KR101313900B1 - Methods for plant protection by fusaricidin - Google Patents

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Abstract

본 발명은 미생물 유래 대사물질을 이용한 식물 보호 방법에 관한 것으로, 구체적으로 패니바실러스 폴리믹사(Paenibacillus polymyxa)균이 생산하는 리포펩티드계열 물질인 푸자리시딘(fusaricidin), 이의 염 또는 이의 유도체를 유효성분으로 함유하는 식물병 저항성 유도제에 관한 것이다. 본 발명의 푸자리시딘은 식물에서 식물병에 대한 저항성을 갖게 함으로써 상기 식물병을 예방하는 효과를 나타내며, 종래의 항생효과에 의한 식물병 방제효과보다 1000배 이상 낮은 농도에서 더욱 뛰어난 식물병 억제 효과를 나타내므로 식물병 저항성 유도제로 유용하게 사용할 수 있으며, 본 발명의 푸자리시딘은 화학적으로 합성된 것이 아닌 생물학적으로 얻어진 것으로, 유기합성 농약의 사용을 대체하여 친환경적 농업에서 식물병 방제 및 예방에 적용시킬 수 있다.The present invention relates to a plant protection method using a microorganism-derived metabolite, and in particular, it is effective to use fusaricidin, a salt thereof, or a derivative thereof, which is a lipopeptides-based substance produced by Paenibacillus polymyxa . It relates to a plant disease resistance inducer containing as a component. Fuzacidin of the present invention exhibits the effect of preventing the plant disease by making it resistant to plant diseases in plants, more excellent plant disease inhibition at a concentration 1000 times lower than the conventional plant disease control effect by the antibiotic effect Since it is effective, it can be usefully used as a plant disease resistance inducer, fuzisidine of the present invention is obtained biologically, not chemically synthesized, replacing and the use of organic synthetic pesticides to control and prevent plant diseases in environmentally friendly agriculture Can be applied to

Description

푸자리시딘을 이용한 식물 보호 방법{Methods for plant protection by fusaricidin}Method for plant protection by fuzacidin {Methods for plant protection by fusaricidin}

본 발명은 미생물의 대사 산물을 유효성분으로 함유하는 식물병 저항성 유도제 및 상기 방법을 이용한 식물병 저항성 유도 방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a plant disease resistance inducer containing a metabolite of a microorganism as an active ingredient and to a plant disease resistance induction method using the method.

인구증가와 기후변화에 의한 생태계 교란 등의 요인에 의해 식량의 안정적 확보가 점점 더 중요한 과제로 부각되고 있고, 이와 관련하여 지속 가능한 친환경 농업의 발전 및 안전한 농산물 생산과 이에 필요한 환경친화적인 농약, 비료 등 농용소재의 개발 중요성이 근래 크게 증가되고 있다. 그중 하나가 작물 재배에 커다란 장애요인인 식물병을 안전하고 효율적으로 방제할 수 있는 방법을 개발하는 것이다. 그동안 화학합성 농약을 대체 또는 보완할 수 있는 방법으로서 기능성 미생물을 이용하여 식물의 병을 방제하는 방법이 다수 개발되어 일부는 상용화 단계에 진입하였지만 현장에서의 적용효율이 화학농약에 비해 낮거나 재현성이 떨어지는 점 등의 단점이 자주 제기되어 활용도 제고에 장애가 되고 있다. 이를 극복하기 위한 한 방법으로 미생물 자체를 이용하는 방법에서 더 나아가 미생물 유래 기능성 물질을 발굴하여 이용하려는 시도가 이루어지고 있다. The securing of food is becoming more and more important due to factors such as population increase and disturbance of ecosystem due to climate change.In this regard, sustainable eco-friendly agriculture and safe agricultural production and environmentally friendly pesticides and fertilizers are required. In recent years, the importance of developing agricultural materials has increased greatly. One of them is developing safe and efficient ways to control plant diseases, which are a major obstacle to growing crops. As a method of replacing or supplementing chemical synthetic pesticides, many methods for controlling plant diseases using functional microorganisms have been developed, and some have entered the commercialization stage, but the application efficiency in the field is lower than that of chemical pesticides, or Disadvantages such as falling are frequently raised, which makes it difficult to improve utilization. In order to overcome this problem, an attempt has been made to find and use a microorganism-derived functional material in addition to using the microorganism itself.

근권 및 토양 내에는 다양한 미생물들이 복잡한 상호관계를 이루며 공존하고 있고 식물의 종류 및 토양환경의 변화에 따라 식물과 관계를 이루며 서식하는 미생물들의 종류가 달라질 수 있다. 미생물 측면에서 보면 그들이 생산하는 물질 및 기타 특성에 따라 영향을 미칠 수 있는 대상 식물들이 달라질 수 있다. 많은 종류의 식물이 존재하고 이에 문제를 일으키는 식물병원균 또한 다양하며 경우마다 우수한 효과를 나타내는 병 저항성 유도물질이 다를 수 있으므로 다양한 기능성 대사물질을 확보하는 일은 매우 중요하다. 이러한 병저항성 유도 물질은 단독, 또는 다른 기능성 물질 및 미생물과의 혼합, 또는 화학합성 농약과의 혼합 형태 등 다양한 방법으로 활용될 수 있을 것이다. In the rhizosphere and soil, various microorganisms coexist in complex interrelationships, and the types of microorganisms living in relation to plants may vary according to the type of plant and the soil environment. In terms of microorganisms, the target plants may be affected by the materials and other properties they produce. It is very important to secure various functional metabolites because there are many kinds of plants and phytopathogens causing problems also vary, and the disease resistance inducers may have different effects. Such disease resistance inducing substances may be utilized in various ways, either alone or in combination with other functional substances and microorganisms, or with chemically synthetic pesticides.

푸자리시딘(fusaricidin)은 패니바실러스 폴리믹사(Paenibacillus polymyxa) 균주로부터 분리된 항생물질로서 6개의 아미노산 잔기가 링 구조를 이루고 있으며 구아니디노-3-하이드록시펜타데카노익산(15-guanidino-3-hydroxypentadecanoic acid)을 포함하고 있다(도 1 참조). 현재까지 패니바실러스 폴리믹사로부터 푸자리시딘 LI-F03, LI-F04, LI-F05, LI-F07 및 LI-F08이 분리ㆍ동정되어 보고되었으며(Kurusu K, Ohba K, Arai T and Fukushima K. J. Antibiotics 40:1506-1514, 1987), 푸자리시딘 A, B, C 및 D가 또한 보고되었다(Kajimura Y and Kaneda M. J. Antibiotics 49:129-135, 1996; Kajimura Y and Kaneda M. J. Antibiotics 50:220-228, 1997). 푸자리시딘의 아미노산 체인은 일반적인 폴리펩티드처럼 유전자에 의해 코딩되어 리보솜에 의해 합성되는 것이 아니라 비리보솜 펩티드 생합성효소(NRPS: non-ribosomal peptide synthetase)에 의해 합성된다(Marahiel MA, Stachelhaus T and Mootz HD. Chem . Rev. 97:2651-2673, 1997; Doekel S and Marahiel MA. Metab . Eng . 6:64-77, 2001). 본 발명자들은 이미 패니바실러스 폴리믹사 E681균의 유전체 해독연구를 통해 푸자리시딘 생합성효소 유전자를 발굴하고 그 기능을 밝혀 보고한 바 있다(Choi S.-K. et al . 2007. Biochem . and Biophys . Res. Commun . 365:89-95).Fusaricidin is a Paenibacillus Polymyxa ) is an antibiotic isolated from the strain 6 amino acid residues form a ring structure and contains 15-guanidino-3-hydroxypentadecanoic acid (see Fig. 1). . To this day, fujarycidin LI-F03, LI-F04, LI-F05, LI-F07 and LI-F08 have been isolated and identified from Penicillus polymixes (Kurusu K, Ohba K, Arai T and Fukushima K). J. Antibiotics 40: 1506-1514, 1987), fuzisidine A, B, C and D have also been reported (Kajimura Y and Kaneda M. J. Antibiotics 49: 129-135, 1996; Kajimura Y and Kaneda M. J. Antibiotics 50: 220-228, 1997). The amino acid chains of fuzacidin are not encoded by genes and synthesized by ribosomes, as are common polypeptides, but by non-ribosomal peptide synthetase (NRPS) (Marahiel MA, Stachelhaus T and Mootz HD). Chem . Rev. 97: 2651-2673, 1997; Doekel S and Marahiel MA. Metab . Eng . 6: 64-77, 2001). The present inventors have already discovered fuzisidine biosynthesis genes through the genome detoxification study of the E. F. E681 strain of Penivacillus polymyx and revealed their function (Choi S.-K. et. al . 2007. Biochem . and Biophys . Res. Commun . 365 : 89-95).

