KR101184359B1

KR101184359B1 - Composition having antioxidative and growth promoting function which comprises Bacillus subtilis KCTC 11454BP as an active ingredient, and a preparation method thereof

Info

Publication number: KR101184359B1
Application number: KR1020100026003A
Authority: KR
Inventors: 박철수; 우문제; 이상훈; 김진수; 신광순
Original assignee: 광동제약 주식회사
Priority date: 2010-03-23
Filing date: 2010-03-23
Publication date: 2012-09-20
Also published as: KR20110106761A

Abstract

본 발명은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 포함하는 항산화 및 성장촉진용 조성물 및 그 제조방법에 대한 것으로, 본 발명의 조성물은 항산화를 통한 건강증진 및 성장촉진에 유용하다. The present invention relates to an antioxidant and growth promoting composition comprising the antler fermented with Bacillus subtilis KCTC 11454BP as an active ingredient, and a method for preparing the same. The composition of the present invention promotes health and promotes growth through antioxidants. Useful for

Description

Composition having antioxidative and growth promoting function which comprises Bacillus subtilis KCTC 11454BP as an active ingredient, and a preparation method about}

본 발명은 녹용 발효 활성을 갖는 신규한 바실러스 속의 균주로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 포함하는 항산화 및 성장촉진용 조성물 및 그 제조방법에 대한 것이다.
The present invention relates to an antioxidant and growth promoting composition comprising the antler fermented with a novel strain of the genus Bacillus having an antler fermentation activity as an active ingredient and a method for producing the same.

녹용(antler, Cervus cornu parvum)은 매화록(Cervus nippon Temminck) 또는 마록(Cervus elaphus Linnaeus) 및 동속 근연동물의 털이 밀생되고 골질화되지 않은 어린 뿔로 동양의학의 중요 약재로 중국 및 일본 등의 동양권 국가에서 오래 전부터 활용되고 있는 양록산업의 주 생산물이다. 녹용은 전 세계 생산량의 80%를 한국에서 소비한다고 알려져 있는데(Choi et al., 2005), 현재 국내에서 이용되는 녹용(녹각도 포함한다)은 대부분 수입에 의존하고 있으며, 2000년에 의약용으로 녹용 159톤을 수입하여 1,600만 달러가 지출되었고, 국내 생산 생녹용은 75 kg에 불과한 실정이다. 한국은 전세계에서 가장 큰 녹용 수입국으로, 대부분 국내에서 소비되고 있다.
Antler, Cervus cornu parvum ) is a plum blossom ( Cervus) nippon Temminck) or Maroc ( Cervus) elaphus Linnaeus) and the young horns of hairs of the same relatives and dense and unosteolyzed horns are the main products of the Yang Lok industry, which has been used for a long time in oriental countries such as China and Japan. Antlers are known to consume 80% of the world's production in Korea (Choi et. al ., 2005), most of the deer antlers (including rusts) currently used in Korea depend on imports. In 2000, 159 tons of antler were imported for medical purposes, and $ 16 million was spent in domestic production. It is just a kilogram. Korea is the world's largest importer of antler, mostly consumed in Korea.

녹용은 인삼과 더불어 오래 전부터 가장 대표적인 강장 생약재로 한국, 중국, 일본을 중심으로 애용되어 왔으며, 현대에 와서 녹용에는 혈압강하, 조혈기능, 고콜레스테롤 혈증 개선, 항스트레스 효과가 있다는 것이 밝혀지고 있다(Kim and Park, 1982; Yong, 1976; Han 1970; Kang and Kim, 1989). 인삼, 녹용과 같이 강장효과를 가진 생약재의 약성은 특정 장기에만 선택적으로 작용하여 강한 효과를 나타내는 것이 아니라 비록 그 효과는 단일 성분 의약품에 비해 약하나 신체 전반에 걸쳐 복합적으로 효능을 나타내는 것이 특징이다(Kim et al., 1994).
Deer antler, along with ginseng, has long been used as the most representative tonic herb, mainly in Korea, China and Japan.In modern times, antler has been found to have lower blood pressure, hematopoietic function, hypercholesterolemia, and antistress effect. Kim and Park, 1982; Yong, 1976; Han 1970; Kang and Kim, 1989). Weaknesses of herbal medicines with tonic effects such as ginseng and antler are not only effective on specific organs, but they are not as strong as they are. et al ., 1994).

최근들어 녹용의 생리활성 성분에 대한 활발한 연구가 진행되고 있는데, 녹용 추출물은 면역기능 증진, 항산화, 항피로, 항혈전, 항노화, 혈압강하, 항염증작용 등 매우 다양한 효능이 있는 것으로 보고되었다(Cho 등, 2005).
Recently, active studies on the bioactive components of deer antler have been conducted.The deer antler extract has been reported to have various effects such as immune function enhancement, antioxidant, anti-fatigue, antithrombosis, anti-aging, lowering blood pressure, and anti-inflammatory action. Cho et al., 2005).

그러나, 녹용은 설사 등의 부작용이 있어, 한방에서 수렴작용이 있는 한약과 병용하여 사용하게 되며, 이 경우 기대했던 효과가 상실되거나 감소될 수 있다. 또한, 한방의 유용한 자원인 녹용은 한약에 이용하기 위해 알코올에 담근 후, 이를 세절하여 사용하게 되는데, 이 과정에서 녹용의 많은 유효성분이 소실되는 문제점이 있다.
However, deer antler has side effects such as diarrhea, and can be used in combination with herbal medicine with astringent action in herbal, in which case the expected effect may be lost or reduced. In addition, antler, which is a useful resource of oriental medicine, is dipped in alcohol for use in Chinese medicine, and then used in small pieces. There is a problem in that many active ingredients of antler are lost in this process.

한편, 녹용을 바실러스 속 균주 등을 이용하여 발효시킬 경우, 항피로, 간보호 및 설사억제 효과가 우수한 녹용 발효물이 얻어질 수 있다는 것이 공지된 바 있다.On the other hand, when the antler is fermented using a strain of the genus Bacillus, it has been known that an antler fermented product excellent in anti-fatigue, liver protection and diarrhea inhibitory effect can be obtained.

대한민국 등록특허 제 206, 182호는 동물의 장 내용물 또는 신선한 변으로부터 분리된, 녹용분해 활성을 갖는 바실러스 속 Py-92균주(KCTC 0049BP)를 개시한 바 있다(생약학회지 1994; 25: 233-237, 약학회지 12994; 38:795-799). 또한 대한민국 특허공개 제 10-2006-0128117호는 바실러스 Py-92 균주로 발효한 녹용 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증강, 장기능 강화, 암예방 및 치료용 약학 조성물을 개시하고 있다. Republic of Korea Patent No. 206, 182 discloses Bacillus genus Py-92 strain (KCTC 0049BP) having antlerogenic activity, isolated from the intestinal contents or fresh stools of the animal (Journal of Biopharmaceuticals 1994; 25: 233-237 , Journal of Pharmacy 12994; 38: 795-799). In addition, Korean Patent Publication No. 10-2006-0128117 discloses a pharmaceutical composition for immuno-enhancing, intestinal function, cancer prevention and treatment containing the antler extract fermented with Bacillus Py-92 strain as an active ingredient.

그러나 바실러스 속 Py-92 균주(KCTC 0049BP) 등을 이용하여 녹용을 발효시킬 경우 수득된 녹용 발효물 내 유효성분의 함량이 적고, 녹용 발효물의 약리활성이 불충분한 단점이 있었다.
However, when fermenting the antler using a Bacillus Py-92 strain (KCTC 0049BP), etc., the content of the active ingredient in the obtained antler fermentation was low, and the pharmacological activity of the antler fermentation was insufficient.

한편, 간은 호흡과정을 통하여 생존을 위해 필수불가결한 에너지를 얻게 된다. 호흡이란 간단히 말해 체외로부터 산소를 받아들이고 체내의 축적된 탄산가스를 배출하는 과정인데, 받아들여진 산소는 세포내의 미토콘드리아에서 NADH로부터 전자를 전달받아 물로 전환되는 전자전달계를 거치게 되고 그 결과 생성된 ATP를 통해 세포 내에 에너지를 공급하게 된다. 그런데 생물체의 호흡에 따라 이루어지는 산소환원과정의 부산물로서 독성을 나타내는 중간 대사산물이 생성될 수 있다. 이러한 과정에서 생성된 매우 불안정한 성질을 가진 물질을 통틀어서 프리라디칼(free radical)이라고 한다On the other hand, the liver gains indispensable energy for survival. Respiration is simply the process of receiving oxygen from the body and releasing accumulated carbon dioxide in the body. The oxygen is passed through an electron transport system that receives electrons from NADH in the mitochondria of the cell and converts them into water. It provides energy to the cells. However, as a byproduct of the oxygen reduction process caused by the breathing of organisms, intermediate metabolites that are toxic may be produced. The highly unstable substances produced during this process are called free radicals.

프리라디칼은 자유기, 활성산소, 또는 유해독성산소라는 말로도 사용되는데 이들은 넓은 의미에서 비슷한 말이다. 우리 몸 속은 여러 물질이 서로 짝을 못 이룬 물질이 만들어지므로 자연히 프리라디칼의 종류도 여러 가지가 된다. Free radicals are also used to refer to free radicals, free radicals, or harmful toxic oxygen, which are similar in a broad sense. There are many kinds of free radicals in our bodies because they are made of substances that are not paired with each other.

예를 들어 안정된 구조를 가진 단백질이 어떤 이유로 불안정한 전자구조를 가진 물질이 생기면 이를 단백질라디칼이라고 한다. 산소가 주성분이 되어 짝을 못 이룬 전자를 가진 물질이 만들어지면 이를 산소라디칼이라고 한다. 산소라디칼을 우리말로 번역하면 활성산소가 된다. 여러 가지 프리라디칼 중에서 인체 내에서 가장 흔하게 많이 생기며 주목을 받아온 것이 바로 활성산소이다. For example, if a protein with a stable structure produces a substance with an unstable electronic structure for some reason, it is called a protein radical. When oxygen is the main component and a substance is created with unpaired electrons, it is called oxygen radical. When oxygen radicals are translated into Korean, they become free radicals. Among various free radicals, free radicals are the most commonly occurring in the human body and have attracted attention.

대표적인 활성산소의 종류로는 슈퍼옥사이드라디칼(Superoxide 라디칼(O₂)), 하이드록시라디칼(hydroxy 라디칼(HO?), 과산화수소(hydrogen peroxide(H₂O₂)) 및 일중항산소(singlet oxygen(1O₂))등이 있는데, 이들 활성산소는 세포구성 성분들인 지질, 단백질, 유전자 등에 대하여 비선택적, 비가역적인 산화반응을 유발하여 면역체계를 파괴함으로써 노화 및 각종 질병을 일으키는 것으로 밝혀졌다(Blake and Winyard, 1995; Lopaczynski and Zeissel, 1995). 활성산소는 정상적인 세포 대사과정에서도 일부 생성되고 있으며 체내에서는 각종 항산화효소와 항산화물질로 이를 제어하고 있다(Cook and Samman, 1996). 그러나 현대생활에서는 각종 환경요인에 의하여 과량의 활성산소가 생성되어 인체 내의 항산화물질은 부족한 상태이며, 이로 인해 각종 질병과 노화가 유발된다. 항산화물질은 식품산업, 의약산업, 화장품산업 등 다양한 분야에서 이용될 수 있기 때문에 국가 경제 산업적 측면에서 매우 큰 파급효과를 기대할 수 있다(Namiki, 1990). 따라서 발효녹용의 라디칼 소거능은 유리 라디칼이 원인이되는 질병을 예방할 수 있는 효과를 기대할 수 있다.
Representative active oxygen species include superoxide radicals (O ₂ ), hydroxy radicals (HO ? ), Hydrogen peroxide (H ₂ O ₂ ), and singlet oxygen (10 O). ₂ )), etc. These free radicals have been shown to cause aging and various diseases by destroying the immune system by inducing non-selective and irreversible oxidation reactions for cell components such as lipids, proteins and genes (Blake and Winyard). Lopaczynski and Zeissel, 1995) .Active oxygen is also produced in normal cell metabolism and is regulated by various antioxidant enzymes and antioxidants in the body (Cook and Samman, 1996). Excessive free radicals are generated by the human body, and the antioxidants in the human body are deficient, which causes various diseases and aging. As it can be used in various fields such as food industry, medicine industry and cosmetics industry, it can be expected to have a very large ripple effect in terms of national economic industry (Namiki, 1990). You can expect the effect to prevent.

