KR101362097B1 - 플라스모디움 항원을 포함하는 백신 - Google Patents

플라스모디움 항원을 포함하는 백신 Download PDF

Info

Publication number
KR101362097B1
KR101362097B1 KR1020077007679A KR20077007679A KR101362097B1 KR 101362097 B1 KR101362097 B1 KR 101362097B1 KR 1020077007679 A KR1020077007679 A KR 1020077007679A KR 20077007679 A KR20077007679 A KR 20077007679A KR 101362097 B1 KR101362097 B1 KR 101362097B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
protein
rts
malaria
delete delete
vaccine
Prior art date
Application number
KR1020077007679A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20070052342A (ko
Inventor
조셉 디 코헨
나디아 가브리엘라 토르니에포쓰
Original Assignee
글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=33306702&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR101362097(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. filed Critical 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이.
Publication of KR20070052342A publication Critical patent/KR20070052342A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101362097B1 publication Critical patent/KR101362097B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/002—Protozoa antigens
    • A61K39/015—Hemosporidia antigens, e.g. Plasmodium antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6075—Viral proteins
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

본 발명은 말라리아 질병에 대해 면역화시키기 위한 말라리아 항원의 신규한 용도에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 중증 말라리아 질병에 대해 면역화시키기 위한 스포로조이트(sporozoite) 항원, 특히 써컴스포로조이트(circumsporozoite) (CS) 단백질 또는 이의 단편의 용도에 관한 것이다.

