KR101279396B1 - Primer set for the detection of Mycoplasma, and method and kit for the detection of Mycoplasma by using the primer set - Google Patents

Primer set for the detection of Mycoplasma, and method and kit for the detection of Mycoplasma by using the primer set Download PDF

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Abstract

본 발명은, 마이코플라즈마 속(genus) 세균들의 감염이나 오염 여부를 한 번의 작업으로 신속하게 검출하는, 마이코플라즈마 속(genus)의 DNA에 특이적인 부분을 표적으로 하는 컨센서스 프라이머(consensus primer), 상기 프라이머를 이용한 마이코플라즈마 검출 방법 및 키트에 관한 것이다.
본 발명은, 마이코플라즈마 속(genus)에 특이적인 16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 하는 프라이머에 관한 것이다.
본 발명은, 상기 프라이머를 이용하는 PCR 방법을 적용하여, 마이코플라즈마 속(genus) 세균을 신속하게 검출하는 방법 및 키트에 관한 것이다.
The present invention provides a consensus primer that targets a specific part of the DNA of mycoplasma genus, which quickly detects infection or contamination of mycoplasma genus bacteria in one operation. It relates to a mycoplasma detection method and kit using a primer.
The present invention relates to a primer that targets a 16s rRNA (ribosomal RNA) gene region specific for the mycoplasma genus.
The present invention relates to a method and kit for rapidly detecting mycoplasma genus bacteria by applying the PCR method using the primers.

Description

마이코플라즈마를 검출하기 위한 프라이머 세트, 상기 프라이머 세트를 이용한 마이코플라즈마 검출 방법 및 키트 {Primer set for the detection of Mycoplasma, and method and kit for the detection of Mycoplasma by using the primer set}Primer set for the detection of Mycoplasma, and method and kit for the detection of Mycoplasma by using the primer set}

본 발명은, 마이코플라즈마 속(genus) 세균들의 감염이나 오염 여부를 한 번의 작업으로 신속하게 검출하는, 마이코플라즈마 속(genus)의 DNA에 특이적인 부분을 표적으로 하는 컨센서스 프라이머(consensus primer), 상기 프라이머를 이용한 마이코플라즈마 검출 방법 및 키트에 관한 것이다. The present invention provides a consensus primer that targets a specific part of the DNA of mycoplasma genus, which quickly detects infection or contamination of mycoplasma genus bacteria in one operation. It relates to a mycoplasma detection method and kit using a primer.

본 발명은, 마이코플라즈마 속(genus)에 특이적인 16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 하는 프라이머에 관한 것이다.The present invention relates to a primer that targets a 16s rRNA (ribosomal RNA) gene region specific for the mycoplasma genus.

본 발명은, 상기 프라이머를 이용하는 PCR 방법을 적용하여, 마이코플라즈마 속(genus) 세균을 신속하게 검출하는 방법 및 키트에 관한 것이다.
The present invention relates to a method and kit for rapidly detecting mycoplasma genus bacteria by applying the PCR method using the primers.

마이코플라즈마(Mycoplasma)는 분류학적으로 몰리큐트 강(綱)(Mollicutes class)에 속하는 원핵세균으로서, 현재까지 수백 종(species)이 보고되고 있다.
Mycoplasma is a prokaryotic bacterium belonging to the Molycutes class taxonomically and hundreds of species have been reported to date.

마이코플라즈마 세균은 사람과 동물의 호흡기나 생식기 등의 각종 장기에 상주하며 심각한 질병을 일으키는데, 특히 폐렴에 의한 사망을 유발하는 등 공중보건학적으로 중요함은 물론 농축산 산업에 막대한 손실을 초래할 수 있는 병원체이다.Mycoplasma bacteria reside in various organs such as the respiratory or genital organs of humans and animals and cause serious diseases. Especially, it is a pathogen that is important for public health, such as death from pneumonia, and can cause enormous losses to the livestock industry. to be.

이는 마이코플라즈마가 세포벽이 없어 페니실린이나 스트렙토마이신과 같은 세포벽합성을 저해하는 항생물질에 내성이 있고, 크기가 0.15~0.8 ㎛ 정도이기 때문에 여과멸균에 의하여 제거되지 않으며, 형태학적으로도 다형적(pleomorphic) 특성이 있어 광학현미경을 이용한 관찰이 어렵다는 점에 관련된다.
It is resistant to antibiotics that inhibit mycosynthesis such as penicillin or streptomycin because mycoplasmas do not have cell walls. ), Which makes it difficult to observe using an optical microscope.

또한 마이코플라즈마 세균은 실험실 세포 배양이나 백신 및 약품의 제조, 보관 시에 이들 세포, 백신 및 약품을 빈번하게 오염시키는 원인으로서 문제가 되고 있다. In addition, mycoplasma bacteria have become a problem as a cause of frequent contamination of these cells, vaccines and drugs during laboratory cell culture, manufacture and storage of vaccines and drugs.

특히 세포 배양에서의 마이코플라즈마 감염율은 30 ~ 87% 에 이를 정도인데, 이는 초대배양에 사용되는 동물조직, 배양에 사용되는 혈청 등에 의해 주로 유발되며, 교차오염으로 인해 확산될 수 있다.In particular, mycoplasma infection rate in cell culture is about 30 ~ 87%, which is mainly caused by animal tissue used in primary culture, serum used in culture, and can spread due to cross contamination.

그런데 마이코플라즈마 오염은 세포의 증식 속도를 저하시킴과 동시에 세포 기능에 심각한 변화를 초래할 수 있다는 점에서 오염 여부의 확인이 매우 중요하다 하겠다.
However, it is very important to confirm whether or not mycoplasma contamination causes a serious change in cell function while reducing the rate of proliferation of cells.

정리해보면, 사람과 동물의 마이코플라즈마 세균에 의한 감염 여부와, 실험실 세포 등에 대한 마이코플라즈마 세균에 의한 오염 여부를 검출하는 것이 매우 절실하다 하겠다.In summary, it is very urgent to detect the infection of mycoplasma bacteria in humans and animals and the contamination of mycoplasma bacteria in laboratory cells.

그러나 마이코플라즈마 세균들은 세포 배양이 까다롭고 분리가 용이하지 않을 뿐만 아니라, 수백 종에 이르는 마이코플라즈마 세균들에 대한 검출은 오랜 시간과 노력이 소모된다.  However, mycoplasma bacteria are not only difficult to culture and difficult to isolate, but the detection of hundreds of mycoplasma bacteria takes a long time and effort.

