KR101280441B1 - Food composition and cosmetic composition containing casein phosphopeptide-h having antioxidation activity and cell activation - Google Patents

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Abstract

본 발명은 마늘, 흑마늘, 양파, 인삼 및 홍삼으로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상과 카제인 포스포펩티드-H (Mix-pep.), 베타 카제인-H, 베타 카제인-H를 함유하는 우유 및 베타 카제인-H를 함유하는 우유를 발효시킨 발효유로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 식품 조성물로서, 맛이 부드럽고, 냄새가 적으며, 항산화 기능 및 세포활성화 기능이 우수할 뿐만 아니라 미네랄 성분의 체내흡수도 우수한 특성을 나타낸다. The present invention relates to milk and beta casein- containing one or more selected from the group consisting of garlic, black garlic, onion, ginseng and red ginseng and casein phosphopeptide-H (Mix-pep.), Beta casein-H, beta casein-H A food composition comprising at least one selected from the group consisting of fermented milk fermented with milk containing H, which is soft in taste, low in odor, and excellent in antioxidant function and cell activation function, Body absorption also shows excellent characteristics.

마늘, 흑마늘, 베타 카제인-H, 카제인 포스포펩티드-H (Mix-pep.), 항산화, 세포활성화 Garlic, black garlic, beta casein-H, casein phosphopeptide-H (Mix-pep.), Antioxidant, cell activation

Description

황산화 활성 및 세포활성화 기능이 있는 카제인 포스포펩티드-H(CPP-H)를 유효성분으로 함유하는 식품 조성물 및 화장품 조성물 {FOOD COMPOSITION AND COSMETIC COMPOSITION CONTAINING CASEIN PHOSPHOPEPTIDE-H HAVING ANTIOXIDATION ACTIVITY AND CELL ACTIVATION}FOOD COMPOSITION AND COSMETIC COMPOSITION CONTAINING CASEIN PHOSPHOPEPTIDE-H HAVING ANTIOXIDATION ACTIVITY AND CELL ACTIVATION}

본 발명은 마늘, 흑마늘, 양파, 인삼 및 홍삼으로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상과 카제인 포스포펩티드-H (Mix-pep.), 베타 카제인-H, 베타 카제인-H를 함유하는 우유 및 베타 카제인-H를 함유하는 우유를 발효시킨 발효유로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 식품 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to milk and beta casein- containing one or more selected from the group consisting of garlic, black garlic, onion, ginseng and red ginseng and casein phosphopeptide-H (Mix-pep.), Beta casein-H, beta casein-H It relates to a food composition comprising at least one selected from the group consisting of fermented milk fermented with milk containing H.

보다 구체적으로 본 발명은 마늘, 흑마늘, 양파, 인삼 및 홍삼으로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상과 카제인 포스포펩티드-H (Mix-pep.), 베타 카제인-H, 베타 카제인-H를 함유하는 우유 및 베타 카제인-H를 함유하는 우유를 발효시킨 발효유로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상을 포함하여 맛이 부드럽고, 냄새가 적으며, 항산화 기능 및 세포활성화 기능이 우수할 뿐만 아니라 미네랄 성분의 체내흡수도 우수한 식품 조성물에 관한 것이다. More specifically, the present invention provides a milk containing one or more selected from the group consisting of garlic, black garlic, onion, ginseng and red ginseng and casein phosphopeptide-H (Mix-pep.), Beta casein-H, beta casein-H, and Food that is soft in taste, low in odor, excellent in antioxidant function and cell activation function as well as excellent in body absorption of minerals, including one or more selected from the group consisting of fermented milk fermented with milk containing beta casein-H It relates to a composition.

종래부터 마늘은 항산화 작용, 항혈전 작용, 항암작용, 콜레스테롤의 저하 및 노화 방지 기능이 있음이 알려져 왔다. 이와 같은 마늘의 작용은 알린의 분해산물인 알리신에 의한 것이다. 마늘의 대표적인 유효성분은 알린(allin)과 스크르디닌(scordinnin)인데 알린은 갈거나 다지면 효소의 작용으로 알라신(allicin)이 된다. 알리신은 위와 같이 인체에 유익한 성분이나, 동시에 마늘 특유의 냄새와 자극적인 맛을 내는 원인이 된다. 따라서 마늘은 그 유익한 성분에도 불구하고, 다량 섭취가 용이하지 않다. Garlic has conventionally been known to have antioxidant, antithrombotic, anticancer, cholesterol lowering and anti-aging functions. This action of garlic is due to allicin, a degradation product of allin. Representative active ingredients of garlic are allin (allin) and scrindinin (scordinnin). Allin becomes an allicin (allicin) by the action of enzymes when ground or chopped. Allicin is a beneficial ingredient to the human body as described above, but at the same time causes a peculiar smell and irritant taste of garlic. Therefore, garlic is not easy to consume large amounts, despite its beneficial ingredients.

양파는 비타민 B1, B2, C등 비타민류와 칼슘, 인, 철분 등 미네랄 성분, 콜레스테롤을 분해시켜주는 페쿠친 성분 등 유익한 성분을 많이 포함하고 있어 오래 전부터 건강식품으로 널리 이용되고 있다. 그러나 양파도 강한 냄새와 미각을 마취시키는 특유의 매운 맛을 가지고 있어서 많은 양을 먹기에는 부적당하다.Onions contain vitamins such as vitamins B1, B2, and C, and minerals such as calcium, phosphorus, and iron, and pecuchin, which breaks down cholesterol, and have been widely used as health foods for a long time. However, onions also have a strong smell and peculiar spiciness that anesthetizes the taste, making them unsuitable for eating large quantities.

최근 마늘 및 양파의 특유의 냄새나 자극을 감소시키면서 양파 고유의 효능을 발휘하기 위해 여러 처리방법이 개발되어 왔다. 국내공개특허 제 10-315204호는 양파를 착즙기에 넣고 추출하여 양파음료를 제조하는 방법을 개시하고 있다. 마 늘의 경우는 마늘을 적당한 크기로 절단 또는 분쇄하여 열풍건조 및 냉동 건조한 마늘 가공품, 마늘음료 등의 건강보조식품이 출시되고 있다.Recently, various treatment methods have been developed in order to reduce the smell and irritation peculiar to garlic and onion, and to exhibit onion's inherent efficacy. Korean Laid-Open Patent Publication No. 10-315204 discloses a method for preparing onion beverage by extracting the onion into a juicer. In the case of garlic, health supplements such as hot air-dried and freeze-dried garlic processed products and garlic drinks have been released by cutting or crushing garlic to an appropriate size.

인삼과 홍삼은 한약재이자 건강식품으로, 국제적으로 그 효능이 인정되면서 다양한 제품으로 사용되고 있다. 인삼은, 옛날부터 인신이라고 부르는 장수식품으로 알려지고 있으며, 현대인들의 관심 속에 의학적으로 효능과 그 특성들이 재조명되고 있다. 인삼은 신체의 기능 저하 정상화, 혈액 질환 개선 효과, 소화기 장애 치료 효과, 신경계 치료 효과, 심장 질환 치료 효과, 피부 및 종양 등 치료 효과 등을 가지고 있다. Ginseng and red ginseng are Chinese herbal medicine and health food. Ginseng has long been known as a long-lived food, called human body, and medical efficacy and its characteristics are being reexamined in the interest of modern people. Ginseng has the effects of normalizing the deterioration of the body, improving blood diseases, treating digestive disorders, treating the nervous system, treating heart diseases, and treating skin and tumors.