미생물의 대사산물을 대상으로 식물유용 물질을 탐색하고자 하는 연구는 오랜 기간 여러 연구팀에 의해 수행되어왔지만 실용화되어 농업에 활용되고 있는 경우는 많지 않다. 실제 작물 생산체계에서 기존개념의 유기합성 농약이 아닌 미생물 유래 대사물질로서 적은 양으로 식물의 병, 충 또는 환경스트레스에 대한 저항성을 증진 시킬 수 있는 기술은 친환경농업의 발전에 중요한 요소이다.
The research to search for plant-derived substances in the metabolites of microorganisms has been conducted by various research teams for a long time, but it is not often used for agriculture. In the actual crop production system, technology that can improve the resistance of plants to diseases, insects or environmental stress in small amounts as a metabolite derived from microorganisms, rather than the conventional organic synthetic pesticides, is an important factor in the development of eco-friendly agriculture.

이에 본 발명자들은 패니바실러스 폴리믹사균이 생산하는 대사 산물 중 리포펩티드 계열 항생 물질인 푸자리시딘이 저농도에서 고추묘에서 고추역병 및 세균성 무름병을, 오이묘에서 오이무름병을 억제하는 효과를 나타내고, 상기 효과가 종래 알려진 항생효과에 의한 식물병 방제효과보다 1/100-1/1000 이하의 낮은 농도에서 식물체로 하여금 병저항성을 갖도록 하여 우수한 식물병 방제효과를 나타내는 것을 확인한 바 식물병에 대한 저항성 유도제로 유용하게 사용할 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors have shown that fuzacidin, a lipopeptide antibiotic, among the metabolites produced by the F. polymycobacterium, has the effect of inhibiting red pepper blight and bacterial urinary disease in red pepper seedlings and cucumbers in cucumber seedlings at low concentrations. It was confirmed that the plant had excellent disease control effects by making plants resistant to disease at concentrations lower than 1 / 100-1 / 1000 than the conventional antibiotic control effect. The present invention has been completed by revealing that it can be usefully used.

한편, 식물체에서의 유도저항성 발현의 특성상 푸자리시딘은 바이러스, 곰팡이, 세균 등 다양한 식물 병 방제제로 활용 할 수 있다
On the other hand, due to the nature of inducible resistance in plants, fuzisidine can be used as a control for various plant diseases such as viruses, fungi and bacteria.

본 발명의 목적은 패니바실러스 폴리믹사균이 생산하는 대사물질인 푸자리시딘이 식물에 대하여 나타내는 유용성을 규명하고 이 균주를 이용하여 푸자리시딘을 생산하는 기술을 확보하며 상기 대사산물을 유효성분으로 포함하는 식물병 저항성 유도제 및 이를 이용한 식물병 저항성 유도 방법을 제공하는 것이다.
An object of the present invention is to identify the usefulness of the fusicidin, which is a metabolite produced by the F. bacterium polymyx bacteria, to plants, and to secure the technology of producing fuzacidin using this strain, and to effectively utilize the metabolite. It is to provide a plant disease resistance inducer comprising a component and a plant disease resistance induction method using the same.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 푸자리시딘(fusaricidin), 이의 염, 또는 이의 유도체를 유효성분으로 함유하는, 식물병에 대한 저항성 유도제를 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a resistance inducer to plant diseases containing fusaricidin, salts thereof, or derivatives thereof as an active ingredient.

또한, 본 발명은 식물, 그의 종자 또는 그의 서식지에 푸자리시딘, 또는 이의 염, 또는 이의 유도체를 처리하는 단계를 포함하는, 식물병에 대한 저항성 유도 방법을 제공한다.
The present invention also provides a method of inducing resistance to plant diseases, comprising the step of treating fuzacidine, or a salt thereof, or a derivative thereof in a plant, its seed or its habitat.

본 발명의 푸자리시딘은 식물에서 식물병에 대한 저항성을 갖게 함으로써 상기 식물병을 예방하는 효과를 나타내며, 종래의 항생효과에 의한 식물병 방제효과보다 1000배 이상 낮은 농도에서 더욱 뛰어난 식물병 억제 효과를 나타내므로 식물병 저항성 유도제로 유용하게 사용할 수 있다, 본 발명의 푸자리시딘은 화학적으로 합성된 것이 아닌 생물학적으로 얻어진 것으로, 유기합성 농약의 사용을 대체하여 친환경적 농업에서 식물병 방제 및 예방에 적용시킬 수 있다.
Fuzacidin of the present invention exhibits the effect of preventing the plant disease by making it resistant to plant diseases in plants, more excellent plant disease inhibition at a concentration 1000 times lower than the conventional plant disease control effect by the antibiotic effect It can be useful as a plant disease resistance inducer because it exhibits the effect, fujarysidine of the present invention is obtained biologically, not chemically synthesized, replacing and using organic synthetic pesticides to control and prevent plant diseases in environmentally friendly agriculture Can be applied to

도 1은 푸자리시딘 A의 화학구조를 나타내는 그림이다.
도 2는 푸자리시딘을 고추묘에 관주처리하였을 때 세균성점무늬병에 대한 방제효과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 푸자리시딘을 고추묘에 관주처리하였을 때 고추역병에 대한 방제효과를 나타내는 그림이다.
도 4는 푸자리시딘을 오이유묘에 엽육주사하였을 때 무름병에 대한 방제효과를 나타내는 그림이다.
1 is a diagram showing the chemical structure of fuzacidin A.
Figure 2 is a graph showing the control effect on bacterial spot pattern disease when irrigating fuzacidine in pepper seedlings.
Figure 3 is a diagram showing the control effect against pepper blight when irrigation of red pepper seedlings in pepper seedlings.
Figure 4 is a figure showing the control effect against the soft beetle when fusicidine injected in cucumber seedlings.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 푸자리시딘(fusaricidin), 이의 염, 또는 이의 유도체를 유효성분으로 함유하는, 식물병에 대한 저항성 유도제를 제공한다.The present invention provides a resistance inducer to plant diseases, containing fusaricidin, salts thereof, or derivatives thereof as an active ingredient.

상기 식물병에 대한 저항성 유도제는 푸자리시딘, 이의 염, 또는 이의 유도체를 10 ng/㎖(0.01 ppm) 내지 16 ㎍/㎖(16 ppm)으로 포함하는 것이 바람직하고, 10 ng/㎖(0.01 ppm) 내지 1 ㎍/㎖(1 ppm)으로 포함하는 것이 더욱 바람직하며, 10 ng/㎖(0.01 ppm) 내지 1 ㎍/㎖(1 ppm)으로 포함하는 것이 가장 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다. The inducer of resistance to plant diseases preferably comprises fuzacidin, salts thereof, or derivatives thereof from 10 ng / ml (0.01 ppm) to 16 µg / ml (16 ppm), and 10 ng / ml (0.01). ppm) to 1 μg / ml (1 ppm), more preferably 10 ng / ml (0.01 ppm) to 1 μg / ml (1 ppm), but are not limited thereto.

상기 푸자리시딘은 LI-F04a(fusaricidin A), LI-F04b(fusaricidin B), LI-F05a, LI-F05b, LI-F08a 및 LI-F08b를 모두 포함하는 것이 바람직하나, LI-F04a, LI-F04b, LI-F05a, LI-F05b, LI-F08a 및 LI-F08b로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나이상의 성분을 포함하는 것이라면 본 발명의 식물병에 대한 저항성 유도제로서 사용가능하다. The fuzacidin is preferably LI-F04a (fusaricidin A), LI-F04b (fusaricidin B), LI-F05a, LI-F05b, LI-F08a and LI-F08b, but LI-F04a, LI Any one or more components selected from the group consisting of -F04b, LI-F05a, LI-F05b, LI-F08a and LI-F08b can be used as an inducer of resistance to plant diseases of the present invention.

상기 푸자리시딘은 패니바실러스 폴리믹사(Paenibacillus polymyxa) E681균주로부터 분리된 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다. The fuzacidin is Paenibacillus polymyxa ) is preferably isolated from strain E681, but is not limited thereto.

