KR101200194B1 - Use of SOCS6 as a hepatocellular carcinomar diagnostic marker - Google Patents

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Abstract

본 발명은 간암 진단용 마커로서의 SOCS6(suppressors of cytokine signaling 6)의 용도에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 SOCS6 유전자를 이용한 간암 진단용 마커, 이를 이용한 간암 진단용 조성물, 키트, 마이크로어레이 및 간암을 진단하는 방법에 관한 것이고, 또한, SOCS6 유전자 또는 단백질의 발현을 증가시켜 간암을 예방 또는 치료할 수 있는 물질을 스크리닝하는 방법 및 간암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 SOCS6 유전자는 정상의 세포 또는 조직에 비해 간암이 발병된 조직 또는 세포에서 발현양이 감소되는 것으로 확인됨에 따라 SOCS6 유전자를 간암 진단용 마커로 사용할 경우 간암을 조기에 신속하고 정확하게 진단 및 예측할 수 있는 효과가 있으며, 나아가 SOCS6가 종양 억제자로서의 역할을 할 수 있으므로 이를 간암의 예방 또는 치료를 위한 치료제의 용도로 사용할 수 있는 효과가 있다. The present invention relates to the use of suppressors of cytokine signaling 6 (SOCS6) as a marker for diagnosing liver cancer. More specifically, the present invention relates to a marker for diagnosing liver cancer using the SOCS6 gene, a composition for diagnosing liver cancer, a kit, a microarray, and a method for diagnosing liver cancer using the same, and also to preventing the liver cancer by increasing the expression of the SOCS6 gene or protein. The present invention relates to a method for screening a treatable substance and a pharmaceutical composition for preventing or treating liver cancer. As the SOCS6 gene according to the present invention has been found to have reduced expression in tissues or cells with liver cancer compared to normal cells or tissues, when the SOCS6 gene is used as a marker for diagnosing liver cancer, liver cancer can be diagnosed and predicted quickly and accurately early. In addition, since SOCS6 may play a role as a tumor suppressor, it may be used as a therapeutic agent for preventing or treating liver cancer.

Description

간암 진단용 마커로서의 ＳＯＣＳ6의 용도{Use of SOCS6 as a hepatocellular carcinomar diagnostic marker}Use of SOCS6 as a hepatocellular carcinomar diagnostic marker

본 발명은 간암을 조기에 효과적으로 진단 및 예측할 수 있는 신규한 간암 진단용 마커, 간암 진단용 조성물, 상기 간암 진단용 마커를 이용한 간암 진단 방법 및 간암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a novel marker for diagnosing liver cancer, a composition for diagnosing liver cancer, a method for diagnosing liver cancer using the marker for diagnosing liver cancer, and a pharmaceutical composition for preventing or treating liver cancer.

간암은 세계적으로 발생 빈도가 높고 치명적인 암의 하나로, 매년 100 만명의 환자들이 간암으로 사망하고 있으며, 특히 한국 및 일본 등의 아시아에서 발생되는 가장 흔한 암이다(Parkin, et al., Int . J. Cancer , 80, 827-841, 1999, Luo et al., Basic Biology and Clinical Sciences 1 st Ed., pp. 435-445, 1997, Chen et al., J. Gastroenterol . Hepatol . 12, S294-308, 1997). 간암의 발생은 간 조직에 B형 간염과 C형 간염 바이러스의 감염 및 아플라톡신 β1의 노출이 그 원인으로 보고되고 있으며(Bosch, et al., Semin. Cancer Dis . 19, 271-285, 1999, Luo, et al., Basic Biology and Clinical Sciences 1 st Ed., pp. 435- 445, 1997), TGF-α(transforming growth factor α) 및 TGF-β와 같은 몇 가지 생장인자(growth factor)들이 간암의 진행기작에 연관됨이 보고되고 있고, 암 억제인자로 잘 알려진 RB 및 p53 단백질도 간암 형성 과정에 중요한 역할을 수행하는 후보 유전자들로 밝혀졌다(Collier, et al., Liver , 13, 151-155, 1993, Naka, et al., Anticancer Res . 18, 555-564, 1998). 이 외에도 DNA 돌연변이와 유전자 발현의 유전적 변화(genetic alteration)등이 간암의 환자조직에서 확인된다는 보고가 있다(Park, et al., Cancer Res. 59, 307-310, 1999).Liver cancer is one of the most common and fatal cancers in the world, with 1 million patients dying from liver cancer each year, and the most common cancer in Asia, especially in Korea and Japan (Parkin, et al., Int . J. Cancer , 80, 827-841, 1999, Luo et al., Basic Biology and Clinical Sciences 1 st Ed ., Pp. 435-445, 1997, Chen et al., J. Gastroenterol . Hepatol . 12, S294-308, 1997). Generation of liver cancer is the exposure of the liver and hepatitis B infections, and aflatoxin of hepatitis C virus in tissue β1 is reported as the cause (Bosch, et al., Semin . Cancer Dis . 19, 271-285, 1999, Luo, et al., Basic Biology and Clinical Sciences 1 st Ed ., Pp. 435-445, 1997), several growth factors, such as transforming growth factor α (TGF-α) and TGF-β, have been reported to be involved in the mechanism of liver cancer, and RB is well known as a cancer suppressor. And p53 proteins have also been identified as candidate genes that play an important role in liver cancer formation (Collier, et al., Liver , 13, 151-155, 1993, Naka, et al., Anticancer Res . 18, 555-564, 1998). In addition, genetic mutations of DNA mutations and gene expression have been reported in patients with liver cancer (Park, et al., Cancer Res . 59, 307-310, 1999).

그러나 간암의 발병 기작에 대한 정확한 원인은 아직까지 밝혀지지 않고 있으며, 간암의 발병과 관련된다고 밝혀진 유전자들 또한 간암 환자들의 외적 특성과 임상 특성을 정확하게 반영하지 못하고 있다.However, the exact cause of the pathogenesis of liver cancer is not known yet, and genes found to be related to the development of liver cancer do not accurately reflect the external and clinical characteristics of liver cancer patients.

또한, 지난 수년간 암에 대한 원인규명, 진단방법 및 치료방법에 대한 집중적인 연구가 이루어졌음에도 불구하고 아직까지 암을 효과적으로 치료할 수 있는 확실한 치료제가 개발되지 못하고 있다. 따라서 암을 초기 단계에 발견하여 외과적 수술 또는 약물 치료에 의해 암세포를 제거하거나 성장을 억제하는 것이 가장 효과적인 방법이라 할 수 있다.In addition, despite intensive studies on the cause, diagnosis, and treatment of cancer over the past several years, there are no reliable treatments that can effectively cure cancer. Therefore, detecting cancer at an early stage and removing cancer cells or inhibiting growth by surgical or drug treatment may be the most effective method.

최근에는 암을 조기에 진단하기 위하여 종양 마커를 이용한 진단방법이 사용되고 있는데, 이는 종양 마커의 경우, 체내의 특정 암 세포에서 과발현되는 경우가 많기 때문에 종양 마커가 기준치 이상으로 발현되었다는 것이 확인되면 바로 특정 장기의 암을 진단할 수 있기 때문이다. 또한 종양 마커를 이용한 암의 진단은 대부분 항체를 이용한 혈액 검사방법으로 수행되고 있으며, 일부는 조직 추출액, 소변, 대변 등을 이용하여 검사하기도 한다. 그러나 종양 마커는 암이 발생하는 장소에 따라 그 종류가 다양하고, 사람에게 생기는 모든 암을 확인할 수 있는 종양 마커는 없으며, 진단이 가능한 종양 마커가 없는 암의 종류도 많다.Recently, a diagnosis method using a tumor marker has been used to diagnose cancer early. This is because tumor markers are often overexpressed in certain cancer cells in the body, and as soon as it is confirmed that the tumor markers are expressed above a reference value, This is because the cancer of the organs can be diagnosed. In addition, the diagnosis of cancer using tumor markers is mostly performed by blood tests using antibodies, and some of them are tested using tissue extracts, urine, and stool. However, there are various types of tumor markers depending on where the cancer occurs, and there are no tumor markers that can identify all cancers occurring in humans, and many types of cancers do not have a tumor marker that can be diagnosed.

한편, 간암의 대표적인 종양 마커로는 알파-페토프로틴, 즉, 알파태아단백(Alpha-Fetoprotein:AFP)이 사용되고 있는데, AFP는 간세포가 형질전환되어 암세포로 탈분화 되었을 때 비정상적으로 생성되는 당단백질로서, 원발성 간암, 간염, 간경변 및 태아성암 등의 발견과 치료경과의 관찰에 이용되고 있다. 또한, 최근에는 이 외에도 DCP(Des-gamma carboxyprothrombin), PIVKA-II(prothrombin induced by vitamin K absence-II), AFP-L3(lens cularis agglutinin-reactive) 및 GPC3(glypican-3) 등이 간암을 진단할 수 있는지에 관한 연구가 진행되고 있다.On the other hand, as a representative tumor marker of liver cancer, alpha-fetoprotein, that is, alpha-fetoprotein (AFP), is used. AFP is a glycoprotein abnormally produced when hepatocytes are transformed and dedifferentiated into cancer cells. It is used to detect primary liver cancer, hepatitis, cirrhosis and fetal cancer, and to observe the progress of treatment. Also recently, Des-gamma carboxyprothrombin (DCP), prothrombin induced by vitamin K absence-II (PIVKA-II), lens cularis agglutinin-reactive (AFP-L3), and GPC3 (glypican-3) have recently been diagnosed. There is research on whether it can be done.

그러나 종래 사용되고 있는 AFP 간암 마커의 경우, 조기 간암 진단시 저감도 및 저특이성을 보이고 있으며, 간경변이나 간염의 악화시에도 발견되고 있어 조기의 간암을 특이적으로 진단하기에는 많은 문제점이 있다.However, the AFP liver cancer markers used in the prior art show low sensitivity and low specificity in early liver cancer diagnosis, and are also found in deterioration of cirrhosis and hepatitis, and there are many problems to specifically diagnose early liver cancer.

또한, 간암 치료를 위해 고주파 열 치료나 다양한 방사선 치료법이 개발되었으나 이러한 기술의 개발에도 불구하고 간암 발병 후의 장기 생존율은 매우 낮으며 수술 후에도 재발이 빈번히 발생하고 있다. 그러나 간암의 진단 시기에 따른 예후가 간암 발병 후의 생존율에 큰 영향을 준다는 보고가 발표된 이후 최근에는 간암의 조기 진단 바이오 마커의 개발이 임상적으로 중요한 이슈로 대두되고 있다. 따라서 조기 간암의 진단율을 효과적으로 증가시킬 수 있는 새로운 종양 마커의 개발이 시급한 실정이다.In addition, high frequency heat therapy or various radiotherapy methods have been developed for the treatment of liver cancer, but despite the development of such technology, long-term survival rate after liver cancer is very low and recurrence occurs frequently after surgery. However, the development of early biomarkers for liver cancer has emerged as a clinically important issue since the prognosis according to the time of diagnosis of liver cancer has a great influence on the survival rate after the onset of liver cancer. Therefore, it is urgent to develop new tumor markers that can effectively increase the diagnosis rate of early liver cancer.

또한, 간암을 치료하기 위해 사용되는 방법으로는 눈에 보이는 병소를 대상으로 하는 외과적 수술법, 라디오파 소작요법(radio-wave thermocauterization therapy), 에탄올 주입요법 및 마이크로웨이브 응고 괴사요법 등이 있으며, 전신요법으로서의 화학요법이 있다. 그러나 이러한 다양한 치료 방법에도 불구하고 치료 성적이 반드시 양호한 것은 아니며, 종래의 치료 방법의 경우 인체 내에서 각종 부작용이 발생한다는 문제점이 있다. 따라서 간암에 대해서 어느 정도의 치료 성적을 안정하게 보증하는 표준적인 치료방법이 없는 이상 간암을 초기에 진단할 수 있는 방법 및 기존에 알려지지 않은 새로운 진단 마커를 통한 보다 정확하고 신속한 간암 진단 방법의 개발이 필요한 실정이다. In addition, the methods used to treat liver cancer include surgical surgery on visible lesions, radio-wave thermocauterization therapy, ethanol infusion therapy, and microwave coagulation necrosis. There is chemotherapy as therapy. However, despite the various treatment methods, the treatment results are not necessarily good, and in the case of the conventional treatment methods, various side effects occur in the human body. Therefore, the development of a method for early diagnosis of liver cancer and the development of a more accurate and rapid method for diagnosing liver cancer through a new and unknown marker for diagnosis of liver cancer is not possible unless there is a standard treatment method that stably guarantees a certain degree of treatment result for liver cancer. It is necessary.