산소 유리기(oxygen free 라디칼)는 산소를 이용하여 생존하는 세포 내에서 생성되는 독성이 강한 물질로서 세포의 DNA나 세포막 지질 및 단백질 등을 손상시키므로 세포 내에서는 superoxide dismutase(SOD), catalase, glutathione peroxidase 등의 항산화 효소와 glutathione, uric acid 등의 여러 가지 비효소적 항산화 물질이 있어 산소 유리기에 의한 산화적 손상으로부터 각종 세포 구조물을 보호한다. SOD는 유리산소를 H₂O₂와 O₂로 전환시키며, 생성된 H₂O₂ catalase와 glutathione peroxidase에 의해 소거되는데 glutathione peroxidase는 환원형 glutathione(GSH)을 산화형 glutathione (GSSG)으로 산화 시키면서 H₂O₂를 제거하며 GSSG 는 glutathione reductase에 의해 다시 GSH로 환원되어 인체 내에서 glutathione은 GSH와 GSSG의 두 가지 형태로 균형을 이루면서 존재하게 된다. 만약 세포 내에 독성 또는 산화적 손상이 일어난 경우에는 GSSG가 서서히 증가하게 되어 GSH/GSSG의 불균형을 초래하게 되어 방어 기전으로서의 역할이 소실된다. GSH는 산소유리기에 의한 세포 손상을 방지하고 세포 내 해독 작용을 담당하는 중요한 물질로 여겨지고 있다. 따라서 건강한 개체의 세포는 산화적 세포손상을 일으킬 수 있는 산소 유리기를 소거하는 방어기전에 의해서 충분히 보호받을 수 있다(De Haan et al., 1995).
Oxygen free radicals are highly toxic substances produced in living cells by using oxygen. They damage DNA, cell membrane lipids, and proteins of cells, and therefore, superoxide dismutase (SOD), catalase, glutathione peroxidase, etc. There are several non-enzymatic antioxidants such as antioxidant enzymes, glutathione and uric acid, which protect various cell structures from oxidative damage caused by oxygen free radicals. SOD converts free oxygen into H ₂ O ₂ and O ₂ , and is eliminated by the produced H ₂ O ₂ catalase and glutathione peroxidase. Glutathione peroxidase oxidizes reduced glutathione (GSH) to oxidized glutathione (GSSG). ₂ O ₂ is removed and GSSG is reduced back to GSH by glutathione reductase, so that glutathione exists in the human body in balance between GSH and GSSG. If toxic or oxidative damage occurs in the cells, the GSSG gradually increases, leading to an imbalance of GSH / GSSG, which loses its role as a defense mechanism. GSH is considered to be an important substance that prevents cellular damage caused by oxygen free radicals and is responsible for intracellular detoxification. Thus, cells in healthy individuals can be sufficiently protected by a defense mechanism that eliminates oxygen free radicals that can cause oxidative cellular damage (De Haan et al., 1995).

성장 호르몬(Growth Hormone)은 성장과 밀접한 연관성이 있다. 유아, 어린이 및 청소년의 정상적인 발육을 위해 요구되는 내분비 요인 중 성장호르몬(GH)은 말초에서 지질, 탄수화물, 단백질 대사에 작용하여 성장에 영향을 미치며, IGF-1(insulin like growth factor-1)의 합성과 분비에 많은 영향을 미친다 (Campbell and Andress, 1997). IGF-1은 성장호르몬(growth hormone)과 관련 깊은 성장인자로 성장호르몬의 자극을 받은 뇌하수체 전엽에서 분비한다. IGF-1은 특히 성장판에서의 연골세포 증식에 영향을 미치는 것으로 알려져 있다(Gerard and Sandra, 2003). 또한 성장호르몬의 발현 기제에도 관여하여 성장호르몬의 발현과정을 조절하며 인체 대부분의 장소에서 세포의 분화(differentiation)와 증식(proliferation), 성숙(maturation)을 조절한다(Scriver et al., 1995).Growth Hormone is closely related to growth. Growth hormone (GH), which is required for the normal development of infants, children and adolescents, affects growth by acting on lipid, carbohydrate, and protein metabolism in the periphery, and the effect of IGF-1 (insulin like growth factor-1) It has a great effect on synthesis and secretion (Campbell and Andress, 1997). IGF-1 is a profound growth factor associated with growth hormone, which is secreted from the anterior pituitary gland stimulated by growth hormone. IGF-1 is known to affect chondrocyte proliferation, particularly in growth plates (Gerard and Sandra, 2003). It is also involved in the mechanism of expression of growth hormone, which regulates the expression of growth hormone and regulates the differentiation, proliferation and maturation of cells in most places of the human body (Scriver et. al ., 1995).

대부분의 호르몬과는 다르게 IGF-1은 여러조직에서 합성되며, 간이 주요 생산지로 간에 있는 성장호르몬 수용체는 IGF-1 m-RNA의 농도를 조절한다. IGF-1은 성장호르몬(growth hormone)과 관련 깊은 성장인자로 성장호르몬의 자극을 받은 뇌하수체 전엽에서 분비한다. IGF-1은 특히 성장판에서의 연골세포 증식에 영향을 미치는 것으로 알려져 있다(Gerard and Sandra, 2003). 또한 성장호르몬의 발현 기제에도 관여하여 성장호르몬의 발현과정을 조절하며 인체 대부분의 장소에서 세포의 분화(differentiation)와 증식(proliferation), 성숙(maturation)을 조절한다(Scriver et al., 1995).Unlike most hormones, IGF-1 is synthesized in many tissues, and the liver's primary production site, the growth hormone receptors in the liver regulate the concentration of IGF-1 m-RNA. IGF-1 is a profound growth factor associated with growth hormone, which is secreted from the anterior pituitary gland stimulated by growth hormone. IGF-1 is known to affect chondrocyte proliferation, particularly in growth plates (Gerard and Sandra, 2003). It is also involved in the mechanism of expression of growth hormone, which regulates the expression of growth hormone and regulates the differentiation, proliferation and maturation of cells in most places of the human body (Scriver et. al ., 1995).

IGF-1은 조직의 성장과 발달 기능에 중요한 역할을 하며, 근모세포를 증식시키고 근세포 분화를 촉진 시키며, 연골의 성장과 세포증식, 분화에도 작용한다(Florini등, 1986). 출생 전에는 성장호르몬 보다는 IGF-I과 IGF-II가 길이 성장에 더 중요하다(Woods et al., 1996). 출생 후에는 길이 성장에 IGF-I과 함께 성장호르몬이 중요한 역할을 차지한다.
IGF-1 plays an important role in tissue growth and developmental function, proliferates myoblasts, promotes myocyte differentiation, and contributes to cartilage growth, cell proliferation and differentiation (Florini et al., 1986). Before birth, IGF-I and IGF-II are more important for length growth than growth hormone (Woods et. al ., 1996). After birth, growth hormone plays an important role in IGF-I growth.

ALP는 파골세포에서 분비되는 당단백질로 임상에서 가장 흔히 이용되는 골형성 지표이다. 골연화증, 파젯병, 신성 골이영양증, 일차성 부갑상선기능 항진증 등의 진단과 치료경과 추적에 유용한 검사로 50년 이상 널리 사용되어 왔다(Duda et al., 1988). 연령증가에 따라 ALP는 증가하는 경향이 있다. ALP 외 골형성지표에는 총알칼리성 포스파타제(total alkaline phosphatase, ALP), 골특이성 알칼리성 포스파타제(bone specific alkaline phosphatase, BALP), OC, PICP 등이 있으며, 최근 BALP의 사용이 증가하고 있다.
ALP is a glycoprotein secreted by osteoclasts and is the most commonly used bone formation indicator in the clinic. It has been widely used for more than 50 years as a useful test for the diagnosis and treatment of osteomalacia, Paget's disease, osseous dystrophy and primary hyperparathyroidism (Duda et al ., 1988). As age increases, ALP tends to increase. In addition to ALP, bone formation indicators include total alkaline phosphatase (ALP), bone specific alkaline phosphatase (BALP), OC and PICP, and the use of BALP has recently increased.

성장판(growth plate)은 장골의 양단에 위치해 있는 수평적으로 정형화된 구조를 지닌 연골세포집단으로서 뼈몸 통끝(metaphysis)과 뼈끝(epiphysis) 사이에 위치하고 있다(Hunziker, 1994). 성장판 내 연골세포(chondrocyte)의 증식, 비대(hypertrophy), 세포외간질(extracellular matrix) 분비, 혈관과 골전구세포의 침입과 이에 따른 골화(ossification) 과정을 거쳐 결국 연골이 골로 변화하게 되는 연골내 골화(endochondral ossification) 과정을 거치면서, 성장판의 뼈몸통끝 부위에 새로운 골이 지속적으로 형성되고, 이에 따라 장골의 길이가 길어지게 된다. 성장판은 성장호르몬, 인슐린양 성장인자(insulin-like growth factor, IGF), 갑상샘호르몬, 성호르몬, 글루코코르티코이드 등의 호르몬(Robson et al., 2002)과 여러 시토카인에 의해 조절을 받으며, 결국 사춘기 후에 골화되면서 주위 뼈와 융합된다.
The growth plate is a group of cartilage cells with a horizontally-structured structure located at both ends of the iliac bone, located between the bone metaphysis and the epiphysis (Hunziker, 1994). In the cartilage where the cartilage turns into bone through the proliferation of chondrocytes, growth of hypertrophy, extracellular matrix secretion, invasion of blood vessels and bone precursor cells and ossification. During the course of endochondral ossification, new bone is continuously formed at the end of the bony trunk of the growth plate, thereby lengthening the long bone. Growth plates include hormones such as growth hormone, insulin-like growth factor (IGF), thyroid hormone, sex hormone, and glucocorticoids (Robson et al. al ., 2002) and several cytokines, which eventually become ossified and fuse with surrounding bones.

이에, 본 발명자들은 발효녹용의 유효성분 효율을 높이고 새로운 약리작용을 일으키기 위하여, 녹용을 발효시킬 수 있는 바실러스 속 미생물을 분리하고자 본 연구를 수행한 결과, 된장으로부터 새롭게 분리한 균주인 바실러스 서브틸리스(Bacilllus subtilis) KCTC 11454BP로 녹용을 발효시킬 경우 종래의 바실러스 서브틸리스 균주에 비하여 발효추출물의 수율이 훨씬 높고 유효성분의 함량을 크게 증가시킬 수 있다는 것을 발견하였다.
Thus, the present inventors conducted the present study to isolate the microorganisms of Bacillus that can ferment the antler, in order to increase the effective component efficiency of fermented antler and cause new pharmacological action, Bacillus subtilis, a strain newly isolated from doenjang (Bacilllus subtilis) When the antler was fermented with KCTC 11454BP, it was found that the yield of fermented extract is much higher than that of the conventional Bacillus subtilis strain and the content of the active ingredient can be greatly increased.

또한 상기 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 로 발효시킨 녹용 발효물에 대하여 연구를 계속한 결과, 상기 녹용 발효물이 자유 라디칼 소거능이 높고 환원형 글루타티온 함량을 증가시킨다는 것을 알아내었으며, 상기 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용 발효물이 성장호르몬 및 ALP 등을 증가시킴으로써, 성장촉진 효과가 있다는 것을 확인하였다.
In addition, as a result of continuing the study on the antler fermentation fermented with the Bacillus subtilis KCTC 11454BP, it was found that the antler fermentation has a high free radical scavenging ability and increases the reduced glutathione content, the Bacillus subtilis KCTC It was confirmed that the antler fermented product fermented with 11454BP increased growth hormone, ALP, and the like, and had a growth promoting effect.

본 발명의 목적은 항산화 및 성장촉진용 조성물을 제공하는 것이다. It is an object of the present invention to provide an antioxidant and growth promoting composition.

