104개씩 넣고 24시간동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350㎕를 첨가하였다. 여기에 평가하고자 하는 장어 및 먹장어 점액을 처리한 후 5시간동안 배양하였다. 배양 상층액을 150㎕취하여 IL-1α를 정량함으로서 장어 및 먹장어 점액의 염증성 사이토카인 발현억제효과를 판단하였다. IL-1α의 양은 효소면역분석법 (Enzyme-linked Immunosorbent Assay;ELISA)을 이용하여 정량화하였으며, IL-1α의 생성율은 수학식 4에 의해 계산하였다.Fibroblasts isolated from human epidermal tissue were placed in a 24-well test plate in an amount of 5 × 10 4 and adhered for 24 hours. Each well was washed once with PBS and 500 占 퐇 of PBS was added to each well. After irradiating the fibroblasts with 10 mJ / cm 2 of ultraviolet light using an ultraviolet B (UVB) lamp (Model: F15T8, UVB 15W, Sankyo Dennki, Japan), PBS was removed and the cells were cultured in DMEM Medium) was added. The eel and eel mucus to be evaluated were treated and cultured for 5 hours. The inhibitory effect of IL-1α on the expression of inflammatory cytokines in the eel and eel mucus was determined by taking 150 μl of the culture supernatant. The amount of IL-1α was quantitated using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and the production rate of IL-1α was calculated by Equation (4).

[수학식 4]&Quot; (4) "

염증성 사이토카인 발현 억제율(%) =〔1-(St-Bo)/(Bt-Bo)〕X 100Inhibitory rate of inflammatory cytokine expression (%) = [1- (St-Bo) / (Bt-Bo)] X 100

Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량Bo: IL-1? Production in wells without UV irradiation

Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량Bt: IL-1? Production in wells irradiated with ultraviolet light and not treated with the sample

St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 IL-1α 생성량
St: IL-1α production in wells irradiated with ultraviolet light and treated with the sample

실험결과, 표 6에 나타난 바와 같이 장어 및 먹장어 점액은 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1α의 생성을 0.02% 농도에서 각각 67%, 65% 억제하여, 자외선에 의한 염증 발생을 낮은 농도에서 효과적으로 방어함을 알 수 있었다.As shown in Table 6, eel and eel mucus inhibited the production of IL-1α, which is an inflammatory cytokine caused by ultraviolet light, by 67% and 65%, respectively, at a concentration of 0.02% I could see the defensive.

시료명Name of sample 처리농도 (%)Treatment concentration (%) 염증성 사이토카인 발현 억제율 (%)Inhibitory rate of inflammatory cytokine expression (%) 장어 점액Eel mucus 0.010.01 3535 0.020.02 6767 먹장어 점액Mite mucus 0.010.01 3434 0.020.02 6565

시험예Test Example 7:  7: 피부미백Skin whitening 측정 실험 Measurement experiment

본 시험예는 실시예에서 수득한 장어 점액을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 미백효과를 비교예 1과 비교실험을 행하여 평가하였다.This test example was prepared by preparing a cosmetic preparation containing the eel mucus obtained in the examples, and evaluating the skin whitening effect in humans by performing a comparative experiment with Comparative Example 1.

비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 7에 나타낸 바와 같았다. 우선 표 7에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존하였다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림(실시예 1, 비교예 1)을 제조한다. 실험자 (20세-35세의 여성) 10명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 1에서 제조된 크림을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. 시험 완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 피부색의 변화를 크로마메타 (Minolta CR300)를 이용하여 색의 밝기 변화(ΔL)를 측정하고, 복수의 숙련자에 의한 객관적 육안 관찰과 피검자에 의한 주관적 육안관찰을 실시하여 하기 등급 분류에 따라 효과를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다. 이때 미백효능 정도를 다음의 7등급으로 분류하여 평가하였다.The cosmetic composition used in the comparative experiment was in the form of a cream, and its composition was as shown in Table 7. First, the b) image recorded in Table 7 was heated and stored at 70 ° C. A) was added to the mixture, followed by preliminary emulsification, homogeneously emulsified with a homomixer, and then gradually cooled to prepare a cream (Example 1, Comparative Example 1). The cream prepared in Example 1 was applied to the right side of the face and the cream prepared in Comparative Example 1 was applied to the left side of the face for 2 consecutive months for 10 consecutive subjects (10 to 20 years old female) . After completion of the test, the skin of the applied area on both right and left sides of the face was analyzed by image analyzer and color change (ΔL) of the color was measured using a Minolta CR300, and an objective visual observation by a plurality of expert Subjective visual observation was performed and the effect was measured according to the following classification. The results are shown in Table 8 below. At this time, the degree of whitening efficacy was classified into the following seven grades and evaluated.