한편, SOCS(suppressors of cytokine signaling) 단백질들은 사이토카인(cytokine) 신호전달의 음성적 피드백 조절인자(negative feedback regulator) 그룹에 속하며, 자누스 키나아제/신호 전달인자(Janus kinase/signal transducer) 및 전사 (JAK/STAT) 경로의 활성인자(activator)들을 포함하고 있는 것으로 알려져 있으며(Krebs D. L. and Hilton D. J. SOCS: physiological suppressors of cytokine signaling. J Cell Sci 2000; 113 (Pt 16):2813-9), 최근 보고된 자료에 의하면, SOCS 단백질들은 인슐린 수용체(insulin receptor, IR), EGFR 및 KIT를 포함하는 수용체 티로신 키나아제(receptor tyrosine kinase, RTK) 신호전달의 음성 조절인자로 작용할 수 있다는 내용이 보고되었다(Emanuelli B., et al. SOCS-3 is an insulin-induced negative regulator of insulin signaling. J Biol Chem 2000; 275:15985-91, Kario E., et al. Suppressors of cytokine signaling 4 and 5 regulate epidermal growth factor receptor signaling. J Biol Chem 2005; 280:7038-48, Bayle J., et al. Suppressor of cytokine signaling 6 associates with KIT and regulates KIT receptor signaling. J Biol Chem 2004; 279:12249-59). On the other hand, SOCS (suppressors of cytokine signaling) proteins belong to the group of negative feedback regulators of cytokine signaling, and Janus kinase / signal transducers and transcription (JAK). / STAT) pathways are known to contain activators (Krebs DL and Hilton DJ SOCS: physiological suppressors of cytokine signaling. J Cell Sci 2000; 113 (Pt 16): 2813-9), recently reported. Data have reported that SOCS proteins can act as negative regulators of receptor tyrosine kinase (RTK) signaling, including insulin receptor (IR), EGFR and KIT (Emanuelli B.). , et al. SOCS-3 is an insulin-induced negative regulator of insulin signaling. J Biol Chem 2000; 275: 15985-91, Kario E., et al. Suppressors of cytokine signaling 4 and 5 regulate epidermal growth factor receptor signaling. J Biol Chem 2005; 280: 7038-48, Bayle J., et al. Suppressor of cytokine signaling 6 associates with KIT and regulates KIT receptor signaling. J Biol Chem 2004; 279: 12249-59).

SOCS 패밀리 중에서 SOCS6는 SOCS1-3 및 CIS와 같은 다른 SOCS 단백질들처럼 JAK/STAT 경로를 조절하지 않는다는 사실이 밝혀졌고(Masuhara M., et al. Cloning and characterization of novel CIS family genes. Biochem Biophys Res Commun 1997; 239:439-46), 나아가 SH2 도메인 및 SOCS 박스를 통해 E3 유비퀴틴 리가아제, 힘-산화(heme-oxidized) IRP2 유비퀴틴 리가아제-1(HOIL-1)에 결합함으로써 표적 단백질들을 프로테아좀에 의해 분해(proteasomal degradation)시킬 수 있도록 작용한다는 사실이 밝혀져 있다(Bayle J., et al. The E3 ubiquitin ligase HOIL-1 induces the polyubiquitination and degradation of SOCS6 associated proteins. FEBS Lett 2006; 580:2609-14). SOCS6는 ERK1/2, AKT 및 IRS-1의 활성을 포함한 IR 신호전달을 약화시키는 작용을 하는 것으로 밝혀졌고(Mooney R. A., et al. Suppressors of cytokine signaling-1 and -6 associate with and inhibit the insulin receptor. A potential mechanism for cytokine-mediated insulin resistance. J Biol Chem 2001; 276:25889-93.), 또한, SOCS6의 경우, KIT와 상호작용하며 줄기세포인자-매개의(stem cell factor-mediated) KIT 신호전달을 음성적으로 조절한다는 내용이 보고된 바 있다(Bayle J., et al. Suppressor of cytokine signaling 6 associates with KIT and regulates KIT receptor signaling. J Biol Chem 2004; 279:12249-59). 그러나 이러한 결과들은 SOCS6가 사이토킨 신호전달이 아니라 RTK 신호전달의 억제자임을 시사한다.Among the SOCS family SOCS6 was the fact that it does not regulate the JAK / STAT path turns like other SOCS proteins such as SOCS1-3 and CIS (Masuhara M., et al. Cloning and characterization of novel CIS family genes. Biochem Biophys Res Commun 1997; 239: 439-46), and furthermore, by binding to E3 ubiquitin ligase, force-oxidized IRP2 ubiquitin ligase-1 (HOIL-1) via the SH2 domain and SOCS box, the fact that the action to be able to disassemble (proteasomal degradation) has been proven (Bayle J., et al. the E3 ubiquitin ligase HOIL-1 induces the polyubiquitination and degradation of SOCS6 associated proteins. FEBS Lett 2006; 580: 2609-14). SOCS6 has been shown to attenuate IR signaling, including the activity of ERK1 / 2, AKT and IRS-1 (Mooney RA, et al. Suppressors of cytokine signaling-1 and -6 associate with and inhibit the insulin receptor . A potential mechanism for cytokine-mediated insulin resistance. J Biol Chem 2001; 276: 25889-93.) In addition, it has been reported that SOCS6 interacts with KIT and negatively regulates stem cell factor-mediated KIT signaling (Bayle J. , et al. Suppressor of cytokine signaling 6 associates with KIT and regulates KIT receptor signaling. J Biol Chem 2004; 279: 12249-59). However, these results suggest that SOCS6 is an inhibitor of RTK signaling, not cytokine signaling.

한편, SOCS 단백질 중에서 특히 SOCS6의 경우, 간암 발병과 상관성이 있으며, 이를 간암 진단을 위한 마커 또는 간암의 치료제를 위한 타겟으로 사용할 수 있다는 내용에 대해서는 아직까지 전혀 보고된 바가 없다. On the other hand, among the SOCS protein, especially in the case of SOCS6, there is a correlation with the development of liver cancer, it has not been reported at all to the information that can be used as a marker for the diagnosis of liver cancer or a target for the treatment of liver cancer.

그러므로 본 발명의 목적은 SOCS6(suppressors of cytokine signaling 6) 유전자 또는 상기 유전자로부터 코딩되는 단백질로 이루어진 간암 진단용 마커를 제공하는 것이다.Therefore, an object of the present invention is to provide a marker for diagnosing liver cancer, which comprises a suppressor of cytokine signaling 6 (SOCS6) gene or a protein encoded from the gene.

또한, 본 발명의 다른 목적은 SOCS6 유전자의 수준 또는 SOCS6 단백질의 수준을 측정하는 물질을 포함하는 간암 진단용 조성물을 제공하는 것이다.In addition, another object of the present invention to provide a composition for diagnosing liver cancer comprising a substance for measuring the level of the SOCS6 gene or the level of the SOCS6 protein.

또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 본 발명의 간암 진단용 조성물을 포함하는 간암 진단용 키트 및 간암 진단용 마이크로어레이를 제공하는 것이다.In addition, another object of the present invention to provide a liver cancer diagnostic kit and liver cancer diagnostic microarray comprising the liver cancer diagnostic composition of the present invention.

또한, 본 발명의 다른 목적은 SOCS6 유전자의 발현양 또는 단백질의 양을 측정하는 단계를 포함하는 간암을 예측 및 진단하는 방법을 제공하는 것이다.In addition, another object of the present invention is to provide a method for predicting and diagnosing liver cancer comprising measuring the amount of expression of SOCS6 gene or the amount of protein.

또한, 본 발명의 다른 목적은 간암을 예방 또는 치료할 수 있는 물질을 스크리닝 하는 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for screening a substance capable of preventing or treating liver cancer.

또한, 본 발명의 다른 목적은 SOCS6(suppressors of cytokine signaling 6)를 유효성분으로 포함하는 간암의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.In addition, another object of the present invention is to provide a composition for preventing or treating liver cancer comprising SOCS6 (suppressors of cytokine signaling 6) as an active ingredient.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 SOCS6 (suppressors of cytokine signaling 6) 유전자 또는 상기 유전자로부터 코딩되는 SOCS6 단백질로 이루어진 간암 진단용 마커를 제공한다.In order to achieve the object of the present invention as described above, the present invention provides a marker for diagnosing liver cancer consisting of a suppressor of cytokine signaling 6 (SOCS6) gene or SOCS6 protein encoded from the gene.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 SOCS6 유전자는 서열번호 1의 염기서열을 갖는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the SOCS6 gene may be one having a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.

또한, 본 발명은 SOCS6(suppressors of cytokine signaling 6) 유전자의 수준 또는 SOCS6 단백질의 수준을 측정하는 물질을 포함하는 간암 진단용 조성물을 제공한다. In addition, the present invention provides a composition for diagnosing liver cancer, which comprises a substance for measuring the level of a suppressor of cytokine signaling 6 (SOCS6) gene or the level of a SOCS6 protein.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 SOCS6 유전자의 수준을 측정하는 물질은 SOCS6 유전자를 증폭할 수 있는 프라이머 또는 프로브일 수 있다.In one embodiment of the invention, the material for measuring the level of the SOCS6 gene may be a primer or probe that can amplify the SOCS6 gene.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 SOCS6 단백질의 수준을 측정하는 물질은 SOCS6 단백질을 특이적으로 인식하는 항체일 수 있다.In one embodiment of the invention, the material for measuring the level of the SOCS6 protein may be an antibody that specifically recognizes the SOCS6 protein.

또한, 본 발명은 상기 본 발명의 간암 진단용 조성물을 포함하는 간암 진단용 키트를 제공한다.The present invention also provides a kit for diagnosing liver cancer comprising the composition for diagnosing liver cancer of the present invention.

또한, 본 발명은 상기 본 발명의 간암 진단용 조성물을 포함하는 간암 진단용 마이크로어레이를 제공한다.In addition, the present invention provides a liver cancer diagnostic microarray comprising the composition for diagnosing liver cancer of the present invention.

또한, 본 발명은,Further, according to the present invention,

(a) 생물학적 시료에 존재하는 SOCS6(suppressors of cytokine signaling 6) 유전자의 발현양 또는 단백질의 양을 측정하는 단계; 및 (b) 상기 (a) 단계의 측정결과를 정상대조군 시료의 SOCS6 유전자 발현양 또는 단백질의 양과 비교하는 단계를 포함하는 간암을 예측 및 진단하는 방법을 제공한다.(a) measuring the amount of protein or protein expressed in a suppressor of cytokine signaling 6 (SOCS6) gene present in a biological sample; And (b) comparing the measurement result of step (a) with the amount of SOCS6 gene expression or protein in the normal control sample.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 생물학적 시료는 조직, 세포, 혈액, 혈청, 혈장, 타액 및 뇨로 이루어진 군중에서 선택되는 것일 수 있다.In one embodiment of the invention, the biological sample may be selected from the group consisting of tissue, cells, blood, serum, plasma, saliva and urine.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 SOCS6 유전자의 발현양 또는 SOCS6 단백질의 양을 측정하는 방법은 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcriptase-polymerase chain reaction), 실시간 중합효소 연쇄반응(real time-polymerase chain reaction), 웨스턴 블럿, 노던 블럿, ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion) 및 면역침전분석법(immunoprecipitation assay)으로 이루어진 군중에서 선택되는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the method for measuring the expression amount of the SOCS6 gene or the amount of SOCS6 protein is reverse transcriptase-polymerase chain reaction, real time polymerase chain reaction (real time-polymerase chain reaction) reaction, western blot, northern blot, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), radioimmunodiffusion and immunoprecipitation assay (immunoprecipitation assay).