Description

플라스모디움 항원을 포함하는 백신 {VACCINES COMPRISING PLASMODIUM ANTIGENS}
본 발명은 말라리아 질병에 대해 면역화시키기 위한 말라리아 항원의 신규한 용도에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 중증 말라리아 질병에 대해 면역화시키기 위한 스포로조이트(sporozoite) 항원, 특히 써컴스포로조이트(circumsporozoite) (CS) 단백질 또는 이의 단편의 용도에 관한 것이다.
말라리아는 세계의 주요 보건 문제 중의 하나이다. 20세기 동안, 말라리아 방지 캠페인과 더불어 경제 사회적 발전은 세계의 많은 지역으로부터 말라리아를 근절시켜 왔고, 이는 세계 표면의 말라리아 영향 지역을 50%에서 27%로 감소시켰다. 그럼에도 불구하고, 예상 인구 성장을 고려해 볼 때, 2010년까지 세계 인구의 절반인 거의 35억명이 말라리아가 전염되는 지역에서 살게 될 것으로 예측된다1. 현재의 추정치는 매년 말라리아로 인해 백만명을 훨씬 상회하는 사망자가 발생하고, 아프리카만해도 어마어마한 경제적 비용이 년간 천억 달러에 상당함을 제시한다2.
이러한 수치는 국제 보건 단체에 제기되는 전세계적 말라리아 위험 및 난제 를 강조해준다. 이러한 위험의 원인은 다양하며, 이용가능하고, 입수가능하고, 종래에 매우 유효한 약제에 대한 광범한 내성의 출현으로부터 보건 체계의 붕괴 및 부족에서 자원의 결핍에 이른다. 이러한 질병을 조절하는 방법이 마련되지 않는 한, 건강 및 소아 생존율을 개선시키고, 빈곤을 감소시키고, 안전을 증대시키고, 가장 취약한 사회를 강화시키기 위한 전세계적 노력은 실패할 것이다.
말라리아의 가장 급성인 형태 중 하나는 말라리아로 인한 사망의 대부분의 원인이 되는 원생동물 기생충인 플라스모디움 팔시파룸 (Plasmodium falciparum)에 의해 야기된다.
플라스모디움 팔시파룸의 생활 주기는 복잡하며, 완결을 위해 2개의 숙주인 인간 및 모기를 필요로 한다. 인간의 감염은 감염된 모기의 타액 중의 스포로조이트의 접종(inoculation)에 의해 개시된다. 스포로조이트는 간으로 이동하여 간세포를 감염시키고 (간 단계), 여기서 이러한 스포로조이트는 적혈구외 세포내 단계를 통해 메로조이트(merozoite) 단계로 분화하고, 이는 적혈구(RBC)를 감염시켜서 무성 혈액 단계에서 주기적 복제를 개시한다. 주기는 RBC에서 다수의 메로조이트가 유성 가메토사이트(gametocyte)로 분화하여 모기에 의해 섭취됨으로써 완결되며, 모기에서 가메토사이트는 중간창자에서 일련의 단계를 통해 발달하여 침샘으로 이동하는 스포로조이트를 생성시킨다.
플라스모디움 팔시파룸의 스포로조이트 단계는 말라리아 백신의 하나의 잠재적인 표적으로서 확인되었다. 스포로조이트의 주요 표면 단백질은 써컴스포로조이트 단백질 (CS 단백질)로서 알려져 있다. 이러한 단백질은 다양한 균주에 대해 클 로닝되고, 발현되고, 시퀀싱되었으며, 균주의 예로는 NF54 균주인 클론 3D7가 있다 (Caspers et al., Mol. Biochem. Parasitol. 35, 185-190, 1989). 균주 3D7로부터의 단백질은 40회 반복되는 테트라펩티드 Asn-Ala-Asn-Pro를 포함하지만 4개의 부반복체 Asn-Val-Asp-Pro가 산재되어 있는 중심 면역우세 반복 영역을 지님을 특징으로 한다. 다른 균주의 경우, 주반복체 및 부반복체의 수 뿐만 아니라 이들의 상대적 위치도 달라진다. 이러한 중심 부분은 CS 단백질의 무반복 부분으로서 명명되는 비반복성 아미노산 서열로 구성된 N 및 C 말단 부분에 의해 플랭킹된다.
CS 단백질을 기재로 하는 글라소스미스클라인 바이오로지칼즈의 RTS,S 말라리아 백신은 1987년 이래로 개발중에 있으며, 현재 연구되고 있는 가장 진보된 말라리아 백신 후보체이다4. 이러한 백신은 플라스모디움 팔시파룸의 전적혈구 단계를 특이적으로 표적화하고, 말라리아에 걸린 적이 없는 성인 자원자의 실험실에서 성장시킨 감염된 모기를 통해 전달되는 플라스모디움 팔시파룸 스포로조이트에 의한 감염 및 반면역화(semi-immune) 성인의 자연 노출에 대해 보호를 제공한다5,6.
RTS,S/AS02A (RTS,S + 애쥬번트)를 6세 내지 11세 및 1세 내지 5세의 소아를 포함하는 감비아에서 수행된 연속 I상 실험에서 사용하였고, 이는 이러한 백신이 안전하고, 잘 용인되고 (well-tolerated), 면역원성임을 확인해주었다7. 후속하여, 소아 백신 투여량을 선택하고, 1세 내지 4세의 모잠비크 소아를 포함하는 I상 실험에서 실험하였는데, 이는 안전하고, 잘 용인되고, 면역원성인 것으로 밝혀졌다8.
그러나, 자연 노출 상태에서 플라스모디움 팔시파룸에 의해 야기되는 임상 질병으로부터 보호하기 위해서는 하나 이상의 항원이 필요하고, 기생충 생활 주기의 다양한 단계를 대표하는 다수의 항원이 필요하다는 것이 기존의 오랜 견해이다 (Page: 3 Webster, Daniel and Hill, Adrian V.S. Progress with new malaria vaccines. Bull World Health Organ, Dec. 2003, vol. 81, no.12, p.902-909. ISSN 0042-9686; Hoffman S. Save the children. Nature. 2004 Aug 19;430(7002):940-1). 또한, 기생충의 전적혈구 단계로부터의 CS와 같은 항원은 중증 질병에 대한 보호를 제공하기 위한 바람직한 항원이 아니라는 것이 일반적으로 유지되는 개념이었는데, 이는 중증 질병이 무성 단계 기생충에 의해 야기되고 CS와 같은 전적혈구 항원은 무성 단계 기생충에서 발현되지 않기 때문이다.
놀랄만한 결과가 나이 어린 아프리카 소아 실험에서 전적혈구 말라리아 항원에 의해 수득되었다. CS 단백질 기재 RTS,S 백신이 자연 노출하의 감염에 대해서 뿐만 아니라 플라스모디움 팔시파룸에 의해 야기되는 광범위한 임상 질병에 대해서도 보호를 제공할 수 있다는 것이 발견되었다. RTS,S 백신을 투여받은 소아들은 심각한 유해 사건, 입원, 및 사망을 포함하는 말라리아로부터의 심각한 합병증을 대조군의 소아들에 비해 적게 겪었다.
특히, 중증 말라리아 질병의 발병률이 이러한 CS 기재 백신에 의해 감소될 수 있다는 결과는 의외였고, 놀랄만한 것이었다. 중증 말라리아 질병은 임상 실시에 대한 WHO 지침에 기재되어 있다 (Page: 3 World Health Organization. Management of severe malaria, a practical handbook. Second edition, 2000. http://mosquito.who.int/docs/hbsm.pdf). 중증 말라리아에 대한 WHO에 근거한 정의에 따른 소아 분류는 병세가 매우 위중하여 사망할 위험성이 높은 소아로 판정한다. 고위험성은 사망할 위험이 약 30% 이상임을 의미하는 것으로 여겨질 수 있다.
또한, 새로운 감염 또는 임상 에피소드 둘 모두에 대한 RTS,S 백신 효능은 약화되지 않거나 매우 서서히 약화되는 것으로 나타난다. 실험에서 6개월 추적검사의 종료시에, 감염의 이환률에 있어서 현저한 차이가 존재하였으므로 백신은 여전히 효능이 있었다. 이는 백신 효능이 단기적임을 제시했던 말라리아에 걸린 적이 없는 자원자 또는 감비아 성인에서의 종래 시험과는 극명한 대조를 이룬다.
따라서, 본 발명은 중증 말라리아 질병에 대해 백신접종하기 위한 약제의 제조에서 약제학적으로 허용되는 애쥬번트 또는 담체와 함께 사용되는 전적혈구 단계에서 발현되는 플라스모디움 항원, 바람직하게는 스포로조이트 항원의 용도를 제공한다.
본 발명은 특히 중증 플라스모디움 팔시파룸 질병의 발병률을 감소시키는 것에 관한 것이다.
이러한 백신의 바람직한 표적 집단은 소아, 특히 5세 미만의 소아, 더욱 특히 1세 내지 4세의 소아이다.
바람직하게는, 플라스모디움 항원은 플라스모디움 팔시파룸 항원이다.
항원은 스포로조이트 또는 간 단계와 같은 기생충의 다른 전적혈구 단계에서 발현되는 임의의 항원으로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 항원은 써컴스포로조이트 (CS) 단백질, 간 단계 항원-1 (LSA-1), 간 단계 항원-3 (LSA-3), 트롬보스폰딘 관련 불명 단백질 (thrombospondin related anonymous protein, TRAP) 및 (적혈구 단계 뿐만 아니라) 간 단계에서 존재하는 것으로 최근 밝혀진 첨단 메레조이트(apical merezoite) 항원-1 (AMA-1)로부터 선택된다. 이러한 항원들 모두는 당 분야에 널리 공지되어 있다. 항원은 전체 단백질 또는 이의 면역원성 단편일 수 있다. 말라리아 항원의 면역원성 단편은 널리 공지되어 있고, 예를 들어 AMA-1으로부터의 엑토도메인(ectodomain)이 있다.
바람직하게는, 플라스모디움 항원은 B형 간염으로부터의 표면 항원 (HBsAg)에 융합된다.
본 발명에 사용되는 바람직한 항원은 써컴스포로조이트 (CS) 단백질로부터 유래되며, 바람직하게는 HBsAg와의 하이브리드 단백질 형태로 존재한다. 항원은 전체 CS 단백질 또는 함께 융합될 수 있는 CS 단백질의 단편(들)을 포함하는 이의 일부일 수 있다.
바람직하게는, CS 단백질 기재 항원은 플라스모디움의 CS 단백질의 실질적으로 모든 C-말단 부분, CS 단백질 면역우세 영역의 4개 이상의 탠덤(tandem) 반복체, 및 B형 간염으로부터의 표면 항원 (HBsAg)을 포함하는 하이브리드 단백질의 형태로 존재한다. 바람직하게는, 하이브리드 단백질은 CS 단백질의 C-말단 부분에 실질적으로 상동인 160개 이상의 아미노산을 함유하는 서열을 포함한다. 특히, CS 단백질의 "실질적으로 모든" C 말단 부분은 소수성 고정(anchor) 서열이 결여된 C 말단을 포함한다. CS 단백질은 C 말단으로부터의 마지막 12개 아미노산이 결여될 수 있다.
가장 바람직하게는, 본 발명에 사용되는 하이브리드 단백질은 선형 링커를 통해 HBsAg의 N-말단에 프레임 융합된(fused in frame) 균주 NF54 (Caspers et al, 상기 참조)로부터 유래된 플라스모디움 팔시파룸 3D7 클론의 아미노산 207-395에 실질적으로 상응하는 플라스모디움 팔시파룸의 CS 단백질의 부분을 포함하는 단백질이다. 링커는 HBsAg로부터의 preS2의 부분을 포함할 수 있다.
본 발명에 사용되는 바람직한 CS 구성물은 WO 93/10152에 개설되어 있다. 가장 바람직한 것은 WO 93/10152 (여기서는 RTS*로 표시되어 있음) 및 WO 98/05355에 기재된 RTS로서 공지된 하이브리드 단백질이며, 상기 두 특허공개문헌의 전체 내용은 본 명세서에 참조로 포함되어 있다.
특히 바람직한 하이브리드 단백질은 다음과 같은 성분들로 구성된 RTS로서 공지된 하이브리드 단백질이다:
ㆍ 사크로마이스 세레비시애 (Sacchromyes cerevisiae) TDH3 유전자 서열로부터 유래된 누클레오티드 1059 내지 1061에 의해 엔코딩되는 메티오닌-잔기. (Musti A.m. et al Gene 1983 25 133-143).
ㆍ 하이브리드 유전자를 구성하기 위해 사용되는 클로닝 절차에 의해 생성되는 누클레오티드 서열 (1062 내지 1070)로부터 유래되는 3개의 아미노산 Met Ala Pro.
ㆍ 플라스모디움 팔시파룸 균주 3D7의 써컴스포로조이트 단백질 (CSP)의 아미노산 207 내지 395를 대표하는 누클레오티드 1071 내지 1637에 의해 엔코딩되는 189개 아미노산의 스트레치(stetch) (Caspers et al, 상기 참조).
ㆍ 하이브리드 유전자를 구성하기 위해 사용되는 클로닝 절차에 의해 생성되는 누클레오티드 1638 내지 1640에 의해 엔코딩되는 아미노산 (Gly).
ㆍ 누클레오티드 1641 내지 1652에 의해 엔코딩되고, B형 간염 바이러스 (adw 혈청형) preS2 단백질의 4개의 카르복시 말단 잔기를 대표하는 4개의 아미노산 Pro Val Thr Asn.
ㆍ 누클레오티드 1653 내지 2330에 의해 엔코딩되고, B형 간염 바이러스 (adw 혈청형)의 S 단백질을 특정하는 226개의 아미노산의 스트레치.
바람직하게는, RTS는 혼합 입자인 RTS,S의 형태로 존재한다.
바람직한 RTS,S 구성물은 동시에 합성되고, 정제 동안 자발적으로 복합 미립 구조 (RTS,S)를 형성하는 2개의 폴리펩티드인 RTS 및 S를 포함한다.
RTS 단백질은 바람직하게는 효모, 가장 바람직하게는 에스. 세레비시애 (S. cerevisiae)에서 발현된다. 이러한 숙주에서, RTS는 지질단백질 입자로서 발현될 것이다. 바람직한 수용체 효모 균주는 바람직하게는 이의 게놈에 B형 간염 S 발현 카세트의 수 개의 삽입된 카피를 이미 함유한다. 따라서, 생성된 균주는 자발적으로 혼합 (RTS,S) 지질단백질 입자로 동시 조립되는 2개의 폴리펩티드인 S 및 RTS를 합성한다. 이러한 입자는 유리하게는 이들 표면에서 하이브리드의 CSP 서열을 나타낸다. 유리하게는, 이러한 혼합 입자에서 RTS:S의 비는 1:4 이다.