상기 식물은 쌍자엽 식물 또는 단자엽 식물인 것이 바람직하며, 담배, 오이, 고추, 토마토, 배추, 밀, 보리로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이 더욱 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.The plant is preferably a dicotyledonous plant or monocotyledonous plant, more preferably selected from the group consisting of tobacco, cucumber, pepper, tomato, cabbage, wheat, barley, but is not limited thereto.

상기 식물병은 역병, 무름병, 세균성점무늬병, 들불병, 탄저병, 모잘록병, 시들음병, 뿌리썩음병, 잿빛곰팡이병, 풋마름병, 잎마름병, 덩굴쪼김병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다. The plant disease is preferably selected from the group consisting of late blight, inflorescence, bacterial spot pattern disease, wild fire disease, anthrax disease, mozzarella disease, wilting disease, root rot disease, gray mold disease, green blight disease, leaf blight disease, vine cutting disease, but is not limited thereto. .

본 발명의 식물병에 대한 저항성 유도제는 농학적으로 허용가능한 담체로서 추가로 식물병 억제 또는 방제 효과가 있는 통상의 다른 합성농약 또는 생물농약과 혼합하거나, 비료에 혼합하여 사용할 수도 있다. Inducers resistant to plant diseases of the present invention may be used as agrochemically acceptable carriers, in addition to other conventional synthetic pesticides or biopesticides having an effect of inhibiting or controlling plant diseases, or mixed with fertilizers.

본 발명의 구체적 실시예에서, 패니바실러스 폴리믹사 E681 균주로부터 부탄올 추출, 실리카겔 크로마토그래피 및 세파텍스 컬럼크로마토 그래피의 3단계 정제과정을 통해 푸자리시딘을 수득하였다. 상기 푸자리시딘에 LI-F04a, LI-F04b, LI-F05a, LI-F05b, LI-F08a 및 LI-F08b의 6종의 푸자리시딘이 존재하는 것을 HPLC 및 질량분석기를 통해 확인하였다(도 1 참조). 상기에서 수득한 푸자리시딘을 고추묘에 처리하였을 때 저농도에서 세균성점무늬 병원균 및 고추역병균에 대한 억제효과를 보였으며, 오이묘에 처리하였을 때 저농도에서 오이 무름병에 대한 억제효과를 보였다(표 2, 표 3 및, 도 2 내지 도 4 참조). In a specific embodiment of the present invention, fuzacidin was obtained from three-step purification of butanol extraction, silica gel chromatography, and Sephatex column chromatography from the Panicivacillus polymix E681 strain. It was confirmed by HPLC and mass spectroscopy that the fuzacidin is present in the six fuzacidins of LI-F04a, LI-F04b, LI-F05a, LI-F05b, LI-F08a and LI-F08b. See FIG. 1). When the fusalicidin obtained above was treated to red pepper seedlings, it showed inhibitory effect on bacterial spot pattern pathogens and red pepper blight germ at low concentrations, and when it was treated to cucumber seedlings, it showed an inhibitory effect on cucumber softwood disease at low concentrations (Table 2). , Table 3 and FIGS. 2-4).

또한, 본 발명의 구체적 실시예에서 상기 푸자리시딘의 주요 식물병원균에 대한 최소억제농도를 확인한 결과, 16 ppm 이상에서 항생효과를 보이는 것으로부터 그 이하의 농도에서 확인한 상기 고추묘 및 오이묘의 식물병 억제 효과는 항생효과에 의한 것이 아니라 저항성 유도에 의한 것임을 알 수 있었다(표 4 참조). In addition, in a specific embodiment of the present invention, as a result of confirming the minimum inhibitory concentration for the main phytopathogens of the fusicidin, the plant disease of the pepper seedlings and cucumber seedlings confirmed at a concentration of less than that showing an antibiotic effect at 16 ppm or more The inhibitory effect was not due to antibiotic effect but to resistance induction (see Table 4).

이에, 본 발명의 푸자리시딘은 저농도에서 식물에 대하여 식물병에 대한 저항성을 유도, 항생효과에 의한 식물병 방제효과보다 1000배 이상 낮은 농도에서 더욱 뛰어난 식물병 억제 효과를 나타내므로 친환경적인 식물병에 대한 저항성 유도제로 유용하게 사용할 수 있음을 확인하였다.친환경적 농업방법에 적용시킬 수 있다.Thus, fujarysidine of the present invention induces resistance to plant diseases against plants at low concentrations, and shows more excellent plant disease suppression effect at a concentration 1000 times lower than the plant disease control effect by antibiotic effect It has been found to be useful as an inducer for disease resistance and can be applied to environmentally friendly farming methods.

본 발명의 저항성 유도제의 유효성분인 푸자리시딘을 효율적으로 생산할 수 있는 균주로서 패니바실러스 폴리믹사 E681 균주를 제공하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명자들은 패니바실러스 폴리믹사 E681 균주의 배양을 위해 포도당을 3% 첨가한 tryptic soy broth(TSB)를 이용하였고 30℃에서 2-3일간 진탕배양하는 조건을 사용하였으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 푸자리시딘의 분리ㆍ정제를 위해 부탄올 추출(n-BuOH extract), 실리카젤 크로마토그라피(silica gel column flash chromatography) 및 세파텍스 컬럼 크로마토그라피(sephadex LH-20 column chromatography)의 3단계 방법을 이용하였으나, 이 방법에 제한되는 것은 아니다. Provided as a strain capable of efficiently producing fuzacidine, an active ingredient of the resistance inducing agent of the present invention, the F. nivicillus polymixes E681 strain, but is not limited thereto. The present inventors used tryptic soy broth (TSB) to which 3% of glucose was added for the cultivation of the F. E681 strain of Pa., But used conditions of shaking culture at 30 ° C. for 2-3 days, but is not limited thereto. Three-stage method of butanol extraction (n-BuOH extract), silica gel column flash chromatography and sephadex LH-20 column chromatography However, it is not limited to this method.

