KR101354692B1 - Oligomer and the synthesis of the oligomer - Google Patents
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Abstract
본 발명은 천연 올리고뉴클레오티드 또는 펩티드 핵산을 대체할 수 있는 올리고머 및 그 제조 방법에 관한 것으로서, 구체적으로 하기 화학식으로 표시될 수 있으며 용액 상태 및 고체상 합성법으로 합성이 가능하고, 올리고머의 생체내 안정성이 우수하여 치료용 제제나 약학적 용도로 사용하기에 적합하다.The present invention relates to an oligomer that can replace a natural oligonucleotide or peptide nucleic acid and a method for producing the same, specifically, can be represented by the following formula and can be synthesized in solution and solid phase synthesis method, excellent oligomer stability in vivo It is suitable for use in therapeutic preparations or pharmaceutical applications.
Description
본 발명은 올리고머 및 그 제조 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 DNA 또는 PNA의 유사 물질로 사용할 수 있으면서 생체내 안정성이 우수한 올리고머 및 그 제조 방법에 관한 것이다. The present invention relates to an oligomer and a method for preparing the same, and more particularly, to an oligomer having excellent in vivo stability while being used as a similar material of DNA or PNA and a method for producing the same.
천연 올리고머(DNA, RNA)는 치료제로서 개발하는데 한계가 있는데, 주된 이유는 주쇄 중 포스포디에스테르 부분이 세포 뉴클리아제에 의해 쉽게 효소 분해되는 취약성으로 인해 생체내 안정성이 낮다는 데 기인한다. 안티센스 분야에서 이러한 일반적인 문제를 극복하기 위하여, 천연 뉴클레오티드의 약리적 특성을 향상시킨 구조적 특징을 갖는 유사물질의 발견과 발전에 상당한 진보가 있었다((Chemistry & Biology 2009, 16, 265). Natural oligomers (DNA, RNA) are limited in their development as therapeutic agents, mainly due to their low in vivo stability due to the vulnerability of the phosphodiester moiety in the main chain to be easily enzymatically degraded by cellular nucleases. To overcome this general problem in the field of antisense, significant advances have been made in the discovery and development of analogs with structural features that enhance the pharmacological properties of natural nucleotides (Chemistry & Biology 2009, 16, 265).
대표적인 것이 펩티드 핵산(PNAs)인데, 이 물질은 N-(2-아미노에틸) 글리신 유닛을 포함하면서 천연 핵산의 당-포스페이트 주쇄를 갖는 DNA/RNA 유사물질이다. Representative are peptide nucleic acids (PNAs), which are DNA / RNA analogs that contain a N- (2-aminoethyl) glycine unit and have a sugar-phosphate backbone of natural nucleic acids.
PNA(peptide nucleic acid)는 DNA 또는 RNA와 상보적 결합력이 탁월하며, 물리화학적으로 매우 안정한 인공핵산(artificial nucleotide)이다. PNA는 자연계 핵산의 골격구조가 폴리아미드(polyamide)로 대체된 핵산으로서, PNA의 화학구조가 자연계 핵산과는 달리 전기적 중성이기 때문에, 상보적인 핵산과 결합할 때 전기적 반발력이 줄어들어 DNA 또는 RNA와 상보적 결합력이 우수한 것으로 알려져 있다. PNA (peptide nucleic acid) is an artificial nucleotide that is excellent in complementary binding to DNA or RNA and is very stable physicochemically. PNA is a nucleic acid in which the backbone structure of natural nucleic acid is replaced with polyamide, and since the chemical structure of PNA is electrically neutral unlike natural nucleic acid, PNA is reduced in electrical repulsion when combined with complementary nucleic acid, thus complementing DNA or RNA. It is known to have excellent binding force.
또한 이때, 상보적인 핵산과의 결합반응의 속도도 빠르게 일어나는데, 염기 개수 및 서열에 따라 정도의 차이는 있지만, PNA-DNA 결합의 경우 DNA-DNA 결합보다 100~5,000배 정도 결합 반응 시간이 빠른 것으로 알려져 있다. In this case, the binding reaction with the complementary nucleic acid also occurs rapidly, although the degree varies depending on the number of bases and the sequence, but PNA-DNA binding is 100 to 5,000 times faster than the DNA-DNA binding. Known.
전기적으로 중성인 PNA의 특성은 PNA oligomer를 이용하여 SNP(single nucleotide polymorphism)의 검출을 가능하게 한다. 즉, 상보적인 염기가 서로 맞지 않는 경우의 Tm 값은 상호 완벽하게 맞는 PNA-DNA의 Tm 값보다 크게 낮기 때문에, 온도를 높여 서로 구분할 수가 있다. The electrically neutral nature of PNA enables the detection of single nucleotide polymorphism (SNP) using a PNA oligomer. That is, the Tm values when the complementary bases do not match each other are significantly lower than the Tm values of the PNA-DNAs that perfectly match each other, so that the temperature can be distinguished from each other.
또한 PNA 올리고머는 화학적, 물리학적 및 생물학적 안정성이 우수하다. 이는 골격구조가 polyamide 결합으로 이루어져 중성이기 때문에 다른 화학물질과 쉽게 반응이 일어나지 않으며, 또한, 골격구조의 변형으로 핵산분해효소나 단백질 분해효소에 의해 인지되지 않기 때문에 가능하다. 이러한 안정성은 생물세포 안에서 효과를 오래 동안 지속시킬 수 있고, 제품의 유효기간을 대폭 연장할 수 있는 장점을 가져오게 된다. PNA oligomers also have excellent chemical, physical and biological stability. This is because the structure is neutral because it is composed of polyamide bonds, and it is not easily reacted with other chemicals, and because the structure is not recognized by nuclease or protease due to modification of the structure. This stability has the advantage of long lasting effects in biological cells and greatly extend the shelf life of the product.
그러나 PNA 또한 아미드 가수분해(물 첨가에 의한)에 의해 펩티드 결합이 끊어질 수 있다는 문제가 있으며, 그 합성 방법이 복잡하기 때문에 보다 안정적인 DNA 대체 물질의 개발이 요구되고 있다. However, PNA also has a problem that peptide bonds may be broken by amide hydrolysis (by water addition), and since the synthesis method is complicated, development of a more stable DNA replacement material is required.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 생체내 안정성이 우수한 올리고머 및 그 제조 방법을 제공하는 것이다. 또한 본 발명의 또 다른 과제는 상기 올리고머를 제조하기 위한 모노머 및 그 제조방법을 제공하는 것이다. The problem to be solved by the present invention is to provide an oligomer having excellent in vivo stability and a method for producing the same. In addition, another object of the present invention is to provide a monomer for producing the oligomer and a method of producing the same.
본 발명은 상기 기술적 과제를 해결하기 위하여, 하기 화학식 (1)로 표시되는 올리고머를 제공한다.In order to solve the above technical problem, the present invention provides an oligomer represented by the following formula (1).
상기 식에서,Where
A는 -NHR'R 또는 -NR'C(O)R로서, 여기서 R' 및 R은 각각 수소, 알킬, 아미노보호기, 펩티드, 단백질, 탄수화물, 지질, 스테로이드로 이루어진 군 중에서 선택되고, A is -NHR'R or -NR'C (O) R, wherein R 'and R are each selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, aminoprotecting groups, peptides, proteins, carbohydrates, lipids, steroids,
B는 각각 독립적으로 천연 핵산염기, 비-천연 핵산염기, DNA 삽입제, 또는 핵산염기-결합기로 이루어진 군 중에서 선택되며, Each B is independently selected from the group consisting of natural nucleic acid bases, non-natural nucleic acid bases, DNA inserts, or nucleic acid base-bonding groups,
C는 CO2H-, -CONR'R-, -SO3H 또는 SO2NR'R 또는 -CO2H 또는 -SO3H의 활성화된 유도체이고, 여기서 R' 및 R은 각각 수소, 알킬, 아미노보호기, 리포터 리간드, 킬레이터, 펩티드, 단백질, 탄수화물, 지질, 스테로이드로 이루어진 군 중에서 선택되고, C is an activated derivative of CO 2 H—, —CONR′R—, —SO 3 H or SO 2 NR′R or —CO 2 H or —SO 3 H, wherein R ′ and R are each hydrogen, alkyl, Aminoprotecting group, reporter ligand, chelator, peptide, protein, carbohydrate, lipid, steroid,
n은 1 내지 20의 정수이다. n is an integer of 1 to 20;
또한 본 발명은 상기 화학식 (1)의 올리고머를 용액상에서 제조하는 방법 및 고체상에서 제조하는 방법을 제공한다.
The present invention also provides a method for preparing the oligomer of the formula (1) in a solution phase and a method for producing in a solid phase.
본 발명에 따른 올리고머를 용액상에서 제조하는 방법은 The process for preparing the oligomers according to the invention in solution
1) N-말단에 해당하는 모노머와 삼중결합 말단이 보호되어 있고 아지드기를 갖는 모노머를 1,3-다이폴라 고리화 첨가반응시켜 하나의 트리아졸기를 포함하는 1차화합물을 합성하는 단계; 1) synthesizing a primary compound including one triazole group by a 1,3-dipolar cycloaddition reaction of a monomer corresponding to the N-terminus and a monomer having a triple bond terminus and having an azide group;
2) 상기 화합물에서 삼중결합 말단을 탈보호시켜 디실릴화된 화합물을 얻는 단계;2) deprotecting the triple bond terminus in the compound to obtain a disilylated compound;
3) 상기 디실릴화된 화합물에 삼중결합 말단이 보호되어 있고 아지드기를 갖는 모노머를 1,3-다이폴라 고리화 첨가반응을 통해 추가하는 단계; 3) adding a monomer having a triple bond end to the disilylated compound and having an azide group through a 1,3-dipolar cyclization addition reaction;
4) 2)단계 내지 3)단계를 반복하여 사슬을 연장하는 단계;4) extending the chain by repeating steps 2) to 3);
5) C-말단에 해당하는 모노머를 첨가반응시켜 올리고머의 합성을 완료하는 단계;를 포함하는 것이 특징이다.
5) adding the monomer corresponding to the C-terminal reaction to complete the synthesis of the oligomer.
또한 본 발명에 따른 올리고머를 고체상에서 제조하는 방법은 In addition, the method for preparing the oligomer according to the present invention in the solid phase
1) 고체지지체에 삼중결합을 도입하는 단계:1) introducing a triple bond to the solid support:
2) 삼중결합의 말단이 보호되어 있고 아지드기를 갖는 모노머를 1,3-다이폴라 고리화 첨가반응(Click chemistry)으로 상기 고체지지체에 도입하는 단계:2) introducing a monomer having a protected end of a triple bond and having an azide group to the solid support by 1,3-dipolar cycloaddition reaction (Click chemistry):
3) 상기 삼중결합 말단을 탈보호시키는 단계;3) deprotecting said triple bond ends;
4) 상기 2)단계 내지 3)단계를 반복하여 사슬을 연장하는 단계;4) extending the chain by repeating steps 2) to 3);
5) 상기 올리고머를 고체지치체에서 유리하는 단계;를 포함하는 것이 특징이다.
5) liberating the oligomer from the solid matrix.
또한 본 발명은 상기 화학식 (1)의 올리고머를 제조하기 위하여 하기 화학식 (2)로 표시되는 모노머를 제공한다. In another aspect, the present invention provides a monomer represented by the following formula (2) to prepare an oligomer of the formula (1).
상기 식에서, Where
R1은 N3 또는 N3로 치환 가능한 작용기이며, R 1 is a functional group which may be substituted with N 3 or N 3 ,
R2는 치환 또는 비치환된 알킨기이며, R 2 is a substituted or unsubstituted alkyne group,
R3는 수소, 또는 
이때, 상기 N3로 치환 가능한 작용기는 NH2, OH, Cl, Br로 이루어진 군 중에서 선택되는 것이 바람직하며, R2는 트리알킬실릴아세틸렌, 트리메틸실릴에테르, 트리에틸실릴, t-부틸디메틸실릴, 디메틸데실실릴, 바이페닐디메틸실릴, 트리이소프로필실릴, 바이페틸디이소프로필실릴알킨, 하이드로메틸알킨으로 이루어진 군중에서 선택되는 것이 바람직하다. At this time, the functional group which can be substituted with N 3 is preferably selected from the group consisting of NH 2 , OH, Cl, Br, R 2 is trialkylsilylacetylene, trimethylsilylether, triethylsilyl, t-butyldimethylsilyl, Preference is given to being selected from the group consisting of dimethyldecylsilyl, biphenyldimethylsilyl, triisopropylsilyl, bifetyldiisopropylsilylalkyne, hydromethylalkyne.