또한 본 발명의 목적은 항산화 및 성장촉진용 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.
It is also an object of the present invention to provide a method for preparing an antioxidant and growth promoting composition.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 항산화 및 성장촉진용 조성물을 제공한다. 또한 본 발명은 녹용을 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시키는 단계를 포함하는 항산화 및 성장 촉진용 조성물의 제조방법을 제공한다.
In order to achieve the above object, the present invention provides an antioxidant and growth promoting composition containing the antler fermented with Bacillus subtilis KCTC 11454BP as an active ingredient. The present invention also provides a method for producing an antioxidant and growth promoting composition comprising the step of fermenting the antler with Bacillus subtilis KCTC 11454BP.

본 발명의 바실러스 서브틸리스 KCTC 111454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 조성물은 항산화 활성 및 성장촉진 기능을 갖는다. 그러므로 본 발명의 조성물을 포함하는 식품 조성물 및 약학적 조성물은 항산화를 통한 노화 방지, 건강증진에 도움이 되며 성장기 어린이의 성장촉진에 효과가 있다.
The composition containing the deer antler fermented with Bacillus subtilis KCTC 111454BP of the present invention as an active ingredient has antioxidant activity and growth promoting function. Therefore, the food composition and the pharmaceutical composition comprising the composition of the present invention is helpful for anti-aging and health promotion through antioxidants, and is effective for promoting growth of growing children.

도 1은 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP의 현미경 관찰 사진이다.
도 2는 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물의 S-GAG 및 sialic acid 함량 변화를 나타낸다.
도 3은 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물의 총 당 및 uronic acid 함량 변화를 나타낸다.
도 4는 본 실험에서 측정한 3주령 SD 래트의 경골 및 경골 성장판의 부위를 나타낸다. 1 is a microscopic picture of Bacillus subtilis KCTC 11454BP.
Figure 2 shows the change in S-GAG and sialic acid content of Bacillus subtilis KCTC 11454BP antler fermentation.
Figure 3 shows the total sugar and uronic acid content changes of Bacillus subtilis KCTC 11454BP antler fermentation.
Figure 4 shows the sites of the tibia and tibial growth plate of three-week-old SD rats measured in this experiment.

본 발명은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 성장촉진용 및/또는 항산화 조성물을 제공한다.
The present invention provides growth promoting and / or antioxidant compositions containing antler, fermented with Bacillus subtilis KCTC 11454BP, as an active ingredient.

또한 본 발명은 녹용에 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP를 접종하여 발효시키는 단계를 포함하는 성장촉진용 및/또는 항산화 조성물의 제조방법을 제공한다.
In another aspect, the present invention provides a method for producing a growth promoting and / or antioxidant composition comprising the step of inoculating Bacillus subtilis KCTC 11454BP by fermentation.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 녹용을 발효시키는 경우에 있어서, 상기 녹용은 녹용 또는 녹각이 될 수 있으며, 국산, 일본, 러시아, 중국, 미국, 캐나다 등 녹용의 산지는 어느 것이든 무방하다. 상기 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시 녹용은 분말 또는 추출액의 형태로 발효될 수 있다.
In the case of fermenting the antler with Bacillus subtilis KCTC 11454BP of the present invention, the antler may be antler or antler, and the origin of antler, such as domestic, Japan, Russia, China, USA, Canada, etc. It may be anything. When the Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) KCTC 11454BP fermented antler may be fermented in the form of powder or extract.

본 발명의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 성장촉진 및/또는 항산화 조성물은 식품 조성물, 화장료 조성물 또는 약학적 조성물이 될 수 있다.
The growth promoting and / or antioxidant composition containing the antler fermented with Bacillus subtilis KCTC 11454BP of the present invention as an active ingredient may be a food composition, a cosmetic composition or a pharmaceutical composition.

본 발명의 항산화용 식품 조성물 및/또는 약학적 조성물은 체내 활성산소를 제거함으로써, 체내 지방, 콜레스테롤과 활성산소가 반응하여 과산화지질을 생성하는 것을 저해하고, 이로써, 과산화지질이 혈전, 색전을 생성하는 것을 예방할 수 있다. 또한 본 발명의 항산화 식품 조성물 및/또는 약학적 조성물은 활성산소를 제거함으로써, 활성산소과 관련된 혈전, 색전, 과산화지질로 인한 혈액순환장애, 뇌졸중, 중풍, 뇌혈전, 심근경색, 동맥경화를 예방 및 치료하고, 활성산소에 의한 DNA, 세포, 조직의 변성을 저해함으로써, 아토피, 알레르기, 종양, 관절염, 백내장, 피부종양을 예방 및 치료하며, 노화진행을 저해한다.
The antioxidant food composition and / or pharmaceutical composition of the present invention removes free radicals from the body, thereby inhibiting the reaction of fat, cholesterol and free radicals in the body to produce lipid peroxide, whereby the lipid peroxide generates blood clots and embolism. You can prevent it. In addition, the antioxidant food composition and / or pharmaceutical composition of the present invention removes free radicals, thereby preventing blood circulation disorder, stroke, stroke, cerebral thrombosis, myocardial infarction, arteriosclerosis due to thrombus, embolism and lipid peroxide associated with active oxygen and By treating and inhibiting the degeneration of DNA, cells and tissues by free radicals, it prevents and treats atopy, allergy, tumor, arthritis, cataract and skin tumor, and inhibits the aging process.

또한 본 발명의 성장촉진용 식품 조성물 및/또는 약학적 조성물은 성장부진, 발육부진, 체력저하, 저체중을 개선 및/또는 치료한다. 그러므로 본 발명의 성장촉진용 식품 조성물 및 약학적 조성물은 성장부진 개선제로 이용될 수 있으며 소아 영양실조 등에 사용될 수 있다.
In addition, the growth-promoting food composition and / or pharmaceutical composition of the present invention improves and / or treats growth slowness, stunting, stamina, low body weight. Therefore, the growth promoting food composition and pharmaceutical composition of the present invention can be used as a growth slowing agent and can be used in pediatric malnutrition.

본 발명의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 항산화 및/또는 성장촉진용 약학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 바람직한 약제학적 제제는 정제, 경질 또는 연질 캅셀제, 액제, 현탁제 등과 같은 경구투여용 제제가 있으며 이들 약제학적 제제는 약제학적으로 허용 가능한 통상의 담체, 예를 들어 경구투여용 제제의 경우에는 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 가용화제, 현탁화제, 보존제 또는 증량제 등을 사용하여 조제할 수 있다.
Antioxidant and / or growth promoting pharmaceutical compositions containing antler, fermented with Bacillus subtilis KCTC 11454BP of the present invention as an active ingredient, can be administered orally or parenterally and can be used in the form of general pharmaceutical preparations. have. Preferred pharmaceutical preparations include oral preparations such as tablets, hard or soft capsules, solutions, suspensions and the like, which can be used in the form of excipients in conventional pharmaceutically acceptable carriers such as oral preparations, Binders, disintegrants, lubricants, solubilizers, suspending agents, preservatives or extenders can be used.

본 발명의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 항산화 및/또는 성장촉진용 약학적 조성물의 투여 용량은, 환자의 상태, 연령, 성별 및 합병증 등의 다양한 요인에 따라 전문가에 의해 결정될 수 있지만 일반적으로는 성인 1kg 당 0.1㎎ 내지 10g, 바람직하게는 10 mg 내지 1g의 용량으로 투여될 수 있다. 또, 단위 제형당 상기 약학적 조성물의 1일 용량 또는 이의 1/2, 1/3 또는 1/4의 용량이 함유되도록 하며, 하루 1 내지 6 회 투여될 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
The dosage of the antioxidant and / or growth promoting pharmaceutical composition containing the antler, fermented with Bacillus subtilis KCTC 11454BP of the present invention as an active ingredient, may vary depending on the condition, age, sex and complications of the patient. Depending on the factor, it may be determined by a specialist but can generally be administered at a dose of 0.1 mg to 10 g, preferably 10 mg to 1 g per kg of adult. In addition, it is intended to contain a daily dose of the pharmaceutical composition or a dose of 1/2, 1/3 or 1/4 thereof per unit dosage form, and may be administered 1 to 6 times a day. However, in the case of long-term intake for health and hygiene or health control, the amount may be below the above range, and the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety.

본 발명의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 항산화 및/또는 성장촉진용 식품 조성물은 건강기능식품, 건강보조식품, 기능성식품 또는 영양제 등이 될 수 있으나 이들에 제한되는 것은 아니다. 상기 식품 조성물은 상기 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 포함하는 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 조성물과 함께 사용될 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 식품 조성물은 식품 또는 음료의 제조시에 원료에 대하여 0.01 내지 70 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 60 중량%의 양으로 첨가될 수 있다. 식품 조성물에 있어서, 상기 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용의 유효용량은 상기 약학적 조성물의 유효용량에 준해서 사용할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.Antioxidant and / or growth promoting food composition containing the antler fermented with Bacillus subtilis KCTC 11454BP of the present invention as an active ingredient may be a dietary supplement, a dietary supplement, a functional food, or a nutrient. It is not limited to these. The food composition may be used as it is, or may be used in combination with other food or food compositions, or may be appropriately used in accordance with conventional methods, including a composition including antler fermented with Bacillus subtilis KCTC 11454BP. The amount of the active ingredient to be mixed can be suitably determined according to its intended use (prevention, health or therapeutic treatment). In general, the food composition of the present invention may be added in the amount of 0.01 to 70% by weight, preferably 0.01 to 60% by weight based on the raw materials in the manufacture of food or beverage. In the food composition, the effective dose of the deer antler fermented with Bacillus subtilis KCTC 11454BP may be used in accordance with the effective dose of the pharmaceutical composition, but for long-term health and hygiene purposes or health control purposes In the case of ingestion may be below the above range, the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 항산화 및 성장촉진용 조성물을 포함하는 식품 조성물은 정제, 경질 또는 연질 캅셀제, 액제, 현탁제 등과 같은 경구투여용 제제의 형태로 이용될 수 있으며, 이들 제제는 허용 가능한 통상의 담체, 예를 들어 경구투여용 제제의 경우에는 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 가용화제, 현탁화제, 보존제 또는 증량제 등을 사용하여 조제할 수 있다.There is no particular limitation on the kind of the food. The food composition comprising an antioxidant and growth promoting composition containing the antler fermented with Bacillus subtilis KCTC 11454BP as an active ingredient is an oral preparation such as tablets, hard or soft capsules, solutions, suspensions and the like. These preparations can be used in the form of a conventional acceptable carrier, for example, for oral preparations, excipients, binders, disintegrants, lubricants, solubilizers, suspending agents, preservatives or extenders, etc. I can prepare it.

상기 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 항산화 및/또는 성장촉진용 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등을 들 수 있으나 이들 종류의 식품으로 제한되는 것은 아니다.
Examples of foods to which the antioxidant and / or growth promoting composition containing the antler fermented with Bacillus subtilis KCTC 11454BP as an active ingredient may be added to meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, Confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, dairy products, including ice cream, various soups, beverages, tea, drinks, alcoholic beverages and vitamin complexes, and the like, but is not limited to these kinds of food.

본 발명의 항산화용 화장료 조성물의 제조 방법에 있어서, 화장품 제조에 허용되는 담체로는 본 발명의 화장료 조성물의 제형에 따라 다를 수 있다. 본 발명의 제형으로는 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 비누, 샴푸, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 리퀴드 파운데이션, 크림 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으며, 본 발명의 항산화용 화장료 조성물은 보다 상세하세는 유연 화장수(스킨, 토너), 수렴 화장수, 영양 화장수(로션), 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 젤, 피부 접착용 패치, 파우더, 피부외용연고, 첩포제, 현탁액, 에멀젼 스프레이, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 위터, 팩, 헤어 에센스 또는 미용액 등의 통상의 화장료 형태로 제조될 수 있다.In the method for producing an antioxidant cosmetic composition of the present invention, the carrier that is acceptable for cosmetic production may vary depending on the formulation of the cosmetic composition of the present invention. Formulations of the present invention may be formulated into solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, soaps, shampoos, surfactant-containing cleansing, oils, powder foundations, liquid foundations, cream foundations, sprays, and the like. , The antioxidant cosmetic composition of the present invention in more detail flexible skin lotion (skin, toner), astringent lotion, nutrition lotion (lotion), nutrition cream, massage cream, essence, gel, skin adhesive patch, powder, skin external ointment , Cosmetic agents, suspensions, emulsion sprays, eye creams, cleansing creams, cleansing foams, cleansing butters, packs, hair essences or cosmetics.