본 발명의 식물병에 대한 저항성 유도제는 단독으로 증류수에 용해시켜 사용하거나, 다른 부형제와 함께 제제화하여 식물병에 대한 저항성 유도제로 사용할 수 있다. 본 발명의 조성물의 제제화에 일반적으로 사용되는 담체, 기타 보조제 등을 배합하여, 유제, 현탁제, 분제, 입제, 정제, 수화제, 수용제, 수액, 유동제, 과립 수화제, 에어로졸제, 페이스트제, 유탁제 등의 여러 형태로 제제할 수 있다. 이때, 제제화에 사용되는 담체로서는, 고체 담체와 액체 담체의 어느 것이나 그 사용목적에 따라 이용할 수 있다. 고체 담체로서는 예를 들면, 전분, 활성탄, 대두분, 소맥분, 목분, 어분, 분유 등의 동식물성 분말; 탈크, 카올린, 벤토나이트, 탄산칼슘, 제올라이트, 규조토, 화이트 카본, 클레이, 알루미나, 황산 암모늄, 요소 등의 무기물 분말을 들 수 있다. 액체 담체로서는 예를 들면 물; 이소프로필알콜, 에틸렌글리콜 등의 알콜; 시클로헥사논, 메틸에틸케톤 등의 케톤류; 디옥산, 테트라히드로퓨란 등의 에테르류; 케로신, 경유 등의 지방족 탄화수소류; 크실렌, 트리메틸벤젠, 테트라메틸벤젠, 메틸나프탈렌, 솔벤트나프타 등의 방향족 탄화수소류; 클로로벤젠 등의 할로겐화 탄화수소류; 디메틸아세트아미드 등의 산 아미드류; 지방산의 글리세린에스테르 등의 에스테르류; 아세토니트릴 등의 니트릴류; 디메틸술폭시드 등의 함황화합물류 등을 들 수 있다. 계면활성제로서는 예를 들면, 알킬벤젠술폰산금속염, 디나프틸메탄디술폰산 금속염, 알콜황산 에스테르염, 알킬아릴 술폰산염, 리그닌술폰산염, 폴리옥시에틸렌글리콜에테르, 폴리옥시에틸렌알킬아릴에테르, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노알킬레이트 등을 들 수 있다. 그 밖의 보조제로서는 예를 들면, 카르복시메틸셀룰로오스, 아라비아 고무, 알긴산 나트륨, 구아검, 트라간트검, 폴리비닐알콜 등의 고착제 혹은 증점제, 금속 비누 등의 소포제, 지방산, 알킬인산염, 실리콘, 파라핀 등의 물성 향상제, 착색제 등을 사용할 수 있다. 이들 제제의 실제 사용 시에는, 그대로 사용하거나, 또는 물 등의 희석제로 소정 농도로 희석하여 사용할 수 있다. Inducing agents resistant to plant diseases of the present invention can be used alone or dissolved in distilled water, or formulated with other excipients can be used as resistance inducing plants against plant diseases. Carriers, other adjuvants, and the like, which are generally used in the formulation of the compositions of the present invention, may be formulated to include emulsions, suspensions, powders, granules, tablets, hydrates, water solubles, sap, flow, granule hydrates, aerosols, pastes, It may be formulated in various forms such as emulsions. At this time, as a carrier used for formulation, any of a solid carrier and a liquid carrier can be used depending on the purpose of use. Examples of the solid carrier include animal and vegetable powders such as starch, activated carbon, soybean meal, wheat flour, wood meal, fish meal and powdered milk; Inorganic powders such as talc, kaolin, bentonite, calcium carbonate, zeolite, diatomaceous earth, white carbon, clay, alumina, ammonium sulfate and urea. Examples of the liquid carrier include water; Alcohols such as isopropyl alcohol and ethylene glycol; Ketones such as cyclohexanone and methyl ethyl ketone; Ethers such as dioxane and tetrahydrofuran; Aliphatic hydrocarbons such as kerosine and light oil; Aromatic hydrocarbons such as xylene, trimethylbenzene, tetramethylbenzene, methylnaphthalene, and solvent naphtha; Halogenated hydrocarbons such as chlorobenzene; Acid amides such as dimethylacetamide; Esters such as glycerin esters of fatty acids; Nitriles such as acetonitrile; Sulfur-containing compounds, such as dimethyl sulfoxide, etc. are mentioned. As surfactant, For example, alkylbenzene sulfonate metal salt, dinaphthyl methane disulfonic acid metal salt, alcohol sulfate ester salt, alkylaryl sulfonate, lignin sulfonate, polyoxyethylene glycol ether, polyoxyethylene alkyl aryl ether, polyoxyethylene Sorbitan monoalkylate, and the like. As other auxiliaries, for example, fixing agents or thickeners such as carboxymethyl cellulose, gum arabic, sodium alginate, guar gum, tragant gum, polyvinyl alcohol, antifoaming agents such as metal soap, fatty acids, alkyl phosphates, silicones, paraffins and the like Physical property improvers, coloring agents, and the like can be used. In actual use of these preparations, they may be used as they are or may be diluted to a predetermined concentration with a diluent such as water.

본 발명에 따른 식물병에 대한 저항성 유도제의 처리량은 기존의 농약 처리량을 크게 벗어나지 않는 범위로서, 예를 들어, 억제제 액이 식물체 표면에 골고루 젖어 흘러내릴 때까지 살포한다. 또한, 식물의 종자로부터 성숙기에 이르기까지 어느 생장단계에 처리하여도 무방하다. 본 발명의 저항성 유도제는 분무, 관주 또는 침지 등의 통상의 약제처리방법에 의해 처리될 수 있다.Throughput of the resistance inducer to plant diseases according to the present invention is a range that does not deviate significantly from the conventional pesticide throughput, for example, sprayed until the inhibitor solution evenly wetted down the surface of the plant. Moreover, you may process at any stage of growth from a seed of a plant to maturity. The resistance inducer of the present invention can be treated by conventional pharmaceutical treatment methods such as spraying, irrigation or dipping.

본 발명에서 식물병에 대한 저항성 유도제의 사용량은 처리되는 식물의 종류, 식물병의 종류 및 상태, 처리시기 및 방법 등에 따라 적절히 조정될 수 있다.In the present invention, the amount of the inducer resistant to plant diseases may be appropriately adjusted according to the type of plant to be treated, the type and condition of the plant disease, treatment time and method, and the like.

본 발명의 식물병에 대한 저항성 유도제는 다양한 세균성 유기체에 의해 초래되는 감염성 식물병의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다. 채소류 무름병의 어위니아 카로토보라(Erwinia carotovora), 인삼 근부병의 어위니아 아라리아보라(Erwinia araliavora) 참깨 잘록병의 슈도모나스 세파시아에(Pseudomonas cepacia), 고추와 토마토 풋마름병의 랄스토니아 솔라나세아룸(Ralstonia solanacearum), 감귤나무 궤양병의 크산토모나스 시트리(Xanthomonas citri),벼 흰빛잎마름병의 크산토모나스 오리제(Xanthomonas oryzae), 채소류 검은빛썩음병의 크산토모나스 캄페스트리스(Xanthomonas campestris) 또는 과수 근두암 종병의 아그로박테리움 투메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens) 감염 등을 비롯한 그람 음성 세균에 의한 감염을 들 수 있다.
Inducing agents resistant to plant diseases of the present invention can be used for the treatment or prevention of infectious plant diseases caused by various bacterial organisms. Erwinia carotovora of vegetable purifying disease, Erwinia araliavora of ginseng root disease, Pseudomonas cepacia of sesame seed disease, Ralstonia solanacearum of red pepper and tomato green blight (Ralstonia solanacearum), Xanthomonas citri of citrus ulcers, Xanthomonas oryzae of rice blight, or Xanthomonas campestris of vegetable rot. Infections with Gram-negative bacteria, including Agrobacterium tumefaciens infections of myocarcinoma tumors .

또한, 본 발명은 식물, 그의 종자 또는 그의 서식지에 푸자리시딘, 또는 이의 염, 또는 이의 유도체를 처리하는 단계를 포함하는, 식물병에 대한 저항성 유도 방법을 제공한다.The present invention also provides a method of inducing resistance to plant diseases, comprising the step of treating fuzacidine, or a salt thereof, or a derivative thereof in a plant, its seed or its habitat.

본 발명의 푸자리시딘은 저농도에서 식물에 대하여 식물병에 대한 저항성을 유도하므로 식물의 식물병 저항성을 유도하는 방법에서 유용하게 사용할 수 있다. Fuzacidine of the present invention can be usefully used in a method of inducing plant disease resistance to plants at low concentrations to induce resistance to plant diseases.

상기 푸자리시딘은 LI-F04a, LI-F04b, LI-F05a, LI-F05b, LI-F08a 및 LI-F08b를 모두 포함하는 것이 바람직하나, LI-F04a, LI-F04b, LI-F05a, LI-F05b, LI-F08a 및 LI-F08b로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나이상의 성분을 포함하는 것이라면 본 발명의 식물병에 대한 저항성 유도제로서 사용가능하다.The fuzacidin is preferably LI-F04a, LI-F04b, LI-F05a, LI-F05b, LI-F08a and LI-F08b, but LI-F04a, LI-F04b, LI-F05a, LI Any one or more components selected from the group consisting of -F05b, LI-F08a and LI-F08b can be used as inducers of resistance to plant diseases of the present invention.

상기 대상 식물은 쌍자엽 식물 또는 단자엽 식물인 것이 바람직하며, 담배, 오이, 고추, 토마토, 배추, 밀, 보리로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.The target plant is preferably a dicotyledonous plant or monocotyledonous plant, preferably selected from the group consisting of tobacco, cucumber, pepper, tomato, cabbage, wheat, barley, but is not limited thereto.

상기 식물병은 역병, 무름병, 세균성점무늬병, 들불병, 탄저병, 모잘록병, 시들음병, 뿌리썩음병, 잿빛곰팡이병, 풋마름병, 잎마름병, 덩굴쪼김병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.The plant disease is preferably selected from the group consisting of late blight, inflorescence, bacterial spot pattern disease, wild fire disease, anthrax disease, mozzarella disease, wilting disease, root rot disease, gray mold disease, green blight disease, leaf blight disease, vine cutting disease, but is not limited thereto. .

