KR101326164B1

KR101326164B1 - 항균성 피부 외용제 조성물

Info

Publication number: KR101326164B1
Application number: KR1020110007375A
Authority: KR
Inventors: 정용환; 김지영; 김동삼; 김영주; 함영민; 오대주
Original assignee: 재단법인 제주테크노파크
Priority date: 2011-01-25
Filing date: 2011-01-25
Publication date: 2013-11-06
Also published as: KR20120086123A

Abstract

본 발명은 스타필로코쿠스 아우레우스, 스타필로코쿠스 에피더미디스 및/또는 프로피오니박테리움 아크네에 대해 항균 활성을 나타내는 참가시뼈대그물말(Dictyopteris pacifica Yendo) 추출물 및/또는 그 분획물을 이용한 항균성 피부 외용제 조성물을 개시한다.

Description

항균성 피부 외용제 조성물{External Composition for Skin Having Antibacterial Activities}

본 발명은 항균성 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 구체적으로 본 발명은 참가시뼈대그물말(Dictyopteris pacifica Yendo) 추출물 및/또는 그 분획물을 이용한 항균성 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

인간의 피부는 주위환경과 직접 접촉하는 기관으로서 각종 피부 질환에 관여하는 세균, 곰팡이 등의 감염이 쉽게 일어난다.

예컨대 피부에 화농을 일으키는 황색포도상구균인 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)을 비롯하여 피부 상재균인 스타필로코쿠스 에피더미디스(Staphyococcus epidermidis), 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 등이 피부에 존재하며, 이 균들은 피부상에 분비된 피지나 땀을 분해시켜 냄새를 발생시키며, 이와 더불어 그 분해 산물들은 피부에 자극을 주고 염증을 발생시킨다.

특히 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)는 지방산 분해효소인 리파아제(lipase)를 이용하여 피지를 분해시켜서 유리지방산을 생성시킨다. 이들 유리지방산은 피부에 자극을 줄 뿐만 아니라 여드름에서 볼 수 있는 붉은 발진인 구진, 농포, 결절 등의 염증성 병변을 유발시킨다.

이러한 세균들에 대한 항균성 물질로서 트리클로카반(triclocarban), 트리클로산(triclosan) 등 항균성 화합물이 사용되어 왔으나 장기간 사용시 피부 작열감, 화끈거림, 피부 발적 등의 피부 부작용을 유발하는 것으로 알려져 있다.

따라서 최근 피부 부작용이 적은 천연 추출물에 대한 연구가 진행되어 왔으며, 예컨대 녹차 카테킨, 유칼립투스 잎 오일, 레몬 껍질 오일, 조릿대 엑기스, 알로에 베라 껍질 추출물 등이 보고되어 있다(국내 공개특허 제2010-0088878호, 국내 공개특허 제2005-0010914호, 국내 공개특허 제2010-0088296호)

한편 참가시뼈대그물말은 암반에 착생하고 엽체는 평편하며, 아차상으로 분기하는 댕기모양으로 불규칙하게 찢어지면서 가지로 된다. 체장은 10-20 cm, 엽폭은 10-30mm, 두께는 170-300 um이고, 엷은 녹색을 띠는 갈색이거나 엷은 갈색이다. 일본, 한국 그리고 중국에서 분포하며, 우리나라에서는 제주도, 울릉도와 동서 남해안에 분포한다(환경부 국립생물자원관. 대한민국 생물지 한국의 조류(Algae). 2010. 제2권 2호 pp. 28-30; 이용필. 2008. 제주의 바닷말. p. 84).

본 발명은 참가시뼈대그물말 추출물 및/또는 그 분획물의 의 피부 세균들에 대한 항균 활성을 이용한 항균성 피부 외용제 조성물을 개시한다.

본 발명은 참가시뼈대그물말 추출물 및/또는 그 분획물을 이용한 항균성 피부 외용제 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.

