KR101251041B1 - 폐외 결핵 진단용 마커 - Google Patents

Abstract

본 발명은 신규한 폐외 결핵 진단용 마커, 상기 마커를 포함하는 폐외 결핵 진단용 조성물 및 폐외 결핵 진단방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로는, HspX, GroEL, Adk 로 이루어진 신규한 폐외 결핵 항원 그룹에서 선택되는 하나 이상의 폐외 결핵 진단용 마커 및 상기 마커에 HBHA 항원을 추가적으로 더 포함하는 폐외 결핵 진단용 조성물 및 진단방법에 관한 것이다. 본 발명에 의한 조성물은 폐외 결핵 환자의 혈청에 대한 민감도가 높아, 보다 정확하게 폐외 결핵 감염여부를 진단할 수 있다.

Description

폐외 결핵 진단용 마커 {Biomarkers for the serodiagnosis of serodiagnosis of diagnosis of extrapulmonary tuberculosis}

본 발명은 신규한 폐외 결핵 진단용 마커, 상기 마커를 포함하는 폐외 결핵 진단용 조성물 및 폐외 결핵 진단방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로는, HspX, GroEL, Adk 로 이루어진 신규한 폐외 결핵 항원 그룹에서 선택되는 하나 이상의 폐외 결핵 진단용 마커 및 상기 마커에 HBHA 항원을 추가적으로 더 포함하는 폐외 결핵 진단용 조성물 및 진단방법에 관한 것이다.

결핵을 유발하는 병원체인 결핵균 (Mycobacterium tuberculosis)은 일차적으로 호흡기를 통하여 감염이 이루어지며, 세계적으로 매년 약 200만 명의 사람들이 결핵에 의하여 사망하고 800만 명 정도의 새로운 결핵환자가 발생하고 있다. 결핵은 세계 10대 사망원인의 하나로 우리나라는 OECD 가입 30개국 중 결핵사망률 1위로 인구 10만명 당 5.5명 (하루 평균 7.4명)이 사망하고 있으며 (2005년도 사망 통계), 이는 일본의 3.9배, 미국의 23.3배이다. 우리나라는 최근 들어 결핵신환자 발생율이 더 이상 감소하지 않고 있으며, 매년 10-20대 청소년에서 집단 결핵이 유발되어 사회문제가 되고 있다. 결핵균에 감염된 사람들 중에서 단지 5-10% 만이 결핵으로 발병한다고 알려져 있다. 그러나 지난 50년간 국가결핵관리사업 추진결과로 결핵에 의한 사망률이 많이 감소하였지만, 2000년대에 들어 신환자수의 감소 추세가 둔화되고 있으며, 최근 3년간 결핵환자의 수는 점차 증가하고 있는 추세이다.

결핵은 주로 폐에서 발생하는 폐결핵이 가장 흔하지만, 결핵균이 혈류를 통해 이동하여 뇌막, 복막, 흉막, 골관절 (척추), 장, 신장, 림프절 등의 다른 장기에서 발생하는 폐외 결핵이 전체 결핵의 10-15%를 차지하고 있다. 폐결핵이 흉부 X-선과 객담검사 등의 비교적 간단한 방법으로 확인이 가능한 데 비해, 폐외 결핵은 침범 부위나 범위에 따라 번거로운 조직검사나 각종 특수검사를 필요로 한다.

대표적인 폐외 결핵인 결핵성 흉막염 (Tuberculous pleuritis)은 흉막액의 결핵균 배양검사가 음성이며, 흉막액에는 과민화된 T림프구들이 주로 존재한다. 보통 흉부 엑스선상 명확한 폐결핵의 증거가 없이 발생했을 때에는 대개 3-6개월 전에 있었던 결핵균의 일차감염에 의한 후유증으로 인한 것이며 폐첨부의 흉막하에 있던 작은 건락성 물질들이 흉막강내로 파열되어서 발생하는 것으로 추정되고 있다.