본 발명에 따른 올리고머를 제조하기 위한 모노머는 구체적으로 하기 화합물 중 하나일 수 있다. The monomer for preparing the oligomer according to the present invention may specifically be one of the following compounds.
또한 본 발명은 하기 화학식 (3)로 표시되는 것을 특징으로 하는 올리고머 합성용 아세트산 유도체를 제공한다:The present invention also provides an acetic acid derivative for oligomer synthesis, characterized by the following formula (3):
상기 식에서, Where
B는 각각 독립적으로 천연 핵산염기, 비천연 핵산염기, DNA 삽입제, 또는 핵산염기-결합기로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다. 구체적인 화합물의 예시로는 하기 화학식 (8) 내지 (11)을 들 수 있다. Each B can be independently selected from the group consisting of natural nucleic acid bases, non-natural nucleic acid bases, DNA inserts, or nucleic acid base-bonding groups. Examples of the specific compound include the following general formulas (8) to (11).
본 발명에 따른 올리고뉴클레오티의 합성 과정에서는 상기 화학식 (12) 내지 (15)의 화합물은 상기 화학식 (4) 내지 (7) 중 어느 하나의 화합물과 상기 화학식 (8) 내지 (11)의 화합물을 반응시켜 제조할 수 있다. In the process of synthesizing oligonucleotides according to the present invention, the compounds of the formulas (12) to (15) may be any one of the compounds of the formulas (4) to (7) and the compounds of the formulas (8) to (11). It can be prepared by reacting.
본 발명에 따른 올리고머는 천연 올리고뉴클레오티드(DNA 또는 RNA) 및 그 대체물질로 이용되고 있는 펩티드 핵산(PNA)에 비해 생체 내 안정성이 더욱 우수하기 때문에 치료제 용도나 여러 가지 약리학적, 약학적 용도로 적용하기에 적합하다.The oligomer according to the present invention is more stable in vivo than peptide oligonucleotide (PNA), which is used as a natural oligonucleotide (DNA or RNA) and its substitutes, and thus is applied to therapeutic or various pharmacological and pharmaceutical uses. Suitable for
도 1은 DNA, PNA 및 본 발명에 따른 올리고머(1)의 화학구조를 나타내는 도면이다.
도 2은 본 발명에 따른 올리고머의 주쇄 부분의 합성 과정을 나타내는 도면이다.
도 3는 본 발명에 따른 올리고머 Boc 보호된 핵산 염기 아세트산의 합성 과정을 나타내는 도면이다.
도 4는 용액상에서 본 발명에 따른 올리고머를 합성하는 순환 과정을 보여주는 도면이다.
도 5는 용액상 합성법에 따라 본 발명에 따른 올리고머를 합성하는 과정을 보여주는 화학 반응식이다.
도 6은 본 발명의 고체상 합성법에 사용되는 폴리스타이렌계 수지와 핵산 염기를 보여주는 도면이다.
도 7은 고체상 합성법에 따라 본 발명에 따른 올리고머를 합성하는 순환 과정을 보여주는 흐름도이다.
도 8은 고체상 합성법에 따라 본 발명의 올리고머를 합성하는 과정을 보여주는 화학 반응식이다.
도 9은 본 발명의 실시예에 따라 합성된 화합물의 MALDI-TOF 데이터를 보여주는 그래프이다. 1 is a diagram showing the chemical structure of DNA, PNA and
2 is a view showing the synthesis process of the main chain portion of the oligomer according to the present invention.
3 is a diagram showing the synthesis of oligomeric Boc protected nucleic acid base acetic acid according to the present invention.
4 is a view showing a cyclic process for synthesizing an oligomer according to the present invention in a solution phase.
5 is a chemical scheme showing a process of synthesizing an oligomer according to the present invention according to the solution phase synthesis method.
6 is a view showing a polystyrene resin and a nucleic acid base used in the solid phase synthesis method of the present invention.
7 is a flow chart showing a cyclic process for synthesizing oligomers according to the present invention according to the solid phase synthesis method.
8 is a chemical scheme showing the process of synthesizing the oligomer of the present invention according to the solid phase synthesis method.
9 is a graph showing MALDI-TOF data of a compound synthesized according to an embodiment of the present invention.
이하 실시예 및 도면을 통해 본 발명을 더욱 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples and drawings.
본 발명에 따른 올리고머는 하기 화학식 (1)로 표시되는 것이 특징이다:The oligomers according to the invention are characterized by the following formula (1):
상기 식에서,Where
A는 -NHR'R 또는 -NR'C(O)R로서, 여기서 R' 및 R은 각각 수소, 알킬, 아미노보호기, 펩티드, 단백질, 탄수화물, 지질, 스테로이드로 이루어진 군 중에서 선택되고, A is -NHR'R or -NR'C (O) R, wherein R 'and R are each selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, aminoprotecting groups, peptides, proteins, carbohydrates, lipids, steroids,
B는 각각 독립적으로 천연 핵산염기, 비-천연 핵산염기, DNA 삽입제, 또는 핵산염기-결합기로 이루어진 군 중에서 선택되며, Each B is independently selected from the group consisting of natural nucleic acid bases, non-natural nucleic acid bases, DNA inserts, or nucleic acid base-bonding groups,
C는 -CO2H, -CONR'R-, -SO3H 또는 SO2NR'R 또는 -CO2H 또는 -SO3H의 활성화된 유도체이고, 여기서 R' 및 R은 각각 수소, 알킬, 아미노보호기, 리포터 리간드, 킬레이터, 펩티드, 단백질, 탄수화물, 지질, 스테로이드로 이루어진 군 중에서 선택되고, C is an activated derivative of —CO 2 H, —CONR′R—, —SO 3 H or SO 2 NR′R or —CO 2 H or —SO 3 H, wherein R ′ and R are each hydrogen, alkyl, Aminoprotecting group, reporter ligand, chelator, peptide, protein, carbohydrate, lipid, steroid,
n은 1 내지 20의 정수이다. n is an integer of 1 to 20;
본 발명의 일실시예에 의하면, 상기 B는 아데닌 시토신, 티민, 아데닌 및 이들의 유도체 중에서 선택되는 것이 바람직하다. 또한 상기 B가 핵산염기이고, 상기 핵산염기가 엑소사이클릭 아미노 작용기를 가질 때, 그 아미노 작용기는 산성 조건 하에서 제거할 수 있고 염기 조건에서 안정한 보호기로 보호되는 것이 바람직하다. 이때 상기 보호기로는 t-부틸옥시가르보닐, 아다만틸옥시카르보닐, 벤질옥시카르보닐 등을 들 수 있다. According to an embodiment of the present invention, the B is preferably selected from adenine cytosine, thymine, adenine and derivatives thereof. Further, when B is a nucleic acid base and the nucleic acid base has an exocyclic amino functional group, the amino functional group is preferably removable under acidic conditions and protected with a stable protecting group under basic conditions. In this case, t-butyloxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl, benzyloxycarbonyl, etc. may be mentioned as the protecting group.
본 발명에 따른 올리고머를 용액상에서 제조하는 방법은 도 4와 도 5에 상세히 도시되어 있다. 도 4는 용액상에서 본 발명에 따른 올리고머를 합성하는 순환 과정을 보여주는 도면이며, 도 5는 용액상 합성법에 따라 본 발명에 따른 올리고머를 합성하는 과정을 보여주는 구체적인 화학 반응식이 순차적으로 나타나있다.The process for preparing the oligomers according to the invention in solution is shown in detail in FIGS. 4 and 5. Figure 4 is a view showing a cyclic process for synthesizing the oligomer according to the present invention in a solution phase, Figure 5 is a specific chemical scheme showing a process for synthesizing the oligomer according to the present invention according to the solution phase synthesis method is shown sequentially.
본 발명에 따른 올리고머를 용액상 합성법을 이용하여 제조하는 방법은 The method for preparing an oligomer according to the present invention using a solution phase synthesis method
1) N-말단에 해당하는 모노머와 삼중결합 말단이 보호되어 있고 아지드기를 갖는 모노머를 1,3-다이폴라 고리화 첨가반응시켜 하나의 트리아졸기를 포함하는 1차 화합물을 합성하는 단계;1) synthesizing a primary compound including one triazole group by a 1,3-dipolar cycloaddition reaction of a monomer corresponding to the N-terminus and a monomer having a triple bond terminal protected and having an azide group;
2) 상기 화합물에서 삼중결합 말단을 탈보호시켜 디실릴화된 화합물을 얻는 단계;2) deprotecting the triple bond terminus in the compound to obtain a disilylated compound;
3) 상기 디실릴화된 화합물에 삼중결합 말단이 보호되어 있고 아지드기를 갖는 모노머를 1,3-다이폴라 고리화 첨가반응을 통해 추가하는 단계; 3) adding a monomer having a triple bond end to the disilylated compound and having an azide group through a 1,3-dipolar cyclization addition reaction;
4) 2)단계 내지 3)단계를 반복하여 사슬을 연장하는 단계;4) extending the chain by repeating steps 2) to 3);
5) C-말단에 해당하는 모노머를 첨가반응시켜 올리고머의 합성을 완료하는 단계를 포함한다. 5) adding the monomer corresponding to the C-terminus to complete the synthesis of the oligomer.
본 발명의 일실시예에 의하면, 상기 1)단계에서 트리아졸기를 포함하는 1차 화합물은 하기 화학식(16)으로 표시되는 화합물일 수 있다. According to one embodiment of the present invention, the primary compound including the triazole group in step 1) may be a compound represented by the following formula (16).
또한 본 발명의 일실시예에 의하면, 상기 삼중결합의 말단이 보호되어 있고 아지드기를 갖는 모노머는 하기 화학식(13)의 TIPS(트리이소프로필실릴) 보호된 모노머인 것이 바람직하다. In addition, according to one embodiment of the present invention, the terminal of the triple bond is protected and the monomer having an azide group is preferably a TIPS (triisopropylsilyl) protected monomer of the formula (13).
또한 본 발명의 일실시예에 의하면, 상기 1)단계 및 3)단계의 1,3-다이폴라 고리화 첨가반응(Click chemistry)은 적절한 용매하에서 촉매, 유기 염기 및 환원제를 사용하여 수행되는 것이 바람직하다. In addition, according to one embodiment of the invention, the 1,3-dipolar cycloaddition reaction (Click chemistry) of steps 1) and 3) is preferably carried out using a catalyst, an organic base and a reducing agent under a suitable solvent. Do.
사용가능한 용매로는 아세토니트릴, 1,4-다이옥산, 디메틸포름아마이드, 디클로로메탄, 디클로로에탄, DMSO, 테트라하이드로퓨란, 톨루엔, 헥사메틸포스포아미드, 부틸 알코올, 이소프로필 알콜, 에틸 알콜, 물 또는 이들의 혼합물을 들 수 있으며, 이 중에서 디메틸포름아마이드 또는 테트라 하이드로퓨란을 사용하는 것이 바람직하다. 1,3 다이폴라 고리화 반응의 반응 속도는 사용하는 용매에 의존한다. Solvents that can be used include acetonitrile, 1,4-dioxane, dimethylformamide, dichloromethane, dichloroethane, DMSO, tetrahydrofuran, toluene, hexamethylphosphoramide, butyl alcohol, isopropyl alcohol, ethyl alcohol, water or These mixtures are mentioned, It is preferable to use dimethylformamide or tetrahydrofuran among these. The reaction rate of the 1,3 dipolar cyclization reaction depends on the solvent used.
사용가능한 촉매로는 Cu(O), Cu(Ⅰ)Br, Cu(Ⅰ)Cl, Cu(Ⅰ)I, Cu(Ⅱ)Br, CuSO4, Cu2O, Cu(OAc)2, CuBF4, [Cu(CH3CN)4]PF6, CuBr·SMe2, Cu(CH3CN)4OTf 를 들 수 있으며, 이 중에서 Cu(Ⅰ)I 또는 CuSO4 또는 CuBr·SMe2를 사용하는 것이 바람직하다. Available catalysts include Cu (O), Cu (I) Br, Cu (I) Cl, Cu (I) I, Cu (II) Br, CuSO 4 , Cu 2 O, Cu (OAc) 2 , CuBF 4 , [Cu (CH 3 CN) 4 ] PF 6 , CuBr · SMe 2 , Cu (CH 3 CN) 4 OTf, among which Cu (I) I or CuSO 4 Or it is preferred to use CuBr · SMe 2.