본 발명자들은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 참가시뼈대그물말의 에탄올 수용액 추출물(80%(v/v) 에탄올)을 제조함과 함께 그것의 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 및 부탄올의 순차적 분획물을 제조하고, 그 추출물과 순차적 분획물의 피부 미생물들 즉 황색포도상구균인 스타필로코쿠스 아우레우스(S. aureus KCTC 1927), 스타필로코커스 에피더미디스(S. epidermidis SK4와, 항생제 내성균인 S. epidermidis SK9 및 S. epidermidis SK19 포함), 및 프로피오니박테리움 아크네스(P. acnes ATCC 3314와 항생제 내성균인 P. acnes SKA7 포함)에 대한 항균 활성을 원판 확산법(Disc diffusion assay), 최소저해농도(Minimum inhibitory concentration, MIC) 및 최소세균사멸농도(Minimal bactericidal concentration, MBC)로 평가하였다.

그 결과, 처리 농도가 1 mg/ml인 원판 확산법에 의한 항균 활성 평가 결과에 있어서는, 에탄올 수용액 추출물은 스타필로코쿠스 아우레우스에 대해서만 항균 활성을 보였고, 헥산 분획물 및 에틸아세테이트 분획물은 항생제 내성균을 포함한 모든 피부 미생물들에 대해서 항균 활성을 보였으며, 디클로로메탄은 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK4 및 항생제 내성균인 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK9를 제외한 피부 미생물들에 대해서 항균 활성을 보였다. 나머지 분획물인 부탄올 분획물과 잔여 물층은 모든 피부 미생물들에 대해서 항균 활성을 나타내지 않았다.

또 최소억제농도에 의한 항균 활성 평가 결과에 있어서는, 에탄올 수용액 추출물은 다른 피부 미생물들에 대해서는 최소억제농도를 나타내지 아니하였으며, 헥산 분획물과 디클로메탄 분획물 및 에틸아세테이트 분획물은 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK4을 제외한 모든 피부 미생물들에 대해서 0.25 내지 2mg/ml 범위의 최소억제농도를 나타내었다.

마지막으로 최소사멸농도에 의한 항균 활성 평가 결과에 있어서는, 헥산 분획물이 스타필로코쿠스 아우레우스 및 항생제 내성균인 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK9에 대해서만 3mg/ml의 최소사멸농도를 나타내었고, 에틸아세테이트 분획물은 항생제 내성균인 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK9에 대해서만 3mg/ml의 최소사멸농도를 나타내었으며, 에탄올 수용액 추출물과 나머지 분획물들은 모두 최소사멸농도를 나타내지 않았다.

상기 실험 결과는 참가시뼈대그물말의 에탄올 수용액 추출물과, 순차적 분획물 중에서 헥산 분획물, 디클로메탄 분획물 및 에틸아세테이트 분획물이 피부 미생물에 대해서 항균 용도로 사용될 수 있음을 보여주는 것이라 할 수 있으며, 특히 헥산 분획물과 에틸아세테이트 분획물이 피부 미생물에 대한 항균 용도로 유용하게 사용될 수 있음을 보여주는 것이라 할 수 있다.

본 발명은 이러한 실험 결과에 기초하여 완성된 것으로서, 본 발명의 항균성 피부 외용제 조성물은 참가시뼈대그물말의 에탄올 수용액 추출물, 그 에탄올 수용액 추출물의 헥산 분획물, 그 에탄올 수용액 추출물의 디클로메탄 분획물 및/또는 그 에탄올 수용액 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 유효성분으로 포함함을 특징으로 한다.

본 명세서에서, "참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물"은 참가시뼈대그물말을 에탄올 수용액(에탄올과 물의 혼합 용매임)에 침지시켜 얻어진 추출물을 의미한다. 참가시뼈대그물말을 에탄올 수용액에 침지시겨 얻는 한, 추출 방법은 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사 등 임의의 방식이 모두 적용될 수 있다.

또 본 명세서에서, "참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물의 헥산 분획물"은 상기 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물을 헥산과 혼합하고 정치시켜 얻어진 분획물 또는 추출 용매가 제거된 고형상의 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물을 물에 현탁하고 이를 헥산과 혼합하고 정치시켜 얻어진 분획물을 의미한다.