따라서 마이코플라즈마 속(genus) 세균들의 감염이나 오염 여부를 신속하게 한 번의 작업으로 검출할 수 있는 기술이 절실하다 하겠다.
Therefore, there is an urgent need for a technology that can quickly detect infection or contamination of genus bacteria in a single operation.

이하, 종래에 사용되었던 마이코플라즈마 검출 기술에 대해서 구체적으로 검토해본다.
Hereinafter, the mycoplasma detection technique used in the prior art will be examined in detail.

먼저, 마이코플라즈마를 검출하기 위하여는 배지를 이용하여 분리 배양하는 직접배양법이 통상적으로 이용되어 왔다. First, in order to detect mycoplasma, a direct culture method of separating culture using a medium has been commonly used.

그런데 직접배양법은 세포나 조직 배양 시 기질이나 생체재료가 오염이 쉽게 되며, 또한 성장속도가 느린 마이코플라즈마의 증식을 확인하기 위해서는 2주 이상의 긴 시간이 걸리는 문제점이 존재한다.However, in the direct culture method, the substrate or the biomaterial is easily contaminated when culturing cells or tissues, and there is a problem that it takes longer than two weeks to confirm the growth of mycoplasma with slow growth rate.

또한 마이코플라즈마의 까다로운 영양 요구성 때문에 종(species)에 따라 서로 다른 배양 기법을 필요로 하는 문제점도 존재한다.There are also problems that require different culture techniques depending on the species due to the demanding nutritional requirements of mycoplasma.

더욱이 마이코플라즈마에 오염이 되었어도 세포의 형태변이나 배양용 배지의 색깔 변이를 유도하지 않고, 감염 시 아무런 증상이 나타나지 않을 수 있으므로 직접배양법으로는 마이코플라즈마의 증식을 확인하는 것은 극히 어렵다고 할 수 있다.
Moreover, even if contaminated with mycoplasma, it is very difficult to confirm the proliferation of mycoplasma by direct culture because it does not induce cell morphology or color change of culture medium, and may cause no symptoms during infection.

또한 마이코플라즈마의 진단 방법으로는, 검물을 채취하여 병원체를 분리 및 동정하는 균분리 동정방법, 혈청학적 방법 또는 조직을 이용한 방법이 이용되어 왔다.As a diagnostic method for mycoplasma, a bacterium identification method, a serological method, or a tissue-based method has been used in which a specimen is collected to isolate and identify a pathogen.

그러나 균분리 동정방법은 병원체의 특성상 배양조건이 까다로울 뿐만 아니라, 성장속도가 매우 느리기 때문에 균 분리 배양에 10일 내지 30일 이상이 걸려 병원체의 진단에 장기간이 소요되고, 따라서 이들의 감염에 대하여 즉시적으로 대처할 수 없는 문제점이 있었다.
However, the bacterium identification method is difficult to culture due to the characteristics of the pathogen, and because the growth rate is very slow, it takes 10 to 30 days or more to isolate the bacterium, and therefore it takes a long time to diagnose the pathogen. There was a problem that can not cope with the enemy.

또한 근래 들어 마이코플라즈마 세균의 검출방법 중에서 가장 선호되는 방법은 유전물질인 핵산을 증폭하는 중합효소연쇄반응(PCR; polymerase chain reaction)을 이용한 방법이다.In recent years, the most preferred method of detecting mycoplasma bacteria is a method using a polymerase chain reaction (PCR) that amplifies a nucleic acid, a genetic material.

여기에서, PCR은 생체 내에 존재하는 적은 양의 DNA를 분리하여 주형으로 사용하고 표적 DNA 서열의 양 말단에 상보적인 올리고뉴클레오타이드 (oligonucleotide)를 프라이머로 이용하여 표적 DNA 단편만을 짧은 시간 안에 수십만 배 이상 증폭시키는 기법이다.
Here, PCR uses a small amount of DNA present in vivo as a template and amplifies only a target DNA fragment hundreds of thousands times in a short time by using oligonucleotides complementary to both ends of the target DNA sequence as primers. Is a technique.

그런데 사람의 경우, 마이코플라즈마 뉴모니에(M. pneumoniae)를 비롯한 다양한 마이코플라즈마 종이 폐렴 원인 병원체로 문제가 되고 있으며, 동물의 경우도 마이코플라즈마 하이오뉴모니에(M. hyopneumoniae)와 마이코플라즈마 하이오라이니스(M. hyorhinis) 이외에도 다른 마이코플라즈마 종이 감염의 원인체로 작용된다.However, in the case of humans, various mycoplasma species including mycoplasma pneumoniae (M. pneumoniae) is a problem causing pneumonia, and in the case of animals,M. hyopneumoniae)And mycoplasma hyorinisM. hyorhinis)Besides Other mycoplasma species are the cause of infection.

이러한 이유로 마이코플라즈마 세균 감염을 판단할 시, 여러 번의 종(species) 특이적인 PCR를 수행하여야 하며 결국 병원체 양성 판별에 오랜 시간이 소요된다.
For this reason, when judging mycoplasma bacterial infection, several species-specific PCR should be performed, resulting in a long time to determine pathogen positive.

따라서 마이코플라즈마 속(genus) 세균들의 감염이나 오염 여부를 한 번의 작업으로 신속하게 검출하되, 마이코플라즈마 속(genus)에 특이적인 컨센서스 중합효소연쇄반응(consensus PCR)을 수행하여 검출할 수 있는 기술이 절실하다 하겠다.
Therefore, there is a technology that can quickly detect whether infection or contamination of genus mycoplasma bacteria (genus) in a single operation, but by performing consensus PCR specific to mycoplasma genus (genus) I will be desperate.

한편 종래에 마이코플라즈마 세균의 검출과 관련된 특허문헌을 살펴보면, 먼저, 한국등록특허공보 10-0615424호(특허문헌1)에는 마이코플라즈마 및 유사 균종의 유전자형 감별을 위한 올리고뉴클레오티드, 이를 포함하는 마이크로어레이와 이를 이용한 균종 검출방법이 개시되어 있다.On the other hand, when looking at the patent literature related to the detection of mycoplasma bacteria in the prior art, Korean Patent Publication No. 10-0615424 (Patent Document 1), the oligonucleotide for genotype discrimination of mycoplasma and similar species, and microarray comprising the same A fungal species detection method using the same is disclosed.

