KR101439783B1 - Maximowiczia Chinensis Extracts For Preventing, Treating Muscular Dystrophy And Manufacturing Method of thereof - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 오미자 추출물을 함유하는 근육질환 예방 및 개선용 조성물과 그 제조방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 근육 단백질 붕괴에 관여하는 mRNA를 분석하고, 상기 mRNA의 발현을 저해하면서 근육 단백질 합성에 관여하는 mRNA 발현의 활성을 높여 근위축 증상에 대한 방지 및 개선시키는 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물과 그 제조방법에 관한 것이다.TECHNICAL FIELD The present invention relates to a composition for preventing and improving muscle diseases containing an extract of Omija and a method for producing the same. More specifically, the present invention relates to a method for analyzing mRNA involved in muscle protein degradation, which comprises inhibiting the expression of mRNA and enhancing mRNA expression activity involved in muscle protein synthesis, thereby preventing or ameliorating atrophy symptoms, And to a method for preparing the same.
근위축(Muscular Dystrophy)은 노화, 기계적 자극의 부재, 기아 및 암 등의 다양한 원인으로 발생된다. 근육 퇴화는 일차적으로 근원섬유 단백질의 유의적인 손실로부터 생기기 때문에, 근력 및 운동 능력이 감소한다. 예컨대, 비록 운동 또는 다른 대응책들(예를 들어, 전기 자극)이 계속적으로 가해진다고 해도(예를 들어, 장기간 우주 비행 동안 우주비행사들에서 일주일마다 근력의 1 내지 3% 손실), 우주비행 또는 장애조건들과 같이 불가피하게 근육 퇴화가 진행된다. 따라서, 기계적 자극의 대안 또는 기계적 자극에 대한 부가안중 어느 것이든 우주 비행사를 돕거나 수행능력을 더 높이기 위한 장애 조건을 극복할 수 있는 다른 대응책에 대한 연구가 요구된다. 그러한 대응책에 대한 적당한 접근으로 근원섬유 단백질들의 위축을 유도하는 상태 하에서도 근육량을 유지하도록 도울 수 있는 천연물 유래 생물소재를 이용하는 것이 있다.Muscular dystrophy is caused by various causes such as aging, lack of mechanical stimulation, starvation and cancer. Muscle regression occurs primarily from significant loss of myofibrillar proteins, resulting in decreased muscle and athletic performance. For example, even though motion or other countermeasures (e.g., electrical stimulation) are applied continuously (e.g., 1 to 3% loss of muscle strength per week in astronauts during long-term space flight) As with the conditions, muscle regression inevitably proceeds. Therefore, research on other countermeasures to overcome obstacles to assist astronauts or to improve their ability to perform, either as alternatives to mechanical stimuli or mechanical stimuli, is required. Derived biological material that can help maintain muscle mass under conditions that induce atrophy of myofibrillar proteins with a proper approach to such countermeasures.
근육량은 근육 단백질의 합성 및 분해율의 균형의 결과인 것으로 입증되어 있다. 근육 단백질 합성의 경우, 포유동물 타켓 rapamycin (mTOR)에 대한 클래스 I phosphoinositide-3 kinase(PI3K)와 Akt/protein kinase B(PKB)과 관련된 신호전달경로는 합성대사 과정을 촉진하는 것으로 알려져 있다. 이 후, mTOR의 인산화가 그 하부 경로의 p70/S6K를 활성화하여 리보좀 단백질 성분(예를 들어, S6)의 인산화를 통해 mRNA 번역을 촉진한다.Muscle mass has been demonstrated to be a result of the synthesis of muscle proteins and the balance of degradation rates. In the case of muscle protein synthesis, the signaling pathway associated with class I phosphoinositide-3 kinase (PI3K) and Akt / protein kinase B (PKB) on mammalian target rapamycin (mTOR) is known to promote synthetic metabolism. Phosphorylation of mTOR then activates p70 / S6K in its downstream pathway and promotes mRNA translation through phosphorylation of the ribosomal protein component (e. G., S6).
다시 말해, 근육 단백질 분해는 forkhead box O (FoxO)와 유비퀴틴-프로테아좀 시스템으로 구성된 신호전달 경로에 의해 일차적으로 조절된다. 이 경로에서, Akt의 활성화가 감소되면 FoxO를 통해 atrogin-1/muscle atrophy F-box (MAFbx) 및 muscle RING Finger 1(MuRF1)를 포함하는 근특이적 E3 리가아제의 발현을 촉진시키고 이는 단백질 분해로 이어진다.In other words, muscle protein degradation is primarily regulated by the signaling pathway consisting of the forkhead box O (FoxO) and the ubiquitin-proteasome system. In this pathway, decreased activation of Akt promotes the expression of muscle-specific E3 ligase, including atrogin-1 / muscle atrophy F-box (MAFbx) and muscle RING Finger 1 (MuRF1) through FoxO, Respectively.
중요한 것은, 근육 분해 경로의 활성 정도가 근형질 및 핵에서 몇 개의 인자들에 의해 영향을 받을 수 있다고 보고 되어 있다. 첫째, 글루코코티코이드의 생합성 물질 중 하나인 덱사메타손(DEX)은 PI3K 및 Akt 활성을 억제하여 FoxO 및 E3 리가아제 활성을 증가시킴으로써 근위축을 촉진한다. 이들 저자들에 따르면, DEX에 의해 PI3K/Akt 경로가 억제되면 FoxO에서 MEK/ERK 경로에 이르는 상호 간섭에 의해 유비퀴틴 발현을 촉진한다. 이러한 간섭은 E3 리가아제(FoxO의 활성화에 의함) 및 유비퀴틴(MEK/ERK 경로에 의함)의 유전자 전사가 동시에 일어나 프로테아좀 시스템에서 불필요한 단백질들이 분해되도록 하는 주요 메커니즘인 것으로 생각되고 있다.Importantly, it has been reported that the degree of activity of the muscle lysis pathway may be influenced by several factors in the myotubes and nuclei. First, dexamethasone (DEX), one of the biosynthetic substances of glucocorticoids, promotes muscle atrophy by inhibiting PI3K and Akt activity and increasing FoxO and E3 ligase activity. According to these authors, inhibition of the PI3K / Akt pathway by DEX promotes ubiquitin expression by mutual interference from the FoxO to the MEK / ERK pathway. This interference is believed to be the main mechanism by which gene transcription of E3 ligase (by activation of FoxO) and ubiquitin (by MEK / ERK pathway) occurs simultaneously and degrades unnecessary proteins in the proteasome system.
두번째, 열충격 단백질(heat shock protein, 또는 HSP)은 근조직이 위축될 때 발현이 감소되고, 반대로 HSP가 과발현되면 근위축을 완화하는 작용을 한다. 최근 연구들에 따르면, HSP70의 과다 발현은 FoxO3a 리포터 활성을 억제하여 유비퀴틴 E3 리가아제 프로모터 활성을 직접적으로 억제하는 것으로 밝히고 있다. HSP는 분자 쉐프런으로써 다양한 스트레스(예를 들어, 저산소증, 열사병, 기계적 스트레스)에 대해 세포 보호작용(cytoprotection)뿐만 아니라 단백질 접힘(protein folding) 및 수선(repairing)을 도와 단백질 품질 조절(quality control)에 기여하는 것으로 알려져 있다. 근육 세포에서, HSPs는 또한 근원섬유의 조직화 및 관리유지(housekeeping) 역할을 담당하여 근육 수축 기능에 필수적으로 영향을 주는 것으로 알려져 있다. 따라서, HSP70의 위축 억제 효과를 염두에 두고, HSP를 유도하는 천연물을 찾는 것이 합리적이다.Second, the heat shock protein (HSP) decreases expression when muscle tissue is atrophy, and conversely, HSP overexpresses it to mitigate muscle atrophy. Recent studies have shown that overexpression of HSP70 inhibits the FoxO3a reporter activity and directly inhibits the ubiquitin E3 ligase promoter activity. HSP is a molecular chefuron that helps protein folding and repairing not only cytoprotection but also protein quality control for various stresses (eg, hypoxia, heat stroke, mechanical stress) . ≪ / RTI > In muscle cells, HSPs are also known to play a role in the organization and maintenance of myofibrils (housekeeping), which is essential for muscle contraction. Therefore, it is reasonable to find a natural product that induces HSP in consideration of the inhibitory effect of HSP70.
오미자는 오미자는 해발이 200~1,600m에 걸쳐 분포하며 지리산, 속리산, 태백산에서 많이 자라는 덩굴성 낙엽 활엽수이다. 키는 6~9m이고, 잎은 길이가 7~10㎝, 폭이 3~5㎝로 뒷면 맥 위에 털이 있고 가장자리에 작은 치아상의 톱니가 있으며 넓은 타원형으로 어긋난다. 꽃은 약간 붉은빛이 도는 황백색이며 지름이 약 1.5㎝로 3~5송이가 새로 나온 짧은 가지의 잎겨드랑이에 한 송이씩 핀다. 열매는 신맛이 강하고 8~9월에 홍색으로 익으며 길이는 0.6~1.2㎝이고 여러 개가 포도 송이 모양으로 밑으로 처져 달린다. 관상용으로 쓰이며, 열매는 약용으로 쓰인다.Omiza is distributed in the altitude of 200 ~ 1,600m above sea level and is a deciduous deciduous broad-leaved tree that grows widely in Mt. Jiri, Mt. The leaves are 6 ~ 9m long, 7 ~ 10㎝ long, 3 ~ 5㎝ wide, with hairs on the back vein, small teeth on the edge, and wide oval shape. The flower is slightly reddish yellowish white with a diameter of about 1.5㎝. It blooms one by one on the axil of the short branch of newly emerged 3-5. The fruit is strong in sour taste and ripen in red color from August to September, and its length is 0.6 ~ 1.2㎝, and several dogs are hanging down with grape clusters. It is used for ornamental purposes, and the fruit is used for medicinal purposes.
구체적인 선행기술을 보면, 선행기술 1(KR 10-2010-0072390 A, 공개일자: 2010년 07월 01일)은 오미자 추출물을 포함하는 생막걸리에 대한 구성을 개시하고 있다. 그러나 이는 오미자가 가진 맛과 향에 기초한 것이고, 천연 열매 추출물이므로 오미자가 가진 유용한 성분이 건강을 증진할 수 있다고 할 뿐, 맛 이외에 구체적인 효과상 특징적 사항의 연구가 이루어진 것은 아니라고 볼 수 있다.As for the specific prior art, Prior Art 1 (KR 10-2010-0072390 A, published on July 01, 2010) discloses a composition for raw rice wine containing an extract of Omija. However, this is based on the taste and aroma of Omija, and because it is a natural fruit extract, the useful ingredient of Omija can promote health.
선행기술 2(KR 10-2006-0119081 A, 공개일자: 2006년 11월 24일)은 항균활성이 있는 오미자(Schizandra chinensis) 추출물에 관한 사항이 개시되어 있으나, 이는 단순히 오미자 추출물이 향균활성을 가진다는 정도에 불과하고, 상기 오미자 추출물을 활용한 근위축과 관련 효과에 대하여는 개시된 바 없다.Prior Art 2 (KR 10-2006-0119081 A, publication date: November 24, 2006) discloses an extract of Schizandra chinensis having antimicrobial activity, but merely has an antibacterial activity of Schizandra chinensis extract And there is no disclosure of the effect of the atypical shrinkage using the above-mentioned Omiza extract.