사용가능한 유기 염기로는 1,8-디아자바이씨클로[5,4,0]운테크-7-온(DBU), N,N-다이아이소프로필에틸아민(DIPEA), 트리에틸아민, 탄산칼륨, 탄산나트륨 등을 들 수 있으며, 이 중에서 N,N-다이아이소프로필에틸아민을 사용하는 것이 바람직하다. Organic bases that can be used include 1,8-diazabicyclo [5,4,0] untech-7-one (DBU), N, N-diisopropylethylamine (DIPEA), triethylamine, potassium carbonate, Sodium carbonate and the like, among which N, N-diisopropylethylamine is preferably used.
또한 사용가능한 환원제로는 L-아스코르빈산 나트륨을 들 수 있다. Also usable reducing agents include sodium L-ascorbate.
본 발명의 일실시예에 의하면 상기 3)단계의 삼중결합 말단을 탈보호하는 단계는 용매의 존재하에서 유기 촉매를 사용하여 수행되는 것이 바람직하다. According to one embodiment of the present invention, the step of deprotecting the triple bond end of step 3) is preferably performed using an organic catalyst in the presence of a solvent.
사용가능한 유기 촉매로는 예를 들어 플루오르화 칼륨, 질산은, Bu4NF, 탄산 칼륨 등이 있다. Organic catalysts that can be used include, for example, potassium fluoride, silver nitrate, Bu 4 NF, potassium carbonate and the like.
한편 반응 온도는 실온 내지 용매의 비점 범위가 바람직하며, 실온을 유지하는 것이 더욱 바람직하다. 반응 시간은 1 내지 24시간이 적절하고, 8 시간내지 24시간 동안 반응시키는 것이 바람직하다.
On the other hand, the reaction temperature is preferably in the boiling point range of room temperature to the solvent, and more preferably maintained at room temperature. The reaction time is suitably 1 to 24 hours, and preferably reacted for 8 to 24 hours.
한편 본 발명에 따른 올리고머는 고체상 합성법을 이용하여 제조할 수도 있으며 전체적인 과정은 도 7과 도 8에 도시되어 있다. 도 7은 고체상 합성법에 따라 본 발명에 따른 올리고머를 합성하는 순환 과정을 보여주는 흐름도이며, 도 8은 고체상 합성법에 따라 본 발명의 올리고머를 합성하는 과정을 보여주는 화학 반응식이 나타나있다. Meanwhile, the oligomer according to the present invention may be prepared using a solid phase synthesis method and the overall process is illustrated in FIGS. 7 and 8. 7 is a flowchart showing a cyclic process for synthesizing an oligomer according to the present invention according to the solid phase synthesis method, Figure 8 is a chemical reaction scheme showing a process for synthesizing the oligomer of the present invention according to the solid phase synthesis method.
본 발명에 따른 올리고머를 고체상 합성법을 이용하여 제조하는 방법은 The method for preparing an oligomer according to the present invention using a solid phase synthesis method
1) 고체지지체에 삼중결합을 도입하는 단계:1) introducing a triple bond to the solid support:
2) 삼중결합의 말단이 보호되어 있고 아지드기를 갖는 모노머를 1,3-다이폴라 고리화 첨가반응(Click chemistry)으로 상기 고체지지체에 도입하는 단계:2) introducing a monomer having a protected end of a triple bond and having an azide group to the solid support by 1,3-dipolar cycloaddition reaction (Click chemistry):
3) 상기 삼중결합 말단을 탈보호시키는 단계;3) deprotecting said triple bond ends;
4) 상기 2)단계 내지 3)단계를 반복하여 사슬을 연장하는 단계;4) extending the chain by repeating steps 2) to 3);
5) 상기 올리고머를 고체지치체에서 유리하는 단계를 포함할 수 있다. 5) may comprise the step of liberating the oligomer in a solid matrix.
본 발명의 일실시예에 의하면 상기 2)단계와 3)단계 사이 또는 3)단계와 4) 단계 사이에 세척 단계 및 수지 프리스웰(Preswell) 단계를 더 포함하는 것이 바람직하다. According to an embodiment of the present invention, it is preferable to further include a washing step and a resin preswell step between steps 2) and 3) or between steps 3) and 4).
본 발명에서 사용가능한 고체지지체는 아민, 클로라이드, 하이드록시 작용기를 포함하는 고분자 중합체인 것이 바람직하며, 예를 들어 폴리스티렌, 폴리옥시에틸렌 변형된 폴리스티렌 또는 CPG (controlled pore glass), 폴리스티렌-디비닐벤젠, 메타아크릴산-디메틸아크릴아미드 및 히드록실 메타아크릴산 중에서 선택될 수 있다. 그 중에서 하기 화학식의 메틸벤즈하이드릴아민(MBHA, methylbenzylhydrylamine) 수지인 것이 바람직하다.The solid support usable in the present invention is preferably a polymer polymer containing amine, chloride, hydroxy functional groups, for example polystyrene, polyoxyethylene modified polystyrene or controlled pore glass (CPG), polystyrene-divinylbenzene, Methacrylic acid-dimethylacrylamide and hydroxyl methacrylic acid. Among them, the compound is preferably methylbenzhydrylamine (MBHA, methylbenzylhydrylamine) resin.
본 발명의 일실시예에서, 상기 1)단계는 고체지지체에 하기 화학식 (22)로 표시되는 모노머를 반응시켜 수행할 수 있다. In one embodiment of the present invention, step 1) may be performed by reacting a monomer represented by the following formula (22) with a solid support.
본 발명의 일실시예에서, 상기 삼중결합의 말단이 보호되어 있고 아지드기를 갖는 모노머는 하기 화학식의 TIPS 보호된 모노머인 것이 바람직하다. In one embodiment of the present invention, the terminal of the triple bond is protected and the monomer having an azide group is preferably a TIPS protected monomer of the following formula.
또한 본 발명의 일실시예에 의하면, 고체상 합성법 중 상기 2)단계의 1,3-다이폴라 고리화 첨가반응(Click chemistry)은 용매하에서 촉매, 유기 염기 및 환원제를 사용하여 수행되는 것이 바람직하다. In addition, according to one embodiment of the present invention, 1,3-dipolar cycloaddition reaction (Click chemistry) of step 2) of the solid phase synthesis method is preferably carried out using a catalyst, an organic base and a reducing agent in a solvent.
사용가능한 용매로는 아세토니트릴, 1,4-다이옥산, 디메틸포름아마이드, 디클로로메탄, 디클로로에탄, DMSO, 테트라하이드로퓨란, 톨루엔, 헥사메틸포스포아미드, 부틸 알코올, 이소프로필 알콜, 에틸 알콜, 물 또는 이들의 혼합물을 들 수 있으며, 이 중에서 디메틸포름아마이드 또는 테트라 하이드로퓨란을 사용하는 것이 바람직하다. 1,3 다이폴라 고리화 반응의 반응 속도는 사용하는 용매에 의존한다. Solvents that can be used include acetonitrile, 1,4-dioxane, dimethylformamide, dichloromethane, dichloroethane, DMSO, tetrahydrofuran, toluene, hexamethylphosphoramide, butyl alcohol, isopropyl alcohol, ethyl alcohol, water or These mixtures are mentioned, It is preferable to use dimethylformamide or tetrahydrofuran among these. The reaction rate of the 1,3 dipolar cyclization reaction depends on the solvent used.
사용가능한 촉매로는 Cu(O), Cu(Ⅰ)Br, Cu(Ⅰ)Cl, Cu(Ⅰ)I, Cu(Ⅱ)Br, CuSO4, Cu2O, Cu(OAc)2, CuBF4, [Cu(CH3CN)4]PF6, CuBr·SMe2, Cu(CH3CN)4OTf 를 들 수 있으며, 이 중에서 Cu(Ⅰ)I 또는 CuSO4 또는 CuBr·SMe2를 사용하는 것이 바람직하다. Available catalysts include Cu (O), Cu (I) Br, Cu (I) Cl, Cu (I) I, Cu (II) Br, CuSO 4 , Cu 2 O, Cu (OAc) 2 , CuBF 4 , [Cu (CH 3 CN) 4 ] PF 6 , CuBr · SMe 2 , Cu (CH 3 CN) 4 OTf, among which Cu (I) I or CuSO 4 Or it is preferred to use CuBr · SMe 2.
사용가능한 유기 염기로는 1,8-디아자바이씨클로[5,4,0]운테크-7-온(DBU), N,N-다이아이소프로필에틸아민(DIPEA), 트리에틸아민, 탄산칼륨, 탄산나트륨 등을 들 수 있으며, 이 중에서 N,N-다이아이소프로필에틸아민을 사용하는 것이 바람직하다. Organic bases that can be used include 1,8-diazabicyclo [5,4,0] untech-7-one (DBU), N, N-diisopropylethylamine (DIPEA), triethylamine, potassium carbonate, Sodium carbonate and the like, among which N, N-diisopropylethylamine is preferably used.
또한 사용가능한 환원제로는 L-아스코르빈산 나트륨을 들 수 있다. Also usable reducing agents include sodium L-ascorbate.
본 발명에 따른 고체상 합성법을 이용한 올리고머 제조 방법에서, 상기 3)단계의 삼중결합 말단을 탈보호하는 단계는 용매의 존재하에서 유기 촉매를 사용하여 수행되는 것이 바람직하다. In the oligomer production method using the solid phase synthesis method according to the invention, the step of deprotecting the triple bond end of step 3) is preferably carried out using an organic catalyst in the presence of a solvent.
사용가능한 유기 촉매로는 예를 들어 플루오르화 칼륨, 질산은, Bu4NF, 탄산 칼륨 등이 있다. Organic catalysts that can be used include, for example, potassium fluoride, silver nitrate, Bu 4 NF, potassium carbonate and the like.
본 발명에 따른 고체상 합성법을 이용한 올리고머 제조 방법에서, 5)단계는 양이온 포착제로 m-크레졸을 포함하는 TFA를 사용하여 수행될 수 있다. In the oligomer preparation method using the solid phase synthesis method according to the present invention, step 5) may be performed using a TFA containing m -cresol as the cation trapping agent.
한편 반응 온도는 실온 내지 용매의 비점 범위가 바람직하며, 실온을 유지하는 것이 더욱 바람직하다. 반응 시간은 1 내지 24시간이 적절하고, 8 시간내지 24시간 동안 반응시키는 것이 바람직하다.
On the other hand, the reaction temperature is preferably in the boiling point range of room temperature to the solvent, and more preferably maintained at room temperature. The reaction time is suitably 1 to 24 hours, and preferably reacted for 8 to 24 hours.
본 발명에 따른 올리고머는 하기 화학식 (3)로 표시되는 모노머를 사용하여 제조할 수 있다. The oligomer according to the present invention can be prepared using a monomer represented by the following formula (3).
또한 본 발명은 상기 화학식 (1)의 올리고머를 제조하기 위하여 하기 화학식 (2)로 표시되는 모노머를 제공한다. In another aspect, the present invention provides a monomer represented by the following formula (2) to prepare an oligomer of the formula (1).
상기 식에서, Where
R1은 N3 또는 N3로 치환 가능한 작용기이며, R 1 is a functional group which may be substituted with N 3 or N 3 ,
R2는 치환 또는 비치환된 알킨기이며, R 2 is a substituted or unsubstituted alkyne group,
R3는 수소, 또는 
이때, 상기 N3로 치환 가능한 작용기는 NH2, OH, Cl, Br로 이루어진 군 중에서 선택되는 것이 바람직하며, R2는 트리알킬실릴아세틸렌, 트리메틸실릴에테르, 트리에틸실릴, t-부틸디메틸실릴, 디메틸데실실릴, 바이페닐디메틸실릴, 트리이소프로필실릴, 바이페틸디이소프로필실릴알킨, 하이드로메틸알킨 중에서 선택되는 것이 바람직하다. At this time, the functional group which can be substituted with N 3 is preferably selected from the group consisting of NH 2 , OH, Cl, Br, R 2 is trialkylsilylacetylene, trimethylsilylether, triethylsilyl, t-butyldimethylsilyl, It is preferred to be selected from dimethyldecylsilyl, biphenyldimethylsilyl, triisopropylsilyl, bifetyldiisopropylsilylalkyne and hydromethylalkyne.
본 발명에 따른 올리고머를 제조하기 위한 모노머는 구체적으로 하기 화합물 중 하나일 수 있다. The monomer for preparing the oligomer according to the present invention may specifically be one of the following compounds.
또한 본 발명은 하기 화학식 (3)로 표시되는 것을 특징으로 하는 올리고머 합성용 아세트산 유도체를 제공한다:The present invention also provides an acetic acid derivative for oligomer synthesis, characterized by the following formula (3):
상기 식에서, Where
B는 각각 독립적으로 천연 핵산염기, 비천연 핵산염기, DNA 삽입제, 또는 핵산염기-결합기로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다. 구체적인 화합물의 예시로는 하기 화학식 (8) 내지 (11)을 들 수 있다. Each B can be independently selected from the group consisting of natural nucleic acid bases, non-natural nucleic acid bases, DNA inserts, or nucleic acid base-bonding groups. Examples of the specific compound include the following general formulas (8) to (11).