또 본 명세서에서, "참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물의 디클로메탄 분획물"은 상기 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물을 디클로메탄과 혼합하고 정치시켜 얻어진 분획물, 상기 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물에서 추출 용매를 제거하여 얻은 고형상의 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물을 물에 현탁한 후 이를 디클로메탄과 혼합하고 정치시켜 얻어진 분획물, 또는 상기 고형상의 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물을 물에 현탁하고 이를 헥산 및 디클로메탄으로 순차적으로 분획하여 얻은 디클로메탄층의 분획물을 의미한다. 여기서 "헥산과 디클로메탄으로 순차적으로 분획한다"는 의미는 고형상의 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물을 물에 현탁하고 이를 헥산과 혼합하고 정치시킨 후 헥산층의 분획물을 제외한 잔여층인 물층을 디클로메탄과 혼합·정치시켜 분획한다는 의미이다.

또 본 명세서에서, "참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물의 에틸아세테이트 분획물"은 상기 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물을 에틸아세테이트와 혼합하고 정치시켜 얻어진 분획물, 상기 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물에서 추출 용매를 제거하여 얻은 고형상의 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물을 물에 현탁한 후 이를 에틸아세테이트와 혼합·정치시켜 얻어진 분획물, 또는 상기 고형상의 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물을 물에 현탁하고 이를 헥산, 디클로메탄 및 에틸아세테이트로 순차적으로 분획하여 얻은 에틸아세테이트층의 분획물을 의미한다. 여기서 "헥산, 디클로메탄 및 에틸아세테이트로 순차적으로 분획한다"는 의미는 고형상의 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물을 물에 현탁하고 이로부터 헥산 분획물과 디클로메탄 분획물을 얻은 후 잔여층인 물층을 에틸아세테이트와 혼합·정치시켜 분획한다는 의미이다.

또 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

또 본 명세서에서, "항균성"이란 피부 미생물인 스타필로코쿠스 아우레우스, 스타필로코쿠스 에피더미디스 및 프로피오니박테리움 아크네스로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 미생물을 사멸시키거나 그 증식을 억제하는 성질 또는 용도를 의미한다.

본 명세서에서 특별히 정의되지 아니한 기타의 용어는 국어사전적 의미나 당업계에서 일반적으로 받아들여지고 있는 의미를 따른다.

본 발명의 항균성 피부 외용제 조성물에 있어서, 바람직한 유효성분은 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물의 헥산 분획물, 디클로메탄 분획물 또는 에틸아세테이트 분획물이다. 더 바람직하게는 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물의 헥산 분획물 또는 에틸아세테이트 분획물이다.

한편 본 발명의 항균성 피부 외용제 조성물은 그 유효성분인 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물 또는 그 분획물을 항균 활성을 나타낼 수 있는 한 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 20.000 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 항균 활성을 나타낼 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.

본 발명의 항균성 피부 외용제 조성물은 구체적인 양태에 있어서 화장료 조성물로 파악할 수 있다.

본 발명의 조성물이 화장료 조성물로서 파악될 경우, 그 화장료 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩, 분말 등의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 조성물은 그 유효성분을 포함하는 이외에 화장료 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다.

여기서 "화장료 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장료 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성을 지니지 않는 것을 말한다.

상기 담체는 본 발명의 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 50 중량% 내지 약 99 중량 %로 포함될 수 있다.

그러나 상기 비율은 화장료의 전술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴이나 손)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.

한편 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다.

상기 담체로서 사용될 수 있는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에 알려진 피부 보습 활성 물질, 항아토피 활성 물질, 항여드름 활성 물질, 미백 활성 물질 등 기능성 물질을 추가로 포함할 수도 있다.

본 발명의 조성물은 또 다른 구체적인 양태에 있어 피부 세정제 조성물로 파악할 수 있다.

본 발명의 피부 세정제 조성물은 고형상 또는 액상으로 제조될 수 있으며, 바디용 비누, 핸드용 비누, 세안제 등으로 제품화될 수 있다.