홍삼은 제조 과정 중 비효소적 갈색화 반응이 촉진되어 많은 갈색화반응 생성물이 형성되고 그 중 말톨(maltol) 등과 같은 항산화 성분도 다량 생성되어 홍삼의 품질 안정에 크게 기여할 뿐 만 아니라 노화 억제 효과도 증가되는 것이 규명되었다. 또한 암세포증식을 억제하는 진세노사이드(ginsenoside Rh2) 파나시트리올(panaxytriol)을 함유하고 있다. 그러나 인삼과 홍삼은 고유의 쓴맛과 독특한 향이 있어 누구나 좋아하고 즐겨먹는 건강식품은 아니다. 특히 여성이나 어린이가 기호성을 가지고 취식하기에는 어려움이 있는 실정이다. Red ginseng promotes the non-enzymatic browning reaction during the manufacturing process, and many browning reaction products are formed. Among them, a large amount of antioxidants such as maltol are produced, which not only contributes to the stabilization of red ginseng, but also increases aging inhibitory effect. It was identified. It also contains ginsenoside (ginsenoside Rh2) panaxytriol, which inhibits cancer cell proliferation. However, ginseng and red ginseng have its own bitterness and unique aroma, so it is not a favorite health food for everyone. In particular, it is difficult for women and children to eat with palatability.

한편, 항산화활성이란 생체 내 활성산소의 생성을 방지하고 세포에 회복 불가능한 손상을 야기하는 산화현상을 방지하는 활성을 말한다. 안정한 상태의 산소는 효소계, 환원 대사, 화학약품, 공해물질, 광화학 반응과 같은 환경적 및 생화학적 요인 등에 의해 수퍼옥사이드 라디칼, 하이드록실 라디칼, 과산화수소와 같은 반응성이 큰 활성 산소로 전환되어 다양한 세포 구성 성분인 지질, 단백질, DNA를 산화시켜 염증을 유발하거나 여러 기관들을 손상시킨다고 알려저 있다. 활성산소의 작용은 체내 방어기구인 슈퍼옥사이드스뮤타제(SOD), 카틸라아제, 퍼옥시다아제 등의 항산화성 효소 및 비타민C, E, 글루타치온등의 항산화물질의 작용에 의하여 최소화 될 수 있으나, 이러한 생체방어력에 이상이 생기거나 과도한 활성산소에 노출될 경우 이 균형이 깨어져서 각종 질병이 유발된다는 것이 보고되고 있다.On the other hand, the antioxidant activity refers to the activity to prevent the production of free radicals in vivo and to prevent the oxidation phenomenon causing irreparable damage to the cell. Oxygen in a stable state is converted into highly reactive reactive oxygen such as superoxide radicals, hydroxyl radicals and hydrogen peroxide by various environmental and biochemical factors such as enzymes, reduction metabolism, chemicals, pollutants, and photochemical reactions. It is known to oxidize lipids, proteins, and DNA, causing inflammation or damaging various organs. The action of free radicals can be minimized by the action of antioxidants such as superoxide smistase (SOD), catylase, and peroxidase, and antioxidants such as vitamins C, E, and glutathione. It is reported that abnormalities or excessive exposure to free radicals cause this balance to break and cause various diseases.

본 발명의 목적은 마늘, 흑마늘, 양파, 인삼 및 홍삼으로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상과 카제인 포스포펩티드-H, 베타 카제인-H, 베타 카제인-H를 함유하는 우유 및 베타 카제인-H를 함유하는 우유를 발효시킨 발효유로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 식품 조성물을 제공하기 위한 것이다. It is an object of the present invention to contain at least one selected from the group consisting of garlic, black garlic, onion, ginseng and red ginseng and milk containing casein phosphopeptide-H, beta casein-H, beta casein-H and beta casein-H To provide a food composition comprising one or more selected from the group consisting of fermented milk fermented milk.

본 발명의 다른 목적은 항산화 기능 및 세포활성화 기능이 우수한, 마늘, 흑마늘, 양파, 인삼 및 홍삼으로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상과 카제인 포스포펩티드-H, 베타 카제인-H, 베타 카제인-H를 함유하는 우유 및 베타 카제인-H를 함유하는 우유를 발효시킨 발효유로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 식품 조성물을 제공하기 위한 것이다.It is another object of the present invention to contain one or more selected from the group consisting of garlic, black garlic, onion, ginseng and red ginseng and casein phosphopeptide-H, beta casein-H, and beta casein-H, which are excellent in antioxidant function and cell activation function. To provide a food composition, characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of fermented milk fermented milk and milk containing beta casein-H.

본 발명의 또 다른 목적은 냄새가 적고 맛이 부드러운, 마늘, 흑마늘, 양파, 인삼 및 홍삼으로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상과 카제인 포스포펩티드-H, 베 타 카제인-H, 베타 카제인-H를 함유하는 우유 및 베타 카제인-H를 함유하는 우유를 발효시킨 발효유로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 식품 조성물을 제공하기 위한 것이다. Another object of the present invention is a low odor and soft taste, containing one or more selected from the group consisting of garlic, black garlic, onion, ginseng and red ginseng and casein phosphopeptide-H, beta casein-H, beta casein-H To provide a food composition, characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of fermented milk fermented milk and milk containing beta casein-H.

본 발명의 또 다른 목적은 냄새가 적고, 맛이 부드러우며, 항산화 기능 및 세포활성화 기능이 우수하고 동시에 미네랄의 흡수까지 우수한, 마늘, 흑마늘, 양파, 인삼 및 홍삼으로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상과 카제인 포스포펩티드-H, 베타 카제인-H, 베타 카제인-H를 함유하는 우유 및 베타 카제인-H를 함유하는 우유를 발효시킨 발효유로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 식품 조성물을 제공하기 위한 것이다.Another object of the present invention is one or more selected from the group consisting of garlic, black garlic, onion, ginseng and red ginseng and casein with less smell, soft taste, excellent antioxidant and cell activation, and at the same time excellent mineral absorption It provides a food composition comprising at least one selected from the group consisting of phosphopeptide-H, beta casein-H, milk containing beta casein-H and fermented milk fermented milk containing beta casein-H It is to.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 식품조성물로부터 제조된 건강보조식품을 제공하기 위한 것이다. Still another object of the present invention is to provide a dietary supplement prepared from the food composition.

본 발명의 상기 및 기타의 목적들은 상세히 설명되는 본 발명에 의하여 모두 달성될 수 있다. The above and other objects of the present invention can be achieved by the present invention described in detail.

상기 기술적 과제를 이루기 위하여, 본 발명은 마늘, 흑마늘, 양파, 인삼 및 홍삼으로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상과 카제인 포스포펩티드-H, 베타 카제인-H, 베타 카제인-H를 함유하는 우유 및 베타 카제인-H를 함유하는 우유를 발효시킨 발효유로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 식품 조성물을 제공한다. In order to achieve the above technical problem, the present invention is one or more selected from the group consisting of garlic, black garlic, onion, ginseng and red ginseng and casein phosphopeptide-H, beta casein-H, beta casein-H milk and beta casein It provides a food composition comprising at least one selected from the group consisting of fermented milk fermented milk containing -H.

본 발명의 일 구체예에서, 상기 식품조성물은 카제인 포스포펩티드, 카제인, 일반우유 및 일반 발효유로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상을 더 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the food composition may further include one or more selected from the group consisting of casein phosphopeptide, casein, general milk and general fermented milk.

본 발명의 다른 구체예에서, 상기 식품조성물은 칼슘, 마그네슘, 셀레늄, 철, 인, 아이오딘, 아연, 칼륨, 코발트로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 더 포함할 수 있다.In another embodiment of the present invention, the food composition may further include one or more selected from the group consisting of calcium, magnesium, selenium, iron, phosphorus, iodine, zinc, potassium, cobalt.

상기 다른 기술적 과제를 이루기 위하여, 본 발명은 상기 식품 조성물로부터 제조된 건강보조식품을 제공한다.In order to achieve the above another technical problem, the present invention provides a dietary supplement prepared from the food composition.

