KR101134622B1 - Substained release hydrogels comprising amphotericin B and preparation method thereof - Google Patents

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Abstract

본 발명은 암포테리신 B, L-아르기닌, 점착성 고분자 및 온도감응성 고분자를 포함하는 용해도 개선 및 방출속도 제어능을 갖춘 수화겔에 관한 것으로, 상기 수화겔은 난용성 암포테리신 B의 수상 용해도를 향상시키고, 점막에 부착이 용이하며, 일부 온도의 범위에서 겔화되는 특성을 가지고, 조성비에 따라서 정상세포에 독성을 나타내는 암포테리신 B가 서서히 방출되도록 방출속도를 제어하는 것이 가능하여, 진균감염 치료의 효과를 향상시킬 수 있고, 체액흡수, 박테리아로부터의 감염예방, 투명성, 취급용이성, 저장성 및 멸균이 가능한 특성을 가지므로, 암포테리신 B를 함유하는 진균감염 치료용 패취제로서 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to a hydrogel having solubility improvement and release rate control including amphotericin B, L-arginine, tacky polymer, and temperature sensitive polymer, wherein the hydrogel improves the aqueous solubility of poorly soluble amphotericin B. It is easy to adhere to the mucous membranes, has a gelling characteristic at a certain temperature range, and it is possible to control the release rate so that amphotericin B, which is toxic to normal cells, is gradually released depending on the composition ratio. It can improve the, and has the characteristics that can absorb body fluids, prevent infection from bacteria, transparency, ease of handling, storage and sterilization, it can be usefully used as a patch for treating fungal infections containing amphotericin B.

Description

암포테리신 B의 서방성 수화겔 및 이의 제조방법{Substained release hydrogels comprising amphotericin B and preparation method thereof}Sustained release hydrogels of amphotericin 및 and method for preparing the same {Substained release hydrogels comprising amphotericin B and preparation method

본 발명은 암포테리신 B의 서방성 수화겔 및 상기 수화겔의 제조방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a sustained release hydrogel of amphotericin B and a method for preparing the hydrogel.

암포테리신 B는 폴리엔 매크로라이드(polyene macrolide)계 항진균제로 소수성 특징을 가진 일곱 개의 이중 결합과 친수성 특징을 가진 하이드록실 그룹과 마이코사민 잔기(mycosamin residue)로 구성된다. 암포테리신 B는 거의 모든 진균 감염증에 대한 치료에 사용되는데, 특히 전신성 진균증에 대하여 치료효과가 우수하여 암, 골수이식, 호중구감소, 면역저하, 또는 면역결핍 환자에게 있어 생명을 위협하는 심각한 감염증을 효과적으로 치료할 수 있다. Ampotericin B is a polyene macrolide antifungal agent consisting of seven double bonds with hydrophobic properties and a hydroxyl group with hydrophilic properties and a mycosamin residue. Ampotericin B is used for the treatment of almost all fungal infections, especially for systemic fungal infections, and is a life-threatening serious infection in cancer, bone marrow transplantation, neutropenia, immunodeficiency, or immunodeficiency. Effective treatment

암포테리신 B는 진균류의 막 스테롤인 에르고스테롤과 결합하여 막의 파열을 초래하고, 이온통로의 투과성을 증가시켜 전해질(K+)과 세포질 내 성분이 누출되게 하여 진균세포를 사멸시키는 효과를 나타낸다.Amphotericin B binds to ergosterol, a membrane sterol of fungi, causes membrane rupture, increases permeability of ion channels, and leaks electrolyte (K + ) and components in the cytoplasm to kill fungal cells.

그러나, 암포테리신 B는 정맥 주사시 에르고스테롤과 동일한 기전으로 정상 세포의 콜레스테롤과 결합함으로써 정상세포와 조직에 대하여 독성을 나타내며, 오한, 발열, 조직괴사, 신장독성 등의 부작용을 함께 수반한다. 특히, 상기 암포테리신 B는 혈액투석에 의한 요로의 방출이 어렵고 신장독성이 매우 강하게 나타나므로 소아, 노인 및 면역력이 약한 환자에 사용할 때 각별한 주의를 필요로 한다.However, amphotericin B is toxic to normal cells and tissues by binding to normal cells cholesterol by the same mechanism as ergosterol upon intravenous injection, accompanied by side effects such as chills, fever, tissue necrosis, kidney toxicity. In particular, since amphotericin B is difficult to release the urinary tract by hemodialysis and very strong renal toxicity, it requires special attention when used in children, the elderly and patients with weak immunity.

이와 더불어 상기 암포테리신 B는 pH 6~7에서 물에 불용성이며, pH 2나 pH 11에서 0.1 ㎎/㎖의 매우 낮은 용해도를 가지므로 약학적 제제로 사용하기 위해 염이나 미셀, 에멀젼, 나노입자, 또는 리포솜의 형태로 가용화하여 사용한다.
In addition, the amphotericin B is insoluble in water at pH 6-7, and has a very low solubility of 0.1 mg / ml at pH 2 or pH 11, so that the salt or micelle, emulsion, nanoparticles Solubilized in the form of, or liposomes.

미국 특허 제4,822,777호에서는 암포테리신 B를 염의 형태로 제조하여 용해도를 향상시키는 방법이 개시되어 있다. 구체적으로, 상기 암포테리신 B와 콜레스테롤 황산염만을 사용하여 100~400 nm 크기의 나노입자를 제조하여, 물에서 암포테리신 B가 염을 형성함으로써 수상에 대한 용해도를 향상시킨 것이다. 그러나, 상기 암포테리신 B는 정상세포와 조직에 대하여 독성을 나타내므로 체내에 천천히 흡수되도록 하는 것이 중요한데, 상기 방법은 용해도 개선의 효과는 있지만 체내에 흡수되는 속도를 제어하기 어려운 문제가 있다.
U.S. Patent No. 4,822,777 discloses a process for preparing amphotericin B in the form of a salt to improve solubility. Specifically, using only amphotericin B and cholesterol sulfate, nanoparticles having a size of 100 to 400 nm were prepared, thereby improving the solubility in aqueous phase by forming salts of amphotericin B in water. However, since amphotericin B is toxic to normal cells and tissues, it is important to be slowly absorbed into the body. However, the method has an effect of improving solubility, but it is difficult to control the rate of absorption into the body.

미국 특허 제5,059,591호에서는 암포테리신 B와 콜레스테롤-폴리에틸렌글리콜(PEG)을 사용하여 암포테리신 B의 독성을 감소시키는 방법이 개시되어 있다. 구체적으로, 암포테리신 B를 콜레스테롤-PEG와 염의 형태로 결합시켰으며 이때 콜레스테롤과 결합된 PEG의 특성을 이용하여 체내 순환시간을 증가시켜 독성을 감소시킨 것이다. 그러나, 상기 방법은 암포테리신 B의 독성을 감소시키기에 충분하지 못한 문제가 있다.
US Pat. No. 5,059,591 discloses a method for reducing the toxicity of amphotericin B using amphotericin B and cholesterol-polyethyleneglycol (PEG). Specifically, amphotericin B is combined with cholesterol-PEG in the form of a salt, wherein the characteristics of the PEG-bound PEG are used to increase the circulation time in the body to reduce toxicity. However, this method has a problem that is not sufficient to reduce the toxicity of amphotericin B.

미국 특허 제4,981,690호에서는 암포테리신 B를 봉입한 리포솜의 제조방법이 개시되어 있다. 구체적으로, 인지질과 콜레스테롤을 사용하여 다중막 리포솜 형태로 제조한 것이다. 그러나, 상기 방법은 체내 투여 시 리포좀의 구조가 불안정하기 때문에 쉽게 파괴되어 봉입되어있던 암포테리신 B가 급격히 방출되는 문제가 있다.
US Patent No. 4,981,690 discloses a method for preparing liposomes encapsulated with amphotericin B. Specifically, it is prepared in the form of a multi-membrane liposome using phospholipids and cholesterol. However, the method has a problem that amphotericin B, which was easily destroyed and encapsulated, is rapidly released because the structure of the liposome is unstable during administration in the body.