[미백효능 평가 기준][Evaluation criteria for whitening efficacy]

-3: 매우 악화, -2: 악화, -1: 약간 악화, 0: 변화 없음, 1: 약간 개선, 2: 개선, 3: 매우 개선
-3: very bad, -2: worse, -1: slightly worse, 0: no change, 1: slight improvement, 2:

표 8에서 나타낸 바와 같이 장어 점액을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 미백효과가 우수함을 알 수 있었다.As shown in Table 8, it was found that the whitening effect was excellent in the facial skin of an experimenter who applied cream containing eel mucus.

원료Raw material 실시예 1Example 1 비교예 1Comparative Example 1 end 스테아릴 알콜Stearyl alcohol 88 88 스테아린산Stearic acid 22 22 스테아린산 콜레스테롤Stearic acid cholesterol 22 22 스쿠알란Squalane 44 44 2-옥틸도데실알콜2-octyldodecyl alcohol 66 66 폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르Polyoxyethylene (25 mole addition) alcohol ester 33 33 글리세릴모노스테아린산 아스테르Glyceryl monostearate Aster 22 22 유동파라핀Liquid paraffin 55 55 I 장어 점액Eel mucus 55 -- 프로필렌글리콜Propylene glycol 55 55 글리세린glycerin 44 44 정제수Purified water to 100to 100 to 100to 100

주)단위: 중량%
Note) Unit: wt%

피부색의
밝기 변화(ΔL)
Skin-colored
The brightness change (? L)
숙련자의객관적 평가Objective evaluation of expert 피검자의주관적 평가Subjective evaluation of the subject
실시예 1Example 1 비교예 1Comparative Example 1 실시예 1Example 1 비교예 1Comparative Example 1 평균값medium 3.43.4 2.72.7 1.71.7 2.92.9 1.81.8

ΔL= 시험 후 피부 밝기 - 시험 전 피부 밝기
ΔL = skin brightness after test - skin brightness before test

시험예Test Example 8:  8: 피부잔주름Skin wrinkles 개선 효과 측정 실험 Improvement effect measurement experiment

본 시험예는 실시예에서 수득한 장어 점액을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 잔주름 개선효과와 피부미용효과를 비교실험을 행하여 평가하였다. 비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 7에 나타낸 바와 같았다. 실시예 1 및 비교예 1에서 제조된 크림을 실험자(20세-35세의 여성) 10명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 1에서 제조된 크림을 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. 실험완료 후 피부 잔주름 완화효과는 제품 사용전과 2개월간 사용 후에 안면 눈꼬리 주위의 주름을 실리콘 수지 복사물(레플리카)로 채취하고, 이것을 피부 미세 주름 장치와 피부 영상 분석기로 눈가 잔주름의 상태를 비교하였다.In this test example, a cosmetic preparation containing the eel mucus obtained in the Examples was prepared, and the skin wrinkle-improving effect and the skin-cosmetic effect were evaluated in humans. The cosmetic composition used in the comparative experiment was in the form of a cream, and its composition was as shown in Table 7. The cream prepared in Example 1 and Comparative Example 1 was applied to 10 subjects (20 to 35 year-old female), the cream prepared in Example 1 on the right side of the face, the cream prepared in Comparative Example 1 on the left side of the face Were applied twice a day for two consecutive months. After the completion of the experiment, the effect of alleviating the skin wrinkles was measured by using a silicone resin replica (replica) before and after use for 2 months, and the wrinkles around the eyes were compared with the skin wrinkles and skin image analyzer.