구체적인 B의 예시로는 하기 구조를 갖는 핵산 염기 및 그 유도체를 들 수 있으며, 티민류는 다음과 같다. Specific examples of B include nucleic acid bases and derivatives thereof having the following structure, and thymines are as follows.
시토신류는 다음과 같다. Cytosine is as follows.
아데닌류는 다음과 같다.Adenine is as follows.
구아닌류는 다음과 같다.Guanine is as follows.
그 밖에 다음과 같은 유도체도 가능하다.In addition, the following derivatives are also possible.
또한 본 발명에 따른 올리고뉴클레오티의 합성 과정에서는 하기 화학식 (12) 내지 (15)로 표시되는 것을 특징으로 하는 모노머를 사용하는 것이 바람직하다. In addition, in the process of synthesizing the oligonucleotide according to the present invention, it is preferable to use a monomer characterized by the following formulas (12) to (15).
상기 화학식 (12) 내지 (15)의 화합물은 하기 화학식 (4) 내지 (7) 중 어느 하나의 화합물과 하기 화학식 (8) 내지 (11)의 화합물을 반응시켜 제조할 수 있다.
The compounds of the formulas (12) to (15) can be prepared by reacting the compound of any one of the following formulas (4) to (7) with the compound of the formulas (8) to (11).
이하에서 실시예를 들어 본 발명을 보다 쉽게 설명하고자 하지만, 이는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것으로 해석되어서는 안된다.
Hereinafter, the present invention will be described more easily with reference to the following examples, which are only intended to illustrate the present invention and the scope of the present invention should not be construed as being limited thereto.
1. One. 올리고머Oligomer 주쇄의Main chain 합성 synthesis
실시예Example 1: One: 터트Rat -부틸 2-(-Butyl 2- ( 프롭Prop -2--2- 이닐아미노Inylamino )) 에틸카바메이트Ethyl carbamate ( ( terttert -- butylbutyl 2-(prop-2-ynylamino)ethylcarbamate)의 제조 [화합물 4]Preparation of 2- (prop-2-ynylamino) ethylcarbamate) [Compound 4]
알려진 방법 (J. Med . Chem. 1990, 33, 97)으로 얻은 터트-부틸 2-아미노에틸카바메이트 (1.35 g, 16.8 mmol)을 THF (50 ml)에 녹인 다음, TEA (2.9 ml, 21 mmol), NaI (126 mg, 0.84 mmol)와 프로파질 브로마이드(0.75 ml, 8.4 mmol)를 첨가하고 가열하여 환류시켰다. 5시간 후, 반응 혼합물을 실온으로 식히고, 용매를 감압 증발시킨 다음, 실리카겔 관 크로마토그래피 (에틸아세테이트:메탄올, 2:1 v/v)로 정제하여 상기 목적화합물 (4, 69%)을 수득하였다.
Tert-butyl 2-aminoethylcarbamate (1.35 g, 16.8 mmol) obtained by the known method ( J. Med . Chem . 1990 , 33 , 97) was dissolved in THF (50 ml) and then TEA (2.9 ml, 21 mmol). ), NaI (126 mg, 0.84 mmol) and propazyl bromide (0.75 ml, 8.4 mmol) were added and heated to reflux. After 5 hours, the reaction mixture was cooled to room temperature, the solvent was evaporated under reduced pressure, and then purified by silica gel column chromatography (ethyl acetate: methanol, 2: 1 v / v) to obtain the target compound (4, 69%). .
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ1.41 (s, 9H), 2.20 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 2.79 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.21 (q, J = 5.6 Hz, 2H), 3.40 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4.91 (br s, 1H)
1 H NMR (CDCl 3 , 300 MHz) δ1.41 (s, 9H), 2.20 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 2.79 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.21 (q, J = 5.6 Hz, 2H), 3.40 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4.91 (br s, 1H)
실시예Example 2: 2: NN -(2--(2- 아지도에틸Azidoethyl )3-() 3- ( 트라이아이소프로필실릴Triisopropylsilyl )) 프롭Prop -2-인-1-아민 2-yn-1-amine
(( NN -(2--(2- azidoethylazidoethyl )-3-() -3- ( triisopropylsilyltriisopropylsilyl )) propprop -2--2- ynyn -1--One- amineamine )의 제조 [화합물 5] ) Preparation [Compound 5]
(2)-1: (2) -1: 터트Rat -부틸 2--Butyl 2- 아지도카바메이트의Azid carbamate 합성 synthesis
알려진 방법 (Org . Biomol . Chem. 2007, 5, 636.)으로 얻은 2-아지도-1-에틸아민 (3.75 g, 43.6 mmol)을 THF (100 ml)에 녹인 다음, 0 ?로 냉각시킨 뒤, THF (40 ml)에 용해 된 다이-터트-부틸 다이카보네이트 (9.51 g, 43.6 mmol)를 30분 동안 천천히 첨가하였다. 첨가 후, 30분간 0 oC에서 교반 후, 18시간 동안 상온에서 더 교반하였다. 그 후, 이 반응 혼합물을 감압 증발시키고, 에틸아세테이트로 희석한 뒤, 염화나트륨 수용액으로 세척하였다. 유기층을 마그네슘설페이트를 통해 건조시키고 농축시켜 상기 목적화합물, 터트-부틸 2-아지도카바메이트를 수득 (72%)하였다.
2-azido-1-ethylamine (3.75 g, 43.6 mmol) obtained by the known method ( Org . Biomol . Chem . 2007 , 5 , 636.) was dissolved in THF (100 ml), and then cooled to 0? , Di-tert-butyl dicarbonate (9.51 g, 43.6 mmol) dissolved in THF (40 ml) was added slowly over 30 minutes. After addition, the mixture was stirred at 0 ° C. for 30 minutes, followed by further stirring at room temperature for 18 hours. Thereafter, the reaction mixture was evaporated under reduced pressure, diluted with ethyl acetate, and washed with an aqueous sodium chloride solution. The organic layer was dried over magnesium sulfate and concentrated to give the target compound, tert-butyl 2-azidocarbamate (72%).
(2)-2: (2) -2: 터트Rat -부틸 2--Butyl 2- 아지도에틸(프롭-2-이닐)카바메이트의Of azidoethyl (prop-2-ynyl) carbamate 합성 synthesis
얻어진 터트-부틸 2-아지도카바메이트 (3.26 g, 17.5 mmol)을 DMF (35 ml)에 녹인 다음, 0?로 냉각시킨 뒤 60% NaH (2.1 g, 52.5 mmol)을 첨가하였다. 0?에서 20분 동안 교반한 뒤, 프로파질 브로마이드 (80 wt% in toluene, 3.9 ml, 35.0 mmol)를 천천히 첨가하고 상온에서 4시간 동안 교반하였다. 그 후, 이 반응 혼합물을 물로 희석하고, 에틸아세테이트로 추출하고 유기층을 염화나트륨 수용액으로 세척했다. 유기층을 마그네슘설페이트를 통해 건조하고 감압 증발한 후 실리카겔 관 크로마토그래피 (n-헥산:에틸아세테이트, 8:1 V/V)로 정제하여 상기 목적화합물, 터트-부틸 2-아지도에틸(프롭-2-이닐)카바메이트를 수득 (77%)하였다.
The resulting tert-butyl 2-azidocarbamate (3.26 g, 17.5 mmol) was dissolved in DMF (35 ml), cooled to 0 ° and 60% NaH (2.1 g, 52.5 mmol) was added. After stirring for 20 minutes at 0 ?, propazyl bromide (80 wt% in toluene, 3.9 ml, 35.0 mmol) was added slowly and stirred at room temperature for 4 hours. Then, the reaction mixture was diluted with water, extracted with ethyl acetate and the organic layer was washed with aqueous sodium chloride solution. The organic layer was dried over magnesium sulfate, evaporated under reduced pressure, and purified by silica gel column chromatography (n-hexane: ethyl acetate, 8: 1 V / V) to obtain the target compound, tert-butyl 2-azidoethyl (prop-2). -Ynyl) carbamate was obtained (77%).
(2)-3: (2) -3: 터트Rat -부틸 2--Butyl 2- 아지도에틸Azidoethyl (3-((3- ( 트라이아이소프로필실릴Triisopropylsilyl )) 프롭Prop -2--2- 이닐Isil ) ) 카바메이Kaba May 트의T 합성 synthesis
얻어진 터트-부틸 2-아지도에틸(프롭-2-이닐)카바메이트 (4.39 g, 19.5 mmol)을 THF (48 ml)에 녹인 다음, -78℃로 냉각시킨 뒤 LHMDS (1M in THF, 21.5 ml, 21.5 mmol)을 첨가하였다. -78℃에서 20분 동안 교반한 뒤, 트리아이소프로필실릴 클로라이드 (4.6 ml, 21.5 mmol)를 천천히 첨가하고 -78℃에서 상온으로 천천히 온도를 올리면서 2시간 동안 교반하였다. 그 후, 이 반응 혼합물을 염화암모늄 포화수용액을 첨가하여, 에틸아세테이트로 추출하고 유기층을 염화나트륨 수용액으로 세척시켰다. 유기층을 마그네슘 설페이트를 통해 건조하고 감압 증발시켜, 실리카겔 관 크로마토그래피 (n-헥산:에틸아세테이트, 15:1 v/v)로 정제하여 상기 목적화합물, 터트-부틸 2-아지도에틸(3-(트라이아이소프로필실릴)프롭-2-이닐)카바메이트를 수득 (55%)하였다.
The resulting tert-butyl 2-azidoethyl (prop-2-ynyl) carbamate (4.39 g, 19.5 mmol) was dissolved in THF (48 ml), cooled to -78 ° C and then LHMDS (1M in THF, 21.5 ml). , 21.5 mmol) was added. After stirring at −78 ° C. for 20 minutes, triisopropylsilyl chloride (4.6 ml, 21.5 mmol) was added slowly and stirred at −78 ° C. for 2 hours while slowly raising the temperature to room temperature. Then, the reaction mixture was added with saturated aqueous ammonium chloride solution, extracted with ethyl acetate, and the organic layer was washed with aqueous sodium chloride solution. The organic layer was dried over magnesium sulfate, evaporated under reduced pressure, and purified by silica gel column chromatography (n-hexane: ethyl acetate, 15: 1 v / v) to give the target compound, tert-butyl 2-azidoethyl (3- ( Triisopropylsilyl) prop-2-ynyl) carbamate was obtained (55%).
(2)-4: (2) -4: NN -(2--(2- 아지도에틸Azidoethyl )3-() 3- ( 트라이아이소프로필실릴Triisopropylsilyl )) 프롭Prop -2-인-1-2-in-1- 아민의Amine 합성 synthesis
얻어진 터트-부틸 2-아지도에틸(3-(트라이아이소프로필실릴)프롭-2-이닐) 카바메이트 (2.59 g, 6.8 mmol)는 디클로로메탄 (10 ml)에 녹인 다음, 0℃로 냉각시킨 뒤 TFA (40% in 디클로로메탄, 4 mL)을 첨가하였다. 상온에서 2시간 동안 교반한 뒤, 디클로로메탄으로 희석하여, 염화나트륨 수용액으로 세척하고, 중탄산나트륨 수용액으로 중화하여, 유기층을 마그네슘 설페이트로 건조하고, 감압 증발시킨 뒤, 실리카겔 관 크로마토그래피 (디클로로메탄:메탄올, 20:1 v/v)로 정제하여 상기 목적화합물, N-(2-아지도에틸)3-(트라이아이소프로필실릴)프롭-2-인-1-아민을 수득 (90%)하였다.
The resulting tert-butyl 2-azidoethyl (3- (triisopropylsilyl) prop-2-ynyl) carbamate (2.59 g, 6.8 mmol) was dissolved in dichloromethane (10 ml) and then cooled to 0 ° C. TFA (40% in dichloromethane, 4 mL) was added. After stirring for 2 hours at room temperature, diluted with dichloromethane, washed with aqueous sodium chloride solution, neutralized with aqueous sodium bicarbonate solution, the organic layer was dried over magnesium sulfate, evaporated under reduced pressure, and then silica gel column chromatography (dichloromethane: methanol) , 20: 1 v / v) to give the title compound, N- (2-azidoethyl) 3- (triisopropylsilyl) prop-2-yn-1-amine (90%).