개략적으로 살펴보면, 청구항 1에는 서열번호 1 ~ 6을 갖는 표적 DNA를 청구하고 있으며, 청구항 2 및 3에는 서열번호 7 ~ 21 및 28 ~ 127을 갖는 마이코플라즈마 균주 감별을 위한 올리고뉴클레오티드를 청구하고 있다. In brief, claim 1 claims a target DNA having SEQ ID NOS: 1 to 6, and claims 2 and 3 claim an oligonucleotide for differentiating mycoplasma strains having SEQ ID NOs: 7 to 21 and 28 to 127.

여기에서, 서열번호 7 ~ 21 및 28 ~ 127의 올리고뉴클레오티드는 주로 개별 마이코플라즈마 탐색을 위한 프로브(probe)로서의 기능을 하게 된다.
Here, the oligonucleotides of SEQ ID NOs: 7-21 and 28-127 will function primarily as probes for individual mycoplasma search.

두 번째로, 한국등록특허공보 10-0502765호(특허문헌2)에는 PCR을 이용하여 마이코플라즈마의 동정 및 탐지를 하기 위한 프라이머가 개시되어 있는데, 청구항 4에는 서열번호 28 ~ 31을 갖는 동정 프라이머가, 청구항 5에는 서열번호 32 ~ 37을 갖는 탐지 프라이머가 기재되어 있다.Secondly, Korean Patent Publication No. 10-0502765 (Patent Document 2) discloses a primer for identifying and detecting mycoplasma using PCR, and claim 4 has an identification primer having SEQ ID NOs: 28 to 31. , Claim 5 describes detection primers having SEQ ID NOs: 32-37.

여기에서, 서열번호 28 ~ 29 및 32 ~ 33은 뉴모니에(Pneumoniae) 그룹, 서열번호 30 ~ 31 및 34 ~ 37은 호미니스(Hominis) 그룹을 위한 프라이머로서, 이하에서 서술하는 본 발명의 실시예에 따른 프라이머와는 일치되지 않는다.
Here, SEQ ID NOs: 28 to 29 and 32 to 33 are Pneumoniae groups, and SEQ ID NOs: 30 to 31 and 34 to 37 are primers for the Hominis group, which is described below. Inconsistent with the primer according to the example.

세 번째로, 한국등록특허공보 10-0974861호(특허문헌 3)에는 생물학적 의약품으로부터 마이코플라즈마를 검출하는 PCR 프라이머 세트가 개시되어 있다.Third, Korean Patent Publication No. 10-0974861 (Patent Document 3) discloses a PCR primer set for detecting mycoplasma from a biological drug.

개략적으로 살펴보면, 1, 2차 중합효소연쇄반응을 실시하되, 1차에는 1, 2 및 10 서열의 전방향 프라이머 및 3, 4, 5, 6 및 11서열의 역방향 프라이머를 사용하며, 2차에는 7 및 12 서열의 전방향 프라이머 및 8, 9 및 13 서열의 역방향 프라이머를 이용하게 된다.Schematically, the first and second polymerase chain reactions are carried out, but the first and second forward primers of the 1, 2 and 10 sequences and the reverse primers of the 3, 4, 5, 6 and 11 sequences are used. Forward primers of 7 and 12 sequences and reverse primers of 8, 9 and 13 sequences will be used.

그러나 상기 1 ~ 13 서열의 프라이머들은 이하에서 서술하는 본 발명의 실시예에 따른 프라이머와는 일치되지 않는다.
However, the primers of the 1 to 13 sequences are not consistent with the primers according to the embodiments of the present invention described below.

총괄적으로 정리하여 보면, 마이코플라즈마 속(genus) 세균의 감염 및 오염 여부를 신속하게 검출하는 것이 요구되나, 병원체의 특성상 균분리 동정방법 등은 진단을 위해서 장기간이 소요되는 문제점이 존재해왔다.
In summary, it is required to quickly detect the infection and contamination of the genus mycoplasma (genus) bacteria, but due to the nature of the pathogen identification method has been a problem that takes a long time for diagnosis.

또한 PCR 방법을 적용할 경우에도 여러 번의 종(species) 특이적인 PCR를 수행하여야 하며 결국 병원체 양성 판별에 오랜 시간이 소요되는 문제점이 존재해왔다.
In addition, even when the PCR method is applied, several species-specific PCRs must be performed, and thus, there has been a problem that it takes a long time to determine the pathogen positive.

또한 종래의 특허기술 중에서는, 개별 마이코플라즈마 탐색을 위한 프로브(probe), 뉴모니에(Pneumoniae) 또는 호미니스(Hominis) 그룹을 위한 프라이머, 13종의 전방향 및 역방향 프라이머를 이용하여 두 번의 중합효소연쇄반응을 실시하는 방법 등이 있었으나, 마이코플라즈마 속(genus) 세균들을 한 번에 특이적으로 신속하게 검출하는 방법은 개발되지 않았다.
In addition, in the conventional patent technology, two polymerizations using a probe for probing individual mycoplasmas, a Pneumoniae or Hominis group, and 13 kinds of forward and reverse primers There have been methods for performing an enzyme chain reaction, but a method for detecting specific mycoplasma genus bacteria at once and rapidly has not been developed.

따라서 본 발명자들은 마이코플라즈마 속(genus) 세균들의 감염이나 오염 여부를 한 번의 작업으로 신속하게 검출하기 위하여, 마이코플라즈마 속(genus)의 DNA에 특이적인 부분을 표적으로 하는 컨센서스 프라이머(consensus primer)를 개발하고, 이를 이용하여 컨센서스 중합효소연쇄반응(consensus PCR)을 수행하는 기술을 제공하고자 본 발명을 안출하였다. Therefore, in order to quickly detect the infection or contamination of mycoplasma genus bacteria in one operation, the present inventors have used a consensus primer that targets a specific part of the DNA of the mycoplasma genus. The present invention was developed to provide a technique for performing consensus polymerase chain reaction (Consensus PCR) using the same.

KRKR 10-061542410-0615424 B1B1 KRKR 10-050276510-0502765 B1B1 KRKR 10-097486110-0974861 B1B1

본 발명의 목적은, 마이코플라즈마 속(genus) 세균들의 감염이나 오염 여부를 한 번의 작업으로 신속하게 검출하는 기술을 제공함에 있다.An object of the present invention is to provide a technique for quickly detecting whether infection or contamination of genus mycoplasma bacteria in one operation.