본 발명의 피부 세정제에는 그 유효성분인 참가시뼈대그물말 에탄올 수용액 추출물 또는 분획물의 항균 활성을 저해하지 않은 한, 당업계에서 세정제의 제조에 사용되는 임의의 성분을 포함할 수 있다.

이러한 임의의 성분으로서는 예컨대, 폴리옥시에틸렌알킬에테르 황산염 등의 음이온 계면활성제, 아민 옥시드, 폴리옥시에틸렌알킬에테르 등의 비이온 계면활성제, 유분, 실리콘류, 저급 또는 고급 알코올 등의 알코올류, 라놀린 유도체, 단백 유도체, 아크릴 수지 분산액, 양이온 성 폴리머, 음이온성 폴리머, 비이온 성 폴리머, 비타민 등의 약제, 살균제, 방부제, pH 조정제, 산화 방지제, 금속 봉쇄제, 자외선 흡수제, 동식물 추출물 또는 그 유도체, 색소, 항료, 안료, 무기물 분체, 점토 광물, 나일론, 폴리에틸렌 등의 수불용성 폴리머 분체, 프로필렌 글리콜, 에틸알콜, 글리세린, 물 등을 들 수 있다.

본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 그 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 등을 포함하여, 국소형 제형 예컨대 크림, 로션, 연고(반고형의 외용약), 마이크로로에멀젼, 젤, 페이스트, 경피제제(TTS)(예컨대 패치제, 붕대 등) 등으로 제조될 수 있다.

상기에서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 의미이다.

약제학적으로 허용되는 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 전분(예컨대 옥수수 전분, 감자 전분 등), 셀룰로오스, 그것의 유도체(예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 등), 맥아, 젤라틴, 탈크, 고체 윤활제(예컨대 스테아르산, 스테아르산 마그네슘 등), 황산 칼슘, 식물성 기름(예컨대 땅콩 기름, 면실유, 참기름, 올리브유 등), 폴리올(예컨대 프로필렌 글리콜, 글리세린 등), 알긴산, 유화제(예컨대 TWEENS), 습윤제(예컨대 라우릴 황산 나트륨), 착색제, 풍미제, 안정화제, 항산화제, 보존제, 물, 식염수, 인산염 완충 용액 등을 들 수 있다. 이러한 담체는 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적당한 것을 하나 이상 선택하여 사용할 수 있다.

부형제도 본 발명의 약제학적 조성물의 제형에 따라 적합한 것을 선택하여 사용할 수 있는데, 예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 히드로프로필메틸셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈 등의 현탁제나 분산제 등을 들 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 그 1일 투여량이 통상 0.001 ~ 150 mg/kg 체중 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 참가시뼈대그물말 추출물 또는 그 분획물을 이용한 피부 외용제 조성물을 제공할 수 있다. 본 발명의 피부 외용제 조성물은 화장료 조성물, 세정제 조성물, 또는 약제학적 조성물 등으로 제품화될 수 있다.

도 1은 참가시뼈대그물말 추출물과 그 분획물의 피부 미생물에 대한 항균 활성을 원판 확산법에 따라 평가한 결과 사진이다.

이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 > 참가시뼈대그물말 추출물의 제조

제주도 제주시 우도 해안에서 2006년 4월 27에 채집한 참가시뼈대그물말을 부착생물을 제거한 후 음건한 다음 마쇄기로 분쇄하였다. 미세 분말 시료를 80% 에탄올에 상온에서 48시간 침출하고 3회 추출하였으며, 그 후 상층액을 회수하고 감압 농축하여 에탄올 추출물을 얻었다.

그리고 에탄올 추출물을 10g을 증류수 1ℓ에 현탁시킨 후, 헥산(1ℓ×3), 디클로로메탄(1ℓ×3), 에틸아세테이트(1ℓ×3), 부탄올(1ℓ×3)로 각각 순차적으로 추출하고 각각의 분획물을 진공 건조하여 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 및 부탄올 그리고 잔사물를 얻었다. 각 분획물은 해당 용매로 용해시켜 0.2 ㎛의 membrane filter(Advantec MFS Inc. USA)로 제균하여 4℃에 보관하면서 본 연구에 사용하였다.