또한, 본 발명은,Further, according to the present invention,

(a) SOCS6 (suppressors of cytokine signaling 6) 유전자 또는 SOCS6 단백질을 포함하는 세포에 분석하고자 하는 시료를 접촉시키는 단계; (b) 상기 SOCS6 유전자의 발현양, SOCS6 단백질의 양 또는 SOCS6 단백질의 활성을 측정하는 단계; 및 (c) 상기 (b) 단계의 측정 결과, SOCS6 유전자의 발현양, SOCS6 단백질의 양 또는 SOCS6 단백질의 활성이 증가되는 경우에 상기 시료는 간암의 예방 또는 치료용 물질로 판정하는 단계를 포함하는, 간암의 예방 또는 치료용 물질을 스크리닝 하는 방법을 제공한다.(a) contacting a sample to be analyzed with a cell comprising a suppressor of cytokine signaling 6 (SOCS6) gene or a SOCS6 protein; (b) measuring the amount of expression of said SOCS6 gene, the amount of SOCS6 protein or the activity of SOCS6 protein; And (c) determining that the sample is a substance for preventing or treating liver cancer when the amount of expression of SOCS6 gene, amount of SOCS6 protein, or activity of SOCS6 protein is increased as a result of the measurement of step (b). In addition, the present invention provides a method for screening a substance for preventing or treating liver cancer.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 SOCS6 유전자의 발현양, SOCS6 단백질의 양 또는 SOCS6 단백질의 활성을 측정하는 방법은 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcriptase-polymerase chain reaction), 실시간 중합효소 연쇄반응(real time-polymerase chain reaction), 웨스턴 블럿, 노던 블럿, ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion) 및 면역침전분석법(immunoprecipitation assay)으로 이루어진 군중에서 선택되는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the method for measuring the expression amount of SOCS6 gene, the amount of SOCS6 protein or the activity of SOCS6 protein is reverse transcriptase-polymerase chain reaction, real-time polymerase chain reaction ( Selection from a crowd consisting of real time-polymerase chain reaction, Western blot, Northern blot, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), radioimmunodiffusion and immunoprecipitation assay It may be.

나아가 본 발명은 SOCS6(suppressors of cytokine signaling 6)를 유효성분으로 포함하는 간암의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.Furthermore, the present invention provides a composition for preventing or treating liver cancer comprising SOCS6 (suppressors of cytokine signaling 6) as an active ingredient.

본 발명에 따른 SOCS6 유전자는 정상의 세포 또는 조직에 비해 간암이 발병된 조직 또는 세포에서 발현양이 감소되는 것으로 확인됨에 따라 SOCS6 유전자를 간암 진단용 마커로 사용할 경우 간암을 조기에 신속하고 정확하게 진단 및 예측할 수 있는 효과가 있으며, 나아가 SOCS6가 종양 억제자로서의 역할을 할 수 있으므로 이를 간암의 예방 또는 치료를 위한 치료제의 용도로 사용할 수 있는 효과가 있다. As the SOCS6 gene according to the present invention has been found to have reduced expression in tissues or cells with liver cancer compared to normal cells or tissues, when the SOCS6 gene is used as a marker for diagnosing liver cancer, liver cancer can be diagnosed and predicted quickly and accurately early. In addition, since SOCS6 may play a role as a tumor suppressor, it may be used as a therapeutic agent for preventing or treating liver cancer.

도 1은 간암 조직과 정상 조직 및 간암 세포와 정상 세포에서의 SOCS6의 발현정도를 비교 측정한 것을 나타낸 것으로서, 1a는 조직샘플을 대상으로 웨스턴 블럿을 수행한 것이고, 1b는 세포샘플들을 대상으로 웨스턴 블럿을 수행한 것을 나타낸 것이다.
도 2는 정상 및 간암 조직 샘플내에서 SOCS6의 발현 정도를 면역조직화학적 염색 방법을 통해 비교 분석한 사진을 나타낸 것으로서, 2a 및 2c는 정상조직을 대상으로 관찰한 것이며, 2b 및 2d는 간암조직을 대상으로 관찰한 것을 나타낸 것이고, 2a 및 2b 는 X200 배율에서, 2c 및 2d는 X400배율에서 관찰한 것이다.1 is a comparison of SOCS6 expression levels in liver cancer tissues, normal tissues, and liver cancer cells and normal cells, in which 1a is a Western blot performed on tissue samples, and 1b is a western sample of cell samples. This shows that the blot was performed.
Figure 2 shows a comparative analysis of the expression level of SOCS6 in normal and liver cancer tissue samples by immunohistochemical staining method, 2a and 2c is observed in normal tissues, 2b and 2d is a liver cancer tissue What was observed with the object was shown, 2a and 2b are observed at X200 magnification, and 2c and 2d are observed at X400 magnification.

본 발명은 SOCS6(suppressors of cytokine signaling 6) 유전자 또는 상기 유전자로부터 코딩되는 SOCS6 단백질을 포함하는 신규한 간암 진단용 마커를 제공함에 특징이 있다.The present invention is characterized by providing a novel marker for diagnosing liver cancer comprising a suppressor of cytokine signaling 6 (SOCS6) gene or an SOCS6 protein encoded from the gene.

기존에 간암 진단을 위해 사용되고 있는 대부분의 마커의 경우, 간암을 정확하게 진단하는 비율이 비교적 낮고 간암 이외의 다른 질병들과도 뚜렷한 구분을 보이지 않아 간암에 대한 예민도 및 특이도가 낮은 문제점이 있었다. 이에 본 발명자들은 새로운 간암 진단용 마커를 발굴하기 위해 간암 조직 및 비-간암 조직에서 발현의 차이를 보이는 유전자를 조사한 결과, SOCS6 (suppressors of cytokine signaling 6) 유전자가 비-간암 조직에 비해 간암 조직에서 낮게 발현되는 것을 확인할 수 있었으며, 상기 SOCS6 유전자의 염기서열을 서열번호 1에 나타내었고, SOCS6의 아미노산 서열을 서열번호 2에 나타내었다.In the case of most markers used for diagnosing liver cancer, the rate of accurately diagnosing liver cancer is relatively low, and there is a problem in that the sensitivity and specificity of liver cancer are low because it does not distinguish clearly from other diseases except liver cancer. Therefore, the present inventors examined genes showing differences in expression in liver cancer tissues and non-liver cancer tissues in order to discover new markers for diagnosing liver cancer, so that the suppressor of cytokine signaling 6 (SOCS6) gene was lower in liver cancer tissues than in non- liver cancer tissues. It was confirmed that the expression, the base sequence of the SOCS6 gene is shown in SEQ ID NO: 1, the amino acid sequence of SOCS6 is shown in SEQ ID NO: 2.

이에 본 발명자들은 정상 세포에 비해 간암 세포에서 SOCS6 유전자의 발현이 감소되는 현상을 확임함에 따라 SOCS6 유전자를 간암 진단을 위한 마커로 사용할 수 있음을 예상할 수 있었으며, 본 발명의 일실시예에 따르면, 간암 환자의 조직 및 정상 조직에서의 SOCS6 유전자의 발현 정도를 웨스턴 블럿과 면역조직화학적 염색법을 통해 관찰한 결과, SOCS6 유전자의 발현은 정상샘플에 비해 종양 샘플들에서 거의 모두 감소되는 것으로 나타났다(도 1 및 2 참조). Accordingly, the inventors of the present invention have been convinced that the expression of the SOCS6 gene is reduced in liver cancer cells compared to normal cells, so that the SOCS6 gene can be used as a marker for diagnosing liver cancer. According to one embodiment of the present invention, , Western blot and immunohistochemical staining of the expression of SOCS6 genes in the tissues and normal tissues of liver cancer patients showed that the expression of SOCS6 genes was almost reduced in tumor samples compared to normal samples (Fig. 1 and 2).

한편, 종래 보고된 연구자료에 따르면, SOCSs, 특히 SOCS1 및 SOCS3가 하향조절, 즉 발현양이 감소되면 간암 세포 내에서 JAK/STAT 경로의 활성이 동반된다는 내용이 보고된 바 있으며, SOCS3-결함 마우스에서 간암발병(hepatocarcinogenesis)이 유도된다는 내용이 보고된 바 있다(Ogata H., et al. Deletion of the SOCS3 gene in liver parenchymal cells promotes hepatitis-induced hepatocarcinogenesis. Gastroenterology 2006; 131:179-93). Previously reported studies have reported that downregulation of SOCSs, particularly SOCS1 and SOCS3, is accompanied by decreased JAK / STAT pathway activity in liver cancer cells, and SOCS3-deficient mice. Induction of hepatocarcinogenesis has been reported (Ogata H., et al. Deletion of the SOCS3 gene in liver parenchymal cells promotes hepatitis-induced hepatocarcinogenesis. Gastroenterology 2006; 131: 179-93).

따라서 이러한 결과들은 SOCS1 및 SOCS3가 종양 억제인자로 작용함으로써 간암의 성장에 관여한다는 것을 나타낸다.These results thus indicate that SOCS1 and SOCS3 are involved in the growth of liver cancer by acting as tumor suppressors.

또한, 일반적으로 암-관련 신호전달 경로에서 SOCS6의 작용에 대해서는 단지, SOCS6가 KIT 발현이상을 일으키지 않는 ERK1/2 및 p38 활성의 상류(upstream)에 있는 줄기세포인자 유도 KIT 수용체 신호전달(stem-cell-factor induced KIT receptor signaling)의 음성적 조절인자라는 내용이 밝혀졌을 뿐(Bayle J., et al. Suppressor of cytokine signaling 6 associates with KIT and regulates KIT receptor signaling. J Biol Chem 2004; 279:12249-59), 이 외의 작용에 대해서는 거의 알려진 바가 없다.In general, for the action of SOCS6 in cancer-related signaling pathways only stem cell factor-induced KIT receptor signaling upstream of ERK1 / 2 and p38 activity in which SOCS6 does not cause KIT expression aberrations. It has only been found to be a negative regulator of cell-factor induced KIT receptor signaling (Bayle J., et al. Suppressor of cytokine signaling 6 associates with KIT and regulates KIT receptor signaling. J Biol Chem 2004; 279: 12249-59 ), Little else is known about the action.

이에 본 발명자들은 SOCS6 역시 종양 억제인자로 작용할 수 있을 것으로 예상하였고, 상기와 같은 일실시예를 통해 간암 조직 및 세포에서 SOCS6의 발현이 억제된다는 사실을 확인함에 따라 SOCS6가 종양 억제인자로서의 역할을 하며, 간암 진단을 위한 마커로 사용할 수 있음을 최초로 규명하였다. The present inventors anticipated that SOCS6 could also act as a tumor suppressor. As a result, SOCS6 plays a role as a tumor suppressor by confirming that the expression of SOCS6 is suppressed in liver cancer tissues and cells through one embodiment. It was first identified that it can be used as a marker for diagnosing liver cancer.

따라서 본 발명은 SOCS6(suppressors of cytokine signaling 6) 유전자 또는 상기 유전자로부터 코딩되는 SOCS6 단백질로 이루어지는 간암 진단용 마커를 제공할 수 있다.Accordingly, the present invention can provide a marker for diagnosing liver cancer, which comprises a suppressor of cytokine signaling 6 (SOCS6) gene or an SOCS6 protein encoded from the gene.