본 발명의 일 구체예에서 상기 건강보조식품은 엑기스, 환, 젤, 잼, 분말, 푸딩, 제리, 사탕류 및 양갱으로 이루어진 군에서 선택된 하나의 제형으로 제조될 수 있다.In one embodiment of the present invention, the dietary supplement may be prepared in one formulation selected from the group consisting of extract, pill, gel, jam, powder, pudding, jerry, candy and yokan.

본 발명에 따른 마늘, 흑마늘, 양파, 인삼 및 홍삼으로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상과 카제인 포스포펩티드-H, 베타 카제인-H, 베타 카제인-H를 함유하는 우유 및 베타 카제인-H를 함유하는 우유를 발효시킨 발효유로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 식품 조성물은 냄새가 적고, 맛이 부드러우며, 항산화 작용 및 세포활성화 작용을 하고, 미네랄의 체내흡수를 촉진하며, 동시에 Probiotics가 더욱 다양하고 건강하다. One or more selected from the group consisting of garlic, black garlic, onion, ginseng and red ginseng and casein phosphopeptide-H, beta casein-H, beta casein-H milk and beta casein-H milk Food composition, characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of fermented milk fermented with less odor, soft taste, antioxidant activity and cell activation, promotes the absorption of minerals, and at the same time Probiotics More diverse and healthy

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명하기로 한다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명은 마늘, 흑마늘, 양파, 인삼 및 홍삼으로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상과 카제인 포스포펩티드-H, 베타 카제인-H, 베타 카제인-H를 함유하는 우유 및 베타 카제인-H를 함유하는 우유를 발효시킨 발효유로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 식품 조성물을 제공한다. The present invention comprises at least one selected from the group consisting of garlic, black garlic, onion, ginseng and red ginseng and milk containing casein phosphopeptide-H, beta casein-H, beta casein-H and milk containing beta casein-H It provides a food composition comprising at least one selected from the group consisting of fermented milk.

본 발명자는 오랜 연구 끝에 카제인 포스포펩티드-H에는 뛰어난 황산화 기능 및 세포활성화 기능이 있음을 알아내었다. 베타 카제인-H는 카제인 포스포펩티드-H를 포함하는 단백질로서, 이를 섭취하는 경우 소화효소의 작용에 의해 카제인 포스포펩티드-H가 생성되므로, 정제된 카제인 포스포펩티드-H 대신에 베타 카제인-H를 식품에 첨가하여도, 뛰어난 황산화 기능 및 세포활성화 효과를 얻을 수 있으며 베타 카제인-H 와 카제인 포스포펩티드-H를 함께 첨가하여도 좋다. 마찬가지로 베타 카제인-H를 함유하는 우유 또는 베타 카제인-H를 함유하는 우유를 발효시킨 발효유도 이를 섭취하는 경우 소화효소의 작용에 의해 카제인 포스포펩티드-H가 생성되므로, 이를 식품에 첨가하는 경우 그 식품의 항산화 기능 및 세포활성화 기능을 강화하는 데에 도움을 줄 수 있다. 마늘, 흑마늘, 양파, 인삼, 홍삼도 본래 항산화 기능을 가지고 있다고 알려져 있지만 카제인 포스포펩티드-H 등의 첨가에 의하여 더욱 더 그 기능을 보강시킬 수 있다.After a long study, the inventors found that casein phosphopeptide-H has excellent sulfate function and cell activation function. Beta casein-H is a protein containing casein phosphopeptide-H, and when ingested, casein phosphopeptide-H is produced by the action of digestive enzymes, so beta casein- instead of purified casein phosphopeptide-H Even if H is added to the food, excellent sulfate function and cell activation effect can be obtained, and beta casein-H and casein phosphopeptide-H may be added together. Similarly, fermented milk fermented with milk containing beta casein-H or milk containing beta casein-H also produces casein phosphopeptide-H by the action of digestive enzymes when ingested. It can help boost the antioxidant and cellular activation of foods. Garlic, black garlic, onion, ginseng and red ginseng are also known to have antioxidant properties, but can be further enhanced by the addition of casein phosphopeptide-H.

또한 마늘, 흑마늘, 양파, 인삼 및 홍삼으로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상에 카제인 포스포펩티드-H, 베타 카제인-H, 베타 카제인-H를 함유하는 우유 및 베타 카제인-H를 함유하는 우유를 발효시킨 발효유로 이루어진 군에서 선택한 하나 이상을 적용하는 경우 마늘, 양파 등 본래 재료가 갖는 독특한 냄새가 감소하고, 맛이 아주 부드러워져 남녀노소 누구나 쉽게 상기 건강 식품을 섭취할 수 있는 뛰어난 효과가 있게 된다. 특히, 본 발명에서 베타-카제인-H를 함유하는 우유를 사용하여 발효시킨 요구르트를 첨가 하는 경우에는, 일반우유가 아니라 베타-카제인-H를 함유하는 우유를 발효시켜 제조되었기 때문에 더욱 더 향이 좋고, 맛이 뛰어난 효과가 있으며, Probiotics가 다양해지고 더욱 건강해지므로, 인체에 더욱 유익하게 되는 장점이 있다. 여기서 카제인 포스포펩티드-H 등을 적용하는 재료는 반드시 마늘, 흑마늘, 양파, 인삼 및 홍삼일 필요는 없고 다른 식품에도 다양하게 적용될 수 있다.In addition, at least one selected from the group consisting of garlic, black garlic, onion, ginseng, and red ginseng fermented casein phosphopeptide-H, beta casein-H, beta casein-H milk and beta casein-H milk When applying one or more selected from the group consisting of fermented milk, the unique smell of the original ingredients, such as garlic, onion is reduced, the taste is very soft, so that anyone of all ages can easily take the healthy food. In particular, when the yogurt fermented using the milk containing beta-casein-H in the present invention is added, since it is manufactured by fermenting the milk containing beta-casein-H instead of ordinary milk, it is more fragrant, The taste is excellent, and since the probiotics are diversified and healthier, there is an advantage to be more beneficial to the human body. Herein, the material applying casein phosphopeptide-H, etc. is not necessarily garlic, black garlic, onion, ginseng and red ginseng, and may be variously applied to other foods.

또한 카제인 포스포펩티드-H에 미네랄의 체내흡수를 매우 효과적으로 돕는 기능도 가지고 있으므로, 마늘, 흑마늘, 양파, 인삼, 홍삼 등이 가진 유익한 미네랄의 체내 흡수가 매우 우수해지는 효과도 더불어 얻을 수 있다. 베타 카제인-H, 베타 카제인-H를 함유하는 우유 또는 베타 카제인-H를 함유하는 우유를 발효시킨 발효유도 이를 섭취하는 경우 소화효소의 작용에 의해 카제인 포스포펩티드-H가 생성되므로, 베타 카제인-H, 베타 카제인-H를 함유하는 우유 또는 베타 카제인-H를 함유하는 우유를 발효시킨 발효유를 식품에 첨가하는 경우에도 그 식품의 미네랄을 효율적으로 흡수할 수 있도록 도움을 줄 수 있다.In addition, casein phosphopeptide-H also has a very effective function of helping the body to absorb minerals, garlic, black garlic, onion, ginseng, red ginseng and other beneficial minerals in the body can be obtained with the effect of very excellent absorption. Fermented milk fermented with beta casein-H, beta casein-H milk, or beta casein-H milk fermented milk also produces casein phosphopeptide-H by the action of digestive enzymes. The addition of fermented milk fermented with H, beta casein-H milk or beta casein-H milk can also help to efficiently absorb the minerals in the food.