상기 본 발명의 제조방법에 의해 제조된 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤의 경우 담체 성분으로는 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라킨트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 바람직하다.
When the formulation of the cosmetic composition prepared by the method of the present invention is a paste, cream or gel, the carrier component is animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, trachant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite , Silica, talc or zinc oxide and the like are preferred.

상기 본 발명의 제조방법에 의해 제조된 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우 담체 성분으로는 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용될 수 있으며, 그의 예로서는 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤젠 알코올, 벤젠 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 바람직하다.
When the formulation of the cosmetic composition prepared by the method of the present invention is a solution or emulsion, a carrier, a solvating agent or an emulsifying agent may be used as a carrier component, and examples thereof include water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, and ethyl. Preference is given to acetates, benzene alcohols, benzene benzoates, propylene glycols, 1,3-butylglycol oils, glycerol aliphatic esters, fatty acid esters of polyethylene glycol or sorbitan.

상기 본 발명의 제조방법에 의해 제조된 화장료 조성물의 제형이 현탄액의 경우 담체 성분으로는 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 바람직하다.
When the formulation of the cosmetic composition prepared by the method of the present invention is a suspension, the carrier component is water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, aluminum metahydroxy, bentonite, Agar or tracant and the like are preferable.

상기 본 발명의 제조방법에 의해 제조된 화장료 조성물의 제형이 계면 활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로는 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤. 지방산 에스테르 등이 바람직하다
When the formulation of the cosmetic composition prepared by the preparation method of the present invention is a surfactant-containing cleansing, the carrier component may be aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, Methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amide ether sulfate, alkylamidobetaine, fatty alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives or ethoxylated glycerol. Fatty acid esters and the like are preferred.

이하, 본 발명을 다음의 실시예 및 실험예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 발명의 범위가 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail by the following examples and experimental examples. However, the following examples and experimental examples are intended to illustrate the contents of the present invention, but the scope of the invention is not limited by the examples and the experimental examples.

<실시예 1> 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 11454BP의 분리Example 1 Isolation of Bacillus subtilis KCTC 11454BP

1. 된장으로부터 균주의 분리1. Isolation of Strains from Doenjang

된장을 일반 배지(nutrient agar) 및 선택 배지(nutrient agar 배지에 NaCl을 첨가하여 선택배지를 만들어 배양)에 각각 도말하여 배양한 다음 콜로니를 성상별로 분리하여 하기에 기재된 방법에 의하여 분리하였다.
Doenjang was plated and cultured in a general medium (nutrient agar) and selection medium (addition of NaCl to the nutrient agar medium to make a selective medium), and then colonies were separated by properties and separated by the method described below.

2. 균주의 배양2. Cultivation of Strains

가. 녹용 분말 고체 배지에서의 배양end. Culture in Deer Antler Powder Solid Medium

녹용분말 4g에 증류수 200 ml를 가하여 현탁한 후 agar 4 g을 가하여 121 ℃에서 15분간 고압 멸균하여 페트리 디쉬에 담아 rhp 배지로 사용하여 상기 된장으로부터 분리한 바실러스 속 14 종의 균주들을 각각 도말하여 30 ℃에서 2일간 배양하면서 균주의 성장 여부를 확인하였다.
4 g of antler powder was suspended in 200 ml of distilled water, and then agar 4 g were added and autoclaved at 121 ° C. for 15 minutes in petri dishes and used as a rhp medium to separate 14 strains of Bacillus sp. The growth of the strain was confirmed while incubating at 2 ° C. for 2 days.

나. 녹용 추출물 함유 고체배지에서의 배양I. Cultivation in Solid Medium containing Deer Antler Extract

녹용 10 g에 증류수 200 ml를 가하여 100 ℃에서 3시간 환류 추출하였다. 원심분리하여 추출액을 회수하였으며, 원심분리에 의하여 얻은 침전에 증류수 150 ml를 가하여 2차 환류 추출하였다. 원심분리에 의하여 얻은 2차 환류 추출액과 1차 추출액과 혼합 농축하여 농축액(7.5 birx) 80 ml를 얻었다. 농축 추출액 80 ml에 증류수 120 ml와 agar 4 g을 가하여 121 ℃에서 15분간 고압 멸균하여 petri-dish에 담아 고체 배지로 사용하여 상기 된장으로부터 분리한 바실러스 속 14종의 균주들을 각각 도말하여 30 ℃에서 2일간 배양하면서 균주의 성장 여부를 확인하였다.
200 ml of distilled water was added to 10 g of deer antler, and the mixture was extracted under reflux at 100 ° C for 3 hours. The extract was recovered by centrifugation, and 150 ml of distilled water was added to the precipitate obtained by centrifugation, followed by secondary reflux extraction. The mixture was concentrated with the secondary reflux extract and the primary extract obtained by centrifugation to obtain 80 ml of concentrate (7.5 birx). Add 120 ml of distilled water and 4 g of agar to 80 ml of concentrated extract, autoclave at 121 ° C. for 15 minutes, put them in petri-dish, and use them as solid medium to spread 14 strains of Bacillus sp. The growth of the strain was confirmed by culturing for 2 days.

3. 성장 정도 측정 및 균주 선정3. Measurement of growth and selection of strain

상기의 녹용 분말 고체 배지와 녹용 추출물 고체 배지에서 성장 정도에 따라 균주의 성장 여부를 측정하여 각각 표 1 및 표 2에 나타내었다.
The growth of the strain according to the growth degree in the antler powder solid medium and antler extract solid medium is shown in Table 1 and Table 2, respectively.

균주 성장이 매우 왕성: +++Very strong strain growth: +++

균주 성장이 왕성 : ++Strain growth is strong: ++

균주 성장이 보통 : +Strain growth is usually: +

균주 성장이 약함 : -+Weak strain growth:-+

전혀 성장하지 않음 : -
Not growing at all:-

녹용 추출물함유 고체 배지에서의 바실러스 속 14종의 균주 성장 정도
Growth of 14 Strains of the Genus Bacillus in Solid Medium Containing Deer Antler Extract

녹용 분말 함유 고체 배지에서의 바실러스속 14종의 균주 성장 정도
Growth Strains of 14 Bacillus Species in Deer Antler Powder-Containing Solid Medium

4. 균주의 동정 4. Identification of Strains

상기 표 1 및 표 2 모두에서 성장이 매우 완성한 균주인 7(임의로 지정한 숫자임)을 선정, 분리하였다.
In Table 1 and Table 2, 7 (which is a randomly designated number) of a very complete strain was selected and separated.

Genomic DNA preparation Kit(SGD62 S120, Solgent Co. Ltd., Korea)를 이용하여 genomic DNA를 추출한 다음 유니버셜 프라이머(universal primer) 27F(5'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3')와 1492R(5'-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3'), EF-Taq(SEF16 R250, Solgent Co. Ltd., Korea)으로 PCR을 실시하여 증폭시켰다. 아세테이트와 70% 에탄올을 이 용하여 정제한 다음 시퀀싱 키트(Big dye terminator cycle sequencing ready reaction kit)와 ABI Prism 3730XL DNA analyzer(Applied Biosystems, Ca, USA)로 염기서열을 결정하였다.
Genomic DNA was extracted using Genomic DNA preparation Kit (SGD62 S120, Solgent Co. Ltd., Korea) and then universal primer 27F (5'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3 ') and 1492R (5). PCR was amplified by '-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3') and EF-Taq (SEF16 R250, Solgent Co. Ltd., Korea). Purification using acetate and 70% ethanol was followed by sequencing kit (Big dye terminator cycle sequencing ready reaction kit) and ABI Prism 3730XL DNA analyzer (Applied Biosystems, Ca, USA).

이러한 분리균주의 16S rRNA 염기서열은 EMBL/DDBJ/PDB/GenBank 시쿼스 데이터베이스로부터 얻은 유연균주의 서열과 정렬시키고 상동성을 비교하여 표 3에 나타내었으며, 그 결과 녹용분말 고체배지와 녹용 추출물 고체배지 모두 성장이 매우 왕성한 균주는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)였다.
The 16S rRNA sequences of these isolates were shown in Table 3 in alignment with homologous strains obtained from the EMBL / DDBJ / PDB / GenBank sequence database and compared with homology. As a result, the antler powder solid medium and the antler extract solid medium A very active strain of all was Bacillus subtilis.

상기 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtillis) 균주를 2009년 1월 16일자로 한국생명공학연구원 생물자원센터(KCTC)에 기탁번호 KCTC 11454BP로 기탁하였다.
The Bacillus subtillis strain was deposited on January 16, 2009 to the Korea Institute of Bioscience and Biotechnology (KCTC) under the accession number KCTC 11454BP.

바실러스 서브틸리스 KCTC11454BP의 16S rDNA 염기서열 및 서열의 상동성
Homology of 16S rDNA Sequence and Sequence of Bacillus subtilis KCTC11454BP

5. 분리 균주의 균학적 특성5. Mycological Characteristics of Isolated Strains

본 발명에 다른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주의 균학적 특성을 조사하여 도 1 및 표 4에 나타내었다.The bacteriological properties of the Bacillus subtilis KCTC 11454BP strain according to the present invention were investigated and shown in FIG. 1 and Table 4. FIG.

바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주의 균학적 특성
Mycological Characteristics of Bacillus subtilis KCTC 11454BP Strain

도 1에서 알 수 있는 바와 같이 본 발명에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주는 간균이었다.
As can be seen in Figure 1 Bacillus subtilis KCTC 11454BP strain according to the present invention was a bacilli.

표 4로부터 본 발명에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주는 운동성이 있으며, 호기성(catalase 함유)이고, 그람 양성균이었으며 포자를 형성하는 것으로 관찰되었다. 또한 본 발명에 다른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주는 생육시 gelatin과 casein에 대하여 protease 활성이 매우 높은 것으로 나타나 fibrin 분해능이 우수하다는 것을 확인할 수 있었으나, 생육시 전분 분해력은 다소 약한 것으로 나타났다.
From Table 4 the Bacillus subtilis KCTC 11454BP strain according to the invention was observed to be motile, aerobic (containing catalase), Gram positive and form spores. In addition, the Bacillus subtilis KCTC 11454BP strain in the present invention was found to have a high protease activity against gelatin and casein when grown, it was confirmed that the fibrin degradation was excellent, but starch degradation was slightly weak during growth.

6. 균학적 특성의 비교6. Comparison of Mycological Characteristics

본 발명에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주와 공지의 균주인 바실러스 속 Py-92균주(KCTC 0049BP), 바실러스 서브틸리스(bacillus subtilis) KCTC 1325 및 바실러스 서브틸리스(Bacillussubtilis) ATCC 9372 균주의 탄소원 이용 여부로 균학적 특성을 비교하여 그 결과를 표 5에 나타내었다.
Carbon source of Bacillus subtilis KCTC 11454BP strain according to the present invention and known strain Bacillus Py-92 strain (KCTC 0049BP), Bacillus subtilis KCTC 1325 and Bacillus subtilis ATCC 9372 strain The results are shown in Table 5 by comparing the bacteriological properties with or without use.

분리균주와 공시균주의 균학적 특성 비교
Comparison of Mycological Characteristics of Isolated Strains and Test Strains

표 5에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 다른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주와 공지균주 ATCC 9372는 insulin 및 trehalose의 탄소원 이용에서 차이를 보였고, 바실러스 서브틸리스 Py-92(KCTC 0049BP), 바실러스 서브틸리스 KCTC 1325와는 D-Xylose, insulin 및 Tregalose 이용성에서 각각 차이를 보였다.
As can be seen in Table 5, the Bacillus subtilis KCTC 11454BP strain and known strain ATCC 9372 according to the present invention showed a difference in the use of carbon sources of insulin and trehalose, Bacillus subtilis Py-92 (KCTC 0049BP), Bacillus Subtilis KCTC 1325 and D-Xylose, insulin and Tregalose availability were different.