본 발명의 목적은, 마이코플라즈마 속(genus)에 특이적인 16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 하는 프라이머를 제공함에 있다.It is an object of the present invention to provide a primer that targets a 16s rRNA (ribosomal RNA) gene region specific for the mycoplasma genus.

본 발명의 목적은, 상기 프라이머를 이용하는 PCR 방법을 적용하여, 마이코플라즈마 속(genus) 세균을 신속하게 검출하는 방법 및 키트를 제공함에 있다.An object of the present invention is to provide a method and kit for rapidly detecting mycoplasma genus bacteria by applying the PCR method using the primer.

본 발명은, 서열번호 1 및 서열번호 2 의 프라이머 쌍을 포함하는, 마이코플라즈마(Mycoplasma)를 검출하기 위한 프라이머를 제공함으로써, 기술적 과제를 해결하고자 한다. The present invention is to solve the technical problem by providing a primer for detecting Mycoplasma ( Mycoplasma ) comprising a primer pair of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2.

본 발명은, 마이코플라즈마 속(genus)에 특이적인 16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 하는 프라이머를 제공함으로써, 기술적 과제를 해결하고자 한다.The present invention aims to solve the technical problem by providing a primer targeting a 16s rRNA (ribosomal RNA) gene region specific to the genus Mycoplasma.

본 발명의 목적은, 상기 프라이머를 이용하는 PCR 방법을 적용하여, 마이코플라즈마 속(genus) 세균을 신속하게 검출하는 방법 및 키트를 제공함으로써, 기술적 과제를 해결하고자 한다. An object of the present invention, by applying a PCR method using the primer, to provide a method and kit for rapidly detecting mycoplasma genus (genus) bacteria, to solve the technical problem.

본 발명에 따른 프라이머는, 9개 종류의 마이코플라즈마 균주들의 102 pg DNA 샘플들에서, 모두 검출 민감도(sensitivity)를 보유하는 현저한 효과를 가지고 있다.The primers according to the present invention have a significant effect of retaining detection sensitivity in 10 2 pg DNA samples of nine kinds of mycoplasma strains.

본 발명에 따른 프라이머는, 2개 종류의 마이코플라즈마 및 7개 종류의 비교대상 균주들의 102 pg DNA 샘플들에서, 검출 특이도(sensitivity)를 보유하는 현저한 효과를 가지고 있다.The primer according to the present invention has a remarkable effect of retaining detection sensitivity in 10 2 pg DNA samples of two kinds of mycoplasma and seven kinds of comparative strains.

본 발명에 따른 프라이머는, 마이코플라즈마 속(genus)에 특이적인 16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 함으로써, 민감도 및 특이도가 매우 향상됨은 물론 임상적으로 신속하고도 현저하게 마이코플라즈마를 검출할 수 있는 효과를 보유하고 있다.The primer according to the present invention, by targeting the 16s rRNA (ribosomal RNA) gene region specific to the mycoplasma genus, greatly improves sensitivity and specificity, and detects mycoplasma rapidly and remarkably clinically. It has an effect that can be done.

본 발명은, 사람 및 동물의 마이코플라즈마 세균 감염을 신속하게 검출할 수 있으므로, 다른 병원체의 감염과 마이코플라즈마 감염 감별 진단을 용이하게 수행하여 조기 치료가 가능함은 물론 질병 확산을 미연에 방지할 수 있는 현저한 효과를 보유하고 있다. The present invention can quickly detect mycoplasmal bacterial infections of humans and animals, and thus can easily diagnose differential diagnosis of mycoplasma infection and infection of other pathogens, thereby enabling early treatment and preventing disease spread. Has a significant effect.

본 발명은, 의약학 분야에서 수행되는 세포 배양이나 생물의약품의 제조, 보관, 투여, 배양에서 빈번하게 오염되는 마이코플라즈마 병원체를 직접 배양 방법에 의하지 않고 신속하고 정확하게 고민감도로 검출할 수 있어 의약학 및 바이오 생물 산업 분야에 적용할 수 있는 현저한 효과를 보유하고 있다.The present invention can quickly and accurately detect mycoplasma pathogens contaminated frequently in the manufacture, storage, administration, and cultivation of cell cultures or biopharmaceuticals carried out in the pharmaceutical field without the direct cultivation method. It has a remarkable effect applicable to the biological industry.

본 발명은, 컨센서스 PCR 방법으로 마이코플라즈마 속(genus) 세균을 동시에 검출할 수 있게 함으로써, 새로운 종(species)의 마이코플라즈마를 발견할 수 있는 연구 방법을 제시하는 현저한 효과를 보유하고 있다.
The present invention has the remarkable effect of presenting a research method for discovering mycoplasma of a new species by allowing the detection of mycoplasma genus bacteria simultaneously by consensus PCR method.

도 1은 본 발명에 따른 프라이머 제작 부위의 염기서열 구조를 나타내는 도면이다.
도 2는 본 발명에 따른 프라이머의 민감도(sensitivity) 실험 결과를 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명에 따른 프라이머의 특이도(specificity) 실험 결과를 나타낸 도면이다.
1 is a view showing the nucleotide sequence structure of the primer production site according to the present invention.
2 is a view showing the results of the sensitivity (sensitivity) experiment of the primer according to the present invention.
3 is a view showing the results of specificity (specificity) experiment of the primer according to the present invention.

본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 안 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.
The terms and words used in the present specification and claims should not be construed as limited to ordinary or dictionary terms and the inventor may properly define the concept of the term in order to best describe its invention It should be construed as meaning and concept consistent with the technical idea of the present invention.

따라서 본 명세서에 기재된 실시예, 참고예, 실험예 및 도면에 도시된 사항은 본 발명의 가장 바람직한 일 예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.
Therefore, the matters shown in the embodiments, reference examples, experimental examples, and drawings described herein are only the most preferred examples of the present invention, and do not represent all of the technical ideas of the present invention, and thus, these are replaced at the time of the present application. It should be understood that there may be various equivalents and variations that can be made.

먼저, 본 명세서에서 사용된 "프라이머(primer)"는 중합효소연쇄반응에서 이용되는 타깃 핵산에 인접해 있는 5'말단 서열 및 3'말단 서열에 상보적인 올리고뉴클레오타이드(oligonucleotide)를 의미한다. First, as used herein, "primer" refers to an oligonucleotide complementary to the 5 'terminal sequence and the 3' terminal sequence adjacent to the target nucleic acid used in the polymerase chain reaction.