다른 구체예에서, 상기 식품조성물은 칼슘, 마그네슘, 셀레늄, 철, 인, 아이오딘, 아연, 칼륨 및 코발트로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 더 포함할 수 있다. 이 경우, 카제인 포스포펩티드-H 등에 의해 상기 첨가한 미네랄이 체내에 우수하게 흡수되는 유익한 효과도 함께 거둘 수 있게 된다.In another embodiment, the food composition may further include one or more selected from the group consisting of calcium, magnesium, selenium, iron, phosphorus, iodine, zinc, potassium and cobalt. In this case, casein phosphopeptide-H or the like can also achieve the beneficial effect that the added mineral is excellently absorbed in the body.

본 발명자는 카제인 포스포펩티드-H에 대한 연구를 거듭한 끝에 카제인 포스포펩티드-H (Mix-pep.)에는 미네랄의 체내 흡수를 돕는 기능 외에도, 뛰어난 황산화 기능 및 세포활성화 기능이 있음을 알아내었다. The present inventors have studied casein phosphopeptide-H and found that casein phosphopeptide-H (Mix-pep.) Has excellent sulfate function and cell activation in addition to the function of helping the body absorb minerals. Came out.

카제인 포스포펩티드(casein phospho peptide, 이하에서 CPP로 약기한다)는 우유나 모유와 같은 유즙에 존재하는 단백질인 카제인을 구성하는 펩티드이며 카제인이 소화효소에 의해 분해되었을 때 분리되는 단편으로서 미네랄의 체내흡수를 돕는 물질이며, 그 아미노산 서열은 하기의 서열 1과 같다. Casein phospho peptide (hereinafter abbreviated as CPP) is a peptide that constitutes casein, a protein present in milk such as milk or breast milk, and is a fragment that is separated when casein is broken down by digestive enzymes. A substance that aids absorption, and its amino acid sequence is shown in SEQ ID NO: 1 below.

[서열 1][SEQ ID NO 1]

Arg-Glu-Leu-Glu-Leu-Asn-Val-Pro-Gly-Glu-Ile-Val-Glu-Ser-Leu-Ser-Ser-Ser-Glu-Glu-Ser-Ile-Thr-Arg Arg-Glu-Leu-Glu-Leu-Asn-Val-Pro-Gly-Glu-Ile-Val-Glu-Ser-Leu-Ser-Ser-Ser-Glu-Glu-Ser-Ile-Thr-Arg

(상기 Ser은 포스포세린을 의미함)(The Ser means phosphoserine)

본 발명자는 미네랄의 가용화에 관련된 CPP의 연구를 거듭한 결과 기존의 CPP와는 상이한 아미노산 서열 및 구조를 가지는 CPP를 함유한 신규한 카제인을 베 타 카제인 H형으로 명명하였으며, 이로부터 정제되는 CPP를 카제인 포스포펩티드-H (이하 CPP-H) 또는 Mix-pep. 이라고 명명하였다. 본 발명자는 CPP-H는 이황화결합에 의해 이량체(dimer)를 구성하여 기존의 서열의 CPP 보다 칼슘의 가용화 능력이 월등하다. CPP-H의 서열은 하기의 서열 2와 같다. As a result of repeated studies of CPP related to solubilization of minerals, the inventors have named a novel casein containing CPP having an amino acid sequence and structure different from the conventional CPP as beta casein H type, and the CPP purified therefrom is called casein. Phosphopeptide-H (hereinafter CPP-H) or Mix-pep. It was named. The inventors of CPP-H constitute dimers by disulfide bonds, so that the solubilization capacity of calcium is superior to that of CPP of the conventional sequence. The sequence of CPP-H is as shown in SEQ ID NO: 2 below.

[서열 2][SEQ ID NO 2]

Arg-Glu-Leu-Glu-Leu-Asn-Val-Pro-Gly-Glu-Ile-Val-Glu-Ser-Leu-Ser-Ser-Ser-Glu-Glu-Ser-Ile-Thr-Cys-Ile-Asn-LysArg-Glu-Leu-Glu-Leu-Asn-Val-Pro-Gly-Glu-Ile-Val-Glu-Ser-Leu-Ser-Ser-Ser-Glu-Glu-Ser-Ile-Thr-Cys-Ile- Asn-lys

(상기 Ser은 포스포세린을 의미함)(The Ser means phosphoserine)

상기 베타 카제인-H 를 함유한 우유, 베타 카제인-H 및CPP-H의 제조 방법은 본 발명자가 발명하여 등록받은 대한민국 등록특허 제140248호 및 제221124호에 자세히 개시되어 있다. 또한 베타 카제인-H 를 함유한 우유를 발효시킨 발효유의 제조방법은 본 발명자가 발명하여 공개한 대한민국 공개특허 제 2008-3637호에 자세히 개시되어 있다.The method of preparing beta casein-H milk, beta casein-H and CPP-H is disclosed in detail in Korean Patent Nos. 140248 and 221124, which the inventors have invented and registered. In addition, a method for preparing fermented milk fermenting milk containing beta casein-H is disclosed in detail in Korean Patent Laid-Open Publication No. 2008-3637.

본 발명은 상기 본 발명에 따른 식품 조성물로부터 제조된 건강보조식품을 제공한다. 상기 건강보조식품은 취식자의 연령, 기호 및 성별에 따라 적절한 제형으로 제조될 수 있으며, 바람직하게는 엑기스, 환, 젤, 잼, 분말, 푸딩, 제리, 사탕류 및 양갱 등의 제형으로 제조될 수 있다.The present invention provides a dietary supplement prepared from the food composition according to the present invention. The dietary supplement may be prepared in a suitable formulation according to the age, preference and sex of the eater, preferably in the form of extract, pill, gel, jam, powder, pudding, jelly, candy and yokan. .

본 발명은 하기의 시험예에 의하여 보다 더 잘 이해될 수 있으며, 하기의 시험예는 특허청구범위에 의하여 한정되는 보호범위를 제한하고자 하는 것이 아니다.The present invention can be better understood by the following test examples, which are not intended to limit the scope of protection defined by the claims.

시험예Test Example

카제인 포스포펩티드-H 의 항산화 기능 및 세포재생능력 측정Antioxidant Function and Cell Regeneration of Casein Phosphopeptide-H

1. 시약 및 실험방법1. Reagents and Experiment Methods

(1) DPPH 자유라디칼 제거 능력(free radical scavenging activity)시험(1) DPPH free radical scavenging activity test

① 자유라디칼 제거 능력(free radical scavenging activity): 자유라디칼 제거 능력은 1,1-디페닐-2-피크릴 히드라질(1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazil (DPPH))을 이용하여 측정하는 Shimada, Fujikawa, Yahara, Nakamura (1992)의 방법을 사용하였다. DPPH 라디칼 분석법은 보라색의 디페닐 피크릴 히드라진(diphenyl-picrylhydrazine)이 항산화활성을 가진 물질에 의해 탈색되어 황색으로 변하는 색을 측정하는데 주로 H+를 내어주는 성향을 가진 항산화제에 의하여 DPPH-H로 non-radical을 형성하는 것을 spectrophotometer를 이용하여 측정하는 방법이다.① Free radical scavenging activity: Free radical scavenging activity is measured using 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazil (1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazil (DPPH)). Shimada, Fujikawa, Yahara, Nakamura (1992) were used. The DPPH radical assay measures the color of purple diphenyl picrylhydrazine, which is discolored by a substance with antioxidant activity and turns yellow. DPPH-H is mainly converted to non-DPPH-H by an antioxidant having a tendency to give H +. Formation of -radical is measured by using spectrophotometer.

② 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazil (DPPH): 100% absolute ethanol에 0.1mM로 조제하여 CPP-H 용해액을 아래 표와 같이 여러농도로 조제하여 실험하였다.② 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazil (DPPH): prepared by 0.1mM in 100% absolute ethanol and the CPP-H solution was prepared at various concentrations as shown in the table below.

