KR101346552B1 - 헤파티티스 ｃ 바이러스가 감염된 간세포의 검출 방법 및 키트 - Google Patents

헤파티티스 ｃ 바이러스가 감염된 간세포의 검출 방법 및 키트 Download PDF

Info

Publication number
KR101346552B1
KR101346552B1 KR1020120047596A KR20120047596A KR101346552B1 KR 101346552 B1 KR101346552 B1 KR 101346552B1 KR 1020120047596 A KR1020120047596 A KR 1020120047596A KR 20120047596 A KR20120047596 A KR 20120047596A KR 101346552 B1 KR101346552 B1 KR 101346552B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
hepatitis
virus
dimethyl
ethyl
hepatocytes
Prior art date
Application number
KR1020120047596A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20130124013A (ko
Inventor
이준석
유영화
한원석
윤창노
이진각
Original Assignee
한국과학기술연구원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한국과학기술연구원 filed Critical 한국과학기술연구원
Priority to KR1020120047596A priority Critical patent/KR101346552B1/ko
Publication of KR20130124013A publication Critical patent/KR20130124013A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101346552B1 publication Critical patent/KR101346552B1/ko

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
    • G01N33/5767—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis non-A, non-B hepatitis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/18—Togaviridae; Flaviviridae
    • G01N2333/183—Flaviviridae, e.g. pestivirus, mucosal disease virus, bovine viral diarrhoea virus, classical swine fever virus (hog cholera virus) or border disease virus
    • G01N2333/186—Hepatitis C; Hepatitis NANB

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본 발명은 형광 화합물을 이용하여 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포와 정상세포를 구별하는 방법에 관한 것이다. 일 구체예에 따르면, 본 발명의 방법은 (E)-2-((2E,4E)-5-(1-에틸-3,3-디메틸-5-술포-3H-인돌-1-이움-2-일)펜타-2,4-디엔-1-일이덴)-3,3-디메틸-1-(8-옥소-8-((2-(비닐술포닐)에틸)아미노)옥틸)인돌린-5-술포네이트에 결합하는 단백질 패턴을 비교하여 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포와 정상세포를 구별하므로, 쉽고 빠르며 정확한 동정 결과를 제공할 수 있다.