결핵성 흉막염의 진단은 환자의 객담이나 흉막액, 흉막조직에서 결핵균을 검출하거나 흉막조직검사에서 결핵성 육아종을 발견함으로 내려진다. 약 1/3의 결핵성 흉막염 환자들에서 흉부 엑스선상 폐결핵이 동반되어 있는데 이런 경우에 폐결핵은 거의 활동성이며 흉막액은 폐결핵이 있는 쪽에 있다.

흉막액 검사는 진단에 매우 유용한데 흉막액은 반드시 삼출액이며 흉막액내의 단백질농도는 증가되어 있어 종종 5 g/dl가 넘고 세포의 50% 이상이 림프구이다. 또한 결핵성 흉막염 환자의 세균학적 검사를 위해서는 흉막액과 객담 모두에서 결핵균 검사를 시행해야 한다. 그러나 흉막액에서의 결핵균 배양 양성율이 낮아서 25% 미만이며 객담에서의 결핵균 배양율도 매우 낮다.

결핵성 흉막염의 다른 진단법으로는 흉막생검이 매우 유용한데 흉막조직에서의 육아종의 존재는 건락성 괴사 소견이나 결핵균 증명이 안된 경우에도 질환이 결핵성 흉막염임을 강력히 암시하는 소견이다. 흉막액내의 ADA수치 역시 결핵성 흉막염의 진단에 유용한데 흉막액내 ADA수치가 70 U/L이상이면 대부분이 결핵이고 40 U/L미만이면서 결핵인 경우는 없었다.

그러나 결핵성 흉막염을 포함하는 폐외 결핵은 특별한 증세 없이 서서히 진행하는 탓에 진단과 치료가 늦어져 종종 생명을 위협하기도 한다. 대부분의 환자가 자각을 하고 병원을 찾았을 때는 이미 중증으로 발전된 후인 경우가 적지 않다. 따라서 폐외 결핵의 조기진단이 시급한 실정이다.

그러므로 폐외 결핵의 효과적인 제어를 위해서는 결핵과 구별되는 폐외 결핵 특이적 항원의 발굴 및 바이오마커의 활용 연구가 반드시 필요하다. 이러한 연구는 폐외 결핵의 조기 진단기법의 개발에 결정적인 단서를 제공할 수 있으며, 발굴된 특이적인 바이오마커를 이용한 진단기법은 폐외 결핵의 치료효과를 예측하게 함으로써 폐외 결핵의 제어 및 국민건강 보건에 이바지할 것이다.

이에 본 발명자들은 폐외 결핵, 특히 결핵성 흉막염에 특이적인 진단마커를 발굴하기 위해 노력하던 중 M. tuberculosis H37Rv 의 특정 단백질 항원의 조합이 폐외 결핵을 혈청학적으로 감별, 진단하는데 유용함을 확인하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

따라서 본 발명의 목적은 폐외 결핵 진단용 마커를 제공하는데 있다.

또한 본 발명은 상기 마커들을 조합한, 폐외 결핵 진단용 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 조성물을 이용하여 폐외 결핵 진단 방법을 제공하는데 있다.

상기의 목적을 달성하기 위해 본 발명은 HspX, GroEL, Adk 로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상의 폐외 결핵 진단용 마커를 제공한다.

상기 마커는 마이코박테리움 투버큘로시스 (mycobacterium tuberculosis) H37Rv 의 특정 단백질 항원이다.

HspX (heat shock protein X, Rv2031c)는 144 아미노산 서열로 이루어진 16-kDa 세포질 항원으로서 정지기나 저산소 조건에서 발현이 증가되는 진단적인 유의성을 가진 항원으로 알려져 있다. 또한 in vivo 결핵균의 감염에 따른 성장을 늦춰주는데 중요한 역할을 할 것으로 보여지고 있다.

GroEL (65-kDa heat shock protein, Rv3417c)은 539 아미노산 서열로 이루어진 60-kDa 샤페론 (chaperon) 단백질로서 misfolding된 펩타이드의 refolding에 관여한다.