또한 "전방향(forward) 프라이머" 및 "역방향(reverse) 프라이머"는 중합효소연쇄반응에 의해 증폭되는 유전자의 일정 부위의 3'말단 및 5'말단에 각각 결합하는 프라이머를 의미한다.
In addition, "forward (prior) primer" and "reverse (reverse) primer" means a primer that binds to the 3 'end and 5' end of each region of the gene amplified by the polymerase chain reaction, respectively.

이하 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다.
Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.

실시예 1. 마이코플라즈마 속(genus) 세균을 특이적으로 검출하는 프라이머의 제조 Example 1 Preparation of a Primer Specificly Detecting Mycoplasma Genus Bacteria

도 1은 본 발명에 따른 프라이머의 제작 부위의 염기서열 구조를 나타내는 도면이다.
1 is a view showing the nucleotide sequence structure of the production site of the primer according to the present invention.

마이코플라즈마 게놈서열 중에서 마이코플라즈마 속(genus) 세균에 특이적인 16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 함으로써, 마이코플라즈마 속(genus)에 속하는 세균을 특이적으로 검출할 수 있는 프라이머를 아래와 같이 서열번호 1 및 2의 염기서열로 이루어진 프라이머 쌍을 포함하도록 제조한다.
By targeting the 16s rRNA (ribosomal RNA) gene region specific to mycoplasma genus bacteria in the mycoplasma genome sequence, primers that can specifically detect bacteria belonging to the mycoplasma genus are sequenced as follows. It is prepared to include a primer pair consisting of the nucleotide sequence of the number 1 and 2.

여기에서, rRNA(ribosomal RNA) 유전자는 세균을 종(species) 수준으로 구분할 수 있는 정보를 담고 있으며, 이 중 16s rRNA(ribosomal RNA)는 유전자 변이가 거의 없는 것으로 알려져 있다.
Here, the rRNA (ribosomal RNA) gene contains information that can distinguish bacteria at the species level (species), of which 16s rRNA (ribosomal RNA) is known to have little genetic variation.

서열번호 1. SEQ ID NO: 1. 전방향 프라이머(Forward primer)Forward primer

5'-CTC TTT GTA CCG GCC ATT GT-3'5'-CTC TTT GTA CCG GCC ATT GT-3 '

(20 mer, 뉴클레오타이드 699283 ∼ 699302)
(20 mer, nucleotides 699283-699302)

서열번호 2. SEQ ID NO: 2. 역방향 프라이머(Reverse primer)Reverse primer

5'-GAA TGA CAG ATG GTG CAT GG-3'5'-GAA TGA CAG ATG GTG CAT GG-3 '

(20 mer, 뉴클레오타이드 699478 ∼ 699497)
(20 mer, nucleotides 699478-699497)

상기 프라이머는 합성 후 OPC 방법으로 정제하여 사용한다.
The primer is used after purification by OPC method.

실시예 2. 마이코플라즈마 속(genus) 세균을 특이적으로 검출하는 방법 Example 2 Method for Specific Detection of Mycoplasma Genus Bacteria

(1) 시료(sample)로부터 DNA를 추출하는 단계(1) extracting DNA from a sample

배양된 세포(cultured cell), 또는 사람과 동물의 폐렴 조직 등을 시료로 사용하며, 이로부터 DNA를 분리 추출한다.
Cultured cells, or pneumonia tissues of humans and animals, are used as samples, and DNA is separated and extracted therefrom.

(2) 실시예 1에서 제조된 마이코플라즈마 속(genus) 세균에 특이적인 프라이머를 준비하는 단계(2) preparing a primer specific for the mycoplasma genus bacteria prepared in Example 1

마이코플라즈마 게놈서열 중에서 마이코플라즈마 속(genus) 세균에 특이적인 16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 하는 프라이머를 준비한다.
In the mycoplasma genome sequence, primers targeting 16s rRNA (ribosomal RNA) gene regions specific for mycoplasma genus bacteria are prepared.

(3) 추출된 시료 DNA 및 프라이머를 가지고 중합효소연쇄반응(PCR)을 실시하는 단계(3) performing polymerase chain reaction (PCR) with the extracted sample DNA and primer

PCR을 위한 반응시약의 조성은, 1㎕ 전방향, 역방향 프라이머 (10 pmol/㎕), 2.5㎕ 10× 반응버퍼, 500 μM 디옥시뉴클레오타이드, 1.5 U Taq 중합효소를 각각 넣고, 25 ㎕의 반응량이 되도록 멸균된 증류수를 첨가하여 섞어 제조한다.The composition of the reaction reagent for PCR was 1 μl forward, reverse primer (10 pmol / μl), 2.5 μl 10 × reaction buffer, 500 μM deoxynucleotide, 1.5 U Taq polymerase, and 25 μl of reaction volume. Prepare by mixing sterilized distilled water as much as possible.

중합효소연쇄반응은 써모사이클러(Thermocycler; ABI, USA)를 이용하여 반응을 실시한다.The polymerase chain reaction is carried out using a thermocycler (ABI, USA).

반응조건은 95℃에서 5 분(min)간 프리디내츄레이션(pre-denaturation)을 실시 한 후 95℃에서 1 분(min), 55℃에서 1분(min), 72℃에서 1분(min)을 30 주기로 시행하고 마지막으로 72℃에서 3분(min)간 포스트폴리머라이제이션(post-polymerization)을 실시한다.The reaction conditions were pre-denaturation for 5 minutes at 95 ° C, followed by 1 minute at 95 ° C, 1 minute at 55 ° C, and 1 minute at 72 ° C. 30 cycles and finally post-polymerization (min) at 72 ℃ for 3 minutes (min).

중합효소 연쇄반응의 산물은 2% 아가로즈겔에 전기영동하여 215 bp의 밴드를 확인한다.
The product of polymerase chain reaction was electrophoresed on 2% agarose gel to identify a band of 215 bp.

참고예 1. 실험 준비Reference Example 1. Experiment Preparation

본 발명의 실시예에 따라 개발된, 마이코플라즈마 속(genus)에 속하는 다양한 세균들을 동시에 검출하기 위한 컨센서스 중합효소연쇄반응 프라이머의 민감도와 특이도를 확인하기 위하여 아래와 같이 실험을 준비하였다.
In order to confirm the sensitivity and specificity of the consensus polymerase chain reaction primer for simultaneously detecting various bacteria belonging to the genus Mycoplasma (genus) developed according to an embodiment of the present invention, the experiment was prepared as follows.