본 발명에서, 상기진단이라는 용어는 병리 상태를 확인하는 것을 의미하는 것으로서, 본 발명의 목적상 상기 진단은 간암 진단 마커의 발현 유무를 확인하여 간암의 발병 여부를 확인하는 것을 의미하며, 또한, 본 발명에서의 진단은 간암 진단 마커의 발현 유무 및 발현 정도를 확인하여 간암의 발병여부, 발전 및 경감 등을 판단하는 것도 포함한다. In the present invention, the term diagnosis refers to confirming a pathological condition. For the purpose of the present invention, the diagnosis means confirming the presence or absence of expression of a diagnostic marker for liver cancer, and confirming the occurrence of liver cancer. Diagnosis in the present invention includes determining whether liver cancer diagnostic markers are expressed and the degree of expression to determine whether the liver cancer is developed, developed and reduced.

또한, 상기 진단용 마커(diagnosis marker)란 간암의 세포를 정상 세포와 구분하여 진단할 수 있는 물질을 의미하며, 정상 세포에 비하여 간암의 세포에서 증가 또는 감소를 보이는 폴리펩타이드 또는 핵산(예컨대, mRNA 등), 지질, 당지질, 당단백질, 당(단당류, 이당류, 올리고당류 등) 등과 같은 유기 생체 분자 등을 포함한다. 본 발명에서 제공하는 간암 진단용 마커는 정상 세포에 비해 간암의 세포에서 발현양이 감소하는 SOCS6 유전자 또는 단백질일 수 있으며, 바람직하게 상기 SOCS6 유전자는 서열번호 1로 기재된 염기서열을 갖는 것일 수 있다. In addition, the diagnostic marker (diagnosis marker) refers to a substance capable of diagnosing cells of liver cancer from normal cells, and a polypeptide or nucleic acid (eg, mRNA, etc.) showing an increase or decrease in cells of liver cancer compared to normal cells. ), Lipids, glycolipids, glycoproteins, organic biomolecules such as sugars (monosaccharides, disaccharides, oligosaccharides, and the like) and the like. The marker for diagnosing liver cancer provided by the present invention may be an SOCS6 gene or protein in which the amount of expression in the cells of liver cancer is reduced compared to normal cells, and preferably, the SOCS6 gene may have a nucleotide sequence set forth in SEQ ID NO: 1.

또한, 본 발명은 SOCS6 유전자의 수준 또는 SOCS6 단백질의 수준을 측정하는 물질을 포함하는 간암 진단용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a composition for diagnosing liver cancer comprising a substance measuring the level of the SOCS6 gene or the level of the SOCS6 protein.

본 발명에서 상기 SOCS6 유전자의 수준은, 바람직하게 SOCS6 유전자가 발현된 mRNA 수준, 즉, mRNA의 양을 의미하며, 상기 수준을 측정할 수 있는 물질로는 SOCS6 유전자에 특이적인 프라이머 또는 프로브를 포함할 수 있다. 본 발명에서 상기 SOCS6 유전자에 특이적인 프라이머 또는 프로브는 서열번호 1로 나타내는 SOCS6 유전자 전체 또는 유전자의 특정 영역을 특이적으로 증폭할 수 있는 프라이머 또는 프로브일 수 있으며, 상기 프라이머 또는 프로브는 당업계에 알려진 방법을 통해 디자인할 수 있다. In the present invention, the level of the SOCS6 gene, preferably means the mRNA level, that is, the amount of mRNA expressed in the SOCS6 gene, and the material capable of measuring the level may include a primer or probe specific to the SOCS6 gene. Can be. In the present invention, the primer or probe specific for the SOCS6 gene may be a primer or probe capable of specifically amplifying the entirety of the SOCS6 gene represented by SEQ ID NO: 1 or a specific region of the gene, and the primer or probe is known in the art. You can design it through the method.

본 발명에서 상기 프라이머란 용어는 적합한 온도 및 적합한 완충액 내에서 적합한 조건(즉, 4종의 다른 뉴클레오시드 트리포스페이트 및 중합반응 효소) 하에서 주형-지시 DNA 합성의 개시점으로 작용할 수 있는 단일-가닥 올리고뉴클레오타이드를 의미한다. 프라이머의 적합한 길이는 다양한 요소, 예컨대, 온도와 프라이머의 용도에 따라 변화가 있을 수 있다. 또한, 프라이머의 서열은 주형의 일부 서열과 완전하게 상보적인 서열을 가질 필요는 없으며, 주형과 혼성화되어 프라이머 고유의 작용을 할 수 있는 범위 내에서의 충분한 상보성을 가지면 충분하다. 따라서 본 발명에서의 프라이머는 주형인 SOCS6 유전자의 뉴클레오타이드 서열에 완벽하게 상보적인 서열을 가질 필요는 없으며, 이 유전자 서열에 혼성화되어 프라이머 작용을 할 수 있는 범위 내에서 충분한 상보성을 가지면 충분하다. 또한, 본 발명에 따른 프라이머는 유전자 증폭 반응에 이용될 수 있는 것이 바람직하다.The term primer in the present invention refers to a single-strand that can serve as an initiation point for template-directed DNA synthesis under suitable conditions and in suitable buffers (ie four different nucleoside triphosphates and polymerases). Oligonucleotides. Suitable lengths of primers can vary depending on various factors, such as temperature and the use of the primer. In addition, the sequence of the primer need not have a sequence that is completely complementary to some sequences of the template, it is sufficient to have sufficient complementarity within the range that can hybridize with the template to perform the primer-specific action. Therefore, the primer in the present invention does not need to have a sequence that is perfectly complementary to the nucleotide sequence of the SOCS6 gene, which is a template, and it is sufficient to have sufficient complementarity within a range capable of hybridizing to the gene sequence to act as a primer. In addition, it is preferable that the primer according to the present invention can be used for gene amplification reactions.

상기 증폭 반응은 핵산 분자를 증폭하는 반응을 말하며, 이러한 유전자의 증폭 반응들에 대해서는 당업계에 잘 알려져 있고, 예컨대, 중합효소 연쇄반응(PCR), 역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR), 리가아제 연쇄반응(LCR), 전자 중재 증폭(TMA), 핵산 염기서열 기판 증폭(NASBA) 등이 포함될 수 있다. The amplification reaction refers to an amplification reaction of a nucleic acid molecule, and the amplification reactions of such genes are well known in the art, for example, polymerase chain reaction (PCR), reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR), and Liga. Aze chain reaction (LCR), electron mediated amplification (TMA), nucleic acid sequence substrate amplification (NASBA), and the like.

본 발명에서, 상기 프로브라는 용어는 자연의 또는 변형된 모노머 또는 연쇄(linkages)의 선형 올리고머를 의미하며, 디옥시리보뉴클레오타이드 및 리보뉴클레오타이드를 포함하고 타켓 뉴클레오타이드 서열에 특이적으로 혼성화할 수 있으며, 자연적으로 존재하거나 또는 인위적으로 합성된 것을 말한다. 본 발명에 따른 프로브는 단일쇄일 수 있으며, 바람직하게는 올리고디옥시리보뉴클레오티드일 수 있다. 본 발명의 프로브는 자연 dNMP(즉, dAMP, dGMP, dCMP 및 dTMP), 뉴클레오타이드 유사체 또는 유도체를 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 프로브는 리보뉴클레오타이드도 포함할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 프로브는 골격 변형된 뉴클레오타이드, 예컨대, 펩타이드 핵산 (PNA) (M. Egholm et al., Nature, 365:566-568(1993)), 포스포로티오에이트 DNA, 포스포로디티오에이트 DNA, 포스포로아미데이트 DNA, 아마이드-연결된 DNA, MMI-연결된 DNA, 2'-O-메틸 RNA, 알파-DNA 및 메틸포스포네이트 DNA, 당 변형된 뉴클레오타이드 예컨대, 2'-O-메틸 RNA, 2'-플루오로 RNA, 2'-아미노 RNA, 2'-O-알킬 DNA, 2'-O-알릴 DNA, 2'-O-알카이닐 DNA, 헥소스 DNA, 피라노실 RNA 및 안히드로헥시톨 DNA, 및 염기 변형을 갖는 뉴클레오타이드 예컨대, C-5 치환된 피리미딘(치환기는 플루오로-, 브로모-, 클로로-, 아이오도-, 메틸-, 에틸-, 비닐-, 포르밀-, 에티틸-, 프로피닐-, 알카이닐-, 티아조릴-, 이미다조릴-, 피리딜- 포함), C-7 치환기를 갖는 7-데아자퓨린 (치환기는 플루오로-, 브로모-, 클로로-, 아이오도-, 메틸-, 에틸-, 비닐-, 포르밀-, 알카이닐-, 알켄일-, 티아조릴-, 이미다조릴-, 피리딜-), 이노신 및 디아미노퓨린을 포함할 수 있다.In the present invention, the term probe refers to a linear oligomer of natural or modified monomers or linkages, includes deoxyribonucleotides and ribonucleotides, and can specifically hybridize to a target nucleotide sequence, and exists naturally. Or artificially synthesized. The probe according to the invention may be single chain, preferably oligodioxyribonucleotides. Probes of the invention can include natural dNMPs (ie, dAMP, dGMP, dCMP and dTMP), nucleotide analogues or derivatives. In addition, the probe of the present invention may also include a ribonucleotide. For example, the probes of the present invention can be used in combination with a framework-modified nucleotide such as a peptide nucleic acid (PNA) (M. Egholm et al., Nature, 365: 566-568 (1993)), phosphorothioate DNA, phosphorodithioate DNA, phosphoamidate DNA, amide-linked DNA, MMI-linked DNA, 2'-O-methyl RNA, alpha-DNA and methylphosphonate DNA, sugar modified nucleotides such as 2'- 2'-O-alkyl DNA, 2'-O-allyl DNA, 2'-O-alkynyl DNA, hexose DNA, pyranosyl RNA, and anhydrohexy Tolyl DNA, and nucleotides with base modifications such as C-5 substituted pyrimidines wherein the substituents are fluoro, bromo, chloro, iodo-, methyl-, ethyl-, vinyl-, formyl-, 7-deazapurines having C-7 substituents (the substituents being fluoro, bromo, chloro, bromo, chloro, , Iodo-, me -, ethyl-, vinyl-, formyl-, alkynyl -, alkenyl-, quinolyl and quinoxalyl thiazol-, quinolyl and quinoxalyl imidazolidin -, pyridyl-), inosine, and may include a diamino purine.

또한, 본 발명에서 상기 SOCS6 단백질의 수준을 측정할 수 있는 물질로는 SOCS6 단백질에 대해 특이적으로 결합할 수 있는 다클론 항체, 단일클론 항체 및 재조합 항체 등의 항체를 포함할 수 있다.In addition, the material that can measure the level of the SOCS6 protein in the present invention may include antibodies such as polyclonal antibodies, monoclonal antibodies and recombinant antibodies that can specifically bind to SOCS6 protein.

또한, 본 발명에 있어서, 상기 기술한 바와 같이 간암을 진단할 수 있는 마커 단백질로서 SOCS6 단백질이 규명되었으므로, 상기 단백질을 이용하여 항체를 생성하는 방법은 당해 기술분야의 일반적 기술자가 공지된 기술을 이용하여 용이하게 제조할 수 있다. 예컨대, 다클론 항체의 경우에는 SOCS6 항원을 동물에 주사하고 동물로부터 채혈하여 항체를 포함하는 혈청을 수득하는 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 생산할 수 있으며, 이러한 다클론 항체는 염소, 토끼, 양, 원숭이, 말, 돼지, 소, 개 등의 임의의 동물 종 숙주로부터 제조가능하다. 단일클론 항체의 경우에는 당업계에 널리 공지된 하이브리도마(hybridoma) 방법(Kohler et al., European Jounral of Immunology, 6, 511-519, 1976)을 이용하여 제조할 수 있거나 또는 파지 항체 라이브러리(Clackson et al, Nature, 352, 624-628, 1991, Marks et al, J. Mol . Biol., 222:58, 1-597, 1991) 기술을 이용하여 제조할 수 있다. In addition, in the present invention, since SOCS6 protein has been identified as a marker protein for diagnosing liver cancer as described above, a method for producing an antibody using the protein uses techniques known to those skilled in the art. It can be manufactured easily. For example, polyclonal antibodies can be produced by methods well known in the art for injecting SOCS6 antigen into an animal and collecting blood from the animal to obtain a serum comprising the antibody, which polyclonal antibodies are goat, rabbit, sheep. Can be produced from any animal species host such as, monkey, horse, pig, cow, dog, and the like. In the case of monoclonal antibodies, the hybridoma method (Kohler et al., European Jounral of Immunology , 6, 511-519, 1976) or phage antibody libraries (Clackson et al, Nature , 352, 624-628, 1991, Marks et al, J. Mol . Biol ., 222: 58 , 1-597, 1991).