미국 특허 제5,965,156호에서는 암포테리신 B를 봉입한 리포솜의 제조방법이 개시되어 있다. 상기의 방법은 산성 유기용매에서 암포테리신 B와 음이온성지질인 포스파티딜글리세롤을 이온결합시켜 리포좀을 형성시켜 약물 봉입율을 증가시키고 체내 독성을 감소시킨 것이다. 그러나, 상기의 방법은 포스파티딜글리세롤과 암포테리신 B의 이온결합을 위하여 산성 유기용매를 사용하기 때문에 암포테리신 B의 분해가 촉진되어 손실되는 문제가 있다.
U. S. Patent No. 5,965, 156 discloses a method for preparing liposomes encapsulated with amphotericin B. The above method is to ionize the amphotericin B and the anionic lipid phosphatidylglycerol in an acidic organic solvent to form liposomes to increase the drug encapsulation rate and reduce the toxicity in the body. However, since the above method uses an acidic organic solvent for ionic bonding of phosphatidylglycerol and amphotericin B, there is a problem in that the decomposition of amphotericin B is accelerated and lost.

상기한 바와 같이, 용해도가 낮고 독성이 강한 암포테리신 B를 약학적 제제로 개발하기 위해서는 수성매질에서 고농도로 가용화 시킬 수 있어야 하고, 독성을 감소시키기 위해 체내에 천천히 흡수되도록 약물방출속도를 제어할 수 있는 기술의 개발이 요구되고 있는 실정이다.
As described above, in order to develop low solubility and highly toxic amphotericin B as a pharmaceutical preparation, it must be able to be solubilized in an aqueous medium at high concentrations, and the rate of drug release can be controlled to be slowly absorbed into the body to reduce toxicity. There is a demand for development of technology.

이에, 본 발명자들은 암포테리신 B의 용해도를 향상시키고 약물방출속도를 제어할 수 있는 방법을 연구하던 중, 암포테리신 B, L-아르기닌, 점착성 고분자 및 온도감응성 고분자를 포함하는 수화겔을 제조하고, 상기 수화겔이 인체에 유해한 용해보조제를 사용하지 않고도 암포테리신 B를 고농도로 용해시키고, 암포테리신 B의 방출속도를 제어하여 지속적으로 암포테리신 B를 방출시킬 수 있어 진균감염 치료용 패취제로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
Therefore, the inventors of the present invention while researching a method for improving the solubility of amphotericin B and controlling the drug release rate, preparing a hydrogel containing amphotericin B, L-arginine, adhesive polymer and temperature sensitive polymer and In addition, the hydrogel dissolves amphotericin B at a high concentration without using a dissolution aid that is harmful to the human body, and can continuously release amphotericin B by controlling the release rate of amphotericin B as a patch for treating fungal infections. It was confirmed that the present invention can be usefully, and completed the present invention.

본 발명의 목적은 암포테리신 B의 서방성 수화겔을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a sustained release hydrogel of amphotericin B.

본 발명은 다른 목적은 상기 수화겔의 제조방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for preparing the hydrogel.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 수화겔을 포함하는 진균감염 치료용 패취제를 제공하는 것이다.
Still another object of the present invention is to provide a patch for treating fungal infection comprising the hydrogel.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 암포테리신 B, L-아르기닌, 점착성 고분자 및 온도감응성 고분자를 포함하는 암포테리신 B의 서방성 수화겔을 제공한다:In order to achieve the above object, the present invention provides a sustained-release hydrogel of amphotericin B comprising amphotericin B, L-arginine, a tacky polymer and a temperature sensitive polymer represented by the following formula:

[화학식 1][Formula 1]

Figure 112010051902079-pat00001
.
Figure 112010051902079-pat00001
.

또한, 본 발명은,In addition, the present invention,

증류슈에 암포테리신 B, L-아르기닌, 점착성 고분자 및 온도감응성 고분자를 용해시켜 수용액을 제조하는 단계(단계 1);Preparing an aqueous solution by dissolving amphotericin B, L-arginine, an adhesive polymer, and a temperature sensitive polymer in a distilled shoe (step 1);

상기 수용액을 트레이에 부어 겔 상태의 시트 형태로 성형하는 단계(단계 2); 및Pouring the aqueous solution into a tray to form a gel sheet (step 2); And

상기 시트를 포장하는 단계(단계 3)를 포함하는 상기 암포테리신 B의 서방성 수화겔의 제조방법을 제공한다.It provides a method for producing a sustained-release hydrogel of amphotericin B comprising the step of packaging the sheet (step 3).

나아가, 본 발명은 상기 암포테리신 B의 서방성 수화겔을 포함하는 진균감염 치료용 패취제를 제공한다.
Furthermore, the present invention provides a patch for treating fungal infections comprising the sustained release hydrogel of amphotericin B.

본 발명에 따르면, 상기 수화겔은 L-아르기닌, 점착성 고분자 및 온도감응성 고분자를 포함하여, 난용성 암포테리신 B의 수상 용해도를 향상시키고, 점막에 부착이 용이하며, 일부 온도의 범위에서 겔화되는 특성을 가지고, 조성비에 따라서 정상세포에 독성을 나타내는 암포테리신 B가 서서히 방출되도록 방출속도를 제어하는 것이 가능하여, 진균감염 치료의 효과를 향상시킬 수 있고, 체액흡수, 박테리아로부터의 감염예방, 투명성, 취급용이성, 저장성 및 멸균이 가능한 특성을 가지므로, 암포테리신 B를 함유하는 진균감염 치료용 패취제로서 유용하게 사용될 수 있다.
According to the present invention, the hydrogel includes L-arginine, a tacky polymer and a temperature sensitive polymer, to improve the water solubility of poorly soluble amphotericin B, and to easily adhere to mucous membranes, and to gel at a range of temperatures. According to the composition ratio, it is possible to control the release rate so that amphotericin B, which is toxic to normal cells, is gradually released, thereby improving the effect of fungal infection treatment, absorbing fluids, preventing infection from bacteria, and transparency. Because of its ease of handling, storage and sterilization, it can be usefully used as a patch for treating fungal infections containing amphotericin B.

도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 암포테리신 B의 농도를 측정하기 위한 검량선을 측정한 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 암포테리신 B에 L-아르기닌 첨가에 따른 용해도의 변화를 나타내는 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 폴록사머 407의 졸(sol)-겔(gel)-졸(sol) 상전이온도를 측정하기 위한 인버팅(inverting) 측정법을 나타내는 사진이다.
도 4는 본 발명의 일실시예에 따른 폴록사머 407 단독 또는 암포테리신 B 및 L-아르기닌 첨가에 따른 폴록사머 407의 졸-겔-졸 상전이온도의 변화를 나타내는 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일실시예에 따른 암포테리신 B, L-아르기닌 및 카보폴 940 첨가에 따른 폴록사머 407의 졸-겔-졸 상전이온도의 변화를 나타내는 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일실시예에 따른 L-아르기닌 및 폴록사머 407이 암포테리신 B의 방출량에 미치는 영향을 나타내는 그래프이다.
도 7은 본 발명의 일실시예에 따른 카보폴 940이 암포테리신 B의 방출량에 미치는 영향을 나타내는 그래프이다.
1 is a graph measuring a calibration curve for measuring the concentration of amphotericin B according to an embodiment of the present invention.
Figure 2 is a graph showing the change in solubility according to the addition of L- arginine to amphotericin B according to an embodiment of the present invention.
FIG. 3 is a photograph showing an inverting measurement method for measuring a sol-gel-sol phase transition temperature of poloxamer 407 according to an embodiment of the present invention.
4 is a graph showing the change in the sol-gel-sol phase transition temperature of poloxamer 407 alone or poloxamer 407 according to the addition of amphotericin B and L-arginine according to an embodiment of the present invention.
FIG. 5 is a graph showing the change of the sol-gel-sol phase transition temperature of poloxamer 407 according to the addition of amphotericin B, L-arginine and carbopol 940 according to an embodiment of the present invention.
6 is a graph showing the effect of L-arginine and poloxamer 407 on the release amount of amphotericin B according to an embodiment of the present invention.
7 is a graph showing the effect of carbopol 940 on the amount of amphotericin B released according to an embodiment of the present invention.