Adk (adenylate kinase, Rv0733)는 결핵균의 핵산 (nucleic acid) 합성과 에너지 대사과정 (metabolism)에 중요한 역할을 하는 효소로서 결핵균의 생존에 필수적인 단백질로 알려져 있다.

또한 본 발명은 상기 HspX, GroEL, Adk 로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상의 폐외 결핵 진단용 마커 및 HBHA 항원으로 이루어진 폐외 결핵 진단용 마커를 제공한다.

HBHA (heparin-binding hemagglutinin, Rv0475)는 199 아미노산 서열로 이루어진 단백질로 상피세포 (epithelial cells)에 박테리아의 부착에 관여하는 것으로 알려져 있다. HBHA 단백질은 C-terminus의 lysine 잔기를 수반하는 methylation 과정을 겪는데, 이는 생물학적 기능에 매우 중요한 역할을 한다.

HBHA 항원은 폐외 결핵 진단용 마커로서 현재 사용되어 지고 있으나, 모든 종류의 폐외 결핵을 진단할 수 없는 한계가 있어왔다. 즉, 본 발명은 기존의 HBHA 항원을 이용한 결핵 진단에서, 환자의 혈청에 대한 민감도를 높여 주기 위해서 HBHA 항원 이외에도 HspX, GroEL, Adk 로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상의 폐외 결핵 진단용 마커를 더 포함하는 바이오마커를 제공한다.

본 발명에서 사용된 용어, "진단"은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 진단은 폐외결핵 발병 여부를 확인하는 것이다.

본 발명에서 사용된 용어, "폐외 결핵 진단용 마커"란 폐외 결핵 환자의 혈청과 건강인의 혈청을 구분하여 진단할 수 있는 물질로 건강인의 혈청에 비하여 폐외 결핵이 발병된 혈청에서 특이적으로 발현되는 유기 생체 분자를 말한다. 상기 유기 생체 분자로는 예를 들면, 이에 한정되지는 않으나, 폴리펩타이드, 단백질, 핵산, 지질, 당지질, 당단백질, 당 등이 포함된다. 본 발명에서 폐외 결핵 진단용 마커는 폐외결핵 환자 유래 혈청의 면역글로불린 G에 특이적으로 반응하는 단백질 또는 이를 암호화하는 핵산일 수 있다.

또한 본 발명은 폐외 결핵의 보다 효율적인 진단을 위해 사용될 수 있는 진단용 조성물을 제공한다. 보다 구체적으로는 잘 알려진 폐외 결핵 환자의 혈청에 특이적으로 반응하는 진단용 항원 외에 추가적인 항원의 조합이 기존의 진단용 항원을 단독으로 사용하였을 때 반응하지 않는 환자의 혈청에 대한 민감도를 높여주기 때문에 보다 효과적인 진단효과를 갖게 됨에 관한 것이다. 이하 본 발명의 폐외 결핵 진단용 조성물에 대해서 자세히 설명한다.

본 발명의 조성물은 HBHA 및 HspX 항원을 포함한다.

바람직하게는 상기 조성물에 GroEL, Adk 로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상의 항원을 더 포함할 수 있다.

본 발명의 실시예에 의하면, 준비된 결핵항원들을 각각의 폐외 결핵 환자의 혈청을 이용하여 ELISA 를 실시한 결과, HBHA와 HspX의 항원에 반응하지 않는 환자의 혈청이 GroEL과 Adk에 의해 특이적으로 결합하였다.

가장 바람직한 형태는 HBHA, HspX, GroEL 및 Adk 로 이루어진 조성물로서, 폐외 결핵 환자의 혈청에 대한 민감도 (약 72%) 가 가장 높았다.

즉, 본 발명에 의한 폐외 결핵 진단용 조성물은 기존의 방법보다 민감도와 특이성이 높아, 보다 정확하게 폐외 결핵 감염여부를 진단할 수 있다.