본 발명에 따른 항체는 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 완전한 형태뿐만 아니라, 항체 분자의 기능적인 단편을 포함할 수 있다. 항체 분자의 기능적인 단편이란 적어도 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 뜻하며, Fab, F(ab'), F(ab') 2 및 Fv 등이 있다.Antibodies according to the invention may comprise functional fragments of antibody molecules, as well as complete forms having two full length light chains and two full length heavy chains. A functional fragment of an antibody molecule refers to a fragment having at least antigen binding function, and includes Fab, F (ab '), F (ab') 2 and Fv.

또한, 본 발명은 SOCS6 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현 수준을 측정할 수 있는 간암 진단용 조성물을 포함하는 간암 진단용 키트를 제공한다. The present invention also provides a kit for diagnosing liver cancer comprising a composition for diagnosing liver cancer capable of measuring the expression level of a SOCS6 protein or a gene encoding the same.

본 발명의 간암 진단용 키트에 포함되는 간암 진단용 조성물은 SOCS6 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현 수준을 측정할 수 있는 프라이머, 프로브 또는 항체를 포함할 수 있으며, 이들의 정의는 앞서 기술된 바와 같다.Liver cancer diagnostic composition included in the kit for diagnosing liver cancer of the present invention may include a primer, a probe, or an antibody capable of measuring the expression level of a SOCS6 protein or a gene encoding the same, and the definition thereof is as described above.

본 발명의 간암 진단용 키트가 만일 PCR 증폭 과정에 적용되는 경우, 본 발명의 키트는 선택적으로, PCR 증폭에 필요한 시약, 예컨대, 완충액, DNA 중합효소(예컨대, Thermus aquaticus (Taq), Thermus thermophilus (Tth), Thermus filiformis, Thermis flavus, Thermococcus literalis 또는 Pyrococcus furiosus(Pfu)로부터 수득한 열 안정성 DNA 중합효소), DNA 중합 효소 조인자 및 dNTPs를 포함할 수 있으며, 본 발명의 간암 진단용 키트가 면역 분석에 적용되는 경우, 본 발명의 키트는 선택적으로, 이차항체 및 표지의 기질을 포함할 수 있다. 나아가, 본 발명에 따른 키트는 상기한 시약 성분을 포함하는 다수의 별도 패키징 또는 컴파트먼트로 제작될 수 있다.If the kit for diagnosing liver cancer of the present invention is subjected to a PCR amplification process, the kit of the present invention may optionally contain reagents necessary for PCR amplification, such as buffers, DNA polymerases (eg, Thermus aquaticus (Taq), Thermus thermophilus (Tth) ), Thermus filiformis, Thermis flavus, Thermococcus literalis or thermally stable DNA polymerase obtained from Pyrococcus furiosus (Pfu)), DNA polymerase cofactors and dNTPs, and the liver cancer diagnostic kit of the present invention In the case, the kit of the present invention may optionally comprise a substrate of a secondary antibody and a label. Furthermore, the kits according to the invention can be produced in a number of separate packaging or compartments comprising the reagent components described above.

또한, 본 발명은 SOCS6 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현 수준을 측정할 수 있는 간암 진단용 조성물을 포함하는 간암 진단용 마이크로어레이를 제공한다.In addition, the present invention provides a liver cancer diagnostic microarray comprising a composition for diagnosing liver cancer capable of measuring the expression level of the SOCS6 protein or a gene encoding the same.

본 발명의 마이크로어레이에 있어서, SOCS6 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현 수준을 측정할 수 있는 프라이머, 프로브 또는 항체는 혼성화 어레이 요소(hybridizable array element)로서 이용되며, 기질(substrate) 상에 고정화된다. 바람직한 기질은 적합한 견고성 또는 반-견고성 지지체로서, 예컨대, 막, 필터, 칩, 슬라이드, 웨이퍼, 파이버, 자기성 비드 또는 비자기성 비드, 겔, 튜빙, 플레이트, 고분자, 미소입자 및 모세관을 포함할 수 있다. 상기 혼성화 어레이 요소는 상기 기질 상에 배열되고 고정화되며, 이와 같은 고정화는 화학적 결합 방법 또는 UV와 같은 공유 결합적 방법에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 상기 혼성화 어레이 요소는 에폭시 화합물 또는 알데히드기를 포함하도록 변형된 글래스 표면에 결합될 수 있고, 또한 폴리라이신 코팅 표면에서 UV에 의해 결합될 수 있다. 또한, 상기 혼성화 어레이 요소는 링커(예: 에틸렌 글리콜 올리고머 및 디아민)를 통해 기질에 결합될 수 있다. In the microarray of the present invention, primers, probes or antibodies capable of measuring the expression level of a SOCS6 protein or gene encoding it are used as a hybridizable array element and immobilized on a substrate. Preferred substrates may include suitable rigid or semi-rigid supports, such as membranes, filters, chips, slides, wafers, fibers, magnetic beads or nonmagnetic beads, gels, tubing, plates, polymers, microparticles and capillaries. have. The hybridization array element is arranged and immobilized on the substrate, and such immobilization can be performed by a chemical bonding method or a covalent binding method such as UV. For example, the hybridization array element can be bonded to a glass surface modified to include an epoxy compound or an aldehyde group, and can also be bonded by UV at the polylysine coating surface. In addition, the hybridization array element can be coupled to the substrate via a linker (eg, ethylene glycol oligomer and diamine).

한편, 본 발명의 마이크로어레이에 적용되는 시료가 핵산일 경우에는 표지(labeling)될 수 있고, 마이크로어레이상의 어레이 요소와 혼성화 될 수 있다. 혼성화 조건은 다양할 수 있으며, 혼성화 정도의 검출 및 분석은 표지 물질에 따라 다양하게 실시될 수 있다.On the other hand, when the sample to be applied to the microarray of the present invention is a nucleic acid can be labeled (labeled), it can be hybridized with the array element on the microarray. Hybridization conditions may vary, and detection and analysis of the degree of hybridization may vary depending on the labeling substance.

또한, 본 발명은 SOCS6 유전자의 발현수준 또는 SOCS6 단백질 수준을 측정하여 간암을 진단하는 방법을 제공할 수 있는데, 상기 방법은 (a) 생물학적 시료에 존재하는 SOCS6(suppressors of cytokine signaling 6) 유전자의 발현양 또는 단백질의 양을 측정하는 단계; 및 (b) 상기 (a) 단계의 측정결과를 정서상조군 시료의 SOCS6 유전자의 발현양 또는 단백질의 양과 비교하는 단계를 포함할 수 있다.In addition, the present invention can provide a method for diagnosing liver cancer by measuring the expression level or SOCS6 protein level of the SOCS6 gene, the method (a) the expression of the suppressor of cytokine signaling 6 (SOCS6) gene present in a biological sample Measuring the amount or amount of protein; And (b) comparing the measurement result of step (a) with the amount of expression of the SOCS6 gene or the amount of protein in the emotional precocious sample.

상기에서 SOCS6 유전자의 발현수준 또는 SOCS6 단백질 수준을 측정하는 방법은 공지의 기술을 이용하여 생물학적 시료로부터 mRNA 또는 단백질을 분리하는 공지의 공정을 포함하여 수행될 수 있다.The method for measuring the expression level or SOCS6 protein level of the SOCS6 gene in the above may be carried out including a known process for separating mRNA or protein from biological samples using known techniques.

본 발명의 일실시예에서는 간암 조직 또는 간암 세포주를 정상 조직 또는 정상 세포주와 비교하여 각각의 세포 또는 조직에서 발현되는 SOCS6의 발현수준을 웨스턴 블럿을 통해 비교하였다. 그 결과, 간암이 발생한 샘플에서의 SOCS6 단백질 발현정도가 정상 샘플에 비해 감소함을 확인함으로써, 상기 본 발명에 따른 간암 진단 방법은 생물학적 시료에서의 SOCS6 발현 수준이 대조군에 비해 감소되는 것으로 나타날 경우, 이를 간암이 발병된 것으로 진단할 수 있다. In one embodiment of the present invention, liver cancer tissues or liver cancer cell lines were compared with normal tissues or normal cell lines, and the expression level of SOCS6 expressed in each cell or tissue was compared through Western blot. As a result, by confirming that the expression level of SOCS6 protein in the liver cancer-decreased sample compared to the normal sample, the liver cancer diagnostic method according to the present invention, when the level of SOCS6 expression in the biological sample appears to be reduced compared to the control, This can be diagnosed as developing liver cancer.

본 발명에서 상기 "생물학적 시료"란 간암 발생 또는 진행 정도에 따른 상기 SOCS6 유전자의 발현 수준 또는 단백질의 수준이 정상 대조군과는 다른, 생체로부터 채취된 시료를 말하며, 상기 시료로는 예를 들면, 이에 제한되지는 않으나, 조직, 세포, 혈액, 혈청, 혈장, 타액 및 뇨 등이 포함될 수 있다.In the present invention, the "biological sample" refers to a sample collected from a living body, in which the expression level or protein level of the SOCS6 gene is different from the normal control group according to the incidence or progression of liver cancer. But not limited to, tissue, cells, blood, serum, plasma, saliva, urine, and the like.

또한, 상기 SOCS6 유전자의 발현 수준 측정은 바람직하게는 mRNA의 수준을 측정하는 것이며, mRNA의 수준을 측정하는 방법으로는 역전사 중합효소연쇄반응(RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소연쇄반응, RNase 보호 분석법, 노던 블럿 및 DNA 칩 등이 있으나, 이에 제한되지는 않는다. In addition, the expression level of the SOCS6 gene is preferably to measure the level of mRNA, the method of measuring the level of mRNA reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), real-time reverse transcription polymerase chain reaction, RNase protection Assays, northern blots and DNA chips, and the like.

또한, 상기 SOCS6 단백질 수준 측정은 항체를 이용할 수도 있는데, 이러한 경우, 생물학적 시료 내의 SOCS6 마커 단백질과 이에 특이적인 항체는 결합물, 즉, 항원-항체 복합체를 형성하며, 항원-항체 복합체의 형성량은 검출 라벨(detection label)의 시그널의 크기를 통해서 정량적으로 측정할 수 있다. 이러한 검출 라벨은 효소, 형광물, 리간드, 발광물, 미소입자(microparticle), 레독스 분자 및 방사선 동위원소로 이루어진 그룹 중에서 선택할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다. 단백질 수준을 측정하기 위한 분석 방법으로는, 이에 제한되지는 않으나, 웨스턴 블럿, ELISA, 방사선면역분석, 방사선 면역 확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역침전 분석법, 보체 고정분석법, FACS, 단백질 칩 등이 있다. In addition, the SOCS6 protein level may be measured using an antibody, in which case, the SOCS6 marker protein and the antibody specific thereto in a biological sample form a binding, ie, an antigen-antibody complex, and the amount of the antigen-antibody complex is Quantitative measurements can be made through the magnitude of the signal on the detection label. Such a detection label may be selected from the group consisting of enzymes, fluorescent materials, ligands, luminescent materials, microparticles, redox molecules and radioisotopes, but is not limited thereto. Analytical methods for measuring protein levels include, but are not limited to, Western blot, ELISA, radioimmunoassay, radioimmunoassay, oukteroni immunodiffusion, rocket immunoelectrophoresis, tissue immunostaining, immunoprecipitation assay, Complement fixation assays, FACS, protein chips, and the like.