Control group (C) Control group (C) Blank of control group (D) Blank of control group (D) Experimental group (A) Experimental group (A) Blank of experimental group (B) Blank of experimental group (B) R1R1 DPPH 용액
100㎕
DPPH Solution
100 μl
EtOH
100㎕
EtOH
100 μl
DPPH 용액
100㎕
DPPH Solution
100 μl
EtOH
100㎕
EtOH
100 μl
R2R2 DMSO
100㎕
DMSO
100 μl
DMSO
100㎕
DMSO
100 μl
시료1
100㎕
Sample 1
100 μl
시료1
100㎕
Sample 1
100 μl

시료1: 시료는 CPP-H를 DMSO와 1:1로 섞어 완전 용해시킨 후, 1000rpm으로 5분간 원심분리하여 얻어진 상층액을 50%액으로 하여 DMSO에 단계희석하여 시험 사용시 최종농도는 5%, 2.5%, 1.25%, 0.625%, 0.3125%를 사용하였다.Sample 1 : Sample was completely dissolved by mixing 1: 1 with CPP-H in DMSO and centrifuged at 1000rpm for 5 minutes to 50% of the supernatant obtained. 2.5%, 1.25%, 0.625%, 0.3125% were used.

③ R1과 R2액을 96-well plate에서 혼합하여 20분간 25℃에서 반응시켰다.③ R1 and R2 were mixed in a 96-well plate and reacted at 25 ° C. for 20 minutes.

④ 반응이 종료된 plate를 565nm에서 흡광도를 측정하여 DPPH radical scavenging activity를 다음과 같이 산출하였다.④ DPPC radical scavenging activity was calculated as follows by measuring the absorbance at 565 nm of the plate after the reaction.

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Figure 112009054741059-pat00002
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(2) 수퍼옥사이드 라디칼 제거 능력(Superoxide radical scavenging activity)시험(2) Superoxide radical scavenging activity test

① Superoxide radical scavenging activity는 Liu, Ooi, Chang (1997)의 방법을 변형시킨 Oktay 등(2003)의 방법을 사용하였다. Superoxide radical은 강력한 조직독성을 유발하는 페록시 니트라이트, HOCl등의 활성화된 free radical의 전구물질이다. Superoxide radical은 미토콘드리아에서 산화적 인산화 과정에서 정상적으로 생성되는 일차적인 활성산소종이다. 이렇게 생성된 superoxide radical은 정상적으로 효소 (superoxide dismutase)에 의해 O2와 H2O2로 분해되어 무독화되지만 제거되지 않은 과도한 superoxide radical은 조직손상을 유발하게 된다.① For the superoxide radical scavenging activity, Oktay et al. (2003) modified from Liu, Ooi, Chang (1997) method were used. Superoxide radicals are precursors of activated free radicals, such as peroxynitrite and HOCl, which cause strong histotoxicity. Superoxide radicals are the primary reactive oxygen species normally produced during oxidative phosphorylation in mitochondria. The superoxide radicals thus produced are normally detoxified to O 2 and H 2 O 2 by enzymes (superoxide dismutase), but excessive superoxide radicals that are not removed cause tissue damage.

② Superoxide radical은 PMS (phenazine methosulphate)-NADH (nicotinamide adenine dinucleotide) 계에 의해서 생성되어 NADH를 산화시키며, NBT (nitroblue tetrazolium)의 환원에 의해서 측정된다.② Superoxide radical is produced by PMS (phenazine methosulphate) -NADH (nicotinamide adenine dinucleotide) system to oxidize NADH and is measured by reduction of NBT (nitroblue tetrazolium).

③ 시험관에 Tris-HCl buffer (16mM, pH 8.0) 3mL을 넣고, NBT (50 μM) 1mL, NADH (78 μM) 1mL을 넣은 뒤, 시험물질의 단계별 농도 액 1mL을 넣었다.③ Put 3 mL of Tris-HCl buffer (16 mM, pH 8.0) into the test tube, 1 mL of NBT (50 μM) and 1 mL of NADH (78 μM), and then add 1 mL of the concentration solution of the test substance.

④ 위의 시험관에 PMS (10 μM) 1mL을 넣어 반응이 시작되면, 25℃에서 5분간 반응시켰다.④ Put 1 mL of PMS (10 μM) into the test tube above, and the reaction was started, and reacted at 25 ° C. for 5 minutes.

⑤ 반응액을 560nm에서 흡광도를 측정하였다.⑤ The absorbance of the reaction solution was measured at 560 nm.

⑥ 측정된 흡광도 측정값을 이용하여 다음과 같이 superoxide radical scavenging activity를 산출하였다.⑥ The superoxide radical scavenging activity was calculated as follows using the measured absorbance measurements.

Figure 112009054741059-pat00003
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(3) 하이드록실 라디칼 제거 능력(Hydroxyl radical scavenging activity)시험(3) Hydroxyl radical scavenging activity test

① Hydroxyl radical scavenging activity는 Jung 등(2006)의 방법을 사용하였다. Hydroxyl radical은 생체내에서 superoxide radical로부터 nitric oxide나 myeloperoxidase등의 효소적 작용에 의하여 생성된다. 산화적 손상에 의한 조직손 상이 있으면 호중구 및 대식세포 등의 염증세포가 침윤하여 조직내의 nitric oxide나 myeloperoxidase등의 활성도가 증가하게 된다. 증가된 NO와 myeloperoxidase는 조직내에 과도하게 축적된 superoxide radical을 peroxynitrite나 hypochlorous acid 또는 hydroxyl radical과 같은 더욱 강력한 활성산소종으로 변화시킨다. Hydroxyl radical은 hypochlorous acid와 마찬가지로 가장 강력한 free radical로서 세포막에 대한 지질과산화반응을 유발함은 물론, DNA, protein, carbohydrate 등에 대한 손상을 가하여 MDA나 protein carbonyl과 같은 손상산물, 산화반응시 생성되는 유해한 aldehyde의 과생산으로 조직손상 및 기능이상을 유발하는 활성산소종이다.① Hydroxyl radical scavenging activity was used by Jung et al. (2006). Hydroxyl radicals are produced from superoxide radicals in vivo by enzymatic action such as nitric oxide or myeloperoxidase. In case of tissue damage due to oxidative damage, inflammatory cells such as neutrophils and macrophages infiltrate and increase the activity of nitric oxide and myeloperoxidase in tissues. Increased NO and myeloperoxidase convert superoxide radicals that are excessively accumulated in tissues into more powerful reactive oxygen species such as peroxynitrite, hypochlorous acid or hydroxyl radicals. Hydroxyl radicals, like hypochlorous acid, are the most powerful free radicals that cause lipid peroxidation reactions to cell membranes, as well as damaging DNA, protein, and carbohydrates, and damaging products such as MDA and protein carbonyl, and harmful aldehydes produced during oxidation. It is a free radical species that causes tissue damage and dysfunction due to overproduction.

② Hydroxyl radical은 Fe3+/ascorbate/EDTA/H2O2 system에 의해서 생성되며, hydroxyl radical에 의한 2-deoxyribose의 산화의 억제에 의하여 측정된다.② Hydroxyl radicals are produced by Fe 3+ / ascorbate / EDTA / H 2 O 2 system and measured by inhibition of oxidation of 2-deoxyribose by hydroxyl radicals.