< 실험예 > 참가시뼈대그물말의 피부균에 대한 항균 할성 실험

<실험예 1> 원판 확산법에 의한 실험

본 실험에 사용한 균주는 피부에서 흔히 검출되는 3종의 균주인 스타필로코쿠스 아우레우스, 스타필로코쿠스 에피더미디스, 프로피오니박테리움 아크네스를 사용하였으며, 스타필로코쿠스 에피더미디스 및 프로피오니박테리움 아크네스에 대해서는 항생제 내성균을 함께 사용하였다.

혐기성 균인 프로피오니박테리움 아크네스는 anaerobic Jar(Oxoid, USA)에서 배양하였다.

균주들의 배지는 Tryptic soy agar(TSA)는 Difco(USA)사, GAM Broth는 Nissui(Japan)사에서 구입하여 사용하였다.

아래의 [표 1]에 사용 균주, 배지 등을 정리하였다.

<사용 균주와 배지>

항균력 측정은 원판 확산법(Disc diffusion assay)을 사용하였다(Hayes, A.J., Markovic, B., 2002. Toxicity of Australian essential oil Backhousia citriodora (Lemon myrtle). Part 11. Antimicrobial activity and in vitro cytotoxicity. Food . Chem . Toxicol . 40(4): 535-543).

각 균주는 10 mL의 액체배지에 접종하고 37℃에서 18시간씩 3회 계대 배양하여 항균활성 시험 균주로 사용하였으며, 각각의 시험균 농도를 0.5 McFarland으로 10⁶ - 10⁸ CFU/mL 되게 한 후 pour-plate 방법에 균접종 평판배지를 만들어 사용하였다.

각각의 시료는 1 mg/ml 농도로 조제하여 농도별로 paper disc(Whatman No.5, 8 mm)에 천천히 흡수시킨 후, 용매를 완전히 증발시킨다. 시험용 평판배지 표면에 디스크를 밀착시키고 최적온도 37℃에서 배양한 후 디스크 주변에 생성된 생육저해환(clear zone, mm)의 크기를 측정하여 항균활성을 비교하였다.

결과를 아래의 [표 2] 및 [도 1](1:에탄올 추출물, 2:헥산 분획물, 3:디클로로메탄 분획물, 4:에틸아세테이트 분획물, 5:부탄올 분획물, 6:잔여 물층)에 나타내었다.

<참가시뼈대그물말 추출물과 분획물의 항균 활성>

* 상기 표에서 - 표시는 항균 활성이 없음을 나타냄

[표 2] 및 [도 1]을 참조하여 보면, 에탄올 추출물과 순차적 분획물 중에서 스타필로코쿠스 아우레우스에 대해서는 에탄올 추출물과 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 분획물이 항균 활성을 보였고, 헥산 분획물에서 다른 균주와 비해서 높은 활성을 나타냄을 알 수 있다. 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK4와 항생제 내성균인 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK9에 대해서는 헥산, 에틸아세테이트 분획물에서 항균 활성을 띠었고, 항생제 내성균인 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK19에 대해서는 헥산, 디클로메탄, 에틸아세테이트 분획물에서 항균 활성을 띠었다. 마지막으로 프로피오니박테리움 아크네스와 프로피오니박테리움 아크네스 SKA7에 대해서는 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 분획물에서 항균 활성을 띠었다.

<실험예 2> 최소저해농도( Minimum inhibitory concentration , MIC )의 측정

최소저해농도(MIC)는 Micro-well dilution assay 방법(Amster D. 1996. Susceptibility testing of antimicrobial in liquid media, antibiotics in laboratory medicine. 4th ed. Williams and Wikins, MD, USA. p 52-111)에 따라 측정하였다. 각각의 균 농도를 0.5 McFarland으로 10⁶ - 10⁸ CFU/mL가 되게 한 후 96 well plate에 분주하고, 각 시료를 농도별로 10㎕씩 처리하여 배양하였다. 세균 배양액의 증식 정도를 Microplate reader(Powerwave XS, BioTek)로 650 nm에서 측정하였다. 세균만 접종한 well에서의 흡광도 값도 비교하여 최소억제농도를 정하였다.