선행기술 3(KR KR 10-0854567 B1, 공고일자: 2008년 08월 26)는 오매, 황련과 함께 오미자를 포함하는 항균제 조성물에 관한 것으로, 동물 사료용 첨가제 조성물로서 향균효과가 높은 범위를 제시하고 있는데, 이는 오미자를 활용하여 근위축 관련 효과에 대한 인식이 없다.BACKGROUND ART [0002] Prior Art 3 (KR KR 10-0854567 B1, publication date: Aug. 26, 2008) relates to an antimicrobial composition containing omija together with amylose and rhodochrosite, and has a high antifungal effect as an additive composition for animal feed , Which is not aware of the effect of muscle atrophy using Omija.
따라서 종래의 선행기술은 오미자의 독특한 향미와 식감을 기초로 한 식품 조성물이거나, 상기 오미자가 가진 향균성에 기초하여 제조된 향균조성물로 활용되는 것이고, 오미자가 가진 새로운 효과에 대한 연구는 미흡한 실정이다. 이에 오미자의 새로운 효과상 특징을 연구하면서 오미자의 근위축 효과상 특징을 기초로 본 발명을 완성하게 되었다.Therefore, conventional prior art is a food composition based on the unique flavor and texture of Omija, or is used as an antibacterial composition prepared on the basis of the antibacterial property of the Omija, and research on the new effect of Omija is insufficient. Therefore, the present invention has been completed on the basis of the characteristics of the muscular atrophy effect of Omija while studying the new effect features of Omija.
본 발명의 목적은 근육 단백질 붕괴에 관여하는 mRNA를 분석하고, 상기 mRNA의 발현을 저해하면서 근육 단백질 합성에 관여하는 mRNA 발현의 활성을 높여 근위축 증상에 대한 방지 및 개선시키는 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물을 제공하는 것이다.An object of the present invention is to provide a method for analyzing mRNA involved in muscle protein degradation and improving the activity of mRNA expression involved in muscle protein synthesis while inhibiting the expression of the mRNA to prevent or ameliorate atrophy symptoms, And to provide a composition for preventing and improving atrophy.
본 발명의 다른 목적은 상기 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for preparing a composition for preventing and ameliorating atrophy, which comprises the extract of Omiza.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물은 오미자(Maximowiczia Chinensis) 및 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올 또는 이들의 50 내지 200 부피% 알코올 수용액을 혼합하여 추출한 오미자 추출물을 포함하고, 근위축(Muscular Dystrophy) 예방 및 개선 효과를 가지는 것일 수 있다.In order to achieve the above object, the composition for preventing and improving muscle atrophy according to one embodiment of the present invention comprises at least one selected from the group consisting of Maximowiczia chinensis and 1 to 4 carbonated lower alcohols or 50 to 200% And an extract of Schizandra chinensis extract mixed with an aqueous solution, and may have the effect of preventing and improving Muscular Dystrophy.
상기 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물은 Atrogin-1 mRNA, MuRF1 mRNA, Myostatin mRNA 및 SIRT1 mRNA로 이루어진 군에서 어느 하나 이상의 발현을 저해시키는 것일 수 있다.The composition for preventing or ameliorating atrophy comprising the extract of Omiza may inhibit the expression of any one or more of the group consisting of Atrogin-1 mRNA, MuRF1 mRNA, Myostatin mRNA and SIRT1 mRNA.
상기 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물은 PI3K mRNA, Adenosine A1R mRNA, Akt1 mRNA 및 TRPV4 mRNA 로 이루어진 군에서 어느 하나 이상의 발현을 증가시키는 것일 수 있다.The composition for preventing and improving muscle atrophy comprising the extract of Omiza may increase expression of any one or more of the group consisting of PI3K mRNA, Adenosine A1R mRNA, Akt1 mRNA and TRPV4 mRNA.
상기 근위축은 불용성 근위축(disuse atrophy of muscle), 기계적 자극 부재 및 골격근의 탈신경지배(denervation) 중 어느 하나 이상에 의한 것일 수 있다.The atrophy may be caused by one or more of disuse atrophy of muscle, mechanical stimulation member, and denervation of skeletal muscle.
상기 오미자는 150 내지 210℃에서 건조 후 동결건조한 것이고, 상기 오미자는 상기 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올과 1 : 3 내지 3 : 1의 부피비인 것일 수 있다.The omiza may be lyophilized after drying at 150 to 210 ° C, and the omija may be in a volume ratio of 1: 3 to 3: 1 with the lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms.
상기 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물은 근섬유다발의 감소, 근육의 염증세포 침윤 및 국소섬유화에 대한 예방 및 개선효과를 가지는 것일 수 있다.The composition for prevention and improvement of muscle atrophy comprising the extract of Omiza may have the effect of reducing muscle fiber bundles, infiltration of inflammatory cells of muscles, and prevention and improvement of local fibrosis.
상기 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물은 상기 오미자 추출물을 0.1 내지 10 중량%로 포함되고, 식품학적으로 허용 가능한 식품보조첨가제를 더 포함하는 근위축 예방 또는 개선용 식품 조성물일 수 있다.The composition for preventing or ameliorating atrophy comprising the Schizandra chinensis extract may be a food composition containing 0.1 to 10% by weight of the Schizandra chinensis extract and further comprising a food-acceptable food-aid additive for preventing or improving muscle atrophy .
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물의 제조방법은 오미자를 150 내지 210℃에서 건조하여 건조된 오미자를 제조하는 오미자 건조단계, 상기 건조된 오미자를 분쇄하여 오미자 분말을 제조하는 오미자 분쇄단계, 상기 오미자 분말을 동결 건조하여 동결건조 된 오미자 분말을 제조하는 동결건조 단계 및 상기 동결건조 된 오미자 분말을 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올 또는 이들의 50 내지 200 부피% 알코올 수용액과 1 : 3 내지 3 : 1의 부피비로 혼합하여 15 내지 35℃에서 10 내지 30 시간 동안 오미자 추출물을 제조하는 단계를 포함하는 것이고, 상기 오미자 추출물은 근위축(Muscular Dystrophy) 예방 및 개선 효과를 가지는 것일 수 있다.
According to another embodiment of the present invention, there is provided a method for preparing a composition for preventing and ameliorating atrophy comprising an extract of Omija comprising the steps of drying omija at 150 to 210 ° C to prepare dried omija, A lyophilizing step of lyophilizing the lyophilized Schizandra chinensis powder, and a step of lyophilizing the lyophilized schizophyll powder by mixing the lyophilized Schizandra chinensis powder with a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or a 50 to 200 volume % Alcohol aqueous solution at a volume ratio of 1: 3 to 3: 1 to prepare an extract of Omija at 15 to 35 ° C for 10 to 30 hours. The Omija extract is effective for prevention and improvement of muscular dystrophy It can be an effect.
이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 이하의 설명은 본 발명의 명확한 이해를 돕기 위한 것일 뿐 본 발명의 권리범위를 이하의 내용으로 한정하는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail. The following description is intended to assist in a clear understanding of the present invention only and does not limit the scope of the present invention to the following contents.
본 발명의 일 실시예에 따른 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물은 오미자(Maximowiczia Chinensis) 및 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올 또는 이들의 50 내지 200 부피% 알코올 수용액을 혼합하여 추출한 오미자 추출물을 포함하고, 근위축(Muscular Dystrophy) 예방 및 개선 효과를 가지는 것일 수 있다.The composition for prevention and improvement of muscle atrophy according to one embodiment of the present invention includes at least one composition selected from the group consisting of Maximowiczia chinensis and a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or an aqueous solution of 50 to 200% And may have the effect of preventing and improving Muscular Dystrophy.
바람직하게 상기 오미자는 오미자 종자일 수 있다. 오미자는 그 향미가 독특하고, 우수한 향균력을 가지만, 실험결과 오미자를 사용한 추출물은 근위축의 개선효과가 크지 않았지만, 오미자 종자 추출물을 사용하는 경우 적은 사용량으로 다양한 원인에 의한 근위축 모델에서 근육 단백질 붕괴 방지하고, 근육 단백질 생성에 기여함으로써 근위축에 대하여 매우 우수한 치료효과를 나타내는 것으로 확인되었다. 이는 오미자 비하여 오미자 종자에 근위축 개선에 효과가 있는 유효성분이 다량으로 포함된 것으로 생각할 수 있다. 또한, 그 사용량이 적어 세포독성 등의 문제도 없으므로 오미자 종자 추출물이 본 발명의 목적에 따른 근위축 예방 및 개선효과를 위한 조성물로 사용하는 것이 더 바람직하다.Preferably, the Omiza may be an Omija seed. Omija has unique flavor and excellent antimicrobial power. However, the experimental results showed that the extract of Omija did not improve the muscle atrophy. However, when using Omija seed extract, muscle protein collapse And contributes to the production of muscle protein. Thus, it has been confirmed that it has a very excellent therapeutic effect on muscle atrophy. It can be considered that the omija seed contains a large amount of the active ingredient which is effective for the improvement of muscle atrophy compared to the omija. In addition, since there is no problem such as cytotoxicity due to its low use amount, it is more preferable that the extract of Omija seed is used as a composition for prevention and improvement of muscle atrophy according to the object of the present invention.
본 발명의 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물 다른 추출물 또는 근위축 관련 약물과 혼합하지 않고 오미자 자체로서 근위축에 대한 개선효과를 낼 수 있는 조성물 및 그 제조방법을 제공한 것으로 종래 근위축 조성물의 경우 추출물 내지 약물에 오미자 엑기스를 포함하는 경우가 있으나 이는 상기 오미자를 사용하여 조성물의 식감향상 내지 향균력 배가를 위한 것일 뿐 오미자 추출물 자체가 근위축 개선에 대한 효과를 나타내는 구성으로 제시하지 못하고 있다.A composition for prevention and improvement of muscle atrophy comprising the extract of Omija of the present invention The present invention provides a composition capable of improving the atrophy of Omija itself without mixing with another extract or a drug for the treatment of muscle atrophy, In the case of the atrophic composition, the extract or the medicament may contain the omija extract. However, the omija extract is only used for improving the texture of the composition or multiplying the antimicrobial activity by using the omija, have.
또한 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올은 70 내지 100 중량% 농도의 에탄올일 수 있다. 상기 에탄올을 사용하는 경우 오미자에 포함된 근위축 개선을 위한 유효성분이 효과적으로 추출될 수 있고, 에탄올 농도가 70 중량% 미만인 경우 오미자 추출물의 근위축 개선효과가 저하될 수 있다.The lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms may be ethanol at a concentration of 70 to 100% by weight. When the ethanol is used, an effective ingredient for improving atrophy contained in the omija can be effectively extracted, and when the ethanol concentration is less than 70% by weight, the effect of improving the atrophy of the omija extract may be lowered.
상기 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물은 Atrogin-1 mRNA, MuRF1 mRNA, Myostatin mRNA 및 SIRT1 mRNA로 이루어진 군에서 어느 하나 이상의 발현을 저해시키는 것일 수 있다.The composition for preventing or ameliorating atrophy comprising the extract of Omiza may inhibit the expression of any one or more of the group consisting of Atrogin-1 mRNA, MuRF1 mRNA, Myostatin mRNA and SIRT1 mRNA.