Description

헤파티티스 Ｃ 바이러스가 감염된 간세포의 검출 방법 및 키트{Method and kit for detecting HCV infected liver cell}
본 발명은 형광 화합물을 이용하여 정상 간세포 및 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포를 구별하는 방법에 관한 것이다.
세포 동정은 감염성 질병 진단의 가장 중요한 과정 중의 하나이다. 기존의 세포 동정 방법은 많은 검사 종목과 특수 배지나 시약을 필요하고, 상용화된 동정 키트는 간단하고 비교적 빠른 결과를 얻을 수 있으나, 키트의 가격이 비싸며 제품에 따라서는 정확한 동정이 이루어지지 않을 수도 있다.
C형 간염 치료제 개발등에 사용되는 모델시스템으로 C형 간염 바이러스의 Replicon 시스템이 알려져 있다. 각 세포주 상태에 따라 단백체 중 형광 프로브와 공유 결합을 이룰 수 있는 단백질 군의 차이를 이용하여 감염된 세포주와 비교군 세포주를 구별하는 방법에 대해서는 아직까지 알려진 바가 없다.
따라서, 본 발명에서는 형광 화합물을 사용하여 간단하고, 빠르며, 정확하게 정상 간세포 및 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포를 서로 구별하는 방법을 제공하고자 한다.
일 구체예는 형광 화합물을 이용하여 정상 간세포 및 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포를 서로 구별하는 방법에 관한 것이다.
다른 구체예는 형광 화합물을 포함하는 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포 검출용 키트에 관한 것이다.
일 양상은 정상 간세포 및 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포의 세포 추출물을 수득하는 단계;
상기 세포 추출물과 (E)-2-((2E,4E)-5-(1-에틸-3,3-디메틸-5-술포-3H-인돌-1-이움-2-일)펜타-2,4-디엔-1-일이덴)-3,3-디메틸-1-(8-옥소-8-((2-(비닐술포닐)에틸)아미노)옥틸)인돌린-5-술포네이트를 접촉시키는 단계; 및
상기 접촉된 결과물을 전기영동하여 상기 세포 추출물의 단백질 패턴을 확인하는 단계를 포함하는 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포의 검출 방법을 제공한다.
본 발명자들은 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포와 정상세포를 서로 쉽게 구별할 수 있는 방법을 연구한 결과, 특정 형광 화합물이 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포와 정상세포에서 서로 다른 단백질들에 결합하여 서로 다른 단팩질 패턴을 나타낸다는 사실을 확인함으로서 본 발명을 완성하였다.
상기 방법은 먼저, 정상 간세포 및 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포의 세포 추출물을 수득하는 단계를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 용어, "세포 추출물"은 구별하고자 하는 대상인 정상 간세포 및 헤파티티스 C 바이러스 내에 포함되어 있는 단백체 전체 집단을 의미하는 것으로 해석될 수 있다. 세포 추출물은 당업계에 널리 알려진 방법에 따라, 세포를 용해할 수 있는 키트를 이용하거나, 초음파를 이용하여 세포를 분쇄하고 원심분리를 통해 세포 내 단백체만 얻는 방법 등을 통해 수득할 수 있다.
본 발명은 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포 또는 정상세포 내에 포함되어 있는 일부 단백질들과 특이적으로 결합하는 형광 화합물인 (E)-2-((2E,4E)-5-(1-에틸-3,3-디메틸-5-술포-3H-인돌-1-이움-2-일)펜타-2,4-디엔-1-일이덴)-3,3-디메틸-1-(8-옥소-8-((2-(비닐술포닐)에틸)아미노)옥틸)인돌린-5-술포네이트를 이용하는 것으로, 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포와 정상세포를 서로 구별할 수 있다. 일 구체예에 따르면, 상기 간세포는 Huh 세포일 수 있으며, 예를 들어, 상기 세포 추출물은 Huh7.5 세포로부터 수득할 수 있다.
헤파티티스 C 바이러스(Hepatitis C Virus, HCV)는 플라비비리데(flaviviridae) 패밀리의 헤파시바이러스(hepacivirus)속에 속하며, 외피를 가진 외가닥의 RNA 바이러스이다. HCV는 간세포를 감염시켜 염증을 유발시키고, 간 손상을 초래하는 병원체로 알려져 있다. 상기 헤파티티스 C 바이러스는 6가지의 유전자형으로 구분되며, 예를 들어, HCV genotype 1, HCV genotype 2, HCV genotype 3, HCV genotype 4, HCV genotype 5 및 HCV genotype 6 타입일 수 있다. HCV는 예를 들어, HCV 2a, HCV 2b 및 HCV 2c와 같이 더욱 다양한 아종으로 구분될 수 있다. 일 구체예에 따르면, 상기 헤파티티스 C 바이러스는 HCV genotype 2일 수 있으며, 가장 바람직하게는 HCV 2a일 수 있다.
다음으로, 상기 세포 추출물과 (E)-2-((2E,4E)-5-(1-에틸-3,3-디메틸-5-술포-3H-인돌-1-이움-2-일)펜타-2,4-디엔-1-일이덴)-3,3-디메틸-1-(8-옥소-8-((2-(비닐술포닐)에틸)아미노)옥틸)인돌린-5-술포네이트를 접촉시키는 단계를 거치게 된다.
본 발명에서 사용되는 형광 화합물인 (E)-2-((2E,4E)-5-(1-에틸-3,3-디메틸-5-술포-3H-인돌-1-이움-2-일)펜타-2,4-디엔-1-일이덴)-3,3-디메틸-1-(8-옥소-8-((2-(비닐술포닐)에틸)아미노)옥틸)인돌린-5-술포네이트((E)-2-((2E,4E)-5-(1-ethyl-3,3-dimethyl-5-sulfo-3H-indol-1-ium-2-yl)penta-2,4-dien-1-ylidene)-3,3-dimethyl-1-(8-oxo-8-((2-(vinylsulfonyl)ethyl)amino)octyl)indoline-5-sulfonate)는 하기 화학식 I의 화학식으로 나타낼 수 있다.