결과를 아래의 [표 3]에 나타내었다.

<최소저해농도>

* 상기 표에서 - 표시는 최소저해농도가 측정되지 않았음을 의미함.

스타필로코쿠스 아우레우스는 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 분획물에서 낮은농도로 억제되었으며, 헥산 분획물에서 0.25 mg/ml에서 가장 낮은 농도로 억제되었다. 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK4는 에탄올 추출물에서 0.5 mg/ml 농도에 억제되었고, 항생제 내성균인 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK9와 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK19는 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 분획물에서 1, 2 mg/ml로 농도로 억제되었다. 프로피오니박테리움 아크네스는 원판 확산법의 결과와 마찬가지로 에탄올 추출물에서는 항균력을 나타내지 않았으나, 순차적 분획물인 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 분획물에서 억제 농도를 나타내었다. 특히 프로피오니박테리움 아크네스 ATCC 3314는 헥산과 디클로로메탄 분획물에서 0.5mg/ml로 낮은 농도에서 억제되었다. 참가시뼈대그말은 순차적 분획물 중 헥산에서 가장낮은 억제 농도를 보여주였다.

<실험예 3> 최소세균사멸농도 ( Minimal bactericidal concentration , MBC ) 측정

MIC로 선정된 농도보다 그 이상의 농도에 해당하는 well의 배양액 100㎕ 씩을 고체배지에 직접 도말하였다. 각각의 균을 배양 후 plate 상에서 육안으로 관찰되는 colony 수를 직접 계수하였다. 이때 확인되어지는 colony 수가 액체배양액으로부터 접종한 초기 접종균수의 99.9%를 사멸시키는 효과를 나타내는 것으로 확인 되어진 경우 이때의 처리농도를 최소세균사멸농도(MBC)로 정하였다(Cohen MA, Huband MD, Yoder SL, Gage JW, Roland GE., 1998, Bacterial eradication by clinafloxacin, CI-990, and ciprofloxacin employing MBC test, in-vitro time-kill and in-vivo time-kill studies. J Antimicrob Chemother . 41(6): 605-14).

결과를 아래의 [표 4]에 나타내었다.

* 상기 표에서 - 표시는 최소세균사멸농도가 측정되지 않았음을 의미함.

스타필로코쿠스 아우레우스는 헥산 분획물에서 최소세균사멸농도가 3 mg/ml를 나타내었으며, 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK4는 나타내지 않았지만 항생제 내성균인 스타필로코쿠스 에피더미디스 SK9는 헥산과 에틸아세테이트 분획물에서 3 mg/ml의 최소세균사멸농도를 나타내었다. 이에 반해 프로피오니박테리움 아크네스와 프로피오니박테리움 아크네스 SKA7는 원판 확산법에서는 항균 활성을 보였으나, 최소세균사멸농도는 나타나지 않았다.

Claims

참가시뼈대그물말의 에탄올 수용액 추출물의 헥산 분획물, 참가시뼈대그물말의 에탄올 수용액 추출물의 디클로메탄 분획물 및 참가시뼈대그물말의 에탄올 수용액 추출물의 에틸아세테이트 분획물로 구성된 군에서 선택된 것을 유효성분으로 하나 이상 포함하는 항균성 피부 외용제 조성물로서,
상기 항균성은 스타필로코쿠스 아우레우스, 스타필로코쿠스 에피더미디스 및 프로피오니박테리움 아크네로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 미생물에 대한 항균성인 것을 특징으로 하는 항균성 피부 외용제 조성물.
삭제
제1항에 있어서,
상기 항균성 피부 외용제 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 항균성 피부 외용제 조성물.
제1항에 있어서,
상기 항균성 피부 외용제 조성물은 세정제 조성물인 것을 특징으로 하는 항균성 피부 외용제 조성물.
제1항에 있어서,
상기 항균성 피부 외용제 조성물은 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 항균성 피부 외용제 조성물.