이상의 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주는 공지균주와 상이한 신규한 균주로 판단된다.
As can be seen from the above results, the Bacillus subtilis KCTC 11454BP strain according to the present invention is determined to be a novel strain different from the known strain.

<실시예 2> 본 발명에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP에 의한 녹용 발효
<Example 2> Antler fermentation by Bacillus subtilis KCTC 11454BP according to the present invention

LB(tryptone 10 g/liter NaCl 10 g/liter yeast extract 5 g/liter) 배지 20 ml를 이용하여 상기 실시예 1에서 분리된 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주를 30 ℃에서 1일 배양한 것을 전배양하였다.
Precultured Bacillus subtilis KCTC 11454BP strain isolated in Example 1 using 20 ml of tryptone 10 g / liter NaCl 10 g / liter yeast extract 5 g / liter (LB) medium at 30 ° C. per day It was.

녹용분말 4 g에 50 mM phosphate buffer (pH 6.0) 30 ml를 가하여 121 ℃에서 15분간 고압 멸균하여 30 ℃로 냉각한 후 본 발명에 다른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주의 전배양액 1ml을 가하여 30 ℃에서 3일간 배양하였다. 배양액에 증류수 60 ml를 가하여 100 ℃에서 3시간 환류 추출 후 원심분리하여 녹용 발효 추출물을 얻었다.
30 ml of 50 mM phosphate buffer (pH 6.0) was added to 4 g of antler powder, which was autoclaved at 121 ° C. for 15 minutes, cooled to 30 ° C., and then 1 ml of the pre-culture of another Bacillus subtilis KCTC 11454BP strain was added to 30 ° C. Incubated for 3 days. 60 ml of distilled water was added to the culture, and the mixture was extracted under reflux at 100 ° C. for 3 hours, followed by centrifugation to obtain a antler fermented extract.

<비교예 1 내지 3> 바실러스 속의 공지균주에 의한 녹용 발효<Comparative Examples 1 to 3> Antler fermentation by known strains in the Bacillus

상기 실시예 2와 동일한 방법으로 공지 균주인 바실러스 속 Py-92 균주(KCTC 0049BP), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) KCTC 1325 및 바실러스 서브틸리스(Bacillussubtilis) ATCC 9372 균주를 이용하여 녹용 발효추출물을 제조하여 각각 비교예 1, 비교예 2 및 비교예 3으로 하였다.
In the same manner as in Example 2 Bacillus genus Py-92 strain (KCTC 0049BP), Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) KCTC 1325 and Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) using a strain ATCC 9372 strain antler It prepared and it was set as the comparative example 1, the comparative example 2, and the comparative example 3, respectively.

<실험예 1> 녹용 추출물의 수율 비교Experimental Example 1 Yield Comparison of Antler Extract

상기 실시예 2 및 비교예 1 내지 3에서 제조된 녹용 발효 추출물의 수율을 측정하여 표 6에 나타내었다.
The yields of the antler fermentation extracts prepared in Example 2 and Comparative Examples 1 to 3 were measured and shown in Table 6.

녹용 발효추출물의 수율 비교
Yield Comparison of Deer Antler Extracts

상기 표 6에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 다른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주에 의한 녹용 발효 추출물의 수율은 공지의 바실러스 속 균주에 의한 녹용 발효 추출물의 수율보다 2-3배 정도의 높은 수율로 녹용 발효 추출물이 생성되었다.
As can be seen in Table 6, the yield of the antler fermentation extract by the Bacillus subtilis KCTC 11454BP strain according to the present invention is a yield of about 2-3 times higher than the yield of the antler fermentation extract by the known Bacillus strains As antler fermented extract was produced.

<실험예 2> 녹용 발효 추출물의 유효성분 함량 비교Experimental Example 2 Comparison of Active Ingredient Content of Deer Antler Ferment Extract

녹용의 유효성분인 S-GAG(Sulfated-glycosaminglycan) 성분은 조골세포 성장 촉진, 파골세포 억제, 골다공증 예방 효과, 관절염 치료제의 지표물질로 관심이 증대된 물질이며, Sialic acid는 Ganglioside의 종류를 결정하는 주요 지표 성분이고, Ganglioside는 기억력과 학습능력 증진 세포의 신경 전달계에 매우 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있어, 상기 실시예 2 및 비교예 1 내지 3에서 제조된 녹용 발효 추출물의 유효성분 함량을 비교하기 위하여 다음과 같은 실험을 실시하였다.
S-GAG (Sulfated-glycosaminglycan), an active ingredient of deer antler, is a substance that has increased interest as an indicator of osteoblast growth, osteoclast inhibition, osteoporosis prevention, and arthritis treatment, and Sialic acid determines the type of Ganglioside. It is a major index component, Ganglioside is known to play a very important role in the neurotransmitter system of memory and learning ability enhancing cells, to compare the active ingredient content of the antler fermentation extract prepared in Example 2 and Comparative Examples 1 to 3 The following experiment was conducted.

녹용 발효추출물에 대한 유효성분의 분석은 아래와 같은 방법으로 측정하였다. Total sugar는 phenol-sulfuric acid 법(Omran 등, 1989)으로 측정하였으며, Sulfated-glycosaminoglycan(S-GAG) 측정은 Dimethyl-methylene blue dye binding 방법(farndale 등, 1982)에 의하여 540 nm에서 측정하였고, Sialic acid 측정은 80 ℃에서 1시간 동안 0.1 N 황산으로 가수분해한 후에 Warren 방법(Warren, 1959)에 의하여 549 nm에서 측정하여 표 7에 나타내었다.
Analysis of the active ingredient for the antler fermentation extract was measured by the following method. Total sugar was measured by phenol-sulfuric acid method (Omran et al., 1989). Sulfated-glycosaminoglycan (S-GAG) was measured at 540 nm by dimethyl-methylene blue dye binding method (farndale et al., 1982). The acid was measured at 549 nm by hydrolysis with 0.1 N sulfuric acid at 80 ° C. for 1 hour, followed by Warren's method (Warren, 1959).

녹용 발효 추출물의 유효성분 함량을 분석한 결과 표 7에서 알 수 있는 바와 같이, 비교예 1 내지 3의 공지의 바실러스 속 균주에 의한 녹용 발효 추출물에서 유효성분인 total sugar, S-GAG의 함량 및 Sialic acid 함량은 발효 전보다 오히려 감소하였으나, 본 발명에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주에 의한 녹용 발효추출물에서는 현저히 증가하는 것을 확인하였다.
As a result of analyzing the active ingredient content of the antler fermentation extract, as shown in Table 7, the content of the total sugar, S-GAG and Sialic as an active ingredient in the antler fermentation extract by the known Bacillus strains of Comparative Examples 1 to 3 The acid content was decreased rather than before fermentation, but it was confirmed that the antler fermentation extract by Bacillus subtilis KCTC 11454BP strain according to the present invention increased significantly.

그러므로 본 발명에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 균주에 의한 녹용 발효추출물은 조골세포 성장 촉진, 파골세포 억제, 골다공증 예방 효과, 관절열 치료제, 기억력과 학습능력 증진 세포의 신경 전달계에 매우 유용하게 이용될 수 있다.
Therefore, the antler fermented extract by Bacillus subtilis KCTC 11454BP strain according to the present invention can be very useful for promoting osteoblast growth, osteoclast inhibition, osteoporosis prevention effect, joint fever treatment agent, memory and learning ability enhancing neurotransmitter system Can be.

<실험예 3> 녹용 발효추출물의 항산화 효과Experimental Example 3 Antioxidant Effect of Antler Ferment Extract

본 발명에 의한 실시예 2 및 비교예 1 내지 3에서 제조된 녹용 발효추출물의 항산화 활성효과를 알아보기 위해서 하기의 시험을 실시하였다.
In order to determine the antioxidant activity effect of the antler fermentation extract prepared in Example 2 and Comparative Examples 1 to 3 according to the present invention was carried out the following test.

항산화 활성은 DPPH 라디칼에 대한 소거 활성과 ABTS 소거 활성을 측정하였다. DPPH 라디칼에 대한 소거 활성은 Blois(1958)의 방법으로 측정하였다. 에탄올 적정량에 시료 0.2 ml과 4 × 10^-4M DPPH 용액 0.8 ml을 가하여 10초간 혼합하고 10분간 방치 후 525 nm에서 흡광도를 측정하여 대조구와 비교하였다.
Antioxidant activity was measured for scavenging activity and ABTS scavenging activity against DPPH radicals. Scavenging activity against DPPH radicals was determined by the method of Blois (1958). 0.2 ml of the sample and 0.8 ml of 4 × 10 ^-4 M DPPH solution were added to the ethanol titration for 10 seconds, left for 10 minutes, and the absorbance at 525 nm was measured and compared with the control.

ABTS 소거 활성은 Arnao 등 (2001)의 방법을 변형하여 측정하였다. 1.0 mM의 2,2'-azobis(2-amodino-propane) deihydrochloride(AAPH)은 100 mM PBS buffer에 녹인 2.5 mM의 ABTS (2,2'-azino-bis 3-ethylbenzenothiazolin-6-sulfonic acid)와 혼합한 후 68 ℃의 항온조에서 12분 동안 반응시켰다. ABTS 용액의 농도는 734 nm에서 0.650 ± 10.2가 되도록 조정하였다. 여러 가지 농도의 시료 20 μl와 980μl ABTS 용액을 37 ℃ water bath에서 10분간 반응시키면서 734 nm에서 감소하는 흡광도 정도를 측정하였다. 이때 라디칼 50 % 소거하는 추출물의 양의 농도(IC₅₀)를 구하였다.
ABTS scavenging activity was measured by modifying the method of Arnao et al. (2001). 1.0 mM 2,2'-azobis (2-amodino-propane) deihydrochloride (AAPH) was dissolved in 2.5 mM ABTS (2,2'-azino-bis 3-ethylbenzenothiazolin-6-sulfonic acid) dissolved in 100 mM PBS buffer. After mixing, the mixture was reacted in a thermostat at 68 ° C. for 12 minutes. The concentration of the ABTS solution was adjusted to 0.650 ± 10.2 at 734 nm. 20 μl of various concentrations of samples and 980 μl ABTS solution were reacted for 10 minutes in a 37 ° C. water bath, and the absorbance at 734 nm was measured. At this time, the concentration (IC ₅₀ ) of the extract of 50% radical scavenging was calculated.

상기 DPPH 라디칼에 대한 소거활성과 ABTS 소거활성의 측정 결과는 표 8에 나타내었다.Table 8 shows the results of the scavenging activity and ABTS scavenging activity on the DPPH radicals.

상기 표 8에서 알 수 있듯이, 녹용 발효 추출물의 라디칼 소거능의 정도를 표시한 IC₅₀값은 ABTS 라디칼 소거능 및 DPPH 라디칼 소거능 모두에서 본 발명에 따른 녹용 발효 추출물이 기존 공지의 균주로부터 얻어진 녹용 발효 추출물보다 약 2-3 배의 항산화 활성 효과가 현저히 우수함을 확인할 수 있었다.
As can be seen from Table 8, the IC ₅₀ value indicating the degree of radical scavenging activity of the antler fermentation extract is more than the antler fermentation extract obtained from the known strain of the antler fermentation extract according to the present invention in both ABTS radical scavenging ability and DPPH radical scavenging ability It was confirmed that the antioxidant activity effect of about 2-3 times is remarkably excellent.

<실시예 3> 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물의 성분 변화Example 3 Changes in Components of Bacillus Subtilis KCTC 11454BP Deer Antler

배양시간에 따른 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물 제조 중의 성분변화를 측정한 결과 (표 10), S-GAG와 sialic acid 함량은 24시간까지는 발효가 진행될수록 증가하다가 그 이후에 감소하는 경향을 보였다(도 2). Total sugar와 urnonic acid함량은 다소 차이를 보였는데 total sugar함량은 24시간까지는 증가하다가 그 이후에는 변화가 없는 경향을 보인 반면, uronic acid함량은 배양 36시간 때 가장 높은 함량을 보이다가 그 이후 감소하였다(도 3). 이를 종합할 때, 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP에 의한 녹용 발효는 24시간 배양이 가장 적합한 것으로 확인되었다.
As a result of measuring the changes in the components of Bacillus subtilis KCTC 11454BP antler fermentation with incubation time (Table 10), the content of S-GAG and sialic acid increased as the fermentation progressed up to 24 hours and then decreased. (FIG. 2). The total sugar and urnonic acid contents were slightly different. The total sugar content increased up to 24 hours and showed no change thereafter, whereas the uronic acid content was the highest at 36 hours of culture and then decreased. (FIG. 3). Taken together, it was confirmed that 24 hour culture was most suitable for antler fermentation with Bacillus subtilis KCTC 11454BP.