표 9는 실시예 1에서 제조된 크림을 사용한 실험자의 눈가 평균 잔주름 깊이 및 주름 감소율을 비교예 1의 크림을 사용한 실험자와 비교한 것이다. 표 9에서 나타난 바와 같이 장어 점액을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 눈주위 피부에서 피부 주름 개선 효과가 우수함을 알 수 있었다.Table 9 compares the average fine wrinkle depth and wrinkle reduction ratio of the eye of the experimenter using the cream prepared in Example 1 with the creamer of Comparative Example 1. As shown in Table 9, it was found that the skin wrinkle improving effect was excellent in the skin around the eyes of the subjects who applied the cream containing the eel mucus.

실시예 1Example 1 비교예 1Comparative Example 1 사용 전Before use 2개월 사용 후After 2 months use 사용 전Before use 2개월 사용 후After 2 months use 평균 잔주름 깊이Average fine wrinkle depth 0.1900.190 0.1560.156 0.1880.188 0.1810.181 사용전 대비 주름 감소율(%)Wrinkle reduction rate before use (%) 17.89 %17.89% 3.72 %3.72%

n=10, p<0.05
n = 10, p < 0.05

시험예Test Example 9 : 피부 보습효과 측정 실험 9: skin moisturizing effect measurement experiment

본 시험예는 실시예에서 수득한 장어 점액을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 보습효과를 비교예 2∼5와 비교실험을 행하여 평가하였다.This test example was prepared by preparing cosmetic preparations containing the eel mucus obtained in the examples and evaluating skin moisturizing effects in humans by performing comparative experiments with Comparative Examples 2 to 5.

비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 10에 나타내 바와 같았다. 우선 표 10에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존한다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림(실시예 2, 비교예 2~5)을 제조하였다. 실험자 20명을 대상으로 하박부에 실시예 2, 비교예 2~5를 바르고, 약 90분 후에, 바르기 전과 바른 후의 보습 능력을 Corneometer(CM 820)로 △Hydration을 평가하였다.The cosmetic composition used in the comparative experiment was in the form of a cream, and the composition thereof was as shown in Table 10. First, the b) image recorded in Table 10 is heated and stored at 70 ° C. A) was added to the mixture, followed by preliminary emulsification, uniformly emulsified with a homomixer, and then gradually cooled to prepare a cream (Example 2, Comparative Examples 2 to 5). Twenty subjects of the experiment were applied to the lower part of the Example 2 and Comparative Examples 2 and 5, and about 90 minutes later, the humidifying ability before and after the application was evaluated by a Corneometer (CM 820).

원료Raw material 실시예 4Example 4 비교예 2Comparative Example 2 비교예 3Comparative Example 3 비교예 4Comparative Example 4 비교예 5Comparative Example 5 end 스테아릴 알콜Stearyl alcohol 88 88 88 88 88 스테아린산Stearic acid 22 22 22 22 22 스테아린산 콜레스테롤Stearic acid cholesterol 22 22 22 22 22 스쿠알란Squalane 44 44 44 44 44 2-옥틸도데실알콜2-octyldodecyl alcohol 66 66 66 66 66 폴리옥시에틸렌(25몰부가)
알콜에스테르
Polyoxyethylene (25 mole addition)
Alcohol ester
33 33 33 33 33
글리세릴모노스테아린산
아스테르
Glyceryl monostearate
Aster
22 22 22 22 22
I 장어 점액Eel mucus 55 -- -- -- -- 글리세린glycerin -- -- 55 -- -- Na-히알루론산염Na-hyaluronate -- -- -- 55 -- 1,3-부틸렌글라이콜1,3-butylene glycol -- -- -- -- 55 정제수Purified water to 100to 100 to 100to 100 to 100to 100 to 100to 100 to 100to 100