③ 시험관에 KH2PO4-KOH (45mM) buffer 200㎕, EDTA (10mM) 100㎕, FeCl3 (5mM) 200㎕, 2-deoxyribose (20mM) 200㎕, ascorbic acid (0.3%) 100㎕, 각 농도별 시험물질 100㎕, H2O2 (10mM) 100㎕를 넣고 37℃에서 90분간 반응시켰다.③ 200 μl of KH 2 PO 4 -KOH (45mM) buffer, 100 μl of EDTA (10mM), 200 μl of FeCl 3 (5mM), 200 μl of 2-deoxyribose (20mM), 100 μl of ascorbic acid (0.3%), respectively. 100 μl of test substance for each concentration and 100 μl of H 2 O 2 (10 mM) were added thereto and reacted at 37 ° C. for 90 minutes.

④ 반응액에 trichloroacetic acid (2.8%) 1mL과 thiobarbituric acid (1%) 1mL을 섞고, 90℃에서 20분간 가열한 후, 상온에서 식혀 520nm에서 흡광도를 측정하였다.④ 1 mL of trichloroacetic acid (2.8%) and 1mL of thiobarbituric acid (1%) were mixed in the reaction solution, heated at 90 ° C. for 20 minutes, and cooled at room temperature to measure absorbance at 520 nm.

Figure 112009054741059-pat00004
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(4) 사람 섬유아세포(Human Normal Fibroblast)를 이용한 세포에 대한 독성(cell cytotoxicity) 측정(4) Measurement of Cell Cytotoxicity Using Human Normal Fibroblasts

본 실험은 시험물질인 CPP-H의 인체 세포에 대한 독성여부를 알아보기 위한 것이다.This experiment is to determine whether the test substance CPP-H is toxic to human cells.

① 세포주정보: Human Normal Fibroblast① Cell line information: Human Normal Fibroblast

항목Item 특징Characteristic OriginOrigin HumanHuman SourceSource ForeskinForeskin AgeAge 88 PassagePassage 1313 TypeType Primarily cellPrimarily cell

8세 남아의 음경 포피를 잘 소독하고 pepsin으로 처리한 조직을 DMEM media로 수회 계대하여 keratinocyte를 제거한 다음 순수한 fibroblast를 얻었다. 얻어진 fibroblast를 동일한 배지로 5~7회 계대한 다음 사용할 때까지 동결 보관하였다(passage 10). 실험 수행을 위해 해동한 fibroblast는 10% FBS에 3회 계대하여 최종 실험을 위해 사용된 세포는 계대수 13을 이용하였다.The penile foreskin of 8 year old boy was sterilized well and the tissues treated with pepsin were passaged several times with DMEM media to remove keratinocytes and pure fibroblast was obtained. The fibroblast obtained was stored frozen until passage 5-7 times with the same medium (passage 10). The thawed fibroblasts were passaged three times in 10% FBS, and cells 13 used for the final experiment were used.

② HDF cell seeding② HDF cell seeding

T75 culture flask에서 배양한 세포를 PBS로 세척한 후 trypsin-EDTA를 이용하여 배양접시에서 떼어낸다. 이를 hematocytometer로 세포수를 결정하고 10% FBS가 포함된 DMEM media를 이용하여 24 well plate에 1 ×105 cell/well로 세포를 분주 한 다음 24시간 동안 안정화시킨다.Cells cultured in a T75 culture flask were washed with PBS and removed from the culture dish using trypsin-EDTA. The number of cells was determined using a hematocytometer, and the cells were dispensed at 1 × 10 5 cell / well in a 24 well plate using DMEM media containing 10% FBS and stabilized for 24 hours.

③ 시료처리③ Sample processing

CPP-H의 시료는 냉장보관하면서 사용하였으며, 유상층과 수상층으로 분리된 층에서 수상층만을 회수한 다음 0.2um제균 필터를 이용하여 제균하였다. 시료(CPP-H 수상층)는 최고 2.00%부터 처리하며 1/2씩 순차적으로 세포 배양 배지를 이용해 희석하여 처리한다. 100% 세포 생존을 나타내는 농도가 나올 수 있도록 처리 시료의 농도를 결정하였다.Samples of CPP-H were used while refrigerated, and only the aqueous phase was recovered from the layers separated into an oil phase and an aqueous phase, and then sterilized using a 0.2um sterilization filter. Samples (CPP-H aqueous phase) are treated with up to 2.00% and diluted in cell sequencing media in half order. The concentration of the treated sample was determined to yield a concentration that indicated 100% cell survival.

④ MTT assay④ MTT assay

시료 처리 후 약 24시간 동안 37 ℃ CO2 배양기에서 배양한다. 배지를 제거하고, 각 well당 500 ㎕ 새 배지 + 60 ㎕ MTT 용액(5 mg/ml)을 넣은 후 2시간 동안 37 ℃ CO2 배양기에서 배양한다. 배지를 제거하고 isopropanol-HCl(0.04 N) 500 ㎕씩 넣고, 5분간 shaking하여 세포를 용해시킨 다음, 각각을 100 ㎕씩 96 well plate에 옮긴다. Microplate reader 565 nm에서 O.D565 값을 측정하고 100% 세포 생존률을 나타내는 시료의 농도를 구하여 cell cytotoxicity를 결정하였다.Incubate in a 37 ° C. CO 2 incubator for approximately 24 hours after sample treatment. Remove the medium, add 500 μl fresh medium + 60 μl MTT solution (5 mg / ml) for each well and incubate in a 37 ° C. CO 2 incubator for 2 hours. Remove the medium, add 500 µl of isopropanol-HCl (0.04 N), shake for 5 minutes to lyse the cells, and transfer 100 µl of each to a 96 well plate. Cell cytotoxicity was determined by measuring the O.D565 value at 565 nm and determining the concentration of the sample showing 100% cell viability.

(5) Human Normal Fibroblast를 이용한 cell proliferation assay(5) Cell proliferation assay using Human Normal Fibroblast

① 시험목적: CPP-H의 세포활성화 기능을 검증하고자, 피부 진피층을 구성하고 있는 fibroblast에 대한 세포 활성 효능을 평가하였다.Test purpose: To verify the cell activation function of CPP-H, we evaluated the cellular activity of fibroblasts in the dermal dermal layer.

② HDF cell seeding② HDF cell seeding

T75 culture flask에서 배양한 세포를 PBS로 세척한 후 trypsin-EDTA를 이용하여 배양접시에서 떼어냈다. 이를 hematocytometer로 세포수를 결정하고 10% FBS가 포함된 DMEM media를 이용하여 12 well plate에 1 ×105 cell/well로 세포를 분주 한 다음 24시간 동안 안정화시켰다.Cells cultured in a T75 culture flask were washed with PBS and then removed from the culture dish using trypsin-EDTA. The number of cells was determined by a hematocytometer, and the cells were dispensed at 1 × 10 5 cells / well in a 12 well plate using DMEM media containing 10% FBS and stabilized for 24 hours.

③ 시료처리③ Sample processing

12 well plate에 1 ×105 cell/well 에 분주한 세포를 0.5% FBS (growth 0%)가 포함된 DMEM 배지로 교환한 후 냉장 보관한 CPP-H를 세포에 독성을 유발하지 않는 농도로 처리하였다. 시료를 처리한 후 48시간 동안 37 ℃ CO2 배양하면서 growth 0%에서 CPP-H에 대한 세포활성 촉진 효능을 평가하였다.Cells dispensed in 1 x 10 5 cells / well in a 12 well plate were exchanged with DMEM medium containing 0.5% FBS (0% growth), and then refrigerated CPP-H was treated at a concentration that does not cause toxicity to the cells. . After treating the sample, while culturing at 37 ℃ CO 2 for 48 hours to evaluate the cell activity promoting effect on CPP-H at 0% growth.