본 발명은 보호, 특히 중증 질병에 대한 보호를 제공하기 위해 필요할 것으로 종래에 여겨졌던 것과는 대조적으로 백신에서 단일 말라리아 항원을 사용하는 것을 가능하게 한다. 따라서, 본 발명에 따르면, RTS 또는 다른 항원이 바람직하 게는 백신에서 유일한 말라리아 항원이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 중증 말라리아에 대한 백신접종에 사용되는 약제의 제조에서 단일 말라리아 단백질로부터의 항원의 용도를 제공한다. 말라리아 단백질은 CS 단백질, AMA-1, TRAP, LSA-1 및 LSA-3을 포함하는 본 명세서에 기재된 단백질 중 어느 하나일 수 있다. 가장 바람직하게는, 이러한 단백질은 본 명세서에 기재된 바와 같은 하이브리드 형태의 CS 단백질이다.
또한, 본 발명은 전적혈구 단계에서 발현되는 말라리아 항원 및 애쥬번트를 포함하는 조성물을 피검체에 투여하는 것을 포함하여 중증 말라리아를 예방하거나 완화시키는 방법을 제공한다. 항원 및 애쥬번트는 본 명세서에 기재된 바와 같다. 바람직한 피검체는 소아, 바람직하게는 본 명세서에 기재된 연령 범위의 소아이다.
본 발명에서 사용되는 적합한 백신접종 스케줄은 1개월 간격으로 백신을 3회 투여하는 것을 포함한다.
중증 말라리아는 임상 실시에 대한 WHO 가이드라인에 따라 규정될 수 있다 (상기 참조). 본 명세서에 기재된 실험에서, 중증 말라리아를 규정하기 위한 기준은 임상 실시에 대한 WHO 지침으로부터 유래하며, 하기 표에 제시되어 있다.
1차 종점으로서, 실험에 규정된 말라리아의 임상 에피소드는 기엠사(Giemsa) 염색된 두꺼운 혈액 필름 (blood film)상에서 ㎕ 당 15 000을 초과하는 플라스모디움 팔시파룸 무성 기생충혈증의 존재 및 발열(fever) (37.5℃ 이상의 겨드랑이 체온)의 존재를 나타낼 필요가 있었다.
중증 말라리아를 규정짓는 것은 하기 중 하나 이상의 추가의 존재였다: 중증 말라리아 빈혈 (PCV < 15%), 뇌 말라리아 (블랑티르 코마 스코어 (Blantyre coma score) < 2), 또는 다발성 발작 (이전 24시간 동안 2회 이상의 전신 경련), 쇠약 (도움없이 앉을 수 없는 능력으로서 규정됨), 저혈당 (< 2.2mmol/dL 또는 < 40mg/dL), 임상적으로 의심되는 산증 또는 순환 허탈을 포함할 수 있는 다른 신체 계통의 중증 질병. 이는 하기 표에 제시되어 있다.
중증 말라리아 환자 정의
중증 말라리아 ㆍ 무성 기생충혈증 확정 판단(definitive reading)
빈혈 ㆍ 적혈구용적율 < 15%
ㆍ 질병의 보다 상당한 다른
이유가 없음
뇌 말라리아 ㆍ 무성 기생충혈증 확정 판단 저혈당증의 교정후 및 발작을
ㆍ 코마 스코어 ≤2 조절한 지 60분 후에 코마 스
ㆍ 의식 상실의 다른 확인가능한 코어를 평가함. 발작이 30분
이유가 없음 이내에 조절될 수 없는 경우,
소아가 포함됨.
중증 말라리아 ㆍ 무성 기생충혈증 확정 판단
(그 밖의 경우) ㆍ 질병의 보다 상당한 다른
이유가 없음
ㆍ 중증 말라리아 빈혈 또는
뇌 말라리아에 대한 기준을
충족시키지 못함
ㆍ 하기 증상 중 하나:
- 다발성 발작 입원 전 24시간 이내에 2회
이상의 전신 경련
- 쇠약 도움없이 앉을 수 없는 능력
- 저혈당증 < 2.2mmol/dL 또는 < 40mg/dL
- 산증 서류 입증 징후 및/또는 실험
실 판독
- 순환 허탈 서류 입증 징후 및/또는 실험
실 판독
본 발명에 따르면, 정제된 하이브리드 단백질의 수용액이 직접 사용되어, 적합한 애쥬번트 또는 담체와 배합될 수 있다. 또한, 단백질은 적합한 애쥬번트 또는 담체와 혼합되기 전에 동결건조되어 있을 수 있다.
본 발명에 따른 바람직한 백신 투여량은 바람직하게는 250 ㎕ (최종 액체 제 형) 중의 투여 당 1 내지 100 ㎍ RTS,S, 더욱 바람직하게는 5 내지 75 ㎍ RTS,S, 가장 바람직하게는 25 ㎍ RTS,S 단백질의 용량이다. 이는 소아, 특히 5세 미만의 소아, 더욱 특히 1 내지 4세의 소아에서 사용하기 위한 바람직한 투여량이고, 바람직한 성인 투여량의 절반을 나타낸다. 바람직한 성인 투여량은 500 ㎕ (최종 액체 제형) 중의 투여 당 1 내지 100 ㎍ RTS,S, 더욱 바람직하게는 5 내지 75 ㎍ RTS,S, 가장 바람직하게는 50 ㎍ RTS,S의 용량이다.
본 발명에 따르면, 항원은 애쥬번트 또는 담체와 배합된다. 바람직하게는, 애쥬번트, 특히 Th1 유형 반응의 우선적 자극인자인 애쥬번트가 존재한다.
적합한 애쥬번트로는 비제한적으로 임의의 공급원으로부터의 독성제거된 지질 A 및 지질 A의 비독성 유도체, 사포닌 및 Th1 세포 반응 (본 명세서에서 Th1 유형 반응으로도 일컬어짐)의 우선적 자극인자인 다른 면역자극물질이 있다.
면역 반응은 크게 2가지 극단적 범주인 체액성 또는 세포 매개성 면역 반응 (관습적으로 각각 보호의 항체 및 세포 이펙터 메커니즘에 의해 특징화됨)으로 나뉘어질 수 있다. 반응의 이러한 범주는 TH1-유형 반응 (세포 매개성 반응), 및 TH2-유형 면역 반응 (체액성 반응)으로 명명되었다.
극단적 TH1-유형 면역 반응은 항원 특이적 일배체형 제한된 세포독성 T 림프구의 발생, 및 자연 살상 세포 반응에 의해 특징화될 수 있다. 마우스에서는 TH1-유형 반응이 종종 IgG2a 서브타입의 항체의 발생에 의해 특징화되지만, 인간에서 이러한 반응은 IgG1 유형 항체에 상응한다. TH2-유형 면역 반응은 마우스 IgG1를 포함하는 일련의 면역글로불린 이소타입의 발생에 의해 특징화된다.
이러한 두 가지 면역 반응 유형의 발생 이면의 구동력은 사이토카인인 것으로 간주될 수 있다. 고수준의 TH1-유형 사이토카인은 주어진 항원에 대해 세포 매개성 면역 반응의 유도를 유리하게 하는 경향이 있는 반면, 고수준의 TH2-유형 사이토카인은 항원에 대해 체액성 면역 반응의 유도를 유리하게 하는 경향이 있다.
TH1 및 TH2-유형 면역 반응의 구별은 절대적이지 않으며, 이러한 두 가지 극단 반응 사이의 연속체의 형태를 취할 수 있다. 실제로, 개체는 우세하게 TH1 또는 우세하게 TH2인 것으로 기술되는 면역 반응을 유지할 것이다. 그러나, 모스만(Mosmann) 및 코프만(Coffman)에 의해 뮤린 CD4 +ve T 세포 클론에서 기재된 바에 따라 사이토카인의 족을 고려하는 것이 종종 편리하다 (Mosmann, T.R. and Coffman, R.L. (1989) TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties. Annual Review of Immunology, 7, p145-173). 관습적으로, TH1-유형 반응은 T-림프구에 의한 INF-γ 사이토카인의 생성과 관련된다. TH1-유형 면역 반응의 유도와 종종 직접 관련된 다른 사이토카인, 예를 들어 IL-12는 T-세포에 의해 생성되지 않는다. 대조적으로, TH2-유형 반응은 IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 및 종양 괴사 인자-β (TNF-β)의 분비와 관련된다.
특정 백신 애쥬번트가 특히 TH1 또는 TH2-유형 사이토카인 반응의 자극에 특히 적합한 것으로 공지되어 있다. 관습적으로, 백신접종 또는 감염 후 면역 반응의 TH1:TH2 균형의 지표는 항원에 의한 재자극 후 시험관내에서의 T 림프구에 의한 TH1 또는 TH2 사이토카인의 생성의 직접 측정, 및/또는 항원 특이적 항체 반응의 IgG1:IgG2a 비의 측정 (적어도 마우스에서)을 포함한다.
따라서, TH1-유형 애쥬번트는 시험관내에서 항원에 의해 재자극된 경우 고수준의 TH1-유형 사이토카인을 생성시키기 위해 단리된 T-세포 집단을 자극하고, TH1-유형 이소타입과 관련된 항원 특이적 면역글로불린 반응을 유도하는 애쥬번트이다.
TH1 세포 반응을 우선적으로 자극할 수 있는 애쥬번트는 WO 94/00153 및 WO 95/17209에 기재되어 있다.
본 발명에서 사용하기에 적합한 애쥬번트를 생성시키기 위해 제형화될 수 있는 바람직한 Th1-유형 면역자극물질은 비제한적으로 하기 물질을 포함한다.
장내세균 리포폴리사카라이드 (LPS)가 면역계의 효능있는 자극인자인 것으로 오랫동안 알려져 왔지만, 애쥬번트로의 사용은 이의 독성 효과로 인해 축소되어 왔다. 환원 말단 글루코사민으로부터의 코어 탄화수물 그룹 및 포스페이트의 제거에 의해 생성된 LPS의 비독성 유도체인 모노포스포릴 지질 A (MPL)는 리비(Ribi) 등의 문헌 [1986, Immunology and Immunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenum Publ. Corp., NY, p407-419]에 기재되어 있고, 하기 구조를 지닌다:
Figure 112007026011472-pct00001
MPL의 또 다른 독성제거된 변형체는 이당류 주쇄의 3-위치로부터의 아실 사슬의 제거로부터 초래되며, 3-O-데아실화 모노포스포릴 지질 A (3D-MPL)로 명명된다. 이는 디포스포릴 지질 A 및 이의 3-O-데아실화 변형체의 제조를 또한 기술하고 있는 GB 2122204B에 교시된 방법에 의해 정제되고 제조될 수 있다.
3D-MPL의 바람직한 형태는 직경이 0.2㎛ 미만의 작은 입자 크기를 지닌 에멀젼의 형태이고, 이의 제법은 WO 94/21292에 기재되어 있다. 모노포스포릴 지질 A 및 계면활성제를 포함하는 수성 제형은 WO9843670에 기재되어 있다.
본 발명에서 사용하려는 세균 리포폴리사카라이드 유래된 애쥬번트는 세균원으로부터 정제되고 처리될 수 있거나, 합성된 것일 수 있다. 예를 들어, 정제된 모노포스포릴 지질 A는 리비 등의 문헌 (1986, 상기 참조)에 기재되어 있고, 살모 넬라 종 (Salmonella sp.)으로부터 유래된 3-O-데아실화 모노포스포릴 또는 디포스포릴 지질 A는 GB 2220211 및 US 4912094에 기재되어 있다. 다른 정제된 리포폴리사카라이드 및 합성 리포폴리사카라이드가 공지되었다 (Hilgers et al., 1986, Int.Arch.Allergy.Immunol., 79(4):392-6; Hilgers et al., 1987, Immunology, 60(1):141-6; 및 EP 0 549 074 B1). 특히 바람직한 세균 리포폴리사카라이드 애쥬번트는 3D-MPL이다.
따라서, 본 발명에서 사용될 수 있는 LPS 유도체는 LPS 또는 MPL 또는 3D-MPL과 구조가 유사한 면역자극물질이다. 또한, LPS 유도체는 MPL의 상기 구조의 하위 부분인 아실화 모노사카라이드일 수 있다.
사포닌은 또한 본 발명에 따른 바람직한 Th1 면역자극인자이다. 사포닌은 잘 알려진 애쥬번트이고, 라카일-듀보와, 엠 (Lacaille-Dubois, M) 및 와그너 에이치. (Wagner H.)의 문헌 [1996. A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine vol 2 pp 363-386]에 교시되어 있다. 예를 들어, Quil A (남아메리카 나무인 퀼라자 사포나리아 몰리나 (Quillaja Saponaria Molina)의 수피로부터 유래됨) 및 이의 분획은 US 5,057,540 및 문헌 ["Saponins as vaccine adjuvants", Kensil, C. R., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2):1-55; 및 EP 0 362 279 B1]에 기재되어 있다. 용혈성 사포닌인 QS21 및 QS17 (Quil A의 HPLC 정제된 분획)가 효능있는 전신성 애쥬번트로서 공지되었고, 이들의 제조 방법은 US 5,057,540 및 EP 0 362 279 B1에 기재되어 있다. 또한, 이들 문헌에는 전신성 백신을 위한 효능있는 애쥬번트로서 작용하는 QS7 (Quil-A의 비용혈성 분획)의 용도가 기재되어 있다. QS21의 용도는 또한 켄실(Kensil) 등의 문헌 [1991. J. Immunology vol 146, 431-437]에 기재되어 있다. QS21과 폴리소르베이트 또는 시크로덱스트린의 배합물이 또한 공지되어 있다 (WO 99/10008). QuilA의 분획, 예를 들어 QS21 및 QS7을 포함하는 미립 애쥬번트 시스템은 WO 96/33739 및 WO 96/11711에 기재되어 있다.