본 명세서에서 용어 "%(W/V)"는 무게/부피 농도의 백분율을 의미한다.
As used herein, the term "% (W / V)" refers to the percentage of weight / volume concentration.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 암포테리신 B, L-아르기닌, 점착성 고분자 및 온도감응성 고분자를 포함하는 암포테리신 B의 서방성 수화겔을 제공한다:The present invention provides a sustained-release hydrogel of amphotericin B comprising amphotericin B, L-arginine, a tacky polymer, and a temperature sensitive polymer represented by Formula 1 below:

Figure 112010051902079-pat00002
Figure 112010051902079-pat00002

본 발명에 따른 수화겔에 있어서, 상기 암포테리신 B의 함량은 1~10%(W/V) 이고, L-아르기닌의 함량은 1~20%(W/V)이며, 점착성 고분자의 함량은 0.1~1%(W/V)이고, 온도감응성 고분자의 함량은 10~50%(W/V)인 것이 바람직하다.
In the hydrogel according to the present invention, the content of amphotericin B is 1 to 10% (W / V), the content of L-arginine is 1 to 20% (W / V), and the content of the tacky polymer is 0.1. It is preferably 1% (W / V), and the content of the temperature sensitive polymer is 10-50% (W / V).

본 발명에 따른 수화겔에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 암포테리신 B는 진균감염에 대해 항진균 역할을 하며, 당업계에 널리 알려진 방법에 따라 제조된 것 또는 시판되는 것을 사용할 수 있다. 이때, 상기 암포테리신 B의 함량은 1~10%(W/V)인 것이 바람직한 바, 1%(W/V) 미만인 경우에는 치료 효과를 충분히 향상시킬 수 없는 문제가 있고, 10%(W/V)를 초과하는 경우에는 더 이상 암포테리신 B의 증가에 따른 치료 효과 향상이 일어나지 않아 암포테리신 B가 낭비되는 문제가 있다.
In the hydrogel according to the present invention, amphotericin B represented by Chemical Formula 1 serves as an antifungal role against fungal infections, and those prepared according to methods well known in the art may be used. At this time, the content of the amphotericin B is preferably 1 to 10% (W / V), when less than 1% (W / V) there is a problem that can not sufficiently improve the therapeutic effect, 10% (W / V) in excess of the increase in the treatment effect due to the increase of amphotericin B no longer causes a problem that the amphotericin B is wasted.

본 발명에 따른 수화겔에 있어서, 하기 화학식 2로 표시되는 L-아르기닌은 수성매질에 대해서 매우 난용성인 암포테리신 B를 가용화시키는 역할을 하며, 당업계에서 널리 알려진 방법에 따라 제조된 것 또는 시판되는 것을 사용할 수 있다:In the hydrogel according to the present invention, L-arginine represented by the following formula (2) serves to solubilize amphotericin B, which is very poorly soluble in an aqueous medium, and prepared or commercially available according to methods well known in the art. You can use one:

Figure 112010051902079-pat00003
Figure 112010051902079-pat00003

이때, 상기 L-아르기닌의 함량은 1~20%(W/V)인 것이 바람직한 바, 1%(W/V) 미만인 경우에는 암포테리신 B를 충분히 용해시키지 못하는 문제가 있고, 20%(W/V)를 초과하는 경우에는 더 이상 암포테리신 B의 용해도 개선 효과가 일어나지 않아 L-아르기닌이 낭비되는 문제가 있다.
At this time, the content of L-arginine is preferably 1 ~ 20% (W / V) bar, when less than 1% (W / V) there is a problem that does not sufficiently dissolve amphotericin B, 20% (W / V) in excess of the solubility of amphotericin B no longer occurs so there is a problem that L- arginine is wasted.

본 발명에 따른 수화겔에 있어서, 상기 온도감응성 고분자는 온도의 변화에 따라 졸(sol) 또는 겔(gel)의 형태로 가역적으로 변하는 특성을 갖는 고분자로서, 일정 범위의 온도에서는 겔의 상태로 존재하는 특징이 있어 수화겔 상태를 유지시키는 역할을 하며, 또한 암포테리신 B의 방출량을 증가시킨다.In the hydrogel according to the present invention, the temperature-sensitive polymer is a polymer having a characteristic of reversibly changing in the form of a sol or a gel in accordance with a change in temperature, which is present in the state of a gel at a range of temperatures. It is characterized by maintaining the hydrogel state, and also increases the amount of amphotericin B released.

본 발명에 따른 수화겔에 있어서, 상기 온도감응성 고분자로는 폴록사머, 폴리에틸렌옥사이드, 알킬-폴리에틸렌옥사이드, 폴리(에틸렌옥사이드/프로필렌옥사이드)의 불규칙 공중합체, 폴리비닐메틸에테르, 폴리포스파젠, 폴리에틸렌글리콜 등을 사용할 수 있고, 바람직하게는 폴록사머를 사용할 수 있다. 더욱 바람직하게는, 낮은 독성과 높은 용해력을 가지며 약물 방출 특성이 뛰어나다는 관점에서, 다양한 치료적 제제에서 약물 전달 매개체로 사용되고 있는 하기 화학식 3으로 표시되는 폴록사머 407을 사용할 수 있다:In the hydrogel according to the present invention, the temperature sensitive polymer is poloxamer, polyethylene oxide, alkyl-polyethylene oxide, irregular copolymer of poly (ethylene oxide / propylene oxide), polyvinyl methyl ether, polyphosphazene, polyethylene glycol, etc. May be used, and preferably poloxamer may be used. More preferably, in view of low toxicity, high solubility and excellent drug release properties, poloxamer 407 represented by the following formula (3) which is used as a drug delivery vehicle in various therapeutic agents may be used:

Figure 112010051902079-pat00004
Figure 112010051902079-pat00004

구체적으로, 상기 폴록사머 407은 친수성을 나타내는 폴리에틸렌옥사이드(PEO)와 소수성을 나타내는 폴리프로필렌옥사이드(PPO)로 구성된 비이온성의 PEO-PPO-PEO 삼중블록 공중합체로서 분자량은 4400-3770-4400이다. 상기 폴록사머 407은 본 발명의 수화겔 상태를 유지시키는 역할 및 암포테리신 B의 방출량을 증가시키는 역할을 한다.Specifically, the poloxamer 407 is a nonionic PEO-PPO-PEO triblock copolymer composed of hydrophilic polyethylene oxide (PEO) and hydrophobic polypropylene oxide (PPO) and has a molecular weight of 4400-3770-4400. The poloxamer 407 serves to maintain the hydrogel state of the present invention and to increase the release amount of amphotericin B.

본 발명에 따른 수화겔에 있어서, 상기 온도감응성 고분자의 함량은 10~50%(W/V)인 것이 바람직하다. 만일, 상기 온도감응성 고분자의 함량이 10%(W/V) 미만인 경우에는 겔 형태를 유지하지 못하는 문제가 있고, 50%(W/V)를 초과하는 경우에는 수용액을 준비하는데 어려움이 있다.
In the hydrogel according to the present invention, the content of the temperature sensitive polymer is It is preferable that it is 10 to 50% (W / V). If the content of the temperature-sensitive polymer is less than 10% (W / V) there is a problem in maintaining the gel form, if it exceeds 50% (W / V) it is difficult to prepare an aqueous solution.