④ MTT assay④ MTT assay

MTT (3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)2,5-diphenyltetrazolium bromide)는 담황색의 기질로서 생 세포의 미토콘드리아 내의 호흡쇄 효소에 의해 개열하고, 암적색의 formazan을 생성한다. 죽은 세포에서는 반응이 일어나지 않으므로 이 fromazan의 생성량은 세포생존율 측정에 이용된다. MTT (3- (4,5-dimetylthiazol-2-yl) 2,5-diphenyltetrazolium bromide) is a pale yellow substrate that is cleaved by respiratory chain enzymes in the mitochondria of live cells and produces a dark red formazan. Since no reaction occurs in dead cells, this fromazan production is used to measure cell viability.

시료를 처리한 다음 약 48시간 후 배지를 제거하고, 각 well당 500 ㎕ 새 배지 + 60 ㎕ MTT 용액(5 mg/ml)을 넣은 후 2시간 동안 37 ℃ CO2 배양기에서 배양한다. 배지를 제거하고 isopropanol-HCl(0.04 N) 500 ㎕씩 넣고, 5분간 shaking하여 세포를 용해시킨 다음, 각각을 100 ㎕씩 96 well plate에 옮겼다. Microplate reader 565 nm에서 O.D565 값을 측정하여 CPP-H를 넣지 않은 세포군(Nagative control)을 100%로 기준하여 세포 활성 촉진 효능을 평가하였다.After 48 hours after the sample was treated, the medium was removed, and 500 μl fresh medium + 60 μl MTT solution (5 mg / ml) was added to each well, followed by incubation in a 37 ° C. CO 2 incubator for 2 hours. The medium was removed, 500 μl of isopropanol-HCl (0.04 N) was added thereto, shaking for 5 minutes to lyse the cells, and 100 μl of each was transferred to a 96 well plate. The O.D565 value was measured at 565 nm of the microplate reader to evaluate the cell activity promoting efficacy based on 100% of the Nagative control group without CPP-H.

(6) HDF cell 을 이용한 MMP-1 활성 억제 평가(6) Evaluation of inhibition of MMP-1 activity using HDF cells

① 시험목적① Purpose of test

MMP-1(Matrix metalloproteinase type 1)은 자외선(UVA)에 의해서 활성화 되어 피부 진피층의 섬유소인 콜라겐을 선택적으로 분해하는 효소이다. 이 효소의 활성이 증가될 경우 피부에서 콜라겐 매트릭스의 감소로 인하여 급격한 광노화를 촉진하게 된다. 본 평가 시험은 CPP-H의 콜라겐을 분해하는 효소인 MMP-1의 활성억제 효능을 평가하고자 수행한 것이다. MMP-1 (Matrix metalloproteinase type 1) is an enzyme that is activated by ultraviolet light (UVA) to selectively break down collagen, a fiber in the dermal layer of the skin. Increased activity of this enzyme promotes rapid photoaging due to a decrease in the collagen matrix in the skin. This evaluation test was performed to evaluate the inhibitory effect of MMP-1, an enzyme that degrades collagen of CPP-H.

② Cell seeding② Cell seeding

T75 culture flask에서 배양한 세포를 PBS로 세척한 후 trypsin-EDTA를 이용하여 배양접시에서 떼어냈다. 이를 hematocytometer로 세포수를 결정하고 10% FBS가 포함된 DMEM media를 이용하여 48 well plate에 5 ×104 cell/well로 세포를 분주 한 다음 24시간 동안 안정화시켰다.Cells cultured in a T75 culture flask were washed with PBS and then removed from the culture dish using trypsin-EDTA. The number of cells was determined by a hematocytometer, and the cells were dispensed at 5 × 104 cells / well in 48 well plates using DMEM media containing 10% FBS and stabilized for 24 hours.

③ 자외선 조사 및 시료처리③ UV irradiation and sample processing

48 well plate에 5 ×104 cell/well에 분주한 세포를 새로운 PBS 완충용액으로 교체한 후 UVA를 20mJ/cm으로 조사한 후 다시 10.0% FBS가 포함된 DMEM 배지로 교환한 후, 세포에 독성을 일으키지 않는 농도로 처리하였다. 시료를 처리한 후 24시간 동안 37 ℃ CO2 배양하였다.After replacing 5 × 104 cells / well in a 48 well plate with fresh PBS buffer solution, irradiate UVA at 20mJ / cm, exchange with DMEM medium containing 10.0% FBS, and then do not cause toxicity to cells. Treated at a concentrated concentration. Samples were treated and incubated at 37 ° C. for 24 hours.

④ Sandwith ELISA for MMP-1④ Sandwith ELISA for MMP-1

상업적으로 판매되는 MMP-1 kit (GE Healthcare, RPN2610, Buckinghamshire, UK)를 이용하여 MMP-1의 발현량을 평가하였다. Kit에 24시간 배양한 세포 상등액을 투여하고 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후 3회 세척한 다음 Anti-MMP1 IgG에 HRP가 컨쥬게이션된 항체를 투여하고 다시 2시간 반응시켜 항원항 체 반응을 유도하였다.The expression level of MMP-1 was evaluated using a commercially available MMP-1 kit (GE Healthcare, RPN2610, Buckinghamshire, UK). The cell supernatant cultured in the kit for 24 hours was administered and reacted for 2 hours. After the reaction, the cells were washed three times, and then H-conjugated antibody was administered to Anti-MMP1 IgG and reacted again for 2 hours to induce antigen antibody response.

2시간 후 항원-항체 반응을 490nm에서 측정하여 MMP-1의 발현량을 평가하였다.After 2 hours, the antigen-antibody response was measured at 490 nm to evaluate the expression level of MMP-1.

2. 시험결과2. Test result

(1) 자유라디칼 제거 능력(free radical scavenging activity) 측정결과(1) Free radical scavenging activity measurement results

CPP-H의 최고농도인 5%에서는 62.76 ±3.52 %, 최저농도인 0.3125 % 에서는 29.92 ±4.14 %의 DPPH free radical scavenging activity를 보였다. 또한 DPPH free radical scavenging activity에 있어서 농도의존적으로 농도가 높아짐에 따라 억제활성 또한 증가하여 CPP-H에 의해 DPPH radical이 효과적으로 제거되었다. 따라서 CPP-H는 전자공여능이 뛰어난 항산화물질임을 알 수 있다.DPPH free radical scavenging activity of 62.76 ± 3.52% at the highest concentration of CPP-H and 29.92 ± 4.14% at the lowest concentration of 0.3125%. In addition, DPPH radical was effectively removed by CPP-H as the concentration-dependent concentration increased in DPPH free radical scavenging activity. Therefore, it can be seen that CPP-H is an antioxidant having excellent electron donating ability.

(2) 수퍼옥사이드 라디칼(Superoxide radical) 제거 시험결과(2) Superoxide radical removal test results

CPP-H 최저농도인 0.3125 %에서는 70.90±0.62 %를, 최고농도인 5 %뿐만 아니라 1.25 %, 2.5% 에서도 각각 82.86±1.46 %, 81.69±0.21 %, 82.68±0.35 %의 높은 제거율을 나타내었고, 농도의존적으로 superoxide radical scavenging activity가 높아짐으로써, superoxide radical이 효과적으로 제거되었다. 이러한 결과는 산화적 스트레스 반응에서 일차적으로 생성되는 수퍼옥사이드 라디칼을 시험물질인 CPP-H가 효과적으로 제거하여, 이차적으로 수반되는 강력한 라디칼인 하이드록실 라디칼 등의 생성을 감소시킨다는 사실을 증명하는 것이다.At 0.3125%, the lowest concentration of CPP-H, the removal rate was 70.90 ± 0.62%, but not only the highest concentration of 5% but also 1.25% and 2.5%, respectively, 82.86 ± 1.46%, 81.69 ± 0.21%, and 82.68 ± 0.35%. The concentration-dependent superoxide radical scavenging activity increased, effectively removing superoxide radicals. These results demonstrate that CPP-H, a test substance, effectively removes superoxide radicals that are primarily produced in oxidative stress reactions, reducing the formation of secondary radical hydroxyl radicals.