상기 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물은 PI3K mRNA, Adenosine A1R mRNA, Akt1 mRNA 및 TRPV4 mRNA 로 이루어진 군에서 어느 하나 이상의 발현을 증가시키는 것일 수 있다.The composition for preventing and improving muscle atrophy comprising the extract of Omiza may increase expression of any one or more of the group consisting of PI3K mRNA, Adenosine A1R mRNA, Akt1 mRNA and TRPV4 mRNA.
이하의 실험예를 참조하면, 상기 오미자 추출물은 상기 Atrogin-1 mRNA, MuRF1 mRNA, Myostatin mRNA 및 SIRT1 mRNA로 이루어진 군에서 어느 하나 이상의 발현을 저해로서 근육 붕괴 단백질의 생성을 억제하며, PI3K mRNA, Adenosine A1R mRNA, Akt1 mRNA 및 TRPV4 mRNA 로 이루어진 군에서 어느 하나 이상의 발현을 증가시켜 근육 생성 단백질의 생성을 증가시킴으로써 근위축에 대한 개선효과를 나타내는 것을 확인할 수 있다.The Omiza extract inhibits the expression of at least one of the above-mentioned Atrogin-1 mRNA, MuRF1 mRNA, Myostatin mRNA and SIRT1 mRNA to inhibit the production of muscle decay proteins, and PI3K mRNA, Adenosine A1R mRNA, Akt1 mRNA, and TRPV4 mRNA, thereby increasing the production of muscle-producing proteins, thereby showing an improvement effect on atrophy.
상기 근위축은 불용성 근위축(disuse atrophy of muscle), 기계적 자극 부재 및 골격근의 탈신경지배(denervation) 중 어느 하나 이상에 의한 것일 수 있다.The atrophy may be caused by one or more of disuse atrophy of muscle, mechanical stimulation member, and denervation of skeletal muscle.
상기 불용성 근위축(disuse atrophy of muscle)은 노화, 질병 등에 의한 활동제한, 오랜 침상생활, 부목(cast)시행 등에 의해 근육의 두께가 감소하는 것을 의미한다. 상기 오미자 추출물은 불용성 근위축에 대한 개선효과가 우수하다.The above-mentioned disuse atrophy of muscle means that the muscle thickness is reduced by restricting the activity due to aging, disease, long bed life, casting, and the like. The above-mentioned Omiza extract has excellent improvement effect on insoluble muscle atrophy.
상기 근위축은 말초신경 손상, 암 및 폐혈증 등의 다양한 임상 질환뿐만 아니라 장기간 침상안정, 사지의 석고 고정 그리고 노화과정 등과 같이 동반된다. 일반적으로 근 위축은 근육 단백질의 감소에 의한 생리학적, 조직화학적 및 생화학적 변화를 동반하며 골격근의 고유 기능의 장애를 초래한다.The atrophy is accompanied by various clinical diseases such as peripheral nerve injury, cancer and hematemesis, as well as long-term bed rest, limb gypsum fixation and aging process. In general, muscle atrophy is accompanied by physiological, histochemical and biochemical changes resulting from a decrease in muscle protein, leading to impairment of the inherent function of the skeletal muscle.
상기 골격근의 탈신경지배 (denervation)는 근육 총량 및 근력의 감소, 근섬유 굵기의 감소, 지근섬유가 속근섬유로 바뀌는 근섬유형의 변환, 섬유성 및 지방결합조직 량의 증가 등을 특징으로 하는 근육위축을 유발한다.The denervation of the skeletal muscle is accompanied by a decrease in muscle mass and muscle strength, a decrease in the thickness of the muscle fiber, a change in the muscle fiber type in which the root fiber is transformed into the inner muscle fiber, ≪ / RTI >
이러한 근육위축의 기전은, 탈신경 지배된 근육세포에서 미토콘드리아가 수적으로 감소하고 기능이 상이 초래되어 미토콘드리아에서 ROS 생성이 증가하므로 산화적 손상에 의한 근육세포의 세포자연사 (apoptosis)가 증가한 결과로 설명될 수 있다.This mechanism of muscle atrophy is due to the increase in apoptosis of muscle cells due to oxidative damage, because the number of mitochondria in the denervated dominant muscle cells is decreased and the function is differentiated and the production of ROS is increased in the mitochondria. .
상기 오미자는 150 내지 210℃에서 건조 후 동결건조한 것일 수 있다.The above-mentioned Schizosaccharum can be lyophilized after drying at 150 to 210 ° C.
오미자를 건조시키는 경우 제품화에 유리한 장점이 있고, 바람직하게는 오미자 종자를 건조시키는 경우 근위축 개선에 효과를 가지는 유효성분이 보다 활성화 된다. 즉, 오미자 종자를 건조과정 없이 바로 동결 건조하여 추출물을 제조하는 경우보다 오미자 종자를 건조하여 추출하는 경우 오미자 종자를 동일한 농도로 사용하는 경우에도 오미자 종자를 건조하여 추출하는 경우가 보다 근위축 개선에 대하여 보다 유리한 효과가 나타난다. When the omija is dried, there is an advantage in commercialization. Preferably, when the omija seed is dried, the active ingredient having the effect of improving the atrophy is more activated. That is, in the case of using the same concentration of Omija seeds when the Omija seeds are dried and extracted, the dryness of the Omija seeds is more improved than the case where the extract is prepared by freeze-drying the Omija seed immediately without drying, A more favorable effect is obtained.
특히 150℃ 미만의 온도로 건조시키는 경우 상기의 효과가 거의 없으며, 210℃를 초과하는 경우 오미자 종자 추출물의 근위축 방지효과가 오히려 감소하는데 상대적으로 고온에 의해 근위축 개선에 효과를 가지는 유효성분이 파괴되는 것으로 추정된다.Particularly, when the drying temperature is lower than 150 ° C, the above effect is hardly obtained. When the temperature is higher than 210 ° C, the effect of preventing the atrophy of Omija seed extract is rather reduced. Respectively.
더 바람직하게는 상기 오미자 종자를 170 내지 190℃에서 건조 후 동결건조한 것일 수 있다. 상기 온도 범위에서 오미자 종자를 건조하는 경우 오미자 종자 추출물이 근위축 방지에 효과가 가장 우수하여 근위축 방지를 위한 유효성분이 가장 많이 함유될 수 있는 것으로 추정된다.More preferably, the Schizosacchis seeds may be lyophilized after drying at 170 to 190 ° C. In the case of drying omija seeds in the temperature range above, it is presumed that the extract of omija seed has the most effect to prevent atrophy, and the most effective ingredient to prevent atrophy is presumed to be contained.
상기 오미자는 상기 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올과 1 : 3 내지 3 : 1의 부피비인 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 근위축 개선에 효과가 있는 유효물질 추출에 유용하다.The oligomer may have a volume ratio of 1: 3 to 3: 1 with the lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms. By the above range, it is useful for extracting an effective substance which is effective for improving atrophy.
바람직하게는 오미자 종자를 사용하는 것으로 상기 오미자 종자는 상기 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올과 1 : 2 내지 1 : 3의 부피비인 것일 수 있다. 오미자 종자를 사용하는 경우 근위축 개선 효과가 우수할 뿐만 아니라 상기 범위에 의하는 경우 근위축 개선에 효과가 있는 유효물질이 많이 추출될 수 있다. 상기 범위보다 알코올 함량이 적은 경우 상기 오미자 종자에 포함된 근위축 개선에 효과가 있는 유효물질의 추출량이 급감하고, 상기 범위 보다 알코올 함량이 많은 경우 여과 또는 농축 등 알코올이 휘발되는 과정에서 상기 오미자 종자의 추출물에 포함된 근위축 개선에 효과가 있는 유효물질이 손실되는 문제가 있다.Preferably, the seeds of Omija seeds are used, and the seeds of Omija seeds may be 1: 2 to 1: 3 by volume of the lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms. In the case of using Omija seed, not only the effect of improving muscle atrophy is excellent, but also the effective substance which is effective in improving muscle atrophy can be extracted by the above range. When the alcohol content is lower than the above range, the extraction amount of the effective substance effective for improving the atrophy contained in the Omija seed is decreased rapidly. When the alcohol content is higher than the above range, the alcohol is volatilized, There is a problem in that an effective substance effective for improvement of muscle atrophy contained in the extract of the present invention is lost.
상기 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물은 상기 오미자 추출물을 0.1 내지 10 중량%로 포함되고, 식품학적으로 허용 가능한 식품보조첨가제를 더 포함하는 근위축 예방 또는 개선용 식품 조성물일 수 있다.The composition for preventing or ameliorating atrophy comprising the Schizandra chinensis extract may be a food composition containing 0.1 to 10% by weight of the Schizandra chinensis extract and further comprising a food-acceptable food-aid additive for preventing or improving muscle atrophy .
바람직하게는 상기 오미자 추출물을 0.1 내지 0.17 중량%로 포함하는 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 세포독성이 없는 범위로서 다양한 환자군에서 근위축에 대한 개선효과를 나타내게 할 수 있다. 특히 상기 범위에 의하는 경우 상기 오미자 추출물의 흡수율이 가장 뛰어나기 때문에 근위축에 대한 개선효과가 가장 우수할 수 있다.And preferably 0.1 to 0.17% by weight of the above-mentioned Omija extract. By the above range, it is possible to exhibit an improvement effect on atrophy in various patient groups as a range without cytotoxicity. In particular, when the ratio is in the above range, the absorption rate of the Omija extract is the highest, and thus the improvement effect on the atrophy can be most excellent.
상기 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물은 근섬유다발의 감소, 근육의 염증세포 침윤 및 국소섬유화에 대한 예방 및 개선효과를 가지는 것일 수 있다.The composition for prevention and improvement of muscle atrophy comprising the extract of Omiza may have the effect of reducing muscle fiber bundles, infiltration of inflammatory cells of muscles, and prevention and improvement of local fibrosis.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물의 제조방법은 오미자를 150 내지 210℃에서 건조하여 건조된 오미자를 제조하는 오미자 건조단계, 상기 건조된 오미자를 분쇄하여 오미자 분말을 제조하는 오미자 분쇄단계, 상기 오미자 분말을 동결 건조하여 동결건조 된 오미자 분말을 제조하는 동결건조 단계 및 상기 동결건조 된 오미자 분말을 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올 또는 이들의 50 내지 200 부피% 알코올 수용액과 1 : 3 내지 3 : 1의 부피비로 혼합하여 15 내지 35℃에서 10 내지 30 시간 동안 오미자 추출물을 제조하는 단계를 포함하는 것이고, 상기 오미자 추출물은 근위축(Muscular Dystrophy) 예방 및 개선 효과를 가지는 것일 수 있다.According to another embodiment of the present invention, there is provided a method for preparing a composition for preventing and ameliorating atrophy comprising an extract of Omija comprising the steps of drying omija at 150 to 210 ° C to prepare dried omija, A lyophilizing step of lyophilizing the lyophilized Schizandra chinensis powder, and a step of lyophilizing the lyophilized schizophyll powder by mixing the lyophilized Schizandra chinensis powder with a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or a 50 to 200 volume % Alcohol aqueous solution at a volume ratio of 1: 3 to 3: 1 to prepare an extract of Omija at 15 to 35 ° C for 10 to 30 hours. The Omija extract is effective for prevention and improvement of muscular dystrophy It can be an effect.