또 다른 바람직한 면역자극물질은 메틸화되지 않은 CpG 디누클레오티드 ("CpG")를 함유하는 면역자극성 올리고누클레오티드이다. CpG는 DNA에 존재하는 시토신-구아노신 디누클레오티드 모티프에 대한 약어이다. CpG는 전신 및 점막 경로 둘 모두에 의해 투여되는 경우 애쥬번트인 것으로 당 분야에 공지되어 있다 (WO 96/02555, EP 468520, Davis et al., J.Immunol, 1998, 160(2):870-876; McCluskie and Davis, J.Immunol., 1998, 161(9):4463-6). 역사적으로, BCG의 DNA 분획은 항종양 효과를 발휘할 수 있는 것으로 관찰되었다. 추가의 실험에서, BCG 유전자 서열로부터 유래된 합성 올리고누클레오티드는 (시험관내 및 생체내 둘 모두에서) 면역자극 효과를 유도할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 이러한 실험의 주체들은 중심 CG 모티프를 포함하는 특정 팔린드롬 서열이 이러한 활성을 함유하는 것으로 결론내렸다. 면역자극에서 CG 모티프의 중심 역할은 후에 크리에그(Krieg)의 간행물 [Nature 374, p546 1995]에서 규명되었다. 상세한 분석 결과, CG 모티프는 특정 서열 환경에 존재해야 하고, 이러한 서열은 세균 DNA에서는 흔하지만 척추동물 DNA에서는 드문 것으로 밝혀졌다. 면역자극 서열은 종종 퓨린, 퓨린, C, G, 피리미딘, 피리미딘이며; 여기서, CG 모티프는 메틸화되어 있지 않지만, 다른 메틸화되지 않은 CpG 서열은 면역자극성인 것으로 알려져 있고, 본 발명에서 사용될 수 있다.
6개의 누클레오티드의 특정 배합물에서 팔린드롬 서열이 존재한다. 이러한 모티프 중 수 개가 하나의 모티프의 반복체로서 또는 다양한 모티프의 배합물로서 동일한 올리고누클레오티드에 존재할 수 있다. 올리고누클레오티드를 함유하는 이들 면역자극성 서열 중 하나 이상의 존재는 자연 살상 세포 (인터페론 γ를 생성시키고 세포용해 활성을 지님) 및 마크로파지를 포함하는 다양한 면역 서브셋(subset)을 활성화시킬 수 있다 (Wooldrige et al Vol 89 (no. 8), 1977). 이러한 컨센서스 서열을 지니지 않는 다른 메틸화되지 않은 CpG 함유 서열이 또한 면역조절성인 것으로 밝혀졌다.
백신으로 제형화되는 경우 CpG는 일반적으로 유리 항원와 함께 유리 용액(free solution)으로 투여되거나 (WO 96/02555; McCluskie and Davis, 상기 참조), 항원에 공유적으로 컨쥬게이션되거나 (WO 98/16247), 수산화 알루미늄과 같은 담체와 제형화된다 ((간염 표면 항원) Davis et al. 상기 참조; Brazolot-Millan et al., Proc.Natl.Acad.Sci., USA, 1998, 95(26), 15553-8).
상기 기술된 이러한 면역자극물질은 담체, 예를 들어 리포솜, 수중유 에멀젼 및 알루미늄염 (예를 들어, 수산화 알루미늄)을 포함하는 금속염과 함께 제형화될 수 있다. 예를 들어, 3D-MPL은 수산화 알루미늄 (EP 0 689 454) 또는 수중유 에멀젼 (WO 95/17210)과 제형화될 수 있고; QS21은 유리하게는 콜레스테롤 함유 리포솜 (WO 96/33739), 수중유 에멀젼 (WO 95/17210) 또는 백반 (WO 98/15287)과 제형화될 수 있고; CpG는 백반 (Davis et al. 상기 참조; Brazolot-Millan 상기 참조) 또는 다른 양이온성 담체와 제형화될 수 있다.
면역자극물질의 배합물, 특히 모노포스포릴 지질 A와 사포닌 유도체의 배합물 (WO 94/00153; WO 95/17210; WO 96/33739; WO 98/56414; WO 99/12565; WO 99/11241), 더욱 특히 WO 94/00153에 기재된 QS21과 3D-MPL의 배합물이 또한 바람직하다. 또한, CpG와 사포닌, 예를 들어 QS21의, 배합물은 본 발명에 사용되는 효능있는 애쥬번트를 형성한다.
따라서, 적합한 애쥬번트 시스템은 예를 들어 모노포스포릴 지질 A, 바람직하게는 3D-MPL과 알루미늄염의 배합물을 포함한다. 향상된 시스템은 모노포스포릴 지질 A와 사포닌 유도체의 배합물, 특히 WO 94/00153에 기재된 QS21과 3D-MPL의 배합물, 또는 WO 96/33739에 기재된 바와 같은 QS21이 콜레스테롤 함유 리포솜 (DQ)에서 켄칭된 덜 리액토제닉(reactogenic)한 조성물을 포함한다.
수중유 에멀젼 중에 QS21, 3D-MPL 및 토코페롤을 포함하는 특히 효능있는 애쥬번트 제형이 WO 95/17210에 기재되어 있으며, 이는 본 발명에서 사용되는 또 다른 바람직한 제형이다.
또 다른 바람직한 제형은 CpG 올리고누클레오티드를 단독으로 포함하거나 QS21, 3D-MPL과 함께 또는 알루미늄염과 함께 포함한다.
따라서, 본 발명의 한 가지 구체예에서, 중증 말라리아 질병의 예방을 위한 백신의 제조를 위해 본 명세서에 기재된 말라리아 항원과 함께 사용되는 독성제거된 지질 A 또는 지질 A의 비독성 유도체, 더욱 바람직하게는 모노포스포릴 지질 A 또는 이의 유도체, 예를 들어 3D-MPL의 용도가 제공된다.
바람직하게는, 사포닌, 바람직하게는 QS21이 추가로 사용된다.
바람직하게는, 본 발명은 수중유 에멀젼 또는 리포솜을 추가로 사용한다.
본 발명에 사용되는 애쥬번트의 바람직한 배합물은 다음과 같다:
1. 3D-MPL, QS21 및 수중유 에멀젼.
2. 리포솜 제형 중의 3D-MPL 및 QS21.
3. 리포솜 제형 중의 3D-MPL, QS21 및 CpG.
각각의 백신 투여량에 존재하는 본 발명의 단백질의 양은 전형적인 백신에서 현저한 유해 부작용없이 면역보호 반응을 유도하는 양으로서 선택된다. 이러한 양은 사용되는 특정 면역원 및 백신에 애쥬번트가 첨가되는 지의 여부에 따라 달라진다. 일반적으로, 각각의 투여량은 1 내지 1000㎍, 바람직하게는 1 내지 200㎍, 가장 바람직하게는 10 내지 100㎍의 단백질을 포함할 것으로 예상된다. 특정 백신을 위한 최적량은 항체 역가 및 피검체에서의 다른 반응의 관찰을 포함하는 표준 실험에 의해 확인될 수 있다. 초기 백신접종 후, 피검체는 바람직하게는 약 4주 이내에 추가접종받은 후, 감염 위험이 존재하는 한 6개월 마다 반복 추가접종을 받는다. RTS,S 단백질의 바람직한 양은 또한 상기 제시된 바와 같다.
본 발명의 백신은 다양한 경로, 예를 들어 경구, 국소, 피하, 점막 (전형적으로 질내), 정맥내, 근내, 비내, 설하, 피내 및 좌제를 통한 투여 중 어느 하나에 의해 제공될 수 있다.
면역화는 예방적 또는 치료적일 수 있다. 본 명세서에 기재된 발명은 절대적으로는 아니지만 주로 말라리아에 대한 예방적 백신접종, 더욱 특히 중증 말라리 아 질병을 예방하거나 이러한 질병에 걸릴 가능성을 감소시키기 위한 예방적 백신접종에 관한 것이다.
본 발명에 사용되는 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제는 당 분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 물 또는 완충액을 포함한다. 백신 제법은 일반적으로 문헌 [Pharmaceutical Biotechnology, Vol.61 Vaccine Design - the subunit and adjuvant approach, edited by Powell and Newman, Plenum Press New York, 1995. New Trends and Developments in Vaccines, edited by Voller et al., University Park Press, Baltimore, Maryland, U.S.A. 1978]에 기재되어 있다. 리포솜내에 캡슐화시키는 것은 예를 들어 풀러톤(Fullerton)의 미국 특허 제 4,235,877호에 기재되어 있다. 단백질을 거대분자에 컨쥬게이션시키는 것은 예를 들어 리크하이트(Likhite)의 미국 특허 제 4,372,945호 및 아모르(Armor) 등의 미국 특허 제 4,474,757호에 기재되어 있다.
재료 및 방법
실험 지역
실험은 2003년 4월과 2004년 5월 사이에 모잠비크 남부의 만히카 디스트릭트 (Manhica District) (Maputo Province)의 센트로 데 인베스티가카오 엠 사우드 다 만히카 (Centro de Investigacao em Saude da Manhica [CISM] (Manhica Health Research Centre)에서 수행하였다. 지역의 특성은 다른 부분에 상세히 기재되어 있다9. 기후는 아열대성이며, 11월부터 4월까지의 온난하고 비가 많은 계절과 나머지 기간의 일반적으로 한랭 건조한 계절의 구별되는 두 계절를 지닌다. 2003년 동안, 연간 강수량은 1286mm 이었다. 두드러진 계절성을 띠는 통년성 말라리아 전염은 주로 플라스모디움 팔시파룸으로 인한 것이다. 아노펠레스 퓨네스터스 (Anopheles funestus)가 주요 벡터이며, 2002년의 추정 곤충학적 접종율 (EIR)은 38 이었다. 아모디아퀸(amodiquine) 및 술파독신-피리메타민 (sulphadoxine-pyrimethamine) (SP)을 기재로 하는 병용 요법이 합병증없는 말라리아의 1차 치료법이고, 보건 시설에서 용이하게 입수가능하다. CISM에 인접한 곳에 110개의 침대를 갖춘 리퍼럴(referral) 보건 시설인 만히카 보건 센터 (Manhica Health Center)가 위치해 있다. 지역 보건 네트워크는 추가의 8개의 주변 보건 지부와 지방 병원으로 구성되어 있다.
실험 설계
실험은 GSK 바이오로지칼즈의 RTS,S/AS02A 말라리아 백신의 안전성, 면역원성 및 효능을 평가하기 위한 IIb상의 무작위화되고 제어된 이중맹검 실험이었다. 주요 목적은 3회째 투여후 14일째부터 시작하여 6개월의 감시 기간에 걸친 1차 백신접종에서 1세 내지 4세의 소아에서의 플라스모디움 팔시파룸 말라리아의 임상 에피소드에 대한 효능을 평가하기 위한 것이었다.
실험은 말라리아의 생활 주기 및 발병기전의 두 시점에서 백신의 효능을 조사하기 위해 설계되었다: 감염 및 임상 질병. 이러한 두 종점은 두 군데의 상이한 장소를 근거로 하는 두 코호트(cohort)에서 동시에 측정하였다 (도 1). 만히카 주위의 반경 10km의 지역으로부터 모집된 코호트 1은 만히카 보건 센터 및 마라그라 보건소 (Maragra Health Post)에서 수동적 환자 발견을 통해 결정된 임상 질병에 대한 보호의 1차 종점의 평가에 기여하였다. 코호트 2는 만히카 북부 55km에 위치한 저지대 농지 및 습지 지역인 일하 조시나 (Ilha Josina)에서 모집하였고, 능동 및 수동 감시의 병용을 통해 신규 감염을 검출하기 위해 추적하였다.
코호트 1의 경우, 15%의 백신 효능의 낮은 신뢰 한계를 검출하도록 80% 파워(power)를 제공하기 위해 군 당 704명의 평가가능한 피검체가 필요하였고, 이는 대조군에서 11%의 감시 기간에 걸친 임상적 플라스모디움 팔시파룸 공격율 및 50%의 백신 효능을 추정한 것이다. 코호트 2의 경우, 신규 감염의 예방에서 20%의 낮은 신뢰 한계를 나타내며 50%의 백신 효능을 검출하도록 86% 파워를 제공하기 위해 군 당 116명의 평가가능한 소아들이 필요하였고, 이는 감시 기간에 걸친 50%의 신규 감염율을 추정한 것이다.
프로토콜은 내셔날 모잠비칸 에틱스 리뷰 커미티 (National Mozambican Ethics Review Committee), 하스피탈 클리닉 오브 바르셀로나 에틱스 리뷰 커미티 (Hospital Clinic of Barcelona Ethics Review Committee) 및 프로그램 포 어프로프리에이트 테크놀로지 인 헬쓰 휴먼 서브젝츠 프로텍션 커미티 (Program for Appropriate Technology in Health (PATH) Human Subjects Protection Committe)에 의해 승인되었다. 실험은 ICH 굿 클리니컬 프랙티스 (Good Clinical Practice) 가이드라인에 따라 수행하였고, 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈에 의해 모니터되 었다. 로컬 세이프티 모니터 (Local Safety Monitor) 및 데이터 앤드 세이프티 모니터링 보오드 (Data and Safety Monitoring Board)는 실험의 실행 및 결과를 면밀히 재검토하였다.
스크리닝 및 고지된 동의
CISM은 실험 지역에서 인구통계 감시 시스템을 운영한다10. 잠재적으로 적격인 거주 소아들의 목록은 이러한 통계조사로부터 만들어졌다. 이들 소아의 집에 방문하여, 부모 또는 후견인에게 정보지를 읽게 하고, 모집 기준을 조사하였다. 이는 실험 지역의 거주 확인 및 EPI 백신에 의한 완전한 면역화를 포함하였다. 관심을 보인 부모/후견인을 만히카 보건 센터 또는 일하 조시나 보건소에 초청하였다. 첫 번째 방문시, 정보지를 다시 읽게 하고, 특별 훈련을 받은 직원으로 하여금 부모/후견인의 그룹에 설명하게 하였다. 개별적 동의서는 이들이 정보지의 이해 여부를 알아보도록 고안된 개개의 구두 이해 시험을 통과한 후에만 얻고자 하였다. 그 후, 이들을 초청하여 고지된 동의 서류에 서명 (또는 읽고 쓰지 못하는 경우에는 엄지 지문을 찍음)하게 하였다. 단체의 일원이 중립적 증인 역할을 하고, 동의서 양식에 부서(countersign)하였다. 스크리닝은 간단한 의료 이력 및 검진, 혈액검사를 위한 손가락자상(fingerprick)에 의한 혈액 채취 및 생화학 시험을 포함하였다.