주)단위: 중량%
Note) Unit: wt%

구분division 실시예 2Example 2 비교예 2Comparative Example 2 비교예 3Comparative Example 3 비교예 4Comparative Example 4 비교예 5Comparative Example 5 보습제 종류Type of moisturizer 장어 점액Eel mucus -- 글리세린glycerin Na-히아루론산염Na-hyaluronate 1,3-부틸렌글라이콜1,3-butylene glycol Corneometer
(△Hydration)
Corneometer
(△ Hydration)
1818 55 1010 1313 99

시험결과, 표 11에서 나타낸 바와 같이 장어 점액을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 보습효과가 우수함을 알 수 있었다.
As a result of the test, as shown in Table 11, it was found that the moisturizing effect was excellent in the facial skin of an experimenter who applied cream containing eel mucus.

시험예Test Example 10 :  10: 경피수분손실량Percutaneous water loss (( TEWLTEWL :  : TransTrans -- epidermalepidermal waterwater lossloss ) 측정) Measure

본 시험예는 실시예에서 수득한 장어 점액을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 경피수분손실량(TEWL : Trans-Epidemal Water Loss)을 Tewameterr(TM300, Courage and Khazaka Electronic Co., Germany)를 이용하여 비교실험을 행하여 평가하였다. 비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 상기 표 10에 나타내 바와 같았다. This test example was conducted by preparing a cosmetic composition containing the eel mucus obtained in the examples and using a Tewameterr (TM300, Courage and Khazaka Electronic Co., Germany) for trans-epidemic water loss (TEWL) And a comparative experiment was conducted. The cosmetic composition used in the comparative experiment was in the form of a cream, and the composition thereof was as shown in Table 10 above.

20 ~ 40대 여성 40명을 대상으로 오른쪽과 왼쪽 얼굴에 각 시료를 바르고 눈가에서 3cm 우측으로 1cm 아래로 떨어진 부위를 바르기 전과 바른 후 1시간, 2시간, 4시간, 6시간의 경피수분손실량을 Tewameterr(TM300, Courage and Khazaka Electronic Co., Germany)를 이용하여 3회 측정하여 평균값을 사용하여 경피수분손실량을 평가하였다.Each sample was applied to the right and left faces of 40 women in their 20s and 40s. Percutaneous water loss before, 1, 2, 4, and 6 hours was applied before and 3 cm from the eye. The results are shown in Table 1. The transdermal water loss was measured using a Tewameter (TM300, Courage and Khazaka Electronic Co., Germany) three times and the mean value was evaluated.

구분division 1시간1 hours 2시간2 hours 4시간4 hours 6시간6 hours 실시예 2Example 2 14.714.7 11.511.5 9.69.6 7.27.2 비교예 2Comparative Example 2 18.618.6 16.716.7 13.513.5 10.810.8 비교예 3Comparative Example 3 16.816.8 14.114.1 12.212.2 9.59.5 비교예 4Comparative Example 4 15.415.4 14.614.6 11.911.9 9.79.7 비교예 5Comparative Example 5 15.515.5 13.813.8 11.411.4 9.29.2

표 12에서 나타낸 바와 같이, 경피수분손실량을 측정한 결과, 장어 점액을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 경피수분손실량이 감소했음을 알 수 있었다.
As shown in Table 12, the amount of transdermal water loss was measured. As a result, it was found that the amount of transdermal water loss was reduced in the facial skin of an experimenter who applied cream containing eel mucus.

시험예Test Example 11 : 아토피 개선 효과 11: atopy improvement effect

본 시험예는 상기 실시예1과 비교예 1의 화장료에 대하여 아토피가 있는 사람을 대상으로 아토피 개선 효과를 비교실험을 행하여 평가하였다.This test example was evaluated by comparing the cosmetic compositions of Example 1 and Comparative Example 1 with those of atopic individuals.