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ1.05 (s, 18H), 2.91 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.43 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.50 (s, 2H)
1 H NMR (CDCl 3 , 400 MHz) δ1.05 (s, 18H), 2.91 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.43 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.50 (s, 2H)
실시예Example 3: 3: 메틸methyl 2-(2- 2- (2- 아지도에틸아미노Azidoethylamino )아세테이트의 제조 [화합물 6]) Preparation of acetate [Compound 6]
알려진 방법 (Org . Biomol . Chem. 2007, 5, 636)으로 얻은 2-아지도-1-에틸아민 (3.85 g, 44.8 mmol)을 디클로로메탄 (100 ml)에 녹인 다음, TEA (7.5 ml, 44.8 mmol)을 첨가하고, 메틸 브로모아세테이트 (4.1 ml, 44.8 mmol)를 10분간 천천히 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 상온에서 24시간 동안 교반한 뒤, 디클로로메탄으로 희석하여, 염화나트륨 수용액으로 세척시켰다. 유기층을 마그네슘 설페이트를 통해 건조시키고 농축시킨 뒤, 실리카겔 관 크로마토그래피 (디클로로메탄:메탄올, 10:1 v/v)로 정제하여 상기 목적화합물, 메틸 2-(2-아지도에틸아미노)아세테이트를 수득 (60%)하였다.
2-azido-1-ethylamine (3.85 g, 44.8 mmol) obtained by the known method ( Org . Biomol . Chem . 2007 , 5 , 636) was dissolved in dichloromethane (100 ml), and then TEA (7.5 ml, 44.8). mmol) and methyl bromoacetate (4.1 ml, 44.8 mmol) was added slowly over 10 minutes. The reaction mixture was stirred at room temperature for 24 hours, diluted with dichloromethane and washed with aqueous sodium chloride solution. The organic layer was dried over magnesium sulfate and concentrated, and then purified by silica gel column chromatography (dichloromethane: methanol, 10: 1 v / v) to obtain the target compound, methyl 2- (2-azidoethylamino) acetate. (60%).
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ1.70 (br s, 1H), 2.80 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.40 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.43 (s, 2H), 3.71 (s, 3H)
1 H NMR (CDCl 3 , 300 MHz) δ 1.70 (br s, 1 H), 2.80 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.40 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.43 (s, 2H) , 3.71 (s, 3 H)
실시예Example 4: 4: 터트Rat -부틸-2-(2--Butyl-2- (2- 아지도에틸아미노Azidoethylamino )) 에틸카바메이트의Ethyl carbamate 제조 [화합물 7] Preparation [Compound 7]
2. 2. 다이die -- 터트Rat -- 부틸카바메이트기Butyl Carbamate Group 보호된 Protected 뉴클레오베이스의Nucleobase 합성 synthesis
실시예Example
5: 5:
다이die
--
터트Rat
--
부틸카바메이트기Butyl Carbamate Group
보호된 염기를 갖는 아세트산[화합물 8, 9, 10, 11]의 제조 Preparation of Acetic Acid [
이하 반응식에 따라 화학식 8, 9, 10, 11의 화합물을 합성하였다. 뉴클레오베이스의 터트-부틸카바메이트기(Boc)를 탈보호화 시킴과 동시에 고체상 지지체에서 목적 화합물의 탈리반응을 동시에 수행하기 위해, 본 발명자는 2개의 Boc (bis-Boc)를 보호기를 사용하였다. 또한, 엑소사이클릭 아민 작용기로 완전히 보호하면 염기의 친유성이 증가되는데 이는 유기합성에 가장 보편적인 용매에 용해가 가능하도록 하고, 고체상 지지체의 탈리반응의 조건과 같은 산성 조건에 의해 탈보호화된다. Compounds of the
3. 3. 올리고머Oligomer 제조용 For manufacturing 모노머의Monomeric 합성 synthesis
이하에서는 상기 실시예에서 제조된 화학식 4, 5, 6, 7의 모노머와 화학식 8, 9, 10, 11의 뉴클레오베이스 모노머 화합물을 하기 반응식에 따라 반응시켜 화학식 12, 13, 14, 15의 모노머를 합성하였다. Hereinafter, the monomer of
본 발명자는 2-아지도-N-에틸에탄아민 주쇄와 bis-N-Boc 보호된 뉴클레오베이스 아세트산 유닛을 여러 가지 커플링제를 이용하여 연결하고자 했다. 이러한 커플링은 2가지 방법으로 수행될 수 있었다. 퓨린(A, G) 염기는 커플링제로서 Bop(벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 를 사용하고, 피리미딘(C, T) 염기는 결합제로서 EDCI (1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드)를 사용하여 반응시켰다. The inventors have attempted to link the 2-azido-N-ethylethanamine backbone with the bis-N-Boc protected nucleobase acetic acid unit using various coupling agents. This coupling could be done in two ways. Purine (A, G) bases use Bop (benzotriazol-1-yloxytris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate as coupling agent, and pyrimidine (C, T) bases use EDCI (1) as a binder. -Ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide).
화학식 12, 13, 14, 15의 염기로는 핵산 염기가 포함되며, 예를 들어 대표적인 천연 염기 G, A, C, T, U 및 그 합성 유도체들이 포함될 수 있다.
Bases of
실시예Example
6: 화학식 12의 6: of
12a; base = G (8), 12b; base = A (9), 12c; base = C (10), 12d; base = T (11)12a; base = G (8), 12b; base = A (9), 12c; base = C (10), 12d; base = T (11)
12a, 12b: 화합물 1인 터트-부틸 2-(프롭-2-이닐아미노)에틸카바메이트 (1.3 mmol)을 디클로로메탄에 녹인 다음, 화합물 8 혹은 9 (1.0 mmol), BOP (1.1 mmol), DIPEA (3.0 mmol)를 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 상온에서 18시간 동안 교반한 뒤, 디클로로메탄으로 희석한 뒤, 0?에서 포화 중탄산나트륨으로 염기화시키고, 1M 시트릭산으로 중화시킨 다음 염화나트륨 수용액으로 세척시켰다. 수층을 디클로로메탄으로 3번 재추출하여 모아진 유기층을 마그네슘 설페이트를 통해 건조시키고 농축시킨 뒤, 실리카겔 관 크로마토그래피 (n-헥산:에틸 아세테이트, 1:4 v/v)로 정제하여 상기 목적화합물을 수득 (12a; 48%, 12b; 60%)하였다. 12a, 12b:
12c, 12d: 화합물 4인 터트-부틸 2-(프롭-2-이닐아미노)에틸카바메이트 (1.3 mmol)을 디클로로메탄에 녹인 후, 화합물 10 혹은 11 (1.0 mmol), EDCI (1.3 mmol), DMAP (0.1 mmol)를 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 상온에서 12시간 동안 교반한 뒤, 농축하고 실리카겔 관 크로마토그래피 (n-헥산:에틸아세테이트, 3:1 v/v)로 정제하여 상기 목적화합물을 수득 (12c; 62%, 12d; 65%)하였다.
12c, 12d: tert-butyl 2- (prop-2-ynylamino) ethylcarbamate (1.3 mmol),
실시예Example
7: 화학식 13의 7: of
13a; base = G (8), 13b; base = A (9), 13c; base = C (10), 13d; base = T (11)13a; base = G (8), 13b; base = A (9), 13c; base = C (10), 13d; base = T (11)
화학식 12과 같은 방법으로 합성하나 화합물 4 대신 화합물 5를 사용한다.
Synthesis was carried out in the same manner as in
실시예Example
8: 화학식 14의 8: of
14a; base = G (8), 14b; base = A (9), 14c; base = C (10), 14d; base = T (11)14a; base = G (8), 14b; base = A (9), 14c; base = C (10), 14d; base = T (11)
화학식 12과 같은 방법으로 합성하나 화합물 4 대신 화합물 6을 사용한다.
Synthesis was carried out in the same manner as in
실시예Example 9: 화학식 15의 9: of formula 15 모노머Monomer 제조 Produce
15a; base = G (8), 15b; base = A (9), 15c; base = C (10), 15d; base = T (11)15a; base = G (8), 15b; base = A (9), 15c; base = C (10), 15d; base = T (11)
화학식 12과 같은 방법으로 합성하나 화합물 4 대신 화합물 7을 사용한다.
Synthesis was performed in the same manner as in
4. 4. 용액상Solution phase 합성법을 이용한 Using synthesis 올리고머의Oligomeric 제조 Produce
도 5에는 용액상에서 본 발명에 따른 올리고머를 합성하는 화학 반응식이 순차적으로 도시되어 있다. 이하 실시예에서 화학식 번호와 화합물은 도 5를 참조한다. 화학식 16, 17, 18, 19의 염기에는 핵산 염기가 포함되며, 예를 들어 대표적인 천연 염기 G, A, C, T, U 및 그 합성 유도체들이 포함될 수 있다.
Figure 5 shows in sequence the chemical reaction for synthesizing oligomers according to the invention in solution. In the following examples, the chemical formula numbers and compounds refer to FIG. 5. Bases of formulas (16), (17), (18), (19) include nucleic acid bases, and for example, representative natural bases G, A, C, T, U and synthetic derivatives thereof.
실시예Example
10: 티민 염기로 이루어진 화학식 16의 10: of
염기부분에 티민을 포함하는 화학식 13 (1.0 mmol)을 THF에 녹인 다음, DIPEA (1.3 mmol), CuI (1.3 mmol), L-아스코르빈산 나트륨 (1.3 mmol)를 첨가하고, 염기부분에 티민을 포함하는 화학식 12 (1.2 mmol)를 첨가하였다 (click 합성법). 이 반응 혼합물을 상온에서 2시간 동안 교반한 뒤, 디클로로메탄으로 희석하고 암모니아수로 세척시켰다. 유기층은 물, 염화나트륨 수용액 순으로 세척하고, 마그네슘 설페이트를 통해 건조시키고, 유기층을 감압증발 시킨 뒤, 실리카겔 관 크로마토그래피 (디클로로메탄:메탄올, 20:1, v/v)로 정제하여 상기 목적화합물을 수득 (92%)하였다. 상기 합성법 이외에도 CuI 대신 CuBr·SMe2나 CuSO4를 사용가능하고, 용매는 THF 대신 DMF나 CH3CN도 사용할 수 있으며, 반응조건에 따라 염기나 L-아스코르빈산 나트륨을 가감할 수 있다.Formula 13 (1.0 mmol) containing thymine in the base portion was dissolved in THF, and then DIPEA (1.3 mmol), CuI (1.3 mmol), L-ascorbic acid sodium (1.3 mmol) was added, and thymine was added to the base portion. Formula 12 (1.2 mmol) was added (click synthesis). The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours, diluted with dichloromethane and washed with ammonia water. The organic layer was washed with water, aqueous sodium chloride solution, dried over magnesium sulfate, the organic layer was evaporated under reduced pressure, and purified by silica gel column chromatography (dichloromethane: methanol, 20: 1, v / v) to obtain the target compound. Obtained (92%). In addition to the above synthesis method, CuBr.SMe 2 or CuSO 4 may be used instead of CuI. The solvent may be DMF or CH 3 CN instead of THF, and base or sodium L-ascorbate may be added or subtracted depending on reaction conditions.
MS (ESI) m/z 833.3 ([M+Na]+, 100), 811.0 (12), 733.3 (10), 711.3 (16), 693.3 (3)
MS (ESI) m / z 833.3 ([M + Na] + , 100), 811.0 (12), 733.3 (10), 711.3 (16), 693.3 (3)
실시예Example
11: 티민 염기로 이루어진 화학식 17의 제조 11: Preparation of
실시예 8의 화학식 16 (1.0 mmol)을 THF에 녹인 다음, TBAF (1.2 mmol)를 첨가하여 상온에서 3시간 동안 교반하였다 (탈실릴화반응). 이 반응 혼합물을 농축시킨 다음 실리카겔 관 크로마토그래피 (에틸아세테이트:메탄올, 20:1, v/v)로 정제하여 탈실릴화 된 화합물 (말단 아세틸렌 화합물)을 수득 (99%)하였다. 얻어진 말단 아세틸렌 화합물은 실시예 8과 동일한 제조방법(click 합성법)을 이용하여 티민 염기를 갖는 화학식 13와 반응시켜 상기 목적화합물을 수득 (86%)하였다. Formula 16 (1.0 mmol) of Example 8 was dissolved in THF, and then TBAF (1.2 mmol) was added thereto, followed by stirring at room temperature for 3 hours (desilylation). The reaction mixture was concentrated and then purified by silica gel column chromatography (ethylacetate: methanol, 20: 1, v / v) to give a desilylated compound (terminal acetylene compound) (99%). The obtained terminal acetylene compound was reacted with the formula (13) having a thymine base using the same preparation method as in Example 8 (click synthesis method) to obtain the target compound (86%).