알레르기 질병의 이력이 있거나, 적혈구용적율이 25% 미만이거나, 영양실조 (3 Z 스코어 이하의 신장 대비 체중)이거나, 임상적으로 유의할 만한 만성 또는 급 성 질병 또는 비정상적 혈액학적 상태 또는 생화학적 파라미터를 지니는 소아들은 참가시키지 않았다. 적격성 피검체를 백신접종 1일째에서 출발하는 실험에 등록시키고, 독특한 실험 번호 및 개개의 사진 식별 카드를 부여하였다.
무작위화 및 면역화
1세 내지 4세의 2022명의 소아를 모집하고, 만히카 보건 센터 또는 일하 조시나 보건소에서 RTS,S/AS02A 후보 말라리아 백신 또는 대조 백신 접종법의 3회 투여량을 수용하도록 무작위화하였다. 무작위화를 블록킹 계획을 사용하여 GSK 바이오로지칼즈에서 수행하였다 (1:1 비, 블록 크기 = 6).
RTS,S는 효모에서 재조합적으로 발현된 하이브리드 분자로 구성되며, 이러한 분자에서 CS 단백질10,11 중심 탠덤 반복체 및 카르복실-말단 영역이, 융합되지 않은 S 항원을 또한 포함하는 입자에서 B형 간염 바이러스 (HBsAg)의 S 항원의 N 말단에 융합되어 있다. RTS,S/AS02A (GlaxoSmithKline Biologicals, Rixensart, Belgium)의 전체량은 500㎕의 AS02A 애쥬번트 (면역자극제 3D-MPL® [Corixa Inc., WA, USA] 및 QS21을 각각 50㎍ 함유하는 수중유 에멀젼) 중에 재구성되는 동결건조된 50㎍의 RTS,S 항원을 함유한다. 성인 투여량의 절반, 즉, 250㎕의 AS02 애쥬번트 (3D-MPL 및 QS21을 각각 25㎍ 함유함) 중에 25㎍의 RTS,S 항원을 함유하는 250㎕ 투여량 부피가 본 실험에 사용되었다.
정례적인 B형 간염 백신접종이 2001년 7월에 모잠비크의 EPI 스케쥴에 도입되었으므로, 12개월 내지 24개월의 소아는 이미 B형 간염 면역화되었다. 따라서, 24개월 미만의 소아에게 1차 및 3차 백신접종에서 대조 백신으로서 2회 투여량의 7가 페렴구균 컨쥬게이트 백신 (Prevnar® Wyeth Lederle Vaccines, New Jersey, USA)를 투여하였고, 2차 백신접종에서 1회 투여량의 헤모필루스 인플루엔자 (Haemophilus influenzae) 타입 b 백신 (HiberixTM GlaxoSmithKline Biologicals, Rixensart, Belgium)을 투여하였다. 24개월 이상의 소아의 경우, 대조 백신은 소아 B형 간염 백신 (Engerix-B® GlaxoSmithKline Biologicals, Rixensart, Belgium)이었다. 전체 투여량 (0.5ml 투여량 부피)을 대조군에 투여하였다.
RTS,S/AS02A 및 대조 백신 둘 모두를 0개월, 1개월, 2개월 백신접종 스케쥴에 따라 번갈아 팔의 어깨삼각근 영역에 근내 투여하였다. 사용된 백신이 다른 외관과 부피를 지니므로, 실험의 이중맹검 특성을 보장하기 위해 특별한 조치를 취하였다. 백신접종 팀은 백신을 준비하고, 면역화 전에 시린지의 함유물을 불투명 테이프로 가렸다. 이 팀은 종점의 감시를 포함하여 어떠한 다른 절차에도 관여하지 않았다.
안전성 및 리액토제너시티(reactogenicity)의 추적검사
각각의 백신접종 후, 실험 참가자들을 1시간 이상 동안 관찰하였다. 훈련받은 현장 담당자가 이후 3일 동안 매일 소아들의 집으로 방문하여 임의의 유해 사건을 기록하였다. 명시된 국소적 및 전신적 유해 사고가 이러한 기간에 걸쳐 보고되었다12. 명시되지 않은 유해 사건은 병원 이환률 감시 시스템을 통해 각각의 투여 후 30일간 기록하였다. 심각한 유해 사건 (SAE)을 유사한 방식으로 알아내고, 실험 기간 내내 기록하였다. 실험 소아들을 3회째 투여 후 60일째부터 시작하여 1개월에 한 번 집으로 방문하였다. 방문 동안, 거주 상태를 조사하고, 보고되지 않은 SAE를 기록하였다. 혈액학적 및 생화학적 파라미터를 모든 참가자에 대해 모니터하고, 3회째 투여 후 1개월째에 혈구 계수를 완결하고, 3회째 투여 후 1개월 및 6과 1/2 개월째에 크레아티닌, 알라닌 아미노트랜스퍼라아제 [ALT] 및 빌리루빈의 측정을 완결하였다.
면역원성 평가
B형 간염 표면 항원 (HBsAg) 상태를 1회째 투여 전에 모든 참가자에서 측정하였다. 항 CS 항체를 코호트 1에서는 1회째 투여 전 및 3회째 투여 후 30일 및 6과 1/2 개월째에 측정하였고, 코호트 2에서는 동일한 시점에서 항-HBs 항체를 측정하였다. 간접 형광 항체 시험 (IFAT)을 스크리닝시에 둘 모두의 코호트에서 측정하였다.
효능 평가
보건 시설 기반 이환률 감시 시스템은 1997년 이래로 활동 중이며13, 현재 만히카 보건 센터, 및 마라그라와 일하 조시나의 보건소에 설치되어 있다. 모든 3군데 시설에서, 프로젝트 의료 직원은 개인 ID 카드를 통해 실험 참가자를 확인하고 표준화된 문서화 및 적절한 의료 관리를 보장하기 위해 매일 24시간 상주하였다.
이전 24시간내에 발열이 보고되거나 발열 기록 (37.5℃ 이상의 겨드랑이 체 온)이 있는 모든 소아들의 혈액을 이중의 얇은 혈액 도말 및 두꺼운 혈액 도말에서 뿐만 아니라 압축 세포 부피 (PCV)의 측정을 위한 미소모세관에서 말라리아 기생충의 측정을 위해 수집하였다. 입원을 정당화하는 임상 질환을 지닌 소아들을 만히카 보건 센터에 입원시켰다. 입원시, 더욱 상세한 임상 이력 및 의료 검사를 수행하고, 의사가 표준 양식에 기록하였다. 실험실 조사 및 최종 진단 결과를 퇴원시에 기록하였다. 임상 관리는 표준 국가 가이드라인에 따라 수행하였다.
감염의 능동 검출 (Active Detection of Infection, ADI)을 코호트 2에서 수행하였다. 말라리아 감염의 감시를 시작하기 4주 전에, 무증상 기생충혈증을 추정적으로 아모디아퀸(amodiaquine) (3일간 10 mg/kg 경구 투여) 및 SP (1회 경구 투여량의 술파독신 25 mg/kg 및 피리메타민 1.25 mg/kg)을 병용하여 제거하였다. 기생충혈증이 없음을 2주 후에 검사하였고, 양성 피검체를 2차 치료제 (Co-Artem®)로 치료하고, ADI를 위한 추가 평가로부터 제외시켰다. 감시를 3회째 투여 후 14일째부터 시작하였고, 이후 2와 1/2 개월 동안 2주 마다 수행한 후, 그 다음 2개월 동안 매월 수행하였다 (도 1). 매 방문시, 현장 담당자가 소아를 집으로 방문하고, 간단한 이환률 질문지를 작성하고, 겨드랑이 체온을 기록하였다. 소아가 열이 없는 경우, 손가락 자상에 의해 슬라이드 및 필터지 상에 혈액을 수집하였다. 소아가 열이 있거나 발열 이력이 있는 경우, 소아과 함께 보건소로 가서 검사하고 혈액 슬라이드를 수집하였다. ADI로부터 양성 슬라이드를 나타낸 모든 소아를 증상에 관계없이 치료하였다.
단면 조사를 둘 모두의 코호트에서 3회째 투여 후 6과 1/2 개월째에 수행하 였다. 방문 동안, 겨드랑이 체온 및 비장 크기 (Hackett's scale)를 측정하고, 혈액 슬라이드를 준비하였다.
실험실 방법
기생충 존재 및 플라스모디움 팔시파룸 무성 단계의 밀도를 측정하기 위해, 기엠사 염색된 혈액 슬라이드를 표준 품질-제어된 절차에 따라 판독하였다14. 외부 검증은 바르셀로나의 하스피탈 클리닉 (Hospital Clinic)에서 수행하였다. 생화학적 파라미터를 건식 생화학 광도계 VITROS DT II (Orto Clinical Diagnostics, Johnson & Johnson Company, USA)를 사용하여 측정하였다. 혈액학적 시험은 시스멕스(Sysmex) KX-21N 세포 계수기 (Sysmex Corporation Kobe, Japan)를 사용하여 수행하였다. 압축 세포 부피 (PCV)를 마이크로헤마토크릿(microhaematocrit) 원심분리기에 의한 원심분리 후에 헉슬리(Hawksley) 적혈구용적 판독기를 사용하여 헤파린처리된 미소모세관에서 측정하였다.
써컴스포로조이트 단백질 탠덤 반복체 에피토프에 대해 특이적인 항체는, 표준 혈청을 기준 물질로 하고 서열 [NVDP(NANP)15]2LR을 함유하는 재조합 항원 R32LR이 흡수된 플레이트를 사용하여 표준 ELISA에 의해 측정하였다. HBsAg의 존재를 시판 키트 (ETI-MAK-4 DIASORIN®)를 사용하여 ELISA에 의해 측정하였다. 항-HBsAg 항체 수준은 시판 키트 (아보트(Abbott)의 AUSAB EIA)를 사용하여 ELISA에 의해 측정하였다. IFAT 측정을 위해, 25㎕의 시험 혈청 (1/81920까지 연속 2배 희석)을 슬라이드 상에 고정된 혈액 단계 플라스모디움 팔시파룸 기생충과 인큐베이 션시켰다. 양성 반응은 FITC 표지된 2차 항체 에반스 블루 (Evans Blue)로 드러나게 하였다. UV 광학 현미경하에서 양성 형광을 나타내는 최대 희석율을 기록하였다.
정의 및 통계 방법
코호트 1에서 평가된 1차 종점은 증상 플라스모디움 팔시파룸 말라리아의 최초 임상 에피소드까지의 시간이었다. 임상 에피소드는 37.5℃ 이상의 겨드랑이 체온을 지니고 ㎕ 당 2500을 초과하는 플라스모디움 팔시파룸 무성 기생충혈증의 존재를 나타내는 보건 시설에 진찰받으러 온 소아로서 규정하였다. 이러한 환자 정의는 91% 특이적 및 95% 민감한 것으로 평가되었다15. 2차 및 3차 종점은 임상 말라리아의 상이한 정의에 대해 백신 효능을 평가하고 다수의 에피소드를 조사하는 것을 포함한다.
모든 병원 입원은 최종 진단을 확립하기 위해 두 그룹의 임상의에 의해 독립적으로 재검토되었고, 차이점은 언블라인딩(unblinding) 전에 합의 회의에서 해결하였다. 병원 입원을 필요로 하는 말라리아는 말라리아가 질병의 단독 원인이거나 중대한 기여 인자인 것으로 판단되는 플라스모디움 팔시파룸 무성 기생충혈증에 걸린 소아에서 규정되었다. 중증 말라리아의 이러한 환자 정의는 임상 실시에 대한 WHO 지침으로부터 유래되었다16. 모든 중증 말라리아 환자는 무성 플라스모디움 팔시파룸 기생충혈증을 지니는 것으로 규정되며, 질병의 다른 더욱 상당한 원인은 없었다. 정의는 중증 말라리아 빈혈 (PCV < 15%), 뇌 말라리아 (블랑티르 코마 스코 어 < 2) 및 다음과 같은 다른 신체 계통의 중증 질병이 복합된 것이었다: 다발성 발작 (이전 24시간 동안 2회 이상의 전신 경련), 쇠약 (도움없이 앉을 수 없는 능력으로서 규정됨), 저혈당 (< 2.2mmol/dL), 임상적으로 의심되는 산증 또는 순환 허탈.
효능의 프로토콜에 따른 (According to Protocol, ATP) 분석은 모든 적격성 기준을 충족하고, 백신접종 과정을 완결하고, 효능 감시에 기여한 피검체를 포함하였다. 모든 원인에 의한 병원 입원에 대한 평가의 경우를 제외하고는 위험에 처한 시간은 실험 지역으로부터의 부재 및 항말라리아 약물 사용에 대해 조정되었다. 임상 말라리아의 다수의 에피소드의 분석을 위해, 피검체는 이전 에피소드 후 28일 동안은 감수성인 것으로 간주되지 않았다.
최초 임상 말라리아 에피소드 또는 말라리아 감염에 대한 시간에 대해, 백신 효능을 콕스(Cox) 회귀 모델을 사용하여 평가하였고, 이는 1에서 위험비(hazard ratio)를 공제한 것으로 규정되었다. 백신 효능은 연령, 모기장(bed-net) 사용, 지리적 지역 및 보건 센터로부터의 거리와 같은 미리 규정된 공변량에 대해 조정되었다. 비례적 위험 가정은 스코엔펠드 오차 (Schoenfeld residual)17 및 시간 의존성 콕스 모델18을 기반으로 하는 시험을 이용하여 그래프식으로 조사하였다. 임상 말라리아 및 병원 입원의 다수의 에피소드에 대해, 옵셋(off-set) 변수로서 위험 상태인 시간을 포함하는 정상 무작위 절편을 지닌 포이손(Poisson) 회귀 모델을 이용하여 그룹 효과를 평가하였다. 백신 효능은 1에서 비율비(rate ratio)를 공제한 것으로 규정되었다. 조정된 백신 효능은 본 명세서 전반에 걸쳐 보고되어 있다.
추가의 탐색 분석은 중증 말라리아 및 입원환자 말라리아에 대한 분석을 포함하였고, 이에 대해 하나 이상의 에피소드를 나타낸 소아의 비율의 차이가 피셔(Fisher)의 정확 시험을 이용하여 비교되었다. VE는 1에서 위험비를 공제한 것으로 계산되었고, 정확한 95% 신뢰 구간을 나타내었다19. 빈혈 이환률의 차이 (PCV < 25%) 및 8과 1/2 개월째의 양성 기생충 밀도의 비율을 피셔의 정확 시험을 이용하여 평가하였다. 적혈구용적값에 대한 치료의 효과 및 양성 밀도의 기하 평균을 비모수 윌콕슨 (nonparametric Wilcoxon) 시험을 이용하여 평가하였다.
유사한 방법을 처리 의향 (intention to treat) 분석에서 사용하였다. 1회째 투여로부터 시작되는 위험 상태인 시간은 실험으로부터의 부재 또는 약물 사용에 대해 조정되지 않았고, 효과의 평가치는 공변량에 대해 조정되지 않았다.
항-CS 및 항-HBsAg 항체 데이터는 기하 평균 역가 (GMT)에 의해 요약되며, 95% CI를 나타내었다. 혈청양성반응율을 항-CS 역가에 대해 계산하였다 (0.5 Eu/mL 초과로서 규정됨). 혈청보호율을 항-HBs 역가에 대해 계산하였다 (10 mIU/mL 이상으로서 규정됨). 분석을 SAS20 및 STATA21을 이용하여 수행하였다.
결과