Time (h)Time (h) 00 1212 2424 3636 4848 pHpH 7.527.52 7.77.7 7.967.96 8.218.21 8.338.33

바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효에 따른 pH 변화
Changes in pH of Bacillus subtilis KCTC 11454BP Deer Antler Fermentation

구 분division 0 H0 H 12 H12 H 24H24H 36H36H 48H48H Uronic acidUronic acid 110.4±3.6110.4 ± 3.6 157 ±4.7157 ± 4.7 162.8±2.7162.8 ± 2.7 221.5±10.7221.5 ± 10.7 196.7±2.7196.7 ± 2.7 S-GAGS-GAG 91.8±3.291.8 ± 3.2 376±4.4376 ± 4.4 396±7.9396 ± 7.9 352±10.6352 ± 10.6 401.1±13.5401.1 ± 13.5 Sialic acidSialic acid 12.57±012.57 ± 0 13.25±013.25 ± 0 17.97±2.2617.97 ± 2.26 13.05±0.6213.05 ± 0.62 12.36±0.0712.36 ± 0.07

바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효 동안 총당 및 uronic acid 함량의 변화Changes in Total Sugar and Uronic Acid Contents of Bacillus subtilis KCTC 11454BP Deer Antler

표준 물질: Total sugar as glucose, Uronic acid as galacturonic acid, Sulfated-GAGs (glycosaminoglycan) as chondroitin sulfate, sialic acid as N-acetylneuraminic acid
Standard substance: Total sugar as glucose, Uronic acid as galacturonic acid, Sulfated-GAGs (glycosaminoglycan) as chondroitin sulfate, sialic acid as N-acetylneuraminic acid

<실시예 4> 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물의 항산화 활성 Example 4 Antioxidant Activity of Bacillus Subtilis KCTC 11454BP Deer Antler

<실험예 1> 재료 및 방법Experimental Example 1 Materials and Methods

바실러스Bacillus 서브틸리스Subtilis KCTCKCTC 11454 11454 BPBP 녹용 velvet 발효물의Fermented 제조 Produce

본 실험에 사용한 녹용은 광동제약으로부터 한약규격집 기준에 적합한 원료를 제공받아 녹용의 분골, 상대, 중대, 하대를 마쇄기로 분쇄하여 혼합 후 사용하였다. 녹용 발효물은 녹용 분말 40 g을 50 mM phosphate buffer(pH 6.0) 300 mL에 넣고 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP를 접종한 후 25-30℃에서 7일간 발효시킨 것을 시료로 하였으며 녹용 비발효물은 동일한 농도의 발효시키지 않은 녹용 분말액을 시료로 하였다. 각각 시료에 300 mL의 물을 가하고 100℃에서 3시간 동안 환류 추출한 후 8,000 × g에서 20분간 원심분리한 상징액을 회수하였다. 이러한 과정을 2회 반복하여 회수한 추출물을 농축하여 농축액 100 mL(7.5 brix)을 얻었으며 이를 각각 발효 녹용 추출액과 비발효 녹용 추출액으로 하였다.　
Deer antler used in this experiment was supplied from Kwangdong Pharm. The antler fermented product was obtained by injecting 40 g of antler powder into 300 mL of 50 mM phosphate buffer (pH 6.0), inoculated with Bacillus subtilis KCTC 11454BP, and fermenting at 25-30 ° C. for 7 days. The antler powder which was not fermented at a concentration was used as a sample. 300 mL of water was added to each sample, and the mixture was refluxed at 100 ° C. for 3 hours, and then the supernatant was recovered by centrifugation at 8,000 × g for 20 minutes. This process was repeated twice, and the extract was concentrated to obtain 100 mL (7.5 brix) of concentrate, which was used as fermented antler extract and non-fermented antler extract, respectively.

실험동물Experimental animal

실험 동물은 나라 바이오텍(Seoul, Korea)에서 공급받은 3주령의 웅성 Sprague-Dawley(SD) 계열 흰쥐(60 ± 10 g)를 이용하였다. 실험 동물은 사육케이지(42 × 28 cm)을 이용해 실험실 온도 22-24℃, 습도 60±5%가 유지되며 밤낮 주기(12시간 light/ 12시간 dark)가 자동 조절 장치에 의해 조절되는 고려대학교 동물실에서 1주간 예비 사육 후 2주 동안 본 연구를 위해 사육되었다.
Experimental animals were 3 weeks old male Sprague-Dawley (SD) series rats (60 ± 10 g) supplied from Nara Biotech (Seoul, Korea). The experimental animals were kept at a laboratory temperature of 22-24 ° C and a humidity of 60 ± 5% using a breeding cage (42 × 28 cm), and the day and night cycle (12 hours light / 12 hours dark) was controlled by an automatic control device. Two weeks after preliminary breeding in the laboratory, two weeks were raised for this study.

그룹 설정 Group settings

연구 그룹은 무작위 추출법에 의해 군당 6마리씩 3개군으로 분류하였다. 시료 처치군은 비발효 녹용 추출물 투여군(NF)과 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물 투여군(FB)으로 분류하였다(표 11). 시료는 매일 일정한 시간에 존대를 이용해 경구로 투여하였으며 전 실험 기간 동안 물과 AIN-93 기본식이(Samyang Co., Seoul, Korea)는 자유롭게 섭취하도록 하였다. 식이 섭취량은 주 2회, 체중은 주 1회 측정하였으며 식이효율(feed efficiency ratio, FER)은 측정된 식이 섭취량에 대한 체중 증가량으로 계산하였다.
The study group was divided into three groups of 6 animals per group by random sampling. Sample treatment groups were divided into non-fermented antler extract administration group (NF) and Bacillus subtilis KCTC 11454BP antler fermentation administration group (FB) (Table 11). Samples were administered orally using zonal fluid at regular times every day, and water and AIN-93 basic diet (Samyang Co., Seoul, Korea) were freely ingested throughout the experiment. Dietary intake was measured twice a week and body weight was measured weekly. The feed efficiency ratio (FER) was calculated as the weight gain relative to the measured dietary intake.

Experiment groupsExperiment groups Administrated sampleAdministrated sample 대조군Control group NCNC SalineSaline 실험군Experimental group 비발효 녹용 투여군Non-fermented antler group NFNF 비발효 녹용 추출물 100 mg/kg BWUnfermented Deer Antler Extract 100 mg / kg BW 발효 녹용 투여군Fermented Antler Administration Group FBFB 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물 100 mg/kg BWBacillus subtilis KCTC 11454BP Deer Antler Ferment 100 mg / kg BW

통계 분석 Statistical analysis

실험 결과는 SPSS ver 10.0(SPSS Inc., IL, USA)을 이용하여 통계 처리하였으며 모든 측정 항목에 대한 평균(mean)과 평균의 표준오차(standard error of the mean, SEM)를 산출하였다. 실험군간의 유의성은 ANOVA test 후 구체적인 사후 검증은 p<0.05 수준에서 Duncan's multiple range test로 실시하였다.
The experimental results were statistically analyzed using SPSS ver 10.0 (SPSS Inc., IL, USA), and the mean and standard error of the mean (SEM) for all measurement items were calculated. Significance between the experimental groups was confirmed by Duncan's multiple range test at p <0.05 level after the ANOVA test.

<실험예 2> 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물의 라디칼 소거능
Experimental Example 2 Radical Scavenging Activity of Bacillus Subtilis KCTC 11454BP Deer Antler

간 조직내 DPPH 라디칼 소거능 측정은 Cheung 등(2003)의 방법을 이용하였다. DPPH을 ethanol에 용해시킨 0.2 mM DPPH 용액 0.4 mL와 시료 0.1 mL을 암소에서 10분간 반응시킨 후 520 nm에서 흡광도를 측정하였다. Measurement of DPPH radical scavenging activity in liver tissue was performed using the method of Cheung et al. (2003). 0.4 mL of 0.2 mM DPPH solution dissolved in ethanol and 0.1 mL of sample were reacted for 10 minutes in the dark, and then absorbance was measured at 520 nm.

　　간 조직내 ABTS 라디칼 소거능 측정은 Re 등(1999)의 방법을 이용하였다. 7 mM ABTS에 2.45 mM potassium persulfate을 첨가하여 암소에서 실온으로 12-16시간 방치한 후 414 nm에서 흡광도가 1.4-1.5가 되도록 증류수로 희석시켰다. 간 조직 시료 12.5 ㎕에 희석된 ABTS 라디칼 용액 250 ㎕를 넣어 암소에서 60분간 반응시키고 414 nm에서 흡광도를 측정하였다. DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능(%)은 다음과 같이 계산하였다.
ABTS radical scavenging activity in liver tissue was measured by Re et al. (1999). 2.45 mM potassium persulfate was added to 7 mM ABTS and allowed to stand at room temperature for 12-16 hours in the dark, followed by dilution with distilled water at 1.4 to 1.5 at 414 nm. 250 μl of diluted ABTS radical solution was added to 12.5 μl of liver tissue sample, and reacted in the dark for 60 minutes, and the absorbance was measured at 414 nm. DPPH and ABTS radical scavenging activity (%) were calculated as follows.

<식 1><Formula 1>

라디칼 scavenging activity (%) = (1 - A_sample/A_control) × 100Radical scavenging activity (%) = (1-A _sample / A _control ) × 100

A_sample: with sample, A_control: without sample
A _sample : with sample, A _control : without sample

바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물(FB)장 내 DPPH 라디칼 소거능 및 hydrogen peroxide 라디칼 소거능은 비발효 녹용 추출물(NF) 및 대조군(NC)에 비하여 상당히 높은 것으로 확인되었다. 특히, 간에서의 ABTS 라디칼 소거능은 비발효 녹용 추출물에 비하여 약 2.5 배 높은 것으로 나타났다. 그러나 간에서의 hydrogen peroxide 소거능은 비발효 녹용 추출물 및 대조군에 비하여 다소 낮았으며, 간에서의 DPPH 라디칼 소거능 및 혈청 내 ABTS 라디칼 소거능은 세 가지 시험군에서 유의적인 차이가 나타나지 않았다. 이들 라디칼들의 혈청 및 간에서의 소거능 정도를 종합하여 고려 시, 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물은, 간 및 혈중 자유 라디칼들 소거능이 있는 것으로 판단된다.
DPPH radical scavenging activity and hydrogen peroxide radical scavenging activity in the field of Bacillus subtilis KCTC 11454BP antler fermentation (FB) were found to be significantly higher than the non-fermented antler extract (NF) and control (NC). In particular, ABTS radical scavenging activity in the liver was about 2.5 times higher than the non-fermented antler extract. However, hepatic hydrogen peroxide scavenging activity was slightly lower than that of non-fermented antler extract and control group. DPPH radical scavenging activity and serum ABTS radical scavenging activity were not significantly different among the three groups. Taking into account the degree of scavenging activity in the serum and liver of these radicals, Bacillus subtilis KCTC 11454BP antler fermentant is judged to have scavenging ability of free radicals in the liver and blood.