1-1. 마이코플라즈마 균주 준비와 배양1-1. Mycoplasma Strain Preparation and Culture

본 발명에 따른 프라이머의 민감도 및 특이도 등을 확인하기 위한 실험을 수행하기 위하여 아래와 같이 총 9 개 종류의 마이코플라즈마 종 별 균주들을 구입하여 배양하였다. In order to perform experiments for confirming the sensitivity and specificity of the primer according to the present invention, a total of nine kinds of mycoplasma strains were purchased and cultured as follows.

Mycoplasma speciesMycoplasma species 1One Mycoplasma hyopneumoniae Mycoplasma hyopneumoniae 22 Mycoplasma hyorhinisMycoplasma hyorhinis 33 Mycoplasma pneumoniae Mycoplasma pneumoniae 44 Mycoplasma hominis Mycoplasma hominis 55 Mycoplasma pulmonis Mycoplasma pulmonis 66 Mycoplasma arthritiditis Mycoplasma arthritiditis 77 Mycoplasma bovisMycoplasma bovis 88 Mycoplasma fluccurareMycoplasma fluccurare 99 Mycoplasma mycoidesMycoplasma mycoides

상기 마이코플라즈마 균주의 배양은 modified Friis 배지를 이용하여 37 ℃에서 58 rpm으로 10일간 배양하여 13,000 g에서 30분 동안 원심 분리하여 Friss 배지성분을 제거하였다.
The mycoplasma strain was cultured for 10 days at 37 rpm at 58 rpm using modified Friis medium to remove Friss medium components by centrifugation at 13,000 g for 30 minutes.

1-2. 비교대상 균주의 준비1-2. Preparation of Comparative Strains

본 발명에 따른 프라이머의 특이도 등을 확인하기 위한 비교 실험을 수행하기 위하여 아래와 같이 총 7 개 종류의 비교대상 균주들을 구입하여 준비하였다. In order to perform a comparative experiment for confirming the specificity of the primer according to the present invention, a total of seven kinds of comparative strains were purchased and prepared as follows.

비교대상 균주Comparative strain 1One Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus 22 Escherichia coliEscherichia coli 33 Helicobacter pylori Helicobacter pylori 44 Pasteurella multocida Pasteurella multocida 55 Salmonella pullorum Salmonella pullorum 66 Salmonella gallinarum Salmonella gallinarum 77 Actinobacillus pleuropneumoniaeActinobacillus pleuropneumoniae

1-3. 마이코플라즈마 및 비교대상 균주 별 DNA 추출 시료 준비1-3. Preparation of DNA Extraction Samples for Mycoplasma and Comparative Strains

배양한 각각의 마이코플라즈마 균주들과 비교대상 균주들의 DNA 추출은 비드 비터-페놀 추출 방법(bead beater-phenol extraction method)를 사용하였다.DNA extraction of each of the cultured mycoplasma strains and the comparison strains was performed using a bead beater-phenol extraction method.

균주들을 13,000 g에서 30분 동안 원심분리하여 얻은 펠렛 검체를 1 ml 멸균 증류수가 들어있는 Mini-Bead Beater(Biospec product) 전용 2 ml 튜브에 무균 채취하여 세절한 후 멸균 3차 증류수에 부유시킨 glass bead(0.1 mm size, Biospec product) 200 μl와 phenol-chlorform-isoamyl alcohol 용액(50:49:1(v/v/v)) 200μl를 넣어 Mini-Bead Beater(Biospec product)로 30초간 5,000rpm으로 진탕하였다.Pellet samples obtained by centrifuging the strains at 13,000 g for 30 minutes were sterilely collected in a 2 ml tube dedicated to Mini-Bead Beater (Biospec product) containing 1 ml sterile distilled water, chopped, and suspended in sterile tertiary distilled water. 200 μl of (0.1 mm size, Biospec product) and 200 μl of phenol-chlorform-isoamyl alcohol solution (50: 49: 1 (v / v / v)) were shaken at 5,000 rpm for 30 seconds with Mini-Bead Beater (Biospec product). It was.

진탕 후 4 ℃에서 12,000 rpm으로 15분간 원심 분리한 후 상층액을 멸균 2ml 튜브에 옮겼다.After shaking, the mixture was centrifuged at 12,000 rpm for 15 minutes at 4 ° C, and the supernatant was transferred to a sterile 2 ml tube.

3 M 초산나트륨(sodium acetate) 10 μl와 ice-cold 에탄올 250μl를 넣어 -20℃에서 10분간 정체시킨 후, 15,000rpm으로 15분간 원심분리 하였다.10 μl of 3 M sodium acetate and 250 μl of ice-cold ethanol were added to the mixture, and the mixture was suspended for 10 minutes at −20 ° C., followed by centrifugation at 15,000 rpm for 15 minutes.

침전물은 70% 알코올로 세척하여 실온에서 건조시키고 Tris EDTA(pH 8.0) 60μl에 용해시켜 실험에 사용하였다.
The precipitate was washed with 70% alcohol, dried at room temperature and dissolved in 60 μl of Tris EDTA (pH 8.0) and used for the experiment.

1-4. 중합효소연쇄반응 조건1-4. Polymerase Chain Reaction Conditions

실시예 1에서 제조된 마이코플라즈마 속(genus) 세균에 특이적인 프라이머를 이용하며, 이는 마이코플라즈마 게놈서열 중에서 마이코플라즈마 속(genus) 세균에 특이적인 16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 하고 있다.A primer specific for the mycoplasma genus bacterium prepared in Example 1 is used, which targets a 16s rRNA gene region specific for the mycoplasma genus bacterium in the mycoplasma genome sequence. .

중합효소연쇄반응을 위한 반응시약 조성, 반응을 위한 써모사이클러, 반응조건 및 반응산물의 확인은, 실시예 2와 동일하게 진행한다.
The composition of the reaction reagent for the polymerase chain reaction, the thermocycler for the reaction, the reaction conditions, and the confirmation of the reaction product proceed in the same manner as in Example 2.