코호트 1 및 2에 대한 실험 프로파일은 도 2A 및 2B에 도시되어 있다. 각각의 코호트내에서, 무작위화는 유사한 소아 군을 초래하였다 (도 4). 모든 지표는 말라리아 전염 세기가 코호트 1의 실험 지역 보다 코호트 2의 실험 지역에서 보다 높았음을 제시한다.
백신 안전성
*RTS,S/AS02A 및 대조 백신은 안전하고, 잘 용인되었고, 둘 모두의 군의 피검체의 92% 이상이 모든 3회 투여량을 투여받았다. 명시된 국소적 및 전신적 유해 사건은 단기간에 걸쳐 나타났고, 대부분 세기가 경미하거나 보통 정도였다. 3 등급의 국소적 또는 전신적 유해 사건은 드물었고, 단기간에 걸쳐 나타났다. RTS,S/AS02A 군 및 대조군에서, 팔 운동을 제한하는 국소 주입 부위 동통은 각각 7회 (0.2%) 및 1회 (0.03%) 투여 후에 발생하였고, 20 mm를 초과하는 주입 부위 팽창은 각각 224회 (7.7%) 및 14회 (0.5%) 투여 후에 발생하였다. 정상적인 활동을 방해하는 명시된 전신적 유해 사고 (발열, 과민성, 졸음, 식욕부진)은 RTS,S/AS02A 군 및 대조군에서 각각 55회 (1.9%) 및 23회 (0.8%) 투여 후에 발생하였다. 하나 이상의 명시되지 않은 유해 사건이 RTS,S/AS02A 군에서 653명 (64.5%)의 피검체에 의해 보고되었고, 대조군에서는 597명 (59.1%)의 피검체에 의해 보고되었다. 안전성 실험실 수치는 실험 과정에 걸쳐 기선으로부터 본질적으로 불변 상태로 유지되었다.
삭제
보고된 SAE 건수는 429건이었다: RTS,S/AS02A 군에서의 180건 [17.8%] 대 대조군에서의 249건 [24.7%]. 실험 동안 15명이 사망하였다: RTS,S/AS02A 군에서 5명 [0.6%], 대조군에서 10명 [1.2%]. 4명의 사망자는 중대한 기여 인자로서 말라리아에 걸려있었고, 이들 4명 모두는 대조군에 속해 있었다. 심각한 유해 사건 또는 사망은 백신접종과 관련된 것으로 판단되지 않았다.
면역원성
백신접종전 항-CS 항체 역가는 실험 소아들에서 낮았다. 백신은 면역원성이며, 3회째 투여 후 높은 항체 수준을 유도하였고 6개월에 걸쳐 최초 수준의 약 1/4로 감소하였지만, 기선값 보다 훨씬 높게 유지되었다. 대조군에서 항체 수준은 추적조사 기간 내내 낮게 유지되었다. 또한, 백신은 높은 수준의 항-HBsAg 항체를 유도하였다 (97% 보다 높은 혈청보호율) (도 5). CS 및 HBsAg 둘 모두의 경우, 백신의 면역원성은 24개월 미만의 소아에서 보다 높았다.
백신 효능
코호트 1에서 수행된 ATP 분석에서, 282명의 소아가 주요 환자 정의를 충족하는 최초 또는 유일한 임상 에피소드를 나타내었고 (RTS,S/AS02A 군에서 123명 및 대조군에서 159명), 이는 26.9%의 미조정된(crude) 백신 효능 평가치 (95%CI: 7.4%-42.2%; p=0.009) 및 29.9%의 조정된 평가치 (95% CI: 11%-44.8%; p=0.004)를 생성시켰다 (도 3A 및 도 6). 제공 시점에서 기하 평균 밀도가 RTS,S/AS02A 군 및 대조군에 대해 각각 43 522/㎕ 및 41 867/㎕ 이었으므로 (p=0.915), 임상 말라리아의 최초 에피소드를 나타낸 소아 중에서 무성 단계 기생충의 밀도는 백신접종에 의해 영향을 받지 않았다.
상이한 방법을 사용하여 분석된 경우 (스코엔펠드 오차(Schoenfeld residuals)를 이용한 위험요소의 비례에 대한 시험 [p=0.139]) 6개월 관찰 기간에 걸쳐 1차 종점에서 규정된 효능 감쇠의 증거는 없었다. 이러한 데이터와 일치하게, 3회째 투여 후 6과 1/2 개월째의 단면 조사에서, RTS,S/AS02A 수용자 중에서 기생충혈증의 이환률은 37% 낮았다 (RTS,S/AS02A에서의 11.9% 대 대조군에서의 18.9%, p < 0.001). 이들 소아의 기생충 밀도는 RTS,S 수용자 및 대조군 사이에서 유사하였다 (기하 평균 밀도 2271 대 2513; p=0.699).
소수의 소아들이 하나 이상의 에피소드를 겪었고, 이러한 종점에 대한 백신 효능은 VE=27.4% 였다 [95% CI: 6.2%-43.8%; p=0.014]. VE 평가치는 기생충 밀도 컷 오프(cut off)를 기준으로 하는 상이한 환자 정의에 대해 현저히 변하지 않았다 (도 6). 1회째 투여로부터 시작되는 임상 질병에 대한 시간의 ITT 분석은 30.2%의 VE를 초래하였다 (95% CI: 14.4%-43.0%; p<0.001). ATP 분석에서, RTS,S/AS02A 군에서 26건의 부수적 빈혈 에피소드 (PCV < 25%)가 존재하였고, 대조군에서는 36건이 존재하였다 (VE=28.2% [95% CI: -19.6%-56.9%; p=0.203]). 8과 1/2 개월째의 빈혈의 이환률은 대조군에서의 0.29% 대 백신 군에서의 0.44% 이며, p=0.686 이었다.
RTS,S/AS02A 군에서, 중증 말라리아 에피소드를 1회 이상 겪은 소아는 11명이었고, 대조군에서는 26명이었다 (VE=57.7% [95% CI: 16.2%-80.6%; p=0.019]). RTS,S/AS02A 군에서, 병원 입원을 필요로 하는 말라리아에 걸린 소아의 수는 42명이었고, 대조군에서는 62명이었다 (VE=32.3% [95% CI: 1.3%-53.9%; p=0.053]). 두 군 사이에 모든 원인에 의한 병원 입원 건수는 유사하였다 (79 대 90; VE=14.4% [95% CI: -19.7%-38.8%; p=0.362]).
최초 감염까지의 시간을 단축시키는데 있어서 백신의 효능의 평가는 코호트 2에서 측정되었다. 무성 플라스모디움 팔시파룸 기생충혈증의 최초 또는 유일한 에피소드를 나타낸 323명의 소아 (RTS,S/AS02A 군에서의 157명 및 대조군에서의 166명)이 존재하였고, 이는 45%의 VE 평가치를 산출시킨다 (95% CI: 31.4%-55.9%; p<0.001) (도 3B 및 도 6). 최초 감염에 대한 시간에서 무성 단계 기생충의 평균 밀도는 대조군 및 RTS,S/AS02A 군에 대해 유사하였다 (3950/㎕ 대 3016/㎕, p=0.354). 코호트 1에 대해 효능의 지속성을 평가하는데 사용된 방법과 동일한 방법을 사용한 경우, 최적 적합(best fit)을 지닌 모델은 약 40%에서 안정화되는 시간에 따른 백신의 효능의 감쇠를 제시하였다. 추적조사의 종료시에 무성 플라스모디움 팔시파룸 기생충혈증의 이환률은 각각 대조군에서 보다 RTS,S/AS02에서 현저히 낮았다 (52.3% 대 65.8%; p=0.019). 8과 1/2 개월째의 빈혈의 이환률은 대조군에서 2.7% 였고, RTS,S/AS02A 군에서 0.0% 였다 (p=0.056).
연령과 백신 효능 사이의 상호작용의 증거는 없었으며, 이는 효능이 연령이 증가함에 따라 현저히 변하지 않았음을 제시한다. 그러나, 본 발명자들은 말라리아 질병의 타격이 큰 보다 연령이 낮은 군에서 백신 효능을 평가하기 위해 추가의 탐색적 하위군 분석을 수행하였다. 1회 투여시 24개월 미만의 소아 중에서, RTS,S/AS02A (N=173) 수용자 중에서 중증 말라리아에 걸린 환자수는 3명이었고, 대조 백신 수용자 (N=173) 중에서 13명이었다 (VE=76.9% [95%CI: 27.0%-96.9%; p=0.018]). 임상 말라리아의 최초 또는 유일한 에피소드의 발생률이 유사하게 분석되었다. 보다 어린 소아들에서 말라리아의 에피소드는 31건 및 47건이었고, 이는 RTS,S/AS02A 군 및 대조군에서 각각 0.41 및 0.70 에피소드 PYAR의 발생률을 산출시킨다 (VE=46.7% [95% CI:14.8%-66.7%; p=0.009]). 신규 감염에 대한 VE는 연 령이 높은 군 및 낮은 군에서 유사하였다 (44.0% 대 46.5%).
CS 역가 및 말라리아 보호 사이의 관계는 코호트 1에서 평가되었다. CS 역가에서 10배 증가 당 위험비는 0.94였고 (95% CI: 0.66-1.33; p=0.708); CS 반응의 높은 터타일(tertile)의 피검체 대 CS 반응의 낮은 터타일의 피검체의 비교를 위한 위험비는 1.38 이었다 (95% CI: CI 0.89-2.12; p=0.150).
검토
RTS,S/AS02A는 플라스모디움 팔시파룸에 의한 감염 및 이에 의해 야기되는 광범위한 임상 질병에 대해 나이 어린 아프리카 소아를 보호하기 위한 최초의 서브유닛(subunit) 백신이다. 결과는 감염에 대해 부분적 보호를 유도하는 하나의 전적혈구 항원을 기재로 하는 백신이 혈액 단계 성분없이도 이환률을 감소시킬 수 있음을 보여준다.
나이 어린 아프리카 소아의 경우, RTS,S/AS02A는 잘 용인되었고, 이의 리액토제너시티 프로파일은 이러한 백신의 이전의 소아 실험에서 관찰된 프로파일과 유사하였다. 국소적 및 전신적 증상은 대조 백신 군에서 보다 흔하였지만, 피검체의 배제를 초래하지 않았다. 백신은 안전하였고; RTS,S/AS02A를 투여받은 소아들은 대조군의 소아들에 비해 모든 원인으로 인한 유해 사건, 입원 및 말라리아로부터의 심각한 합병증을 보다 적게 겪었다. 다른 개입 실험에서 나타난 바와 같이, 본 발명자들의 실험 참가자 사이의 사망률은 이러한 집단에서 역사적 배경에 따른 사망률9 보다 낮았다.
플라스모디움 팔시파룸 스포로조이트에 대한 높은 수준의 노출에도 불구하고, 이러한 집단에서 천연 항 CS 항체 수준은 낮았다. 백신은 매우 면역성이었는데, 특히 24개월 미만의 소아에서 그러하였다. 항체 수준은 6개월에 걸쳐 약 75% 감소하였지만, 추적조사 기간의 종료시에 이러한 수준은 면역전 수준 보다 여전히 훨씬 높았다. RTS,S/AS02A 수용자 사이에서, 본 발명자들은 항 CS 항체의 수준 및 말라리아의 위험 사이의 관련성을 발견하지 못했다. 그러나, 거의 모든 백신 수용자에 의해 달성된 높은 역가 및 면역의 비교적 낮은 한계 보호 수준이 존재할 수 있다는 가능성은 이러한 분석을 잠재적으로 구속하였다. 또한, 백신은 이러한 실험에서는 측정되지 않은 보호에 관여하는 것으로 믿어지는 세포 매개 반응을 유도하는 것으로 알려져 있다22.
감염에 대한 백신의 효능은 스포로조이트를 중화시키고 혈류로 유입되는 감염된 간세포 또는 간 단계 메로조이트의 갯수를 제한할 수 있는 이러한 전적혈구 백신의 공지된 능력과 일치한다5. 또한, 결과는 감염에 대한 보호와, 경증의 합병증없는 질병, 말라리아 병원 입원 및 중증 말라리아에 대한 보호 사이의 현저한 일관성을 나타낸다. 효능이 나이 어린 소아에서 및 보다 심각한 종점에 대해 보다 높음을 제시하는 경향이 있는 것으로 여겨지지만, 다양한 종점에 대한 신뢰 구간이 중복되며, 관찰된 차이는 우연에 기인할 수 있다. 다양한 종점에 대한 관찰된 보호는 보다 용이하게 측정된 감염 종점이 임상 질병에 대한 백신 효능을 위한 대용지표의 역할을 할 수 있음을 제시한다.
본 발명자들은 빈혈 환자에서 현저한 차이를 관찰하지 못한 것에 대해 의외라고 생각했다. 경향은 보다 적은 수의 환자가 RTS,S/AS02A 백신의 수용자에서 발생하는 것이지만, 실험 동안 말라리아 빈혈의 비율은 예상 보다 훨씬 낮았고, 이는 이러한 종점에 대해 통계적으로 유의할 만한 백신 효능을 검출할 수 있는 능력을 제한하였다. 질병 경과의 초기에 소아들을 보건 시설로 데려오도록 집중적으로 고무시킨 것이 말라리아 환자의 신속한 치료를 보장할 수 있었고, 빈혈의 발생률을 감소시켰다. 또한, 모잠비크는 말라리아에 대한 보다 유효한 1차 치료법으로 전환하였고, 이러한 약물을 투여받은 소아들은 보다 신속한 기생충의 제거, 보다 적은 재발 및 이에 따른 보다 짧은 감염 기간을 나타내었다. 이러한 개입 각각은 빈혈의 관찰된 발생률에 대해 영향을 미칠 수 있었다.
감쇠 효능을 검출하기 위해 본 발명자들이 사용한 통계 방법은 관찰 기간 내내 신규 감염 및 임상 질병 둘 모두에 대해 백신 효능이 지속되며, 최종 단면 조사에서 감염의 이환률에서 현저한 차이가 있음을 제시하였다. 이는 백신 효능이 단기간 지속됨을 제시하는 말라리아에 걸린 적이 없는 자원자 또는 감비아 성인에서의 실험과 극명한 대조를 이룬다6,23. 이러한 명백히 대립되는 결과에 대해 몇 가지 가능한 설명이 존재한다. 첫째, 백신이 성인에서 보다 이러한 실험 집단에서 훨씬 더 면역원성이며, 지속된 면역 반응이 지속적 보호 효능을 일으킬 수 있었다. 둘째, 이러한 실험 동안 일어나는 보다 높은 수준의 스포로조이트 노출이 항체 측정에 의해 드러나지 않은 보호 면역 반응의 천연 부스팅(boosting)을 일으킬 수 있었다. 실험 집단은 장기간 안정성 및 백신 효능의 지속기간 둘 모두를 모니터링하기 위해 여전히 감시받고 있다.
이러한 실험의 가장 놀라운 결과 중의 하나는 58%의 중증 말라리아에 대한 입증된 효능 및 효능이 나이 어린 소아에서 보다 높을 수 있다는 제시이다. 중증 말라리아의 정의는 계속 논의될 문제이지만, WHO에 의거한 정의에 따른 소아의 분류에 의해 매우 위중하여 사망 위험이 높은 소아가 판정된다는 것에는 거의 의혹의 소지가 없다.
Figure 112007026011472-pct00002
Figure 112007026011472-pct00003
Figure 112007026011472-pct00004