따라서 본 발명은 상기와 같은 검출 방법들을 통하여, 대조군의 SOCS6 mRNA 발현양 또는 단백질의 양과 간암 환자 또는 간암 의심환자에서의 SOCS6 mRNA 발현양 또는 단백질의 양을 확인할 수 있고, 상기 발현양의 정도를 대조군과 비교함으로써 간암의 발병여부, 진행단계 또는 예후 등을 예측 및 진단할 수 있다.Therefore, the present invention can determine the amount of SOCS6 mRNA expression or protein in the control group and the amount of SOCS6 mRNA expression or protein in liver cancer patients or suspected liver cancer patients through the above-described detection method, and the degree of expression By comparing with, it is possible to predict and diagnose the incidence, progression or prognosis of liver cancer.

나아가 본 발명은 (a) SOCS6(suppressors of cytokine signaling 6) 유전자 또는 SOCS6 단백질을 포함하는 세포에 분석하고자 하는 시료를 접촉시키는 단계; (b) 상기 SOCS6 유전자의 발현양, SOCS6 단백질의 양 또는 SOCS6 단백질의 활성을 측정하는 단계; 및 (c) 상기 (b) 단계의 측정 결과, SOCS6 유전자의 발현양, SOCS6 단백질의 양 또는 SOCS6 단백질의 활성이 증가되는 경우에 상기 시료는 간암의 예방 또는 치료용 물질로 판정하는 단계를 포함하는, 간암의 예방 또는 치료용 물질을 스크리닝 하는 방법을 제공한다. The present invention further comprises the steps of (a) contacting a sample to be analyzed with a cell comprising a suppressor of cytokine signaling 6 (SOCS6) gene or a SOCS6 protein; (b) measuring the amount of expression of said SOCS6 gene, the amount of SOCS6 protein or the activity of SOCS6 protein; And (c) determining that the sample is a substance for preventing or treating liver cancer when the amount of expression of SOCS6 gene, amount of SOCS6 protein, or activity of SOCS6 protein is increased as a result of the measurement of step (b). In addition, the present invention provides a method for screening a substance for preventing or treating liver cancer.

본 발명의 방법에 따르면, 먼저 SOCS6 유전자 또는 단백질을 포함하는 간암 세포에 분석하고자 하는 시료를 접촉시킬 수 있다. 여기서 상기시료는 SOCS6 유전자의 발현양, SOCS6 단백질의 양 또는 SOCS6 단백질의 활성에 영향을 미치는지 여부를 검사하기 위하여 스크리닝에서 이용되는 미지의 물질을 의미한다. According to the method of the present invention, first, a sample to be analyzed may be contacted with liver cancer cells containing a SOCS6 gene or protein. Herein, the sample refers to an unknown substance used in screening to examine whether the amount of expression of the SOCS6 gene, the amount of SOCS6 protein, or the activity of the SOCS6 protein is affected.

상기 시료는 화학물질, 뉴클레오티드 또는 천연 추출물을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 이후, 시료가 처리된 세포에서 SOCS6 유전자의 발현양, SOCS6 단백질의 양 또는 SOCS6 단백질의 활성을 측정할 수 있으며, 측정 결과, SOCS6 유전자의 발현양, SOCS6 단백질의 양 또는 SOCS6 단백질의 활성이 증가되는 것이 측정되면 상기 시료는 간암을 치료 또는 예방할 수 있는 물질로 판정될 수 있다.The sample may include, but is not limited to, chemicals, nucleotides or natural extracts. Subsequently, the expression level of the SOCS6 gene, the amount of SOCS6 protein or the activity of the SOCS6 protein can be measured in the cells treated with the sample. As a result, the expression level of the SOCS6 gene, the amount of SOCS6 protein or the activity of the SOCS6 protein is increased. The sample may be determined to be a substance capable of treating or preventing liver cancer.

상기에서 SOCS6 유전자의 발현양, SOCS6 단백질의 양 또는 SOCS6 단백질의 활성을 측정하는 방법은 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 수행될 수 있는데, 예를 들면, 이에 제한되지는 않으나, 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcriptase-polymerase chain reaction), 실시간 중합효소 연쇄반응(real time-polymerase chain reaction), 웨스턴 블럿, 노던 블럿, ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion) 및 면역침전분석법(immunoprecipitation assay)등을 이용하여 수행할 수 있다.The method of measuring the expression level of SOCS6 gene, the amount of SOCS6 protein or the activity of SOCS6 protein in the above can be carried out through various methods known in the art, for example, but not limited to reverse transcriptase polymerase chain Reverse transcriptase-polymerase chain reaction, real time-polymerase chain reaction, western blot, northern blot, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), radioimmunoassay (radioimmunodiffusion) and immunoprecipitation assay (immunoprecipitation assay) can be performed using.

나아가, 본 발명에서 SOCS6 유전자 또는 단백질의 발현이 정상조직 또는 정상세포에 비해 간암조직 또는 간암세포에서 감소된다는 사실을 통해 본 발명자들은 SOCS6가 종양 억제자로 작용할 수 있으며 따라서 SOCS6를 간암의 예방 또는 치료를 위한 치료제로서 사용할 수 있다는 것을 알 수 있었다.Furthermore, through the fact that the expression of the SOCS6 gene or protein in the present invention is reduced in hepatocellular carcinoma or hepatocellular carcinoma compared to normal or normal cells, the present inventors have found that SOCS6 can act as a tumor suppressor. It can be seen that it can be used as a therapeutic for.

그러므로 본 발명은 SOCS6를 유효성분으로 함유하는 간암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있다.Therefore, the present invention can provide a pharmaceutical composition for preventing or treating liver cancer containing SOCS6 as an active ingredient.

본 발명에 따른 상기 약학적 조성물은 SOCS6 단백질 또는 SOCS6 유전자가 세포 내에서 발현될 수 있도록 SOCS6 유전자를 함유하는 발현 벡터를 유효성분으로 포함할 수 있으며, 상기 SOCS6 단백질은 바람직하게 서열번호 1로 표시되는 염기서열로부터 코팅되는 폴리펩타이드일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 폴리펩타이드일 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention may include an expression vector containing the SOCS6 gene as an active ingredient so that the SOCS6 protein or the SOCS6 gene can be expressed in a cell, and the SOCS6 protein is preferably represented by SEQ ID NO: 1. It may be a polypeptide coated from the base sequence, more preferably may be a polypeptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2.

또한, 본 발명의 SOCS6 단백질은 서열번호 1의 염기서열로부터 코딩되는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드에 대해 기능적 동등물일 수 있다. 상기 '기능적 동등물'이란, 아미노산의 부가, 치환 또는 결실의 결과, 서열번호 1으로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 60%, 바람직하게는 70%, 보다 바람직하게는 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 것으로서 본 발명의 SOCS6와 실질적으로 동질의 활성을 나타내는 폴리펩티드를 말한다. 여기서, '실질적으로 동질의 활성'이란 상기에서 기재한 Grim19의 활성을 의미한다. 상기 기능적 동등물에는, 예를 들어, 본 발명에 따른 SOCS6의 아미노산 서열의 아미노산 중 일부가 치환되거나, 결실 또는 부가된 아미노산 서열 변형체가 포함될 수 있다. 아미노산의 치환은 바람직하게는 보존적 치환일 수 있으며, 천연에 존재하는 아미노산의 보존적 치환의 예는 다음과 같다; 지방족 아미노산(Gly, Ala, Pro), 소수성 아미노산(Ile, Leu, Val), 방향족 아미노산(Phe, Tyr, Trp), 산성 아미노산 (Asp, Glu), 염기성 아미노산 (His, Lys, Arg, Gln, Asn) 및 황함유 아미노산(Cys, Met). 아미노산의 결실은 바람직하게는 본 발명의 Grim19의 활성에 직접 관여하지 않는 부분에 위치할 수 있다. 또한 상기 기능적 동등물의 범위에는 SOCS6의 기본 골격 및 이의 생리 활성을 유지하면서 폴리펩티드의 일부 화학 구조가 변형된 폴리펩티드 유도체도 포함될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 폴리펩티드의 안정성, 저장성, 휘발성 또는 용해도 등을 변경시키기 위한 구조변경 및 생리활성을 유지하면서 다른　단백질과　융합으로　만들어진　융합단백질　등이 이에 포함될 수 있다. 본 발명에서 SOCS6 단백질은 DNA 재조합 기술을 사용하여 제조될 수 있으며 이를 위하여 당업계에 공지된 방법을 사용할 수 있다. 구체적으로 SOCS6 단백질은 상기 SOCS6 유전자를 사용하여 세균, 효모, 식물 세포주 및 동물 세포주 내에서 재조합 방식으로 주입하는 유전공학 방법에 의해 제조될 수 있다.In addition, the SOCS6 protein of the present invention may be a functional equivalent to a polypeptide having an amino acid sequence encoded from the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1. The term 'functional equivalent' refers to a sequence homology with at least 60%, preferably 70%, more preferably 80% or more of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO. 1 as a result of the addition, substitution or deletion of amino acids. It refers to a polypeptide that exhibits substantially homogeneous activity with SOCS6 of the present invention. Here, "substantially homogeneous activity" refers to the activity of Grim19 described above. Such functional equivalents may include, for example, amino acid sequence variants in which some of the amino acids of the amino acid sequence of SOCS6 according to the invention have been substituted, deleted or added. Substitution of amino acids may preferably be conservative substitutions, examples of conservative substitutions of amino acids present in nature are as follows; Aliphatic amino acids (Gly, Ala, Pro), hydrophobic amino acids (Ile, Leu, Val), aromatic amino acids (Phe, Tyr, Trp), acidic amino acids (Asp, Glu), basic amino acids (His, Lys, Arg, Gln, Asn ) And sulfur-containing amino acids (Cys, Met). Deletion of amino acids may preferably be located at portions not directly involved in the activity of Grim19 of the present invention. The functional equivalent may also include polypeptide derivatives in which some chemical structures of the polypeptide are modified while maintaining the basic backbone of SOCS6 and its physiological activity. For example, a fusion protein made of a fusion with other proteins while maintaining structural changes and physiological activities for altering the stability, storage, volatility or solubility of the polypeptide of the present invention may be included. In the present invention, the SOCS6 protein may be prepared using DNA recombination technology, and methods known in the art may be used for this purpose. Specifically, the SOCS6 protein may be prepared by a genetic engineering method that recombinantly injects bacteria, yeast, plant cell lines, and animal cell lines using the SOCS6 gene.

또한, 본 발명에 따른 상기 약학적 조성물에 포함되는 발현벡터는 상기 SOCS6 유전자가 삽입된 발현벡터를 말하며 이에 한정되지 않지만 바람직하게는 당업계에 공지된 플라스미드, 바이러스 또는 기타 매개체를 의미한다.In addition, the expression vector included in the pharmaceutical composition according to the present invention refers to an expression vector into which the SOCS6 gene is inserted, but is not limited thereto, and preferably means a plasmid, virus or other medium known in the art.

본 발명에 따른 상기 발현벡터는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 세포에 도입할 수 있다. 예를 들어 이에 한정되지는 않으나, 일시적 형질감염(transient transfection), 미세주사, 형질도입(transduction), 세포융합, 칼슘 포스페이트 침전법, 리포좀 매개된 형질감염(liposome-mediated transfection), DEAE 덱스트란-매개된 형질감염(DEAE Dextran- mediated transfection), 폴리브렌-매개된 형질감염(polybrene-mediated transfection), 전기침공법(electropora tion), 유전자 총(gene gun) 및 세포 내로 핵산을 유입시키기 위한 다른 공지의 방법에 의해 세포 내로 도입할 수 있다(Wu et al., J. Bio. Chem., 267:963-967, 1992; Wu and Wu, J. Bio. Chem., 263:14621-14624, 1988).The expression vector according to the present invention can be introduced into cells using methods known in the art. For example, but not limited to, transient transfection, microinjection, transduction, cell fusion, calcium phosphate precipitation, liposome-mediated transfection, DEAE dextran- DEAE Dextran-mediated transfection, polybrene-mediated transfection, electroporation, gene guns and other known methods for introducing nucleic acids into cells Can be introduced into cells by the method of (Wu et al., J. Bio. Chem., 267: 963-967, 1992; Wu and Wu, J. Bio. Chem., 263: 14621-14624, 1988). .