본 발명의 방법에서 사용되는 푸자리시딘, 이의 염, 또는 이의 유도체의 함량은 대상 식물의 종류, 식물병의 종류 및 상태, 처리시기 및 방법 등에 따라 적절히 조정될 수 있으나 통상 10 ng/㎖(0.01 ppm) 내지 16 ㎍/㎖(16 ppm)으로 포함하는 것이 바람직하고, 10 ng/㎖(0.01 ppm) 내지 1 ㎍/㎖(1 ppm)으로 포함하는 것이 더욱 바람직하며, 10 ng/㎖(0.01 ppm) 내지 1 ㎍/㎖(1 ppm)으로 포함하는 것이 가장 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다. The content of fuzacidine, salts thereof, or derivatives thereof used in the method of the present invention may be appropriately adjusted depending on the type of plant, the type and condition of plant diseases, the treatment time and method, etc., but it is usually 10 ng / ml (0.01). ppm) to 16 μg / ml (16 ppm), more preferably 10 ng / ml (0.01 ppm) to 1 μg / ml (1 ppm), and 10 ng / ml (0.01 ppm) ) To 1 μg / ml (1 ppm), but is not limited thereto.

상기 방법에 있어서, 추가적으로 상기 조성물에 식물 생장 촉진 및 식물병 방제 효과가 있는 미생물을 포함하는 것이 바람직하며, 상기 식물 생장 촉진 및 식물병 방제 효과가 있는 미생물은 아씨네토박터(Acinetobacter)속, 아그로박테리움(Agrobacterium)속, 아쓰로박터(Arthrobacter)속, 아조스피릴럼(Azospirillum)속, 바실러스(Bacillus)속, 브라디히조비움(Bradyrhizobium)속, 프랑키아(Frankia)속, 슈도모나스(Pseudomonas)속, 라이조비움(Rhizobium)속, 세라시아(Serratia)속, 패니바실러스(Paenibacillus) 속 및 찌오바실러스(Thiobacillus)속 균으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이 바람직하며, 패니바실러스 폴리믹사(Penibacillus polymyxa)인 것이 더욱 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다. In the above method, the composition further comprises a microorganism having the effect of promoting plant growth and controlling plant diseases, and the microorganism having the effect of promoting plant growth and controlling plant diseases is Acinetobacter genus, Agro. tumefaciens (Agrobacterium) into, ahsseuro bakteo (Arthrobacter) in the azo RY rilreom (Azospirillum) genus Bacillus (Bacillus), A bra Grundig tank emptying (Bradyrhizobium), A Franc Escherichia (Frankia) genus Pseudomonas (Pseudomonas), A It is preferably selected from the group consisting of the genus Rhizobium , Serratia , Paenibacillus and Thiobacillus , and more preferably Penibacillus polymyxa . However, it is not limited thereto.

상기 방법의 적용에 있어서, 통상 일반적으로 행하지고 있는 방법, 즉 살포(예를 들면 분무, 미스팅, 아토마이징, 분말 살포, 과립 살포, 수면시용, 상시용(箱施用) 등), 토양시용(예를 들면 혼입, 관주 등), 표면시용(예를 들면 도포, 도말법, 피복 등), 침지, 독이(毒餌) 시용 등에 의해 행할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 그 사용량은, 그 제형, 피해상황, 적용방법, 적용장소 등에 따라 적절히 결정할 수 있다. 또한, 상기 방법에 있어서, 추가로 통상의 다른 생물농약, 합성농약, 또는 비료와 함께 제제화하거나 혼합하여 사용할 수도 있다.In the application of the above method, a method generally performed generally, that is, spraying (for example, spraying, misting, atomizing, powder spraying, granulating spraying, sleeping, normal, etc.), soil application ( For example, mixing, irrigation, etc.), surface application (for example, coating, smearing, coating, etc.), dipping, poisoning, etc. can be performed, but it is not limited to this. The amount to be used can be appropriately determined according to the dosage form, the damage situation, the application method, the application place, and the like. In the above method, it may further be formulated or mixed with other conventional biopesticides, synthetic pesticides, or fertilizers.

상기 식물병은 무름병, 들불병, 탄저병, 역병, 모잘록병, 시들음병, 뿌리썩음병, 잿빛곰팡이병, 풋마름병, 잎마름병, 덩굴쪼김병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
The plant disease is preferably selected from the group consisting of incurable disease, wild fire disease, anthrax, late blight, mossock disease, wilted disease, root rot disease, ash fungus, green blight disease, leaf blight, vine cutting disease, but is not limited thereto.

[[ 실시예Example ]]

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
However, the following examples are illustrative of the present invention, and the present invention is not limited to the following examples.

<< 실시예Example 1>  1> 패니바실러스Fanny Bacillus 폴리믹사Polyamic acid 균으로부터  From bacteria 푸자리시딘의De Perez of Dein 분리 및 동정  Isolation and identification

본 발명자들이 사용한 패니바실러스 폴리믹사 E681 균은 식물유용균으로서(특허 제 0220402호, 기탁균주번호: KCTC 8801P, 현재 특허권은 소멸됨) 발명자 박창석 교수로부터 제공을 받아 사용하였다. 균주를 기탁할 당시에는 바실러스 폴리믹사(Bacillus polymyxa) E681 균으로 명명하였으나 그 후 Ash C. 등에 의해 새로 도입된 분류체계(Ash, C. et al ., 1993. Antonie van Leeuwenhoek . 64: 253-260)에 의해 패니바실러스(Paenibacillus) 속명을 적용하여 현재의 균주명 즉 '패니바실러스 폴리믹사 E681'로 개명하였다. 상기 균주를 포도당을 3% 첨가한 tryptic soy broth(TSB)를 이용하여 30℃에서 3일간 진탕배양 한 후 배양액을 부탄올을 이용하여 추출하여 약 10배 농축된 시료를 준비하였다. 배양액 내의 목적 대사산물(푸자리시딘) 생산 확인을 위하여 페이퍼 디스크 방법 (paper disk method)으로 식물병원성 곰팡이인 푸자리움 옥시스포룸 (Fusarium oxysporum)과 그람양성 세균인 마이크로코코스 루티우스 (Micrococcus luteus)에 대해 성장저해활성을 검정한 결과 우수한 활성, 즉 성장저해 환을 나타냄을 확인하였다. 푸자리시딘의 분리ㆍ정제를 위해 부탄올 추출(n-BuOH extract), 실리카젤 크로마토그라피(silica gel column flash chromatography, Merck) 및 세파텍스 컬럼 크로마토그라피(sephadex LH-20 column chromatography, Pharmacia)의 방법을 이용하였다. 이 3단계 정제과정을 통해 푸자리시딘 시료를 확보하였고 역상 컬럼 (X-Terra, Waters Co.)이 장착된 LC/MS 분석기 (Thermo Electron Co.)을 통해 시료 내에 6종의 푸자리시딘이 혼합되어 존재함을 밝혔다. 이 푸자리시딘 혼합 시료를 C-18 역상 컬럼 (YMC Co.)이 장착된 HPLC(Shimadzu Co.) 기기를 통하여 6종의 푸자리시딘을 분획하였다. 이때 이용되었던 이동상은 32% acetonitrile을 이용하였다. 질량분석기를 이용하여 분석한 결과 6종의 분자량은 각각 883, 897(2종), 911(2종) 및 925 달톤(Dalton) 이었으며 이들 푸자리시딘 시료에 대해 아미노산 조성의 분석을 위하여 푸자리시딘 시료를 pico-tag 방법으로 가수분해하여 Pico-tag 컬럼 (Waters Co.)이 장착된 HPLC 기기 (Waters Co.)를 통하여 아미노산 조성을 분석하였다. 이들은 문헌에 보고된 푸자리시딘 종류 중 푸자리시딘 A(fusaricidin A), 푸자리시딘 B(fusaricidin B), LI-F5a, LI-F5b, LI-F8a 및 LI-F8b에 해당되는 것을 확인하였다.
The present invention was used by the inventors of the present invention Professor Chang-Seok Park (Patent Bacillus polymixes E681) as a plant-utilized bacterium (Patent No. 0220402, deposited strain No .: KCTC 8801P, the current patent is expired). At the time of deposit of the strain is Bacillus miksa poly (Bacillus polymyxa ) E681, but the classification system newly introduced by Ash C. et al (Ash, C. et al . , 1993. Antonie van Leeuwenhoek . 64: 253-260) was applied to the genus Paenibacillus ( Penbacillus ) genus was renamed to the current strain name 'Panibacillus polymixes E681'. The strain was shaken and cultured at 30 ° C. for 3 days using tryptic soy broth (TSB) added with 3% glucose, and the culture solution was extracted with butanol to prepare a sample about 10-fold concentrated. To confirm the production of the target metabolite (fuzacidin) in the culture medium, Fusarium , a phytopathogenic fungus, Fusarium , was used as a paper disk method. oxysporum ) and Gram-positive bacteria Micrococcus luteus ), the growth inhibition activity assay was confirmed that the excellent activity, that is, the growth inhibition ring. Method for butanol extraction (n-BuOH extract), silica gel column flash chromatography (Merk) and sephadex LH-20 column chromatography (Pharmacia) for the separation and purification of fuzacidine Was used. This three-stage purification process was used to obtain fuzacidin samples and six fucicidins in the sample through an LC / MS analyzer (Thermo Electron Co.) equipped with a reversed phase column (X-Terra, Waters Co.). Revealed that it is mixed. This fuzacidin mixed sample was fractionated from six fuzacidins via a HPLC (Shimadzu Co.) instrument equipped with a C-18 reverse phase column (YMC Co.). The mobile phase used was 32% acetonitrile. The molecular weights of the six species were 883, 897 (two species), 911 (two species) and 925 Daltons, respectively. Sidine samples were hydrolyzed by the pico-tag method and the amino acid composition was analyzed by HPLC instrument (Waters Co.) equipped with a Pico-tag column (Waters Co.). These correspond to the fusaricidin A, fusaricidin B, LI-F5a, LI-F5b, LI-F8a, and LI-F8b of the fusicidin A reported in the literature. Confirmed.