Claims (15)

  1. 지질 A의 비독성 유도체 및 사포닌을 포함하는 약제학적으로 허용되는 애쥬번트와 결합한 써컴스포로조이트 단백질(CS) 또는 이의 면역원성 단편인 전적혈구(pre-erythrocytic) 단계에서 발현되는 플라스모디움 (Plasmodium) 항원을 포함하고,
    스포로조이트 항원은 B형 간염으로부터의 표면 항원 (HBsAg)에 융합된 것이고,
    상기 CS 단백질 또는 이의 면역원성 단편이 플라스모디움의 CS 단백질의 모든 C-말단 부분, CS 단백질 면역우세 영역의 4개 이상의 탠덤(tandem) 반복체 및 B형 간염으로부터의 표면 항원 (HBsAg)을 포함하는 하이브리드 단백질의 형태이고,
    상기 하이브리드 단백질이 선형 링커를 통해 HBsAg의 N-말단에 프레임 융합된(fused in frame) 플라스모디움 팔시파룸 (P.falciparum) NF54 균주 3D7 클론 CS 단백질의 아미노산 207-395에 상응하는 플라스모디움 팔시파룸의 CS 단백질의 서열을 포함하고,
    상기 하이브리드 단백질이 RTS이고,
    상기 RTS가 혼합 입자인 RTS,S의 형태이고,
    상기 RTS,S의 양이 투여량 당 25㎍이고,
    상기 애쥬번트가 3D-MPL과 QS21의 배합물을 포함하며,
    상기 3D-MPL 및 QS21의 양이 투여량 당 각각 25㎍인, 중증 말라리아 질병에 대해 5세 미만의 소아에게 백신접종하기 위한 조성물.
  2. 삭제
  3. 제 1항에 있어서, 표적 집단이 1세 내지 4세의 소아인 조성물.
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 제 1항에 있어서, 상기 애쥬번트가 수중유 에멀젼을 추가로 포함하는 것인 조성물.
  15. 제 1항에 있어서, 상기 애쥬번트가 리포솜을 추가로 포함하는 것인 조성물.
KR1020077007679A 2004-09-16 2005-09-14 플라스모디움 항원을 포함하는 백신 KR101362097B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB0420634A GB0420634D0 (en) 2004-09-16 2004-09-16 Vaccines
GB0420634.8 2004-09-16
PCT/EP2005/009995 WO2006029887A2 (en) 2004-09-16 2005-09-14 Vaccines comprising plasmodium antigens