본 발명에 따른 수화겔에 있어서, 상기 점착성 고분자는 본 발명의 수화겔에 점착력을 부여하고 암포테리신 B의 방출량을 감소시키는 역할을 한다. 상기 점착성 고분자로는 카보폴, 키토산, 카르복시메틸셀룰로오즈, 폴리브렌, 폴리라이신, 폴리비닐메틸이미다졸, 폴리비닐설페이트, 헤파린, 폴리에틸렌피롤리돈 등을 사용할 수 있고, 바람직하게는 카보폴을 사용할 수 있다. 더욱 바람직하게는, 점막부착형 제형 설계를 위해 낮은 독성을 가지고 낮은 농도로도 높은 점도를 나타낸다는 관점에서, 점막부착성 제제에서 많이 응용되고 있는 하기 화학식 4로 표시되는 카보폴 940을 사용할 수 있다:In the hydrogel according to the present invention, the adhesive polymer serves to impart adhesion to the hydrogel of the present invention and reduce the amount of amphotericin B released. Carbopol, chitosan, carboxymethylcellulose, polybrene, polylysine, polyvinylmethylimidazole, polyvinyl sulfate, heparin, polyethylenepyrrolidone, etc. may be used as the adhesive polymer, and preferably carbopol may be used. Can be. More preferably, Carbopol 940 represented by the following general formula (4) may be used in view of low toxicity and high viscosity even at low concentrations for the design of mucoadhesive formulations. :

Figure 112010051902079-pat00005
Figure 112010051902079-pat00005

본 발명에 따른 수화겔에 있어서, 상기 점착성 고분자의 함량은 0.1~1%(W/V)인 것이 바람직하다. 만일 상기 점착성 고분자의 함량이 0.1%(W/V) 미만이면 점착력을 충분히 향상시킬 수 없는 문제가 있고, 1%(W/V)를 초과하는 경우에는 점도가 너무 높아지는 문제가 있다.
In the hydrogel according to the present invention, the content of the adhesive polymer is preferably 0.1 to 1% (W / V). If the content of the adhesive polymer is less than 0.1% (W / V) there is a problem that can not sufficiently improve the adhesive force, if the content exceeds 1% (W / V) there is a problem that the viscosity is too high.

또한, 본 발명은 상기 암포테리신 B의 서방성 수화겔의 제조방법을 제공한다.The present invention also provides a method for preparing the sustained release hydrogel of amphotericin B.

구체적으로, 본 발명에 따른 수화겔의 제조방법은 증류슈에 암포테리신 B, L-아르기닌, 점착성 고분자 및 온도감응성 고분자를 용해시켜 수용액을 제조하는 단계(단계 1);Specifically, the method for preparing a hydrogel according to the present invention comprises the steps of dissolving amphotericin B, L-arginine, adhesive polymer and temperature sensitive polymer in a distilled shoe to prepare an aqueous solution (step 1);

상기 수용액을 트레이에 부어 겔 상태의 시트 형태로 성형하는 단계(단계 2); 및Pouring the aqueous solution into a tray to form a gel sheet (step 2); And

상기 시트를 포장하는 단계(단계 3)를 포함한다.
Packing the sheet (step 3).

이하, 본 발명을 단계별로 더욱 구체적으로 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail step by step.

본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 암포테리신 B, L-아르기닌, 온도감응성 고분자 및 점착성 고분자를 증류수에 용해시켜 수용액을 제조하는 단계이다.In the production method according to the present invention, step 1 is a step of dissolving amphotericin B, L-arginine, a temperature sensitive polymer and a tacky polymer in distilled water to prepare an aqueous solution.

이때, 상기 암포테리신 B의 함량은 전체 수용액에 대하여 1~10%(W/V) 이고, L-아르기닌의 함량은 1~20%(W/V)이며, 온도감응성 고분자의 함량은 10~50%(W/V)이고, 점착성 고분자의 함량은 0.1~1%(W/V)인 것이 바람직하다.
At this time, the content of amphotericin B is 1 ~ 10% (W / V) with respect to the total aqueous solution, the content of L- arginine is 1 ~ 20% (W / V), the content of the temperature-sensitive polymer is 10 ~ It is preferably 50% (W / V), and the content of the tacky polymer is 0.1 to 1% (W / V).

본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 온도감응성 고분자로는 폴록사머, 폴리에틸렌옥사이드, 알킬-폴리에틸렌옥사이드, 폴리(에틸렌옥사이드/프로필렌옥사이드)의 불규칙 공중합체, 폴리비닐메틸에테르, 폴리포스파젠, 폴리에틸렌글리콜 등을 사용할 수 있고, 바람직하게는 폴록사머를 사용할 수 있다. 더욱 바람직하게는, 낮은 독성과 높은 용해력을 가지며 약물 방출 특성이 뛰어나다는 관점에서, 다양한 치료적 제제에서 약물 전달 매개체로 사용되고 있는 상기 화학식 3으로 표시되는 폴록사머 407을 사용할 수 있다.In the production method according to the present invention, the temperature sensitive polymer is poloxamer, polyethylene oxide, alkyl-polyethylene oxide, irregular copolymer of poly (ethylene oxide / propylene oxide), polyvinyl methyl ether, polyphosphazene, polyethylene glycol Etc. can be used, Preferably poloxamer can be used. More preferably, in view of low toxicity, high solubility, and excellent drug release properties, poloxamer 407 represented by Formula 3, which is used as a drug delivery medium in various therapeutic agents, may be used.

본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 점착성 고분자로는 카보폴, 키토산, 카르복시메틸셀룰로오즈, 폴리브렌, 폴리라이신, 폴리비닐메틸이미다졸, 폴리비닐설페이트, 헤파린, 폴리에틸렌피롤리돈 등을 사용할 수 있고, 바람직하게는 카보폴을 사용할 수 있다. 더욱 바람직하게는, 점막부착형 제형 설계를 위해 낮은 독성을 가지고 낮은 농도로도 높은 점도를 나타낸다는 관점에서, 점막부착성 제제에서 많이 응용되고 있는 상기 화학식 4로 표시되는 카보폴 940을 사용할 수 있다.
In the production method according to the present invention, the adhesive polymer can be used carbopol, chitosan, carboxymethyl cellulose, polybrene, polylysine, polyvinylmethylimidazole, polyvinyl sulfate, heparin, polyethylenepyrrolidone, etc. And preferably Carbopol. More preferably, in view of low toxicity and high viscosity even at low concentrations for the design of mucoadhesive formulations, Carbopol 940 represented by Formula 4, which is widely applied in mucoadhesive preparations, may be used. .

제조된 수용액은 원심분리를 한 후, 가라앉은 침전물을 제외한 상등액 부분을 취하는 과정을 추가로 수행하여 암포테리신 B가 균일하게 용해된 수용액을 제조할 수 있다.
The prepared aqueous solution may be further centrifuged, followed by a process of taking a portion of the supernatant except for the settled precipitate, thereby preparing an aqueous solution in which amphotericin B is uniformly dissolved.

본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 얻어진 수용액을 트레이에 부어, 겔 상태의 시트 형태로 만드는 단계이다. 구체적으로는, 상기 단계 1에서 얻어진 수용액을 트레이에 붓고 항온수조에 방치하면 온도감응성 고분자의 특성에 의해 물리적 겔화가 되어 트레이 안에서 시트가 형성된다.In the production method according to the invention, the step 2 is a step of pouring the aqueous solution obtained in the step 1 to a tray to form a sheet of gel state. Specifically, when the aqueous solution obtained in step 1 is poured into a tray and left in a constant temperature water bath, the gel is physically gelled by the characteristics of the temperature sensitive polymer to form a sheet in the tray.

본 발명에 따른 제조방법에 있어서 상기 트레이는 용도에 따라 일반적인 모양 또는 다양한 크기, 두께 및 모양으로 제작된 것을 사용할 수 있다.
In the manufacturing method according to the present invention, the tray may be manufactured in a general shape or various sizes, thicknesses and shapes according to the use.

본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 단계 3은 상기 단계 2에서 얻어진 시트 형태의 수화겔을 포장하는 단계이다. 상기 포장에는 통상의 포장 재료를 사용할 수 있으며, 예를 들어 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리염화비닐, 나일론 또는 폴리에스테르 등과 같은 고분자 필름이나 알루미늄 박, 또는 알루미늄과 고분자 필름의 라미네이트를 사용할 수 있다.In the manufacturing method according to the present invention, step 3 is a step of packaging the hydrogel in the form of a sheet obtained in step 2. Conventional packaging materials may be used for the packaging, and for example, a polymer film such as polyethylene, polypropylene, polyvinyl chloride, nylon or polyester, aluminum foil, or a laminate of aluminum and a polymer film may be used.