MS (ESI) m/z 1023.4 ([M+Na]+, 100), 1024.4 (7), 1023.5 (7), 1002.3 (10), 1001.3 (21)
MS (ESI) m / z 1023.4 ([M + Na] + , 100), 1024.4 (7), 1023.5 (7), 1002.3 (10), 1001.3 (21)
실시예Example
12: 티민 염기로 이루어진 화학식 18 및 화학식 19의 제조 12: Preparation of
화학식 18의 화합물은 실시예 11과 같은 방법 (화학식 17와 같은 방법)으로 합성하고, 화학식 19의 화합물은 화학식 13 대신 티민 염기를 포함하는 화학식 14를 사용하여 말단을 메틸에스터로 종결시킨다.The compound of
MS (ESI) m/z 1413.5 ([M+Na]+, 100), 1313.5 (3), 1292.5 (6), 1291.5 (8), 1123.4 (3)
MS (ESI) m / z 1413.5 ([M + Na] + , 100), 1313.5 (3), 1292.5 (6), 1291.5 (8), 1123.4 (3)
5.1 고체상 합성법을 이용한 5.1 using solid phase synthesis 올리고머의Oligomeric 제조 방법 Manufacturing method
본 발명에 따른 올리고머는 고체상 합성법(solid-phase synthesis)을 이용하여 제조할 수 있다. 메리필드에 의해 고안된 고체상 합성법을 이용하면 한 번에 한 아미노산을 연속적으로 첨가하여 거대한 펩티드 사슬을 합성할 수 있으며, 각 단계의 수율이 높고, 상당 부분 자동화가 가능하다는 장점이 있다. 최근 다양한 고체지지체 수지가 개발되면서 널리 이용되고 있다. The oligomers according to the invention can be prepared using solid-phase synthesis. Using the solid-phase synthesis method devised by Merrifield, it is possible to synthesize huge peptide chains by adding one amino acid at a time in succession, high yield of each step, and considerable automation. Recently, various solid support resins have been developed and widely used.
본 발명에서는 이미 보고된 여러 가지 조합 합성 방법과 1,3-다이폴라 고리화 첨가 반응을 본 발명의 모노머를 이용한 TNA 올리고머의 합성에 적용하였다. 앞서 서술한 바와 같이 TNA 모노머를 제조한 후, 폴리스티렌, CLEAR®, Tantagel® 같은 폴리옥시에틸렌 변형된 폴리스티렌 또는 CPG (controlled pore glass)등의 적당한 고체상 지지체에서 고체상 합성을 통하여 TNA 올리고머를 제조한다. 고체상 지지체는 이와 같은 예로서 제한되는 것은 아니며, TNA올리고머를 고정할 수 있고 잠재적으로 유리 가능한 아민, 클로라이드, 하이드록시 작용기를 포함한다. In the present invention, various combination synthesis methods and 1,3-dipolar cycloaddition reactions that have been reported have been applied to the synthesis of TNA oligomers using the monomer of the present invention. After preparing the TNA monomer as described above, the TNA oligomer is prepared through solid phase synthesis on a suitable solid phase support such as polystyrene, polyoxyethylene modified polystyrene such as CLEAR®, Tantagel® or controlled pore glass (CPG). Solid phase supports are not limited to these examples and include amine, chloride, hydroxy functional groups capable of immobilizing and potentially freeing TNA oligomers.
실시예Example 13: 고체상 지지체에 13: solid phase support TNATNA 모노머Monomer 도입 Introduction
단계 1: 에틸 3-(Step 1: Ethyl 3- ( 프로프Professional -2--2- 이닐아미노Inylamino )) 프로파노에이트의Propanoate 합성[화합물 20] Synthesis [Compound 20]
에틸 3-아미노프로파노에이트 (10.0 g, 65.1 mmol)를 THF (100 ml)에 용해 후 상온에서 TEA (22.7 ml, 163 mmol)을 가하였다. 충분히 교반 시킨 후, 프로파질 브로마이드 (9.29 g, 78.1 mmol)와 촉매량의 NaI를 첨가하여 상온에서 여섯 시간 교반하였다. 반응 종료 후 반응 혼합물에 물을 더한 후, 에틸아세테이트로 추출하고 마그네슘 설페이트로 건조한 다음 유기 용매를 감압 증발하였다. 잔류물을 실리카겔 관 크로마토그래피 (n-헥산:에틸 아세테이트, 2:1 v/v)로 정제하여 상기 목적 화합물 (4.04 g, 40%)을 얻었다.
Ethyl 3-aminopropanoate (10.0 g, 65.1 mmol) was dissolved in THF (100 ml) and then TEA (22.7 ml, 163 mmol) was added at room temperature. After sufficient stirring, propazyl bromide (9.29 g, 78.1 mmol) and a catalytic amount of NaI were added, followed by stirring at room temperature for 6 hours. After the reaction was completed, water was added to the reaction mixture, which was then extracted with ethyl acetate, dried over magnesium sulfate, and the organic solvent was evaporated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (n-hexane: ethyl acetate, 2: 1 v / v) to give the title compound (4.04 g, 40%).
단계 2: 에틸 3-(2-5-Step 2: ethyl 3- (2-5-
메틸methyl
-2,4--2,4-
다이옥소Dioxo
-3,4--3,4-
다이하이드로피리미딘Dihydropyrimidine
-1(2H)-일)-N-(-1 (2H) -yl) -N- (
프로프Professional
-2--2-
이닐Isil
))
아세타마이도Acetamaido
))
프로파노에이트의Propanoate
합성 [화합물 21] Synthesis [Compound 21]
에틸 3-(프로프-2-이닐아미노)프로파노에이트 (4.04 g, 26.0 mmol)를 실온에서 다이클로로메탄 (50 ml)에 녹인 후, EDCI (7.49 g, 39.0 mmol), 촉매량의 DMAP, 2-(5-메틸-2,6-다이옥소-3,4-다이하이드로피리미딘-1(2H)-일)아세틱에시드 (5.75 g, 31.2 mmol)를 더하고 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후, 반응 혼합물에 물을 더한 후, 디클로로메탄으로 추출하고 마그네슘 설페이트로 건조한 다음 용매를 감압 증발하였다. 잔류물을 실리카겔 관 크로마토그래피 (에틸아세테이트)로 정제하여 상기 목적화합물 (7.20 g, 90%)을 얻었다.
Ethyl 3- (prop-2-ynylamino) propanoate (4.04 g, 26.0 mmol) was dissolved in dichloromethane (50 ml) at room temperature, then EDCI (7.49 g, 39.0 mmol), catalytic amount of DMAP, 2 -(5-methyl-2,6-dioxo-3,4-dihydropyrimidin-1 (2H) -yl) acetic acid (5.75 g, 31.2 mmol) was added and stirred at rt for 4 h. After the reaction was completed, water was added to the reaction mixture, which was then extracted with dichloromethane, dried over magnesium sulfate, and the solvent was evaporated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (ethyl acetate) to obtain the title compound (7.20 g, 90%).
단계 3: 3-(2-(5-Step 3: 3- (2- (5-
메틸methyl
-2,4--2,4-
다이옥소Dioxo
-3,4--3,4-
다이하이드로피리미딘Dihydropyrimidine
-1(2H)-일)-N-(프-1 (2H) -yl) -N- (FR
로프rope
-2--2-
이닐Isil
))
아세타마이드Acetamide
))
프로파놀릭Propanolic
에시드의Acid
합성 [화합물 22] Synthesis [Compound 22]
에틸 3-(2-5-메틸-2,4-다이옥소-3,4-다이하이드로피리미딘-1(2H)-일)-N-Ethyl 3- (2-5-methyl-2,4-dioxo-3,4-dihydropyrimidin-1 (2H) -yl) -N-
(프로프-2-이닐)아세타마이도)프로파노에이트 (7.20 g, 23.4 mmol)를 THF (50ml)에 용해한 뒤, 0 oC로 냉각시켜, 1N 수산화리튬 수용액 (46.8 ml, 46.8 mmol)을 더하여 상온에서 한 시간 교반하였다. 반응 종료 후 반응 혼합물에 물을 더한 후, 2N 염산 수용액으로 산성화시켜 에틸아세테이트로 추출한다. 추출된 유기층을 마그네슘 설페이트로 건조한 다음 용매를 감압 증발시켜 상기 목적화합물 (5.88 g, 90% )을 얻었다.
(Prop-2-ynyl) acetamido) propanoate (7.20 g, 23.4 mmol) was dissolved in THF (50 ml) and then cooled to 0 ° C. in 1N aqueous lithium hydroxide solution (46.8 ml, 46.8 mmol) Addition was stirred for 1 hour at room temperature. After the completion of the reaction, water was added to the reaction mixture, which was then acidified with 2N aqueous hydrochloric acid and extracted with ethyl acetate. The extracted organic layer was dried over magnesium sulfate, and the solvent was evaporated under reduced pressure to obtain the target compound (5.88 g, 90%).
단계 4: 에틸 3-(2-5-Step 4: ethyl 3- (2-5-
메틸methyl
-2,4--2,4-
다이옥소Dioxo
-3,4--3,4-
다이하이드로피리미딘Dihydropyrimidine
-1(2H)-일)-N-(-1 (2H) -yl) -N- (
프로프Professional
-2--2-
이닐Isil
))
아세타마이도Acetamaido
))
프로파노에이트이Propanoate
도입 된Introduced
메틸벤즈하이드릴아Methylbenzhydryl
민 레진의 합성 [화합물 P-1]Synthesis of Min Resin [Compound P-1]
메틸벤즈하이드릴아민 (MBHA)형태의 레진 (200 mg, 0.16 mmol)을 상온에서 DMF (5 ml)에 넣어 10분간 흔들고, 화학식 22으로 표지 되는 3-(2-(5-메틸-2,4-다이옥소-3,4-다이하이드로피리미딘-1(2H)-일)-N-(프로프-2-이닐)아세타마이드)프로파놀릭 에시드 (141 mg, 0.48 mmol)을 첨가한 후, 같은 온도에서 10분 간 더 흔들어 혼합하였다. 이후, EDCI (92.0 mg, 0.48 mmol), HBOT (64.9 mg, 0.48 mmol), NMM (52.8 ul, 0.48 mmol)을 첨가하여 상온에서 12시간 흔들어 혼합하였다. 반응 종료 후, 상기의 반응 혼합물을 여과하여 디메틸포름아마이드, 디클로로메탄, 디클로로메탄/메탄올 및 메탄올로 반복 세척하여 연갈색 고체상의 레진 (화학식 P-1, 235.7 mg)을 얻었다.
Resin (200 mg, 0.16 mmol) in the form of methylbenzhydrylamine (MBHA) was added to DMF (5 ml) at room temperature for 10 minutes, and shaken for 3- (2- (5-methyl-2,4). -Dioxo-3,4-dihydropyrimidin-1 (2H) -yl) -N- (prop-2-ynyl) acetamide) propanolic acid (141 mg, 0.48 mmol) after addition Shake and mix for another 10 minutes at the same temperature. Then, EDCI (92.0 mg, 0.48 mmol), HBOT (64.9 mg, 0.48 mmol) and NMM (52.8 ul, 0.48 mmol) were added thereto, followed by mixing for 12 hours at room temperature. After completion of the reaction, the reaction mixture was filtered and washed repeatedly with dimethylformamide, dichloromethane, dichloromethane / methanol and methanol to give a light brown solid resin (Formula P-1, 235.7 mg).
5.2 5.2 올리고머Oligomer 서열 order NHNH 22 -- TCAGTCAG -H의 합성Synthesis of -H
본 발명에 따른 올리고머 합성은 아민 작용기를 갖는 교차 결합된 폴리스티렌 레진인 메틸벤즈하이드릴아민 레진 (MBHA, methylbenzylhydrylamine resin)에서 수동으로 합성되었다. 레진을 디메틸포름아마이드 용매 하에서 커플링 제제로 EDCI와 HOBT를 사용하여 에틸 3-(2-5-메틸-2,4-다이옥소-3,4-다이하이드로피리미딘 -1(2H)-일)-N-프로프-2-이닐) 아세타마이도)프로파노에이트와 반응시켜 티민 단량체가 도입된 레진을 합성하였다.
Oligomeric synthesis according to the invention was manually synthesized in methylbenzylhydrylamine resin (MBHA), a crosslinked polystyrene resin with amine functionality. Resin was converted to ethyl 3- (2-5-methyl-2,4-dioxo-3,4-dihydropyrimidin-1 (2H) -yl) using EDCI and HOBT as coupling agents under dimethylformamide solvent. Resin introduced with thymine monomer was synthesized by reacting with -N-prop-2-ynyl) acetamido) propanoate.