<< 실시예Example 2>  2> 고추묘에On pepper seedlings 대한  About 푸자리시딘의De Perez of Dein 병 저항성 유도효과 검정 Disease resistance induction effect test

본 발명자들은 푸자리시딘의 식물에 대한 유용성을 연구하던 중 이미 알려진 식물병원성 미생물에 대한 항균력 외에 낮은 농도에서 식물의 병 저항성을 유도하는 사실을 하기 실험을 통해 발견하였다.The inventors of fuzacidin While studying the usefulness of plants, in addition to the known antimicrobial activity against phytopathogenic microorganisms, the fact that induce the disease resistance of plants at low concentrations was found through the following experiment.

<2-1> <2-1> 푸자리시딘의De Perez of Dein 고추묘Pepper seedling 관주처리에In cross-processing 의한  by 세균성점무늬병Bacterial spot disease 방제효과 Control effect

상기 실시예 1에서 수득한 푸자리시딘 시료(6종류의 혼합물)를 각각 메탄올 및 멸균증류수를 이용하여 용해ㆍ희석하여 10 ng/㎖(=0.01 ppm) 및 1 ㎍/㎖(=1 ppm) 농도의 희석액을 준비하였다. 고추('부강' 품종) 유묘의 본엽이 3-4장 되었을 때 고추 뿌리에 상기에서 준비한 6종류의 푸자리시딘 희석 시료(실험군)를 각각 관주처리 하였다. 양성 대조군으로 페니바실러스 폴리믹사 E681(Paenibacillus polymyxa E681) 균주(균밀도, 1x108 cfu/㎖) 및 BTH[benzo-(1,2,3)-thiadiazole-7-carbothioic acid S-methyl ester, 1.0 mM]를, 음성 대조군으로 푸자리시딘 생합성 효소 유전자(fusA)가 불활성화된 변이균주(균밀도, 1x108 cfu/㎖) 및 멸균증류수를 상기 실험군과 동일한 방식으로 관주처리 하였다. Fuzacidine samples (six kinds of mixtures) obtained in Example 1 were dissolved and diluted with methanol and sterile distilled water, respectively, to give 10 ng / ml (= 0.01 ppm) and 1 μg / ml (= 1 ppm). Dilutions of concentration were prepared. When the main leaves of red pepper ('Bujiang' variety) seedlings were 3-4 sheets, six kinds of dilution samples (experimental group) prepared above were irrigated on the pepper roots. As a positive control, a strain of Paenibacillus polymyxa E681 (Bacterial density, 1x10 8 cfu / ml) and BTH [benzo- (1,2,3) -thiadiazole-7-carbothioic acid S-methyl ester, 1.0 mM ], As a negative control, the mutant strain ( fuel density, 1 × 10 8 cfu / ml) and sterile distilled water in which fuzacidine biosynthetic enzyme gene ( fusA ) was inactivated was irrigated in the same manner as the experimental group.

그 결과, 처리 1주일 후 세균성점무늬 병원균(Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria)(균밀도, 1x106 cfu/㎖)을 고추잎에 주입하여 면역반응을 관찰한 결과 10 ng/㎖ 과 1 ㎍/㎖ 두 가지 농도에서 모두 병 억제 효과가 나타났고 특히 10 ng/㎖의 낮은 농도에서 더 우수한 효과를 나타내었는데 이는 P. polymyxa E681 균 자체를 관주처리 했을 때와 비슷한 정도의 효과였다(도 2). 따라서 푸자리시딘 유전자가 불활성화된 변이균주의 경우 병 억제 효과가 크게 낮아지는 것으로 보아 푸자리시딘이 식물의 유도저항성 발현에 중요한 인자인 것으로 판단된다.
As a result, after 1 week of treatment, bacterial spot pattern pathogens ( Xanthomonas axonopodis pv. vesicatoria (even density, 1x10 6 cfu / mL) was injected into the pepper leaves and the immune response was observed. Both the concentrations of 10 ng / mL and 1 ㎍ / mL showed inhibitory effects. At lower concentrations, the effect was better, which was about the same as when the P. polymyxa E681 bacteria were irrigated (Fig. 2). Therefore, in the case of the mutant strains in which the fuzacidin gene is inactivated, the effect of inhibiting the disease is considerably lowered.

<2-2> <2-2> 푸자리시딘의De Perez of Dein 고추묘Pepper seedling 엽면Foliar 살포에 의한  By spraying 고추역병Pepper Plague 방제효과 Control effect

상기 실시에 1의 푸자리시딘의 3단계 정제과정 중에서 2단계의 실리카젤 크로마토그라피까지의 정제과정을 거쳐 얻은 푸자리시딘 시료를 메탄올 및 멸균증류수를 이용하여 용해ㆍ희석하여 0.1, 1.0, 10, 100, 500 및 1000 ppm 농도의 희석액을 각각 준비하였다. 대조 약제로는 고추역병균 화학 약제인 디메소모르프(1 ppm 농도)를 사용하였다.Fuzisidine samples obtained through the purification process from the three-stage purification process of fuzacidin of Example 1 to the silica gel chromatography in two stages were dissolved and diluted with methanol and sterile distilled water to obtain 0.1, 1.0, Dilutions of 10, 100, 500 and 1000 ppm concentrations were prepared respectively. As a control drug, dimesomorph (1 ppm concentration), which is a caybean germ disease chemical agent, was used.

고추역병균은 국립농업과학원 공시균주인 피토프토라 캡사이시 217(Phytophthora capsici 217) 균주를 사용하였다. 이 공시균을 V-8 juice에 7일간 배양한 후, 배양된 역병균의 콜로니를 살균 증류수로 5회 헹구어 여분의 V8 배지성분을 제거한 다음 증류수를 페트리 디쉬 당 10 ㎖ 씩 추가하여 형광 불빛아래 상온에서 1일간 배양시켜 형성된 유주자낭을 4℃ 저온에 시험 전까지 보관하여 실험에 사용하였다.The causative bacterium of cayenne pepper is Phytophthora capsaisi, 217Phytophthora capsici 217) strain was used. After incubating the specimen for 7 days in V-8 juice, the colony of the cultured late blight was rinsed five times with sterile distilled water to remove the extra V8 medium, and then distilled water was added to each 10 ml per petri dish at room temperature under fluorescent light. The cultured saccharin formed by culturing for 1 day at was stored at 4 ° C. before the test and used for the experiment.

고추 종자('마니따' 품종)를 Na-hyperchloride 1% 용액으로 표면 살균한 다음 30℃로 24시간 최아시킨 후 묘상에 파종하였다. 발아 2주 후 flora guard(TKS 2) 상토에 이식하여 육묘하였다. 2주간 육묘한 묘의 근권에 역병균을 1.0x106 cystospore/㎖ 의 농도로 토양 관주하였다. 앞에서 준비한 푸자리시딘 시료와 대조구 디메소모르프는 역병균 관주처리 하기 전 및 후에 고추묘 엽면에 살포하였다. Pepper seeds ('Manita' varieties) were surface sterilized with a 1% solution of Na-hyperchloride, and then seeded at seedlings for 24 hours at 30 ° C. Two weeks after germination, they were transplanted into flora guard (TKS 2) topsoil and grown. Plasma seedlings were irrigated with soil at a concentration of 1.0 × 10 6 cystospore / ml for 2 weeks. The previously prepared fuzacidin sample and the control dimethomorph were sprayed on the leaves of pepper seedlings before and after the late blight irrigation.