또한, 본 발명에 따른 간암의 예방 또는 치료용 조성물은 약학적으로 유효한 양의 SOCS6 단백질 또는 SOCS6 유전자를 포함하는 발현벡터를 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기에서 약학적으로 유효한 양이란 면역질환의 증상을 예방, 개선 및 치료하기에 충분한 양을 말한다.In addition, the composition for preventing or treating liver cancer according to the present invention may include an expression vector comprising a pharmaceutically effective amount of a SOCS6 protein or a SOCS6 gene alone or include one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents. Can be. The pharmaceutically effective amount herein refers to an amount sufficient to prevent, ameliorate and treat the symptoms of an immune disease.

본 발명에서 상기 '치료'란, 달리 언급되지 않는 한, 상기 용어가 적용되는 질환 또는 질병, 또는 상기 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미하며, 본원에서 사용된 상기 '치료'란 용어는 '치료하는'이 상기와 같이 정의될 때 치료하는 행위를 말한다. 따라서 포유동물에 있어서 간암의 "치료" 또는 "치료요법" 은 하기의 하나 이상을 포함할 수 있다:In the present invention, the term 'treatment', unless stated otherwise, reverses, alleviates, inhibits, or prevents the disease or condition to which the term applies, or one or more symptoms of the disease or condition, As used herein, the term 'treatment' refers to the act of treating when 'treating' is defined as above. Thus, in mammals, "treatment" or "therapy" of liver cancer may include one or more of the following:

(1) 간암의 성장을 저해함, 즉, 그 발달을 저지시킴,(1) inhibits the growth of liver cancer, that is, inhibits its development,

(2) 간암의 확산을 예방함, 즉, 전이를 예방함,(2) prevent the spread of liver cancer, i.e. prevent metastasis,

(3) 간암의 증상을 경감시킴.(3) alleviate the symptoms of liver cancer.

(4) 간암의 재발을 예방함, 및(4) prevent recurrence of liver cancer, and

상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증 등과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 약학적으로 허용되는 담체로는 예를 들면, 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등과 같은 경구 투여용 담체 및 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코스 및 글리콜 등과 같은 비경구 투여용 담체 등이 있으며 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르 브산과 같은 항산화제가있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995). 본 발명에 따른 약학적 조성물은 상술한 바와 같은 약학적으로 허용되는 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 적합한 형태로 제형화 될 수 있다. 즉, 본 발명의 약학적 조성물은 공지의 방법에 따라 다양한 비경구 또는 경구 투여용 형태로 제조될 수 있으며, 비경구 투여용 제형의 대표적인 것으로는 주사용 제형으로 등장성 수용액 또는 현탁액이 바람직하다. 주사용 제형은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하여 당업계에 공지된 기술에 따라 제조할 수 있다. 예를 들면, 각 성분을 식염수 또는 완충액에 용해시켜 주사용으로 제형화될 수 있다. 또한, 경구 투여용 제형으로는, 이에 한정되지는 않으나, 분말, 과립, 정제, 환약 및 캡슐 등이 있다.The term "pharmaceutically acceptable" as used herein refers to a composition that is physiologically acceptable and does not normally cause an allergic reaction such as gastrointestinal disorder, dizziness, or the like when administered to humans. Pharmaceutically acceptable carriers include, for example, carriers for oral administration such as lactose, starch, cellulose derivatives, magnesium stearate, stearic acid and the like, water for parenteral administration such as water, suitable oils, saline, aqueous glucose and glycols And may further contain stabilizers and preservatives. Suitable stabilizers include antioxidants such as sodium hydrogen sulfite, sodium sulfite or ascorbic acid. Suitable preservatives include benzalkonium chloride, methyl- or propyl-paraben and chlorobutanol. Other pharmaceutically acceptable carriers can be found in Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1995). The pharmaceutical composition according to the present invention may be formulated in a suitable form according to methods known in the art together with the pharmaceutically acceptable carrier as described above. That is, the pharmaceutical composition of the present invention can be prepared in various parenteral or oral dosage forms according to known methods, and isotonic aqueous solution or suspension is preferable as an injectable formulation as a typical parenteral dosage form. Injectable formulations may be prepared according to techniques known in the art using suitable dispersing or wetting agents and suspending agents. For example, each component may be formulated for injection by dissolving in saline or buffer. In addition, formulations for oral administration include, but are not limited to, powders, granules, tablets, pills and capsules.

상기와 같은 방법으로 제형화된 약학적 조성물은 유효량으로 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있는데, 상기 투여란 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며 물질의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. Pharmaceutical compositions formulated in such a manner can be administered in an effective amount via a variety of routes including oral, transdermal, subcutaneous, intravenous or intramuscular, which administration is intended to introduce any substance into the patient in any suitable manner. Means and route of administration of the substance can be administered via any general route as long as it can reach the target tissue.

또한, 상기에서 유효량 이란 환자에게 투여하였을 때, 예방 또는 치료 효과를 나타내는 양을 말한다. 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여량은 환자의 질환 종류 및 중증도, 연령, 성별, 체중, 약물에 대한 민감도, 현재 치료법의 종류, 투여방법, 표적 세포 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있으며, 당 분야의 전문가들에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 종래의 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 바람직하게는 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 1~10000㎍/체중kg/day, 더욱더 바람직하게는 10~1000㎎/체중kg /day의 유효용량으로 하루에 수회 반복 투여될 수 있다. In addition, the effective amount in the above means an amount exhibiting a prophylactic or therapeutic effect when administered to a patient. The dosage of the pharmaceutical composition according to the present invention may vary depending on various factors such as the disease type and severity of the patient, age, sex, weight, sensitivity to the drug, type of current treatment, administration method, target cell, and the like. It can be easily determined by experts. In addition, the pharmaceutical composition of the present invention may be administered in combination with a conventional therapeutic agent, may be administered sequentially or simultaneously with a conventional therapeutic agent, and may be single or multiple administrations. Preferably all of the above factors can be administered in an amount that can achieve the maximum effect in a minimum amount without side effects, more preferably 1 to 10000 ㎍ / weight kg / day, even more preferably 10 to 1000 mg It may be administered repeatedly several times a day at an effective dose of / kg body weight / day.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to examples. However, these examples are intended to illustrate the present invention in more detail, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

<< 실시예Example 1> 1>

시료의 준비Preparation of sample

(1) 조직 샘플(1) tissue sample

10명의 환자들로부터 67개의 냉동 간암(hepatocelullar carcinoma)조직 샘플을 얻었다. 본 실시예에서 사용된 상기 조직 샘플들은 카톨릭대학교 의과대학 윤리검토위원회의 승인을 받은 것이며, 헬싱키 선언의 요구에 부합되도록 사전에 참가자들로부터 동의를 받았다. 또한 대조군으로는 정상의 조직 샘플을 수득하여 사용하였다.
67 frozen hepatocellular carcinoma tissue samples were obtained from 10 patients. The tissue samples used in this example were approved by the Catholic University Medical College Ethics Review Committee, and were previously agreed by the participants to meet the requirements of the Declaration of Helsinki. As a control, a normal tissue sample was obtained and used.

(2) 세포배양(2) cell culture

10% 소태아혈청(fetal bovine serum) (Lonza, Walkersville, MD, USA) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycine) (GIBCO BRL., Gaithersburg, MD, USA)을 포함한 RPMI1640 배지(Lonza, Walkersville, MD, USA) 에서 11개의 간암세포주인 Hep3B, HepG2, PLC/PRF/5, SNU-182, SNU-354, SNU-368, SNU-387, SNU-423, SNU-449, 및 SNU-475를 배양하였다. 불멸화된 정상 간세포주(immortalized normal liver cell line)인 THLE-3은 BEGM Bulletkit(Lonza, Walkersville, MD, USA)가 보충된 BEBM(Lonza, Walkersville, MD, USA)에서 배양하였다.
RPMI1640 medium (Lonza, Walkersville, USA) including 10% fetal bovine serum (Lonza, Walkersville, MD, USA) and 1% penicillin / streptomycine (GIBCO BRL., Gaithersburg, MD, USA) , Hepat3B, HepG2, PLC / PRF / 5, SNU-182, SNU-354, SNU-368, SNU-387, SNU-423, SNU-449, and SNU-475 Incubated. THLE-3, an immortalized normal liver cell line, was cultured in BEBM (Lonza, Walkersville, MD, USA) supplemented with BEGM Bulletkit (Lonza, Walkersville, MD, USA).

<< 실시예Example 2> 2>

웨스턴Western 블럿Blot 분석 analysis

본 발명자들은 상기 실시예 1에서 수득한 간암 조직 및 간암 세포들에 대해 SOCS6의 발현양상을 웨스턴 블럿을 통해 확인하였다. 웨스턴 블럿 수행을 위해 먼저, 상기 실시예 1에서 배양한 세포들은 50 ㎍/ml 의 페닐메탄-설포닐플루오라이드(phenylmethane-sulfonylfluoride, PMSF) 및 1X Complete protease inhibitor cocktail tablets (PMSF, Roche, Mannheim, Germany)을 포함한 RIPA (Radio Immunoprecipitation) 용해 버퍼(50 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1% Nonidet P-40, 0.25% sodium deoxycholate, 1mM)를 이용하여 세포 용해물(whole-cell lysates)을 수득하였고, 간암 조직으로부터의 단백질은 T-PERTM 시약(Pierce, Rockford, IL, USA)을 이용하여 간암 조직으로부터 추출하였다. 이후, 상기 과정을 통해 각각의 세포 및 조직으로부터 추출한 단백질의 농도는 BCA 단백질 분석 키트(Pierce, Rockford, IL, USA)를 이용하여 측정하였으며, 샘플의 흡광도는 VICTOR3TM multilabel plate reader로 570 nm에서 확인하였다. SDS-PAGE로 10㎍의 단백질들을 분리시키고, PVDF 막 (polyvinylidene difluoride membrane) (Amersham, Buckinghamshire, UK) 위로 옮겼다. 상기 막(membrane)은 0.05% 의 Tween-20 (USB corporation, Cleveland, OH, USA)을 포함한 TBS (tris-buffered saline)에서 5% 스킴밀크(skimmed milk)로 1시간 동안 블러킹을 시켰으며, 이후, 상기 막을 1차 항체들 및 HRP-연결(conjugated)된 2차 항체(Pierce, Rockford, IL, USA)와 함께 각각 밤새동안 및 1시간 동안 배양시켰다. 이때 항체로는 항-SOCS6 및 항-α-튜뷸린(anti-α-tubulin)을 Santa cruz biotechnology (Delaware, CA, USA)에서 구입하여 사용하였고, 신호 검출을 위해서는 ECL plus Western blotting detection system (Amersham, Buckinghmashire, UK)을 사용하여 수행하였다. 또한 상기 멤브레인은 LAS 3000 image analyzer (Fuji Photo Film, Japan)로 측정하였고, 이때 대조군으로는 정상 세포인 THLE-3 및 정상 조직을 사용하였으며, 그 결과를 도 1에 나타내었다.
The present inventors confirmed the expression pattern of SOCS6 for liver cancer tissues and liver cancer cells obtained in Example 1 through Western blot. In order to perform western blot, the cells cultured in Example 1 were treated with 50 μg / ml of phenylmethane-sulfonylfluoride (PMSF) and 1X Complete protease inhibitor cocktail tablets (PMSF, Roche, Mannheim, Germany). Whole-cell lysates using RIPA (Radio Immunoprecipitation) lysis buffer (50 mM Tris-HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1% Nonidet P-40, 0.25% sodium deoxycholate, 1 mM) Were obtained, and protein from liver cancer tissue was extracted from liver cancer tissue using T-PER ™ reagent (Pierce, Rockford, IL, USA). Then, the concentration of protein extracted from each cell and tissue through the above process was measured using a BCA protein analysis kit (Pierce, Rockford, IL, USA), the absorbance of the sample was confirmed at 570 nm with a VICTOR3 TM multilabel plate reader It was. 10 μg of proteins were separated by SDS-PAGE and transferred onto a polyvinylidene difluoride membrane (Amersham, Buckinghamshire, UK). The membrane was blocked for 1 hour with 5% skimmed milk in tris-buffered saline (TBS) containing 0.05% of Tween-20 (USB corporation, Cleveland, OH, USA). The membranes were incubated with primary antibodies and HRP-conjugated secondary antibodies (Pierce, Rockford, IL, USA) overnight and for 1 hour, respectively. In this case, anti-SOCS6 and anti-α-tubulin were purchased from Santa cruz biotechnology (Delaware, CA, USA) and used as an antibody. For signal detection, the ECL plus Western blotting detection system (Amersham) was used. , Buckinghmashire, UK). In addition, the membrane was measured by a LAS 3000 image analyzer (Fuji Photo Film, Japan), in which the control group was used as normal cells THLE-3 and normal tissue, the results are shown in FIG.