본 발명에서, 폐외 결핵은 바람직하게는, 결핵성 흉막염이다.

또한, 본 발명은 상기 HBHA 및 HspX 항원 또는 상기 항원에 GroEL, Adk 로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상의 항원을 더 포함한 폐외 결핵 진단용 키트를 제공한다.

본 발명의 진단용 키트는 진단의 신속도 및 편리성을 높이기 위해, 적합한 담체 또는 지지체상에 공지된 다양한 방법을 이용하여 고정화된 상태로 제공될 수 있다 (Antibodies: A Labotory Manual, Harlow ＆ Lane; Cold SpringHarbor, 1988). 적합한 담체 또는 지지체의 예로는 아가로스, 셀룰로즈, 니트로셀룰로즈, 덱스트란, 세파덱스, 세파로즈, 리포솜, 카복시메틸 셀룰로즈, 폴리아크릴아미드, 폴리스테린, 반려암, 여과지, 이온교환수지, 플라스틱 필름, 플라스틱 튜브, 유리, 폴리아민-메틸 비닐-에테르-말레산 공중합체, 아미노산 공중합체, 에틸렌-말레산 공중합체, 나일론, 컵, 플랫 팩 (flat packs) 등 이 포함된다. 그 외의 다른 고체 기질로는 세포 배양 플레이트, ELISA 플레이트, 튜브 및 폴리머성막이 있다. 상기 지지체는 임의의 가능한 형태, 예를 들어 구형 (비드), 원통형 (시험관 또는 웰 내면), 평면형(시트, 시험 스트립)을 가질 수 있다.

상기 진단용 키트로는 예를 들면, 샘플 중의 특정 단백질을 검출하기 위해 면역크로마토그래피법을 기초로 하는 측방 유동 검정 키트(lateral flow assay kit)의 형태로 제공될 수 있다. 측방 유동 검정 키트는 샘플에 적용되는 샘플패드 (sample pad), 탐지용 항체가 코팅되어 있는 방출패드(releasing pad), 샘플이 이동하여 분리되고 항원-항체 반응이 일어나는 전개용 막 (예를 들어 니트로셀룰로스) 또는 스트립, 그리고 흡수패드(absorption pad)로 이루어져 있다.

또한 본 발명은 상기 HBHA 및 HspX 항원으로 이루어진 조성물을 이용한, 폐외 결핵 진단 방법을 제공한다.

본 발명의 폐외 결핵 진단방법은,

(1) 웰 마이크로플레이트에 HBHA 및 HspX 항원을 반응시키는 단계;

(2) 상기 (1) 단계의 항원에 검사 혈청시료를 반응시키는 단계; 및

(3) 항원-항체 복합체의 형성 여부를 측정하는 단계;

를 포함하여 폐외 결핵 감염 여부를 진단할 수 있다.

보다 바람직하게는, 상기 항원에는 GroEL, Adk 로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상의 항원을 더 포함하는 것이다.

상기 진단방법은 폐외결핵 진단용 항원을 혈청학적 시료에 접촉시켜 항원-항체 복합체의 형성여부를 측정함으로써, 생물학적 샘플 중에서 본 발명의 진단용 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 존재 여부를 확인하는 방법이다. 본 발명에서 사용된 용어 '항원-항체 복합체'란 본 발명의 항원 단백질과 생물학적 샘플 중 이를 특이적으로 인지하는 항체의 결합물을 의미한다.

상기 (1) 의 항원은 재조합 형태의 항원일 수 있다.

본 발명의 항원 단백질은 결핵균으로부터 유래한 것으로서, DNA 서열을 기초로 하여 재조합 방법에 의해 제조될 수 있다. 유전자 재조합 기술을 이용할 경우 단백질을 코딩하는 핵산을 적절한 발현 벡터에 삽입하고, 재조합 발현 벡터로 형질 전환된 형질 전환체에서 목적으로 하는 단백질이 발현되도록 숙주 세포를 배양한 후 형질 전환체로부터 목적으로 하는 단백질을 회수함으로써 수득될 수 있다.