실시예Example 14: 14: TNATNA 올리고머Oligomer 서열 order NHNH 22 -- TCAGTCAG -H의 합성Synthesis of -H
단계 1: Step 1:
TNA
상기 화학식 P-1로 표시되는 레진 (235.7 mg, 0.16 mmol)을 DMF (5 ml)에 넣고 상온에서 10분간 흔들어, DIPEA (101 ul, 0.48 mmol), CuSO4 (76.6 mg, 0.48 mmol), L-아스코르빈산 나트륨 (95.1 mg, 0.48 mmol)을 첨가하여 10분간 더 흔들어 준다. 마지막으로 화학식 13으로 표시되는 모노머 (0.32 mmol)를 가한 뒤, 상온에서 24시간 동안 흔들어 혼합하였다. 반응 종료 후, 반응 혼합물을 여과하고 다이메틸포름아마이드, 물, 디클로로메탄, 디클로로메탄/메탄올 및 메탄올로 반복 세척하여 연갈색 고체인 레진 (화학식 P-2, 254.1 mg)을 얻었다.
Resin (235.7 mg, 0.16 mmol) represented by Chemical Formula P-1 was added to DMF (5 ml), and shaken at room temperature for 10 minutes, DIPEA (101 ul, 0.48 mmol), CuSO 4 (76.6 mg, 0.48 mmol), and L Add sodium ascorbate (95.1 mg, 0.48 mmol) and shake for another 10 minutes. Finally, monomer (0.32 mmol) represented by
단계 2: Step 2: TNATNA 올리고머의Oligomeric 삼중결합 Triple bond 탈보호화반응Deprotection reaction
상기 화학식 P-2로 표시되는 레진 (254.1 mg, 0.16 mmol)을 상온에서 THF (5 ml)에 놓고 흔들고 TBAF (480 ul, 0.48 mmol)을 첨가한 후, 4시간 흔들었다. 반응 종료 후, 상기 반응 혼합물을 여과하고 얻어진 여과물을 디클로로메탄 및 메탄올의 혼합용매로 반복 세척하여 연갈색 고체인 레진 (화학식 P-3, 226.8 mg)을 얻었다.
Resin (254.1 mg, 0.16 mmol) represented by Chemical Formula P-2 was shaken with THF (5 ml) at room temperature, TBAF (480 ul, 0.48 mmol) was added thereto, and then shaken for 4 hours. After the completion of the reaction, the reaction mixture was filtered and the resulting filtrate was washed repeatedly with a mixed solvent of dichloromethane and methanol to obtain a light brown solid resin (Formula P-3, 226.8 mg).
단계 3: Step 3: TNATNA 올리고머의Oligomeric 탈리반응Desorption reaction
상기 화학식 P-6로 표시되는 레진 (226.8 mg, 0.16 mmol)을 25%의 m-크레졸이 혼합된 TFA (5ml)에 넣고 상온에서 3시간 흔들어 혼합하여 핵산염기의 엑소사이클릭아민의 보호기제거와 탈레진 반응으로 동시에 수행하였다. 반응 종료 후, 상기 반응 혼합물을 여과하고 TFA로 반복 세척하여 여과액을 모아 감압 증발시켰다. 잔여액을 에틸에테르에 분산시키고 원심분리하여 상층액을 경사하여 제거하였다. 분리된 고체를 다시 한번 에틸 에테르에 분산시키고 원심분리와 상층액 제거의 과정으로 세척하고 건조하여 TNA 올리고머 (109.5 mg)를 얻었다. 얻어진 TNA 올리고머를 HPLC로 분석하고 MALDI-TOF (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight)로 분자량을 확인하였다. Resin (226.8 mg, 0.16 mmol) represented by the above formula (P-6) was added to TFA (5 ml) mixed with 25% m -cresol and shaken for 3 hours at room temperature to remove the protecting group of the exocyclic amine of the nucleic acid base. It was carried out simultaneously with a thresin reaction. After completion of the reaction, the reaction mixture was filtered and washed repeatedly with TFA to collect the filtrate and evaporated under reduced pressure. The residue was dispersed in ethyl ether and centrifuged to remove the supernatant by decantation. The separated solid was once again dispersed in ethyl ether, washed and dried by centrifugation and supernatant removal to give a TNA oligomer (109.5 mg). The obtained TNA oligomer was analyzed by HPLC and the molecular weight was confirmed by Matrix Assisted Laser Desorption Ionization-Time of Flight (MALDI-TOF).
도 9에는 화학식 23으로 표시되는 올리고머의 MALDI-TOF 그래프가 도시되어 있다.
9 illustrates a MALDI-TOF graph of the oligomer represented by
실시예Example 15: 15: TNATNA 올리고머Oligomer 서열 order NHNH 22 -- TCACTATCACTA -H의 합성Synthesis of -H
실시예 14와 동일한 방법으로 수행하되, 메틸벤즈하이드릴아민 (MBHA)형태의 레진 대신, 2-클로로트리틸클로라이드 레진(0.86 mmol/g)을 이용하여 상기의 올리고머를 합성하였다. The oligomer was synthesized in the same manner as in Example 14, using 2-chlorotritylchloride resin (0.86 mmol / g) instead of the resin of methylbenzhydrylamine (MBHA).
Claims (44)
상기 식에서,
A는 -NHR'R 또는 -NR'C(O)R로서, 여기서 R' 및 R은 각각 수소; C1-C6의 알킬; 및 t-부톡시카르보닐, 아다만틸옥시카르보닐, 벤질옥시카르보닐 중에서 선택된 아미노보호기로 이루어진 군 중에서 선택되고,
B는 각각 독립적으로 하기 화학식 중 어느 하나의 구조를 가지며;
상기 Boc는 t-부톡시카르보닐을 의미하고,
상기 Bn은 벤질을 의미하며,
C는 -CO2H, -CONR'R-, -SO3H 또는 SO2NR'R이고, 여기서 R' 및 R은 각각 수소; C1-C6의 알킬; 및 t-부톡시카르보닐, 아다만틸옥시카르보닐, 벤질옥시카르보닐 중에서 선택된 아미노 보호기로 이루어진 군 중에서 선택되고,
n은 1 내지 20의 정수이다. Oligomers represented by the following formula (1):
In this formula,
A is -NHR'R or -NR'C (O) R, wherein R 'and R are each hydrogen; C1-C6 alkyl; And aminoprotecting groups selected from t-butoxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl, benzyloxycarbonyl,
Each B independently has a structure of any one of the following formulas;
Boc means t-butoxycarbonyl,
Bn means benzyl,
C is -CO 2 H, -CONR'R-, -SO 3 H or SO 2 NR'R, wherein R 'and R are each hydrogen; C1-C6 alkyl; And an amino protecting group selected from t-butoxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl, benzyloxycarbonyl,
n is an integer of 1 to 20;
상기 B는 아데닌, 시토신, 티민, 구아닌 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 올리고머. The method of claim 1,
The B is an oligomer, characterized in that selected from adenine, cytosine, thymine, guanine.
2) 상기 화합물에서 삼중결합 말단을 탈보호시켜 디실릴화된 화합물을 얻는 단계;
3) 상기 디실릴화된 화합물에 삼중결합 말단이 보호되어 있고 아지드기를 갖는 모노머를 1,3-다이폴라 고리화 첨가반응을 통해 추가하는 단계;
4) 2)단계 내지 3)단계를 반복하여 사슬을 연장하는 단계;
5) C-말단에 해당하는 모노머를 첨가반응시켜 올리고머를 합성하는 단계를 포함하는 용액상에서 하기 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법:
상기 식에서,
A는 -NHR'R 또는 -NR'C(O)R로서, 여기서 R' 및 R은 각각 수소; C1-C6의 알킬; 및 t-부톡시카르보닐, 아다만틸옥시카르보닐, 벤질옥시카르보닐 중에서 선택된 아미노보호기로 이루어진 군 중에서 선택되고,
B는 각각 독립적으로 하기 화학식 중 어느 하나의 구조를 가지며;
상기 Boc는 t-부톡시카르보닐을 의미하고,
상기 Bn은 벤질을 의미하며,
C는 -CO2H, -CONR'R-, -SO3H 또는 SO2NR'R이고, 여기서 R' 및 R은 각각 수소; C1-C6의 알킬; 및 t-부톡시카르보닐, 아다만틸옥시카르보닐, 벤질옥시카르보닐 중에서 선택된 아미노 보호기로 이루어진 군 중에서 선택되고,
n은 1 내지 20의 정수이다.1) synthesizing a primary compound including one triazole group by a 1,3-dipolar cycloaddition reaction of a monomer corresponding to the N-terminus and a monomer having a triple bond terminal protected and having an azide group;
2) deprotecting the triple bond terminus in the compound to obtain a disilylated compound;
3) adding a monomer having a triple bond end to the disilylated compound and having an azide group through a 1,3-dipolar cyclization addition reaction;
4) extending the chain by repeating steps 2) to 3);
5) a method of preparing an oligomer of the general formula (1) in a solution comprising the step of synthesizing the oligomer by the addition of the monomer corresponding to the C-terminal:
In this formula,
A is -NHR'R or -NR'C (O) R, wherein R 'and R are each hydrogen; C1-C6 alkyl; And aminoprotecting groups selected from t-butoxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl, benzyloxycarbonyl,
Each B independently has a structure of any one of the following formulas;
Boc means t-butoxycarbonyl,
Bn means benzyl,
C is -CO 2 H, -CONR'R-, -SO 3 H or SO 2 NR'R, wherein R 'and R are each hydrogen; C1-C6 alkyl; And an amino protecting group selected from t-butoxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl, benzyloxycarbonyl,
n is an integer of 1 to 20;
상기 1)단계에서 1차 화합물은 하기 화학식(16)으로 표시되는 화합물인 것을 특징으로 하는 용액상에서 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법:
상기 Boc는 t-부톡시카르보닐을 의미하고,
상기 TIPS는 트리이소프로필실릴을 의미한다.6. The method of claim 5,
Method for preparing an oligomer of formula 1 in a solution phase, characterized in that the primary compound in step 1) is a compound represented by the following formula (16):
Boc means t-butoxycarbonyl,
The TIPS means triisopropylsilyl.
상기 삼중결합의 말단이 보호되어 있고 아지드기를 갖는 모노머는 하기 화학식 (13)의 트리이소프로필실릴(TIPS)기로 보호된 모노머인 것을 특징으로 하는 용액상에서 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법:
상기 TIPS는 트리이소프로필실릴을 의미한다.6. The method of claim 5,
Wherein the monomer of the triple bond is protected and the azide group is a monomer protected by a triisopropylsilyl (TIPS) group of formula (13):
The TIPS means triisopropylsilyl.
상기 1)단계 및 3)단계의 1,3-다이폴라 고리화 첨가반응(Click chemistry)은 용매하에서 촉매, 유기 염기 및 환원제를 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 용액상에서 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.6. The method of claim 5,
1,3-dipolar cycloaddition reaction (Click chemistry) of steps 1) and 3) is carried out using a catalyst, an organic base and a reducing agent in a solvent to prepare an oligomer of formula 1 in a solution Way.
상기 용매는 아세토니트릴, 1,4-다이옥산, 디메틸포름아마이드, 디클로로메탄, 디클로로에탄, DMSO, 테트라하이드로퓨란, 톨루엔, 헥사메틸포스포아미드, 부틸 알코올, 이소프로필 알콜, 에틸 알콜, 물 또는 이들의 혼합물이며,
상기 DMSO는 디메틸설폭사이드를 의미하는 것을 특징으로 하는 용액상에서 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.9. The method of claim 8,
The solvent is acetonitrile, 1,4-dioxane, dimethylformamide, dichloromethane, dichloroethane, DMSO, tetrahydrofuran, toluene, hexamethylphosphoramide, butyl alcohol, isopropyl alcohol, ethyl alcohol, water or their Mixture,
The DMSO is a method for preparing an oligomer of formula 1 in a solution characterized in that dimethyl sulfoxide means.
상기 용매는 디메틸포름아마이드 또는 테트라하이드로퓨란인 것을 특징으로 하는 용액상에서 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.9. The method of claim 8,
Wherein said solvent is dimethylformamide or tetrahydrofuran.