웨스턴 블럿 수행 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 간암 조직의 경우 정상세포이 배해 SOCS6의 발현이 현저하게 감소된 것으로 나타났으며(도 1a 참조), 간암 세포주에서의 내생적(endogenous) SOCS6의 발현을 측정한 결과, 대체로 매우 적은 양으로 SOCS6가 발현되고 있거나 또는 아예 발현되지 않고 있다는 것을 알 수 있었다(도 1b 참조).
As a result of Western blot, as shown in FIG. 1, normal cells were significantly reduced in the expression of SOCS6 in liver cancer tissues (see FIG. 1A), and endogenous SOCS6 expression was detected in liver cancer cell lines. As a result of the measurement, it was found that SOCS6 was expressed or was not expressed at all in a very small amount (see FIG. 1B).

<< 실시예Example 3> 3>

면역조직화학(Immunohistochemistry ImmunohistochemistryImmunohistochemistry ) 염색법을 통한 ) Through staining SOCS6SOCS6 의 발현분석Expression Analysis

상기 실시예 2의 결과를 통해 본 발명자들은 SOCS6가 정상조직에 비해 간암 조직에서 발현양이 현저히 감소되는지를 확인할 수 있었고, 나아가 이러한 결과를 보다 확실히 검증하기 위해 간암 조직에서의 SOCS6 발현을 면역조직화학적 분석을 통해 조사하였다. 면역조직화학적 분석을 위해 6개의 간암 조직 슬라이드 및 하나의 간암 조직 마이크로어레이를 사용하였다. 항원을 회수하기 위해 전자렌지에서 상기 슬라이드들을 sodium citrate 버퍼 (pH 6.0)로 30분간 끓인 후, 20분간 식혔다. 신호의 증폭은 스트렙타비딘-퍼옥시다제(streptavidin-peroxidase) 및 비오틴화 티라미드(biotinylated tyramide)를 포함하는 renaissance TSA indirect kit (NEN Life Science, Boston, MA., USA)를 사용하였으며, 단계적인(graded) 에탄올 용액을 통해 물로 수화시킨 후에, 내생적인 퍼옥시다제 활성(endogenous peroxidase activity)을 파괴하기 위해 상기 슬라이드들에 PBS에서 1% H2O2를 실온에서 15 분간 처리하였다. 이후, 20분간 TNT 버퍼(0.1 M Tris-HCl, pH7.4, 0.15 M NaCl 및 0.05% Tween-20)로 세척한 후에, 상기 슬라이드들에 TNB 버퍼(1M Tris-HCl, pH7.4, 0.15 M NaCl 및 0.5% blocking reagent)를 처리하였다. 이후, 상기 조직들은 4℃에서 SOCS6에 대한 1차 항체(1:500) 와 함께 밤새 반응시켰고, 검출은 비오틴화 염소 항-토끼 항체(biotinylated goat anti-rabbit antibody) (Sigma, St.Louis, MO., USA)를 이용하여 수행하였으며, 퍼옥시다제-연결(peroxidase-linked) 아비딘-비오틴 복합체(avidin-biotin complex)와 함께 배양시켰다. 크로모겐(chromogen)으로 디아미노벤지딘(diaminobenzidine)을 사용하였고, 그 후 상기 슬라이드들을 Mayer's hematoxylin으로 대조염색(counterstain)하였다. TMA의 평가는 2명의 병리학자에 의해 독립적으로 이루어졌으며 불일치하는 부분에서는, multi-head microscope을 사용하여 공동으로 TMA를 재평가함으로써 의견 일치를 이루었다. 면역염색(immunostaining)의 강도는 1+ (약), 2+ (중), 및 3+ (강)로 등급화 하였다. 면역염색된 세포들의 수가 10% 미만인 경우에는 그 샘플을 네거티브(negative)로 간주하였으며, 그 결과는 도 2에 나타내었다.
Through the results of Example 2, the present inventors were able to confirm whether SOCS6 expression was significantly reduced in liver cancer tissues compared with normal tissues, and furthermore, immunohistochemical analysis of SOCS6 expression in liver cancer tissues to more clearly verify these results. The analysis was investigated. Six liver cancer tissue slides and one liver cancer tissue microarray were used for immunohistochemical analysis. The slides were boiled with sodium citrate buffer (pH 6.0) for 30 minutes in a microwave to recover the antigen and then cooled for 20 minutes. Signal amplification was performed using a renaissance TSA indirect kit (NEN Life Science, Boston, MA., USA), including streptavidin-peroxidase and biotinylated tyramide. After hydration with water through a graded ethanol solution, the slides were treated with 1% H 2 O 2 in PBS for 15 minutes at room temperature in order to disrupt endogenous peroxidase activity. Thereafter, after washing with TNT buffer (0.1 M Tris-HCl, pH 7.4, 0.15 M NaCl and 0.05% Tween-20) for 20 minutes, the slides were placed in TNB buffer (1 M Tris-HCl, pH 7.4, 0.15 M). NaCl and 0.5% blocking reagent) were treated. The tissues were then reacted overnight with primary antibody (1: 500) against SOCS6 at 4 ° C. and detection was performed with biotinylated goat anti-rabbit antibody (Sigma, St. Louis, MO). , USA) and were incubated with the peroxidase-linked avidin-biotin complex. Diaminobenzidine was used as the chromogen, and the slides were then counterstained with Mayer's hematoxylin. The assessment of TMA was made independently by two pathologists, and in the discrepancy, consensus was reached by jointly reassessing the TMA using a multi-head microscope. The intensity of immunostaining was graded as 1+ (weak), 2+ (medium), and 3+ (strong). When the number of immunostained cells was less than 10%, the sample was considered negative and the results are shown in FIG. 2.

면역조직화학적 염색 분석 결과, 정상적인 간세포(hepatocyte)에서는 세포질에서 강한 양성 염색을 나타내었으나, 간암 조직에서는 음성적이거나 약한 양성 염색을 나타냄을 통해 상기 실시예 2의 결과와 동일하게 정상조직에 비해 간암조직의 경우, SOCS6의 발현이 억제되고 있음을 알 수 있었다.
As a result of immunohistochemical staining, normal hepatocytes showed strong positive staining in the cytoplasm, but liver cancer tissues showed negative or weak positive staining, compared to normal tissues, as in Example 2 above. In this case, it was found that the expression of SOCS6 was suppressed.

따라서 본 발명자들은 상기 결과를 통해 간암 세포에서 특이적으로 SOCS6 유전자의 발현이 감소되는 사실을 최초로 확인함에 따라 SOCS6를 간암 진단을 위한 마커로 사용할 수 있다는 사실 및 SOCS6가 종양 억제 유전자로 작용할 수 있음에 따라 간암의 예방 또는 치료할 수 있다는 사실을 알 수 있었다.Therefore, the present inventors first confirmed that the expression of the SOCS6 gene was specifically reduced in liver cancer cells, and thus, the fact that SOCS6 could be used as a marker for diagnosing liver cancer and SOCS6 could act as a tumor suppressor gene. As a result, it was found that liver cancer could be prevented or treated.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.So far I looked at the center of the preferred embodiment for the present invention. It will be understood by those skilled in the art that various changes in form and details may be made therein without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the appended claims. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in an illustrative rather than a restrictive sense. The scope of the present invention is defined by the appended claims rather than by the foregoing description, and all differences within the scope of equivalents thereof should be construed as being included in the present invention.

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Claims (10)

삭제delete 삭제delete SOCS6 (suppressors of cytokine signaling 6) 유전자를 증폭할 수 있는 프라이머 또는 프로브; 또는 SOCS6 단백질의 수준을 측정하는 물질을 포함하는 간암 진단용 조성물. Primers or probes capable of amplifying the suppressors of cytokine signaling 6 (SOCS6) gene; Or a composition for diagnosing liver cancer comprising a substance for measuring the level of SOCS6 protein. 삭제delete 삭제delete (a) 생물학적 시료에 존재하는 SOCS6(suppressors of cytokine signaling 6) 유전자의 발현양 또는 단백질의 양을 측정하는 단계; 및
(b) 상기 (a) 단계의 측정결과를 정상대조군 시료의 SOCS6 유전자의 발현양 또는 단백질의 양과 비교하는 단계를 포함하는 간암의 예측 및 진단을 위한 정보를 제공하는 방법.(a) measuring the amount of protein or protein expressed in a suppressor of cytokine signaling 6 (SOCS6) gene present in a biological sample; And
(b) comparing the measurement result of step (a) with the amount of SOCS6 gene expression or protein in the normal control sample, and providing information for the prediction and diagnosis of liver cancer. 제6항에 있어서,
상기 생물학적 시료는 조직, 세포, 혈액, 혈청, 혈장, 타액 및 뇨로 이루어진 군 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 간암의 예측 및 진단을 위한 정보를 제공하는 방법.The method according to claim 6,
Wherein said biological sample is selected from the group consisting of tissues, cells, blood, serum, plasma, saliva, and urine. 제6항에 있어서,
상기 측정은 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcriptase-polymerase chain reaction), 실시간 중합효소 연쇄반응(real time-polymerase chain reaction), 웨스턴 블럿, 노던 블럿, ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석(RIA: radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion) 및 면역침전분석법(immunoprecipitation assay)으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 간암의 예측 및 진단을 위한 정보를 제공하는 방법.The method according to claim 6,
The measurement is reverse transcriptase-polymerase chain reaction, real time-polymerase chain reaction, western blot, northern blot, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA). : Method for providing information for the prediction and diagnosis of liver cancer, characterized in that selected from the group consisting of radioimmunoassay, radioimmunodiffusion and immunoprecipitation assay. 제6항에 있어서,
상기 생물학적 시료에서 존재하는 SOCS6 유전자의 발현양 또는 단백질의 양이 대조군에 비해 감소된 경우, 간암이 발병된 것으로 판정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 간암의 예측 및 진단을 위한 정보를 제공하는 방법.The method according to claim 6,
If the amount of expression or protein of the SOCS6 gene present in the biological sample is reduced compared to the control group, the method for providing information for the prediction and diagnosis of liver cancer comprising the step of determining that the liver cancer . 삭제delete
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR101936502B1 (en) * 2016-05-30 2019-01-09 가톨릭대학교 산학협력단 Biomarkers for diagnosis and prognosis of Hepatoma and uses thereof
CN106841615A (en) * 2017-01-25 2017-06-13 贵州省人民医院 For prostate cancer progress and the detection reagent and its kit of Prognosis detection SOCS6

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NCBI Reference Sequence: NM_004232.3, SOCS6(2009.11.22).

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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