상기 분쇄단계는 오미자 또는 오미자 종자를 분쇄물의 평균입경이 0.03mm 내지 1mm인 것일 수 있다. 평균입경이 0.03mm 미만인 경우 상기 분쇄물이 뭉쳐 유효성분의 추출효율이 저하되며, 1mm를 초과하는 경우 오미자의 내피에 존재하는 근위축 개선을 위한 유효성분의 추출효율이 떨어지는 문제가 있다.In the pulverizing step, the average particle diameter of the ground powder of omija or omija may be 0.03 mm to 1 mm. When the average particle diameter is less than 0.03 mm, the pulverized material clumps and the extraction efficiency of the active ingredient decreases. When the average particle diameter exceeds 1 mm, there is a problem that the extraction efficiency of the effective ingredient for improving the atrophy of the endosymbion of the omisza is low.
상기 오미자 추출물을 제조하는 단계에서 15℃ 미만인 경우 오미자에 포함된 유효성분 중 근위축 개선에 대한 유효물질의 수득률이 저하될 수 있고, 35℃를 초과하는 경우 알코올이 일정 부분 휘발되면서 상기 오미자 종자의 추출물에 포함된 근위축 개선에 효과가 있는 유효물질이 손실되는 문제가 있다.When the temperature is lower than 15 ° C., the yield of the effective substance for improving the atrophy among the active ingredients contained in the omija may be lowered. When the temperature is higher than 35 ° C., the alcohol is partially volatilized and the omija seed There is a problem that an effective substance effective for improvement of muscle atrophy contained in the extract is lost.
따라서 상기 온도 범위에서 10 내지 30 시간 동안 천천히 추출하여 오미자 추출물을 수득하는 것이 바람직하다.Therefore, it is preferable to slowly extract for 10 to 30 hours in the above temperature range to obtain an Omija extract.
더 바람직하게는 19 내지 28℃에서 20 내지 28시간 동안 추출하는 것일 수 있다. 상기 범위에 의하는 경우 상기 유효물질의 수득률이 가장 높아 근위축에 대한 효과가 가장 우수할 수 있다.More preferably at 19 to 28 DEG C for 20 to 28 hours. In the above range, the yield of the effective substance is the highest, and the effect on the atrophy can be most excellent.
상기 오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물은 오미자 추출물을 제조하는 단계 이후에 170 내지 300℃에서 1 내지 5 시간 동안 수증기 증류법(hydrodistillation)에 이해 분리된 것일 수 있다.The composition for preventing and improving muscle atrophy comprising the extract of Omija may be separated into a hydrodistillation process at 170 to 300 ° C for 1 to 5 hours after the step of preparing the Omija extract.
본 발명에 따른 근위축 예방 및 개선 효과를 가지는 오미자 추출물은 근육 단백질 붕괴에 관여하는 mRNA의 활성을 저해하고, 근육 단백질 합성에 관여하는 mRNA 발현의 활성을 높여 근위축 예방 및 개선에 효과를 가진다.The Omiza extract having the effect of preventing and improving muscle atrophy according to the present invention has an effect on preventing and improving muscle atrophy by inhibiting the activity of mRNA involved in muscle protein collapse and increasing the activity of mRNA expression involved in muscle protein synthesis.
특히 상기 근위축 증상에 대한 방지 및 개선시키는 오미자 추출물은 오미자 종자를 사용하는 경우 상기 근위축 개선 효과가 매우 탁월하고, 사용에 따른 부작용이 없다는 장점을 가진다. In particular, the extract of Omiza, which prevents or ameliorates the symptoms of the atrophy, has the advantage that the effect of improving the atrophy is very excellent when using the Omiza seed, and there is no side effect due to use.
따라서 본 발명에 따른 근위축 증상에 대한 방지 및 개선시키는 오미자 추출물을 사용하는 경우 종래의 오미자의 향균 효과 내지 오미자 그 자체의 향미에 기초한 식감 향상에서 벗어나 상기 근위축 효과의 개선을 위한 용도로서 기능성 식품 내지 약학적 제재 등 다양한 제형을 제조하여 오미자를 폭넓게 활용할 수 있다는 장점을 가진다.Therefore, in the case of using the extract of Omija to prevent or ameliorate the symptoms of the atrophy according to the present invention, the use of the functional food as an application for improvement of the muscle atrophy effect, apart from the antibacterial effect of the conventional Omija or the improvement of the texture based on the flavor of the Omija itself, And can be widely used for manufacturing various formulations such as pharmaceutical preparations and the like.
도 1은 NTX(대퇴신경절단술)로 유발된 근위축모델에서 오미자종자추출물을 투여 후 노출된(피부제거) 장딴지 근의 두께변화에 관한 것이다.
도 2는 NTX(대퇴신경절단술)로 유발된 근위축모델에서 오미자종자추출물을 투여한 후의 장딴지근의 무게변화에 관한 것이다.
도 3은 HS(하지거상법)로 유발된 근위축모델에서의 체중변화에 관한 것이다.
도 4은 HS(하지거상법)로 유발된 근위축모델에서의 장딴지근 두께 변화에 관한 것이다.
도 5는 HS(하지거상법)로 유발된 근위축모델에서의 근노출후의 비복근 두께변화에 관한 것이다.
도 6은 HS(하지거상법)로 유발된 근위축모델에서의 비복근 두께의 변화에 관한 것이다.
도 7은 HS(하지거상법)로 유발된 근위축모델에서의 비복근의 조직학적 변화에 관한 것이다.FIG. 1 relates to the thickness change of the exposed (skin-removed) calf muscle after administration of Omija seed extract in NTX (femoral nerve triceps) -induced atrophy model.
FIG. 2 is a graph showing the weight change of the calf muscles after administration of Omija seed extract in the NTX (femoral nerve triceps) -induced atrophy model.
Figure 3 relates to body weight changes in an atrophy model induced by HS (hypoglossal method).
Figure 4 relates to the change in the muscle thickness of the calf in an asymmetric model induced by HS (lower limb method).
Figure 5 relates to the change in gastrocnemius thickness after muscle exposure in an asymmetric model induced by HS (lower limb method).
Figure 6 relates to the change in gastrocnemius thickness in an atrophy model induced by HS (hypotensive method).
Figure 7 relates to the histological changes of the gastrocnemius in an asymmetric model induced by HS (hypoglossal method).
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail so that those skilled in the art can easily carry out the present invention. The present invention may, however, be embodied in many different forms and should not be construed as limited to the embodiments set forth herein.
[제조예: 오미자 추출물의 제조][Production Example: Preparation of Omiza Extract]
오미자 종자를 경북 문경 일대에서 수거한 다음, furnace (대한과학, Korea)를 이용하여, 180℃에서 완전 건조한 다음 평균입경 기준으로 0.15 내지 0.2mm로 분쇄하고, 동결건조기 (Freezone 1; Labconco Corp., MO, USA)로 완전 동결건조한 다음 100% 주정에 실온에서 24시간 동안 침전시킨 다음 여과하고, 여과액을 rotary vacuum evaporator (Buchi Rotavapor R-144, Switzerland) 농축한 다음 190℃ 3시간 동안 hydrodistillation을 통해 분리하였다.
The seeds of Omija were collected from Mungyeong, Kyungbuk Province and then completely dried at 180 ° C using furnace (Korea Science and Technology, Korea) and then pulverized to 0.15 to 0.2 mm on an average particle size basis. (Buchi Rotavapor R-144, Switzerland) and then hydrolyzed for 3 hours at 190 ° C. The resulting solution was filtered through a rotary vacuum evaporator (Buchi Rotavapor R-144, Switzerland) Respectively.
[실험예 1: 신경절단에 의한 근위축 개선 효과 시험][Experimental Example 1: Test for improving atrophy by nerve shear]
1. 시험방법1. Test Method
- 실험동물- Experimental animals
60마리의 건강한 SPF 6 주령 수컷 ICR 마우스를 입수하여, 7일간 순화시킨 다음 NTX(대퇴신경절단술) 2주후 체중 (위수술 대조군: 41.11±3.71g, 33.00~47.10g; NTX 근육위축 유발군: 41.51±3.54g, 34.30~49.50g) 및 종아리 두께 (위수술 대조군: 4.50±0.41mm, 4.03~5.28mm; NTX 근육 위축 유발군 3.26±0.18mm, 3.00~3.60mm)가 일정한 실험동물을 군당 10마리씩 선정하여 실험에 사용하였다. 모든 실험동물은 NTX 수술일, 약물 투여시작일 및 최종 부검일에 각각 18시간 정도 절식을 실시하였으며(이 기간에도 음수는 자유롭게 공급하였다), picric acid로 개체를 식별하였다. Sixty healthy SPF 6-week-old male ICR mice were obtained for 7 days and then weighed after 2 weeks of NTX (femoral nerve triceps) weight (41.11 ± 3.71 g, 33.00 ~ 47.10 g; NTX muscle atrophy group: 41.51 ± 3.54 g and 34.30 to 49.50 g) and calf thickness (4.50 ± 0.41 mm, 4.03 to 5.28 mm, and 3.26 ± 0.18 mm and 3.00 to 3.60 mm in NTX muscle atrophy group, respectively) Were selected. All experimental animals were fasted for 18 hours at NTX operation day, drug administration start date, and final autopsy day (negative water was also freely supplied during this period), and individuals were identified with picric acid.
- 군 분리 (총 6개군; 군 당 10마리)- Group separation (total 6 groups; 10 per group)
(1) Sham vehicle control: 위수술 매체 대조군(1) Sham vehicle control: Control group
(2) NTX control: 좌골신경 절단 및 멸균 증류수 투여 대조군(2) NTX control: sciatic nerve sheath and sterilized distilled water control
(3) Oxymetholone: 좌골신경 절단 및 oxymetholone 50mg/kg 투여 대조 약물군(3) Oxymetholone: sciatic nerve cleavage and
(4) 오미자종차추출물(SSE) 300: 좌골신경 절단 및 오미자 종자 추출물 300mg/kg 투여 대조 약물군(4) Schizandra chinensis Extract (SSE) 300: sciatic nerve cleavage and Schizandra chinensis extract 300 mg / kg
(5) 오미자종차추출물(SSE) 150: 좌골신경 절단 및 오미자 종자 추출물 150mg/kg 투여 대조 약물군(5) Schizandra chinensis Extract (SSE) 150: Sciatic nerve cut and Schizandra chinensis extract 150mg / kg Controlled drug group
(6) 오미자종차추출물(SSE) 75: 좌골신경 절단 및 오미자 종자 추출물 75mg/kg 투여 대조 약물군.(6) Schizandra chinensis Extract (SSE) 75: Schizophrenia and Schizandra chinensis extract 75 mg / kg Control group.