상기 촉매는 Cu(O), Cu(Ⅰ)Br, Cu(Ⅰ)Cl, Cu(Ⅰ)I, Cu(Ⅱ)Br, CuSO4, Cu2O, Cu(OAc)2, CuBF4, [Cu(CH3CN)4]PF6, CuBr·SMe2, Cu(CH3CN)4OTf 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용액상에서 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.9. The method of claim 8,
The catalyst is Cu (O), Cu (I) Br, Cu (I) Cl, Cu (I) I, Cu (II) Br, CuSO 4 , Cu 2 O, Cu (OAc) 2 , CuBF 4 , [Cu (CH 3 CN) 4 ] PF 6 , CuBr.SMe 2 , Cu (CH 3 CN) 4 A method for producing an oligomer of formula (1) in a solution characterized in that it is selected from OTf.
상기 촉매는 Cu(Ⅰ)I 또는 CuSO4 또는 CuBr·SMe2인 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용액상에서 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.9. The method of claim 8,
Wherein the catalyst is selected from Cu (I) I or CuSO 4 or CuBr · SMe 2 phosphorus.
상기 유기 염기는 1,8-디아자바이씨클로[5,4,0]운테크-7-온(DBU), N,N-다이아이소프로필에틸아민(DIPEA), 트리에틸아민, 탄산칼륨, 탄산나트륨 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용액상에서 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.9. The method of claim 8,
The organic base is in 1,8-diazabicyclo [5,4,0] untech-7-one (DBU), N, N-diisopropylethylamine (DIPEA), triethylamine, potassium carbonate, sodium carbonate A process for preparing the oligomer of formula 1 in a solution phase characterized in that it is selected.
상기 유기 염기는 N,N-다이아이소프로필에틸아민인 것을 특징으로 하는 용액상에서 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.9. The method of claim 8,
Wherein said organic base is N, N-diisopropylethylamine.
상기 환원제는 L-아스코르빈산 나트륨인 것을 특징으로 하는 용액상에서 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.9. The method of claim 8,
The reducing agent is a method for producing the oligomer of formula 1 in the solution characterized in that the sodium ascorbate.
상기 2)단계의 삼중결합 말단을 탈보호하는 단계는 용매의 존재하에서 유기 촉매를 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 용액상에서 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.9. The method of claim 8,
Deprotecting the triple bond end of step 2) is carried out using an organic catalyst in the presence of a solvent.
상기 유기 촉매는 플루오르화 칼륨, 질산은, Bu4NF, 탄산 칼륨 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 용액상에서 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.17. The method of claim 16,
Wherein the organic catalyst is selected from potassium fluoride, silver nitrate, Bu 4 NF and potassium carbonate.
반응 온도는 실온 내지 용매의 비점 범위인 것을 특징으로 하는 용액상에서 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.6. The method of claim 5,
The reaction temperature ranges from room temperature to the boiling point of the solvent.
2) 삼중결합의 말단이 보호되어 있고 아지드기를 갖는 모노머를 1,3-다이폴라 고리화 첨가반응(Click chemistry)으로 상기 고체지지체에 도입하는 단계;
3) 상기 삼중결합 말단을 탈보호시키는 단계;
4) 상기 2)단계 내지 3)단계를 반복하여 사슬을 연장하는 단계;
5) 상기 올리고머를 고체지치체에서 유리하는 단계를 포함하는 고체상 합성법을 이용하여 하기 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법:
상기 식에서,
A는 -NHR'R 또는 -NR'C(O)R로서, 여기서 R' 및 R은 각각 수소; C1-C6의 알킬; 및 t-부톡시카르보닐, 아다만틸옥시카르보닐, 벤질옥시카르보닐 중에서 선택된 아미노보호기로 이루어진 군 중에서 선택되고,
B는 각각 독립적으로 하기 화학식 중 어느 하나의 구조를 가지며;
상기 Boc는 t-부톡시카르보닐을 의미하고,
상기 Bn은 벤질을 의미하며,
C는 -CO2H, -CONR'R-, -SO3H 또는 SO2NR'R이고, 여기서 R' 및 R은 각각 수소; C1-C6의 알킬; 및 t-부톡시카르보닐, 아다만틸옥시카르보닐, 벤질옥시카르보닐 중에서 선택된 아미노 보호기로 이루어진 군 중에서 선택되고,
n은 1 내지 20의 정수이다. 1) introducing a triple bond to the solid support;
2) introducing a monomer having a protected end of a triple bond and having an azide group to the solid support by 1,3-dipolar cycloaddition reaction (Click chemistry);
3) deprotecting said triple bond ends;
4) extending the chain by repeating steps 2) to 3);
5) a method of preparing an oligomer of formula 1 using a solid-phase synthesis method comprising the step of liberating the oligomer in a solid matrix:
In this formula,
A is -NHR'R or -NR'C (O) R, wherein R 'and R are each hydrogen; C1-C6 alkyl; And aminoprotecting groups selected from t-butoxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl, benzyloxycarbonyl,
Each B independently has a structure of any one of the following formulas;
Boc means t-butoxycarbonyl,
Bn means benzyl,
C is -CO 2 H, -CONR'R-, -SO 3 H or SO 2 NR'R, wherein R 'and R are each hydrogen; C1-C6 alkyl; And an amino protecting group selected from t-butoxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl, benzyloxycarbonyl,
n is an integer of 1 to 20;
상기 2)단계와 3)단계 사이 또는 3)단계와 4) 단계 사이에 세척 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.20. The method of claim 19,
Method of preparing an oligomer of formula 1 using a solid-phase synthesis method characterized in that it further comprises a washing step between step 2) and step 3) or between step 3) and step 4).
상기 고체지지체는 아민, 클로라이드, 하이드록시 작용기를 포함하는 고분자 중합체인 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.20. The method of claim 19,
The solid support is a method for producing an oligomer of the formula (1) using a solid phase synthesis method characterized in that the polymer polymer containing amine, chloride, hydroxy functional groups.
상기 고체지지체는 폴리스티렌, 폴리옥시에틸렌, 폴리스티렌-디비닐벤젠, 메타아크릴산-디메틸아크릴아미드 및 히드록실 메타아크릴산으로 이루어진 군에서 선택된 고분자 중합체인 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.22. The method of claim 21,
The solid support is a polystyrene, polyoxyethylene, polystyrene-divinylbenzene, methacrylic acid-dimethylacrylamide and hydroxyl methacrylic acid to prepare an oligomer of the formula (1) using a solid-phase synthesis method characterized in that the polymer selected from the group consisting of How to.
상기 고체지지체는 하기 화학식의 메틸벤즈하이드릴아민(MBHA, methylbenzylhydrylamine) 수지인 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법:
상기 P는 폴리스티렌, 폴리옥시에틸렌, 폴리스티렌-디비닐벤젠, 메타아크릴산-디메틸아크릴아미드 및 히드록실 메타아크릴산으로 이루어진 군에서 선택된다.The method of claim 22,
The solid support is a method for producing an oligomer of formula 1 by using a solid phase synthesis method characterized in that the methylbenzhydrylamine (MBHA, methylbenzylhydrylamine) resin of the formula:
P is selected from the group consisting of polystyrene, polyoxyethylene, polystyrene-divinylbenzene, methacrylic acid-dimethylacrylamide and hydroxyl methacrylic acid.
상기 1)단계는 고체지지체에 하기 화학식 (22)로 표시되는 화합물을 반응시켜 수행되는 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법:
Step 1) is a method for preparing an oligomer of formula 1 by using a solid phase synthesis method characterized in that the solid support is carried out by reacting a compound represented by the formula (22):
상기 삼중결합의 말단이 보호되어 있고 아지드기를 갖는 모노머는 하기 화학식의 TIPS 보호된 모노머인 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법:
상기 TIPS는 트리이소프로필실릴을 의미한다.20. The method of claim 19,
Method for preparing an oligomer of the formula (1) using a solid-phase synthesis method characterized in that the monomer of the triple bond is protected terminal having an azide group of the following formula:
The TIPS means triisopropylsilyl.
상기 2)단계의 1,3-다이폴라 고리화 첨가반응(Click chemistry)은 용매하에서, 촉매, 유기 염기 및 환원제를 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.20. The method of claim 19,
1,3-dipolar cycloaddition reaction (Click chemistry) of step 2) is prepared in the solid phase synthesis method using a solid phase synthesis method characterized in that carried out using a catalyst, an organic base and a reducing agent in a solvent Way.
상기 용매는 아세토니트릴, 1,4-다이옥산, 디메틸포름아마이드, 디클로로메탄, 디클로로에탄, DMSO, 테트라하이드로퓨란, 톨루엔, 헥사메틸포스포아미드, 부틸 알코올, 이소프로필 알콜, 에틸 알콜, 물 또는 이들의 혼합물이며,
상기 DMSO는 디메틸설폭사이드를 의미하는 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.The method of claim 26,
The solvent is acetonitrile, 1,4-dioxane, dimethylformamide, dichloromethane, dichloroethane, DMSO, tetrahydrofuran, toluene, hexamethylphosphoramide, butyl alcohol, isopropyl alcohol, ethyl alcohol, water or their Mixture,
The DMSO is a method for preparing an oligomer of formula 1 by using a solid-phase synthesis method characterized in that dimethyl sulfoxide means.
상기 용매는 디메틸포름아마이드 또는 테트라 하이드로퓨란인 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.The method of claim 26,
The solvent is a method for preparing an oligomer of formula 1 using a solid-phase synthesis method characterized in that dimethylformamide or tetra hydrofuran.
상기 촉매는 Cu(O), Cu(Ⅰ)Br, Cu(Ⅰ)Cl, Cu(Ⅰ)I, Cu(Ⅱ)Br, CuSO4, Cu2O, Cu(OAc)2, CuBF4, [Cu(CH3CN)4]PF6, CuBr·SMe2, Cu(CH3CN)4OTf 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.The method of claim 26,
The catalyst is Cu (O), Cu (I) Br, Cu (I) Cl, Cu (I) I, Cu (II) Br, CuSO 4 , Cu 2 O, Cu (OAc) 2 , CuBF 4 , [Cu (CH 3 CN) 4 ] PF 6 , CuBr.SMe 2 , Cu (CH 3 CN) 4 A method for producing an oligomer of formula 1 by using a solid-phase synthesis method characterized in that it is selected from OTf.
상기 촉매는 Cu(Ⅰ)I 또는 CuSO4 또는 CuBr·SMe2인 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.30. The method of claim 29,
The catalyst is a method for producing an oligomer of formula (I) using a solid-phase synthesis method characterized in that selected from Cu (I) I or CuSO 4 or CuBr.SMe 2 phosphorus.
상기 유기 염기는 1,8-디아자바이씨클로[5,4,0]운테크-7-온(DBU), N,N-다이아이소프로필에틸아민(DIPEA), 트리에틸아민, 탄산칼륨, 탄산나트륨 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.The method of claim 26,
The organic base is in 1,8-diazabicyclo [5,4,0] untech-7-one (DBU), N, N-diisopropylethylamine (DIPEA), triethylamine, potassium carbonate, sodium carbonate A method for preparing an oligomer of formula (I) using a solid phase synthesis method characterized in that the selected.
상기 유기 염기는 N,N-다이아이소프로필에틸아민인 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.32. The method of claim 31,
Wherein said organic base is N, N-diisopropylethylamine, to prepare an oligomer of formula (I) using a solid phase synthesis method.
상기 환원제는 L-아스코르빈산 나트륨인 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.The method of claim 26,
The reducing agent is a method for preparing an oligomer of formula 1 by using a solid-phase synthesis method, characterized in that the sodium ascorbate.
상기 3)단계의 삼중결합 말단을 탈보호하는 단계는 용매의 존재하에서 유기 촉매를 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.20. The method of claim 19,
Deprotecting the triple bond end of step 3) is a method of preparing an oligomer of formula 1 by using a solid-phase synthesis method, characterized in that carried out using an organic catalyst in the presence of a solvent.
상기 유기 촉매는 플루오르화 칼륨, 질산은, Bu4NF, 탄산 칼륨 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.35. The method of claim 34,
The organic catalyst is a method of preparing an oligomer of formula (I) using a solid-phase synthesis method characterized in that the potassium fluoride, silver nitrate, Bu 4 NF, potassium carbonate.
상기 5)단계는 양이온 포착제로 m-크레졸을 포함하는 트리플루오로아세트산(TFA)을 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.20. The method of claim 19,
Step 5) is a method for preparing an oligomer of the formula (1) using a solid-phase synthesis method characterized in that it is carried out using trifluoroacetic acid (TFA) containing m -cresol as the cation trapping agent.
반응 온도는 실온 내지 용매의 비점 범위인 것을 특징으로 하는 고체상 합성법을 이용하여 화학식 1의 올리고머를 제조하는 방법.20. The method of claim 19,
The reaction temperature is a method for producing the oligomer of formula (1) using a solid phase synthesis method characterized in that the boiling point of the room temperature to the solvent.
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