실험예 1. 본 발명에 따른 프라이머의 마이코플라즈마 속(genus) 세균에 대한 민감도(sensitivity) 확인Experimental Example 1. Confirmation of sensitivity of mycoplasma genus bacteria of the primer according to the present invention

참고예 1의 실험준비에 따라서, 총 9개 종류의 마이코플라즈마 균주들인 마이코플라즈마 하이오뉴모니에(M. hyopnenmoniae), 마이코플라즈마 하이오라이니스 (M. hyorhinis), 마이코플라즈마 뉴모니에 (M. pneumoniae), 마이코플라즈마 호미니스 (M. hominis), 마이코플라즈마 펄모니스 (M. Pulmonis), 마이코플라즈마 아쓰라이티디티스 (M. arthritiditis), 마이코플라즈마 보비스 (M. bovis), 마이코플라즈마 플루큐라레 (M. fluccurare), 마이코플라즈마 마이코이데스 (M. mycoides) 균주의 102 pg의 DNA 샘플들을 준비하였다.
According to the experimental preparation of Reference Example 1, a total of nine kinds of mycoplasma strains, Mycoplasma hyopnenmoniae , Mycoplasma hyorhinis , and Mycoplasma pneumoniae ), mycoplasma hoe Nice (M. hominis), mycoplasma Pearl's monitor (M. Pulmonis), mycoplasma Oh bitter di itty-Tees (M. arthritiditis), mycoplasma bovis (M. bovis), mycoplasma flu curare 10 2 pg of DNA samples of M. fluccurare , Mycoplasma mycoides strains were prepared.

샘플들 각각에 대하여, 실시예 1에서 제조된 마이코플라즈마 속(genus) 세균에 특이적인 16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 하는 프라이머를 가지고 중합효소연쇄반응을 수행하였으며, 중합효소연쇄반응의 조건은 실시예 2와 동일하게 진행하였다.
For each of the samples, a polymerase chain reaction was carried out with primers targeting the 16s rRNA (ribosomal RNA) gene region specific for the mycoplasma genus bacterium prepared in Example 1. The conditions were carried out in the same manner as in Example 2.

도 2는 본 발명에 따른 프라이머의 민감도(sensitivity) 실험 결과를 나타낸 도면이고, 이를 표로서 나타낸 것이 다음의 표 3이다.
2 is a view showing the results of the sensitivity (sensitivity) experiment of the primer according to the present invention, which is shown as a table Table 3 below.

Mycoplasma speciesMycoplasma species PCR resultPCR result 1One M. hyopneumoniaeM. hyopneumoniae ++ 22 M. hyorhinisM. hyorhinis ++ 33 M. pneumoniaeM. pneumoniae ++++++ 44 M. hominis M. hominis ++++++ 55 M. pulmonisM. pulmonis ++++ 66 M. arthritiditisM. arthritiditis ++ 77 M. bovisM. bovis ++ 88 M. fluccurareM. fluccurare ++++++ 99 M. mycoidesM. mycoides ++++

+++: Strong reaction, ++: moderate, +: mild, -: No reaction
+++: Strong reaction, ++: moderate, +: mild,-: No reaction

도 2 및 표 3에 나타난 것과 같이, 본 발명에서 개발한 마이코플라즈마 속(genus) 세균에 특이적인 16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 하는 프라이머는 3, 4 및 8번 균주(M. pneumoniae, M. hominis, M. fluccurare)의 DNA와는 강하게 반응하였음을 알 수 있다. As shown in Figure 2 and Table 3, primers targeting the 16s rRNA (ribosomal RNA) gene region specific for the mycoplasma genus bacteria developed in the present invention are strains 3, 4 and 8 ( M. pneumoniae) , M. hominis , M. fluccurare ) strongly reacted with DNA.

또한 5 및 9번 균주(M. Pulmonis, M. mycoides) 의 DNA와는 다소 강한 정도로, 나머지 균주(M. hyopnenmoniae, M. hyorhinis, M. arthritiditis, M. bovis)의 DNA 와는 일반적인 정도로 반응하였음을 알 수 있다.
In addition, it was found that it reacted with DNA of the 5th and 9th strains ( M. Pulmonis , M. mycoides ) somewhat stronger, and with the DNA of the remaining strains ( M. hyopnenmoniae , M. hyorhinis, M. arthritiditis , M. bovis ). Can be.

따라서 실험예 1의 결과를 볼 때, 본 발명에서 개발된 마이코플라즈마 속(genus)에 특이적인 16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 하는 프라이머는 마이코플라즈마 속(genus) 세균들의 DNA에 민감할 정도로 반응하는 것이 확인되었다.
Therefore, in view of the results of Experiment 1, primers targeting the 16s rRNA (ribosomal RNA) gene region specific to the mycoplasma genus developed in the present invention will be sensitive to the DNA of mycoplasma genus bacteria. It was confirmed to react to the extent.

실험예 2. 본 발명에 따른 프라이머의 마이코플라즈마 속(genus) 세균에 대한 특이도(specificity) 확인Experimental Example 2. Confirmation of specificity of mycoplasma genus bacteria of the primer according to the present invention

참고예 1의 실험준비에 따라, 마이코플라즈마 및 비교대상 균주 102 pg의 DNA 샘플들을 준비하였다.According to the experimental preparation of Reference Example 1, DNA samples of mycoplasma and the comparative strain 10 2 pg were prepared.

여기에서, 마이코플라즈마 균주는 마이코플라즈마 하이오뉴모니에 (M. hyopnenmoniae) 및 마이코플라즈마 하이오라이니스 (M. hyorhinis) 2개 종류를 준비하였다.Here, two kinds of mycoplasma strains were prepared: mycoplasma hyopnenmoniae and mycoplasma hyorhinis .

또한 비교대상 균주는 총 7개 종류로서, 스타필로코코스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 대장균(Escherichia coli), 헬리코박터 파일로리(Helicobacter pylori), 파스튜렐라 멀토시다(Pasteurella multocida), 살모넬라 퓰루룸(Salmonella pullorum), 살모넬라 갈리나리움(Salmonella gallinarum), 엑티노바실러스 플루루뉴모니에(Actinobacillus pleuropneumoniae) 균주이다.
In addition, the comparison target strain is a total of seven types, Staphylococcus Cocos aureus (Staphylococcus aureus), Escherichia coli (Escherichia coli), Helicobacter pylori (Helicobacter pylori), wave stew Pasteurella far Toshio the (Pasteurella multocida), Salmonella manipulator rurum ( Salmonella pullorum ), Salmonella gallinarum ( Salmonella gallinarum ), Actinobacillus pleuropneumoniae strains.