상기 본 발명의 진단용 조성물은 폐외결핵의 진단용 항원 이외에 면역학적 분석에 사용되는 당업계에 공지된 시약을 추가로 포함할 수 있다.

상기에서 면역학적 분석은 항원과 항체의 결합을 측정할 수 있는 있는 방법이라면 모두 포함될 수 있다.이러한 방법들은 당 분야에 공지되어 있으며 예를 들어, 면역세포화학 및 면역조직화학, 방사선 면역 분석법 (radioimmunoassays), 효소결합면역법 (ELISA: Enzyme Linked Immunoabsorbent assay), 면역 블롯 (immunoblotting), 파아르 분석법 (Farr assay), 면역침강, 라텍스 응집, 적혈구 응집, 비탁계법, 면역확산법, 카운터-전류 전기영동법, 단일 라디칼 면역확산법, 면역크로마토그래피법, 단백질 칩 및 면역형광법이 있다.

면역학적 분석에 사용되는 시약으로는 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지, 용해제, 세정제가 포함된다. 또한, 표지물질이 효소인 경우에는 효소활성을 측정할 수 있는 기질 및 반응 정지제를 포함할 수 있다.

상기에서 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지는 항원-항체 복합체의 형성을 정성 또는 정량적으로 측정가능하게 하며, 이의 예로는 효소, 형광물질, 리간드, 발광물, 미소입자(microparticle), 레독스 분자 및 방사성 동위원소 등을 사용할 수 있다.효소로는 β-글루쿠로니다제, β-D-글루코시다제, 우레아제, 퍼옥시다아제, 알칼라인 포스파타아제, 아세틸콜린에스테라아제, 글리코즈 옥시다아제, 헥소키나제, 말레이트 디하이드로게나아제, 글루코스-6-인산디하이드로게나아제, 인버타아제 등을 사용할 수 있다.형광물질로는 플루오레신, 이소티오시아네이트, 로다민, 피코에리테린, 피코시아닌, 알로피코시아닌, 플루오르신이소티옥시아네이트 등을 사용할 수 있다.리간드로는 바이오틴 유도체 등이 있으며, 발광물로는 아크리디늄 에스테르, 루시페린, 루시퍼라아제 등이 있다. 미소입자로는 콜로이드 금, 착색된 라텍스 등이 있고 레독스 분자로는 페로센, 루테늄 착화합물, 바이올로젠, 퀴논, Ti 이온, Cs 이온, 디이미드, 1,4-벤조퀴논, 하이드로퀴논 등이 있다. 방사성 동위원소로는 ³H, ¹⁴C, ³²P, ³⁵S, ³⁶Cl, ⁵¹Cr, ⁵⁷Co, ⁵⁸Co, ⁵⁹Fe, ⁹⁰Y, ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹⁸⁶Re 등이 있다. 그러나 상기 예시된 것들 외에 면역학적 분석법에 사용할 수 있은 것이라면 어느 것이라도 사용할 수 있다.

본 발명의 폐외 결핵의 새로운 항원 마커를 이용하여 폐외 결핵을 진단할 수 있으며, 본 발명의 조성물로, 종래에 진단되지 못한 폐외 결핵 환자에 대해서도 감염여부를 높은 민감도로 정확히 진단할 수가 있다. 특히, 본 발명의 진단 조성물과 방법은 폐외 결핵 환자의 혈청 시료로부터 M. 투버쿨로시스를 진단할 수 있으므로 의료 현장에서 용이하게 적용할 수 있다.

이하, 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것이 아니고, 당업자에 의해 통상적으로 주지된 변형, 치환 및 삽입 등을 수행할 수 있으며, 이에 대한 것도 본원 발명의 범위에 포함됨은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

<실시예 1> 결핵항원의 준비

현재까지 폐외결핵의 진단을 포함한 마이코박테리움의 혈청학적 진단에 유의성을 갖고 있는 단백질 (HBHA)과 진단용 후보 결핵항원 (GlcB, GroEL, CFP-10, Adk, PstS3, Rv-CF, HspX, HBHA)들을 준비하였다.