화학식 I
Figure 112012035882980-pat00001
마지막으로, 상기 방법은 상기 접촉된 결과물을 전기영동하여 상기 세포 추출물의 단백질 패턴을 확인하는 단계를 거치게 된다.
상기 형광 화합물은 상기 접촉된 결과물을 전기영동한 후, 상기 형광 화합물을 검출할 수 있는 스캐너를 이용하여 검출할 수 있으며, 상기 형광 화합물이 결합된 단백질 또는 상기 단백질의 패턴을 서로 비교함으로써, 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포와 정상세포를 서로 구별할 수 있다.
다른 양상은 (E)-2-((2E,4E)-5-(1-에틸-3,3-디메틸-5-술포-3H-인돌-1-이움-2-일)펜타-2,4-디엔-1-일이덴)-3,3-디메틸-1-(8-옥소-8-((2-(비닐술포닐)에틸)아미노)옥틸)인돌린-5-술포네이트를 포함하는 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포 검출용 키트를 제공한다.
일 구체예에 따른 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포 검출용 키트는 (E)-2-((2E,4E)-5-(1-에틸-3,3-디메틸-5-술포-3H-인돌-1-이움-2-일)펜타-2,4-디엔-1-일이덴)-3,3-디메틸-1-(8-옥소-8-((2-(비닐술포닐)에틸)아미노)옥틸)인돌린-5-술포네이트 및 이를 안정화시킬 수 있는 버퍼 등을 포함할 수 있으며, 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포와 정상세포를 서로 구별하는 용도로서 사용될 수 있다. 가장 바람직하게는, 상기 키트는 HCV genotype 2에 감염된 간세포, 가장 바람직하게는 HCV 2a에 감염됨 간세포를 구별하기 위한 것일 수 있다.
일 구체예에 따르면, 본 발명의 방법은 (E)-2-((2E,4E)-5-(1-에틸-3,3-디메틸-5-술포-3H-인돌-1-이움-2-일)펜타-2,4-디엔-1-일이덴)-3,3-디메틸-1-(8-옥소-8-((2-(비닐술포닐)에틸)아미노)옥틸)인돌린-5-술포네이트에 결합하는 단백질 패턴을 비교하여 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포와 정상세포를 구별하므로, 쉽고 빠르며 정확한 동정 결과를 제공할 수 있다.
도 1은 일 구체예에 따른 방법에 의해 Huh7.5 세포주와 HCV 2a 감염 Huh7.5 세포주의 단백질 패턴을 비교한 결과이다.
이하 하나 이상의 구체예를 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실험 방법 및 실험 결과
(1) 세포주의 배양
Huh7.5 세포주 (Cat#: APC49, Apath, inc.)와 HCV 2a 감염 Huh7.5 세포주 (Cat#: APC140, Apath inc.)의 단백체를 준비하기 위하여, 상기 세포주를 Apath inc.로부터 구매하였다. 세포는 Apath에서 제공하는 프로토콜을 따라 37℃, 5% CO2 조건으로 인큐베이터 내에서 배양하였다. Huh7.5 세포의 배양을 위해서 10% Fetal Bovine Serum(FBS), 0.01 mM non-essential amino acids(NEAA), 1X Penicilin/Streptomycin을 포함한 Dulbecco Modified Eagle Medium(DMEM) 배양액을 사용하였으며, HCV 2a 감염 Huh7.5 세포주는 10% FBS, 1X NEAA, 1 g/L G418, 1X Penicilin/Streptomycin을 포함한 DMEM 배양액을 사용하였다.
(2) 형광 화합물 처리 및 SDS-PAGE 이미지 분석
상기 각각의 세포를 24시간 동안 배양한 후, 상기 세포가 배양액에 담긴 상태에서 DMSO 1%에 포함된 20 uM (E)-2-((2E,4E)-5-(1-에틸-3,3-디메틸-5-술포-3H-인돌-1-이움-2-일)펜타-2,4-디엔-1-일이덴)-3,3-디메틸-1-(8-옥소-8-((2-(비닐술포닐)에틸)아미노)옥틸)인돌린-5-술포네이트를 처리한 다음, 37℃, 5% CO2 조건의 인큐베이터에서 1시간 동안 다시 배양하였다. 이후. 1X 트립신/EDTA를 처리한 다음, 원심분리 하여 상층액을 버리고, PBS 용액(pH 7.4)으로 2번 씻어 준 후, SigmaAldrich 사의 CellLyticTM M kit(Cat #: C2978)를 이용하여 단백질 혼합물 용액을 얻었다. 상기 단백질 혼합물 용액에 Laemmli 샘플 버퍼를 넣고, 95℃에서 2분 동안 가열한 다음, 15% SDS가 포함된 폴리아크릴아미드 겔에 로딩하여 전기영동(120V 20분, 이어서 180V 60분)한 후, 상기 형광 화합물로 표지된 단백질의 패턴을 형광 SDS-PAGE Scanner(TyphoonTM 9400, GE Health Science)로 확인하였다. 이때, (E)-2-((2E,4E)-5-(1-에틸-3,3-디메틸-5-술포-3H-인돌-1-이움-2-일)펜타-2,4-디엔-1-일이덴)-3,3-디메틸-1-(8-옥소-8-((2-(비닐술포닐)에틸)아미노)옥틸)인돌린-5-술포네이트의 표지 단백질 이미지는 TyphoonTM 9400 기기의 ex: 488 nm, em: 526-SP 조건에서 얻었다. 상기 각 세포주의 구별은 단백질 분자량(molecular weight) 축에 대한 패턴을 이용하였다.
도 1에서 보는 바와 같이, SDS-PAGE 결과로부터 Huh7.5 세포와 HCV 2a 감염 Huh7.5 세포주에서 오른쪽 Coomassie 염색에서는 단백체의 정량적 차이가 분명하지 않으나, 왼쪽 형광 영상에서는 확연한 형광 표지 패턴의 차이가 나타남을 확인할 수 있었다.