상기 실험을 통해 푸자리시딘의 고추역병에 대한 예방 및 치료효과를 살펴본 결과 표 1에 나타난 바와 같이 후처리 보다는 전처리에서, 높은 농도 보다는 낮은 농도로 처리 할 경우에, 특히 1 ppm에서 우수한 방제효과를 나타내었다. 상기 결과로부터 푸자리시딘의 방제효과가 항균작용에 의해서가 아니라 저항성 유도에 의해 나타난 것임을 알 수 있었다. 1000 ppm의 고농도 처리 시 나타난 효과는 저항성 유도보다는 항생제로서의 기능에 의한 효과로 판단된다.
As a result of examining the prophylactic and therapeutic effect of fujarycidin against pepper blight through the experiments, as shown in Table 1, in the pretreatment rather than the post-treatment, when treated at a lower concentration than the high concentration, particularly at 1 ppm, excellent control effect Indicated. From the above results, it can be seen that the control effect of fuzacidin was not caused by antibacterial action but by resistance induction. The effect of high concentrations of 1000 ppm may be attributed to its function as an antibiotic rather than to induce resistance.

푸사리시딘의 엽면살포에 의한 고추역병 방제효과Effect of Fusarisidine Foliar Spray on Red Pepper Disease 처리process 질병 증상의 세기(%)Intensity of disease symptoms (%) 병에걸린 식물(%)Diseased plants (%) 전처리Pretreatment 후처리After treatment 전처리Pretreatment 후처리After treatment 대조구1(무처리)Control 1 (No Treatment) 83.3 83.3 81.7 81.7 100.0 100.0 100.0 100.0 대조구2(디메소모르프, 1 ppm)Control 2 (Dimesomorph, 1 ppm) 0.0 0.0 33.3 33.3 0.0 0.0 33.3 33.3 푸자리시딘 0.1 ppmFuzacidin 0.1 ppm 45.0 45.0 40.0 40.0 66.7 66.7 50.0 50.0 푸자리시딘 1 ppmFuzacidin 1 ppm 6.7 6.7 78.3 78.3 50.0 50.0 100.0 100.0 푸자리시딘 10 ppmFuzacidin 10 ppm 35.0 35.0 75.0 75.0 83.3 83.3 100.0 100.0 푸자리시딘 100 ppmFuzacidin 100 ppm 48.3 48.3 91.7 91.7 83.3 83.3 100.0 100.0 푸자리시딘 1000 ppmFuzacidin 1000 ppm 35.0 35.0 78.3 78.3 50.0 50.0 83.3 83.3

<2-3> <2-3> 푸자리시딘의De Perez of Dein 고추묘Pepper seedling 관주처리에In cross-processing 의한  by 고추역병Pepper Plague 방제효과  Control effect

상기 실시예 2-2와 동일한 방법으로 푸자리시딘 시료, 고추역병균 및 고추 묘를 준비하고 고추역병균을 토양 관주하기 전에 푸자리시딘 시료를 먼저 고추묘 뿌리에 관주처리 하였다. In the same manner as in Example 2-2, fuzaridin samples, pepper blight and pepper seedlings were prepared, and fuzacidine samples were first irrigated to pepper seed roots before irrigation of pepper blight.

그 결과, 도 3 및 표 2의 결과를 얻었다. 실시예 2-2 경우와 마찬가지로 1 ppm 농도에서 가장 좋은 방제효과를 나타내었고, 1000 ppm의 고농도에서 나온 효과는 저항성 유도보다는 항생제로서의 기능에 의한 효과로 판단된다.
As a result, the results of FIG. 3 and Table 2 were obtained. As in Example 2-2, the best control effect was obtained at the concentration of 1 ppm, and the effect from the high concentration of 1000 ppm was judged to be due to its function as an antibiotic rather than to induce resistance.

푸사리시딘 관주처리에 의한 고추역병 방제효과Control of Pepper Blight Disease by Fusarisidine Irrigation 처리process 질병 증상의 세기(%)Intensity of disease symptoms (%) 병에걸린 식물(%)Diseased plants (%) 대조구1(무처리)Control 1 (No Treatment) 83.3 83.3 100.0 100.0 대조구2(디메소모르프, 1 ppm)Control 2 (Dimesomorph, 1 ppm) 3.3 3.3 33.3 33.3 푸자리시딘 0.1 ppmFuzacidin 0.1 ppm 53.3 53.3 83.3 83.3 푸자리시딘 1 ppmFuzacidin 1 ppm 3.3 3.3 33.3 33.3 푸자리시딘 10 ppmFuzacidin 10 ppm 36.7 36.7 50.0 50.0 푸자리시딘 100 ppmFuzacidin 100 ppm 56.7 56.7 100.0 100.0 푸자리시딘 1000 ppmFuzacidin 1000 ppm 36.7 36.7 66.7 66.7

<2-4> <2-4> 푸자리시딘의De Perez of Dein 엽육주사에In lobe injection 의한 오이 무름병 방제효과  Cucumber purifying disease control effect

세균성 무름병균으로서 국립농업과학원 보존균인 E. carotovora SCC1 균주를 LB한천배지에 24시간 배양한 다음 살균 증류수에 1x108 cfu/㎖의 농도로 현탁하여 식물체 접종에 사용하였다. 오이('은성 백다다기' 품종)를 Na-hypercholoride 1%로 표면살균 후 10% perite를 혼합한 floraguard(TKS 2) 상토에 이식하여 2주간 육묘한 다음 상기 실시예 2-2와 동일한 방법으로 준비한 푸자리시딘 시료를 엽육조직에 각각 주사하였다. 1주 후 무름병균인 E. carotovora SCC1을 엽면살포하여 접종하고 병 발생을 2주 후 까지 병 발생을 관찰하였다. As bacterial bacillus, E. carotovora SCC1 strain, which was preserved by the National Academy of Agricultural Science, was incubated in LB agar for 24 hours and then suspended in sterile distilled water at a concentration of 1x10 8 cfu / ml and used for plant inoculation. Cucumber ('Silver white tea cultivar') was transplanted to floraguard (TKS 2) soil mixed with 10% perite after surface sterilization with 1% Na-hypercholoride and seeded for 2 weeks, and then prepared in the same manner as in Example 2-2. Zaricidin samples were injected into the lamellae, respectively. After 1 week, E. carotovora SCC1 was inoculated with foliar spray, and disease development was observed until 2 weeks later.

그 결과, 표 3에 나타난 바와 같이, 0.1 ppm의 낮은 농도에서 가장 좋은 방제효과를 나타내었고, 100 ppm의 고농도에서 나온 효과는 저항성 유도보다는 항생제로서의 기능에 의한 효과로 판단된다.
As a result, as shown in Table 3, it showed the best control effect at the low concentration of 0.1 ppm, the effect from the high concentration of 100 ppm is judged to be due to the function as an antibiotic rather than resistance induction.