상기와 같이 포장된 수화겔은 방사선 조사를 통하여 멸균하는 단계를 더 포함할 수 있다. 이때, 사용되는 방사선은 감마선, 자외선, 전자선 등을 사용할 수 있다.
The hydrogel packaged as described above may further include sterilization through irradiation. In this case, the radiation used may be gamma rays, ultraviolet rays, electron beams, and the like.

나아가, 본 발명은 상기 암포테리신 B를 포함하는 수화겔을 이용한 진균감염 치료용 패취제를 제공한다. Furthermore, the present invention provides a patch for treating fungal infections using a hydrogel containing amphotericin B.

본 발명에 따른 수화겔은, L-아르기닌이 함유되어 난용성 암포테리신 B의 수상 용해도를 약 2,600배 향상시키고(표 1 및 도 2 참조), 점착성 고분자가 함유되어 점막에 부착이 용이하며, 온도감응성 고분자가 함유되어 일정 온도의 범위에서 겔화가 되는 특성을 가지고(표 2, 도 4 및 도 5 참조), 조성비에 따라서 정상세포에 독성을 나타내는 암포테리신 B가 서서히 방출되도록 방출속도를 제어하는 것이 가능하여(표 3, 도 6 및 도 7 참조), 진균감염 치료의 효과를 향상시킬 수 있다. 또한 수화겔의 특성인 체액 흡수, 박테리아로부터의 감염예방, 투명성, 취급의 용이성, 저장성 및 멸균이 가능한 특성을 가지므로, 진균감염 치료용 패취제로 유용하게 사용될 수 있다.
The hydrogel according to the present invention contains L-arginine to improve the aqueous solubility of poorly soluble amphotericin B by about 2,600 times (see Table 1 and FIG. 2), and contains an adhesive polymer to easily adhere to the mucosa, and temperature It contains a sensitive polymer and gelled in a certain temperature range (see Tables 2, 4 and 5), and controls the release rate so that amphotericin B, which is toxic to normal cells, is gradually released depending on the composition ratio. It is possible (see Tables 3, 6 and 7) to enhance the effectiveness of fungal infection treatment. In addition, the hydrogel has a characteristic of absorbing body fluids, preventing infection from bacteria, transparency, ease of handling, storage and sterilization, and thus may be useful as a patch for treating fungal infections.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 이에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, an Example demonstrates this invention further in detail. However, the following examples are merely to illustrate the present invention, but the content of the present invention is not limited thereto.

<< 실시예Example 1>  1> 암포테리신Amphotericin B, L-아르기닌,  B, L-arginine, 카보폴Cabopol 940 및  940 and 폴록사머Poloxamer 407이 함유된  Contains 407 수화겔의Hydrogel 제조 Produce

암포테리신 B는 Duchefa Biochemical사에서 구입하였고, L-아르기닌은 Sigma-Aldrich사에서 구입하였으며, 카보폴 940은 Lubrizol Inc.에서 구입하였고, 폴록사머 407은 BASF사에서 구입하였다.Ampotericin B was purchased from Duchefa Biochemical, L-arginine was purchased from Sigma-Aldrich, Carbopol 940 was purchased from Lubrizol Inc., and Poloxamer 407 was purchased from BASF.

증류수에 암포테리신 B 10 W/V%, L-아르기닌 10 W/V%, 카보폴 940 0.1 W/V% 및 폴록사머 407 20 W/V%를 넣고 충분히 용해되도록 3일간 상온에서 교반한 다음 3,000 rpm으로 5분간 원심분리 후 가라앉은 침전물을 제외한 상등액 부분을 주사기로 취하였다. 상기 취한 용액을 0.45 ㎛ 필터로 여과하여 암포테리신 B가 균일하게 용해된 수용액을 제조하였다. 상기 수용액을 형틀에 붓고 밀봉한 다음 37℃ 항온수조에 약 1시간 정도 담가 놓아 진균감염 치료용 수화겔을 만들었다.
Add amphotericin B 10 W / V%, L-arginine 10 W / V%, Carbopol 940 0.1 W / V%, and Poloxamer 407 20 W / V% in distilled water, and stir at room temperature for 3 days to ensure sufficient dissolution. After centrifugation at 3,000 rpm for 5 minutes, the supernatant portion, except for the settled precipitate, was taken by syringe. The solution taken was filtered with a 0.45 μm filter to prepare an aqueous solution in which amphotericin B was uniformly dissolved. The aqueous solution was poured into a mold, sealed and soaked in a constant temperature water bath at 37 ° C. for about 1 hour to prepare a hydrogel for treating fungal infections.

<실시예 2> 폴록사머 407의 농도를 달리한 수화겔의 제조Example 2 Preparation of Hydrogels with Different Concentrations of Poloxamer 407

폴록사머 407를 각각 25 W/V%, 30 W/V% 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1의 방법과 동일한 방법으로 수행하여 진균감염 치료용 수화겔을 만들었다.
A hydrogel for treating fungal infection was prepared in the same manner as in Example 1, except that poloxamer 407 was used at 25 W / V% and 30 W / V%, respectively.

<실시예 3> 카보폴의 농도를 달리한 수화겔의 제조Example 3 Preparation of Hydrogels with Different Carbopol Concentrations

카보폴 940을 0.2 W/V% 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1의 방법과 동일한 방법으로 수행하여 진균감염 치료용 수화겔을 만들었다.
Carbopol 940 was used in the same manner as in Example 1 except for using 0.2 W / V% to prepare a hydrogel for treating fungal infections.

<실시예 4> L-아르기닌의 농도를 달리한 수화겔의 제조Example 4 Preparation of Hydrogels with Different L-Arginine Concentrations

L-아르기닌을 20 W/V% 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1의 방법과 동일한 방법으로 수행하여 진균감염 치료용 수화겔을 만들었다.
A hydrogel for treating fungal infection was prepared by the same method as in Example 1 except for using 20 W / V% of L-arginine.

<실험예 1> 암포테리신 B의 용해도 측정Experimental Example 1 Measurement of Solubility of Ampoterisin B

<실험예 1-1> 암포테리신 B의 농도 측정을 위한 검량선 작성Experimental Example 1-1 Calibration curve for measuring the concentration of amphotericin B

암포테리신 B의 농도를 측정하기 위해서 디메틸설폭사이드(DMSO) 용매에 암포테리신 B를 완전히 용해시킨 후 계열희석(serial dilution)하여 농도가 1, 5, 10, 25 mg/ml인 표준용액을 제조하였다. 이를 UV-VIS 분광기(Mini 1240, Schimadzu, 일본)를 이용하여 파장 405 nm에서의 흡광도를 측정하였고, 그 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1에서 얻은 검량선의 직선회귀식을 하기 수학식 1로 나타내었고, 하기의 실험들에서 암포테리신 B의 농도를 산출하는데 사용하였다.
In order to measure the concentration of amphotericin B, amphotericin B was completely dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) solvent, followed by serial dilution to prepare a standard solution having a concentration of 1, 5, 10, 25 mg / ml. Prepared. The absorbance at wavelength 405 nm was measured using a UV-VIS spectrometer (Mini 1240, Schimadzu, Japan), and the results are shown in FIG. 1. The linear regression equation of the calibration curve obtained in FIG. 1 is represented by Equation 1 below, and used to calculate the concentration of amphotericin B in the following experiments.

Figure 112010051902079-pat00006
Figure 112010051902079-pat00006

<실험예 1-2> 물에 대한 암포테리신 B의 용해도 측정Experimental Example 1-2 Measurement of Solubility of Ampoterisin B in Water

증류수에 암포테리신 B를 과량 첨가한 수용액을 3 일간 상온에서 교반하고, 3,000 rpm으로 5 분간 원심분리하였다. 원심분리 후 가라앉은 침전물을 제외한 상등액 부분에서 0.8~0.9 ml를 주사기로 취하여 암포테리신 B 포화용액 샘플을 만들고, 실험예 1-1과 같은 방법으로 수행하여 암포테리신 B의 용해도를 측정한 결과 1 ㎍/ml로 수성매질에 대해서 매우 난용성임을 알 수 있었다.
An aqueous solution in which an amphotericin B was added to distilled water was stirred at room temperature for 3 days, and centrifuged at 3,000 rpm for 5 minutes. After centrifugation, 0.8 to 0.9 ml of the supernatant except for the settled precipitate was taken with a syringe to prepare a sample of amphotericin B, and the solubility of amphotericin B was measured by the same method as Experimental Example 1-1. 1 μg / ml was found to be very poorly soluble in aqueous media.