Claims (5)

  1. 정상 간세포 및 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포의 세포 추출물을 수득하는 단계;
    상기 세포 추출물과 (E)-2-((2E,4E)-5-(1-에틸-3,3-디메틸-5-술포-3H-인돌-1-이움-2-일)펜타-2,4-디엔-1-일이덴)-3,3-디메틸-1-(8-옥소-8-((2-(비닐술포닐)에틸)아미노)옥틸)인돌린-5-술포네이트를 접촉시키는 단계; 및
    상기 접촉된 결과물을 전기영동하여 상기 세포 추출물의 단백질 패턴을 확인하는 단계를 포함하는 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포의 검출 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 간세포는 Huh7.5 세포인 것인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 헤파티티스 C 바이러스는 HCV genotype 2인 것인 방법.
  4. (E)-2-((2E,4E)-5-(1-에틸-3,3-디메틸-5-술포-3H-인돌-1-이움-2-일)펜타-2,4-디엔-1-일이덴)-3,3-디메틸-1-(8-옥소-8-((2-(비닐술포닐)에틸)아미노)옥틸)인돌린-5-술포네이트를 포함하는 헤파티티스 C 바이러스가 감염된 간세포 검출용 키트.
  5. 제4항에 있어서, 상기 헤파티티스 C 바이러스는 HCV genotype 2인 것인 키트.
KR1020120047596A 2012-05-04 2012-05-04 헤파티티스 ｃ 바이러스가 감염된 간세포의 검출 방법 및 키트 KR101346552B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120047596A KR101346552B1 (ko) 2012-05-04 2012-05-04 헤파티티스 ｃ 바이러스가 감염된 간세포의 검출 방법 및 키트

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120047596A KR101346552B1 (ko) 2012-05-04 2012-05-04 헤파티티스 ｃ 바이러스가 감염된 간세포의 검출 방법 및 키트

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20130124013A KR20130124013A (ko) 2013-11-13
KR101346552B1 true KR101346552B1 (ko) 2013-12-30