- 근육 위축의 유발- induction of muscle atrophy
이전의 방법들 [Ogawa et al., 2005; Nagpal et al., 2012]에 따라, 아래와 같은 순서로 우측 대퇴부의 근육을 가로로 절개하여, 좌골신경을 노출시킨 다음 약 5mm 정도의 좌골 신경을 절단 및 절제하였다(하기의 도 2 참조). 위수술 대조군에서는 좌골 신경을 노출시킨 다음 절제를 실시하지 않고, 창강을 폐쇄하였다. Previous methods [Ogawa et al., 2005; According to Nagpal et al., 2012, the muscles of the right femur were transversally incised in the following sequence to expose the sciatic nerve, and then the sciatic nerve of about 5 mm was cut and excised (see FIG. 2 below). In the gastric control group, the sciatic nerve was exposed and the abdomens were closed without resection.
-약물투여-drug injection
오미자 종자 추출물을 멸균 증류수에 현탁시켜 동물 체중 kg 당 10ml의 용량으로 NTX 2주 후부터, 매일 1회씩 28일간 금속제 zonde가 부착된 1ml 주사기 (syringe)를 이용하여 강제 경구투여 하였으며, oxymetholone 역시 오미자 종자 추출물과 동일하게 멸균 증류수에 현탁시켜 경구투여하였고, 위수술 및 NTX 대조군에서는 오미자 종자 추출물 또는 oxymetholone 대신 동일한 용량의 멸균 증류수만을 경구 투여하였다. 본 실험에 사용한 oxymetholone 투여용량은 이전의 동물 실험 결과를 바탕으로 50 mg/kg [Pavlatos et al., 2001; Isaacs et al., 2011]을 투여용량으로 선정하였으며, 오미자 종자 추출물은 300, 150 및 75mg/kg으로 선정하였다. The omija seed extract was suspended in sterilized distilled water, and the animals were orally administered with a 1 ml syringe attached with a metal zonde for 28 days from 2 weeks after the administration of NTX at a dose of 10 ml per kg of body weight. Oxymetholone was also added to the omija seed extract . In the stomach surgery and NTX control group, only the same volume of sterilized distilled water was orally administered instead of Omija seed extract or oxymetholone. The dose of oxymetholone used in this study was 50 mg / kg based on previous animal studies [Pavlatos et al., 2001; Isaacs et al., 2011] were selected as dosing doses and Omija seed extracts were selected as 300, 150 and 75 mg / kg.
- 관찰항목- Observations
체중, 종아리 두께, 종아리 근육 중량 변화를 관찰하여, 근육 위축에 미치는 오미자 종자 추출물의 효과를 평가하였다. Weight, calf thickness, and calf muscle weight were examined to evaluate the effect of Omija seed extract on muscle atrophy.
- 체중측정- Weight measurement
체중은 전자저울(Precisa Instrument, Moosmattstr, Switzland) 로 측정하였다.Body weights were measured with an electronic balance (Precisa Instrument, Moosmattstr, Switzland).
- 장딴지근 두께 및 중량 측정- Calf muscle thickness and weight measurement
장딴지근의 측정은 NTX시행일, 약물투여 하루전, 투여일, 투여후 1, 7, 14, 21, 27일과 희생일에 전자캘리퍼(Mytutoyo, Tokyo, Japan)로 측정하였다. 또한 희생일에 근육을 노출한 후 장딴지근의 두께를 측정하였다. 한편, 장딴지근의 두께측정 변화는 아래의 식으로 계산하였다.Measurements of the calvarial muscle were measured with an electronic caliper (Mytutoyo, Tokyo, Japan) on the day of NTX administration, on the day before the drug administration, on the day of administration, on
4주간의 장딴지근 변화량(mm) = 희생시 장딴지근 두께 - 첫 투여일의 장딴지근 두께(Mm) = calf muscle thickness at sacrifice - calf muscle thickness at the first administration day
장딴지근의 중량은 희생일에 장딴지근을 경골에서 조심스럽게 분리한 후 전자저울로서 측정하였다. 또한 상대적 중량을 측정하기 위하여 체중으로 나누어 상대적 중량을 나타내었다.
The weight of the calf muscle was carefully measured and measured as an electronic balance after the calf muscle was carefully separated from the tibia on the day of sacrifice. The relative weight was also divided by body weight in order to measure the relative weight.
2. 시험결과2. Test results
- 체중 및 증체량의 변화- Changes in body weight and weight gain
본 실험의 결과, 실험 전 기간인 6주 동안 NTX 또는 투여물질과 관련된 의미있는 체중 및 증체량의 변화는 인정되지 않았다. NTX 대조군에서는 약물투여 4주 동안의 증체량이 위수술 매체 대조군에 비해 -8.99%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 300, 150 및 75mg/kg 투여군에서는 각각 NTX 대조군에 비해 24.42, -5.81, 13.95 및 -2.33%의 변화를 나타내었다.As a result of this experiment, significant changes in body weight and weight gain related to NTX or the administered substance were not observed for 6 weeks before the experiment. In the NTX control group, the weight gain during 4 weeks of administration was -8.99% as compared with the control group. In the oxymetholone,
NTX 로 유발된 근위축모델에서 오미자종자추출물을 투여한 후의 체중변화은 하기의 표 1에 나타내었다.The weight change after administration of Omija seed extract in the NTX-induced atrophy model is shown in Table 1 below.
[B]Sacrifice
[B]
(수치는 평균 ±표준편차, SSE =오미자종자추출물; NTX = 대퇴신경절단술)(Mean ± SD, SSE = Omija seed extract, NTX = femoral nerve triceps)
- 종아리 두께의 변화- Change in calf thickness
NTX 2주후 종아리 두께의 감소가 유발된 동물만 선정하여 사용하였으므로, 약물 투여 시작 1일 전부터 NTX 대조군에서는 위수술 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 종아리 두께의 감소가 인장되기 시작하여, 실험 전 기간동안 인정되었고, 결과적으로 4주간의 투여기간 동안의 종아리 두께의 변화 역시 위수술 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 감소를 나타내었다. 한편 oxymetholone, 오미자 종자 추출물 300 및 150mg/kg 투여군에서는 투여 시작7일후부터 NTX 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 종아리 두께의 증가가 인정되었으며, 결과적으로 투여 기간 동안의 종아리 두께의 변화량 역시 NTX 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 증가를 각각 나타내었다. 또한 오미자 종자 추출물 75mg/kg 투여군에서도 NTX 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 종아리 두께의 증가가 투여시작 14일 후부터 인정되었고, 투여기간 동안의 종아리 두께 변화량 역시 NTX 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 증가를 나타내었다.As a result of using
NTX 대조군에서는 약물투여 4주 동안의 종아리 두께 변화량이 위수술 매체 대조군에 비해 -304.05%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 300, 150 및 75mg/kg 투여군에서는 각각 NTX 대조군에 비해 76.20, 85.52, 79.77 및 69.45%의 변화를 나타내었다.In the NTX control group, the change in calf thickness during the 4 weeks of drug administration was -304.05% as compared with the control group. In the oxymetholone,
- 근육 노출 후 종아리 두께의 변화 - Changes in calf thickness after muscle exposure
NTX 대조군에서는 위수술 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 근육 노출 후 종아리 두께의 감소가 인정되었으나, oxymetholone 및 모든 오미자 종자 추출물 투여군에서는 각각 NTX 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 근육 노출 후 종아리 두께의 증가가 인정되었다.In the NTX control group, there was a significant decrease in calf thickness after the muscle exposure (p <0.01) compared to the control group. However, oxymetholone and all Omija seed extract groups showed significant (p <0.01) An increase in calf thickness was recognized.
NTX 대조군에서는 근육 노출 후 종아리 두께가 위수술 매체 대조군에 비해 -43.71%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 300, 150 및 75mg/kg 투여군에서 각각 NTX 대조군에 비해 21.31, 22.95, 15.25 및 14.79%의 변화를 나타내었다.In the NTX control group, the calf thickness after the muscle exposure was -43.71% compared to the control group, and the oxymetholone,
- 종아리 근육 중량의 변화 - Changes in calf muscle weight
NTX 대조군에서는 위수술 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 종아리 근육 절대 및 상대 중량의 감소가 각각 인정되었으나, oxymetholone 및 모든 오미자 종자 추출물 투여군에서는 각각 NTX 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 종아리 근육 중량의 증가가 인정되었다.In NTX control group, the absolute and relative weight of calf muscle was significantly decreased (p <0.01) compared to the control group, but oxymetholone and all Omija seed extract groups were significantly higher than NTX control group (p <0.01) An increase in muscle weight was recognized.
NTX 대조군에서는 절대 종아리 근육 중량이 위수술 매체 대조군에 비해 -57.83%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 300, 150 및 75mg/kg 투여군에서 각각 NTX 대조군에 비해 75.69, 78.00, 63.69 및 44.55%의 변화를 나타내었다.In the NTX control group, the absolute calf muscle weight was -57.83% compared to the control group, and 75.69, 78.00, 63.69 and 44.55% of the oxymetholone,
NTX 대조군에서는 체중에 대한 종아리 근육 상대 중량이 위수술 매체 대조군에 비해 -58.42%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 300, 150 및 75mg/kg 투여군에서 각각 NTX 대조군에 비해 72.56, 81.93, 65.26 및 47.22%의 변화를 나타내었다.In the NTX control group, the relative weight of calf muscle relative to body weight was -58.42% higher than that of the control group, and that of oxymetholone,
하기의 표2는 NTX 로 유발된 근위축모델에서 오미자종자추출물을 투여한 후의 장딴지근 두께 변화에 관한 것이다.
Table 2 below shows the change in muscle thickness of the calf after administration of the Omija seed extract in an NTX-induced model of muscle atrophy.