GroupGroup DPPHDPPH ABTSABTS Hydrogen peroxideHydrogen peroxide SerumSerum LiverLiver SerumSerum LiverLiver SerumSerum LiverLiver NCNC 6.3±8.0^c 6.3 ± 8.0 ^c 21.1±2.2^b 21.1 ± 2.2 ^b 44.6±1.4^ab 44.6 ± 1.4 ^ab 27.0±6.9^b 27.0 ± 6.9 ^b 44.5±15.9^c 44.5 ± 15.9 ^c 3.4±0.4^a 3.4 ± 0.4 ^a NFNF 8.6±4.3b^c 8.6 ± 4.3b ^c 24.1±2.8^ab 24.1 ± 2.8 ^ab 41.5±1.4^b 41.5 ± 1.4 ^b 16.5±1.7^c 16.5 ± 1.7 ^c 47.8±10.4^c 47.8 ± 10.4 ^c 3.0±0.3^ab 3.0 ± 0.3 ^ab FBFB 15.2±5.9^ab 15.2 ± 5.9 ^ab 25.5±2.0^a 25.5 ± 2.0 ^a 41.1±3.8^b 41.1 ± 3.8 ^b 40.0±11.1^a 40.0 ± 11.1 ^a 55.4±15.7^bc 55.4 ± 15.7 ^bc 2.6±0.4^bc 2.6 ± 0.4 ^bc

비발효 녹용 추출물 및 바실러스 서브틸리스 11454BP 녹용 발효물을 투여한 래트에서의 라디칼 소거능
Radical Scavenging Activity in Rats Fed Unfermented Antler Extract and Bacillus Subtilis 11454BP Antler Fermentation

<실험예 3> 바실러스 서브틸리스 11454BP 녹용 발효물이 환원형 글루타티온에 미치는 영향
Experimental Example 3 Effect of Bacillus subtilis 11454BP Antleric Fermentation on Reduced Glutathione

Tietz(1969)의 방법을 이용하여 혈액내 환원형 글루타티온(glutathione, GSH)의 함량을 측정하였다. 혈장에 동량의 5% sulfosalicylic acid를 첨가하고 4℃, 2,000 × g에서 10분간 원심 분리를 하였다. 상징액 100 ㎕에 0.3 mM Na2HPO4 800 ㎕와 0.1% sodium citrate에 0.04%가 되도록 5,5'-dithiobis 2-nitrobenzoic acid(DTNB)을 섞은 용액 100 ㎕를 첨가하고 5분 후 412 nm에서 흡광도를 측정하였으며 환원형 글루타티온을 표준물질로 하여 정량하였다.
The content of reduced glutathione (GSH) in blood was measured using the method of Tietz (1969). An equivalent amount of 5% sulfosalicylic acid was added to the plasma and centrifuged at 4 ° C. and 2,000 × g for 10 minutes. To 100 μl of supernatant, 100 μl of a solution containing 5,5'-dithiobis 2-nitrobenzoic acid (DTNB) was added to 800 μl of 0.3 mM Na2HPO4 and 0.04% to 0.1% sodium citrate, and the absorbance was measured at 412 nm after 5 minutes. Reduced glutathione was used as a standard.

그 결과, 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물은 혈중 GSH 함량이 240±1.5 μmol/mL이었고, 간 내 GSH 함량은 7.3±0.9 mmol/g이었다(표 13). 이는 비발효 녹용 추출물의 혈중 및 간내 GSH 함량이 각각 192.4±49.7 μmol/mL 및 3.8±0.8 mmol/g이라는 점을 고려할 때, 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP의 녹용 발효를 통하여, 상기 발효녹용에 GSH 함량 증가능이 생김으로써, 상기 녹용 발효물이 산화적 세포손상의 방지 효능을 갖게 된다는 것을 의미한다.
As a result, Bacillus subtilis KCTC 11454BP antler fermentation had a blood GSH content of 240 ± 1.5 μmol / mL and liver GSH content of 7.3 ± 0.9 mmol / g (Table 13). Considering that the blood and liver GSH contents of the non-fermented deer antler extract were 192.4 ± 49.7 μmol / mL and 3.8 ± 0.8 mmol / g, respectively, the GSH content of the fermented deer antler was obtained through the antler fermentation of Bacillus subtilis KCTC 11454BP. By increasing the capacity, it means that the antler fermented product has the effect of preventing oxidative cell damage.

GroupGroup GSHGSH Serum (μmol/mL)Serum (μmol / mL) Liver (mmol/g)Liver (mmol / g) NCNC 253.3±52.1^bcd 253.3 ± 52.1 ^bcd 4.6±0.9^c 4.6 ± 0.9 ^c NFNF 192.4±49.7^d 192.4 ± 49.7 ^d 3.8±0.8^c 3.8 ± 0.8 ^c FBFB 240.6±91.5^cd 240.6 ± 91.5 ^cd 7.3±0.9^b 7.3 ± 0.9 ^b

<실시예 4> 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물의 성장촉진 기능 Example 4 Growth Promoting Function of Bacillus Subtilis KCTC 11454BP Deer Antler

<실험예 1> 재료 및 방법Experimental Example 1 Materials and Methods

본 실험에 사용한 녹용은 광동제약으로부터 한약규격집 기준에 적합한 원료를 제공 받아 녹용의 분골, 상대, 중대, 하대를 마쇄기로 분쇄하여 혼합 후 사용하였다. 녹용 발효물은 녹용 분말 40 g을 50 mM phosphate buffer(pH 6.0) 300 mL에 넣고 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP를 접종한 후 25-30℃에서 7일간 발효시킨 것을 시료로 하였으며 녹용 비발효물은 동일한 농도의 발효시키지 않은 녹용 분말액을 시료로 하였다. 각각 시료에 300 mL의 물을 가하고 100℃에서 3시간 동안 환류 추출한 후 8,000 ×g 에서 20분간 원심분리한 상징액을 회수하였다. 이러한 과정을 2회 반복하여 회수한 추출물을 농축하여 농축액 100 mL(7.5 brix)을 얻었으며 이를 각각 발효 녹용 추출액과 비발효 녹용 추출액으로 하였다.　　　　
Deer antler used in this experiment was supplied from Kwangdong Pharm. Deer antler fermentation was added 40 g of antler powder to 300 mL of 50 mM phosphate buffer (pH 6.0) and Bacillus subtilis. After inoculating KCTC 11454BP, the samples were fermented at 25-30 ° C. for 7 days, and the antler-fermented non-fermented antler powder was used as a sample. 300 mL of water was added to each sample, and the mixture was refluxed at 100 ° C. for 3 hours, and the supernatant was recovered by centrifugation at 8,000 × g for 20 minutes. This process was repeated twice, and the extract was concentrated to obtain 100 mL (7.5 brix) of concentrate, which was used as fermented antler extract and non-fermented antler extract, respectively.

실험 동물 Experimental animal

그룹 설정 Group settings

　　연구 그룹은 무작위 추출법에 의해 군당 6마리씩 5개군으로 분류하였다(표 14). 시료 처치군은 비발효 녹용 추출물 투여군(NF)과 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물 투여군(FB)으로 분류하였다. 시료는 매일 일정한 시간에 존대를 이용해 경구로 투여하였으며 전 실험 기간 동안 물과 AIN-93 기본식이(Samyang Co., Seoul, Korea)는 자유롭게 섭취하도록 하였다. 식이 섭취량은 주 2회, 체중은 주 1회 측정하였으며 식이효율(feed efficiency ratio, FER)은 측정된 식이 섭취량에 대한 체중 증가량으로 계산하였다. The study group was divided into five groups of 6 animals per group by random sampling (Table 14). Sample treatment groups were divided into non-fermented antler extract administration group (NF) and Bacillus subtilis KCTC 11454BP antler fermentation administration group (FB). Samples were administered orally using zonal fluid at regular times every day, and water and AIN-93 basic diet (Samyang Co., Seoul, Korea) were freely ingested throughout the experiment. Dietary intake was measured twice a week and body weight was measured weekly. The feed efficiency ratio (FER) was calculated as the weight gain relative to the measured dietary intake.

Experiment groupsExperiment groups Administrated sampleAdministrated sample 대조군Control group 대조군Control group SalineSaline 실험군Experimental group 비발효 녹용 추출물투여군Non Fermented Antler Extract Group NFNF 비발효 녹용 추출물 100 mg/kg BWUnfermented Deer Antler Extract 100 mg / kg BW 녹용 발효물 투여군Deer Antler Fermentation Group FBFB 바실러스 서브틸리스 KCTC 1145BP 녹용 발효물
100 mg/kg BWBacillus subtilis KCTC 1145BP Antler Ferment
100 mg / kg BW 양성 대조군Positive control PF-300PF-300 Foremilk 300 mg/kg BWForemilk 300 mg / kg BW PYH-300PYH-300 효모 가수분해물 300 mg/kg BWYeast Hydrolyzate 300 mg / kg BW

통계 분석 Statistical analysis

실험 결과는 SPSS ver 13.0(SPSS Inc., IL, USA)을 이용하여 통계 처리하였으며 모든 측정 항목에 대한 평균(mean)과 평균의 표준오차(standard error of the mean, SEM)를 산출하였다. 실험군간의 유의성은 ANOVA test 후 구체적인 사후 검증은 p<0.05 수준에서 Duncan's multiple range test로 실시하였다.
The experimental results were statistically analyzed using SPSS ver 13.0 (SPSS Inc., IL, USA), and the mean and standard error of the mean (SEM) for all measurement items were calculated. Significance between the experimental groups was confirmed by Duncan's multiple range test at p <0.05 level after the ANOVA test.

<실험예 2> 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물이 식이섭취량, 체중증가량 및 식이효율에 미치는 영향
Experimental Example 2 Effect of Bacillus subtilis KCTC 11454BP Antler Fermentation on Dietary Intake, Weight Gain and Dietary Efficiency

발효녹용에 대한 성장 촉진 효과 측정을 경구 투여 시 각 식이섭취, 체중증가량 및 식이효율에 대한 결과(표 15), 식이섭취량은 양성 대조군인 효모가수분해물 300 mg 경구 투여군(PYH-300)이 가장 높은 섭취량을 보였으며, 식이 효율 역시 섭취량이 높았던 군이 비교적 높았으나 대조군(control)을 제외하고 투여군과 positive control(PF-300 및 PYH-300)군 사이에 식이효율에는 유의적인 차이가 없었다. 체중 증가량 역시 대조군에 비해 투여군과 양성 대조군에서 체중 증가량이 높았으나, 투여군과 양성 대조군 사이에는 유의적인 차이가 없었다.
The results of each dietary intake, weight gain and dietary efficiency in oral administration of fermented deer antler were measured as the highest in the yeast hydrolyzate 300 mg orally (PYH-300). Intake rate and dietary efficiency were also higher in the group with higher intake, but there was no significant difference in dietary efficiency between the control group and the positive control group (PF-300 and PYH-300) except the control group. The weight gain was higher in the administration group and the positive control group than in the control group, but there was no significant difference between the administration group and the positive control group.

GroupGroup Diet intake (g/day)Diet intake (g / day) Weight gain (g/day)Weight gain (g / day) FERFER ControlControl 15.1±0.00^h 15.1 ± 0.00 ^h 2.34±0.06^c 2.34 ± 0.06 ^c 0.16±0.007^b 0.16 ± 0.007 ^b NFNF 18.1±0.04^e 18.1 ± 0.04 ^e 3.27±0.52^b 3.27 ± 0.52 ^b 0.18±0.008^a 0.18 ± 0.008 ^a FBFB 18.1±0.00^e 18.1 ± 0.00 ^e 4.05±0.13^a 4.05 ± 0.13 ^a 0.22±0.010^b 0.22 ± 0.010 ^b PF-300PF-300 18.8±0.00^c 18.8 ± 0.00 ^c 3.78±0.18^ab 3.78 ± 0.18 ^ab 0.20±0.009^a 0.20 ± 0.009 ^a PYH-300PYH-300 19.4±0.25^a 19.4 ± 0.25 ^a 3.87±0.35^a 3.87 ± 0.35 ^a 0.20±0.008^a 0.20 ± 0.008 ^a

녹용 비발효물 및 발효물이 SD 래트의 식이 섭취량, 체중 증가 및 식이효율에 미치는 영향Effects of Deer Antlers and Fermented Products on Dietary Intake, Weight Gain and Dietary Efficiency in SD Rats

FER, food efficiency ratio = body weight (g/24 day)/food intake (g/21day)
FER, food efficiency ratio = body weight (g / 24 day) / food intake (g / 21day)

<실험예 3> 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물이 성장 호르몬(GF), IGF-1, ALP 및 BALP에 미치는 영향
Experimental Example 3 Effect of Bacillus subtilis KCTC 11454BP Antler Fermentation on Growth Hormone (GF), IGF-1, ALP and BALP

성장 호르몬(Growth hormone ( GrowthGrowth HormoneHormone ))

상기 표 14의 대조군, 실험군들을 SD 래트들에 각각 경구 투여하고 ELISA법을 이용하여 혈장 내 성장 호르몬의 양을 mouse/rat growth hormone kit(Shibayagi)로 측정하였다. 그 결과, 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물 투여군(FB)이 녹용 비발효 추출물 투여군(NF)에 비하여 혈장 내 성장 호르몬 함량이 약 47.4 % 증가된 것이 확인되었다. 그러나 녹용 발효물 투여군의 성장 호르몬 함량은 양성 대조군인 PF-300군 및 PYH-300 투여군보다 낮았으며, 음성대조군인 saline 투여군과는 유의한 차이가 없었다(표 16).
The control and experimental groups of Table 14 were orally administered to SD rats, respectively, and the amount of growth hormone in plasma was measured by mouse / rat growth hormone kit (Shibayagi) using ELISA. As a result, it was confirmed that the growth hormone content of plasma was increased by about 47.4% in Bacillus subtilis KCTC 11454BP deer antler fermentation administration group (FB) compared with deer antler fermentation extract administration group (NF). However, the growth hormone content of the antler fermented group was lower than the positive control group PF-300 and PYH-300 group, and there was no significant difference from the negative control group saline group (Table 16).