각각의 재조합 단백질은 다음과 같은 방법으로 제작하였다.

첫째로, M. tuberculosis H37Rv genomic DNA를 주형으로 상위의 해당 유전자 서열에 대한 프라이머로 증폭한 후, 증폭시킨 유전자는 각각에 대한 효소로 벡터와 함께 처리한 후, 정제하고 라이게이션 (ligation)시켰다. 라이게이션 (Ligation) 된 플라스미드는 E. coli BL21 세포에 42℃ 온도 조건에서 90초간 충격을 가하여 형질전환시켜 항생제가 포함된 LB배지에서 형질전환된 균주만을 선택적으로 얻었다. 그 후, 얻은 균주를 1mM IPTG를 첨가하여 37℃에서 대량 배양하여 용해시킨 후, Ni-NTA 친화성 크로마토그래피 (affinity chromatography)를 통해 정제된 재조합 형태의 결핵 항원들을 수집하였다. 각 항원들의 프라이머와 제한효소 정보는 하기 표 1과 같다.

Antigen	enzyme	vector	Primer (forward, reverse)
GlcB (Rv1837c)	NdeI/XhoI	pET22b	5'-GGGCCCCATATGACAGATCGCGTGTCGGTG 3'-CCCAAACTCGAGGCGGGCCGCATCGTCACC
GroEL (Rv3417c)	NdeI/HindIII	pET23b	(미국 콜로라도 대학에서 받은 플라스미드)
CFP-10 (Rv3841)	BamHI/EcoRI	pET28a	5'-GGCCGGGGATCCATGGCAGAGATGAAGACC 3'-GGCCGGGAATTCGAAGCCCATTTGCGAGGA
Adk (Rv0733)	NdeI/XhoI	pET22b	5'-GGCCGGCATATGGTGAGAGTTTTGTTGCTG 3'-GGCCGGCTCGAGCTTTCCCAGAGCCCGCAA
PstS3 (Rv0928)	NdeI/XhoI	pET22b	5'-GGGCCCCATATGACCTCAATGTATGAACAG 3'-CCCAAACTCGAGGGCGATCGCGTTGACCGC
HspX (Rv2031c)
HBHA (Rv0475)	BamHI/EcoRI	pMV3-38	5'-AGGAGGATCCATGGCTGAAAACTCGAAC 3'-ATTCGAATTCCGACTACTTCTGGGTGAC

*' '제한효소 인식 사이트

<실시예 2> 폐외 결핵의 혈청학적 진단

준비된 결핵항원들을 각각의 폐외결핵 환자의 혈청을 이용하여 ELISA를 실시하였다. ELISA 수행은 다음과 같은 방법으로 실시하였다.

결핵균 항원을 0.05M 카보네이트 버퍼 (carbonate buffer)에 일정 농도(1~10㎍/㎖)로 용해한 후 96 웰 마이크로플레이트 (well microplate)에 0.1㎖씩 분주하여 4℃에서 하룻밤 항원을 부착시켰다. 각각의 마이크로플레이트 (microplate)는 0.05% tween 20이 포함된 PBS용액으로 2회 세척한 후 1% 소 혈청 알부민 (bovine serum albumin (BSA))이 포함된 PBS용액 (이하 PBS/Tween 20)을 각 웰 (well)당 0.15㎖씩 첨가하여 실온에서 2시간동안 블롯킹 (blocking)하였다. PBS/Tween 20으로 3회 세척한 후 0.1% BSA/PBS/Tween 20으로 환자 및 건강인 혈청을 각각 1:100까지 희석한 후 0.1㎖씩 분주한 후 실온에서 40분 동안 항원-항체 반응을 실시하였다. PBS/Tween 20으로 3회 세척한 후 2차 항체인 퍼옥시다제 결합 항-인간 IgG (peroxidase conjugated anti-human IgG)을 각각 0.1% BSA/PBS/Tween 20으로 1:2,000 희석하여 0.1㎖씩 분주하고 실온에서 1시간동안 반응시켰다. PBS/Tween 20으로 7회 세척한 후 O-phenylenediamine(OPD) 기질액 (OPD 10mg을 1㎖의 methanol에 용해하였다. 그리고 100㎖의 시트르산 버퍼 (citrate buffer) pH5.0과 30% H₂O₂ 10㎕를 혼합)을 0.1㎖씩 분주하였다. 15분간 발색반응 후 2N 황산용액 50㎕씩 넣어 기질반응을 정지시키고 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