<실험예 1-3> L-아르기닌 첨가에 따른 암포테리신 B의 용해도 측정Experimental Example 1-3 Measurement of Solubility of Ampoterisin B with Addition of L-Arginine

증류수에 과량의 암포테리신 B 및 0.1 M, 0.2 M, 0.5 M, 1.0 M의 L-아르기닌을 첨가한 수용액을 사용한 것을 제외하고는 실험예 1-2와 같은 방법으로 수행하여 용액 샘플을 만들고, 실험예 1-1과 같은 방법으로 수행하여 암포테리신 B의 용해도를 측정한 결과를 표 1 및 도 2에 나타내었다.A solution sample was prepared by the same method as Experimental Example 1-2, except that an aqueous solution in which excess amphotericin B and 0.1 M, 0.2 M, 0.5 M, and 1.0 M of L-arginine was added to distilled water was used. The results of measuring the solubility of amphotericin B by the same method as in Experimental Example 1-1 are shown in Table 1 and FIG. 2.

R의 농도 (M)Concentration of R (m) AmB의 용해도 (mg/ml)Solubility of AmB (mg / ml) 0.10.1 0.20.2 0.20.2 0.50.5 0.50.5 1.31.3 1.01.0 2.62.6 R: L-아르기닌, AmB: 암포테리신 B R: L-arginine, AmB: amphotericin B

표 1 및 도 2에 나타난 바와 같이, L-아르기닌이 첨가된 농도에 따라서 암포테리신 B의 용해도가 직선적으로 비례하여 향상되었음을 확인할 수 있었다. 본 결과로부터 1 M의 L-아르기닌을 첨가한 경우에 암포테리신 B의 용해도는 약 2.6 mg/ml로 상기 실험예 1-2의 물에 대한 암포테리신 B의 용해도 1 ㎍/ml에 비해 약 2,600배나 증가함을 확인할 수 있었다.
As shown in Table 1 and Figure 2, it was confirmed that the solubility of amphotericin B was linearly proportional to the concentration of L-arginine added. From this result, when 1M of L-arginine was added, the solubility of amphotericin B was about 2.6 mg / ml, and the solubility of amphotericin B in water of Experimental Example 1-2 was about 1 µg / ml. 2,600 times increase was confirmed.

<< 실험예Experimental Example 2> 첨가물에 따른  2> according to additives 수화겔의Hydrogel 상전이온도 측정 Phase transition temperature measurement

증류수에 20%(W/V), 25%(W/V), 30%(W/V)의 폴록사머 407(BASF, 독일)을 가한 뒤 2일 동안 4℃의 수조에서 보관하여 완전히 용해된 폴록사머 407 용액 샘플들을 제조하고, 하기와 같은 처리를 수행하였다.20% (W / V), 25% (W / V) and 30% (W / V) of Poloxamer 407 (BASF, Germany) were added to distilled water and then stored in a water bath at 4 ° C for 2 days to completely dissolve. Poloxamer 407 solution samples were prepared and subjected to the following treatment.

1군) 폴록사머 407 용액 단독Group 1) Poloxamer 407 solution alone

2군) 폴록사머 407 용액에 암포테리신 B 1 mg/ml 첨가Group 2) Add 1 mg / ml of amphotericin B to poloxamer 407 solution

3군) 폴록사머 407 용액에 암포테리신 B 1 mg/ml 및 L-아르기닌 1 M 첨가Group 3) Add 1 mg / ml of amphotericin B and 1 M of L-arginine to poloxamer 407 solution

4군) 폴록사머 407 용액에 암포테리신 B 1 mg/ml, L-아르기닌 1 M 및 카보폴 940 0.1%(W/V) 첨가Group 4) Add 1 mg / ml of amphotericin B, 1 M of L-arginine and 0.1% (W / V) of Carbopol 940 to poloxamer 407 solution.

5군) 폴록사머 407 용액에 암포테리신 B 1 mg/ml, L-아르기닌 1 M 및 카보폴 940 0.2%(W/V) 첨가Group 5) Add 1 mg / ml of amphotericin B, 1 M of L-arginine and 0.2% (W / V) of Carbopol 940 to poloxamer 407 solution.

상기 처리된 폴록사머 407 용액 샘플들을 10℃의 항온 수조에 넣고 온도를 높여가면서 상전이온도를 측정하였다. 상전이온도를 측정한 방법은 도 3의 인버팅(inverting) 방법으로 측정하였는데, 상전이온도의 오차를 줄이기 위하여 겔에 온도계를 직접 넣고 측정하였고, 그 결과를 표 2, 도 4 및 도 5에 나타내었다.The treated poloxamer 407 solution samples were placed in a constant temperature water bath at 10 ° C. and the phase transition temperature was measured while increasing the temperature. The method of measuring the phase transition temperature was measured by the inverting method of FIG. 3. In order to reduce the error of the phase transition temperature, a thermometer was directly inserted into the gel and measured, and the results are shown in Tables 2, 4, and 5. .

구분division Pol(W/V%)Pol (W / V%) AmB(mg/ml)AmB (mg / ml) R(M)R (M) C(W/V%)C (W / V%) 겔화온도(℃)Gelation temperature (℃)
1군

Group 1
2020 -- -- -- 28~6028-60
2525 -- -- -- 23~7923-79 3030 -- -- -- 20.5~84.520.5-84.5
2군

Group 2
2020 1One -- -- 23~5723-57
2525 1One -- -- 19~7319-73 3030 1One -- -- 15.5~815.5 ~ 8
3군

Group 3
2020 1One 1One -- 25.8~5825.8-58
2525 1One 1One -- 20~7020-70 3030 1One 1One -- 17~8017-80
4군

4th group
2020 1One 1One 0.10.1 24~6224 ~ 62
2525 1One 1One 0.10.1 18.5~7418.5-74 3030 1One 1One 0.10.1 12~8612-86
5군

5 groups
2020 1One 1One 0.20.2 23~6823-68
2525 1One 1One 0.20.2 16~7516-75 3030 1One 1One 0.20.2 9~889-88 AmB: 암포테리신 B, R: L-아르기닌, Pol: 폴록사머 407, C: 카보폴 940 AmB: amphotericin B, R: L-arginine, Pol: poloxamer 407, C: carbopol 940

도 4는 폴록사머 407 단독 또는 암포테리신 B 및 L-아르기닌 첨가에 따른 폴록사머 407의 졸-겔-졸 상전이온도의 변화를 나타내는 그래프이고, 도 5는 암포테리신 B, L-아르기닌 및 카보폴 940 첨가에 따른 폴록사머 407의 졸-겔-졸 상전이온도를 나타내는 그래프이다.
FIG. 4 is a graph showing the change of sol-gel-sol phase transition temperature of poloxamer 407 with poloxamer 407 alone or with addition of amphotericin B and L-arginine, and FIG. 5 is amphotericin B, L-arginine and carbo It is a graph showing the sol-gel-sol phase transition temperature of poloxamer 407 with the addition of the pole 940.

표 2, 도 4 및 도 5에 나타난 바와 같이, 폴록사머 407 20%(W/V) 단독 용액에서의 겔화 온도의 범위는 28~60℃이었고, 암포테리신 B를 첨가한 폴록사머 407 20%(W/V) 용액에서의 겔화 온도의 범위는 23~57℃ 나타났다. 이것은, 소수성 약물의 존재로 인해 고분자의 소수성 회합이 더욱 증진되어 상전이온도가 낮아진 것으로 사료된다. As shown in Table 2, Figures 4 and 5, the gelation temperature in the poloxamer 407 20% (W / V) alone solution was 28 ~ 60 ℃, poloxamer 407 20% with amphotericin B added The gelation temperature in the (W / V) solution ranged from 23 to 57 ° C. It is considered that the hydrophobic association of the polymer is further enhanced due to the presence of the hydrophobic drug, thereby lowering the phase transition temperature.