아토피가 있는 실험자(3세-40세) 20명을 대상으로 이중 10명에게는 아토피 피부 부위에 실시예 1에서 제조된 크림을, 나머지 10명에게는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 4주간 도포하였다. 제품 도포 전(0주), 제품 도포 4주 후에 피험자의 시험 부위의 아토피 피부염 중증도, IgE 변화, 산호성 백혈구(Eosinophil) 변화, 수분함유량, 피부산성도를 각각 측정하였다. 4주간 시험에 참여한 모든 피험자들에게서 이상반응은 없었다. Twenty subjects (20 to 40 years old) with atopic skin were examined for the cream prepared in Example 1 for atopic skin area and the cream prepared in Comparative Example 1 for the remaining 10 subjects twice per day And applied continuously for 4 weeks. Atopic dermatitis severity, IgE change, coral leucocyte (Eosinophil) change, moisture content, and skin acidity were measured before and 4 weeks after product application (0 week). There were no adverse events in all subjects participating in the 4-week study.

표 13에는 실시예 1 및 비교예 1에서 제조된 크림을 사용한 실험자의 아토피 개선효과를 비교한 것을 나타내었다.Table 13 shows the comparison of the effect of improving the atopy of the experimenter using the cream prepared in Example 1 and Comparative Example 1.

시료명Name of sample 아토피 피부염 중증도Atopic dermatitis severity IgE 변화IgE change 산호성 백혈구 변화Coral leukocyte change 수분함유량Moisture content 피부산성도Skin acidity I'm after I'm after I'm after I'm after I'm after 실시예 1Example 1 37.5037.50 29.2129.21 434.1434.1 318.6318.6 314314 247247 25.8525.85 26.9026.90 5.7235.723 6.0686.068 비교예 1Comparative Example 1 37.7637.76 33.0533.05 446.8446.8 366.4366.4 320320 283283 26.3526.35 25.0025.00 5.7115.711 5.8255.825

n=20, p<0.05
n = 20, p < 0.05

표 13에 나타난 바와 같이, 아토피 피부 진단 기준이 되는 아토피 피부염 중증도, 혈액에서의 IgE 및 산호성 백혈구의 변화, 수분함유량, 피부산성도 등이 본 실시예의 장어 점액을 함유한 크림을 도포한 실험자에서 우수하여 본 발명의 장어 점액은 아토피 개선 효과가 우수함을 알 수 있었다.
As shown in Table 13, it was found that in an experiment in which an atopic dermatitis severity, a change in blood IgE and coral leukocyte, a moisture content, and a skin acidity, which are diagnostic criteria of atopic skin, , It was found that the eel mucus of the present invention is excellent in atopy improvement effect.

Claims (10)

피부로 점액을 분비하는 점액성 표피를 갖는 어류로부터 수득된 점액을 유효성분으로 함유하며,
상기 어류는 바다장어, 뱀장어, 먹장어 및 메기 중 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
A mucilage obtained from a fish having mucus epidermis that secretes mucus into the skin as an active ingredient,
Wherein the fish is any one selected from sea eel, eel, eel, and catfish.
삭제delete 제1항에 있어서,
상기 점액은,
조성물 총 중량에 대해 0.001 ~30.0중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
The mucus-
Wherein the cosmetic composition is contained in an amount of 0.001 to 30.0% by weight based on the total weight of the composition.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
항산화용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
In the cosmetic composition,
Wherein the composition is an antioxidant.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 미백용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
In the cosmetic composition,
Wherein the cosmetic composition is for skin whitening.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 주름 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
In the cosmetic composition,
Wherein the cosmetic composition is for improving skin wrinkles.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 보습용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
In the cosmetic composition,
Wherein the composition is for moisturizing the skin.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
아토피 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
In the cosmetic composition,
Wherein the cosmetic composition is for improving atopy.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 장벽 기능 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
In the cosmetic composition,
Wherein the cosmetic composition is for improving the skin barrier function.
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
항염증용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method according to claim 1,
In the cosmetic composition,
Lt; RTI ID = 0.0 > anti-inflammatory < / RTI >
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