(3) 하이드록실 라디칼(Hydroxyl radical) 제거 시험결과(3) Test result of hydroxyl radical removal

CPP-H는 최저농도인 0.15625 %에서는 28.59±0.74 %를, 최고농도인 5% 뿐만 아니라 2.5, 1.25, 0.625, 0.3125 % 에서도 각각 74.4±1.20 %, 73.87±2.03 %, 71.68±2.79 %, 66.34±3.92 %, 53.38±2.49 %의 높은 제거율을 나타내었고, 농도의존적으로 hydroxyl radical scavenging activity가 높아짐으로써, hydroxyl radical이 효과적으로 제거되었다. 따라서 CPP-H는 하이드록실 라디칼로 인한 손상으로부터 세포를 유효하게 보호하는 능력이 있음을 알 수 있다.CPP-H was 28.59 ± 0.74% at the lowest concentration of 0.15625%, 74.4 ± 1.20%, 73.87 ± 2.03%, 71.68 ± 2.79%, 66.34 ± at 2.5, 1.25, 0.625, 0.3125% as well as 5% at the highest concentration, respectively. The removal rate was 3.92% and 53.38 ± 2.49%, and the hydroxyl radical scavenging activity was increased in a concentration-dependent manner, which effectively removed the hydroxyl radical. Thus, it can be seen that CPP-H has the ability to effectively protect cells from damage caused by hydroxyl radicals.

(4) Human Normal Fibroblast를 이용한 cell cytotoxicity 측정결과(4) Measurement result of cell cytotoxicity using Human Normal Fibroblast

CPP-H는 최대처리농도 5.00%에서도 섬유아세포에 대한 독성을 전혀 유발하지 않았다. 따라서 CPP-H는 인체에 적용함에 매우 안전한 물질로 평가된다. CPP-H did not cause any toxicity to fibroblasts even at the maximum treatment concentration of 5.00%. Therefore, CPP-H is considered to be a very safe substance for human application.

(5) Human Normal Fibroblast를 이용한 cell proliferation assay 결과 CPP-H는 1.00% 농도에서 세포증식률이 약 143%로 TGF-beta의 145%와 거의 비슷하였으며, 희석농도 0.064%에서도 20%의 세포 활성 효능을 보여 낮은 농도에서도 높은 세포 활성을 보유하고 있음을 알 수 있다.(5) As a result of cell proliferation assay using human normal fibroblast, CPP-H showed about 143% cell proliferation at 1.00%, almost similar to 145% of TGF-beta. It can be seen that it has high cellular activity even at low concentrations.

(6) Human Normal Fibroblast를 이용한 MMP-1 활성 억제 평가결과(6) Evaluation result of inhibition of MMP-1 activity using Human Normal Fibroblast

CPP-H는 자외선으로부터 유도된 MMP-1(negative control)의 활성을 40% 억 제하는 것으로 나타나, MMP-1의 활성억제 소재로 널리 이용되고 있는 녹차추출물의 EGCG(억제율 35%)보다 우수한 활성 억제 효능을 나타내었다. 그 결과 CPP-H는 자외선에 의한 콜라겐의 분해로부터 피부를 보호하는 효능도 가지고 있음을 알 수 있다.CPP-H inhibits the activity of MMP-1 (negative control) induced by ultraviolet light by 40%, which is superior to EGCG (35% inhibition) of green tea extract, widely used as an inhibitor of MMP-1 activity. Inhibitory effect was shown. As a result, it can be seen that CPP-H also has an effect of protecting the skin from degradation of collagen by ultraviolet rays.

<110> HAN, Sang Kee <120> Food composition comprising one or more selected from garlic, black garlic, onion, ginseng, and red ginseng; and one or more selected from casein phosphopeptide-H, beta casein-H, milk including beta casein-H, and yogurt prepared by fermenting milk including beta casein-H , <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> casein phosphopeptide <400> 1 Arg Glu Leu Glu Leu Asn Val Pro Gly Glu Ile Val Glu Ser Leu Ser 1 5 10 15 Ser Ser Glu Glu Ser Ile Thr Arg 20 <210> 2 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> casein phosphopeptide-H <400> 2 Arg Glu Leu Glu Leu Asn Val Pro Gly Glu Ile Val Glu Ser Leu Ser 1 5 10 15 Ser Ser Glu Glu Ser Ile Thr Cys Ile Asn Lys 20 25 <110> HAN, Sang Kee <120> Food composition comprising one or more selected from garlic,          black garlic, onion, ginseng, and red ginseng; and one or more          selected from casein phosphopeptide-H, beta casein-H, milk          including beta casein-H, and yogurt prepared by fermenting milk          including beta casein-H, <160> 2 <170> Kopatentin 1.71 <210> 1 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> casein phosphopeptide <400> 1 Arg Glu Leu Glu Leu Asn Val Pro Gly Glu Ile Val Glu Ser Leu Ser   1 5 10 15 Ser Ser Glu Glu Ser Ile Thr Arg              20 <210> 2 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> casein phosphopeptide-H <400> 2 Arg Glu Leu Glu Leu Asn Val Pro Gly Glu Ile Val Glu Ser Leu Ser   1 5 10 15 Ser Ser Glu Glu Ser Ile Thr Cys Ile Asn Lys              20 25

Claims (7)

Arg-Glu-Leu-Glu-Leu-Asn-Val-Pro-Gly-Glu-Ile-Val-Glu-Ser-Leu-Ser-Ser-Ser-Glu-Glu-Ser-Ile-Thr-Cys-Ile-Asn-Lys 아미노산 서열의 카제인 포스포펩티드-H를 포함하여 항산화활성을 갖는 것을 특징으로 하는 항산화용 식품조성물.Arg-Glu-Leu-Glu-Leu-Asn-Val-Pro-Gly-Glu-Ile-Val-Glu-Ser-Leu-Ser-Ser-Ser-Glu-Glu-Ser-Ile-Thr-Cys-Ile- A food composition for antioxidant, comprising an phosphopeptide-H, a casein of Asn-Lys amino acid sequence. . . 제1항에 있어서, The method of claim 1, 상기 식품조성물은 마늘, 양파, 인삼 및 홍삼으로 이루어진 군에서 선택되는 2가지 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화용 식품조성물.The food composition is an antioxidant food composition, characterized in that it comprises two or more selected from the group consisting of garlic, onion, ginseng and red ginseng. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 식품조성물은 칼슘, 마그네슘, 셀레늄, 철, 인, 아이오딘, 아연, 칼륨 및 코발트로 이루어진 군에서 선택되는 2가지 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화용 식품조성물.The food composition is an antioxidant food composition, characterized in that it comprises two or more selected from the group consisting of calcium, magnesium, selenium, iron, phosphorus, iodine, zinc, potassium and cobalt. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 의한 항산화용 식품조성물로부터 제조된 건강보조식품.A health supplement food prepared from the food composition for antioxidant according to any one of claims 1 to 3. Arg-Glu-Leu-Glu-Leu-Asn-Val-Pro-Gly-Glu-Ile-Val-Glu-Ser-Leu-Ser-Ser-Ser-Glu-Glu-Ser-Ile-Thr-Cys-Ile-Asn-Lys 아미노산 서열의 카제인 포스포펩티드-H를 포함하여 세포 활성화 효능을 갖는 세포 활성화용 화장품조성물.Arg-Glu-Leu-Glu-Leu-Asn-Val-Pro-Gly-Glu-Ile-Val-Glu-Ser-Leu-Ser-Ser-Ser-Glu-Glu-Ser-Ile-Thr-Cys-Ile- Cosmetic composition for cell activation having cell activation efficacy, including casein phosphopeptide-H of the Asn-Lys amino acid sequence. 삭제delete 삭제delete
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