ELISA 결과는 하기 표 2와 같다.

Antigen	Cutoff value	Sensitivity	AUC (95% confidence interval)
GlcB	0.1415	12.96	0.7614 (0.6543-0.8685)
GroEL	0.1015	40.74	0.7938 (0.6970-0.8907)
CFP-10	0.142	24.07	0.8333 (0.7405-0.9262)
Adk	0.2255	20.37	0.5179 (0.3929-0.6429)
PstS3	0.1175	27.78	0.8278 (0.7352-0.9203)
Rv-CF	0.2280	46.30	0.8660 (0.7897-0.9424)
HspX	0.1635	50.00	0.8633 (0.7865-0.9401)
HBHA	0.2560	61.81	0.8588 (0.7848-0.9329)
r-EC HBHA	0.1125	31.48	0.7762 (0.6740-0.8784)
HspX+HBHA	0.1600	59.26	0.8540 (0.7750-0.9330)
HspX+ GroEL+Adk	0.0890	55.56	0.7660 (0.6676-0.8646)
HspX+HBHA+GroEL	0.1500	66.67	0.8562 (0.7770-0.9353)
HspX+HBHA+Adk	0.1360	64.81	0.8673 (0.7916-0.9429)
HspX+HBHA+GroEL+Adk	0.127	72.22	0.8673 (0.7910-0.9435)

상기 결과를 살펴보면, 기존의 HBHA 항원으로 폐외 결핵환자를 진단하는 방법은 민감도가 61.81% 임에 비해, HBHA항원의 본 발명에서 새롭게 발굴한 폐외 결핵 항원인 GRIEL, Adk, HspX 를 함께 넣어주면, 민감도가 최고 72.22 %까지 올라가는 것을 확인할 수 있었다.

Claims (11)

1. 삭제
2. 삭제
3. HBHA(heparin-binding hemagglutinin) 및 HspX (heat shock protein X)항원을 포함하는 폐외 결핵 진단용 조성물.
4. 제 3항에 있어서, GroEL, Adk(adenylate kinase)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 항원을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
5. 제 3항 또는 제 4항에 있어서, 상기 폐외 결핵은 결핵성 흉막염인 것을 특징으로 하는 조성물.
6. 제 3항 또는 제 4항의 조성물을 포함하는 폐외 결핵 진단용 키트.
7. 제 3항의 조성물을 이용한, 폐외 결핵 진단을 위한 정보 제공 방법.
8. 제 7항에 있어서, 상기 정보 제공 방법은,
   (1) 웰 마이크로플레이트에 HBHA 및 HspX 항원을 반응시키는 단계;
   (2) 상기 (1) 단계의 항원에 검사 혈청시료를 반응시키는 단계; 및
   (3) 항원-항체 복합체의 형성 여부를 측정하는 단계;
   를 포함하는 폐외 결핵의 감염 여부를 진단하는 것을 특징으로 하는 방법.
9. 제 8항에 있어서, 상기 (1)에서 GroEL, Adk 로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상의 항원을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
10. 제 7항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폐외 결핵은 결핵성 흉막염인 것을 특징으로 하는 방법.
11. 제8항 또는 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 (1)의 항원은 재조합 형태의 항원인 것을 특징으로 하는 방법.