[B-A]Changes after test article treated periods (mm)
[BA]
[B]Sacrifice
[B]
(수치는 평균± 표준편차, SSE = 오미자 종자추출물, NTX = 대퇴신경절단술, ap<0.01 as compared with sham control by ANOVAtest; bp<0.01 as compared with NTX control by ANOVA test)(Mean ± SD, SSE = Omija seed extract, NTX = femoral nerve triceps, a p <0.01 compared with sham control by ANOVA test, b p <0.01 compared with NTX control by ANOVA test)
도 1을 참조하면, 현저한 노출된 장딴지근 두께의 감소가 NTX 유발군에서 정상대조군과의 비교시 관찰된다. 그러나 oxymetholone과 오미자종자추출물의 투여군에서는 NTX 대조군에 비하여 현저하게 두께의 증가가 일어난다는 것을 알 수 있다.(ap<0.01 as compared with sham control by ANOVAtest, bp<0.01 as compared with NTX control by ANOVA test)Referring to FIG. 1, a significant reduction in the amount of exposed exposed calf muscle thickness was observed in the NTX-induced group compared with the normal control group. However, it can be seen that remarkably occur an increase in thickness compared with the NTX control group, group of oxymetholone and Schisandra chinensis seed extract. (A p <0.01 as compared with sham control by ANOVAtest, b p <0.01 as compared with NTX control by ANOVA test)
도 2를 참조하면 NTX대조군에서는 정상대조군 대비 현저한 절대/상대적 장딴지근의 무게 감소가 발생하였다. 그러나 oxymetholone투여군과 오미자종자추출물 투여군에서는 NTX대조군 대비 현저한 장딴지근의 무게 증가가 일어났다는 것을 알 수 있다. (ap<0.01 as compared with sham control by ANOVAtest, bp<0.01 as compared with NTX control by ANOVA test)
Referring to FIG. 2, in the NTX control group, a significant absolute / relative weight loss of the calf muscle occurred compared to the normal control group. However, in the oxymetholone treated group and the Omija seed extract treated group, the weight gain of the calf muscle was significantly greater than that of the NTX control group. (A p <0.01 as compared with sham control by ANOVAtest, b p <0.01 as compared with NTX control by ANOVA test)
[실험예 2: 하지거상법에 의한 근위축 개선 효과 시험][Experimental Example 2: Test for improving the atrophy by the lower limb method]
1. 시험방법1. Test Method
- 실험동물- Experimental animals
60마리의 7개월령 SPF ICR 암컷 마우스를 입수하여, 37일간 순화시킨 다음 체중 (정상 매체 대조군: 53.131±5.24g, 48.00~61.40g; HS 근육위축 유발군: 52.77±5.83g, 43.50~64.70g) 및 종아리 두께 (정상 매체 대조군: 3.42±0.17mm, 3.13~3.64mm; HS(hind-limb suspension; 하지거상법, 근육위축 유발군: 3.42±0.14mm, 3.16~3.68mm)가 일정한 실험동물을 군당 6마리씩 선정하여 실험에 사용하였다. 모든 실험동물은 약물 투여시작일 및 최종 부검일에 각각 18시간 정도 절식을 실시하였으며, picric acid로 개체를 식별하였다Sixty-seven 7-month-old SPF ICR female mice were obtained and weighed for 37 days before weighing (53.131 ± 5.24g, 48.00 ~ 61.40g, HS muscular atrophy group: 52.77 ± 5.83g, 43.50-64.70g) And the calf thickness (normal medium control group: 3.42 ± 0.17 mm, 3.13 to 3.64 mm; HS (hind-limb suspension), muscle atrophy group: 3.42 ± 0.14 mm, 3.16 to 3.68 mm) All animals were fasted for 18 hours at the start of the drug administration and at the final autopsy, and individuals were identified with picric acid
- 실험군 (총 6개군; 군 당 6마리)- Experimental group (total 6 groups; 6 per group)
(1) Intact vehicle control: 정상 매체 대조군(1) Intact vehicle control: Normal medium control
(2) HS control: HS 및 멸균 증류수 투여 대조군(2) HS control: HS and sterilized distilled water control
(3) Oxymetholone: HS 및 oxymetholone 50mg/kg 투여 대조 약물군(3) Oxymetholone: HS and oxymetholone 50 mg / kg Control group
(4) SSE 150: HS 및 오미자 종자 추출물 150mg/kg 투여군(4) SSE 150: HS and Ominja seed extract 150 mg / kg group
(5) SSE 100: HS 및 오미자 종자 추출물 100mg/kg 투여군(5) SSE 100: HS and Omiza seed extract 100 mg / kg group
(6) SSE 50: HS 및 오미자 종자 추출물 50mg/kg 투여군(6) SSE 50: HS and Omija seed extract 50 mg / kg group
- 실험모델- Experimental model
이전의 방법들 [Desaphy et al., 2010; Onda et al., 2011]에 따라, 꼬리의 끝부분에 elastic tape를 이용하여, 가느다란 실을 부착시킨 다음 반대쪽 끝을 마우스 케이지의 상단 철망에 클립을 이용하여 고정시켜, 후지를 수평에서 30-40° 정도 상향되도록 위치시켰다. HS는 투여시작일에서부터 28일간 실시하여 후지 근육의 불용성 위축을 유발하였고, 정상 매체 대조군에서는 HS를 실시하지 않고, 후지의 움직임을 자유롭게 하였다.Previous methods [Desaphy et al., 2010; According to Onda et al., 2011, an elastic tape is attached to the tip of the tail to attach a thin thread, and the opposite end is fixed to the upper wire netting of the mouse cage using a clip, Lt; RTI ID = 0.0 > 40 < / RTI > HS was administered for 28 days from the start of administration to induce insulin - like atrophy of the fusiform muscles. In the normal medium control group, HS was not performed and the Fuji movement was made free.
- 약물투여- drug injection
오미자 종자 추출물을 멸균 증류수에 현탁시켜 동물 체중 kg 당 10ml의 용량으로 HS 시작일에서부터, 매일 1회씩 28일간 금속제 zonde가 부착된 1ml 주사기 (syringe)를 이용하여 강제 경구투여 하였으며, oxymetholone 역시 오미자 종자 추출물과 동일하게 멸균 증류수에 현탁시켜 경구 투여하였고, 정상 매체 및 HS 대조군에서는 오미자 종자 추출물 또는 oxymetholone 대신 동일한 용량의 멸균 증류수만을 경구 투여하였다. 본 실험에 사용한 oxymetholone 투여용량은 이전의 동물 실험 결과를 바탕으로 50 mg/kg [Pavlatos et al., 2001; Isaacs et al., 2011]을 투여용량으로 선정하였으며, 오미자 종자 추출물은 150, 100 및 50mg/kg으로 선정하였다.The omija seed extract was suspended in sterilized distilled water, and the animals were orally administered at a dose of 10 ml per kg of body weight using a 1 ml syringe with a metal zonde for 28 days once a day starting from the HS start day. Oxymetholone was also added to the omija seed extract In the same way, oral sterilized distilled water was used for oral administration. In normal medium and HS control, only sterilized distilled water of the same volume was orally administered instead of Omija seed extract or oxymetholone. The dose of oxymetholone used in this study was 50 mg / kg based on previous animal studies [Pavlatos et al., 2001; Isaacs et al., 2011] were selected as dosing doses, and 150, 100, and 50 mg / kg of Omija seed extract were selected.
- 관찰항목- Observations
체중, 종아리 두께, 비복근 중량, 두께, 조직학적 변화를 관찰하여, 근육 위축에 미치는 오미자 종자 추출물의 효과를 평가하였으며, 근육 단백질의 붕괴 및 합성에 관여하는 것으로 알려진 mRNA 발현 양상 역시 비복근에서 평가하였다. The effects of Omija seed extract on muscle atrophy were evaluated by observing body weight, calf thickness, gastrocnemius weight, thickness, and histological changes. The expression pattern of mRNA, which is known to be involved in muscle protein degradation and synthesis, was also evaluated in gastrocnemius muscle.
근육 단백질의 붕괴 및 합성에 관여하는 mRNA 발현: Atrogin-1, muscle RING-finger protein-1 (MuRF1), PI3k p85α, adenosine A1 receptor (A1R), transient receptor potential cation cannel subfamily V member 4 (TRPV4), myostatin and Sirtulin 1 (SIRT1) The expression of mRNAs involved in the disruption and synthesis of muscle proteins: Atrogin-1, muscle RING-finger protein-1 (MuRF1), PI3k p85α, adenosine A1 receptor (A1R), transient receptor potential cannon subfamily V member 4 (TRPV4) myostatin and Sirtulin 1 (SIRT1)
- 일반조직병리학적 관찰- General histopathological observation
평균 근육 섬유 직경, 근육 다발 내 침윤 염증세포 수 및 collagen fiber가 차지 하는 비율을 고려하였다.The mean muscle fiber diameter, the number of infiltrating inflammatory cells in the muscle bundle, and the proportion of collagen fibers accounted for.
- 통계- statistics
수치는 평균±표준편차로 나타내었으며, ANOVA test로서 유의성을 검증하였다.
Values were expressed as mean ± SD, and significance was verified as ANOVA test.
2. 시험결과2. Test results
- 체중 및 증체량의 변화- Changes in body weight and weight gain
본 실험의 결과, HS 대조군에서는 HS 시작 7일후부터 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 체중의 감소가 인정되기 시작하여, 실험 전 기간인 4주 동안의 증체량 역시 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 현저한 감소를 나타내었다. 한편 oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150 및 100mg/kg 투여군에서는 각각 HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 체중의 증가가 투여 21일 후부터 인정되기 시작하여 28일간의 투여기간 동안의 증체량 역시 HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 증가를 각각 나타내었다. 오미자 추출물 50mg/kg 투여군에서도 투여 시작 27일후부터 HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.05) 체중의 증가가 인정되기 시작하여 28일간의 투여기간 동안의 증체량 역시 HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.05) 증가를 나타내었다As a result, in the HS control group, a significant decrease (p <0.01 or p <0.05) in body weight was observed from the 7th day after HS start to the normal medium control group. (P <0.01) compared to the control group. On the other hand, the increase in body weight (p <0.01 or p <0.05) of oxymetholone and
HS 대조군에서는 약물투여 4주 동안의 증체량이 정상 매체 대조군에 비해 -2364.58%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서는 각각 HS 대조군에 비해 45.16, 61.26, 47.64 및 36.60%의 변화를 나타내었다.In the HS control group, the amount of weight gain during 4 weeks of administration was -2364.58% as compared to that of the normal medium control group. In the oxymetholone,
- 종아리 두께의 변화- Change in calf thickness
HS 시작 7일 후부터HS 대조군에서는 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 종아리 두께의 감소가 인장되기 시작하여, 실험 전 기간동안 인정되었고, 결과적으로 4주간의 투여기간 동안의 종아리 두께의 변화 역시 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 감소를 나타내었다. 한편 oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서는 각각 투여 시작7일후부터HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 종아리 두께의 증가가 인정되었으며, 결과적으로 투여 기간 동안의 종아리 두께의 변화량 역시 HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 증가를 각각 나타내었다.From 7 days after the start of HS, decrease in calf thickness started to be significant (p <0.01) in the HS control group as compared to the normal medium control group, and was recognized during the whole experiment period. As a result, (P <0.01) compared to the normal control group. On the other hand, in oxymetholone, 150, 100 and 50 mg / kg group, the increase in calf thickness was significantly increased (p <0.01 or p <0.05) The calf thickness variation was also significantly (p <0.01) higher than the HS control group.
HS 대조군에서는 약물투여 4주 동안의 종아리 두께 변화량이 정상 매체 대조군에 비해 -1357.38%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서는 각각 HS 대조군에 비해 30.86, 53.02, 28.64 및 16.78%의 변화를 나타내었다.In the HS control group, the change in calf thickness during the 4 weeks of drug administration was -1357.38% compared to the normal control group. In oxymetholone,
- 근육 노출 후 비복근 두께의 변화 - Changes in gastrocnemius thickness after muscle exposure
HS 대조군에서는 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 근육 노출 후 비복근 두께의 감소가 인정되었으나, oxymetholone 및 모든 오미자 종자 추출물 투여군에서는 각각 HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 근육 노출 후 종아리 두께의 증가가 인정되었다.In the HS control group, the decrease in gastrocnemius thickness was significantly (p <0.01) lower than that in the normal control group. However, oxymetholone and all of the Omija seed extract group were significantly (p <0.01) An increase in thickness was recognized.
HS 대조군에서는 근육 노출 후 종아리 두께가 정상 매체 대조군에 비해 -37.38%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서 각각 HS 대조군에 비해 22.68, 30.69, 23.92 및 10.30%의 변화를 나타내었다.In the HS control group, the calf thickness was -37.38% as compared with the normal control group, and the oxymetholone,
- 비복근 중량의 변화 - Variation of gastrocnemius weight
HS 대조군에서는 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 비복근 근육 절대 중량의 감소가 각각 인정되었으나, oxymetholone 및 모든 오미자 종자 추출물 투여군에서는 각각 HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 비복근 중량의 증가가 인정되었다. 한편 비복근의 상대중량은 HS 대조군을 포함한 모든 실험군에서 의미 있는 변화를 나타내지 않았다.(P <0.01) decreased in the HS control group compared to the normal control group, but the oxymetholone and all the Schizandrae extract group showed a significant increase in gastrocnemius weight (p <0.01) compared to the HS control group . On the other hand, the relative weight of gastrocnemius showed no significant change in all experimental groups including HS control group.