Family

ID=49853119

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020120047596A KR101346552B1 (ko) 2012-05-04 2012-05-04 헤파티티스 ｃ 바이러스가 감염된 간세포의 검출 방법 및 키트

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101346552B1 (ko)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20120020067A (ko) * 2010-08-27 2012-03-07 삼성테크윈 주식회사 헤파티티스 ｃ 바이러스 검출용 키트 및 이를 이용한 헤파티티스 ｃ 바이러스의 검출 방법

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20120020067A (ko) * 2010-08-27 2012-03-07 삼성테크윈 주식회사 헤파티티스 ｃ 바이러스 검출용 키트 및 이를 이용한 헤파티티스 ｃ 바이러스의 검출 방법

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Gardner, Jason P., et al. PNAS, 100권, 8호, 4498-4503페이지 (2003) *
Lindenbach, Brett D. et al., Nature, 436권, 7053호, 933-938페이지(2005) *
조효손, 미생물학회지, 47권, 4호, 342-347페이지(2011) *

Also Published As

Publication number Publication date
KR20130124013A (ko) 2013-11-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Alfonso et al. Identification of cellular proteins modified in response to African swine fever virus infection by proteomics
Liu et al. SUMO modification stabilizes enterovirus 71 polymerase 3D to facilitate viral replication
Sridhar et al. A systematic approach to novel virus discovery in emerging infectious disease outbreaks
Perdikaris et al. Development of a portable, high throughput biosensor system for rapid plant virus detection
JP2015514213A5 (ko)
Lean et al. Development of immunohistochemistry and in situ hybridisation for the detection of SARS-CoV and SARS-CoV-2 in formalin-fixed paraffin-embedded specimens
Deng et al. A highly sensitive immuno-PCR assay for detection of H5N1 avian influenza virus
CN104004763B (zh) 一种亲和丙型病毒性肝炎核心蛋白的核酸适体及其应用
Brussel et al. Use of a new RNA next generation sequencing approach for the specific detection of virus infection in cells
Lothert et al. Quantification methods for viruses and virus-like particles applied in biopharmaceutical production processes
Moennig et al. Classical swine fever
Zhang et al. A novel ViewRNA in situ hybridization method for the detection of the dynamic distribution of Classical Swine Fever Virus RNA in PK15 cells
Yin et al. Isolation and characterization of a novel chicken astrovirus in China
Tercero et al. Characterization of the molecular interactions that govern the packaging of viral RNA segments into rift valley fever phlebovirus particles
KR101346552B1 (ko) 헤파티티스 ｃ 바이러스가 감염된 간세포의 검출 방법 및 키트
KR101345797B1 (ko) 형광 화합물을 활용한 ｈｃｖ 감염 세포 확인 방법
Pu et al. Evaluate severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 infectivity by pseudoviral particles
Henkel et al. Identification of fibrosis-relevant proteins using DIGE (difference in gel electrophoresis) in different models of hepatic fibrosis
CN105132583A (zh) 一种以流感病毒为载体的hcv核酸检测用质控品及其制备方法
Morioka et al. Development and evaluation of silver amplification immunochromatography kit for foot-and-mouth disease virus antigen detection
CN105861757A (zh) H9亚型禽流感病毒和h6亚型禽流感病毒的二重rt-pcr试剂盒及其应用
US10208291B2 (en) Method for generating high-titer hepatitis E virus stocks and titration assay for hepatitis E virus
Zhou et al. Establishment and evaluation of recombinant expression of HCV transmembrane protein (p7) and detection of Anti-p7 antibody in serum of HCV-infected patients by chemiluminescence
KR101343356B1 (ko) ＭｅｔＮ 마커를 활용한 엔테로박터 및 에스케리키아의 구별 방법
KR101343357B1 (ko) ｙｏｇＡ 유전자로부터 발현되는 디히드로게나아제를 활용한 엔테로박터 클로아세 및 바실러스 서브틸리스의 구별 방법

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170113

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20171214

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20181203

Year of fee payment: 6

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20191203

Year of fee payment: 7