또한, 암포테리신 B 및 L-아르기닌을 첨가한 폴록사머 407 20%(W/V) 용액에서의 겔화 온도의 범위는 25.8~58℃로 나타나, 암포테리신 B의 가용화제로 사용된 L-아르기닌이 상전이온도를 상승시켰음을 확인할 수 있었다. In addition, the range of gelation temperature in poloxamer 407 20% (W / V) solution to which amphotericin B and L-arginine was added was 25.8 to 58 ° C, resulting in L-arginine used as a solubilizer for amphotericin B. It was confirmed that the phase transition temperature was increased.

나아가, 암포테리신 B, L-아르기닌 및 카보폴 940을 첨가한 폴록사머 407 20%(W/V) 용액에서의 겔화 온도의 범위는 크게 변하지 않았으나, 카보폴의 농도에 비례하여 겔화 온도의 범위가 다소 확장됨을 확인할 수 있었다.Furthermore, the gelation temperature in poloxamer 407 20% (W / V) solution with amphotericin B, L-arginine and Carbopol 940 did not change significantly, but the gelation temperature was proportional to the concentration of carbopol. It can be seen that is slightly expanded.

따라서, 본 발명에 사용되는 폴록사머 407은 암포테리신 B, L-아르기닌 및 카보폴 940을 첨가하더라도 체온(37℃)에서는 항상 겔화 상태로 존재하므로 수화겔로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.
Accordingly, it can be seen that poloxamer 407 used in the present invention can be usefully used as a hydrogel, even though amphotericin B, L-arginine, and carbopol 940 are always present in the body temperature (37 ° C.).

<< 실험예Experimental Example 3>  3> 암포테리신Amphotericin B의  B's InIn vitroin vitro 약물 방출 거동 측정 Drug Release Behavior Measurement

증류수에 암포테리신 B를 과량 첨가한 수용액을 3 일간 상온에서 교반하고, 3,000 rpm으로 5 분간 원심분리하였다. 원심분리 후 가라앉은 침전물을 제외한 상등액 부분에서 0.8~0.9 ml를 주사기로 취하여 암포테리신 B 포화용액 샘플 2 ml를 MWCO(molecular weight cut off) 6000~8000의 멤브레인에 적신 다음, 37℃의 PBS 40 ml가 든 원심관(conical tube)에 넣었다. An aqueous solution in which an amphotericin B was added to distilled water was stirred at room temperature for 3 days, and centrifuged at 3,000 rpm for 5 minutes. After centrifugation, take 0.8-0.9 ml of syringe from the supernatant except for the settled precipitate, soak 2 ml of amphotericin B saturated solution in a membrane of MWCO (molecular weight cut off) 6000-8000, and then PBS 40 at 37 ° C. It was placed in a conical tube containing ml.

상기 원심관을 37℃로 온도를 맞추어 놓은 인큐베이터(SI-300, Lab Companion, Korea) 안에서 흔들어(shaking) 주면서 정해진 시간 간격(1시간, 6시간, 12시간, 18시간, 1일, 2일, 3일, 6일, 7일, 9일, 10일, 11일 및 14일)에 맞춰 암포테리신 B 포화용액을 함유하고 있는 멤브레인을 원심관에서 빼내어 새로운 PBS 40 ml가 들어있는 원심관으로 옮겼다. Shaking the centrifuge tube in an incubator (SI-300, Lab Companion, Korea) at a temperature of 37 ° C. for a predetermined time interval (1 hour, 6 hours, 12 hours, 18 hours, 1 day, 2 days, On days 3, 6, 7, 9, 10, 11 and 14), the membrane containing the amphotericin B saturated solution was removed from the centrifuge tube and transferred to a centrifuge tube containing 40 ml of fresh PBS. .

각 시간대별 원심관에서 용액을 채취하여 상기 멤브레인으로부터 방출된 암포테리신 B의 농도를 상기 실험예 1-1과 같은 방법으로 측정하였고, 약물 방출량은 처음에 멤브레인에 투입된 암포테리신 B의 농도와 비교하여 방출된 암포테리신 B의 농도를 %로 나타내었다.The concentration of amphotericin B released from the membrane was measured in the same manner as in Experimental Example 1-1, and the drug release amount was determined from the concentration of amphotericin B initially introduced into the membrane. The concentration of amphotericin B released compared is expressed in%.

다음으로, 상기 암포테리신 B 포화용액에 L-아르기닌, 폴록사머 407 및 카보폴 940을 추가하여 상술한 방법으로 암포테리신 B의 방출량을 측정하였다. 그 측정 결과를 하기 표 3, 표 4, 도 6 및 도 7에 나타내었다.Next, L-arginine, poloxamer 407, and Carbopol 940 were added to the amphotericin B saturated solution, and the amount of amphotericin B was measured by the method described above. The measurement results are shown in Tables 3, 4, 6, and 7 below.

첨가물에 따른 AmB의 방출량 (%)% AmB released by additive 시간
time
AmBAmB AmB+RAmB + R AmB+R+PolAmB + R + Pol
0시간0 hours 00 00 00 2시간2 hours 0.350.35 19.3319.33 6.296.29 4시간4 hours 0.470.47 30.7330.73 14.0614.06 8시간8 hours 0.710.71 41.4041.40 21.3521.35 12시간12 hours 0.910.91 45.8845.88 53.9653.96 1일1 day 1.031.03 49.8049.80 70.1470.14 2일2 days 1.521.52 52.0252.02 76.0476.04 3일3 days 2.042.04 54.6954.69 80.0480.04 4일4 days 2.452.45 56.6356.63 82.4682.46 6일6 days 3.303.30 58.6958.69 86.2486.24 8일8 days 4.104.10 60.9560.95 87.3487.34 10일10 days 4.914.91 62.8562.85 87.2787.27 14일14 days 6.536.53 65.3265.32 85.3185.31 AmB: 암포테리신 B, R: L-아르기닌, Pol: 폴록사머 407, C: 카보폴 940 AmB: amphotericin B, R: L-arginine, Pol: poloxamer 407, C: carbopol 940

첨가물에 따른 AmB의 방출량 (%)% AmB released by additive 시간
time
AmB+R+PolAmB + R + Pol AmB+R+Pol+C 0.1 W/V%AmB + R + Pol + C 0.1 W / V% AmB+R+Pol+C 0.2 W/V%AmB + R + Pol + C 0.2 W / V%
0시간0 hours 00 00 00 1시간1 hours 6.456.45 7.377.37 6.586.58 4시간4 hours 14.6114.61 14.7014.70 14.8914.89 8시간8 hours 22.5322.53 21.0121.01 22.4022.40 1일1 day 52.6852.68 45.6745.67 38.4638.46 2일2 days 70.4970.49 56.7056.70 49.2549.25 3일3 days 75.9375.93 58.8958.89 54.1054.10 6일6 days 80.1580.15 67.0767.07 57.1957.19 7일7 days 82.6482.64 68.4668.46 57.8057.80 9일9th 86.4086.40 73.9273.92 60.4060.40 10일10 days 88.8488.84 75.0175.01 64.1064.10 11일11th 87.9387.93 74.3474.34 63.9263.92 14일14 days 85.1785.17 72.7772.77 63.6763.67 AmB: 암포테리신 B, R: L-아르기닌, Pol: 폴록사머 407, C: 카보폴 940 AmB: amphotericin B, R: L-arginine, Pol: poloxamer 407, C: carbopol 940

도 6은 L-아르기닌 및 폴록사머 407이 암포테리신 B의 방출량에 미치는 영향을 나타내는 그래프이고, 도 7은 카보폴 940이 암포테리신 B의 방출량에 미치는 영향을 나타내는 그래프이다.
FIG. 6 is a graph showing the effect of L-arginine and poloxamer 407 on the amount of amphotericin B released, and FIG. 7 is a graph showing the effect of carbopol 940 on the amount of amphotericin B released.