푸사리시딘 엽육주사에 의한 오이 무름병 방제효과Effect of Cucumber Follicle Injection on Cucumber Soft Disease 처리process 질병 증상의 세기(%)Intensity of disease symptoms (%) 대조구1(무처리)Control 1 (No Treatment) 66.3 66.3 대조구2(BTH, 0.1 mM)Control 2 (BTH, 0.1 mM) 43.1 43.1 푸자리시딘, 0.1 ppmFuzacidin, 0.1 ppm 27.5 27.5 푸자리시딘, 1 ppmFuzacidin, 1 ppm 56.4 56.4 푸자리시딘, 10 ppmFuzacidin, 10 ppm 81.3 81.3 푸자리시딘, 100 ppmFuzacidin, 100 ppm 34.4 34.4

<< 실시예Example 3>  3> 푸자리시딘의De Perez of Dein 주요  main 식물병원균에Phytopathogenic bacteria 대한 최소억제농도  Minimum inhibitory concentration

상기 실시예 2-2와 동일한 방법으로 준비한 푸자리시딘 시료를 사용하여 국립농업과학원 농업미생물과에서 병에 걸린 식물로부터 직접 분리하여 보관해온 식물병원성 곰팡이균들을 공시균으로 사용하여 최소억제농도를 구하였다. 최소억제농도는 푸자리시딘 시료를 곰팡이 배지인 PDA(Potato Dextrose Agar, Difco)에 여러 농도 즉, 1.0, 2.0, 4.0, 8.0, 16.0, 32.0, 64.0, 128.0, 256.0 및 512.0 ppm이 되도록 무균적으로 첨가한 다음 페트리디쉬(87.5mm)에 분주하여 고체배지를 준비한 다음 공시병원균의 균사편을 5mm 크기의 코르크 보러로 잘라내어 고체배지 위에 일정한 간격으로 놓고 25℃의 항온기에서 3일간 배양 후 성장 저해 효과를 관찰함으로써 최소 억제농도를 결정하였다.The minimum inhibitory concentration was determined by using phytopathogenic fungi, which were directly isolated from diseased plants in the National Agricultural Research Institute of Agriculture and Microbiology, using the fuzacidin sample prepared in the same manner as in Example 2-2. Obtained. The minimum inhibitory concentrations are aseptic in the sample of fuzacidin in various concentrations (1.0, 2.0, 4.0, 8.0, 16.0, 32.0, 64.0, 128.0, 256.0, and 512.0 ppm) in the fungal medium PDA (Potato Dextrose Agar, Difco). After adding to the Petri dish (87.5mm) to prepare a solid medium, and then the mycelia of the pathogens were cut with a cork of 5mm size, placed at regular intervals on a solid medium and incubated for 3 days in a thermostat at 25 ℃ growth inhibition effect The minimum inhibitory concentration was determined by observing.

그 결과 표 4의 결과를 얻었다. 본 발명의 푸자리시딘은 피토프토라 캡사이시 및 피텀 얼티멈(Pythum ultimum)에 대해 비교적 우수한 항생활성 나타내었다. 특히, 푸자리시딘은 16 ppm 이상에서 식물 병원균에 대한 항생효과가 나타나는 것을 확인하여 상기 실시예 2-1 내지 실시예 2-4에서 확인한 식물병 억제 효과가 항생효과에 의한 것이 아님을 확인하였다.
As a result, the result of Table 4 was obtained. Fuzacidin of the present invention exhibited relatively good anti-bioactivity against phytophthora capsaicin and Pythum ultimum . In particular, fuzacidin was confirmed that the antibiotic effect on the plant pathogens at 16 ppm or more confirmed that the plant disease inhibitory effect confirmed in Examples 2-1 to 2-4 was not due to the antibiotic effect. .

푸자리시딘의De Perez of Dein 주요  main 식물병원균에Phytopathogenic bacteria 대한 최소억제농도( Minimum inhibitory concentration MICMIC )) 곰팡이성 병원균Fungal pathogens MIC(ppm)MIC (ppm) 라이족토니아 솔라니(Raiztonia Solani ( RhizoctoniaRhizoctonia solanisolani )) >512> 512 푸자리움Fujingum 옥시스포룸( OxySproom ( FusariumFusarium oxysporumoxysporum )) 128128 피트포토로In pit photo 캡사이시( Capsai City ( PhytphthoraPhytphthora capsicicapsici )) 1616 Call fp토트리춤fp totree dance 아쿠타툼( Akutatum ( ColletotrichumColletotrichum acutatumacutatum )) 256256 피티움Pitium 얼티멈( Ultimate ( PythiumPythium ultimumultimum )) 1616 알터나리아Alternaria 알터네이트( Alternate ( AlternariaAlternaria alternatealternate )) 256256 포트리티스 시네레아( Botrytis cinerea) Portree teeth Cine Leah (Botrytis cinerea ) 3232 셀레로티니아Sellotininia 셀레로티오룸( Celerio Tio Room SclerotiniaSclerotinia sclerotiorumsclerotiorum )) 3232

이상에서 기술한 여러 실시예에서 나타낸 바과 같이 패니바실러스 폴리믹사 E681균 배양액으로부터 분리ㆍ정제한 푸자리시딘을 낮은 농도로 희석하여 만든 시료(실시예 1에서는 0.01~1 ppm 농도, 실시예 2에서는 0.1~1 ppm 농도)를 고추 및 오이 유묘에 관주, 엽면살포 및 엽육주사 등의 방법으로 전처리 하였을 때 고추 세균성점무늬병, 고추역병, 오이무름병에 대해 우수한 방제효과를 나타내었으며 따라서 낮은 농도에서 효율적인 저항성 유도가 이루어지는 것으로 나타났다. As shown in the various examples described above, a sample prepared by diluting fuzacidin isolated and purified from a culture medium of F. Bacillus polymix Inc. E681 to a low concentration (0.01 to 1 ppm in Example 1, Example 2 When 0.1 ~ 1 ppm concentration) was pretreated to red pepper and cucumber seedlings by irrigation, foliar spraying and foliar injection, it showed excellent control effect against red pepper bacterial spot pattern disease, red pepper blight and cucumber urine disease. Appeared to be done.

상기 결과들을 통해 본 발명의 푸자리시딘이 기존에 알려진 항생물질로서의 기능 외에 저항성유도기작을 통해 우수한 식물병 방제 효과를 나타냄을 확인하였고, 식물 유용기능 미생물 및 미생물의 배양액을 함께 처리할 경우에도 그 효과를 기대할 수 있음을 알 수 있었다.Through the above results, it was confirmed that fuzacidin of the present invention exhibited excellent plant disease control effects through resistance induction mechanisms in addition to the functions of antibiotics known in the prior art, even when treated with plant useful microorganisms and culture medium of microorganisms. It can be seen that the effect can be expected.

본 발명에서는 푸자리시딘의 유용한 효과를 검정하기 위해 정제된 시료를 준비하여 사용하였지만 실제 농업적 활용에 있어서는 패니바실러스 폴리믹사균 배양 상등액이나 1차 용매 추출물 등 부분정제된 푸자리시딘을 사용할 수 있을 것이다.
In the present invention, a purified sample was prepared and used for assaying the useful effect of fuzacidin, but in actual agricultural use, partially purified fuzacidine, such as F.C. Could be.

Claims (13)

삭제delete 삭제delete 삭제delete LI-F04a, LI-F04b, LI-F05a, LI-F05b, LI-F08a 및 LI-F08b을 포함하는 푸자리시딘(fusaricidin)을 유효성분으로 함유하는 고추역병, 고추 세균성점무늬병 및 오이 무름병으로 구성된 군으로부터 선택된 식물병 저항성 유도제.
Consisting of pepper blight, pepper bacterial spot pattern disease, and cucumber beetle containing fusaricidin as an active ingredient, including LI-F04a, LI-F04b, LI-F05a, LI-F05b, LI-F08a, and LI-F08b Plant disease resistance inducer selected from the group.
삭제delete 제 4항에 있어서, 상기 푸자리시딘을 10 ng/㎖(0.01 ppm) 내지 1 ㎍/㎖(1 ppm)으로 포함하는 것을 특징으로 하는 저항성 유도제.
The resistance inducing agent according to claim 4, wherein the fuzacidine is contained in an amount of 10 ng / ml (0.01 ppm) to 1 µg / ml (1 ppm).
삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 고추 또는 오이, 그의 종자, 또는 그의 서식지에 LI-F04a, LI-F04b, LI-F05a, LI-F05b, LI-F08a 및 LI-F08b을 포함하는 푸자리시딘을 처리하는 단계를 포함하는 고추역병, 고추 세균성점무늬병 및 오이 무름병으로 구성된 군으로부터 선택된 식물병에 대한 저항성 유도방법.
Capsicum blight, comprising treating fusicidin comprising LI-F04a, LI-F04b, LI-F05a, LI-F05b, LI-F08a and LI-F08b to pepper or cucumber, its seeds, or its habitat A method of inducing resistance to plant diseases selected from the group consisting of red pepper bacterial spot pattern disease and cucumber radish disease.
삭제delete 제 11항에 있어서, 상기 푸자리시딘은 10 ng/㎖(0.01 ppm) 내지 1 ㎍/㎖(1 ppm)으로 처리하는 것을 특징으로 하는 식물병에 대한 저항성 유도방법.12. The method of claim 11, wherein the fuzacidine is treated at 10 ng / ml (0.01 ppm) to 1 µg / ml (1 ppm).
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