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20070052342A KR20070052342A (ko) 2007-05-21
KR101362097B1 true KR101362097B1 (ko) 2014-02-21

Family

ID=33306702

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020077007679A KR101362097B1 (ko) 2004-09-16 2005-09-14 플라스모디움 항원을 포함하는 백신

Country Status (18)

Country Link
US (1) US20080102091A1 (ko)
EP (1) EP1791558A2 (ko)
JP (2) JP5670611B2 (ko)
KR (1) KR101362097B1 (ko)
CN (2) CN101056653A (ko)
AR (1) AR051023A1 (ko)
AU (1) AU2005284223B2 (ko)
BR (1) BRPI0515334A (ko)
CA (1) CA2579527C (ko)
GB (1) GB0420634D0 (ko)
IL (1) IL181733A0 (ko)
MA (1) MA28885B1 (ko)
MX (1) MX2007003160A (ko)
NO (1) NO20071523L (ko)
RU (1) RU2423994C2 (ko)
SG (2) SG159520A1 (ko)
TW (1) TW200621287A (ko)
WO (1) WO2006029887A2 (ko)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050002958A1 (en) * 1999-06-29 2005-01-06 Smithkline Beecham Biologicals Sa Vaccines
GB0513421D0 (en) 2005-06-30 2005-08-03 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccines
US9364525B2 (en) 2006-07-18 2016-06-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccines for malaria
BRPI0716519A2 (pt) 2006-09-07 2013-10-08 Glaxosmithkline Biolog Sa Método para fabricar uma vacina
CN101675068A (zh) * 2007-03-02 2010-03-17 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 新的方法和组合物
CA2695477A1 (en) * 2007-08-13 2009-02-19 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Infant plasmodium falciparum cs vaccines
WO2010108177A2 (en) * 2009-03-20 2010-09-23 University Of South Florida A method and composition using a dual specificity protein tyrosine phosphatase as an antimalarial drug target
US20120244178A1 (en) * 2011-03-25 2012-09-27 Denise Doolan Plasmodium falciparum antigens
US9241988B2 (en) * 2012-04-12 2016-01-26 Avanti Polar Lipids, Inc. Disaccharide synthetic lipid compounds and uses thereof
US9169304B2 (en) 2012-05-01 2015-10-27 Pfenex Inc. Process for purifying recombinant Plasmodium falciparum circumsporozoite protein
WO2014140166A2 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
GB201416773D0 (en) * 2014-09-23 2014-11-05 Glaxosmithkline Biolog S A And Chancellor Masters And Scolars Of The The University Of Oxford Novel Methods For Including An Imune Response
WO2016184784A1 (en) 2015-05-15 2016-11-24 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Peptides including binding domain of plasmodium falciparum proteins (cbp1 and cbp2) to chemokine cx3cl1
CN108025052B (zh) * 2015-09-16 2022-05-10 人工细胞科技公司 抗疟疾组合物和方法
EP3947446A1 (en) 2019-03-25 2022-02-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Treatment of taupathy disorders by targeting new tau species
WO2020221451A1 (en) * 2019-04-30 2020-11-05 Humabs Biomed Sa Antibodies binding to plasmodium circumsporozoite protein and uses thereof

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100251505B1 (ko) 1991-11-16 2000-05-01 장 스테판느 말라리아원충으로부터의 cs 및 hbsag 사이의 혼성 단백질(hybrid protein between cs from plasmodium and hbsag)

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA40597C2 (uk) * 1992-06-25 2001-08-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Вакцинна композиція,спосіб лікування ссавців, що страждають або сприйнятливі до інфекції, спосіб лікування ссавців, що страждають на рак, спосіб одержання вакцинної композиції, композиція ад'ювантів
UA56132C2 (uk) * 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
EP1201250A1 (en) * 2000-10-25 2002-05-02 SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. Immunogenic compositions comprising liver stage malarial antigens
EP1423405A4 (en) * 2001-03-26 2005-01-05 Us Army AMA-1 PROTEIN OF PLASMODIUM FALCIPARUM AND ITS APPLICATIONS
US7550275B2 (en) * 2002-11-12 2009-06-23 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Expression, purification and uses of a Plasmodium falciparum liver stage antigen 1 polypeptide
ATE553200T1 (de) * 2003-08-15 2012-04-15 Commw Scient Ind Res Org Verfahren und mittel zur veränderung der fasereigenschaften in faserproduzierenden pflanzen

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100251505B1 (ko) 1991-11-16 2000-05-01 장 스테판느 말라리아원충으로부터의 cs 및 hbsag 사이의 혼성 단백질(hybrid protein between cs from plasmodium and hbsag)

Also Published As

Publication number Publication date
SG159520A1 (en) 2010-03-30
TW200621287A (en) 2006-07-01
IL181733A0 (en) 2007-07-04
AR051023A1 (es) 2006-12-13
EP1791558A2 (en) 2007-06-06
SG193159A1 (en) 2013-09-30
AU2005284223A1 (en) 2006-03-23
AU2005284223B2 (en) 2011-12-15
MA28885B1 (fr) 2007-09-03
BRPI0515334A (pt) 2008-07-22
WO2006029887A2 (en) 2006-03-23
US20080102091A1 (en) 2008-05-01
NO20071523L (no) 2007-03-28
CA2579527C (en) 2016-06-21
JP2008513400A (ja) 2008-05-01
WO2006029887A3 (en) 2006-05-11
KR20070052342A (ko) 2007-05-21
JP5670611B2 (ja) 2015-02-18
JP5632404B2 (ja) 2014-11-26
MX2007003160A (es) 2007-10-23
RU2423994C2 (ru) 2011-07-20
CA2579527A1 (en) 2006-03-23
CN101056653A (zh) 2007-10-17
GB0420634D0 (en) 2004-10-20
JP2012116849A (ja) 2012-06-21
RU2007109608A (ru) 2008-10-27
CN104027795A (zh) 2014-09-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101362097B1 (ko) 플라스모디움 항원을 포함하는 백신
JP5508266B2 (ja) ワクチン
JP5486802B2 (ja) 抗マラリアワクチン
AP1166A (en) Vaccine composition against malaria.
CN101820901B (zh) 疫苗
Roestenberg et al. Safety and Immunogenicity of a Recombinant Plasmodium falciparum

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
J201 Request for trial against refusal decision
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
B701 Decision to grant
GRNT Written decision to grant
LAPS Lapse due to unpaid annual fee