HS 대조군에서는 비복근 절대 중량이 정상 매체 대조군에 비해 -40.76%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서 각각 HS 대조군에 비해 21.90, 33.14, 22.29 및 13.11%의 변화를 나타내었다.In the HS control group, the absolute weight of the gastrocnemius showed a change of -40.76% as compared with the normal medium control group, and that of oxymetholone,
HS 대조군에서는 체중에 대한 비복근 상대 중량이 정상 매체 대조군에 비해 -1.00%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서 각각 HS 대조군에 비해 -7.80, -3.51, -4.88 및 -7.33%의 변화를 나타내었다.In the HS control group, the relative weight of the gastrocnemius relative to body weight was -1.00% compared to the normal medium control group. In oxymetholone,
- 비복근 Atrogin-1 mRNA 발현의 변화- Changes in gastrocnemius Atrogin-1 mRNA expression
정상 매체 대조군에 비해 HS 대조군에서는 유의성 있는 (p<0.01) 비복근 Atrogin-1 mRNA 발현의 증가가 인정되었으나, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서는 각각 HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) Atrogin-1 mRNA 발현의 감소가 인정되었다.(P <0.01) gonadotropin Atrogin-1 mRNA expression was increased in the HS control group compared to the normal medium control group, whereas the oxymetholone and omija seed extract groups at 150, 100 and 50 mg / <0.01). Atrogin-1 mRNA expression was decreased.
HS대조군에서는 비복근 Atrogin-1 mRNA 발현이 정상 매체 대조군에 비해 290.67%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서 각각 HS 대조군에 비해 -40.96, -53.11, -42.66 및 -34.98%의 변화를 나타내었다. In the HS control group, Atrogin-1 mRNA expression of gastrocnemius was 290.67% higher than that of the normal control group. In oxymetholone,
- 비복근 MuRF1 mRNA 발현의 변화- Changes in gastrocnemius MuRF1 mRNA expression
정상 매체 대조군에 비해 HS 대조군에서는 유의성 있는 (p<0.01) 비복근 MuRF1 mRNA 발현의 증가가 인정되었으나, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서는 각각 HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) MuRF1 mRNA 발현의 감소가 인정되었다.Significant (p <0.01) increased gastrocnemius MuRF1 mRNA expression was observed in the HS control group compared to the normal medium control group. However, in the oxymetholone and
HS대조군에서는 비복근 MuRF1 mRNA 발현이 정상 매체 대조군에 비해 220.67%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서 각각 HS 대조군에 비해 -30.93, -53.69, -28.90 및 -22.56%의 변화를 나타내었다.In the HS control group, the expression of gastrocnemius MuRF1 mRNA was 220.67% as compared with that of the normal medium control group, and -30.93, -53.69, -28.90 and -30.93, respectively, in the oxymetholone and
- 비복근 PI3K mRNA 발현의 변화- Changes in gastrocnemius PI3K mRNA expression
정상 매체 대조군에 비해 HS 대조군에서는 유의성 있는 (p<0.01) 비복근 PI3K mRNA 발현의 증가가 인정되었으나, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서는 각각 HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) PI3K mRNA 발현의 증가가 인정되었다. 한편 oxymetholone 투여군에서는 HS 대조군에 비해 의미 있는 PI3K mRNA 발현의 변화는 인정되지 않았다.PI3K mRNA expression was significantly increased (p <0.01) in the HS control group compared to the normal medium control group, but PI3K mRNA expression was significantly increased in the 150, 100 and 50 mg / mRNA expression was increased. On the other hand, no significant changes in expression of PI3K mRNA were observed in oxymetholone treated group compared to HS control group.
HS대조군에서는 비복근 PI3K mRNA 발현이 정상 매체 대조군에 비해 195.67%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서 각각 HS 대조군에 비해 4.11, 34.67, 21.87 및 9.24%의 변화를 나타내었다.In the HS control group, PI3K mRNA expression of the gonadotropin was 195.67% higher than that of the normal control group. In the oxymetholone,
- 비복근 Akt1 mRNA 발현의 변화- Changes in gastrocnemius Akt1 mRNA expression
정상 매체 대조군에 비해 HS 대조군에서는 유의성 있는 (p<0.01) 비복근 Akt1 mRNA 발현의 증가가 인정되었으나, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서는 각각 HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) Akt1 mRNA 발현의 증가가 인정되었다. 한편 oxymetholone 투여군에서는 HS 대조군에 비해 의미 있는 Akt1 mRNA 발현의 변화는 인정되지 않았다.Significant (p <0.01) gonadotropin Akt1 mRNA expression was observed in the HS control group compared with the normal medium control group. However, in the 150, 100 and 50 mg / kg group treated with Omija seed extract, ≪ 0.05), indicating an increase in Akt1 mRNA expression. On the other hand, no significant change in Akt1 mRNA expression was observed in oxymetholone treated group compared to HS control group.
HS대조군에서는 비복근 Akt1 mRNA 발현이 정상 매체 대조군에 비해 90.50%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서 각각 HS 대조군에 비해 4.20, 65.97, 48.12 및 32.63%의 변화를 나타내었다.In the HS control group, the expression of Akt1 mRNA was 90.50% higher than that of the normal control group. In the oxymetholone,
- 비복근 Adenosine A1R mRNA 발현의 변화- Changes in adenosine A1R mRNA expression in gastrocnemius
정상 매체 대조군에 비해 HS 대조군에서는 유의성 없는 비복근 Adenosine A1R mRNA 발현의 증가가 인정되었으나, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서는 각각 HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) Adenosine A1R mRNA 발현의 증가가 인정되었다. 한편 oxymetholone 투여군에서도 HS 대조군에 비해 유의성은 인정되지 않았으나, 경미한 Adenosine A1R mRNA 발현의 증가가 인정되었다.Adenosine A1R mRNA expression was significantly increased in the HS control group compared to the normal control group. However, Adenosine A1R mRNA expression was significantly increased in the 150, 100 and 50 mg / kg groups of Omija seed extracts compared to the HS control group (p <0.01) An increase was recognized. In the oxymetholone-treated group, however, the adenosine A1R mRNA expression was slightly increased compared with the HS-treated group.
HS대조군에서는 비복근 Adenosine A1R mRNA 발현이 정상 매체 대조군에 비해 42.67%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서 각각 HS 대조군에 비해 27.45, 375.70, 231.07 및 188.32%의 변화를 나타내었다.In the HS control group, adenosine A1R mRNA expression was 42.67% higher than that of the normal control group. In the oxymetholone,
- 비복근 TRPV4 mRNA 발현의 변화- Changes in gastrocnemius TRPV4 mRNA expression
정상 매체 대조군에 비해 HS 대조군에서는 유의성 없는 비복근 TRPV4 mRNA 발현의 증가가 인정되었으나, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서는 각각 HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) TRPV4 mRNA 발현의 증가가 인정되었다. 한편 oxymetholone 투여군에서도 HS 대조군에 비해 유의성은 인정되지 않았으나, 경미한 TRPV4 mRNA 발현의 증가가 인정되었다.The TRPV4 mRNA expression was significantly increased in the HS control group compared to the normal control group, but the TRPV4 mRNA expression was significantly increased (p <0.01) in the 150, 100 and 50 mg / kg group treated with Omija seed extract It was acknowledged. On the other hand, oxymetholone treated group did not show any significant difference compared to HS control group, but mild TRPV4 mRNA expression was increased.
HS대조군에서는 비복근 TRPV4 mRNA 발현이 정상 매체 대조군에 비해 37.50%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서 각각 HS 대조군에 비해 36.12, 160.48, 117.45 및 85.21%의 변화를 나타내었다.In the HS control group, the expression of gonadotropin TRPV4 mRNA was 37.50% higher than that of the normal control group, and the change of 36.12, 160.48, 117.45 and 85.21% in the oxymetholone,
- 비복근 Myostatin mRNA 발현의 변화- Changes in myostatin mRNA expression in gastrocnemius muscle
정상 매체 대조군에 비해 HS 대조군에서는 유의성 있는 (p<0.01) 비복근 Myostatin mRNA 발현의 증가가 인정되었으나, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서는 각각 HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) Myostatin mRNA 발현의 감소가 인정되었다.Significant (p <0.01) gonadal myostatin mRNA expression was increased in the HS control group compared to the normal medium control group but significantly higher in the oxymetholone and omija seed extract groups of 150, 100 and 50 mg / kg than in the HS control group (p <0.01 Or p < 0.05).
HS대조군에서는 비복근 Myostatin mRNA 발현이 정상 매체 대조군에 비해 607.00%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서 각각 HS 대조군에 비해 -41.37, -56.01, -42.48 및 -39.46%의 변화를 나타내었다.In the HS control group, myostatin mRNA expression was 607.00% higher than that of the normal control group, and -41.37, -56.01, -42.48, and -41.47, respectively, in the oxymetholone,
- 비복근 SIRT1 mRNA 발현의 변화- Changes in gastrocnemius SIRT1 mRNA expression
정상 매체 대조군에 비해 HS 대조군에서는 유의성 있는 (p<0.01) 비복근 SIRT1 mRNA 발현의 증가가 인정되었으나, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서는 각각 HS 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) SIRT1 mRNA 발현의 감소가 인정되었다.In the HS control group, the expression of gastrocnemic SIRT1 mRNA was significantly increased (p <0.01) compared to the normal control group, but the oxymetholone and Omiza seed extracts were significantly (p <0.01) Or p < 0.05), indicating a decrease in SIRT1 mRNA expression.
HS 대조군에서는 비복근 SIRT1 mRNA 발현이 정상 매체 대조군에 비해 503.83%의 변화를 나타내었으며, oxymetholone, 오미자 종자 추출물 150, 100 및 50mg/kg 투여군에서 각각 HS 대조군에 비해 -39.53, -60.25, -40.82 및 -28.43%의 변화를 나타내었다In the HS control group, the gastrocnemius SIRT1 mRNA expression was 503.83% higher than that of the normal medium control group, and -39.53, -60.25, -40.82, and -40.82, respectively, in the oxymetholone and
하기의 표 3은 HS로 유발된 근위축모델에서의 비복근내의 근단백질 관련 mRNA 변화에 관한 것이다.
The following Table 3 relates to the muscle protein-related mRNA changes in the gastrocnemius in the HS-induced myosinocyte model.
TargetsGroups
Targets
(수치는 평균±표준편차, relative expressions/18s ribosomal RNA, SSE = 오미자종자추출물, HS = 하지거상법; MuRF1 = muscle RING-finger protein-1; PI3k = phosphatidylinositol 3-kinase; A1R = A1 receptor; TRPV4 = transient receptor potential cation cannel subfamily V member 4; SIRT1 = Sirtulin 1; ap<0.01 as compared with intact control by ANOVA test; bp<0.01 and cp<0.05 as compared with HS control by ANOVA test)(Mean ± standard deviation, relative expressions / 18s ribosomal RNA, SSE = Schizandra chinensis extract, HS = unstable method; MuRF1 = muscle RING-finger protein-1; PI3k = phosphatidylinositol 3-kinase; A1R = A1 receptor; TRPV4 = transient receptor potential cation cannel
하기의 표4는 HS로 유발된 근위축모델에서의 비복근의 조직형태학적 변화에 관한 것이다.The following Table 4 relates to the histomorphological changes of the gastrocnemius in the HS-induced atrophy model.