InsulinInsulin -- likelike growthgrowth factorfactor -1(-One( IGFIGF -1)-One)

상기 표 14의 실험군들을 각각 경구 투여하고 ELISA법을 이용하여 mouse/rat IGF-1 kit(Shibayagi, Gunma, Japan) 로 혈장 내 IGF-1 함량을 측정하였다. 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물 투여군(FB) 및 녹용 비발효 추출물 투여군(NF)은 음성대조군인 saline 투여군에 비하여 혈장 내 IGF-1 함량이 상당히 높았다. 또한 녹용 발효물 투여군의 혈장 내 IGF-1 함량이 녹용 비발효 추출물 투여군의 그것보다 약간 높았으나 유의한 차이는 없었다(표 16).
The experimental groups of Table 14 were orally administered, respectively, and the plasma IGF-1 content was measured by mouse / rat IGF-1 kit (Shibayagi, Gunma, Japan) using the ELISA method. Bacillus subtilis KCTC 11454BP deer antler fermentation group (FB) and antler non-fermented extract group (NF) had a significantly higher plasma IGF-1 content than the negative control saline group. In addition, the plasma IGF-1 content of the antler fermented group was slightly higher than that of the antler extract, but there was no significant difference (Table 16).

ALPALP 및 And BALPBALP

혈장 50 ㎕에 0.5% wheat germ agglutin(Sigma, St. Louis, USA) 용액 50 ㎕을 첨가한 뒤 37℃에서 30분간 반응시키고 다시 2% triton-X 용액을 5 ㎕ 첨가하여 잘 혼합한 후 37℃에서 30분간 반응시켰다. 반응액을 3,000 × g에서 4분간 원심 분리 한 후 상징액을 취해 상징액과 혈장내의 alkaine phosphatase(ALP)를 혈액 자동 분석기인 FUJI DRI-CHEM 3500으로 측정하였다.
Add 50 µl of 0.5% wheat germ agglutin (Sigma, St. Louis, USA) solution to 50 µl of plasma, react for 30 minutes at 37 ° C, mix 5 µl of 2% triton-X solution, and mix well. The reaction was carried out for 30 minutes at. The reaction solution was centrifuged at 3,000 × g for 4 minutes, and the supernatant was collected. The supernatant and plasma alkaine phosphatase (ALP) were measured by the automatic blood analyzer FUJI DRI-CHEM 3500.

BALP의 측정은 Rosalki와 Foo(1984)의 방법을 이용하여 실시하였으며, 앞서 FUJI DRI-CHEM 3500으로 측정한 혈장 내 ALP 값에서, 상징액의 ALP 값을 뺀 값을 BALP로 하였다.
BALP was measured using the method of Rosalki and Foo (1984), and BALP was obtained by subtracting the ALP value of the supernatant from the plasma ALP value measured by FUJI DRI-CHEM 3500.

그 결과, 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물 투여군(FB) 및 녹용 비발효 추출물 투여군(NF)은 음성대조군인 saline 투여군에 비하여 ALP 및 BALP 함량이 상당히 높은 것으로 확인되었다. 특히, 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물 투여군은 비발효 녹용 추출물에 비하여 ALP 및 BALP 함량이 각각 28.4 % 및 22.6 % 증가하였다(표 16).
As a result, the Bacillus subtilis KCTC 11454BP antler fermentation administration group (FB) and antler non-fermented extract administration group (NF) was found to be significantly higher in ALP and BALP content than the negative control group saline administration group. In particular, the Bacillus subtilis KCTC 11454BP antler fermentation group increased ALP and BALP contents by 28.4% and 22.6%, respectively, compared to the non-fermented antler extract (Table 16).

GroupGroup GH
(ng/mL)GH
(ng / mL) IGF
(ng/mL)IGF
(ng / mL) ALP
(U/L)ALP
(U / L) BALP
(U/L)BALP
(U / L) ControlControl 14.2±4.514.2 ± 4.5 360.0±22.0360.0 ± 22.0 577.5±127.7577.5 ± 127.7 458.3±159.9458.3 ± 159.9 NFNF 7.6±3.57.6 ± 3.5 464.0±29.1464.0 ± 29.1 683.8±30.8683.8 ± 30.8 575.8±27.5575.8 ± 27.5 FBFB 11.2±1.311.2 ± 1.3 478.3±102478.3 ± 102 878.3±259.6878.3 ± 259.6 705.7±254.9705.7 ± 254.9 PF-300PF-300 23.6±7.823.6 ± 7.8 532.7±75.4532.7 ± 75.4 1149.3±352.21149.3 ± 352.2 884.7±218884.7 ± 218 PYH-300PYH-300 23.9±7.623.9 ± 7.6 510.3±75.1510.3 ± 75.1 763.8±198.7763.8 ± 198.7 624.8±174.8624.8 ± 174.8

<실험예 4> 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물 투여 시 경골 길이 및 성장판 증식 검토
<Experiment 4> Tibia length and growth plate proliferation of Bacillus subtilis KCTC 11454BP antler fermentation

실험 전과 실험 종료 직후의 경골 및 경골 성장판의 길이(도 4)는 ethyl ether로 마취시켜 X-ray mmmography system(GE Senographe 500t, GE Medical Systems, France)로 증감지(minR-2, Kodak, USA)와 필름(CM-H for mammography, Konica, Japan)을 이용하여 촬영하였다. 촬영시 관전압은 32 kVp, 관전류는 32 mAs으로 하였으며 plateform과의 거리는 25 cm였고 15초간 노출하여 촬영하였다. 촬영된 필름은 현상기(QX-130Ⅱ, Konica)로 현상액 31°C, 정착액 29°C에서 현상하고 필름을 Vidar VXR-12 film digitizer(Vidar Systems Co., USA; Resolution 570 dpi, Depth 12)로 스캔하였다. 스캔된 영상은 Image J 프로그램(National Institute of Health, MD, USA)을 이용하여 경골과 경골 성장판의 중앙, 좌, 우 세 부위의 profile curve를 구하고 반치폭의 픽셀수로부터 길이를 계산하였다.
The lengths of the tibia and tibial growth plates before and after the experiment (FIG. 4) were anesthetized with ethyl ether, and then sensitized with an X-ray mmmography system (GE Senographe 500t, GE Medical Systems, France). Photographing was performed using a film (CM-H for mammography, Konica, Japan). The tube voltage was 32 kVp, the tube current was 32 mAs, and the distance from the plateform was 25 cm. Film taken is developed with developer (QX-130Ⅱ, Konica) at developer 31 ° C, fixer 29 ° C and scanned film with Vidar VXR-12 film digitizer (Vidar Systems Co., USA; Resolution 570 dpi, Depth 12) It was. Scanned images were calculated using the Image J program (National Institute of Health, MD, USA) to obtain the profile curves of the middle, left, and right parts of the tibia and the tibial growth plate and calculate the length from the half-pixel width.

표 14의 실험군들을 경구투여한 후 경골 성장판의 길이와 경골의 길이를 측정하였다.After oral administration of the experimental groups of Table 14, the length of the tibial growth plate and the length of the tibia were measured.

녹용 비발효 추출물 및 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효추출물이 모두 음성대조군(saline 투여군) 및 PF-300군보다 경골 성장판의 길이가 증가하였다. 그러나 녹용 비발효 추출물과 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효추출물 간에는 성장판의 길이가 가시적인 차이를 보이지는 않았다. 반면 경골의 경우, 녹용 비발효 추출물 투여군과 음성대조군(saline 투여군)은 차이가 없는데 반하여, 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효추출물 투여군의 경우 음성대조군에 비해 0.28mm, 비발효녹용추출물에 비해 0.25 mm 성장한 것이 관찰되었다. 그러므로 본 발명의 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP 녹용 발효물을 장기간 복용할 경우, 뼈 성장이 상당히 촉진될 것으로 판단된다.
The length of the tibial growth plate was increased in both the antler-free fermentation extract and the Bacillus subtilis KCTC 11454BP antler fermentation extract than the negative control group (saline administration group) and the PF-300 group. However, there was no visible difference in growth plate length between the antler extract and the Bacillus subtilis KCTC 11454BP antler fermentation extract. On the other hand, in the tibia, the antler-free fermented antler extract group and the negative control group (saline-administered group) were not different, whereas the Bacillus subtilis KCTC 11454BP antler fermented extract group was 0.28 mm compared to the negative control group and 0.25 mm compared to the non-fermented antler extract. Growing was observed. Therefore, when the Bacillus subtilis KCTC 11454BP antler fermentation product of the present invention is taken for a long time, it is believed that bone growth will be significantly promoted.

GroupGroup 경골길이 증가량(mm)Tibia length increase (mm) 성장판 길이 증가량 (mm)Growth plate length increase (mm) ControlControl 7.78±0.117.78 ± 0.11 0.57±0.020.57 ± 0.02 NFNF 7.81±0.227.81 ± 0.22 0.68±0.110.68 ± 0.11 FBFB 8.06±0.488.06 ± 0.48 0.68±0.050.68 ± 0.05 PF-300PF-300 7.64±0.727.64 ± 0.72 0.62±0.160.62 ± 0.16 PYH-300PYH-300 8.10±0.408.10 ± 0.40 0.71±0.090.71 ± 0.09

본 발명의 바실러스 서브틸리스 KCTC 11454BP로 발효시킨 녹용을 유효성분으로 함유하는 조성물은 라디칼 소거능 등 항산화 활성 및 성장촉진 효과가 뛰어난바, 이를 포함하는 식품, 화장품, 의약은 노화 등 항산화 관련 현상, 질환 등에 유용하며, 성장기 어린이의 성장촉진에도 유용하다.
The composition containing the deer antler fermented with Bacillus subtilis KCTC 11454BP of the present invention as an active ingredient is excellent in antioxidant activity and growth promoting effect, such as radical scavenging ability, food, cosmetics, and medicines comprising the same, antioxidant related phenomena, diseases It is also useful for promoting growth of young children.

한국생명공학연구원Korea Biotechnology Research Institute KCTC11454KCTC11454 2009011620090116

Claims

Bacillus subtilis Growth promoting food composition containing the extract of antler, fermented with KCTC 11454BP as an active ingredient.

The method of claim 1,
The food is a growth functional food composition, characterized in that the health functional food, health supplements, functional food or nutrients.

Bacillus subtilis Growth promoting pharmaceutical composition containing the extract of antler, fermented with KCTC 11454BP as an active ingredient.

Fermenting the antler with Bacillus subtilis KCTC 11454BP; and
Method for producing a growth promoting food composition comprising the step of extracting the antler fermentation.

The method of claim 4, wherein
The food is a functional food, a health supplement, a functional food or a nutrient.

Fermenting the antler with Bacillus subtilis KCTC 11454BP; and
Method for producing a growth promoting pharmaceutical composition comprising the step of extracting the antler fermentation.