샘플들 각각에 대하여, 실시예 1에서 제조된 마이코플라즈마 속(genus) 세균에 특이적인 16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 하는 프라이머를 가지고 중합효소연쇄반응을 수행하였으며, 중합효소연쇄반응의 조건은 실시예 2와 동일하게 진행하였다.
For each of the samples, a polymerase chain reaction was carried out with primers targeting the 16s rRNA (ribosomal RNA) gene region specific for the mycoplasma genus bacterium prepared in Example 1. The conditions were carried out in the same manner as in Example 2.

도 3은 본 발명에 따른 프라이머의 특이도(specificity) 실험 결과를 나타낸 도면이고, 이를 표로서 나타낸 것이 다음의 표 4이다.
Figure 3 is a view showing the results of the specificity (specificity) experiment of the primer according to the invention, which is shown in Table 4 below.

Mycoplasma speciesMycoplasma species PCR resultPCR result 1One M. hyopneumoniaeM. hyopneumoniae ++++ 22 M. hyorhinisM. hyorhinis ++++ 33 Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus -- 44 Escherichia coli Escherichia coli -- 55 Helicobacter pyloriHelicobacter pylori -- 66 Pasteurella multocidaPasteurella multocida -- 77 Salmonella pullorumSalmonella pullorum -- 88 Salmonella gallinarumSalmonella gallinarum -- 99 Actinobacillus pleuropneumoniaeActinobacillus pleuropneumoniae --

+++: Strong reaction, ++: moderate, +: mild, -: No reaction
+++: Strong reaction, ++: moderate, +: mild,-: No reaction

도 3및 표 4에 나타난 것과 같이, 본 발명에서 개발한 마이코플라즈마 속(genus) 세균에 특이적인 16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 하는 프라이머는 마이코플라즈마 속(genus) 세균인 마이코플라즈마 하이오뉴모니에(M. hyopnenmoniae) 및 마이코플라즈마 하이오라이니스(M. hyorhinis)의 DNA에 특이적으로 반응하였음을 알 수 있다.As shown in FIG. 3 and Table 4, the primers targeting the 16s rRNA (ribosomal RNA) gene region specific for the mycoplasma genus bacteria developed in the present invention are mycoplasma high, which is a mycoplasma genus bacterium. It can be seen that it specifically reacted to DNA of M. hyopnenmoniae and Mycoplasma hyorhinis .

반면에 마이코플라즈마 속(genus)에 속하지 않은 총 7개 종류의 비교대상 균주의 DNA와는 반응이 일어나지 않았음을 알 수 있다.
On the other hand, it can be seen that there was no reaction with the DNA of a total of seven kinds of comparative strains not belonging to the genus Mycoplasma.

따라서 실험예 2의 결과를 볼 때, 본 발명에서 개발된 마이코플라즈마 속(genus)에 특이적인 16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 하는 프라이머는 마이코플라즈마 속(genus) 세균들의 DNA에만 특이적으로 반응하는 것이 확인되었다.
Therefore, when looking at the results of Experiment 2, the primer targeting the 16s rRNA (ribosomal RNA) gene region specific to the mycoplasma genus developed in the present invention is specific only to the DNA of mycoplasma genus bacteria. It was confirmed to react.

실험예 1 및 실험예 2를 총괄하여 정리하여 보면, 본 발명의 실시예 1에 따른 프라이머는 마이코플라즈마 속(genus)에 특이적인 16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 함으로써, 마이코플라즈마 속(genus) 세균들을 검출하기 위한 민감도(sensitivity) 및 특이도(sensitivity)가 확인되었음을 알 수 있다.Collectively, Experimental Example 1 and Experimental Example 2, the primer according to Example 1 of the present invention by targeting the 16s rRNA (ribosomal RNA) gene region specific to the genus Mycoplasma, genus Mycoplasma ( genus) Sensitivity and specificity for detecting bacteria can be seen.

서열목록 전자파일 첨부Attach an electronic file to a sequence list

Claims (4)

서열번호 1 및 서열번호 2 의 프라이머 쌍을 포함하되,
16s rRNA(ribosomal RNA) 유전자 영역을 표적으로 하여 마이코플라즈마(Mycoplasma)를 검출하고,
상기 마이코플라즈마는 마이코플라즈마 하이오뉴모니에(M. hyopnenmoniae), 마이코플라즈마 하이오라이니스 (M. hyorhinis), 마이코플라즈마 뉴모니에 (M. pneumoniae), 마이코플라즈마 호미니스 (M. hominis), 마이코플라즈마 펄모니스 (M. Pulmonis), 마이코플라즈마 아쓰라이티디티스 (M. arthritiditis), 마이코플라즈마 보비스 (M. bovis), 마이코플라즈마 플루큐라레 (M. fluccurare), 마이코플라즈마 마이코이데스 (M. mycoides) 균주를 포함하는 것을 특징으로 하는, 마이코플라즈마(Mycoplasma)를 검출하기 위한 프라이머 세트.
Including primer pair of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2,
Mycoplasma is detected by targeting the 16s rRNA (ribosomal RNA) gene region,
The mycoplasma may be mycoplasma hyopnenmoniae , mycoplasma hyorhinis , mycoplasma pneumoniae , mycoplasma hominis , mycoplasma Pearl's monitor (M. Pulmonis), mycoplasma Oh bitter di itty-Tees (M. arthritiditis), mycoplasma bovis (M. bovis), mycoplasma flu curare (M. fluccurare), mycoplasma Mai Koh death (M. mycoides ), comprising a primer set for detecting Mycoplasma ( Mycoplasma ).
삭제delete 청구항 1의 프라이머 세트를 이용하되, 중합효소연쇄반응 (Polymerase chain reaction, PCR)으로 마이코플라즈마(Mycoplasma)를 검출하는 방법.
Using the primer set of claim 1, the method for detecting Mycoplasma (Polymerase chain reaction (Polymerase chain reaction, PCR)).
중합효소연쇄반응(PCR)을 이용하여 마이코플라즈마(Mycoplasma)를 검출하는 키트로서,
청구항 1의 프라이머 세트를 포함하는, 마이코플라즈마(Mycoplasma) 검출키트.
A kit for detecting Mycoplasma using polymerase chain reaction (PCR),
Mycoplasma detection kit comprising the primer set of claim 1.
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