(수치는 평균±표준편차; SSE = 오미자종자추출물; HS = 하지거상법, ap<0.01 as compared with intact control by ANOVA test; bp<0.01 as compared with HS control by ANOVA test)(Values are mean ± SD; SSE = Schisandra seed extract; HS = not elevation method, a p <0.01 as compared with intact control by ANOVA test; b p <0.01 as compared with HS control by ANOVA test)
하기의 표 5는 HS로 유발된 근위축모델에서 비복근의 myostatin의 변화에 관한 것이다.Table 5 below shows the changes in gastrocnemius myostatin in the HS-induced atrophy model.
(수치는 평균 ±표준편차, relative expressions/18s ribosomal RNA(Mean ± SD, relative expressions / 18s ribosomal RNA
SSE = 오미자종자추출물; HS = 하지거상법, ap<0.01 as compared with intact control by ANOVA test; bp<0.01 as compared with HS control by ANOVA test)SSE = Omija seed extract; HS = not elevated, a p <0.01 compared with intact control by ANOVA test; b p <0.01 compared with HS control by ANOVA test)
하기의 도 3을 참조하면, HS유발군에서 7일째에 정상대조군에 비하여 체중감소가 발생하였다(화살표 day 7). 그러나 oxymetholone 투여군과 SSE, 100mg/kg 투여군에서는 유의한 체중증가가 투여후 21일째부터 HS대조군 대비 유의한 증가를 나타내었으며, SSE50mg/kg 투여군에서는 27일째부터 HS투여군 대지 현저한 체중증가를 나타내었다.(수치는 평균±표준편차, SSE = 오미자종자추출물; HS = 하지거상법; Day -1: 투여 1일 전날 또는 하지거상일; Day 0: 첫 투여일; Day 28: 투여28일째 또는 희생일; † 절식일 (밤샘절식); ap<0.01 as compared with intact control by ANOVAtest; bp<0.01 and c p<0.05 as compared with HS control by ANOVA test)Referring to FIG. 3, weight loss occurred on the 7th day in the HS-induced group as compared with the normal control group (arrow day 7). However, significant increases in body weight gain were observed in the oxymetholone-treated group and in the SSE and 100 mg / kg-treated group compared to the HS-treated group at 21 days after the administration and in the
도 4를 참조하면, HS 대조군에서는 정상대조군 대비 day 7일에 현저한 장딴지근의 감소를 나타내었다(화살표). 그러나 oxymetholone투여군과 오미자종자투여군에서는 HS대조군 대비 day 7 일째부터 현저한 장딴지근 두께의 증가가 나타났다.(수치는 평균±표준편차, SSE = 오미자종자추출물; HS = 하지거상법; Day -1: 투여1일전날 또는 하지거상일; Day 0: 첫 투여일; Day 28: 투여28일째 또는 희생일; † 절식일 (밤샘절식); ap<0.01 as compared with intact control by ANOVA test; bp<0.01 as compared with HS control by ANOVA test)Referring to FIG. 4, in the HS control group, a significant decrease in the calf muscle was noted at
도 5를 참조하면, HS 대조군에서는 정상대조군 대비 절대적 비복근무게의 현저한 감소를 나타내었다. 그러나 oxymetholone투여군과 오미자종자추출물 투여군에서는 HS대조군 대비 현저한 절대 비복근 무게의 증가를 나타내었다. (수치는 평균±표준편차, SSE : 오미자종자추출물, HS = 하지거상법, ap<0.01 as compared with intact control by ANOVA test, bp<0.01 as compared with HS control by ANOVA testReferring to FIG. 5, the HS control group showed a significant decrease in the absolute gastrocnemius weight compared to the normal control group. However, the administration of oxymetholone and Omija seed extract showed a marked increase in absolute gastrocnemius weight compared to HS control. (Mean ± SD, SSE: Schizandra chinensis extract, HS = not elevated, a p <0.01 compared with intact control by ANOVA test, b p <0.01 compared with HS control by ANOVA test
도 6을 참조하면, HS 대조군에서는 정상대조군 대비 절대적 비복근무게의 현저한 감소를 나타내었다. 그러나 oxymetholone투여군과 오미자종자추출물 투여군에서는 HS대조군 대비 현저한 절대 비복근 무게의 증가를 나타내었다.(수치는 평균±표준편차, SSE : 오미자종자추출물, HS = 하지거상법, ap<0.01 as compared with intact control by ANOVA test, bp<0.01 as compared with HS control by ANOVA test)Referring to FIG. 6, the HS control group showed a significant decrease in the absolute gastrocnemius weight compared to the normal control group. However, oxymetholone group and Schisandra chinensis seed extract administration group showed an increase in significant absolute gastrocnemius muscle weight compared to HS control group (figure mean ± SD, SSE:. Chinensis Seed Extract, HS = not elevation method, a p <0.01 as compared with intact control by ANOVA test, b p <0.01 compared with HS control by ANOVA test)
도 7을 참조하면, HS대조군에서는 전형적인 근위축병변인 근섬유다발의 감소(평균 근섬유직경 감소), 염증세포침윤(평균 염증세포수증가), 국소섬유화(콜라겐섬유의 점유영역증가; sirus red stain에서 붉은색)가 정상대조군에 비하여 증가하였다. 그러나 이러한 근위축병변이 오미자종자추출물의 투여로 용량의존적으로 현저하게 감소하였다.(A - C = 정상대조군; D - F = HS 대조군; G - I = Oxymetholone 투여군; J - L = SSE 150mg/kg; M - O = SSE 100mg/kg ; P - R = SSE 50mg/kg, SSE = 오미자종자추출물; HS = 하지거상법; Scale bars = 40μm)7, in the HS control group, a decrease in the number of muscle fibers (average fiber diameter reduction), inflammatory cell infiltration (increase in the average number of inflammatory cells), local fibrosis (increase in collagen fibers occupied area, sirus red stain Red color) was increased compared to the normal control group. However, these atrophic lesions significantly decreased dose - dependently on the administration of Omija seed extract (A - C = normal control group; D - F = HS control group; G - I = oxymetholone group; J - L =
이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the invention is not limited to the disclosed exemplary embodiments, Of the right.
Claims (8)
근위축(Muscular Dystrophy) 예방 및 개선 효과를 가지는 것인
오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물.An extract of Schizandra chinensis and an extract of Schizandra chinensis mixed with 1 to 4 carbon lower alcohols or a 50 to 200% by volume alcohol aqueous solution thereof,
Muscular Dystrophy Prevention and improvement effects that have
A composition for preventing and improving muscle atrophy comprising an extract of Omija.
상기 조성물은 Atrogin-1 mRNA, MuRF1 mRNA, Myostatin mRNA 및 SIRT1 mRNA로 이루어진 군에서 어느 하나 이상의 발현을 저해시키는 것인
오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물.The method of claim 1, wherein
Wherein said composition inhibits expression of any one or more of the group consisting of Atrogin-1 mRNA, MuRF1 mRNA, Myostatin mRNA and SIRT1 mRNA
A composition for preventing and improving muscle atrophy comprising an extract of Omija.
상기 조성물은 PI3K mRNA, Adenosine A1R mRNA, Akt1 mRNA 및 TRPV4 mRNA 로 이루어진 군에서 어느 하나 이상의 발현을 증가시키는 것인
오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물.The method of claim 1, wherein
Wherein said composition increases expression of any one or more of the group consisting of PI3K mRNA, Adenosine A1R mRNA, Akt1 mRNA and TRPV4 mRNA
A composition for preventing and improving muscle atrophy comprising an extract of Omija.
상기 근위축은 불용성 근위축(disuse atrophy of muscle), 기계적 자극 부재 및 골격근의 탈신경지배(denervation) 중 어느 하나 이상에 의한 것인
오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물.The method of claim 1, wherein
The atrophy is caused by at least one of disuse atrophy of muscle, mechanical stimulation member, and denervation of skeletal muscle
A composition for preventing and improving muscle atrophy comprising an extract of Omija.
상기 오미자는 150 내지 210℃에서 건조 후 동결건조한 것이고,
상기 오미자는 상기 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올과 1 : 3 내지 3 : 1의 부피비인 것인
오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물.The method according to claim 1,
The Schizosaccharomyces pomaceae is lyophilized after drying at 150 to 210 ° C,
Wherein the organophosphorus is in a volume ratio of 1: 3 to 3: 1 with the lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms
A composition for preventing and improving muscle atrophy comprising an extract of Omija.
상기 조성물은 근섬유다발의 감소, 근육의 염증세포 침윤 및 국소섬유화에 대한 예방 및 개선효과를 가지는 것인
오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물.The method according to claim 1,
Wherein said composition has a preventive and ameliorative effect on reduction of muscle fiber bundles, inflammatory cell infiltration of muscles, and local fibrosis
A composition for preventing and improving muscle atrophy comprising an extract of Omija.
상기 오미자 추출물을 0.1 내지 10 중량%로 포함되고,
식품학적으로 허용 가능한 식품보조첨가제를 더 포함하는 근위축 예방 또는 개선용 식품 조성물.The method according to claim 1,
Wherein said Omiza extract is contained in an amount of 0.1 to 10% by weight,
A food composition for preventing or ameliorating atrophy, which further comprises a food-acceptable food-aid additive.
상기 건조된 오미자를 분쇄하여 오미자 분말을 제조하는 오미자 분쇄단계,
상기 오미자 분말을 동결 건조하여 동결건조 된 오미자 분말을 제조하는 동결건조 단계 및
상기 동결건조 된 오미자 분말을 탄소수 1 내지 4개의 저급 알코올 또는 이들의 50 내지 200 부피% 알코올 수용액과 1 : 3 내지 3 : 1의 부피비로 혼합하여 15 내지 35℃에서 10 내지 30 시간 동안 오미자 추출물을 제조하는 단계를 포함하는 것이고,
상기 오미자 추출물은 근위축(Muscular Dystrophy) 예방 및 개선 효과를 가지는 것인
오미자 추출물을 포함하는 근위축 예방 및 개선용 조성물의 제조방법.An omija drying step of drying omiza at 150 to 210 DEG C to produce dried omija,
Crushing the dried omiza to produce an omija powder,
A lyophilizing step of lyophilizing the above-mentioned schizophyll powder to prepare a lyophilized Schizosaccharum powder;
The lyophilized Schizandra chinensis powder is mixed with a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or a 50 to 200 volume% alcohol aqueous solution thereof in a volume ratio of 1: 3 to 3: 1, and the Schizosaccharomyces japonica extract at 15 to 35 ° C for 10 to 30 hours Comprising the steps of:
The above-mentioned Schizandra chinensis extract has the effect of preventing and improving Muscular Dystrophy
A method for preparing a composition for preventing and improving muscle atrophy comprising an extract of Omija.
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