표 3, 도 6에 나타난 바와 같이, 아무것도 첨가하지 않은 암포테리신 B의 포화용액에서 암포테리신 B의 방출량은 직선형의 방출을 나타내었으나, 2주간 7% 미만의 방출을 나타내어 용해도가 개선되지 않은 상태에서는 암포테리신 B의 방출이 용이하지 않음을 확인할 수 있었다.As shown in Table 3, Figure 6, the amount of amphotericin B in the saturated solution of amphotericin B to which nothing was added showed a linear release, but less than 7% release for 2 weeks, so that the solubility was not improved. In the state, it was confirmed that the release of amphotericin B is not easy.

그러나, L-아르기닌 첨가에 따른 암포테리신 B의 방출량은 1일 이내에 약 50%가 방출되었고, 2주간 약 65%의 누적 방출량을 나타내어 L-아르기닌이 암포테리신 B의 용해도를 개선하여 방출량이 향상됨을 나타내었다.However, the amount of amphotericin B released by L-arginine addition was about 50% within 1 day, and the cumulative release amount was about 65% for 2 weeks, indicating that L-arginine improved the solubility of amphotericin B. Improved.

또한, L-아르기닌 및 폴록사머 407 첨가에 따른 암포테리신 B의 방출량은 12시간 이내까지는 약 20%가 방출되어 서서히 방출되는 효과를 나타내었고, 2주간의 누적 방출량은 약 85%로 증가함을 나타내었다.
In addition, the amount of amphotericin B released by the addition of L-arginine and poloxamer 407 was released by about 20% until 12 hours, and the cumulative amount of release over two weeks increased to about 85%. Indicated.

나아가, 표 4 및 도 7에 나타난 바와 같이, L-아르기닌, 폴록사머 407 및 카보폴 940 첨가에 따른 암포테리신 B의 2주간의 누적 방출량은 카보폴 940이 0.1%(W/V) 일 때 73%, 카보폴 940이 0.2%(W/V) 일 때 64%로 감소하여 카보폴 940의 농도가 증가함에 따라 암포테리신 B의 방출량은 감소함을 나타내었다.
Furthermore, as shown in Table 4 and FIG. 7, the cumulative release of amphotericin B for two weeks following the addition of L-arginine, poloxamer 407 and carbopol 940 is 0.1% (W / V) of carbopol 940. At 73% and Carbopol 940 was 0.2% (W / V), it decreased to 64%, indicating that the amount of amphotericin B decreased as the concentration of Carbopol 940 increased.

이로부터, L-아르기닌과 폴록사머 407에 의해서 암포테리신 B의 용해도 및 방출량이 향상되고, 카보폴 940에 의해서 암포테리신 B의 방출량이 감소되는 것을 알 수 있다. 따라서, 상기 조성물의 농도를 조절함으로써 암포테리신 B의 방출속도를 제어할 수 있으므로 진균감염 치료용 패취제로 사용될 수 있는 수화겔을 제조할 수 있다.From this, it can be seen that the solubility and release amount of amphotericin B is improved by L-arginine and poloxamer 407, and the amount of release of amphotericin B is reduced by carbopol 940. Therefore, since the release rate of amphotericin B can be controlled by adjusting the concentration of the composition, a hydrogel that can be used as a patch for treating fungal infection can be prepared.

Claims (18)

하기 화학식 1로 표시되는 암포테리신 B, L-아르기닌, 점착성 고분자 및 온도감응성 고분자를 포함하되,
상기 점착성 고분자는 카보폴이고,
상기 온도감응성 고분자는 폴록사머인 것을 특징으로 하는 암포테리신 B의 서방성 수화겔:
[화학식 1]
Figure 112012017760716-pat00016
.
Including amphotericin B, L-arginine, an adhesive polymer and a temperature sensitive polymer represented by Formula 1,
The adhesive polymer is carbopol,
The sustained-release hydrogel of amphotericin B, characterized in that the temperature sensitive polymer is poloxamer:
[Formula 1]
Figure 112012017760716-pat00016
.
제1항에 있어서, 상기 암포테리신 B의 함량은 1~10%(W/V)이고, L-아르기닌의 함량은 1~20%(W/V)이며, 점착성 고분자의 함량은 0.1~1%(W/V)이고, 온도감응성 고분자의 함량은 10~50%(W/V)인 것을 특징으로 하는 암포테리신 B의 서방성 수화겔.
According to claim 1, wherein the content of amphotericin B is 1 ~ 10% (W / V), the content of L- arginine is 1 ~ 20% (W / V), the content of the adhesive polymer is 0.1 ~ 1 A sustained release hydrogel of amphotericin B, which is% (W / V), and the content of the temperature-sensitive polymer is 10-50% (W / V).
삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서, 상기 폴록사머는 하기 화학식 2로 표시되는 폴록사머 407인 것을 특징으로 하는 암포테리신 B의 서방성 수화겔:
[화학식 2]
Figure 112012017760716-pat00017
.
The sustained-release hydrogel of amphotericin B according to claim 1, wherein the poloxamer is poloxamer 407 represented by the following Chemical Formula 2:
(2)
Figure 112012017760716-pat00017
.
삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서, 상기 카보폴은 카보폴 940인 것을 특징으로 하는 암포테리신 B의 서방성 수화겔.
The sustained release hydrogel of amphotericin B according to claim 1, wherein the carbopol is Carbopol 940.
제1항에 있어서, 상기 수화겔은 난용성 암포테리신 B를 가용화하고, 약물방출제어능을 갖는 것을 특징으로 하는 암포테리신 B의 서방성 수화겔.
The sustained-release hydrogel of amphotericin B according to claim 1, wherein the hydrogel solubilizes poorly soluble amphotericin B and has drug release control ability.
증류슈에 암포테리신 B, L-아르기닌, 온도감응성 고분자 및 점착성 고분자를 용해시켜 수용액을 제조하는 단계(단계 1);
상기 수용액을 트레이에 부어 겔 상태의 시트 형태로 성형하는 단계(단계 2); 및
상기 시트를 포장하는 단계(단계 3)를 포함하되,
상기 점착성 고분자는 카보폴이고,
상기 온도감응성 고분자는 폴록사머인 것을 특징으로 하는 제1항에 따른 수화겔의 제조방법.
Dissolving amphotericin B, L-arginine, a temperature sensitive polymer and a tacky polymer in a distilled shoe to prepare an aqueous solution (step 1);
Pouring the aqueous solution into a tray to form a gel sheet (step 2); And
Packing the sheet (step 3),
The adhesive polymer is carbopol,
The temperature-sensitive polymer is a method for producing a hydrogel according to claim 1, characterized in that the poloxamer.
제10항에 있어서, 전체 수용액에 대하여 상기 암포테리신 B의 함량은 1~10%(W/V)이고, L-아르기닌의 함량은 1~20%(W/V)이며, 온도감응성 고분자의 함량은 10~50%(W/V)이고, 점착성 고분자의 함량은 0.1~1%(W/V)인 것을 특징으로 하는 수화겔의 제조방법.
The method of claim 10, wherein the content of the amphotericin B relative to the total aqueous solution is 1 to 10% (W / V), the content of L- arginine is 1 to 20% (W / V), the temperature-sensitive polymer The content is 10 to 50% (W / V), the content of the adhesive polymer is 0.1 to 1% (W / V) method for producing a hydrogel, characterized in that.
삭제delete 삭제delete 제10항에 있어서, 상기 폴록사머는 PEO-PPO-PEO의 분자량이 4400-3770-4400인 폴록사머 407인 것을 특징으로 하는 수화겔의 제조방법.
The method of claim 10, wherein the poloxamer is a poloxamer 407 manufacturing method characterized in that the molecular weight of PEO-PPO-PEO is 4400-3770-4400.
삭제delete 삭제delete 제10항에 있어서, 상기 카보폴은 카보폴 940인 것을 특징으로 하는 수화겔의 제조방법.
The method of claim 10, wherein the carbopol is carbopol 940, characterized in that the manufacturing method of the hydrogel.
제1항의 암포테리신 B의 서방성 수화겔을 포함하는 진균감염 치료용 패취제.A patch for treating fungal infections comprising the sustained release hydrogel of claim 1 amphotericin B.
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